2. Antgenos bacterianos 3. Formas de resistencia: esporas 4. Morfologa y visualizacin de las bacterias 5. Metabolismo bacteriano 6. Divisin bacteriana 7. Medios de cultivo 8. Taxonoma bacteriana 9. Identificacin de bacterias 10. Bacterias de inters en medicina
1 1. Estructura de la clula bacteriana Las bacterias son clulas procariotas, de un tamao entre 02 y 5 m, envueltas por una membrana citoplasmtica y una pared externa de estructura caracterstica; poseen el citoplasma repleto de ribosomas y el material gentico est libre sin membrana nuclear. Algunas son mviles por poseer flagelos (Figura 1). Citoplasma. El citoplasma de las clulas procariotas, a diferencia del de las eucariotas, carece de orgnulos membranosos internos (mitocondrias, retculo endoplasmtico, aparato de Golgi) y de los microtbulos que forman el citoesqueleto de las clulas eucariotas. Est constituido por una masa densa, amorfa, con aspecto granular por estar repleto de abundantes ribosomas. Los ribosomas de las clulas procariotas son ms pequeos que los de las eucariotas, aunque de estructura semejante a los de stas, en ellos tiene lugar la sntesis proteica. Genoma bacteriano. El genoma bacteriano est formado por una sola molcula de DNA bicaternario de forma circular, cerrada, y gran tamao (cromosoma). En Escherichia coli mide 1-2 mm lo que supone unas mil veces la longitud de la bacteria. Este gran tamao y la ausencia de histonas 1 hace que el DNA se encuentre aparentemente apelotonado formando un ovillo en el interior del citoplasma. Esta molcula de DNA no se encuentra separada del citoplasma por una membrana nuclear sino que est directamente inmersa en el mismo, por lo que no se puede hablar con propiedad de ncleo bacteriano, refirindose a este acumulo de material gentico como nucleoide. La ausencia de membrana nuclear permite una trascripcin muy rpida de la informacin gentica. Las bacterias pueden albergar material gentico adicional al cromosoma en forma de pequeas molculas circulares de DNA bicaternario libre en el citoplasma, denominadas plsmidos, que constituyen material gentico extracromosmico autnomo. Los plsmidos, como los fagos lisognicos 2 pueden codificar diversos
1 Aunque existen otras protenas asociadas al DNA bacteriano con funcin de soporte
2 Ver leccin de virus. Los bacterifagos, aunque constituyen un fragmento de material gentico exgeno, en estado lisognico tienden a integrarse en el cromosoma bacteriano. Tambin los plsmidos pueden circunstancialmente integrarse en el cromosoma bacteriano 2 productos de inters, como enzimas inactivantes de antibiticos, bacteriocinas 3 , exotoxinas, adhesinas y otros factores de patogenicidad, as como enzimas con actividades metablicas. Los plsmidos se replican de forma sincrnica con el cromosoma celular y como l se transmiten de forma estable a las clulas hijas (transmisin vertical); este tipo de transmisin tambin se da en otros episomas como los fagos lisognicos. Algunos plsmidos, conocidos como plsmidos transferibles, pueden transmitirse a otras clulas bacterianas carentes de ellos mediante un mecanismo de transferencia horizontal denominado conjugacin, que comporta su replicacin previa, y el paso de una copia a travs de una fimbria a otra bacteria, por lo que ambas clulas, donadora y receptora, poseen una copia del mismo. Membrana celular. Posee las caractersticas generales de las membranas biolgicas. Est formada por una doble capa de fosfolpidos en la que se encuentran incluidas protenas de gran importancia funcional relacionadas con la permeabilidad y el metabolismo (Figuras 2 y 3). La membrana celular asla al citoplasma del medio externo, en ella se localizan secuencialmente diversos enzimas implicados en el metabolismo energtico y biosinttico. Tambin participa en el anclaje y segregacin del cromosoma bacteriano durante la divisin celular mediante invaginaciones (mesosomas). Constituye el soporte para los flagelos y tambin aporta la energa necesaria para su movimiento. Pared bacteriana. La pared bacteriana es una estructura rgida, que se encuentra situada por fuera de la membrana citoplasmtica constituyendo un exoesqueleto, cuya composicin qumica fundamental es una molcula, conocida como peptidoglicano, que slo se encuentra en el mundo bacteriano. El peptidoglicano es un largo polmero, filamentoso, constituido por dos aminoazcares (N-acetil-glucosamina y N-acetil-murmico) alternados. Estos filamentos polimricos se enlazan entre s por pequeos pptidos. En efecto, del N- acetil-murmico se originan unos tetrapptidos los cuales se unen entre s por otros puentes peptdicos.
3 Las bacteriocinas son protenas con actividad antibacteriana para otras bacterias diferentes a las que las producen, que les permite competir en territorios donde existe una flora mixta 3 Podra imaginarse la membrana celular como el frgil vidrio de una garrafa protegido por su envoltura de mimbre, que equivaldra a la pared. Los largos mimbres formados por los polmeros de los azcares estaran unidos entre s por pequeos pptidos para no desarmarse. Segn las caractersticas generales de la pared, las bacterias pueden dividirse en dos grandes grupos, que se diferencian fcilmente entre s al observarlas al microscopio ptico despus de haber sido teidas por el mtodo de Gram. En la tincin de Gram se utiliza como colorante el violeta de genciana que tie las clulas bacterianas de color violeta oscuro. Despus de esta primera tincin, se decolora la preparacin con alcohol y acetona. Unas bacterias, las grampositivas, resisten la decoloracin y persisten teidas de violeta intenso, mientras que otras bacterias, las gramnegativas, se decoloran. Para poder observar estas bacterias decoloradas, se utiliza un colorante como la safranina que las tie de color rosa plido, contrastando claramente con el violeta. Este comportamiento distinto depende de diferencias en la estructura de la pared (Figura 4). Pared de las bacterias grampositivas. En este grupo de bacterias el peptidoglicano es muy grueso, constituyendo una ancha malla tridimensional a travs de la cual emergen radialmente al exterior estructuras fibrilares polisacridas, entre otras los cidos teicoicos. Tambin existen protenas fibrilares que emergen desde el peptidoglicano a la superficie 4 . Algunas de estas estructuras constituyen los antgenos de superficie de las bacterias grampositivas (Figuras 5 y 6). Pared de las bacterias gramnegativas. El peptidoglicano forma una malla fina, existiendo por fuera del mismo y unida a l por lipoprotenas, una membrana externa, que no se encuentra en las bacterias grampositivas. Entre la membrana externa y la membrana citoplasmtica se delimita un espacio virtual, denominado periplsmico (Figuras 5 y 7). La membrana externa tiene estructura clsica en doble capa fosfolipdica y contiene en gran abundancia protenas algunas de las cuales regulan la permeabilidad (porinas) y lipopolisacridos (LPS). El lipopolisacrido es una molcula alargada que posee dos fragmentos, uno interno de naturaleza lipdica, anclado en la membrana, que se conoce como lpido A y otro que sobresale al exterior, formado a su vez por dos partes: una medial denominada
4 En algunos grupos bacterianos emergen lpidos 4 core y otra distal o externa formada por una secuencia de 2 a 3 azcares que se repiten y constituyen el antgeno de superficie ms importante de las bacterias gramnegativas denominado antgeno O (Figura 8). Algunas bacterias, poseen una pared rica en cidos grasos de cadena larga (cidos miclicos y ceras) junto a protenas y polisacridos. Estos cidos grasos les confieren propiedades particulares; entre ellas una mayor resistencia a agentes qumicos, como los cidos y lcalis 5 . Se tien mal por el mtodo de Gram y lenta pero intensamente con colorantes como la fucsina (rojo), pero una vez teidas por este colorante a diferencia del resto de las bacterias, resisten la decoloracin por cidos y alcoholes denominndose bacterias alcohol-cido resistentes. Esta caracterstica tintorial se evidencia mediante la tincin de Ziehl-Neelsen en las que las bacterias alcohol-cido resistentes se tien de rojo y las que pierden la coloracin al ser tratadas por alcohol y cido se tien con azul de metileno para contrastarlas con las anteriores. Slo las micobacterias, nocardias y rodococos entre las bacterias de inters en medicina, y las esporas bacterianas, son alcohol-cido resistentes, aunque existen otros grupos como las corinebacterias que no son alcohol-cido resistentes, pero tambin poseen una pared rica en cidos grasos. Ciertas bacterias con estructura de gramnegativas como las espiroquetas, poseen una pared caracterizada por presentar flagelos en el espacio periplsmico que les confiere una morfologa espirilar caracterstica y colaboran a su movilidad. Por ltimo, las arqueobacterias y los micoplasmas carecen de pared bacteriana. Estas bacterias sin pared son de forma variable. El peptidoglicano constituye un exoesqueleto rgido. Su funcin principal es evitar la ruptura osmtica de la membrana ya que en condiciones normales la presin intracelular en las clulas procariotas es ms elevada que la extracelular. Secundariamente esta pared rgida confiere la forma caracterstica de cada bacteria. Segn la morfologa pueden distinguirse cuatro tipos de bacterias: cocos, de forma esfrica; bacilos, de forma alargada; espiroquetas, de forma espiral y bacterias sin pared de forma irregular.
5 Aspecto muy importante, en relacin a su capacidad de persistencia en el medio ambiente y a las tcnicas para su cultivo (vase ms adelante) 5 La inoculacin a animales de experimentacin de lipopolisacrido da lugar a una compleja y grave reaccin txica que puede abocar al shock 6 , por lo que se le ha denominado endotoxina. Esta toxicidad, a la que tambin es susceptible el hombre, depende probablemente del lpido A. La cadena distal polisacrida del antgeno O protege a la bacteria frente a diversos sistemas bactericidas existentes en los tejidos, en particular el complemento. Se halla especialmente desarrollada en las bacterias gramnegativas que carecen de cpsula. La membrana externa constituye una barrera que condiciona el transporte de la mayora de las sustancias qumicas. La permeabilidad en las bacterias gramnegativas se efecta a este nivel mediante porinas y protenas de transporte especfico. Este fenmeno de permeabilidad tiene importancia en microbiologa clnica ya que es responsable de importantes diferencias en la sensibilidad a los antibiticos. As, las bacterias gramnegativas, son resistentes a una serie de antibiticos hidroflicos, a los que son sensibles las bacterias grampositivas, ya que no pueden atravesar sus membranas externas en funcin de su tamao, configuracin espacial de la molcula o carga neta. Por otra parte, en el espacio periplsmico se hallan libres diversas enzimas que an siendo externas al protoplasma celular no difunden libremente al medio por lo que su eficacia resulta incrementada por concentracin en este espacio. Las betalactamasas, enzimas que inactivan los antibiticos betalactmicos (penicilina y otros), se localizan a este nivel. Exopolmeros bacterianos: Cpsula y glicocalix. Son estructuras fibrilares polimricas localizadas externamente a la pared, generalmente de naturaleza polisacrida que pueden ser productos de sntesis celular exportados (cpsula) o productos sintetizados extracelularmente por exoenzimas bacterianas a partir de sustratos extracelulares (glicocalix). La cpsula posee una notable capacidad antignica y su actividad antifagocitaria la convierte en un importante factor de virulencia para las bacterias que la poseen (Figura 9). El glicocalix envuelve a las clulas bacterianas y facilita su adhesividad a diversas estructuras, como en Streptococcus mutans agente causal de la caries dental al
6 Hipotensin por vasodilatacin, seguida de mala perfusin tisular y fallo multiorgnico 6 esmalte de los dientes. Retiene humedad y nutrientes y puede dificultar el acceso de los antibiticos y los anticuerpos a los antgenos de superficie. Muchas bacterias no poseen estos exopolmeros que son estructuras facultativas y por tanto no son imprescindibles para la vida bacteriana. Flagelos. Son estructuras fibrilares de naturaleza proteica que constituyen los rganos de locomocin de las bacterias. Estn formados por la agregacin de mltiples subunidades de una protena globular denominada flagelina. La agregacin de estas subunidades da lugar a un largo cilindro hueco (Figuras 10 y 11). Su naturaleza proteica confiere al flagelo un carcter muy inmunognico (antgenos H). Pili y Fimbrias. Son estructuras externas filamentosas, tubulares, huecas formadas de modo semejante a los flagelos por agregacin de mltiples subunidades proteicas. Poseen capacidad antignica. Algunas fimbrias juegan un papel importante en la patognia de las infecciones bacterianas ya que permiten a las bacterias que las poseen adherirse a las superficies mucosas, otras poseen funciones semejantes a la cpsula y otras participan en los procesos de transferencia de plsmidos por conjugacin entre las clulas (pili sexuales). 2. Antgenos bacterianos Las estructuras con capacidad antignica en las bacterias son muy numerosas. Sin embargo las que posen mayor inters en medicina, por las razones que se sealarn ms adelante, son de localizacin perifrica como la cpsula (K), el lipopolisacrido (O) y las protenas de la membrana externa en las bacterias gramnegativas, y los cidos teicoicos y otros exopolmeros de la pared en las grampositivas. Los flagelos (H), las fimbrias y las protenas de la membrana citoplasmtica tambin poseen carcter antignico. Los anticuerpos protectores van dirigidos generalmente a los antgenos capsulares. Existe evidencia de este hecho ya que se han utilizado purificados como vacunas eficaces en el caso de neumococo, hemfilos y del agente causal de la fiebre tifoidea (antgeno capsular Vi de Salmonella typhi). 7 Se conoce menos la importancia protectora de los anticuerpos dirigidos frente a los antgenos O, H y protenas de membrana externa y el papel que juegan estas estructuras en la patogenicidad de algunas bacterias. Todos estos antgenos se han utilizado, dependiendo de los microorganismos, para la subdivisin de las especies bacterianas en serogrupos o serotipos. As el antgeno capsular permite subdividir al neumococo, al meningococo y a los hemfilos en diversos tipos. Los antgenos O y H permiten subdividir las especies de enterobacterias en serotipos y los antgenos de membrana externa permiten subdividir los grupos de meningococo en diversos subtipos. 3. Formas de resistencia: Esporas Algunas bacterias grampositivas , en situaciones ambientales adversas, son capaces de generar formas de resistencia, denominadas esporas 7 mediante un proceso complejo de esporulacin. Las esporas constituyen una de las escasas formas de diferenciacin celular aparecidas en el mundo bacteriano 8 . Una espora bacteriana posee una forma esfrica u oval y contiene una copia completa del material gentico de la bacteria, estructuras para la sntesis proteica, parte de los sistemas enzimticos para la obtencin de energa y sustancias de reserva energtica, rodeados por varias envolturas concntricas, de diferente composicin qumica, algunas de las cuales son muy resistentes a los agentes fsicos y qumicos. Al encontrar condiciones favorables las esporas revierten al estado morfolgico y metablico normal vegetativo a travs de un proceso de germinacin. Las esporas, que pueden ser circulares u ovales, segn su localizacin en la bacteria antes de liberarse pueden clasificarse en centrales, subterminales y terminales. Estos datos poseen valor para la identificacin de las bacterias esporuladas. Las esporas nicamente se producen en algunas bacterias grampositivas y entre ellas tan slo existen dos gneros, Bacillus y Clostridium, de inters en medicina.
7 Para destruir las esporas se requiere calor hmedo a 121C durante 20 minutos, calor seco a 180C durante 2 horas o antispticos enrgicos
8 Otras son las variaciones morfolgicas que se producen en el ciclo vital de las clamidias, coxiela y las estructuras formadas por las mixobacterias
8 4. Morfologa y visualizacin de las bacterias La mayora de las bacterias poseen un tamao variable entre 0.2 y 5 m pudindose observar al microscopio ptico en fresco o teidas mediante la tincin de Gram u otras como la de Ziehl-Neelsen. Aunque presentan escasa variabilidad morfolgica, pueden adscribirse a varios grupos segn su forma. Las redondeadas se denominan cocos y las alargadas bacilos. Los bacilos con forma de coma, se denominan vibriones. Algunos bacilos poseen forma espirilar denominndose espirilos, que no hay que confundir con las espiroquetas que presentan una morfologa aparentemente semejante, pero poseen flagelos en el espacio periplsmico. Las bacterias sin pared, como los micoplasmas, poseen forma irregular. Cada bacteria perteneciente a uno de estos tipos morfolgicos (cocos y bacilos) puede subdividirse segn la tincin de Gram en grampositivas o gramnegativas y segn la de Ziehl en alcohol-cido resistentes o no. La morfologa, la coloracin por la tincin de Gram y la de Ziehl-Neelsen, as como la presencia o ausencia de esporas, que pueden visualizarse como una estructura morfolgicamente definida, constituyen los caracteres ms elementales para la clasificacin de las bacterias. El examen microscpico es muy utilizado para detectar e identificar presuntivamente las bacterias en las diversas muestras clnicas que se remiten al laboratorio para estudio. Sin embargo, algunas bacterias como los micoplasmas, las espiroquetas, clamidias y rickettsias, no se visualizan mediante las tcnicas microscpicas convencionales, por requerir tinciones especiales o por su pequeo tamao. 5. Metabolismo bacteriano El metabolismo es el conjunto de reacciones bioqumicas catablicas que producen energa para el movimiento, el transporte de sustancias en la clula y para la sntesis de los compuestos celulares estructurales a travs de las reacciones anablicas. Aunque las bacterias poseen todas las potencialidades metablicas, auttrofas y hetertrofas conocidas, slo poseen inters en medicina las quimiorgano- 9 hetertrofas, que utilizan compuestos orgnicos para la obtencin de energa, como las existentes en los tejidos y secreciones del cuerpo humano. Las bacterias quimiorganotrofas obtienen energa de los hidratos de carbono y otros sustratos orgnicos que se incorporan a las rutas metablicas fermentativas. La energa se acumula en forma de ATP, que se produce a partir del ADP (ADP+P=ATP), por dos mecanismos, el de fosfosilizacin a nivel de sustrato o la fuerza motriz de protones (por gradiente electroqumico membrana). El primero tiene lugar en las fermentaciones y el segundo en la cadena respiratoria. La fermentacin es un proceso anaerobio en el que, a travs de diversas vas metablicas siendo la de Embden-Meyerhof una de las ms universales se produce cido pirvico a partir de la glucosa y se obtiene una ganancia neta de 2 ATP y 2 NADPH, fuentes de energa y de poder reductor, respectivamente (Figura 12). El cido pirvico (piruvato) puede ser posteriormente degradado, por fermentacin, a varios catabolitos como cido lctico, etanol, butilenglicol, cido butrico, cido propinico y otros (Figura 13). Del cido pirvico, formado por fermentacin puede an extraerse gran cantidad de energa mediante un proceso de respiracin aerobia. A partir del pirvico se forma acetil coenzima A que se incorpora al ciclo de Krebs. A l estn acopladas las cadenas respiratorias que permiten la sntesis de ATP. En las cadenas respiratorias el aceptor final de electrones es el oxgeno (Figura 14). Muchas bacterias hetertrofas pueden obtener energa tanto por va fermentativa (anaerobia) como por la respiracin (aerobia) por lo que pueden cultivarse y crecer tanto en ausencia como en presencia de oxgeno, denominndose aerobias y anaerobias facultativas. Algunas, denominadas aerobias estrictas, slo pueden crecer en presencia de oxgeno porqu las vas fermentativas no producen suficiente energa. Otras slo pueden obtener energa por va fermentativa anaerobia y adems la presencia de oxgeno es letal para ellas. Estas bacterias denominadas anaerobias estrictas deben cultivarse en una atmsfera carente de oxgeno. Por ltimo, algunas bacterias denominadas microaerfilas activan su metabolismo a 10 concentraciones bajas de oxgeno, pero no crecen a la concentracin atmosfrica y lo hacen muy lentamente en anaerobiosis estricta. Las subunidades moleculares necesarias para la biosntesis de macromolculas, como los aminocidos, azcares, lpidos, bases pricas, pirimidnicas, as como ciertas vitaminas y otros factores esenciales, pueden ser tomadas del medio y utilizadas como tales para la sntesis. Sin embargo, la mayora de estas subunidades pueden ser sintetizadas a partir de catabolitos intermediarios formados en los procesos catablicos de molculas sencillas y universales como los glcidos y otras. La glucosa 6-fosfato, el fosfoenol piruvato, el oxalacetato, y el -cetoglutarato, constituyen metabolitos focales a partir de los cuales, formando diversos intermediarios, pueden dar lugar a la mayora de las molculas estructurales o funcionales complejas de las clulas bacterianas, de modo que la combustin de los azcares adems de aportar energa va formando catabolitos qumicos que son precursores de subunidades bsicas estructurales. Ello muestra como existe una profunda interdependencia entre los procesos catablicos bioenergticos y los biosintticos. Aspectos aplicados del estudio de metabolismo bacteriano. Aunque el estudio del metabolismo bacteriano posee gran inters desde numerosos puntos de vista (terico 9 , farmacolgico, industrial) desde el punto de vista de la microbiologa mdica aplicada posee valor taxonmico ya que las bacterias, tras su clasificacin inicial segn la morfologa, Gram, Ziehl, movilidad y esporulacin, se diferencian en grupos segn el tipo respiratorio: aerobias, anaerobias, facultativas o microaerfilas y posteriormente pueden clasificarse a nivel de familia, gnero o especie segn posean o no diversas capacidades metablicas. El conocimiento del metabolismo bacteriano permite adems comprender el fundamento de los mtodos de cultivo, el modo de accin de algunos antibiticos que actan interfiriendo rutas metablicas especficas y otros aspectos de la biologa relacionados con la enfermedad humana, como la localizacin intracelular obligada de algunas bacterias (clamidias y rickettsias) por insuficiencia de sus vas metablicas para permitirles la vida libre.
9 El metabolismo de las bacterias hetertrofas no es esencialmente diferente del de las clulas de otros organismos como hongos, protozoos y animales 11 6. Divisin bacteriana La divisin bacteriana se hace por un proceso relativamente sencillo en relacin a las clulas eucariotas que se denomina fisin binaria. La duplicacin del cromosoma bacteriano constituye el paso previo a la divisin celular. La molcula de DNA se abre y cada una de las hebras se fija a la membrana, probablemente en un mesosoma, replicndose. Los dos cromosomas resultantes se separan por crecimiento de la membrana de la zona intermedia entre los mesosomas que hacen las funciones de un aparato mittico primitivo. Posteriormente se sintetiza un septo bacteriano de doble pared que dividir a las dos clulas hijas. Ver vdeo: http://www.youtube.com/watch?v=DY9DNWcqxI4&feature=player_detailpage Nutricin bacteriana. En condiciones naturales las bacterias crecen en lugares en los que encuentran los elementos necesarios para su multiplicacin, que en las bacterias quimiorganohetertrofas, como las patgenas para el hombre, son substratos orgnicos as como agua e iones minerales. Si bien numerosas bacterias de vida libre son capaces de crecer con substratos simples como nica fuente de carbono y energa, muchas de las bacterias adaptadas a la vida parasitaria precisan de la presencia de diversas molculas orgnicas que no son capaces de sintetizar, por carecer de los sistemas enzimticos necesarios. A estas molculas se las denomina factores de crecimiento y esas bacterias se denominan auxtrofas para esta determinada sustancia. Si se incluyen en un tubo de ensayo todos los elementos necesarios para la multiplicacin in vitro de una bacteria, como el agua, sales minerales, azcares, protenas y factores de crecimiento, si son necesarios, se obtiene un medio de cultivo (Figura 15). 7. Medios de cultivo Los medios de cultivo, al permitir la multiplicacin bacteriana in vitro facilitan el aislamiento de las bacterias a partir de sus hbitats naturales y permiten su propagacin en el laboratorio. 12 Los medios de cultivo pueden ser lquidos, cuando los componentes nutritivos se hallan disueltos en solucin acuosa, o slidos, cuando esta solucin de nutrientes se gelifica al aadirle un polisacrido gelificante no degradable por la actividad metablica de las bacterias como el agar-agar. El agar-agar se disuelve en el medio de cultivo lquido por ebullicin y al enfriarse por debajo de los 45C solidifica como una gelatina endurecida dando al medio la consistencia de la carne de membrillo. Los medios lquidos se dispensan en matraces o tubos de ensayo y los slidos se reparten en placas circulares provistas de tapa, denominadas placas de Petri, o en tubos de ensayo. La ventaja de los medios slidos dispuestos en placas de Petri consiste en que en ellos pueden aislarse de modo individualizado las distintas bacterias de una mezcla contenidas en un material clnico (orinas, pus, etc.). En efecto, si se inocula (siembra) un medio lquido con una mezcla de bacterias (o una muestra clnica que contenga diversos tipos de bacterias) stas se multiplican en el medio lquido entremezclado, en suspensin. Si por el contrario mediante un asa 10 se disemina por la superficie de un medio slido el material que contiene las bacterias (siembra por agotamiento), cada clula bacteriana se multiplica en el lugar donde ha quedado depositada, dando lugar, al cabo de unas horas o das, a millones de clulas que forman un conglomerado celular, visible macroscpicamente, denominado colonia bacteriana (Figura 15). Ver vdeo: http://www.youtube.com/watch?v=_1KP9zOtjXk&feature=player_detailpage Como algunas clulas bacterianas han quedado depositadas en la superficie del medio aisladas de las dems, a partir de ellas se forman colonias aisladas constituidas por un solo tipo de bacteria. Las bacterias de estas colonias pueden transferirse, mediante el asa a otros medios de cultivo, lquidos o slidos, en los que crecen en cultivo puro. A partir de los cultivos puros se efecta la identificacin, se evala la sensibilidad a los antibiticos o pude realizarse cualquier otro estudio biolgico.
10 El asa est formada por un mango semejante a un lpiz con un filamento recto y fina de metal que acaba en un bucle que permite tocar y sembrar el material biolgico 13 Condiciones fisicoqumicas de los cultivos bacterianos. Para que se produzca la multiplicacin, las bacterias deben sembrarse en medios que posean adems de los nutrientes necesarios, el pH y la osmolaridad adecuados. Estos medios de cultivo deben incubarse en estufas a la temperatura ptima de crecimiento que, para la mayora de las bacterias de inters mdico, se sita entre 35 y 37C (bacterias mesfilas) 11 . Asimismo la atmsfera necesaria durante la incubacin depende del tipo respiratorio de las bacterias, que como se ha sealado pueden ser aerobias, anaerobias, facultativas o microaerfilas. Dinmica del crecimiento bacteriano. Cuando se siembra una bacteria en un medio lquido originalmente transparente, despus de unas horas de incubacin ste se enturbia como consecuencia del crecimiento bacteriano. En la superficie de los medios slidos, se desarrollan colonias como ya se ha indicado. La cintica de la multiplicacin bacteriana se establece experimentalmente midiendo variaciones de la masa bacteriana en funcin del tiempo. ste clculo conduce a la obtencin de una curva de crecimiento (Figura 16). El tiempo de generacin es el tiempo necesario para que tenga lugar una divisin bacteriana, doblndose por tanto la masa bacteriana existente: De l depende el mayor o menor tiempo necesario para que se visualice una colonia sobre el medio slido o se observe el enturbiamiento de un medio lquido. El tiempo de generacin depende de la presencia de substratos energticos, de la temperatura de incubacin y otros factores externos, pero es fundamentalmente una caracterstica propia de cada especie bacteriana, variando de una a otra. La mayora de las bacterias de inters mdico tiene un tiempo de generacin de alrededor de 20 minutos detectndose macroscpicamente el crecimiento en los medios de cultivo (turbidez o colonias) tras 18 o 24 horas de incubacin. Algunas bacterias poseen tiempos de generacin ms prolongados como Mycobacterium tuberculosis, causante de la tuberculosis, que posee un tiempo de generacin superior a 24 horas, requiriendo semanas para formar colonias visibles macroscpicamente en los medios slidos.
11 Bacterias psicrfilas: crecen entre 4-20C; bacter ias mesfilas: crecen entre 25-35C y bacterias termfilas: crecen entre 40-45C 14 Utilizacin de los medios de cultivo. Segn su funcin los medios de cultivo pueden dividirse en medios de aislamiento, medios de propagacin y medios de identificacin. Los medios de aislamiento se utilizan para aislar las bacterias a partir de los materiales o productos donde naturalmente se hallan (tierra, aguas, superficies cutaneomucosas y tejidos u rganos infectados). Los medios de aislamiento pueden clasificarse 1) usuales, 2) enriquecidos, 3) selectivos, 4) diferenciales y 5) de enriquecimiento. Para su descripcin es preciso comprender el concepto de medio usual al que se ha hecho referencia anteriormente. Los medios usuales son medios de formulacin sencilla que incluyen agua, protenas obtenidas de un extracto o infusin de carne, glucosa y sales minerales, particularmente cloruro sdico y oligoelementos. Las bacterias que crecen en l son las que no poseen requerimientos de factores esenciales y se denominan no exigentes. Las bacterias exigentes son las que requieren diversos factores esenciales para su crecimiento y se cultivan en medios enriquecidos que aportan estos factores. Los medios enriquecidos se preparan aadiendo a un medio usual sangre, suero, extractos de levadura, que aportan esos factores o incorporndolos purificados, como el factor V (nicotin-adenin-dincletido, NAD), el factor X (hemina), la cisteina u otros. Los medios enriquecidos ms utilizados en bacteriologa son el agar usual con sangre (agar sangre) y el agar-chocolate (agar usual enriquecido con los factores X y V). Cuando se pretende aislar todas las bacterias de un producto se siembra por agotamiento un medio slido usual o preferentemente enriquecido. Sin embargo, es habitual que de un producto que contenga una mezcla de diversas especies bacterianas se desee aislar tan solo una especie en particular, que est en cantidades muy escasas con relacin al resto de bacterias acompaantes, como una 15 salmonela de las heces o una legionela del esputo 12 . Para conseguir este objetivo pueden utilizarse medios selectivos o de enriquecimiento. Los medios selectivos son medios slidos, usuales o enriquecidos, a los que se ha aadido alguna sustancia que inhibe el crecimiento de las bacterias, excepto las de la especie que se desea aislar. Diversos productos consiguen este efecto, siendo los ms utilizados algunos colorantes con actividad antibacteriana selectiva, las sales biliares y los antibiticos entre otros. Los medios de enriquecimiento son medios lquidos que se utilizan para incrementar la cantidad de clulas bacterianas de una especie existente en una mezcla. Su actividad depende, como en los selectivos, de la incorporacin de sustancias con actividad inhibitoria para determinadas bacterias. Durante la incubacin se produce la multiplicacin en el medio lquido de las bacterias que se desean aislar y se inhibe la de las dems bacterias. Tras la incubacin, cuando la especie buscada ya est en una proporcin muy superior a la de las bacterias que le acompaaban inicialmente en la muestra clnica, se efecta una resiembra en un medio selectivo slido. Los medios diferenciales son medios slidos que incorporan a su formulacin un substrato cuya utilizacin o no por las diferentes especies bacterianas da lugar a colonias de aspecto diferente; especies cuyas colonias en medios usuales apareceran como idnticos. Los substratos ms utilizados son azcares (lactosa, sacarosa, etc.) que se aaden al medio junto a un colorante que es indicador de pH (rojo de fenol, azul de bromotimol, etc.). Las bacterias que no utilizan el substrato dan lugar a colonias con el color original del medio al no modificar el pH. Las que lo utilizan acidifican el medio con sus catabolitos y dan lugar a colonias de otro color al virar el indicador de pH. Los medios cromognicos son medios diferenciales que incorporan substratos qumicos sintticos, que unidos a sustancias naturales son incoloros. Algunas bacterias, mediante enzimas especficas pueden hidrolizar estos enlaces y liberar compuestos de color intenso (Figura 17). La mayora de medios selectivos se formulan a la vez como diferenciales, funcionan por tanto como medios selectivos-diferenciales.
12 Las heces y el esputo contienen decenas o centenas de diferentes especies bacterianas 16 8. Taxonoma bacteriana Las bacterias se clasifican en grupos taxonmicos, siendo la familia, el gnero y la especie los ms operativos desde el punto de vista de la microbiologa mdica. La unidad taxonmica bsica es la especie bacteriana. En la actualidad el criterio utilizado para establecer que dos bacterias pertenecen a una misma especie es el de la homologa gentica que existe entre ellas (taxonoma gentica). Si se supone que la secuencia de bases del DNA de una bacteria es AGTCCGCTAT, se considerar con una homologa del 100% las que poseen la misma secuencia AGTCCGCTAT. Si se supone que otra bacteria posee una secuencia ATTCCTAGTT, en la que slo coinciden con la primera la mitad de las bases su homologa con ella es del 50%. Se consideran como pertenecientes a la misma especia aquellas bacterias que poseen una homologa gentica superior al 80%. La tcnica que permite determinar la homologa gentica entre dos bacterias es la de hibridacin. Si se estudian los caracteres metablicos de las bacterias, en la mayora de los casos puede efectuarse una correlacin entre stos y el grupo taxonmico definido por hibridacin. Las especies semejantes entre s se agrupan en gneros y estos en familias. La familia y el gnero se denominan mediante un nombre cientfico latino (vg: familia Pseudomonadacae, gnero Pseudomonas). La especie se denomina mediante dos nombres latinos, el primero de los cuales es el del gnero y el segundo el propio de la especie (vg: Pseudomonas aeruginosa). A veces se utilizan como sinnimos nombres coloquiales vernculos (vg: Pseudomonas aeruginosa, sinnimo bacilo piocinico). 9. Identificacin de las bacterias La identificacin de una bacteria como perteneciente a una determinada especie se establece en la prctica basndose en caracteres estructurales, metablicos y antignicos (fenotpicos). Ello es posible, a pesar de que los grupos taxonmicos se establecen por criterios genticos, porque cada grupo definido por tcnicas genticas presenta caracteres fenotpicos y propios del grupo. 17 Los caracteres ms universalmente estudiados son la morfologa, la reaccin al Gram y al Ziehl, la presencia de esporas y flagelos (movilidad), el tipo respiratorio, su exigencia en factores esenciales de crecimiento y la presencia de catalasa y citocromooxidasa que permiten diferenciar las bacterias en grandes grupos. Otros caracteres estudiados son su actividad metablica sobre diversos substratos como azcares, aminocidos, lpidos, etc. Para estudiar estas propiedades metablicas se utilizan medios de identificacin que incorporan los substratos a estudiar. La metabolizacin de los substratos por la bacteria se detecta mediante indicadores de pH cuando comporta un cambio importante del pH del medio o mediante la deteccin de un catabolito especfico producido en el proceso metablico, mediante reactivos que sufren variaciones de color (como por ejemplo la deteccin del indol, producido por metabolizacin del triptfano, mediante el reactivo de Kovacs de color amarillo que vira a rojo). En la actualidad existen en el mercado sistemas de identificacin que incorporan los diversos medios de identificacin a micropocillos dispuestos en soportes de plstico. Estos sistemas han facilitado, mediante la realizacin sencilla de numerosas pruebas metablicas, la identificacin de las bacterias. Los antgenos que poseen valor en la clasificacin bacteriana infraespcifica pueden detectarse, la mayora de las ocasiones, por pruebas sencillas de aglutinacin en porta mediante antisueros especficos. Aparte del serotipado existen otros mtodos para la deteccin de grupos bacterianos diferentes dentro de una misma especie (clasificacin infraespecfica), como son el fagotipado (lisotipado), el antibiotipado y otros basados en tcnicas de biologa molecular 13 . 10. Bacterias de inters en medicina Las bacterias de inters en medicina pueden clasificarse, segn un criterio patognico, en dos grupos: las que forman parte de la flora normal del hombre en la piel y las mucosas digestiva, respiratoria y urogenital, como simbiontes inocuos y las patgenas que poseen capacidad para producir enfermedad. Esta diferencia
13 Polimorfismo de fragmentos de restriccin del ADN, ribotipado, diferencias en isoenzimas, y otros (ver ms adelante) 18 prctica, en realidad no es tajante ni absoluta, ya que la capacidad patgena de un microorganismo depende tanto de l como de la capacidad de defensa del hospedador, lo que se refleja en dos hechos: 1) la existencia de portadores sanos de bacterias patgenas y 2) que bacterias de la flora normal pueden causar en determinadas circunstancias infecciones oportunistas graves. Las infecciones bacterianas se caracterizan por ser de curso agudo, con fiebre, leucocitosis, signos biolgicos de reaccin de fase aguda (VSG, protena C reactiva y fibringeno elevados), y dar signos focales dependientes de los rganos afectados por la infeccin. Algunas bacterias como las brucelas (fiebre de Malta) o el bacilo de Koch (tuberculosis), despus de la primoinfeccin, tienen capacidad para persistir en los macrfagos durante aos en estado latente, pudiendo dar lugar a reactivaciones. Se dispone de numerosos medicamentos antibacterianos tiles, aunque su uso, en ocasiones indiscrimado, ha favorecido la seleccin de cepas resistentes. Slo existen vacunas eficaces frente a algunas bacterias capsuladas y toxignicas. A continuacin se presentan sucintamente algunas bacterias de inters mdico. La mayora de estas bacterias se visualizan fcilmente al microscopio ptico y crecen bien en diversos medios de cultivo a temperatura ptima de 35 a 37C, en caso contrario se seala en el texto. Cocos grampositivos Los cocos grampositivos incluyen tres gneros de gran inters, Staphylococcus, Streptococcus y Enterococcus. Gnero Staphylococcus. Los estafilococos son cocos grampositivos que se agrupan en racimos. La especie Staphylococcus aureus [Sin: estafilococo dorado] es la que posee mayor capacidad patgena por producir numerosas enzimas exocelulares involucradas en la patogenicidad. Una de ellas, la coagulasa, permite diferenciar esta especie del resto de especies de estafilococos de inters en medicina, como S. epidermidis y otros, denominados colectivamente estafilococos coagulasa negativa. Los estafilococos se hallan fundamentalmente en la piel y mucosa nasal. S. aureus causa por mecanismo invasor, penetrando a las glndulas sebceas y folculos 19 pilosos o a travs de heridas, infecciones cutneas, desde las que puede difundir por va hemtica, ocasionando infecciones generalizadas. Algunas cepas de S. aureus producen distintas exotoxinas que dan lugar a enteritis y otros procesos patolgicos 14 . Los estafilococos coagulasa negativa son los agentes causales ms frecuentes de infecciones oportunistas asociadas a cuerpos extraos como catteres endovasculares, prtesis valvulares cardacas y prtesis articulares, entre otras. Gnero Streptococcus. Los estreptococos son cocos grampositivos que se disponen en cadenas o parejas. Al cultivarlos en agar-sangre pueden dar lugar a diversos tipos de hemolisis de la sangre alrededor de las colonias por liberacin de hemolisinas, lo que permite diferenciar 1) los estreptococos que poducen hemolisis total de la sangre y que se denominan -hemolticos, 2) los que producen hemolisis parcial, denominados -hemolticos o viridans y 3) los no hemolticos. Entre los -hemolticos, que se diferencian en serogrupos 15 por la estructura antignica del carbohidrato C de su pared, se incluye Streptococcus pyogenes (Grupo A), que se halla en la faringe. Puede producir infecciones graves en la propia faringe y en la piel. Algunas cepas lisognicas producen una exotoxina eritrognica, que hace que la infeccin local invasora faringitis o piodermitis se acompae de un exantema cutneo caracterstico causado por la exotoxina dando lugar a un cuadro clnico denominado escarlatina. Por otra parte en algunas personas, despus de la infeccin invasora, pueden aparecer lesiones a distancia como consecuencia del desencadenamiento de una reaccin inmunopatolgia que da lugar a un cuadro clnico sistemtico, la fiebre reumtica, que se acompaa de inflamacin asptica local en las articulaciones (artritis) y en el endocardio (endocarditis). Tambin se puede producir lesin en los glomrulos renales por mecanismo inmunopatolgico (glomorulonefritis). Obsrvese pues, que esta especie es capaz de producir infeccin por los tres mecanismos patognicos conocidos: invasor, toxignico e inmune.
14 El shock txico y el sndrome de la piel escaldada
15 Grupos A, B, C, D, E, F, G, H, K, L, M, N y O de Lancefield. Se sealan en cursiva las que pueden encontrarse en el hombre 20 S. agalactiae es otro estreptococo beta-hemoltico (Grupo B) que se halla en el tubo digestivo y vagina pudiendo causar, adems de infecciones urinarias, infecciones sistmicas perinatales (sepsis y meningitis) cuando el recin nacido se contamina a su paso por la vagina. No se conoce con precisin la va de penetracin de este microorganismo a los rganos profundos del recin nacido desde la colonizacin cutnea e intestinal (deglucin) del que tiene lugar a su paso por la vagina. Los estreptococos del grupo viridans, que comprende varias especies de taxonoma mal definida, forman parte de la flora normal de la orofaringe. Streptococcus mutans, se considera directamente involucrado como agente causal de la caries dental, y el resto de especies, excepcionalmente pueden causar infecciones oportunistas (Tabla 1). Una especie particular de estreptococo -hemoltico, el neumococo (Streptococcus pneumoniae), se halla en la faringe y posee gran capacidad para producir infeccin pulmonar severa neumona seguida con frecuencia de bacteriemia que puede dar lugar a meningitis de pronstico muy grave. Posee una cpsula polisacrida antignica que ha permitido dividir la especie en ms de 80 serotipos y que est involucrada en la patogenicidad por ser un factor de resistencia a la fagocitosis. Se ha preparado una vacuna polivalente con los antgenos capsulares de los 23 serotipos ms frecuentes y otra conjugada heptavalente 16 . La conjuntiva y las mucosas de los senos paranasales y del odo medio estn en comunicacin con la faringe a travs de sus conductos naturales y las infecciones bacterianas en esas localizaciones (conjuntivitis, sinusitis y otitis) estn causadas por patgenos que residen en la rino y orofaringe: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes y Staphylococcus aureus.
16 La vacuna 23-valente incluye los siguientes serotipos (nomenclatura danesa): 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F, 33F. Aunque la prevalencia de los serotipos patgenos vara segn el pas, se han sealado en cursiva los serotipos ms prevalentes en nuestro medio. Tambin son frecuentes los serotipos 6A, 7A y 15F, no incluidos en la vacuna. Recomendada en nios de ms de dos aos y adultos. La nueva vacuna conjugada de polisacridos y protenas heptavalente es eficaz en nios de corta edad.
21 El gnero Enterococcus, engloba un conjunto de especies (E. faecalis y otras 17 ), semejantes a estreptococos, de hbitat intestinal. Los enterococos poseen creciente inters en el campo de la infeccin oportunista; ya que por su elevada resistencia a los antimicrobianos son seleccionados fcilmente por los antibiticos de amplio espectro. Cocos gramnegativos Gnero Neisseria. Los cocos gramnegativos de mayor inters en medicina pertenecen al gnero Neisseria. Morfolgicamente se presentan formando parejas con aspecto de granos de caf enfrentados por su cara plana. Son aerobios estrictos. El gnero posee varias especies comensales ubicadas en la orofaringe y dos especies patgenas N. meningitidis (meningococo), y N. gonorrhoeae (gonococo) cuyo nico hbitat natural es el hombre. El meningococo se halla en la faringe, se transmite por va area, y bajo determinadas circunstancias mal parecidas, puede producir bacteriemia para localizarse en las meninges causando se asocia a shock sptico. La meningitis meningococica es ms frecuente en la infancia y suele presentarse en brotes epidmicos. Basndose en la estructura antignica de los polisacridos de la cpsula se han diferenciado 13 serogrupos, los ms frecuentes de los cuales son el A, B, C, W-135 y el Y. Se han ensayado vacunas que han resultado eficaces frente a los serogrupos A y C pero el hombre responde mal a la inoculacin del antgeno del grupo B que es el ms frecuente en nuestro medio 18 . El gonococo causa infecciones genitales: de la uretra (uretritis), del cervix uterino (cervicitis) y del recto (proctitis) de transmisin sexual 19 . Tras la infeccin clnica
17 Las especies ms frecuentes aisladas en clnica son: E. faecalis (80-90%), E. faecium (5-10%), E. avium, E. raffinosus y E. gallinarum, que se aslan raramente. El aislamiento de otras especies es excepcional. Estos microorganismos causan infecciones urinarias, colecistitis, infecciones intraabdominales y plvicas, sepsis y con menor frecuencia endocarditis bacteriana, as como infecciones en otras localizaciones
18 Ello ha conducido a ensayar vacunas utilizando como antgenos no el polisacrido, sino las protenas de membrana externa 22 algunas personas pueden persistir como portadores asintomticos del microorganismo en la uretra, vagina y recto y transmitir la enfermedad. En el gnero Neisseria existe un gran nmero de especies que son simbiontes inocuos en la orofaringe, entre las que cabe destacar N. catarrhalis por su potencial patgeno recientemente descubierto (infecciones respiratorias). Este micro- organismo ha sido transferido a otro gnero bajo la denominacin de Moraxella catarrhalis. Bacilos grampositivos Entre los bacilos grampositivos aerobios estrictos o facultativos, los gneros de mayor inters en medicina son Corynebacterium, Listeria, Bacillus y Lactobacillus 20 . Corynebacterium diphtheriae causa la difteria que se caracteriza por una faringitis muy exudativa que puede llegar a obstruir la va respiratoria, con grave sintomatologa general por produccin de una potente exotoxina que al ser absorbida afecta al miocardio y nervios perifricos. Existen portadores sanos del microorganismo, que se transmite por va area. La toxina est codificada por un bacterifago lisognico (fago ). El asilamiento de C. diphtheriae de la faringe no es fcil, requiere medios especiales y un cierto nivel de experiencia. Aunque la disposicin de una vacuna antidiftria eficaz ha erradicado en nuestro medio la enfermedad y disminuido el nmero de portadores, la vacunacin inadecuada de la poblacin podra hacerla reaparecer. Otras especies de este gnero, denominadas colectivamente difteroides o difteromorfos 21 , forman parte de la flora normal de la piel y mucosas y pueden causar, como oportunistas, infecciones sobre catteres, sondas , prtesis y otros cuerpos extraos, una patologa semejante a la de los estafilococos coagulasa- negativa.
19 Las enfermedades cuya transmisin especfica es por contacto sexual tambin se denominan venreas
20 Excepcionalmente Erysipelothrix rhusiopathiae, bacilo grampositivo no esporulado que se encuentra en los peces puede infectar la piel humana a travs de microheridas causando el erisipelatoide, infeccin cutnea eritematoviolcea que constituye una zoonosis profesional (pescateros, cocineros, etc.)
21 Corynebacterium jeikeium, C. urealyticum, C. pseudodiphthericum, C. pseudotuberculosis, C. xeroris, C. striatum, y el grupo no nominado G-2. C. minutissimum, causa una infeccin cutnea caracterstica: la eritrasma 23 El gnero Listeria posee una especie, Listeria monocytogenes, psicrfila (crece a 4C), que se halla ampliamente distribuida en la naturaleza en particular en el tubo digestivo de numerosos animales. Puede contaminar al hombre de modo directo o a travs de los alimentos. Una vez que ha colonizado el tubo digestivo humano puede persistir asintomticamente o producir una patologa en todo semejante a la del estreptococo hemoltico del grupo B (contaminacin del neonato, sepsis con meningitis y meningitis primaria en el inmunodeprimido). El gnero Bacillus se distingue por su morfologa caracterstica, producir esporas y crecer en aerobiosis 22 . Dos especies poseen potencial patgeno para el hombre. Bacillus anthracis causa el carbunco en los animales y el hombre. La puerta de entrada de la infeccin es cutnea, dando lugar a una lesin local caracterstica la pstula maligna desde donde puede producir sepsis. La inhalacin de esporas causa una neumona grave. El carbunco es una enfermedad zoontica y profesional (pastores, matarifes, curtidores, etc). Bacillus cereus contamina con sus esporas, abundantes en el suelo, los alimentos y al germinar y multiplicarse en ellos libera toxinas que al ser ingeridas causan gastroenteritis. Lactobacillus es un gnero algunas de cuyas especies constituyen parte de la flora normal de la vagina. Bacilos gramnegativos Familia Enterobacteriaceae. Incluye ms de 20 gneros y 100 especies de bacilos gramnegativos, aerobios y anaerobios facultativos que crecen bien en medios usuales. La mayora tiene su hbitat natural en el medio ambiente (agua, tierra). Algunas especies se han adaptado al tubo digestivo de numerosos animales incluyendo el hombre, como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae o Proteus mirabilis, constituyendo parte de la flora normal. Estas bacterias, con E. coli a la cabeza, pueden causar infeccin oportunista grave (urinaria, abdominal, respiratoria y sepsis) y son junto a algunas bacterias anaerobias que desde su mismo hbitat producen infecciones semejantes, a Staphylococcus epidermidis, que causa infecciones asociadas a cuerpos extraos, los agentes causales ms frecuentes de infeccin oportunista.
22 Carcter diferencial con el otro gnero esporulado de inters en patologa humana (Clostridium), que es anaerobio estricto y con el que morfolgicamente es indistinguible 24 Esta familia, incluye, adems varios gneros patgenos para el hombre como Shigella, Salmonella, Yersinia y algunas cepas de la especie Escherichia coli que poseen factores de enteropatogenicidad comportndose como patgenos primarios (Tabla 2). Esta familia de microorganismos es una de las ms estudiadas en bacteriologa, en particular E. coli, que es la bacteria aerobia y anaerobia facultativa ms abundante en el tubo digestivo del hombre, y que por su facilidad de cultivo a sido tomada como modelo de estudio de las clulas procariotas, siendo probablemente el ser vivo mejor conocido desde el punto de vista biolgico (estructura , fisiologa y gentica). Una caracterstica de inters de algunos miembros de esta familia es que distintos grupos dentro de una misma especie poseen potencialidades patognicas muy diversas y ello no slo en E. coli sino tambin en Salmonella y Yersinia, como se ha descrito en la Tabla 2. En otra familia de bacilos gramnegativos, Pseudomonadaceae, el gnero Pseudomonas y en particular P. aeruginosa posee caractersticas microbiolgicas y de hbitat muy semejantes a las enterobacterias telricas. Ocasionalmente pueden colonizar el tubo digestivo, la orofaringe o la piel del hombre, y causar infecciones oportunistas semejantes a las causadas por enterobacterias comensales 23 . Las pseudomonas forman parte de un amplio grupo de bacilos gramnegativos aerobios que se hallan en abundancia en las plantas y el medio ambiente denominados colectivamente bacilos gramnegativos no fermentadores 24 . Aparte de P. aeruginosa se encuentran en este grupo los gneros Burkholderia (B. cepacia, B. pseudomallei), Stenotrophomonas (S. maltofhilia). Bacterias de morfologa espirilar. El gnero Vibrio est formado por bacilos gramnegativos con morfologa curvada y su hbitat natural lo constituyen los ecosistemas acuticos (marinos y de agua dulce). La especie Vibrio cholerae se
23 Aparte de P. aeruginosa existen otras especies del gnero Pseudomonas que tambin causan infecciones oportunistas aunque con menor frecuencia, como P. fluorescens y P. putida, P. stutzeri, etc. Existen dos especies, B. mallei y B. pseudomallei patgenas primarias para los animales y ocasionalmente el hombre, causantes del muermo y la meliodosis respectivamente; estas especies patgenas no se hallan en nuestro pas (S. E. asitico, O. Medio, frica, Australia).
24 Entre estos gneros de bacilos gramnegativos no fermentadores telricos, que pueden causar infecciones oportunistas se hallan Acinetobacter, (A. baumanii), Alcaligenes y Flavobacterium, entre otros. 25 divide por su antgeno 0 (somtico) en ms de 80 serogrupos, pero slo las cepas del serogrupo 1 (01) producen el clera mediante liberacin de una potente exotoxina tras colonizar la mucosa del intestino 25 . El clera, que posee un gran potencial epidmico (pandemias), es una gastroenteritis toxignica muy grave por la intensa deshidratacin que causa, y en ausencia de tratamiento presenta una elevada tasa de mortalidad. Otros vibriones pueden tambin producir patologa al hombre 26 . Gnero Campylobacter. Campylobacter jejuni, posee una morfologa espirilar muy caracterstica, es microaerfilo, se halla en el tubo digestivo de diversos animales, en particular a aves y causa enteritis al hombre 27 . Es de destacar que C. jejuni y las salmonelas gastroenterticas son con mucho las bacterias ms frecuentemente causantes de enteritis en nuestro medio. Helicobacter pylori, con caractersticas morfolgicas y de cultivo semejantes a las campilobacterias tiene como hbitat natural la mucosa gstrica del hombre y se ha relacionado con las gastritis crnica, la lcera duodenal y el cncer de estmago y otros procesos patolgicos. Bacterias hemfilas. Los hemfilos (gnero Haemophilus) son bacilos gramnegativos pleomrficos, que requieren para su crecimiento los factores X y V que se hallan en la sangre de ah su nombre por lo que se cultivan en agar chocolate. La especie que causa infeccin con mayor frecuencia es H . influenzae. En trminos nemotcnicos puede decirse que su hbitat natural, (orofaringe), y su capacidad patgena (neumona, sepsis, meningitis, as como otitis, conjuntivitis y sinusitis) es semejante a la del neumococo. Adems ambas bacterias poseen cpsulas como
25 Recientemente se han descrito cepas de otro serogrupo aparte el 01 (0139) productoras de toxina colrica
26 Los otros serotipos de V. cholerae y V. parahaemolyticus, pueden infectar al hombre por consumo de marisco, causando gastroenteritis. Las especies V. vulnificus, V. alginolyticus y otros pueden causar infecciones de heridas y otitis en baistas
27 Otras especies de Campylobacter que causan enteritis al hombre con menor frecuencia son C. coli y C. lari. C. fetus puede colonizar el tubo digestivo y causar sepsis primaria oportunista; pero no causa gastroenteritis 26 factor de virulencia ya que les permite eludir la fagocitosis 28 . Existe una vacuna preparada con el antgeno capsular del serotipo b, que es el ms prevalente en las infecciones humanas. Entre las dems especies del gnero (tabla 3) destaca H. ducreyi que produce el chancroide (lcera genital con adenomegalia satlite) enfermedad de transmisin sexual, poco frecuente en nuestro medio. Bordetella pertussis es un cocobacilo gramnegativo aerobio estricto de morfologa semejante a Haemophilus. Cuando infecta el rbol traqueobronquial causa una enfermedad respiratoria local acompaada de sntomas generales severos (tosferina). La patogenia de la enfermedad es compleja. La disposicin de una vacuna eficaz, ha hecho que esta enfermedad sea poco frecuente en nuestro medio. Gardnerella vaginalis, morfologicamente semejante a los hemofilos, se asocia a una patologa vaginal muy frecuente denominada vaginosis; que se caracteriza por: 1) desaparicin de la flora normal de lactobacilos de la vagina, con aparicin de Gardnerella y anaerobios 2) flujo moderado o abundante con olor ftido caracterstico y 3) molestias vaginales imprecisas. A pesar de la presencia regular de este microorganismo en la vagina de las pacientes con este cuadro clnico no se conoce con precisin su papel patgeno en el proceso. Brucelas. El gnero Brucella est formado por bacilos gramnegativos pequeos, aerobios estrictos, que crecen bien en medios usuales, pero lo hacen lentamente. El gnero incluye varias especies siendo B. melitensis la ms frecuente en nuestro medio. Esta especie infecta a los animales, en particular el ganado caprino y ovino producindoles diversos procesos patolgicos (aborto epidmico). Pueden alcanzar al hombre en general a travs de productos lcteos, como la leche y el queso, causando una grave enfermedad generalizada acompaada de septicemia persistente conocida como fiebre de Malta 29 .
28 En H. influenzae se han descrito diferentes inmunotipos de cpsula (a, b, c), siendo el b el que produce con mayor frecuencia infecciones sistmicas en el hombre. Bajo determinadas circunstancias, cepas no capsuladas pueden tambin producir infecciones invasivas 29 Otras especies que producen al hombre un cuadro clnico semejante son B. abortus (ganado bovino) B. suis (ganado porcino) y ms raramente B. canis (perros)
27 Las brucelas poseen inters conceptual por varias razones; en primer lugar por constituir un ejemplo claro de zoonosis (enfermedades de los animales trasmisibles al hombre) y en segundo lugar porque su capacidad biolgica para persistir en los macrfagos tras ser fagocitadas caracterstica que comparten con las micobacterias las faculta para producir infecciones recidivantes, a diferencia de las bacterias estudiadas hasta ahora cuyas infecciones poseen un carcter agudo. Legionela. El gnero Legionella est formado por bacilos o cocobacilos con estructura de bacterias gramnegativas. Se tien mal por el mtodo de Gram. Son aerobios estrictos y requieren para su cultivo medios especficos en los que crecen lentamente ( 3 das) . Su hbitat natural lo constituyen los ambientes acuticos. Algunas especies de entre las ms de 22 existentes causan infeccin humana, la ms frecuente es L. pneumophila 30 (14 serogrupos) que al alcanzar al hombre por inhalacin de vapor de agua contaminada produce una neumona grave, o un sndrome febril ms benigno, denominado fiebre de Pontiac, en particular en personas ancianas o con un dficit en las defensas antiinfecciosas. Se han descrito epidemias en instituciones causadas por el vapor de agua (aerosoles) de las duchas o calefaccin, y en barrios de ciudades por vapor de agua contaminado eliminado a partir de industrias. Bacterias alcohol cido-resistentes Un conjunto de bacterias cuya pared presenta la estructura bsica de las bacterias grampositivas, poseen en sta gran cantidad de cidos grasos, entre ellos cidos miclicos, que les confieren el carcter de la alcohol-cido resistencia, lo que puede constatarse mediante la tincin de Ziehl-Neelsen. El gnero Mycobacterium es el ms importante de este grupo 31 . Gnero Mycobacterium. Las micobacterias son bacilos que se tien difcilmente mediante la tincin de Gram, pero se observan como alcohol-cido resistentes mediante la tincin de Ziehl.
30 Seguida por L. micdadei, L.bozemanii, L. dumoffii, L. longbeachae y otras 31 Los gneros Nocardia y Rhodococcus tambin estn constituidos por bacterias dbilmente alcohol- cido resistentes. Sus especies y en particular N. asteroides y R. equi pueden causar infecciones oportunistas pulmonares
28 Se hallan ampliamente distribuidas por la naturaleza constituyendo, como sucede en otras familias bacterianas, un espectro que va desde especies saprfitas telricas no patgenas, hasta especies estrictamente adaptadas al hombre con gran capacidad patgena. Son aerobias estrictas y crecen en medios orgnicos complejos con yema de huevo y glicerol, siendo sus exigencias nutritivas variables y el tiempo de generacin tambin variable, diferencindose a este respecto en dos grupos, crecedoras lentas y crecedoras rpidas (> o < 5 das). Algunas especies producen regularmente pigmentos carotenoides (escotocromgenas), otras los producen tras induccin por la luz (fotocromgenas) y otras no los producen (no cromgenas). Estos caracteres tiempo de crecimiento y pigmentacin se han utilizado para la clasificacin inicial de las numerosas especies definidas en la actualidad (Tabla 4). M. tuberculosis (bacilo de Koch) es la especie ms importante por su capacidad patgena causando la tuberculosis humana. Se caracteriza por su crecimiento lento y no producir pigmento. Su husped natural es el hombre. Se transmite por va area y produce principalmente infeccin pulmonar desde donde puede difundir a otros rganos por va hematgena 32 . Otras especies afines a M. tuberculosis, son M. africanum y M. bovis; esta ltima produce enfermedades en los bvidos y puede transmitirse al hombre, y una micobacteria (M. bovis), modificada en el laboratorio por cultivos repetidos en medios glicerinados con lo que se consigui la atenuacin de su capacidad patgena, se denomina Bacilo de Calmette y Guerin (BCG) y es utilizada como vacuna. Otras especies de inters en patologa son M. kansasii, M. scrofulaceum, M. avium M. intracellulare y M. xenopi, entre los crecedores lentos y M. fortuitum y M. chelonae entre los rpidos. Mycobacterium leprae, causa la lepra. No ha podido ser cultivada en medios artificiales, pero s propagada por inoculacin en el cojinete plantar al armadillo. Su
32 Rin, genitales, meninges 29 husped natural es el hombre, aunque tambin se han documentado infecciones naturales en los armadillos. Bacterias anaerobias Las bacterias anaerobias incluyen un amplio conjunto de gneros y especies (cocos y bacilos grampositivos y gramnegativos) que crecen nicamente en ausencia de oxgeno (anaerobiosis) y requieren para su cultivo medios enriquecidos con sangre. Poseen una morfologa relativamente caracterstica, por lo que un observador experimentado puede sospechar su presencia al observarlas por el mtodo de Gram. Se hallan formando parte de la flora autctona de la orofaringe (surcos gingivodentales y criptas amigdalares) y del tubo digestivo, particularmente en el colon, constituyendo el grupo ms abundante de la flora normal del intestino. Las bacterias anaerobias de mayor inters en medicina son las pertenecientes a los gneros Peptostreptococcus, que son cocos grampositivos, Bacteriodes, Prevotella, Porphyromonas y Fusobacterium, que son bacilos gramnegativos, y Eubacterium, Bifidobacterium, Propionibacterium 33 y Actinomyces que son bacilos grampositivos no espurulados y Clostridium que es un gnero de bacilos grampositivos esporulados. Los gneros sealados, excepto Clostridium y Actinomyces que incluyen especies patgenas primarias, causan infecciones oportunistas. El gnero Clostridium est formado por bacilos grampositivos esporulados 34 En l junto a especies comensales, existen otras de elevado poder patgeno por produccin de exotoxinas como C. difficile que causa enteritis, C. perfringens y otras que causan gangrena gaseosa, C. tetani que causa el ttanos y C. botulinum que produce el botulismo (Tabla 5).
33 En el lenguaje coloquial suele referirse colecticamente como bacteriodes a los gneros Bacteriodes, Prevotella, Porphyromonas y Fusobacterium y como corinebacterias anaerobias a Eubacterium, Bifidobacterium y Propionibacterium 34 Recurdese que Bacillus (aerobio) y Clostridium (anaerobio), son los nicos gneros bacterianos de inters mdico que forman esporas
30 La vacuna antitetnica, elaborada con toxina tetnica inactiva (toxoide), es de extraordinaria eficacia. Las bacterias anaerobias no slo requieren la anaerobiosis para su multiplicacin, sino que el oxigeno es letal para ellas, por lo tanto las muestras clnicas en las que se sospecha su presencia (exudado, pus, esfacelos, etc) deben tomarse y trasladarse al laboratorio mediante tcnicas adecuadas para evitar su contacto con el oxgeno atmosfrico. Por descontado que la incubacin de los medios de cultivo en que se siembran debe hacerse en anaerobiosis. Bacterias sin pared Gnero Mycoplasma. Los micoplasmas constituyen un grupo de bacterias carentes de pared, por lo que son pleomrficos, flexibles, frgiles y susceptibles a la lisis osmtica. Su tamao es de 0.2 0.3 m. por lo que algunas clulas son submicroscpicas. Poseen un genoma relativamente pequeo. En la naturaleza se hallan fundamentalmente asociados a las mucosas de los animales y a las plantas y pueden causar diversas enfermedades. La especie de mayor inters en medicina en M. pneumoniae que causa infeccin pulmonar (neumona atpica) 35 . Los micoplasmas pueden manipularse y estudiarse por tcnicas bacteriolgicas convencionales, pero debido a que se tien mal con la tincin de Gram, requieren medios de cultivo complejos y crecen muy lentamente; para su deteccin en microbiologa clnica se han adoptado tcnicas alternativas al examen directo y el cultivo fundamentalmente pruebas serolgicas y genticas. Espiroquetas Las espiroquetas constituyen un grupo heterogneo de bacterias definidas por su morfologa espiral, presencia de fibras con estructura flagelar en el espacio periplsmico y movilidad caracterstica.
35 El concepto de neumona atpica se aplica a las neumonas que presentan una clnica diferente de la neumona neumoccica, considerada como tpica. Estn causadas Mycoplasma, Chlamidia, Chlamidophila, Coxiella y virus respiratorios. Las legionelas, presentan un cuadro clnico ms diferenciado y grave 31 La familia Spirochetaceae incluye tres gneros de inters en patologa humana, Treponema, Borrelia y Leptospira. La mayora de las espiroquetosis evolucionan por estadios con manifestaciones clnicas, separados por perodos de latencia asintomticos de duracin variable. Es difcil definir la importancia relativa del mecanismo invasor y el inmune en la patogenia de los estadios clnicamente expresivos. El gnero Treponema incluye especies patgenas para el hombre como T. pallidum causante de una enfermedad venrea, la sfilis, otras causantes de enfermedades no venreas y varias especies no patgenas para el hombre (Tabla 6). Treponema pallidum, causante de la sfilis, es el patgeno humano ms importante de este gnero. Tiene al hombre como nico husped natural. No se visualiza por el Gram, debido a su pequeo dimetro (0,15 x 10 m) pero puede visualizarse por microscopia de campo oscuro y mediante tinciones argnticas. No crece en medios artificiales y para su propagacin debe inocularse a animales de experimentacin (testculo de conejo). La sfilis es una enfermedad de transmisin sexual, caracterizada porque la lesin inicial primaria en el lugar de inoculacin, generalmente las mucosas genitales, es una lcera indolora que cura espontneamente. La enfermedad evoluciona, progresiva y asintomticamente al estadio secundario y posteriormente con lentitud al terciario, afectando a numerosos rganos, como la piel, el hgado, el endocardio y el SNC y pudiendo transmitirse al feto por va placentaria (sfilis congnita). El diagnstico de la sfilis es fundamentalmente serolgico. En el gnero Borrelia, B. recurrentis, causa la fiebre recurrente 36 , transmitida por piojos su reservorio es el hombre. Tras el perodo de inoculacin (7 das) se produce una espiroquetemia con afectacin del estado general, que suele curar despus de una semana para reaparecer 2 a 4 das despus. La enfermedad es endmica en algunas reas, como frica (Etiopia y Sudn), Asia y Amrica del Sur. Otras especies como B. duttonii y B. hispanica que causan un cuadro clnico semejante,
36 El carcter recurrente de la enfermedad se debe a que cuando la respuesta inmune ha controlado la infeccin emergen en bacterias con variantes antignicas que reactivan el proceso infeccioso al evadir la respuesta inmune inicial 32 tienen su reservorio natural en diversos roedores y alcanzan al hombre vehiculados por garrapatas del gnero Ornithodorus (Tabla 8). Las borrelias poseen un tamao de 2-4 x 10-30 m y pueden visualizarse en extensiones de sangre teidas por el mtodo de Giemsa. B. burgdorferi transmitida por garrapatas desde su reservorio animal (roedores) al hombre, causa la enfermedad de Lyme. Esta se caracteriza en una fase precoz por una lesin cutnea, el eritema crnico migrante cerca del lugar de inoculacin por la garrapata y sintomatologa gripal. Las manifestaciones tardas, que aparecen semanas o meses ms tarde, son recurrentes y se caracterizan por producir artralgias, artritis, meningitis y miocarditis que pueden responder a un proceso preponderantemente inmunopatolgico dada la escasez de bacterias observadas en esas lesiones. Aunque B. burgdorferi se tie por el mtodo de Giemsa y puede crecer en medios artificiales su diagnstico se hace habitualmente por serologa. En el gnero Leptospira, L. interrogans no se observa por su finura con las tinciones bacteriolgicas habituales (0,15 x 5-15 m) crece en aerobiosis en medios enriquecidos. Causa diversas enfermedades en animales (ratas, perros, bvidos) que las eliminan al medio (charcas) con la orina donde sobrevive varios das. Ocasionalmente se transmite al hombre desde el medio acutico a travs de lesiones cutneas o por ingesta causando bacteriemia seguida, tras un breve periodo asintomtico, de afectacin sistmica. La hepatitis, meningitis, afectacin renal y vasculitis son las manifestaciones clnicas prominentes. Clamidias (gneros Chlamydia y Chlamidophila) Las clamidias son bacterias con estructura semejante a las gramnegativas. Efectan sntesis proteica y biosntesis, ya que poseen vas anablicas diversas semejantes a otras bacterias hetertrofas, pero carecen de vas metablicas para la obtencin de ATP y la reoxidacin del NADH, por lo que dependen de las clulas eucariotas, para obtener aporte energtico, siendo por tanto parsitos intracelulares obligados. Presentan dimorfismo entre su estadio de multiplicacin intracelular y la forma libre, lo que constituye uno de los escasos procesos de diferenciacin celular del mundo bacteriano. 33 La partcula extracelular infecciosa presenta una estructura celular denominada cuerpo elemental de 0,3 m, con un nucleoide denso. Es ingerida por la clula susceptible por endocitosis, situndose en una vacuola endocitaria. Esta partcula evolucionar a una estructura mayor, de 0,5 m, denominada cuerpo reticulado que se divide para dar lugar a cuerpos elementales que son liberados por lisis celular. Se tien mal por el mtodo de Gram, pero pueden colorearse por Giemsa u otras tinciones, mediante las cuales, adems, puede observarse en las clulas la presencia de cuerpos de inclusin formados por el cuerpo reticulado. El examen microscpico convencional no se utiliza rutinariamente para su deteccin en tejidos y exudados. Se multiplican en cultivos celulares por lo que se estudian por tcnicas semejantes a las empleadas en virologa. El gnero Chlamydophila incluye dos especies de inters: C. psittaci que tienen su reservorio natural en diversas aves, C pneumoniae con reservorio humano, causantes de infecciones pulmonares (neumona atpica). Chlamydia trachomatis, que produce diversos y heterogneos procesos patolgicos como el tracoma (conjuntivitis crnica folicular maligna), el linfogranuloma venreo, uretritis, cervitis, conjuntivitis e infeccin pulmonar neonatal. Las clamidias poseen un antgeno comn de grupo y antgenos especficos de especie o serotipo 37 . En C. trachomatis se han descrito 15 serotipos (A, B, Ba, C-K, L1-L3). Existe una relacin especfica entre cada serotipo y los diversos procesos patolgicos sealados (Tabla 7); aunque no se conoce la causa de este hecho ni el porqu de la limitada distribucin geogrfica del tracoma y del linfogranuloma venreo. Rickettsias Las rickettsias son bacilos gramnegativos aerobios, de pequeo tamao, 0.3-2 m, que se tien mal por el Gram y son parsitos intracelulares obligados, aunque no se conoce con exactitud las razones de esta dependencia; por todo ello fueron inicialmente confundidas con virus.
37 El antgeno comn reside en el lipopolisacrido y los especficos en protenas de la membrana externa
34 La familia Rickettsiaceae comprende cuatro gneros de inters en medicina: Rickettsia, Coxiella, Rochalimea y Ehrlichia. (Tabla 9). Todas las rickettsias presentan un reservorio natural animal y alcanzan accidentalmente al hombre para producir enfermedad a travs de artrpodos vectores, excepto Coxiella burnetii que se transmite al hombre por inhalacin o ingesta. Presenta una distribucin geogrfica localizada, o universal segn la especie. Las especies del gnero Rickettsia, tras ser inoculadas al hombre mediante la picadura de un artrpodo producen una infeccin generalizada, afectando a numerosos rganos, localizndose en las clulas endoteliales de los pequeos vasos sanguneos en los que se produce una vasculitis caracterstica. Clnicamente se expresan por fiebre, afectacin del estado general y exantema. R. prowazekii, cuyo reservorio natural es el hombre, es transmitida por piojos, causa el tifus epidmico 38 enfermedad inexistente en la actualidad en nuestro pas (frica, Asia y Sudamrica). En los pases de la cuenca mediterrnea, incluyendo el nuestro, existe una ricketssiosis exantemtica causada por R. conorii, transmitida por garrapatas, denominada fiebre botonosa mediterrnea. Coxiella burnetii, de distribucin universal, tiene como reservorio diferentes animales, bvidos, cabras y ovejas en las que causa diversas enfermedades, se elimina con las excretas y la leche y puede, por inhalacin o ingestin, causar infeccin sistmica denominada fiebre Q que se manifiesta como un sndrome febril sin focalidad. En otras ocasiones la infeccin causa neumona atpica y menos frecuentemente hepatitis. En la prctica las rickettsias no se visualizan mediante tcnicas de microscopa convencional y se cultivan en lneas celulares como los virus. Por estas razones y por su elevada contagiosidad en el laboratorio, su diagnstico suele efectuarse por mtodos serolgicos y otros.
38 La recurrencia del tifus epidmico que aparece aos despus de la infeccin se conoce como enfermedad de Brill 35
Figura 1. Estructura de la clula bacteriana 36
Figura 2. Membrana citoplasmtica Est formada por una doble capa de fosfolpidos en la que se encuentran embebidas protenas que pueden desplazarse lateralmente. 37
Figura 3. Fosfoglicridos Estn constituidos por una molcula de glicerol cuyos dos primeros hidroxilos se encuentran esterificados por molculas de cidos grasos, mientras que el hidroxilo del tercer tomo de carbono est esterificado por el cido fosfrico el cual esterifica a su vez a un alcohol o aminocido. 38
Figura 4. Peptidoglicano Es un polmero de dos aminoazcares (N-acetil-glucosamina y N-acetil-murmico) que se alternan. Estos polmeros se entrelazan dando lugar a una malla rgida: del N-acetil-murmico se originan unos tetrapeptidos que se unen entre s mediante puentes peptdicos. 39
Figura 5. Diferencias en la pared entre las bacterias grampositivas y gramnegativas En las bacterias grampositivas el peptidoglicano es muy grueso. En las bacterias gramnegativas, el peptidoglicano es una malla fina, existiendo por fuera del mismo una membrana externa que no se encuentra en las bacterias grampositivas. 40
Figura 6. Estructura de la pared celular de las bacterias grampositivas LTA: cidos teicoicos; WTA: Protenas fibrilares 41
Figura 7. Estructura de la pared celular de las bacterias gramnegativas 42
Figura 8. Liposacarido Est constituido por el lpido A inmerso en la membrana externa y una cadena polisacarida que sobresale hacia el exterior. El lpido A es un glicofosfolpido formado por un disacrido de N-acetil-glucosamina unido a grupos fosfato y a varias molculas de cidos grasos de cadena larga. En el polisacarido se distingue una parte interna formada por 5 a 7 azcares comunes a diversos grupos bacterianos y una parte externa o cadena lateral formada por una secuencia de 2 a 3 azcares que se repiten n veces. 43
Figura 9. Cpsula Estructura fibrilar polimrica, de naturaleza generalmente polisacrida que se sintetiza en el interior de la clula y se exporta al exterior. Por su actividad antifagocitaria constituye un importante factor de virulencia. Su visualizacin en el laboratorio de microbiologa suele hacerse por tinciones negativas. 44
Figura 10. Flagelos Estructuras fibrilares de naturaleza proteica, formadas por la agregacin de mltiples subunidades de una protena globular denominada flagelina. Constituyen el rgano de locomocin de las bacterias. 45
Figura 11. Disposicin de los flagelos en la superficie bacteriana Segn esta, las bacterias flageladas pueden subdividirse en: monotricas (un solo flagelo), periticas (varios flagelos distribuidos por toda la superficie bacteriana) y lofotricas (varios flagelos formando un penacho). 46
Figura 12. Esquema de la fermentacin de glucosa segn Embden-Meyerhof Es la va ms universal. Lleva al cido pirvico que es el catabolito central de otras vas fermentativas (metabolismo anaerobio) y de la va aerobia representada por el ciclo de Krebs. 47
Figura 13. Vas fermentativas del cido pirvico. Incluye, entre las ms importantes: lctica, alcohlica, cida mixta, butilenglicolica, butrica, propionica. En cualquiera de ellas, el aceptor de electrones liberados en los procesos oxidativos de los sustratos metablicos es un compuesto orgnico. 48
Figura 14. Ciclo de Krebs Los microorganismos con metabolismo aerobio pueden llevar los catabolitos producidos en las fermentaciones a niveles energticos aun ms bajos obteniendo mayor energa. En este proceso, se produce una oxidacin del sustrato con transferencia de los electrones al oxgeno a travs de la cadena respiratoria. 49
Figura 15. Colonia bacteriana Cuando las bacterias contenidas en un inculo se diseminan por la superficie del agar, se dividen en el lugar donde han quedado depositadas dando lugar al cabo de unas horas a una masa celular macroscpicamente visible denominada colonia bacteriana. 50
Figura 16. Curva de crecimiento La cintica del crecimiento bacteriano se establece experimentalmente midiendo las variaciones de la masa bacteriana en funcin del tiempo. Se observan cuatro fases: a) tiempo de latencia, b) crecimiento exponencial, c) estacionaria y d) muerte celular. 51
Figura 17. Medio cromognico Las colonias de las bacterias adoptan diferente color, en funcin del sustrato del medio que pueden hidrolizar. 52 Tabla 1. Estreptococos viridans
Bajo el nombre de estreptococos viridans se incluye un conjunto de estreptococos para los que no existe unanimidad en su clasificacin, difciles de identificar a nivel de especie mediante caracteres metablicos convencionales, que son generalmente alfa-hemolticos, sensibles a la vancomicina y productores de la enzima leucina- aminopeptidasa. Las distintas especies se han incluido en varios grupos en razn de la semejanza de sus caracteres metablicos. En la prctica, por las razones sealadas, no se identifican a nivel de especie y se hace referencia a ellos como estreptococos viridans.
Son comensales de la cavidad orofarngea y algunos se encuentran en el tracto respiratorio superior (S. milleri) y tracto intestinal (S. bovis y S. milleri).
Grupos Especie Patologa especfica 1
Grupo del S. mutans: S. mutans S. sobrinus S. rattus S. cricetus
Caries Endocarditis Grupo del S. salivarius: S. salivarius S. vestibularis S. intestinalis S. thermophilus
Bacteriemia en pacientes con cncer Endocarditis Streptococcus bovis: S. bovis I S. bovis II Bacteriemia en pacientes con cncer Endocarditis
Grupo Streptococcus milleri: S. anginosus S. constellatus S. intermedius Endocarditis Grupo del S. sanguis: S. sanguis S. gordonii S. parasanguis S. crista
Endocarditis Streptococcus mitis: S. mitis
Endocarditis Otros estreptococos viridans: S. acidomininus S. uberis
Endocarditis Estreptococos piridoxal dependientes 2 S. defectivus S. adjacens Endocarditis
1 Los estreptococos viridans pueden causar caries dental, endocarditis bacteriana subaguda (endocarditis lenta) y tambin pueden aislarse como contaminantes en hemocultivos y cultivos de lquido cefalorraqudeo, aunque cada vez con ms frecuencia causan infecciones en neonatos y pacientes inmunodeprimidos
2 Constituye un grupo de estreptococos auxotrficos para el piridoxal, que slo crecen en presencia de esta sustancia o en anaerobiosis 53 Tabla 2. Especies patgenas de la familia Enterobacteriaceae
Gneros patgenos Especies Patologa Observaciones Escherichia E. coli Gastroenteritis Slo algunas cepas de esta especie son enteropatgenas Shigella
La peste es una enfermedad que afecta a los ratones y puede alcanzar al hombre a travs de las pulgas.
Slo algunos serotipos de esta especie son patgenos para el hombre (O3; O5; O27; O8; O9; entre los ms frecuentes). 54 Tabla 3. Especies de Haemophilus aisladas en patologa humana.
La especie que con ms frecuencia causa infeccin en el hombre es H. influenzae del serotipo b. Causa una patologa semejante al neumococo (infeccin respiratoria y de estructuras pararespiratorias), sepsis y meningitis. Algunas cepas no capsuladas pueden ocasionar infeccin respiratoria y colonizacin vaginal, contaminando al neonato a su paso por el canal del parto y causando infeccin neonatal (sepsis con meningitis).
Algunas especies tras producir bacteriemia transitoria pueden causar endocarditis en pacientes con alteraciones valvulares.
Especie Frecuencia Distribucin Patologa H. influenzae frecuente Universal Infeccin respiratoria Sepsis Meningitis H. aegypticus 1 Pases clidos Conjuntivitis, fiebre purprica de Brasil H. parainfluenzae poco frecuente Universal Endocarditis H. aphrophilus poco frecuente Endocarditis H. paraphrophilus poco frecuente Endocarditis H. ducreyi Asia y frica Chancroide H. hemolyticus raro H. parahemolyticus raro
1 H. aegypticus corresponde al biotipo III de H. influenzae y causa especficamente conjuntivitis y la fiebre purprica de Brasil 55 Tabla 4. Principales especies de Mycobacterium
Solo M. tuberculosis tiene su reservorio animal en el hombre. El resto de especies se hallan en los animales (M. bovis) o son de hbitat telrico.
Los rganos lesionados que se sealan son los afectados con mayor frecuencia en personas previamente sanas. Las micobacterias pueden alcanzar otros rganos por va hemtica, particularmente en pacientes inmunodeprimidos.
Especie Patologa prevalente (localizacin) Crecedores lentos (>5 das)
* No cromgenos
M. tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, BCG) M. avium M. intracellulare M. ulcerans M. malmoense M. haemophilum
Piel, S.N.C. (lepra) 56 Tabla 5. Principales bacterias anaerobias
Las bacterias anaerobias se encuentran como comensales en la piel, orofaringe, tracto intestinal bajo, vagina y uretra terminal. Las infecciones causadas por anaerobios suelen tener un origen endgeno y ser polimicrobianas. La identificacin de estos microorganismos a nivel de especie no suele ser til a no ser que tengan caractersticas particulares de patogenicidad o resistencia que les diferencien de las de su gnero. Especie Consideraciones Distribucin Cocos grampositivos Gen. Peptostreptococcus P. magnus
Posible resistencia a la clindamicina
Presentes en cavidad oral, tracto gastrointestinal y genitourinario
Cocos gramnegativos Gen. Veillonela
Presente en cavidad oral Bacilos gramnegativos Gen. Bacteroides B. fragilis
B. thetaiotaomicron, B. distasonis, B. ovatus, B. uniformis
Gen. Porphyromonas Gen. Prevotella P. disiens P. bivia Gen. Fusobacterium F. necrophorum F. nucleatum F. mortiferum F. varium
Uno de los aislados con mayor frecuencia Mayor resistencia a los antibiticos que B. fragilis
Asociadas a infeccin del tracto genital femenino
Gran virulencia
Resistencia a la penicilina y clindamicina
Es el gnero predominante en el tracto intestinal. El complejo B. fragilis interviene con gran frecuencia en las infecciones de la cavidad abdominal. Los bacteroides pigmentados estn presentes en la cavidad oral y suelen asociarse a infecciones pulmonares
Similar a Bacteroides Similar a Bacteroides Presentes en vagina
De distribucin similar a los Bacteroides, suelen aislarse como causa de infeccin respiratoria Bacilos grampositivos no esporulados Gen. Eubacterium
Gen. Bifodobacterium Gen. Propionebacterium
Gen. Actinomyces
Gen. Mobiluncus Gen. Lactobacillus Gen. Ramibacterium
Asociado a infeccin del tracto genital femenino
Posible poder patgeno en ciertas circunstancias Suele requerir de tratamientos prolongados Asociados a vaginosis
Presentes en cavidad oral y en vagina
Presentes en cavidad oral Presentes en los folculos y en las glndulas sebceas de la piel
Presentes en vagina Presentes en vagina Bacilos grampositivos esporulados Gen. Clostridium C. tetani C. botulinum C. septicum
C. perfringens
C. difficile
C. ramosum C. clostridioforme, C. innocum
Causante del ttanos Causante del botulismo Se ha asociado con tumores malignos gastrointestinales Puede causar infecciones graves
Causa de colitis pseudomembranosa asociada a teraputica antibitica Posible resistencia a la penicilina, clindamicina y cefalosporinas
Presentes en el tubo digestivo del hombre y la mayora de animales, sus esporas se encuentran en gran nmero en el suelo 57 Tabla 6. Treponematosis humanas
El pin, la pinta y el bejel son infecciones cutneas que se transmiten por contacto directo. El reservorio natural de sus agentes es el hombre.
Especie Distribucin Patologa T. pallidum ss pallidum Mundial Sfilis T. pertenue Trpicos (frica, Amrica, Asia) Frambesia (Pin) T. carateum Trpicos (Amrica) Pinta
T. pallidum ss endemicum Distribucin irregular en zonas clidas y pobres frica sahariana, Asia) Bejel
58
Tabla 7. Infecciones por Chlamydia y Chlamydophila
Especie Patologa Chlamydophila psittaci Muchos serotipos mal sistematizados (Distribucin universal)
Su principal reservorio lo constituyen las aves domsticas y salvajes. La infeccin humana es una zoonosis contrada por la inhalacin de secreciones respiratorias o polvo de las excretas de aves infectadas. El cuadro clnico es de neumona atpica.
Chlamydophila pneumoniae Un serotipo (Distribucin universal)
Su reservorio es humano. Causa infeccin del tracto respiratorio alto (faringitis, sinusitis) y bajo (bronquitis, neumona atpica). Su transmisin es area.
Chlamydia trachomatis
Serotipos A, B, Ba, C (Prevalente en regiones desrticas o semidesrticas de frica, India, Pakistn, Indonesia y Australia)
Serotipos D, E, F, G, H, I, J, K (Distribucin universal)
Serotipos L 1 , L 2 , L 3
(Prevalentes en frica y Sudamrica)
Causan el tracoma; grave conjuntivitis folicular crnica, que constituye una de las causas ms importantes de ceguera evitable en las areas endmicas.
Uretritis y cervicitis de transmisin sexual que pueden complicarse con epidedimitis en el varn, endometritis, salpingitis y pelviperitonitis (enfermedad inflamatoria plvica) en la mujer, y proctitis en ambos sexos. Conjuntivitis de inclusin en adultos. El neonato puede contaminarse a su paso por el canal del parto. La mayora presenta conjuntivitis de inclusin. En el 5-10% puede observarse una neumona neonatal.
Dan lugar a linfogranuloma venreo, de transmisin sexual. Se caracteriza por una lesin inicial ulcerada en los genitales, que se resuelve espontnea y rpidamente. Posteriormente aparece linfoadenopata regional fistulizada que se sigue tardiamente de reaccin fibrtica y alteracin del drenaje linftico.
59 Tabla 8. Especies de Borrelia causantes de fiebre recurrente
Las fiebres recurrentes estn causadas por numerosas especies de Borrelia que tienen como reservorio al hombre o diversos roedores y son transmitidas por piojos y garrapatas. Su distribucin geogrfica es irregular.
Especie Vector Reservorio Distribucin Patologa B. recurrentis Pediculus humanus humanus (piojo 1 ) Humano Mundial Fiebre recurrente epidmica B. duttoni Ornithodoros moubata Humano frica (C, E y S) Fiebre recurrente endmica de E- Africa B. hispanica Ornithodoros erraticus Roedores Espaa, Portugal, Marruecos, Argelia y Tnez
Fiebre recurrente hispano-africana B. burgdorferi Garrapatas del gnero Ixodes Roedores E-O Estados Unidos, Europa, Asia y Australia Enfermedad de Lyme Otras bacterias: B. crocidurae, Ornithodoros spp Roedores y otros pequeos mamferos frica, Asia, Amrica y cacaso (segn hbitat del vector) Fiebres recurrente B. merionesi, B. microti B. dipodilli, B. persica, B. caucasica, B. latyschewii, B. hermsii, B. turicatae, B. parkeri, B. mazzottii, B. venezuelensis
1 El piojo se infecta al ingerir sangre de un enfermo, pero la infeccin no se transmite por va transovrica 60 Tabla 9. Rickettsias y rickettsiosis R. sibirica (Asia Central) y R. australis (Australia) causan infecciones sistmicas con exantema transmitidos por garrapatas. R. akari (V.S. Rusia) es transmitida por caros.
Organismos Vector Reservorio Distribucin Patologa R. prowazekii Piojo humano Humano frica, Asia, S. Amrica Tifus exantemtico epidmico R. typhi Pulgas Roedores Mundial Tifus marino R. rickettsii Garrapata Roedores, perros N. y S. Amrica Fiebre exantemtica de las Montaas rocosas R. conorii 2 Garrapata Roedores Cuenca mediterrnea Fiebre botonosa mediterrnea Rochalemaea quintae Piojo humano Humano Europa, Asia, frica Fiebre de las trincheras Erlichia, Anaplasma y Neorikettsia 1
Coxiella burnetii 2 Inoculacin Ganado Mundial Fiebre Q
1 Son un grupo de zoonosis transmitidas por garrapatas. Con excepcin de N. sennetsu, especie confinada al rea de Malasia-Japn, que produce un cuadro similar a la mononucleosis infecciosa, y de la que desconocemos su ciclo, las Erlichia spp y Anaplasma spp se mantienen en un ciclo garrapata, rumiante, roedor. Provocan un cuadro pseudogripal consistente en fiebre, malestar general, artromialgias y cefalea. Algunos pacientes desarrollan neumona atpica y en el caso de E. chaffeensis alteraciones del S.N.C. (meningitis). 2 Microorganismos que causan enfermedad en nuestro medio