e-boletn SENC

revista electrnica de la Sociedad Espaola de Neurociencia

nmero 1, septiembre de 2007
debate
clulas madre
crnica
representacin del esquema corporal
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debate
Clulas madre
Debate coordinado y elaborado por Carlos Vicario-Abejn.
Instituto Cajal, CSIC, Madrid.
En este artculo se recogen las opiniones de los investigadores que se nombran a continuacin,
acerca de diversos aspectos de la biologa de las clulas madre (o troncales) as como de la
investigacin y empleo de estas clulas y de clulas derivadas de las mismas, en terapia celular
y regenerativa. Dichas opiniones no se han transcrito literalmente sino que han sido integradas
en un texto conjunto.
Investigadores participantes (por orden alfabtico):
Jordi Alberch. Facultad de Medicina, Universidad de Barcelona.
Josep Maria Canals. Facultad de Medicina, Universidad de Barcelona.
Jos Manuel Garca-Verdugo. Instituto Cavanilles/Universidad de Valencia.
Jos Lpez-Barneo. Hospital Universitario Virgen del Rocio/Universidad de Sevilla.
Salvador Martnez. Instituto de Neurociencias, Universidad Miguel Hernndez-CSIC,
Alicante.
Alberto Martnez-Serrano. Centro de Biologa Molecular, Universidad Autnoma de Madrid.
1. Me gustara, en primer lugar, dedicar unos minutos a la terminologa que utilizamos
en este campo. Hablamos de clulas madre, de clulas troncales o empleamos ambos
trminos indistintamente?
La mayora de los cientfcos participantes utilizan ms a menudo el trmino clula madre
que el de clula troncal, otros lo emplean indistintamente. El mayor uso del trmino clula
madre se debe, principalmente, a razones histricas ya que dentro de la literatura cientfca en
castellano (por ejemplo, en libros de texto) es ms comn este trmino, o a razones puramente
fonticas pues, para algunos, el trmino clula tronco o troncal (traduccin literal del trmino
ingls stem cell) no suena bien en castellano. Sin embargo, se reconoce que, estrictamente
hablando, los trminos clula troncal o clula tronco pueden ser ms correctos que el de clula
madre, particularmente para referirnos a las clulas ES (embryonic stem cells), ya que a partir
de ellas se generan todas las clulas y tejidos del organismo mamfero (excepto la placenta).
Alberto reconoce tambin que ambos trminos (madre y troncal) se emplean
indistintamente en el mbito hispano-hablante pero aboga claramente por el empleo de clula
troncal y la eliminacin del trmino clula madre. Opina Alberto que el decir clula madre
genera discusin y confusin sin fundamento, cuando las opiniones de los cientfcos se difunden
a la sociedad porque las clulas troncales no pueden ser madre de nadie. Pero la sociedad
adopta/usa el trmino madre, favorecindose que grupos de presin lo utilicen para intentar
convencer a la sociedad que usar clulas troncales para investigacin es poco ms o menos
como matar la descendencia de madres. Opina, tambin, que la eliminacin del trmino
clula madre favorecera que empezsemos a hablar de cuestiones relevantes, como puede
ser el origen de las clulas troncales y el potencial que distintas fuentes de estas clulas tienen
para la generacin de diversos tipos celulares. No obstante, conviene recordar que tambin
en los pases anglosajones (Estados Unidos es un claro ejemplo) y en otros pases (como
Alemania), algunos grupos critican la investigacin en el campo de las clulas madre/troncales
embrionarias a pesar de que en esos pases se utilizan los trminos embryonic stem cell
(ingls) o stammzelle (en alemn).
Qu entendemos por una clula madre?
Fundamentalmente una clula con capacidad de autorrenovacin o autorregeneracin y de
diferenciacin a muchos tipos celulares. Hablaramos de clulas multipotentes si generan slo
clulas diferenciadas de una hoja blastomrica y pluripotentes sin son capaces de diferenciarse
en clulas de las tres hojas. En principio, slo el zigoto (que no es una clula madre) posee
totipotencialidad, es decir, capacidad para generar un organismo completo. Se destaca que la
clula madre debe de tener la capacidad de dividirse no slo de un modo simtrico (multiplicando
su poblacin), sino tambin, de un modo asimtrico, es decir, generando una clula hija idntica
(o prcticamente idntica) a la primera y una clula que se diferenciar dentro de un linaje
celular determinado. As, gracias a este tipo de divisin se mantiene la poblacin de clulas
madre y se origina progenie diferenciada. Aunque clsicamente se propona que la clula hija
deba de ser idntica a la clula madre, diversos experimentos muestran que la clula hija puede
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mantener caractersticas de clula madre pero no ser idntica en su potencial de diferenciacin
en trminos cuantitativos. Por ejemplo, en una regin concreta del sistema nervioso como el
bulbo olfatorio (BO), las clulas madre neurales (CMN) presentes en dicha regin en distintas
edades del desarrollo podran no tener el mismo potencial para generar neuronas y gla.
Finalmente, sealar que el trmino ingls stem cell fue primeramente empleado por
embrilogos del siglo XIX, al referirse a clulas de la lnea germinal y del sistema hematopoytico
(ver Comentario de Ramalho-Santos y Willenbring en Cell 2007). Fue precisamente en estudios
de hematopoyesis y, ligeramente ms tarde, en estudios de las clulas de las criptas de la
pared intestinal (ver revisin de Potten y Loeffer en Development 1990), donde se formularon
las principales caractersticas que debera de cumplir una clula madre o troncal: clulas con
capacidad casi ilimitada de proliferacin (autorrenovacin) y capacidad de dar lugar a clulas
diferenciadas.
Colonia de clulas madre embrionarias humanas (clulas ES), en una matriz de fbroblastos embrionarios de ratn.
Y por una clula madre neural?
Una clula madre neural sera aquella clula con capacidad de autorrenovacin y de generacin
de neuronas y clulas de la macrogla (astrocitos y oligodendrocitos, principalmente, si nos
referimos al Sistema Nervioso Central).
Y por clula progenitora o progenitor? Y por clula precursora o precursor?
Respecto a los trminos progenitor y precursor, la opinin ms general es que los dos trminos
pueden usarse indistintamente para referirse a clulas proliferativas que carecen de capacidad
de autorrenovacin y cuya capacidad de diferenciacin sera, en general, ms limitada que la de
la clula madre. As, a pesar de que algunos progenitores o precursores tienen alta capacidad
de proliferacin (de tipo simtrico), dicha capacidad es transitoria, de modo que fnalmente
generan clulas diferenciadas. Es decir, carecen de la capacidad de autorrenovacin, propiedad
que nicamente poseen las clulas madre o troncales. En cuanto a la localizacin de las CMN
y los progenitores, algunos estudios sugieren que durante el desarrollo embrionario de la
corteza cerebral, las CMN se encontraran en la zona ventricular mientras que los progenitores
intermedios en la zona subventricular (ZSV) adyacente. Esta distincin entre CMN y progenitor
ha sido detalladamente estudiada en la ZSV del cerebro adulto: slo las clulas madre o clulas
tipo B poseen caractersticas de CMN, estas clulas generan progenitores o clulas tipo C de
amplifcacin transitoria. Destaca Jos Manuel que, adems, algunas clulas madre (tipo B)
tambin contactan con la superfcie ventricular en etapas adultas, lo que sugiere una transicin
de CMN embrionarias a CMN adultas. En esta transicin tendra un papel predominante la gla
radial, como se menciona a continuacin.
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A: clula madre; B: clula progenitor; C: clula diferenciada.
2. Hay datos slidos que avalen la existencia de clulas con capacidad de diferenciarse
a neuronas, astrocitos y oligodendrocitos (es decir, multipotentes) en el Sistema
Nervioso Central (SNC) embrionario in vivo? Y en el adulto? En qu regiones? O, si
por el contrario, slo podemos observar su potencial mximo cuando alteramos su
ambiente extracelular o cambiamos su repertorio gentico, por ejemplo?
La opinin general es que durante el desarrollo del cerebro existen clulas neuroepiteliales que
poseen las caractersticas de clula madre o troncal neural. Adems, tambin clulas de la gla
radial podran tener estas mismas propiedades, aunque mayoritariamente generan neuronas
y astrocitos (tambin generan oligodendrocitos pero en menor nmero). Las acciones de
factores extrnsecos e intrnsicos limitaran el fenotipo al que fnalmente se diferenciaran estas
clulas y los progenitores intermedios. Distintas poblaciones de CMN podran existir en diversas
regiones cerebrales por lo que tendramos que hablar de CMN de la corteza, o del BO o del
cerebelo etc pues, en condiciones basales, generan clulas especfcas (en particular, neuronas)
de esa regin. Incluso, CMN localizadas en distintos lugares dentro de la ZSV, dan lugar a
determinados tipos de neuronas del BO, segn ha publicado el grupo de Arturo Alvarez-Buylla
en Science (Merkle et al., 2007). Sin embargo, la restriccin regional podra no ser absoluta,
de modo que clulas de una regin trasplantadas en otras distintas, podran diferenciarse en
neuronas de la regin hospedadora y perder la identidad de la regin de origen.
Convendra indicar, fnalmente, que quiz por limitaciones de tipo experimental, los datos de
la literatura que apoyan la existencia in vivo de CMN con capacidad de diferenciacin a los
tres linajes celulares (neuronas, astrocitos y oligodendrocitos) no son abundantes. Son ms
abundantes los datos que muestran la existencia de clulas bipotentes: que se diferencian a
neuronas y astrocitos (en la corteza cerebral, por ejemplo), neuronas y oligodendrocitos (en
la mdula espinal y en la corteza) o a astrocitos y oligodendrocitos (tambin en la mdula
espinal). Hara falta tambin un anlisis ms riguroso de la capacidad de autorrenovacin (no
slo de la proliferacin) de las CMN in vivo, aunque tcnicamente resulta difcil de realizar,
incluso en roedores (por ejemplo, el trasplante seriado de clones de CMN).
En el cerebro adulto de mamfero se destaca por todos la existencia de CMN en la
ZSV, clulas que producen neuronas, astrocitos y oligodendrocitos. Si bien es cierto que, en
condiciones basales, se observa una mayor formacin de neuronas (especfcamente del BO)
que de astrocitos y, sobre todo, que de oligodendrocitos, a partir de estas clulas de la ZSV.
Clulas con caractersticas de CMN podran existir tambin en la ZSV del cerebro humano segn
se describe en el artculo publicado en Nature por Sanai et al. (2004). Tambin algunas clulas
localizadas en el giro dentado o en zonas limtrofes (zona subgranular del giro dentado y la zona
subventricular del ventrculo lateral hipocampal, respectivamente), tendran caractersticas de
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CMN. Respecto a vertebrados no mamferos, destacar la existencia de clulas multipotentes en
la retina y corteza cerebral de aves, reptiles y peces.
Aadir, fnalmente que el potencial mximo de las CMN para diferenciarse a clulas de
distintos linajes, puede aumentar cuando se altera su ambiente extracelular o su repertorio
gentico. Esto se ha observado en roedores sometidos a isquemia cerebral donde aumenta la
produccin de neuroblastos a partir de CMN de la ZSV. Adems, la eliminacin de los progenitores
tipo C por tratamiento con un antimittico, provoca una activacin de las CMN de la ZSV. Es
decir, debemos de dejar claro que el potencial mximo de la CMN no coincide necesariamente
con su capacidad basal de proliferacin y diferenciacin in vivo ya que, en esta situacin,
existen restricciones ambientales y genticas que limitan estas capacidades.
Clulas marcadas con contraste paramagntico emigrando
desde la zona subventricular hasta el bulbo olfatorio. Modelo in vivo (RM ponderada T2).
Imagen cedida por el Laboratorio de Investigacin de Neurociencias Clnicas (LINC), Hospital Clnico Universitario-
Universidad de Santiago de Compostela.
3. La polmica acerca de las regiones y zonas del SNC adulto donde existe
neurognesis sigue abierta. Qu regiones del adulto identifcaramos como
claramente neurognicas? Y, con los datos de que disponemos, en qu otras (si
alguna) no descartaramos que existiese?
Al igual que, respecto a la existencia de CMN en el cerebro adulto, hay prcticamente unanimidad
en identifcar al eje formado por la ZSV-corriente migratoria rostral (CMR)-BO por una parte
y al giro dentado (GD) del hipocampo, como las zonas y regiones donde se ha probado la
existencia de neurognesis en el cerebro adulto. Sealar, de todos modos, que respecto a la
migracin rostral de neuroblastos hacia el BO, slo un reciente trabajo ha publicado datos que
apoyan la presencia de dicha corriente migratoria en el cerebro humano (Curtis et al. 2007,
Science), hallazgo que deber ser corroborado por otros grupos. Dado que la pregunta acerca
del signifcado funcional y la fsiologa de estas nuevas neuronas, no se ha planteado en este
debate por haber sido objeto de uno anterior en el boletn de la SENC, el lector interesado
puede consultar artculos recientes (Aimone et al. y Meshi et al., Nature Neurosci 2006; Lledo
et al., Nature Reviews Neurosci 2006; Gould, Nature Reviews Neurosci 2007).
Finalmente, indicar que no existe acuerdo en la comunidad cientfca respecto a la
existencia de neurognesis en otras regiones del cerebro de mamfero adulto como la corteza,
la amgdala o la sustancia nigra, al menos en condiciones basales (ver el reciente artculo de
E. Gould en Nature Reviews Neurosci, 2007). Alberto, no obstante, no descartara que pudiera
tener lugar generacin de interneuronas en la corteza adulta.
4. En qu aspectos estn ayudando los conceptos de clula madre y de clula
madre neural al avance del conocimiento cientfco en biologa bsica o fundamental?
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Y respecto al avance en el conocimiento de la biologa de enfermedades?
En cuanto a la biologa bsica, se destaca que las clulas madre estn siendo un modelo
experimental muy til para estudiar los mecanismos bsicos de la divisin y diferenciacin
celular. Dentro del sistema nervioso, las CMN son un buen modelo para estudiar algunos procesos
bsicos de la diferenciacin y determinacin neural, como por ejemplo, el estudio de las seales
y mecanismos de accin que regulan la diferenciacin de una clula multipotente a neurona o
gla. Esta idea ha permitido conocer, no slo factores de transcripcin que inducen y determinan
la adquisicin de un fenotipo celular particular, sino tambin, represores de la diferenciacin
de una CMN hacia un determinado linaje neuronal o glial. Es decir, la investigacin en clulas
madre somticas y, en particular, en CMN adems de ser una buena herramienta de trabajo
para realizar los estudios mencionados y otros, est aportando riqueza conceptual a nuestros
planteamientos. Salvador seala que, desde el punto de vista evolutivo, el mantenimiento
de poblaciones de CMN en el cerebro de mamferos adultos, no parece haber supuesto una
ventaja evolutiva (al menos hasta donde sabemos hoy) por su carcter casi vestigial. Sin
embargo, esta visin podra cambiar, si se demostrase fehacientemente que la incorporacin
de nuevas neuronas en el GD del hipocampo adulto favorece o regula procesos de la memoria
y el aprendizaje.
Respecto al conocimiento de la biologa de las enfermedades, se indica que su relevancia
es relativamente escasa hasta el momento. Sin embargo, tambin se seala que alteraciones
en el comportamiento de algunas poblaciones de clulas madre, podran favorecer la formacin
de tumores. Adems, se est intentando derivar clulas madre a partir de tejidos de personas
con una determinada enfermedad y tambin clulas madre ES de embriones obtenidos tras el
diagnstico preimplantacional, para realizar anlisis genticos. Refrindonos al sistema nervioso
central, si bien es cierto que no se ha descrito una enfermedad causada por defecto o exceso
en poblaciones de CMN, algunos trabajos recientes sugieren que alteraciones en molculas
reguladoras de la neurognesis-gliognesis y de la proliferacin y muerte celular, podran estar
implicadas en problemas de retraso mental y microcefalia (Ver Gauthier et al., Neuron 2007;
Baala et al., Nature Genetics 2007). Por otra parte, el conocimiento de las molculas y clulas
que forman parte del nicho de las CMN, es crtico para desarrollar la terapia regenerativa (ver
ms adelante).
Finalmente, decir que las clulas madre tienen inters en la industria farmacutica como
una posible fuente celular para el descubrimiento de nuevos frmacos.
Autorrenovacin y diferenciacin de clulas madre neurales (CMN). La inmunotincin con un anticuerpo contra
sinapsina sugiere la presencia de botones sinpticos en neuronas derivadas de las CMN.
Imagen cedida por el Laboratorio de Carlos Vicario, Instituto Cajal, CSIC, Madrid.
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5. La polmica acerca de si clulas del sistema hematopoytico dan lugar a neuronas
y gla in vivo tambin sigue abierta. Hay datos claros que indiquen la conversin de
clulas hematopoyticas en neurales in vivo? O quiz, la gran mayora de los datos
publicados se pueden explicar por una posible fusin de clulas hematopoyticas
con neurales? En cualquier caso, podra existir aplicabilidad en terapia celular de la
posible fusin entre ambos tipos de clulas?
En este punto hay acuerdo general de que, en condiciones basales, las clulas del sistema
hematopoytico no producen clulas neurales in vivo, (slo generaran microgla). Salvador no
descarta que ocurra, sin embargo, en situaciones de lesin o en el cerebro inmaduro.
Respecto a la aplicabilidad teraputica de la fusin celular, la mayora de los participantes
opina que en la actualidad es nula o escasa. Pero, por otra parte, se seala que, tal vez, cuando
conozcamos ms acerca de este proceso celular as como de la biologa de otras clulas (la
microgla, concretamente), pueda tener alguna utilidad teraputica como medio de introducir
factores trfcos en el sistema nervioso y para estimular la angiognesis en situaciones de
hipoxia-isquemia.
6. En qu lesiones, enfermedades neurodegenerativas o trastornos del desarrollo
que afectan al SNC sera posible la aplicacin teraputica de los avances
conseguidos en el campo de las clulas madre y de la neurognesis en el adulto?
Cul sera la mejor estrategia general a seguir para su aplicacin? Por ejemplo:
trasplantes intracraneales de clulas madre o su progenie, inyecciones de clulas
madre por va intravenosa, activacin de la neurognesis endgena, empleo de
diversos tipos de clulas para liberar factores trfcos o neurotransmisores, etc.?
Las enfermedades y lesiones que afectan al sistema nervioso en las que se considera que las
terapias de tipo celular, neuroprotectora o neuroregenerativa, o combinaciones de ellas, podran
ayudar en su tratamiento, son aqullas en las que la enfermedad no produce una alteracin
generalizada (al menos inicialmente), sino que afecta, principalmente, a una regin cerebral
como ocurre en la enfermedad de Parkinson y la enfermedad de Huntington. Se indica, de todos
modos, que los benefcios de los primeros ensayos clnicos con trasplantes celulares han sido
escasos e, incluso, han producido efectos secundarios (disquinesias) en algunos pacientes de
Parkinson. Pero tambin se destaca que el conocimiento en el campo de las clulas madre, la
neuroproteccin y el empleo de vectores genticos podra ayudar a mejorar las expectativas
teraputicas de los mencionados tratamientos. Ver, como muestra de estos avances, los nuevos
artculos publicados en Lancet, Nature y PNAs de 2007 (Kaplitt et al.; Lindholm et al., Chan et
al.; Redmon et al), que describen resultados obtenidos en enfermos y en modelos animales de
la enfermedad de Parkinson.
Respecto al Huntington, Pep y Jordi proponen como ms viable la combinacin de
terapia de reemplazamiento de las neuronas que mueren y terapia neuroprotectora con factores
trfcos y/o antiapptticos. Esta combinacin quiz permita la regeneracin de las conexiones
correctas y la prevencin de la muerte neuronal que tiene lugar en estadios intermedios y
tardos de la enfermedad.
Respecto al Parkinson, dado que las clulas se trasplantan ectpicamente en el estriado,
el mayor benefcio de la terapia celular estribara en el suministro de dopamina y factores
neurotrfcos que pudieran enlentecer/retrasar la muerte de las terminales dopaminrgicas que
provienen de la sustancia nigra. De ese modo, tal vez pueda conseguirse paliar los sntomas
motores de la enfermedad.
En cuanto a la regeneracin en situaciones de isquemia cerebral, se destaca que, en
modelos animales se ha observado una considerable movilizacin y migracin de neuroblastos
desde la ZSV hasta el estriado infartado, aunque debe de incrementarse la supervivencia y
diferenciacin de estas nuevas clulas.
Tambin se seala que la inyeccin de CMN por va intravenosa, se est investigando
para el tratamiento de enfermedades en cuya etiologa hay componentes de tipo autoinmune,
como ocurre en la enfermedad lateral amiotrfca y en la esclerosis mltiple.
7. De qu tipos de clulas de origen humano (ES, neurales, hematopoyticas,
fbroblastos reprogramados, etc.), es/sera factible obtener neuronas y gla en cultivo
para emplear en trasplantes celulares en la clnica? Nota: Al hablar de neuronas y
gla, nos referimos a clulas que pertenecen a dichos linajes celulares basndonos,
no slo en la expresin de marcadores celulares, sino tambin, en su morfologa y
funcionalidad.
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Algunos participantes se inclinan por el empleo de CMN y progenitores neurales como fuente de
neuronas y gla, porque las primeras clulas ya han recibido seales in vivo que las instruyen
a generar productos neurales. Este hecho facilitara su diferenciacin a la neurona o gla
deseada.
No se le ve muchas ventajas, sino ms bien inconvenientes (en estos momentos), al
empleo de las clulas madre ES. Esto es debido a su alta tendencia a producir teratomas, a la
presencia de aberraciones cromosmicas en las lneas de clulas humanas existentes (segn
nos apunta Pep que ha sido presentado en el 1st Annual Public Symposium of the ESTOOLS,
2007; ver tambin Baker et al. Nature Biotech 2007), y al posible rechazo inmunolgico. Jos
seala que la reprogramacin de fbroblastos (u otras clulas adultas), es un hecho fascinante
pues adems de acabar con las limitaciones tico/legales y las implicaciones polticas, permitir
obtener clulas similares a las embrionarias y, de ellas, derivar otras compatibles con el
paciente. Naturalmente, habr que evaluar el comportamiento de estas clulas (produccin o
no de teratomas, etc.) para determinar su potencial aplicabilidad clnica (ver Maherali et al.,
Cell Stem Cell 2007; Wernig et al., Nature 2007).
Respecto a la utilizacin de clulas madre de origen no neural para producir neuronas y
gla, no se observa como una alternativa viable al tejido cerebral (al menos, por el momento),
ya que habra que manipularlas excesivamente en cultivo para restringir su destino celular.
Adems, los resultados obtenidos hasta la fecha son muy muy limitados, es decir, se ha
conseguido que las clulas expresen un marcador como la -III-tubulina pero sin lograrse una
morfologa, expresin de neurotransmisores, canales inicos que demuestre que se trata de
clulas neuronales o gliales. Sin embargo, las clulas de la mdula sea y del cordn umbilical
podran tener efcacia teraputica, no como fuente de neuronas, sino como clulas de soporte,
a travs de mecanismos de accin an bsicamente desconocidos.
Jos destaca que las clulas madre derivadas del cuerpo carotdeo, que han identifcado
recientemente en su laboratorio, pueden tener aplicabilidad potencial en la enfermedad
de Parkinson y en otras patologas donde este factor neurotrfco GDNF produzca efectos
benefciosos.
8. Podemos proponer estrategias encaminadas a favorecer que neuronas
trasplantadas o generadas por activacin de clulas madre endgenas, sobrevivan
a largo plazo y, en el mejor de los casos, se incorporen a los circuitos neuronales
y permitan el funcionamiento de los mismos tras una enfermedad o lesin? Y
estrategias para favorecer el restablecimiento de las conexiones o, al menos, de la
funcionalidad parcial de los circuitos degenerados o lesionados?
La opinin general es que el logro de estos objetivos queda todava lejano y que las limitaciones
para trasladar nuestros conocimientos al xito de la terapia en pacientes, son muy grandes, en
este momento. No obstante, se est de acuerdo en que cuanto mayor sea nuestro conocimiento
de los factores y mecanismos que favorecen y regulan la migracin, supervivencia neuronal, y
la formacin y mantenimiento de las conexiones neuronales, ms cerca estaremos de mejorar
las estrategias para alcanzar los mencionados objetivos, como se resalta en la pregunta 6.
Asimismo, aunque muy incipiente todava, el uso de biomateriales podra servir de soporte para
la inyeccin de clulas y factores neurotrfcos encapsulados con el objetivo de aumentar la
supervivencia de las clulas trasplantadas, as como para producir estructuras que favorezcan
el reestablecimiento de circuitos daados.