Uv Vis

CORTESIA DE : Electromdica Peruana S. A.
Di vi si n Anal t i c a
Dpto. Espectroscopia
Espectroscopia en el Ultravioleta - Visible
Conceptos Bsicos.-
Espectroscopia.-
Medicin e interpretacin de
fenmenos de absorcin,
dispersin o emisin de
radiacin electromagntica
que ocurre en tomos,
molculas u otras especies
qumicas. La absorcin o
emisin estn asociadas a
los cambios de estado
energticos de las
partculas actuantes.
Conceptos Bsicos.-
Espectroscopia Molecular.-
Se refiere exclusivamente a los
fenmenos de absorcin,
dispersin o emisin, asociados
a especies moleculares. Estos
fenmenos implican cambios
energticos a nivel de los
orbitales de enlace en la capa
mas externa, y los patrones de
cambio en los estados de
transicin suelen ser de baja
energa y de muy poca
diferencia entre ellos.
Conceptos Bsicos.-
Radiacin Electromagntica.-
Es la Energa que se
transmite por el espacio
a enormes velocidades.
Adopta muchas formas
(Ejem. Luz, calor , Rayos
X, Radiacin g, UV, mW,
etc.)
Conceptos Bsicos.-
Caractersticas de la Radiacin Electromagntica.-
Longitud de Onda.
Frecuencia.
Velocidad.
Amplitud.
No necesita medio de
propagacin.
Comportamiento Dual:
Onda y Partcula
Conceptos Bsicos.-
Caractersticas de la Radiacin Electromagntica.-
Modelo tipo onda:
Presenta como parmetros ondulatorios: Amplitud (A), Periodo (P), Longitud
de Onda (l ), Frecuencia (n, 1/P).
Tiempo
P
Periodo
Longitud de Onda (l )
Amplitud (A)
Conceptos Bsicos.-
Energia.-
Cuando la Radiacin Electromagntica interacciona con tomos y
molculas ya no es posibles explicar sus atributos mediante la Teora
Ondulatoria y es mejor considerarla como partculas de energa
llamadas Fotones .
En este caso, se observa que la frecuencia de la radiacin
electromagntica es proporcional a la energa del Fotn.
La constante de Proporcionalidad se denomina Constante de Planck
(h) . Cuantitativamente esta constante se relaciona con la frecuencia
de la siguiente forma:
E = h.n
Conceptos Bsicos.-
Energa.-
La Energa de los Fotones tambin se relaciona con la Longitud de
Onda de la Radiacin. Como la velocidad de la Luz puede medirse
segn la ecuacin:
c = l .n
entonces, la energa de un Fotn puede calcularse a partir de la
siguiente ecuacin:
E = (h.c)/l
(las unidades de energa pueden ser Ergios o Joule.seg)
Conceptos Bsicos.-
Transformaciones de la Energa.-
Como indica el principio de
conservacin de la energa:
La suma de todas las formas
de energa que ingresan a una
muestra debe de ser igual a la
energa que sale de ella, ms la
energa que quede en el
material .
Los resultados de las
interacciones de un tomo o
molcula con sus alrededores y
con la luz puede representarse
por la figura de la derecha.
Conceptos Bsicos.-
Transformaciones de la Energa.-
La Energa penetra en el tomo y
sale de el en forma de luz, calor y
energa cintica de partculas
como los electrones.
Como la luz puede transformarse
en calor, la longitud de onda de
la luz emitida puede ser mas
larga (de menor energa) que la
longitud de onda que excita a
los tomos, y la energa restante
se emplear para calentar el
tomo y sus alrededores.
hn
Entrada
e
-
Entrada
e
-
Salida
(Efecto Fotoelctrico,
Emision Termoelectrnica,
Electrones Secundarios) k
b
T
salida
(Perdida de
energia no
radiante)
k
b
T
Entrada
hn
Salida
(luminiscencia,
emisin)
Conceptos Bsicos.-
Espectro de la Radiacin Electromagntica
l (m) 10
-11
10
-9
10
-7
10
-5
10
-3
10
-1
10
Rayos g
Rayos X
Ultravioleta Infrarrojo
Ondas Hertzianas (radio,TV)
Microondas
400 500 600 700 800 l (nm)
Violeta Azul Verde
Amarillo
Naranja
Rojo
Visible
Conceptos Bsicos.-
Es posible separar radiacin de una sola longitud de onda?
No. Sin importar el mtodo
que se emplee para
producir cualquier longitud
de onda especfica o
seleccionar una longitud
de onda nica , de una
amplia gama de longitudes
de onda, lo ms que se
puede hacer es aislar un
Intervalo de Longitudes de
Onda muy cercano al valor
deseado.
H
H
2
Ancho de
Banda
espectral
Longitud de
Onda Nominal
Longitud de
onda (nm)
P
o
t
e
n
c
i
a
Conceptos Bsicos.-
Y el termino Luz Monocromtica ?
El termino Luz Monocromtica (un solo Color), no significa que la
radiacin tenga una sola longitud de onda. Luz Monocromtica
significa que la radiacin presenta un ancho de banda espectral
Finito.
El intervalo de Longitudes de onda de la radiacin, es el ancho de
Banda?
No. El intervalo de Longitudes de Onda se denomina Pureza
Espectral y es una medida Cuantitativa del intervalo de Longitudes
de Onda de la radiacin. El ancho de Banda es un nmero que nos
indica en forma cuantitativa el intervalo de estas longitudes de onda.
El Ancho de Banda Espectral tambin se denomina Ancho de Lnea
espectral .
Conceptos Bsicos.-
Y ... como se miden estos valores?
La medicin cuantitativa que
se emplea es el Ancho de la
Banda en el punto
intermedio entre la lnea
base y el mximo (esto se
denomina Ancho Total a la
Mitad de la Altura o Ancho
Total a la Mitad del Mximo .
H
H
2
Ancho de
Banda
espectral
Longitud de
onda (nm)
Longitud de
Onda Nominal
P
o
t
e
n
c
i
a
Conceptos Bsicos.-
En resumen, debe de recordarse que:
1 Es posible producir radiacin con un ancho de banda
angosto a determinadas longitudes de onda.
2 La intensidad luminosa puede medirse
cuantitativamente con un ancho de banda angosto.
3 La longitud de onda puede modificarse de manera
continua y sin saltos en determinados intervalos de
longitud de onda. Este mtodo se denomina Barrido
(Scan en ingles).
Conceptos Bsicos.-
Que es la Rejilla Espectral y Ancho de Rejilla Espectral?
La Rendija Espectral o tambin denominado SLIT , es un corte en
una barra de metal que permite el paso de luz desde la fuente hacia el
detector. Las rejillas se presenta en forma par (Slit de entrada y Slit de
salida), y en la mayor parte de los instrumentos modernos controlados
por PC, estas rendijas son intercambiables en forma automtica a
diferentes tamaos. La barra se Slit se controla mediante pulsos para
intercambiar posiciones, no tamao de abertura. El ancho de Slit en
estos instrumentos puede variar hasta en 5 tamaos de Slit.
El Ancho de la Rendija Espectral es el tamao de esta abertura, la cual
se mide en nanmetros. El ancho de la rendija Espectral utilizado
comnmente es de 1 nm, pero segn la aplicacin la rendija puede ser
mayor o menor tamao (5 nm la mas alta y la mas baja de 0.1 nm).
Conceptos Bsicos.-
Cual es la relacin entre el Ancho de Banda Espectral y el Ancho de
Rendija Espectral?
Observe la figura de la parte inferior, en ella se observa la fuente
luminosa y la Rendija de Entrada y Salida de radiacin. La radiacin
pasa atraves de la Rendija de entrada y luego se dispersa. Las
diferentes longitudes de onda se propagan en diferentes ngulos, y
solo un estrecho intervalo de longitud de onda atraviesa la Rendija
de Salida.
Fuente Luminosa
Elemento
Dispersor
Detector
Slit de Entrada
Slit de Salida
Conceptos Bsicos.-
Rejilla Espectral?
Las diferentes longitudes de onda se
propagan en ngulos diferentes, pero solo un
estrecho intervalo de longitudes de onda
pasan a travs de la Rendija de Salida.
Es evidente que el Ancho de la Banda
Espectral depende del Tamao de la Rendija
de Salida.
Conceptos Bsicos.-
Rejilla Espectral?
Pero el ancho de la banda espectral tambin
depende de la amplitud de la dispersin de la
radiacin y de la distancia entre el elemento
de dispersin y la rendija de salida. Para un
ancho de Rendija fijo, el ancho de la Banda
Espectral, que pasa a travs de la rendija de
salida solo depende de la longitud de onda de
la radiacin.
Conceptos Bsicos.-
Rejilla Espectral?
U
A medida que la rendija es mas amplia, el
poder espectral que la atraviesa es mayor y el
ancho de banda espectral tambin aumenta.
Siempre hay que tener en cuenta que cuando
se incrementa la Potencia espectral
empleando una rendija mas ancha, se reduce
la pureza del espectro.
Conceptos Bsicos.-
Que es Resolucin y Potencia de Resolucin?
Potencia de Resolucin es el termino que se utiliza para
referirse a la capacidad del instrumento para separar
longitudes de onda.
La Resolucin se refiere a la separacin entre las
longitudes de onda del espectro.
La Potencia de Resolucin se refiere al instrumento,
mientras que la Resolucin se refiere solo al espectro.
Conceptos Bsicos.-
Que es Resolucin y Potencia de Resolucin?
Dl
l
1
l
2
Valle del 90%
P
o
t
e
n
c
i
a
La figura de la derecha nos da
un ejemplo de la resolucin
de dos radiaciones de
longitudes de onda cercanas.
El ejemplo nos indica que el
espectro obtenido presenta
una resolucin X con un
valle al 90%. Esto significa
que se considera que los
picos estn resueltos cuando
la profundidad del valle es del
90% de la altura de los dos
picos iguales.
Conceptos Bsicos.-
Medicin de Espectros
La medicin de Espectros o Scan (rastreo), depende de manera
ntima tanto de la las propiedades espectrales de la muestra como del
instrumento que se emplea para la medicin.
En el instrumento, se dirige la mayor cantidad posible de radiacin
hacia un Monocromador de barrido. Este Monocromador enfoca
radiacin de diferentes longitudes de onda en forma continua y
ordenada (ascendente o descendente), sobre la muestra. Estas
radiaciones son absorbidas emergen de la muestra hacia la rendija
de salida y de all al detector. El detector recibe la seal y la
transforma a valores numricos que la PC registra en forma ordenada
en una grfica de Longitud de Onda vs. Energa radiante (Espectro de
Absorcin).
Conceptos Bsicos.-
Proceso de Scanning:
Fuente Luminosa
Elemento
Dispersor
Slit de Entrada
Detector
Electromdica Peruana S. A.
Divisin Analtica
Slit de Salida
Celda de Muestra
Conceptos Bsicos.-
Y... Como varia el espectro con respecto al cambio de tamao del
Slit?
Observe los siguientes espectros:
P
o
t
e
n
c
i
a
l
P
o
t
e
n
c
i
a
l
(a) (b)
P
o
t
e
n
c
i
a
l
P
o
t
e
n
c
i
a
l
(c)
(d)
Conceptos Bsicos.-
El detector responde nicamente a la potencia luminosa total que
ingresa a el, y no efecta una discriminacin efectiva de longitudes
de onda. Como resultado de ello, el detector saca un promedio de la
potencia que llega a todas las longitudes de onda que atraviesan el
monocromador.
Detector
Conceptos Bsicos.-
En consecuencia , a medida que el monocromador barre a travs de la
longitud de onda, y cuando el borde de la rendija llega al intervalo
espectral del mximo, la potencia promedio que cae a el detector
aumenta.
Esto se observa como una elevacin en el nivel de potencia antes de
que la longitud de onda nominal del pico definido llegue a la base del
pico definido.
Detector
Conceptos Bsicos.-
Cuando la longitud de onda nominal llega al sensor, este marca la
mxima potencia y se registra el mximo de absorcin.
Detector
Conceptos Bsicos.-
Cuando la Longitud de onda nominal del Pico definido llega al centro
de la rendija parece que el punto mas alto (la potencia ms alta) del
pico se reduce, ya que el detector saca el promedio de la potencia
mxima y de los puntos que se encuentran a una potencia inferior a
ambos lados.
Detector
Conceptos Bsicos.-
Cuando se optimiza el ancho de la rendija, el espectro se asemeja
mucho a la cubierta de absorcin, como se muestra en la figura (a).
P
o
t
e
n
c
i
a
l
P
o
t
e
n
c
i
a
l
(b) (a)
Si se emplea una rendija ms angosta, la menor potencia que llega al
detector implica que la contribucin del ruido comienza a oscurecer
el espectro (como se observa en la figura b).
P
o
t
e
n
c
i
a
l
P
o
t
e
n
c
i
a
l
(c)
(d)
Conceptos Bsicos.-
A medida que la rendija se hace ms ancha que el ptimo, el ancho
espectral es mayor que el mximo definido y el pico agudo adquiere
una apariencia mas ancha y mas baja (como se puede ver en c y d).
Conceptos Bsicos.-
Que es la Espectrometra de Absorcin?
Es la parte de la Espectroscopia que se encarga de llevar a cabo
mediciones cuantitativas, midiendo la fraccin de luz de una
determinada longitud de onda que atraviesa por la muestra
Fuente Luminosa
Elemento
Dispersor
Slit de Entrada
Slit de Salida
Muestra
Detector
Seal
Conceptos Bsicos.-
Como se lleva a cabo el anlisis por Absorcin?
Para llevar a cabo el anlisis, se efectan dos mediciones de la
cantidad de luz absorbida:
1) Se mide la cantidad de luz (a una longitud de onda elegida), que
cae al detector al introducir un blanco al aparato (Potencia del
Haz P
o
). Es decir, se mide la potencia de la energa cuando la
concentracin de la muestra es igual a Cero.
2) Se mide la cantidad de la luz cuando se colocan analitos o
muestras de calibracin (estndares) y se comparan con la
medicin del blanco. Sea la Potencia de este Haz de energa igual
a P.
Se efectan comparaciones entre la relacin P/P
o
Conceptos Bsicos.-
Como se lleva a cabo el anlisis por Absorcin?
Hay tres trminos distintos para expresar dicha proporcin:
Transmitancia.-
T =
P
P
o
% Transmitancia.-
%T = 100 x T
Absorbancia.-
A =
P
P
o
- Log
A = - Log T
Conceptos Bsicos.-
Absorbancia y Concentracin.-
La Absorbancia de una muestra es proporcional a la cantidad total del
material que absorbe la luz incidente. Es decir:
A = a x b x c
En donde:
a = Es una constante caracterstica del material.
b = La longitud de la trayectoria que atraviesa la muestra.
c = La concentracin del material que absorbe luz.
Esta ecuacin es conocida como la ley de Lambert - Beer
Conceptos Bsicos.-
Absorbancia y Concentracin.-
Cuando la concentracin c se expresa en Mol/L y la longitud en cm,
la constante a pasa a ser el Coeficiente de Extincin Molar, e . La
ecuacin pasa a ser entonces:
A = ex b x c
El Valor de edepende de la longitud de onda de medicin, por lo que
ecomnmente debe de notarse con la longitud de onda de trabajo.
Por ejemplo:
e
l (nm)
a 530 se escribe como e
530
Conceptos Bsicos.-
Aspecto Matemtico de la Ley de Lambert - Beer.-
P
o
b
P
Consideremos un bloque de materia absorbente (Slido, Lquido o
Gas), como el que se muestra a continuacin:
Conceptos Bsicos.-
Se observa que:
El haz paralelo de radiacin monocromtica de
potencia P
o
incide perpendicularmente a la superficie
del bloque.
El haz de radiacin atraviesa una longitud b del
material que contiene n partculas absorbentes
(tomos, iones o molculas).
La potencia del haz disminuye a un valor P a causa de
la absorcin.
Conceptos Bsicos.-
b
dx
P
o
P
S
Consideremos ahora una seccin transversal del bloque del material
absorbente (Slido, Lquido o Gas), con un rea S y un espesor
infinitesimal dx.
Conceptos Bsicos.-
Se observa que:
Dentro de la seccin hay dn partculas absorbentes,
cada una con una superficie de absorcin fotnica de
captura inmediata.
La proyeccin del rea total de esta superficie de
captura dentro de la seccin se designar como dS .
La relacin entre el rea de captura y el rea total esta
dada por dS/S. Esta relacin representa la probabilidad
de captura de fotones dentro de la seccin.
Conceptos Bsicos.-
De las observaciones se desprende que:
La potencia del Haz P
x
que ingresa en la seccin es
proporcional al nmero de fotones por cm
2
-seg.
dP
x
representa la cantidad de fotones por segundo,
eliminados dentro de la seccin.
Entonces la fraccin de fotones absorbidos puede
representarse como: - dP
x
/P
x
. Esta relacin es igual a la
probabilidad media de captura. El signo menos del
trmino, indica que P experimenta disminucin.
Conceptos Bsicos.-
De esta forma, podemos deducir que:
dP
x
P
x
- =
dS
S
............ (1)
Pero como dS representa la suma de las reas de captura
de las partculas dentro de la seccin, esta debe de ser
proporcional al nmero de partculas:
dS = a.dn
............ (2)
Donde dn es el nmero de partculas y a es una constante
de proporcionalidad, que puede denominarse Seccin
Transversal de Captura .
Conceptos Bsicos.-
Combinando las ecuaciones (1) y (2) tenemos:
dP
x
P
x
- =
a.dn
S
Integrando la ecuacin desde P
o
a P, obtendremos:
P
P
o
- =
a.n
S
Ln
Conceptos Bsicos.-
Convirtiendo la fraccin en logaritmos de base 10 e
invirtiendo la ecuacin para cambiar el signo, obtenemos:
Donde n es el nmero total de partcula dentro del
bloque.
P
P
o
=
a.n
2.303S
Log
............ (3)
Conceptos Bsicos.-
El rea de la seccin transversal S puede expresarse en
trminos de volumen V del bloque en cm
3
y de su
longitud b en cm. De esta forma:
S =
V
b
............ (4)
Sustituyendo la ecuacin (4) en (3), obtenemos:
P
P
o
=
a.n.b
2.303V
Log
............ (5)
Conceptos Bsicos.-
Aspecto Matematico de la Ley de Lambert - Beer.-
Pero la relacin n/V tiene unidades de concentracin
(nmero de partculas por cm
3
) y puede convertirse en
moles/Litro utilizando el nmero de Avogadro:
Nmero de Moles =
n partculas
6.023 x 10
23
partculas/mol
Nmero de Moles =
n Mol
6.023 x 10
23
Conceptos Bsicos.-
Transformando a concentracin en Moles/Litro:
Concentracin =
n
6.023 x 10
23
Mol x
1000 cm
3
/L
V cm
3
Concentracin =
1000.n
6.023 x 10
23
Mol/L
............ (6)
Combinando la ecuacin (6) en (5), obtenemos:
P
P
o
=
6.02 x 10
23
(a.b)
2.303 (1000)
Log
Conceptos Bsicos.-
Finalmente, si agrupamos todas las constantes de la
ecuacin como un solo trmino (e), obtendremos:
P
P
o
=
e. a . b Log
En otras palabras:
P
P
o
=
e. a . b Log
Absorbancia =
Instrumentacin.-
Que es un Espectrofotmetro UV - Visible?
Es un instrumento ptico que
presenta la capacidad de
resolver radiaciones de
diferentes longitudes de onda,
dentro del Rango Ultravioleta y
Visible.
Este rango, por lo general se
encuentra dentro de los valores
de 190 a los 1100 nm.
Instrumentacin.-
De que consta un Espectrofotmetro UV - Visible?
Un Espectrofotmetro UV - Visible presenta los siguientes
componentes:
Fuente de Radiacin.
Celda de muestra y Compartimiento de Muestras.
Lentes, Espejos y el Sistema Monocromador
Detector y Pre - amplificador.
Pantalla de datos.
Procesador de Datos o Computadora Personal.
Perifricos de Salida de datos.
Instrumentacin.-
Fuente de Radiacin.-
Los Espectrofotmetros UV - Visible por lo general constan de
dos fuentes de radiacin:
* La Lmpara de Tungsteno - Halgeno
* La Lmpara de Deuterio (D2).
Ambas lmparas presentan diferentes caractersticas de
construccin y trabajo. El uso de una de ellas o de las dos
(simultanea o alternadamente), dependen bsicamente del analito
bajo estudio y del rango de observacin que ha de realizar el analista
para su trabajo.
Instrumentacin.-
La Lmpara de Tungsteno Halgeno:
Utilizan un Filamento hecho de
Tungsteno, presentan ventanas de salida
de radiacin hechas de cuarzo, el
interior de las lmparas se encuentran
rellenas con una pequea cantidad de
Halgeno en fase vapor (por lo general
Yodo o Bromo). Estn completamente
selladas. Cuando el filamento de
Tungsteno se calienta, este se sublima y
en presencia del Halgeno inicia el
Ciclo Halgeno .
W
W
+nX WX
n
WX
n
WX
n
nX
Pared de la Lmpara
(Cuarzo)
Filamento de
Tungsteno
El ciclo Halogeno se expresa mediante
la siguiente ecuacin:
W + nX WX
n
Lmpara a baja Temperatura
Lmpara a alta Temperatura
W = Tungsteno.
X = Halogeno.
Instrumentacin.-
La Lmpara de Tungsteno Halgeno:
El rango til detrabajo deestas lmparas empiezadesdelos 345nmyterminaen
los 1200nm. Presentantiempos devidamayores enun50%ms quelas lmparas
convencionalesysubrilloes75%mayor.
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
La intensidad baja debido a que la superficie
internadelalmparaserecubredeTungsteno.
El Filamento de Tungsteno se
rompe
Tiempo
(Horas) 500
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
La intensidad de la lmpara no decrece debido a que la superficie
internadelalmparanoserecubredeTungsteno
El Filamento de Tungsteno
se rompe
Tiempo
(Horas)
2000
Instrumentacin.-
La Lmpara de Deuterio:
Estas lmparas presentan una
ventana de Transmisin hecha de
cuarzo y se encuentran rellenas con
Deuterio en su interior. El rango de
trabajo de estas lmparas parte
desde los 180 hasta los 400 nm.
Estas lmparas presentan la ventaja
de poseer un espectro continuo en
este rango y dos lneas de emisin
muy fuertes a 486.0 y 656.1 nm, las
cuales se utilizan frecuentemente
para verificar la performance de los
instrumentos.
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
Tiempo
(Horas)
500 500
I
o
I
o/2
I
o/4
Lmpara de Deuterio
Instrumentacin.-
La Lmpara de Deuterio y la Lmpara de Tungsteno - Halgeno
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
La intensidad baja debido a que la superficie
internadelalmparaserecubredeTungsteno.
El Filamento de Tungsteno se
rompe
Tiempo
(Horas) 500
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
La intensidad de la lmpara no decrece debido a que la superficie
internadelalmparanoserecubredeTungsteno
El Filamento de Tungsteno
se rompe
Tiempo
(Horas)
2000
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
Tiempo
(Horas) 500 500
I
o
I
o/2
I
o/4
Lmpara de Deuterio
Instrumentacin.-
El Sistema Monocromador.-
Es un conjunto de elementos pticos que se encarga de separar y
seleccionar la radiacin de la longitud de onda analtica bajo estudio.
En otras palabras, el Monocromador es la parte del que dispersa la
radiacin Policromtica, para seleccionar un solo tipo de radiacin.
Un Monocromador presenta los siguientes elementos pticos:
Lentes y Espejos.
Ranuras de Entrada y Salida (SLIT).
El Dispersor (Filtro, Prisma o Rejilla de Difraccin).
Instrumentacin.-
Lentes y Espejos.-
Por lo general estos lentes estn hechos de un material plstico
recubiertos por un bao de Plata o de cualquier otra superficie
altamente reflectante. Los lentes son Biconvexos y por lo general
se encuentran por pares, ubicados a la entrada y salida de
radiacin, (antes de la muestra y despus de ella). La principal
funcin de los Lentes es la de enfocar la radiacin hacia diferentes
partes del instrumento (Celda de muestra, Monocromador,
Detector).
Ya que los espejos y lentes presentan casquetes esfrico, estos
deben presentar correccin para la aberracin en su construccin.
Radiacin de
550 2.5 nm
Instrumentacin.-
Ranuras de Apertura.-
Las Ranuras de apertura (Slit) son
espacios vacos muy finos y
discretos que permiten el paso de
un haz de radiacin
monocromtica. Estas Ranuras de
Entrada no solo permiten el paso
de radiacin monocromtica de
valores discretos, si no que
tambin impiden el paso de
radiacin de diferentes longitudes
de onda que no se deseen para el
anlisis.
5 nm
Radiacin de
540 a 560 nm
Radiacin objetivo: 550 nm
Instrumentacin.-
Idealmente, el tamao del Slit se
selecciona para que sea la dcima parte
del ancho del pico de inters. Este valor
se toma debido a que el haz de
radiacin que emerge del
monocromador no es 100% puro (la
lmpara de Tungsteno emite radiacin
en todo el rango). En realidad, la
radiacin que emerge del
monocromador es de un determinado
rango de longitudes de onda muy
cercanos al valor deseado.
P
o
t
e
n
c
i
a
l
50 nm
5nm
Instrumentacin.-
Ancho Medio de
Banda Espectral
(1 nm)
1/2
500 502
l (nm)
498
E
n
e
r
g
a

d
e

l
a

R
a
d
i
a
c
i
n
Rango de radiacin que pasa
por el Slit de salida
El ancho de la banda espectral a la
mitad de la altura de la radiacin de
ms alta energa se denomina Ancho
Medio de la banda espectral. La
Absorbancia depende de este Ancho
Medio ya que la Absortividad Molar
(en la ley de Lambert y Beer), depende
de la longitud de onda. Por ejemplo,
las longitudes de onda presentes en
un haz de radiacin de 500 nm con un
ancho de banda de 2 nm oscila desde
los 498 a los 502 nm, pero el Ancho
Medio de la Banda es de 1 nm (es
decir 499 a 501 nm a lo ms).
Instrumentacin.-
Como se escoge el valor del Slit del
instrumento?
Por lo general se toma la dcima parte
del valor del ancho medio de la banda
espectral del analito. Si el ancho del
Slit es demasiado estrecho la
radiacin que emerge de ella puede
no tener la energa suficiente
originando altos niveles de ruido y
una muy baja precisin fotomtrica,
como se observ en una de las
diapositivas mostradas.
500 450
550
l (nm)
Ancho Medio de 100 nm
1/2
1
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
Instrumentacin.-
Relacin entre el ancho de la banda espectral y la altura real del pico espectral.
1
4 nm
1/2
2 nm
1/4
1 nm
Ancho de Banda :
Area :
Energa :
1
1
1
Ancho de Banda :
Area :
Energa :
1/2
1/4
1/4
Ancho de Banda :
Area :
Energa :
1/4
1/16
1/16
Instrumentacin.-
Elemento Dispersor.-
Es la parte del Monocromador que separa la radiacin Policromtica en sus
componentes mas simples en rangos de longitud de onda estrechas.
Existen 3 tipos de elementos dispersores utilizados en los espectrofotmetros
UV/Visible, los cuales son:
Filtros de Interferencia.
Prismas de Cuarzo.
Rejillas de Difraccin.
Instrumentacin.-
Filtros de Interferencia:
Los Filtros de Interferencia son
placas de vidrio (simples o en
combinacin), que se encuentran
recubiertas con sustancias colorantes
o pigmentos que absorben radiacin
en determinados rangos de
longitudes de onda, dejando pasar
solo bandas estrechas de radiacin.
Otro tipo de filtros se construyen
intercalando una placa de cuarzo y
una de un gel que contiene el
colorante de absorcin, seguida de
otra placa de vidrio empapada en otro
colorante o pigmento.
Placa de Cuarzo
Gel con Absorbente
Placa de Cuarzo
con Absorbente
Instrumentacin.-
De esta forma, pueden separase rangos estrechos de
longitudes de onda, y seleccionando el filtro adecuado
puede trabajarse en rangos especficos. Esta seleccin
se hace ms fcil aun, ya que solo 5 tipos de filtros
cubren la mayor parte de las aplicaciones cuantitativas.
Pero, por lo general, el Ancho de la banda espectral que
se obtiene con este tipo de sistemas es de 30 a 50 nm.
Filtros de Interferencia:
Instrumentacin.-
Las principales ventajas que presenta este elemento dispersor son:
No requieren de montajes ni sistemas mecnicos complicados para la
seleccin de la longitud de onda de trabajo.
Debido a que no utilizan Ranuras de entrada y salida, la potencia del haz que
emerge del filtro es alta.
Ventajas y Desventajas de usar Filtros de Interferencia
Las principales desventajas que presenta este elemento dispersor son:
No pueden obtenerse ancho de banda estrechos.
No permite realizar lecturas a dos longitudes de onda en forma simultanea.
q
q
Instrumentacin.-
Prismas:
Son piezas de cuarzo con dimensiones y
formas especficas y con ndice de
refraccin caractersticos. Estos prismas
estn diseados exclusivamente para un
tipo de Monocromador.
Por lo general son piezas Trapezoidales
que pueden estar o no recubiertas de una
placa altamente reflectante. Debido a que
la refraccin de radiacin depende del
ndice de refraccin del medio que
atraviesa, los prismas se constituyen en
elementos dispersores de gran eficacia.
Instrumentacin.-
Prismas:
La figura de la izquierda nos
muestra un Monocromador que
utiliza un Prisma como separador
de radiacin. El sistema que se
observa es el montaje de Litrow.
En este sistema, el Prisma se
coloca en un ngulo de 30
grados.
Prisma Superficie Reflectante
Fuente de Radiacin
Slit de Entrada
Slit de Salida
Espejo Esfrico
Instrumentacin.-
Un Prisma cubre un amplio rango de Longitudes de onda (desde 185 hasta
los 2500 nm).
No se requieren filtros de corte como en los monocromadores de Rejilla de
difraccin.
Un Monocromador de Prisma asegura una alta dispersin con una alta
resolucin en el rango Ultravioleta (desde los 185 hasta los 300 nm).
Ventajas de usar Prismas
Instrumentacin.-
Se requiere un complicado sistema para obtener una escala lineal de
longitud de onda. Esto se debe a que la dispersin del prisma vara
con la longitud de onda.
No puede obtenerse una resolucin uniforme a un determinado
ancho de banda fija. Esto se debe a que la la dispersin del prisma
no es lineal.
Desventajas de usar Prismas
Instrumentacin.-
Rejilla de Difraccin:
Un Monocromador de Rejilla de Dispersin
utiliza una pequea placa (por lo general 1
x 1 cms), que presenta caractersticas
especiales. Esta placa por lo general se
denomina Rejilla o Grating. Estas rejillas
presentan en su superficie una serie de
dientes escalonados, uno tras otro, de tal
forma que forman una superficie
densamente poblada (cerca de 500 a 2000
dientes por milmetro cuadrado). Estos
dientes presentan una posicin y ngulo
especfico.
q
i
a
d
Radiacin
Policromtica
l (m = 1)
Superficie de Aluminio
Resina Sinttica
Placa de Vidrio
l (m = 2)
Instrumentacin.-
Rejilla de Difraccin:
q
i
a
d
Radiacin
Policromtica
l (m = 1)
Superficie de Aluminio
Resina Sinttica
Placa de Vidrio
l (m = 2)
ml = d(Sen i + Sen q)
El ngulo a (ngulo de inclinacin de
los dientes de la rejilla de difraccin),
se denomina Angulo de Cuchilla .
Muchas de las rejillas de difraccin
comerciales son replicas de las
rejillas maestras.
Cuando un haz de radiacin choca
con una de estas rejillas, el haz es
dispersados en diferentes ngulos,
(dependiendo de la longitud de onda),
de acuerdo a la siguiente ecuacin:
Instrumentacin.-
Una rejilla de difraccin asegura una mayor dispersin, con mayor resolucin en el
rango Visible y el Infrarrojo cercano.
Una Rejilla de Difraccin asegura una alta precisin en longitud de onda,
principalmente por que la desviacin debida al cambio de temperatura es
despreciable.
Con un ancho de Slit constante, la resolucin es casi constante con respecto a la
longitud de onda. Esto se debe a que la rejilla de difraccin proporciona la misma
dispersin en un rango amplio de longitudes de onda.
Con el uso del mecanismo de Barra de Senos, el movimiento de la rejilla de
difraccin se asegura una escala lineal de longitudes de onda.
Ventajas de usar Rejillas de Difraccin
Instrumentacin.-
La principal desventaja que presenta el usar un Monocromador de Rejilla es
que se requieren filtros de corte para evitar espectros emergentes de mayor
orden y la intensidad de la radiacin de la energa que emerge del
Monocromador hacia el Slit de Salida es de menor potencia .
Desventajas de usar Rejillas de Difraccin
Instrumentacin.-
Rejillas de Difraccin y el Mecanismo de la Barra de Seno
l = 2dSen i
Para simplificar la explicacin de lo que es un mecanismo de barra
de seno, tomaremos como referencia un Montaje de Litrow, en el
cual el ngulo de radiacin incidente sea el mismo que el ngulo de
Difraccin (i = Angulo incidente, q= Angulo de difraccin).
De esta forma, la ecuacin:
ml = d(Sen i + Sen q)
Se transforma en:
Instrumentacin.-
Rejillas de Difraccin y el Mecanismo de la Barra de Seno
X
A
Motor
Rejilla de
Difraccin
Slit de Entrada
Slit de Salida
i
q
500
nm
Contador de
Longitud de
Onda
La ecuacin describe que la longitud de onda es
proporcional al Seno del ngulo incidente.
Obsrvese el grfico de la derecha, en el se se
ve que el mecanismo de la barra de seno
describe la siguiente ecuacin:
Sen i = (X/A)
Combinando la ecuacin anterior con esta
ltima, obtenemos:
l = (2d)(X)/A
Lo que indica que la l onda es proporcional al
movimiento de la distancia X, proporcionando
una escala lineal de longitud de onda.
Instrumentacin.-
Montaje Litrow Czerny - Turner
Czerny - Turner de Tipo Cruzado
Monk - Gillson
La siguiente figura muestra los sistemas Monocromadores ms usados.
Instrumentacin.-
El Divisor de Haz.-
El divisor de haz (Beam
Spliter) es la parte del
instrumento que se encarga
de dividir el haz de radiacin
en dos haces, los cuales se
intercalan en forma ordenada
y a frecuencia constante,
generando dos caminos o
pasos pticos denominados:
Haz de Muestra y Haz de
Referencia (o Haz de Control).
Instrumentacin.-
El Divisor de Haz.-
La Finalidad de dividir el Haz es
la de monitorear en forma casi
continua la absorcin de la
Muestra como la de la Referencia.
De esta forma, cualquier cambio
que se produzca en el sistema
(elctrico, qumico, fsico), afecte
tanto a la referencia como a la
muestra.
De esta forma la correccin por
cualquier tipo de variacin se
realiza en forma instantnea y
efectiva.
Cual es la finalidad
de dividir el haz de
radiacin en dos?
Instrumentacin.-
Tipos de Divisores de Haz
(a)
(b)
Espejo de Malla o
Tipo Malla
(c)
(d) (e)
(f)
Instrumentacin.-
Tipos de Divisores de Haz
(g) (h)
(j) (i)
Instrumentacin.-
La Celda y el Compartimento de Celdas.-
El Compartimiento de Celdas es la parte fsica del
instrumento en la cual se alojarn las celdas de
absorcin. Este por lo general es un espacio que
presenta uno o ms contenedores de muestra (fijo o
automtico), y las aberturas para los lentes pticos.
El compartimiento de muestras por lo general se
encuentra recubierto de una pintura de recubrimiento
no voltil, oscura y de muy baja reflexin, lo cual la hace
altamente absorbente a un amplio rango de radiaciones.
Instrumentacin.-
La Celda y el Compartimiento de Celdas.-
El Compartimiento de Celdas debe de
estar diseado para alojar una serie de
accesorios opcionales (como por
ejemplo: Esfera de Integracin,
Microceldas, Sipper, etc).
Las celdas que se utilizan en el
espectrofotmetro por lo general estn
hechas de Vidrio o Cuarzo, pero si la
aplicacin requiere rango Visible, y el
solvente es agua, pueden utilizarse
celdas de Plstico descartable.
Las dimensiones de estas celdas varan
segn la aplicacin, pero las ms
comunes son las de 1 cm de paso ptico.
Instrumentacin.-
La Celda y el Compartimiento de Celdas.-
Una celda para UV-Visible debe de
lavarse escrupulosamente con agua y
detergente (preferentemente neutro) y
luego ser enjuagada con abundante
agua destilada o desionizada antes de
ponerse a secar.
Si la celda queda manchada con algn
colorante, dejar remojando la celda en
una solucin de Hipoclorito de Sodio
por un tiempo mximo de 20 minutos,
enjuagar con abundante agua
destilada o desionizada y colocar a
secar boca abajo.
Instrumentacin.-
El Detector.-
Es la parte del instrumento que
recibe la intensidad de radiacin
monocromtica de la muestra, y
la transforma a un valor de seal
elctrica. Esta seal elctrica es
medida y comparada con
respecto a un valor de referencia
(Blanco de control), para
presentar un valor numrico que
nosotros podamos entender
Radiacin
Electromagntica
Energa Elctrica
Seal Digital
Instrumentacin.-
El Detector.-
El tipo de Detector ms usado es
el Tubo Fotomultiplicador. Este
detector utiliza el fenmeno de la
Foto Emisin para generar un
pequeo flujo de corriente, el cual
es amplificado y medido en forma
proporcional a la cantidad de
radiacin incidente sobre el
detector. Cada fotn que cae sobre
el detector incide sobre una placa
que desprende 3 o 5 electrones,
los cuales chocan a su vez sobre
otras placas, generando un efecto
de cascada.
Instrumentacin.-
El Detector.-
Un Detector Tubo Fotomultiplicador presenta las siguientes ventajas:
Alta Sensibilidad en todo el Rango.
Repetibilidad de la seal.
Baja Fluctuacin de la seal de Absorbancia.
Deriva mnima
Bajo Nivel de Ruido.
Instrumentacin.-
De que consta un Espectrofotometro UV - Visible?
La Pantalla de Presentacin de Datos.-
Es la parte del instrumento que permite ver los diferentes
datos que pueden conseguirse con el espectrofotmetro.
La forma de presentacin de datos incluyen accesorios
tales como : LEDs (Diodos Emisores de Luz), Pantallas
de Cristal Lquido (LCD), Tubos de Rayos Catdicos
(CRTs), Medidores Anlogos, etc.
Instrumentacin.-
De que consta un Espectrofotometro UV - Visible?
La Pantalla de Presentacin de Datos.-
Por lo general todos los equipos modernos presentan
una pantalla grfica que permite ver tanto el barrido
espectral, como los datos cuantificados.
Instrumentacin.-
La Computadora Compatible.-
La Computadora personal o
compatible de mesa se ha vuelto
parte indispensable de todo
equipo moderno. La PC aumenta
las capacidades de trabajo y las
funciones del instrumento,
permitindole realizar: trabajos
automatizados, Procesamientos y
Clculos matemticos veloces y
una inmejorable presentacin de
los mismos.
Instrumentacin.-
La Computadora Compatible.-
Por lo general la conexin a una PC
se lleva a cabo utilizando una
interfase IEEE 488 (GP-1B) y BCD
(las cuales son interfase paralela de
8 bits.
La interfase comnmente usada es
la RS-232C. Esta es una interfase
serial de 8 a 16 bits.
La interfase IEEE 488 es otro tipo de
interfase, la cual es superior a la RS-
232C y a la BCD, ya que permite la
comunicacin con mas de un
instrumento por medio de un bus.
Instrumentacin.-
Perifericos de Salida de Datos.-
Los perifericos de Salida de
datos se refieren a las
diferentes formas en las
cuales los datos se dan a
conocer. El periferico ms
usado para la salida de
datos es la Impresora. Otras
formas de salida de datos es
por medio de dispositivos
Magneto-Opticos (Disquetes
o Tarjetas de Memoria).
Alguna Pregunta?
Gracias por su
Atencin!
Electromedica
Peruana S. A.
Divisin Analtica

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