03/06/2013

Aplicacionesbiotecnolgicasde
baculovirus (nucleopoliedrovirus)
SalvaHerrero
Lab.GenBqBt
Dpt deGentica
ERIBiotecmed
Universitat deValncia

03/06/2013

Aplicacionesbiotecnolgicasdebaculovirus

Gene
delivery

Protein
expression

Baculovirus elcontrolbiolgico
deplagas

03/06/2013

Daosalaagriculturacausadospor
insectos

Lasprdidasenloscultivosdebidasalos
insectossecalculanenun13%comomedia
Elprincipalcontroldelasplagasde
insectosseefectamedianteelusode
insecticidas
Losinsecticidas($25000M)suponen
alrededordel20%delasventasde
plaguicidasenEE.UU.usadosenagricultura

Controlconvencionaldelosinsectosplaga

Los insecticidas suponen un coste nada

despreciable, en tiempo y dinero, al
agricultor
Tienen efecto indiscriminado sobre las
poblaciones de insectos
Se acumulan en el medio ambiente
La mayora son perjudiciales para la salud
humana

03/06/2013

Problemas asociados al uso de

insecticidas convencionales
Toxicidad de los agentes activos
Acumulacin en las cadenas trficas
Aparicin de resistencias por su uso
continuado
Eliminacin de especies no diana
(insectos beneficiosos)

Repercusin sobre la opinin pblica

03/06/2013

Alternativas al uso de insecticidas

convencionales
Aplicacindemtodosculturalesde
controldeplagas
Usodeferomonas(confusinsexual)
Sueltamasivademachosestriles
Controlbiolgico(parsitosy
depredadores)

Bioinsecticidas

Usodeinsecticidasmicrobianos

Inters de la utilizacin de insecticidas

microbianos
Ausenciaderesiduosydeplazosde
seguridad
Alternativaalosinsecticidasdesntesis
cuandosehadesarrolladoresistencia
Usopermitidoenlaagriculturaecolgica
Sustitutosdeactualesinsecticidasdesntesis
quehanquedadoyquedarnprohibidosen
breve

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Biopesticides market

EU2012
Biopesticides($540)

Conventional

5%

95%

EU biopesticides market. 2013

MicrobialBiopesticides
Nematodes
InvertebrateBiocontrolAgents

14%

Pollinators

18%

2%

Semiochemicals(insectpheromones)
PlantGrowthRegulators
BiochemicalBiopesticides

6%
12%
35%
13%

03/06/2013

Patgenos en el control de plagas de

insectos
Nematodos(familiasHeterorhabditidae y
Steinernematidae
Hongos(Beauveria bassiana)
Virus

(Baculovirus)

Bacterias(Bacillus thuringiensis)

Virus de insecto

03/06/2013

Virus de Insecto

Virus de Insecto
Familia

TipodeGenoma

Especies

Poxviridae

DNAdc

17

Iridoviridae

DNAdc

Baculoviridae

DNAdc

42

Polydnaviridae

DNAdc

53

Nimaviridae
Ascoviridae
Parvoviridae
Pseudoviridae

DNAdc
DNAdc
DNAsc
RNAscRT

1
4
6
3

Metaviridae

RNAscRT

26

Reoviridae

RNAdc

23

Birnaviridae
Dicistroviridae

RNAdc
RNAsc+

1
12

Iflaviridae

RNAsc+

Nodaviridae
Tetraviridae

RNAsc+
RNAsc+

5
13

Ejemplos(abreviatura)

Aedes aegypti entomopoxvirus (AAEV)

Locusta migratoria entomopoxvirus (LMEV)
Choristoneura fumiferana entomopoxvirus (CFEV)
Invertebrate iridescent virus 1 (IIV1)
Spodoptera exigua mltiple nucleopolyhedrovirus (SeMNPV)
Cydia pomonella granulovirus (CpGV)
Neodiprion sertifer nucleopolyhedrovirus (NeseNPV)
Cotesia melanoscela bracovirus (CmeBV)
Campoletis sonorensis ichnovirus (CsIV)
White spot syndrome virus (WSSV)
Spodoptera frugiperda ascovirus 1a (SfAV1a)
Aedes aegypti densovirus (AaDNV)
Drosophila melanogaster 1731 virus (Dme1731V)
Drosophila melanogaster Gypsy virus (DmeGypV)
Ceratitis capitata Yoyo virus (CcaYoyV)
Aedes pseudoscutellaris reovirus (APRV)
Cypovirus 1 (CPV1)
Drosophila X virus (DXV)
Cricket paralysis virus (CrPV)
Deformed wing virus (DWV)
Spodoptera exigua iflavirus1 (SeIV1)
Black beetle virus (BBV)
Helicoverpa armigera stunt virus (HaSV)

03/06/2013

Familia Baculoviridae

Familia Baculoviridae
Genero Nucleopoliedrovirus
Afecta a diferentes ordenes de
insectos:
Principalmente Lepidptera
En menor grado Himenptera,
Dptera, Coleptera

Genero Granulovirus
Todos los aislados hasta la
fecha de lepidpteros

03/06/2013

Morfologa de baculovirus

M-NPV

S-NPV

Nucleopolyhedrovirus (NPV)

Granulovirus (GV)

ODV (Occluded derived virus)

Especies de baculovirus. Nomenclatura

Husped

virus

Anticarsia gemmatalis

AgMNPV

Autographa californica

AcMNPV

Bombyx mori

BmNPV

Spodoptera exigua

SeMNPV

Helicoverpa armigera

HaSNPV

Trichoplusia ni

TniSNPV

Pieris Brassicae

PbGV

Cydia pomonella

CpGV

Plutella xylostella

PxGV

10

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Baculovirus mode of action: Primary

infection

Ingestion OBs
Release ODVs
Binding and
entrance of ODVs

Mode of action: Secondary infection

Virus multiplication
Spreading BV
Systemic infection

Occlusion new virus

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Dos tipos de viriones

Viriones ocluidos(ODVs)

Ocluidosenpoliedrina
Infectacel.intestinales
Infectivosoralmente
Fusindemembranas

Viriones brotados(BV)

Libresenlacel yhemolinfa
Infec.mayoratiposcel.
Infectivoscelcel
Endocitosis

Dos tipos de viriones

12

03/06/2013

Baculovirus transmission
Infectiouscycleinthefield

Horizontal transmission

4. Insect death
3. Multiplication and
secondary infection
5. Liquefaction and viral
spreading

1. Ingestion

2. Primary infection

Baculovirus transmission
Infectiouscycleinthefield

Vertical transmission

Covert infection

1. Ingestion
Ingestin virus

Infeccin
primaria
Infeccin
primaria
Overt infection

13

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Diversidad de baculovirus
Diversidad de baculovirus. Genotipos y transmisin vertical

Ms eficiente
para el
control de
poblaciones
locales

Baculovirus en el cultivo en invernadero.

El caso del SeMNPV
Spodopteraexigua,plagapolifagadegran
importanciaenlosinvernaderosalmerienses.

Rodrigo Lasa

Rodrigo Lasa

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Produccin de baculovirus
Infeccin larvas

Multiplicacin

Homogenizacin larvas

Centrifugacin baja velocidad

Centrifugacin velocidad media

Formulacin

Ventajas y limitaciones en el uso de

baculovirus
Ventajas

Elevadaespecificidad(compatibilidadconfauna
auxiliar
Capacidaddeautoreplicacin ydispersin
Ecolgico(sinplazosdeseguridad)
Posibilidaddeproduccindeformalocal
Limitaciones

Elevadaespecificidad
Mododeaccinlento
Bajapersistenciaencampo
Produccincostosa

15

03/06/2013

Productos comerciales basados en

Baculovirus

SeMNPV

S. exigua

HzSNPV

H. zea
H. virescens

CpGV

C. pomonella
C. nigricana

Productos comerciales basados en

Baculovirus

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Baculovirus en el cultivo de algodn

Aplicacionesbiotecnolgicasdebaculovirus

Gene
delivery

Protein
expression

17

03/06/2013

Baculovirus comovectorde
expresinproteico

Baculovirus, one of the largest viral genomes

Chen et al., JGV. 2001

DNAds
100150kb
100150ORFs
Highlyspecific
About1000species
MainlyfromLepidoptera
(fewfromColeoptera and
Diptera)

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03/06/2013

Generacin de baculovirus recombinantes

Chen et al., JGV. 2001

Variossistemascomerciales

BactoBac (invitrogen)
flashBAC (OET)
BaculoGOLD (BDBiosciences)
BaculoDirect (Invitrogen)

Permitelaexpresinsimultanea
devariasprotenas
Genavirusen510das

Generacin de baculovirus recombinantes

Chen et al., JGV. 2001

Variossistemascomerciales

19

03/06/2013

BES in vitro e in vivo

Chen et al., JGV. 2001

Cultivocelular

Insectos

Ventajas e inconvenientes

From http://pef.aibn.uq.edu.au/4pages/invivo.htm

20

03/06/2013

Aplicaciones protenas recombinantes

Chen et al., JGV. 2001

Apoyogruposdeinvestigacin
Generacinantgenosparakitsdedeteccin
Produccindevacunas
Antgenosactivadoressistemainmune
Viruslike particles

Sntesisdemetabolitos

Apoyo grupos de investigacin

Produccindeprotenasalacartaparasu
usoeninvestigacinbiomdica
Optimizacindelprocesodeproduccin.
Produccinencultivocelularoinsectos.

Chen et al., JGV. 2001

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03/06/2013

Generacin antgenos para Kits de deteccin.

Reduccin considerabledelcoste
por anlisis
Ej:Deteccin peste porcina
africana

Chen et al., JGV. 2001

http://vimeo.com/58525117

Produccin de vacunas.
Chen et al., JGV. 2001

Flublok,primerinyectableproducidoconbaculovirus y
aprovado porlaFDA(Enero2013).
MediantelaexpresindeHemaglutininas (HA)y
produccindeVLP
3semanasproduccin

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03/06/2013

Aplicacionesbiotecnolgicasdebaculovirus

Gene
delivery

Protein
expression

Baculovirus comoagentede
transferenciagnica

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Bacmam, una baculovirus modificado

Transduccin (wiki):Tambinseutilizaparadesignaral
procesomedianteelcualADNexgenoesintroducidoenuna
clulamedianteunvectorviral
Losviriones brotantes debaculovirus secaracterizanporuna
transduccinmuypromiscua.Aunquesonincapacesde
replicar.
Estohafomentadosuestudioendistintasaplicaciones
biomdicas:
MedicinaRegenerativa
Generacinclulasmadre(IPSs)
TerapiaGnica
BacMam

Bacmam en Medicina regenerativa

BacMam 1.0
Noenhancer

BacMam 1.0
With
enhancer

BacMam 2.0
Noenhancer

BacMam 2.0
With
enhancer

+/

++

++

++

Primarycells

++

++

++

Stemcells

++

++

++

Neurons

++

++

Immortalized
Tcells

+/

PrimaryT
cellsandB
cells

Celllines

24

03/06/2013

Bacmam, una baculovirus modificado

Mediantelatransduccindediferentestiposcelularescon
baculovirus sepuedeinducirlaexpresindedeterminadas
protenas.
Ej.Regeneracindehueso/cartlagomediantelaexpresintransiente
defactoresdefactoresosteognicos yangiognicos
BVa

BVb

Mol Ther. 2013Apr;21(4):73949.doi:10.1038

Figure 1: Generating iPSCs. Gene delivery methods for generating iPSCs [Retroviral or Lentiviral Transduction (A), Adenoviral Transduction (B), Plasmid Transfection (C), Transposon-based Transfectio

Bacmam, una baculovirus modificado

Mediantelatransduccindediferentestiposcelularescon
baculovirus sepuedeinducirlaexpresindedeterminadas
protenas.
Ej.GeneracindeclulaspiPS (proteininduced pluripotent stem
cells)mediantelaexpresindeciertosfactoresdetranscripcin.

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03/06/2013

Figure 1: Generating iPSCs. Gene delivery methods for generating iPSCs [Retroviral or Lentiviral Transduction (A), Adenoviral Transduction (B), Plasmid Transfection (C), Transposon-based Transfectio

Bacmam, una baculovirus modificado

Mediantelatransduccindediferentestiposcelularescon
baculovirus
Ej.Terapiagnica.Aunquevectorprometedorporserexclusivode
insectos,losestudiosestnrelativamenteparalizados
Bienmediantelatransformacindeclulasinvitroyposterior
trasplanteoinvivoatravsdelatransduccinselectiva

Baculoviruses asgenetherapyvectorsforhumanprostatecancer.JIP2011.107:s59s70

Lneasdeinvestigacin:
Resistenciaabioinsecticidas.
Desarrollodenuevosbioinsecticidas.
Sistemainmuneeninsectosysu
interaccinconpatgenosviralesy
bacterianos.
Ingenieradebaculovirus parasuuso
biotecnolgicoybiomdico.

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Immune
response

Protein
expression

Interactions with other pathogens

Increaseingutmicrobiota afterimmunesuppressioninbaculovirusinfectedlarvae
(Jakubowskaetal.,Plos Pathogen2013)

Aplicaciones.


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03/06/2013

Interactions with other pathogens

3 nuevos virus de S. exigua

Aplicaciones.

Protein expression. Novel promoters

Nuevos promotores para la expresin de protenas

Aplicaciones.


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03/06/2013

Protein expression. VLPs

Produccin vacunas para sanidad animal.

Enprocesodemaduracinybsquedadesocios

Immune related proteins in the host

Nuevas protenas del sistema inmune del insecto

E.colicherry

E.colicherry +ProtenaX

Aplicaciones. 


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En resumen
Existenunagranpotencialindustrialparaeluso
debaculovirus.Tantoensuvertientecomo
agentedecontroldeplagascomoensus
aplicacionesbiotecnolgicas.

Msinformacin: www.uv.es/genbqbt
sherrero@uv.es

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