Po-04 Procedimiento de Validacion de Metodos Analiticos

PROCEDIMIENTO DE VALIDACIN DE
MTODOS ANALTICOS FISICOQUIMICOS

CODIGO PO-04
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FECHA 21/05/2011
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DOCUMENTO CONTROLADO

RESPONSABLE DEL PROCESO:
DIRECTOR TECNICO FISICOQUIMICA
ANALISTA FISICOQUIMICA

CONTROL DE CAMBIOS EN EL DOCUMENTO
VERSION
QUE CAMBIA
CAMBIOS REALIZADOS Y CAUSA
FECHA DEL
CAMBIO
00
Se agrega en el procedimiento las consideraciones a tener en cuenta
para hacer verificaciones de las validaciones de los mtodos analticos en
el Numeral 6.6. Verificaciones de la validacin. En el procedimiento se
unifican la terminologa empleada para definir el conjunto de actividades
descritas (se cambian trminos de estandarizacin y normalizacin por
validacin en todo el cuerpo del documento).
21/05/2011

AUTORIZACIONES
Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:
Nombre / Cargo
YECITH SANGUINO PUELLO
Director Tcnico Fisicoqumica
Nombre / Cargo
NORBEY ARIAS AARON
Analista Fisicoqumica
Nombre / Cargo
LOANA ARAUJO PUMAREJO
Representante del Sistema de Gestin de Calidad
Firma y Fecha:26/08/2010 Firma y Fecha: 19/05/2011 Firma y Fecha: 21/05/2011

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1. OBJETIVO

Presentar las directrices para realizar la validacin (Confirmacin) de los mtodos analticos
utilizados en el laboratorio.

2. ALCANCE

Este procedimiento aplica a los mtodos analticos utilizados por el laboratorio Ambiental y
de Alimentos Nancy Flrez Garca en el rea Fisicoqumica y para los cuales se solicite
acreditacin.

3. DEFINICIONES

- Incertidumbre de medida: Parmetro, asociado al resultado de una medicin, que
caracteriza la dispersin de los valores que podran ser razonablemente atribuidos al
mesurando.
- Promedio Aritmtico: Es la suma de los valores registrados en una serie de mediciones
divididas entre el nmero de las mismas.
- Desviacin: Se designa con este nombre a la diferencia entre cada una de las
mediciones y el promedio aritmtico.
- Desviacin Promedio: Es el promedio aritmtico de todas las desviaciones sin
considerar los signos.
- Exactitud: Es el grado de aproximacin entre el valor obtenido experimentalmente y el
valor real o aceptado.
- Precisin: Es el grado de aproximacin mutua entre resultados independientes (por
ejemplo valores de medicin) de una muestra homognea obtenidos mediante un
mtodo analtico dado en condiciones establecidas.
- Lmite de deteccin del mtodo (LDM): Aquella concentracin del analito que cuando
se procesa a travs del mtodo completo proporciona una seal en el instrumento
significativamente (con una probabilidad del 99%) diferente de la seal de una muestra
blanco o seal de fondo. En el lmite de deteccin todava no se puede cuantifica.
- Lmite de cuantificacin del mtodo (LCM): La concentracin por encima de la cual se
puede cuantificar un analito. El lmite de cuantificacin es siempre ms grande que el
lmite de deteccin.
- Linealidad: Es la caracterstica de tener una relacin proporcional entre el parmetro
analizado y el resultado deseado. La transformacin matemtica se lleva a cabo por

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medio de una funcin lineal. Esta funcin se puede aplicar solamente en un intervalo de
concentracin limitado, en el cual existe proporcionalidad. Este intervalo (intervalo de
trabajo) debe determinarse.
- Intervalo de trabajo: Es el intervalo entre dos concentraciones de un analito en una
muestra, para la cual se podra mostrar, que el mtodo tiene suficiente precisin y
exactitud, y muestra linealidad. No se tiene que llevar a cabo una determinacin del
intervalo de trabajo si ya se mostr linealidad en un intervalo definido.
- Sensibilidad: Es una medida del factor de respuesta del instrumento como una funcin
de la concentracin. Normalmente se mide como la pendiente de la curva de calibracin.
Como valor se puede reportar el promedio para las curvas obtenidas en los ensayos de
validacin y en la medicin de muestras, indicando su desviacin estndar.
- Blanco (BK): Es un sistema fsico que no contiene muestra real y por consiguiente no
debera contener el analito de inters, pero que debe contener todos los reactivos que
se utilizan en el mtodo de anlisis, y ser sometido a las mismas condiciones y al mismo
procedimiento que las muestras reales y los estndares. En lugar de muestra, el volumen
faltante se completar con agua grado reactivo que deber tener la calidad
recomendada por el mtodo respectivo.
- Muestra (M): Para este propsito, el trmino se refiere a cada sistema fsico que sea
sometido al procedimiento de anlisis siguiendo el mtodo que se est estandarizando,
ya sea un Blanco, un Estndar, una Muestra Adicionada, o una Muestra Real
propiamente dicha.
- Lmites de confianza: Es un estimado de una desviacin individual mxima del
promedio, dentro del cual deben caer un cierto porcentaje de las dems desviaciones.
- Lmites de alarma superior e inferior: Son valores determinados para las cartas de
control y se calculan como 2 veces el valor de la desviacin estndar ms el promedio
de los datos de una sustancia o muestra de control. Cualquier dato que caiga fuera de
los lmites de alarma es seal de que existe algn y se hace necesario tomar acciones
que pueden ir desde el lavado completo del material de vidrio empleado en el anlisis
hasta repetir el anlisis de todo el lote de muestras.
- Lmite de control superior e inferior: Son valores determinados para las cartas de
control y se calculan como 3 veces el valor de la desviacin estndar ms el promedio
de los datos de una sustancia o muestra de control. Cualquier dato que caiga fuera de
los lmites de control es reexaminado y se suspenden los anlisis hasta que el sistema
vuelva a estar bajo control. Las acciones van desde el lavado completo del material de
vidrio empleado en el anlisis hasta una nueva calibracin con los estndares.
- Mensurando: Magnitud particular sometida a medicin.
- Recuperacin: Es la capacidad que tiene un procedimiento analtico para determinar
cuantitativamente una especie qumica que ha sido adicionada a una muestra.

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- Validacin: Confirmacin mediante el suministro de evidencia objetiva de que se han
cumplido los requisitos para una utilizacin o aplicacin especfica prevista.
- Verificacin: Confirmacin mediante la aportacin de evidencia objetiva de que se han
cumplido los requisitos especificados.
- Valor verdadero convencional (de una magnitud): Valor atribuido a una magnitud
particular, y aceptado a veces por convencin, porque la representa, con una
incertidumbre apropiada, para un fin dado.
- Repetitividad (de los resultados de las mediciones): Proximidad entre los resultados
de mediciones sucesivas del mismo mesurando, realizadas bajo las mismas condiciones
de medicin. (Aplicacin de un mismo procedimiento, a un mismo objeto, por el mismo
operador, en intervalos cortos de tiempo, con el mismo equipamiento instrumental, en el
mismo lugar).
- Reproducibilidad: Proximidad entre los resultados de mediciones de un mismo
mensurando, realizadas bajo distintas condiciones de medicin.
- Precisin intermedia: Magnitud que relaciona la variacin en los resultados observados
cuando uno o ms factores, tales como tiempo, equipamiento, operador, varan dentro de
un mismo laboratorio.

4. RESPONSABLES

El Director Tcnico del rea es el responsable de la aplicacin y supervisin de las
directrices establecidas en este procedimiento.

5. DOCUMENTOS DE REFERENCIA

- Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. EURACHEM- CITAC Guide QUAM:
2000. Numeral 7.7. (1) DE-339.
- American Public Health Association, American Water Work Association and Water
Environment Federation, Standard Methods For the Examination of Water and
Wastewater, 21st Edition. American Public Health Association 1015 Fifteenth Street NW.
Washington, D.C., 2005. DE-208.
- La validacin de mtodos analticos. Rius, F. Xavier et al. Departamento de qumica
analtica y qumica organica. Instituto de estudios avanzados. Universidad de Rovira y
Virgili. Tarragona, Espaa. DE-342.

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6. DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO

6.1. PLANEACIN GENERAL DE LA VALIDACIN

Realizar las siguientes actividades para orientar el proceso de la validacin propiamente
dicho:

- Crear un archivo fsico (carpetas) para toda la documentacin generada en el proceso.
Las carpetas debe estar disponibles para su consulta permanente.
- Seleccionar el mtodo para cada analito y por cada matriz.
- Estudiar cada uno de los mtodos de referencia correspondientes a los mtodos a
estandarizar para establecer si se dispone de todos los insumos necesarios.
- Asegurar el conocimiento exacto del funcionamiento de los equipos de medicin
involucrados.
- Definir quienes participarn en las actividades experimentales.
- Establecer el tiempo (semanas o meses) disponibles para realizar la validacin.

Nota: Si al momento de la validacin no se han unificados criterios para los formatos de
captura de datos, los datos primarios pueden ser registrados en un formato libre en el cual se
incluyan las variables de inters e informacin que permita reconstruir claramente las
condiciones de la validacin (fecha, responsable, etc.).

6.2. ACTIVIDADES PRELIMINARES A LA VALIDACIN

Cuando aplique, programar y realizar para el mtodo analtico a validar las actividades
experimentales necesarias que permitan obtener informacin bsica para poder determinar
los atributos de desempeo. Entre las actividades preliminares se deben realizar las
siguientes cuando aplique:

- Determinar el intervalo de concentraciones entre las cuales se puede aplicar el mtodo
analtico. teniendo como criterios: La informacin de la literatura, intereses especficos
(decretos ambientales), ensayos preliminares en el laboratorio. El intervalo de aplicacin
va desde la mnima cantidad detectable (LDI) hasta la concentracin que se podra leer
con la mxima dilucin posible aceptable con las condiciones fisicoqumicas de la
muestra (en lo general no debe ser mayor de 1:1000).
- Determinacin de las matrices de las muestras con las cuales se realizar la validacin
del mtodo.

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- Atributos del mtodo que se pueden determinar con los recursos disponibles.
- Definir las condiciones experimentales especficas no definidas claramente en el mtodo
de referencia, por ejemplo: tiempos de secado, tiempos de enfriamiento, velocidades de
agitacin, volumen de muestra, presiones de succin, tiempo para desarrollo de color,
etc.
- Establecer el mecanismo ms adecuado para calcular el lmite de deteccin del mtodo.
- Establecer las variables instrumentales o metodolgicas particulares del laboratorio que
puedan afectar el proceso de medicin en aquellos aspectos en que no se pueda seguir
estrictamente el protocolo.
- Verificacin y optimizacin de las condiciones y de los parmetros instrumentales,
incluyendo curva de calibracin.

Registrar las conclusiones obtenidas de estos estudios en un solo informe, el cual formar
parte de la validacin.

6.3. METODOLOGA PARA LA VALIDACIN

6.3.1. Recomendaciones generales

- Los experimentos deben ser realizados por los analistas utilizando los mismos equipos y
los mismos reactivos qumicos.
- Disponer de muestras y estndares estables, homogneos y en la cantidad suficiente
para ser utilizados a lo largo del estudio.
- Cada grupo de muestras analizadas se debe considerar totalmente independiente el uno
del otro, aunque las soluciones estndares y las muestras se hayan preparado al inicio
del estudio.
- Analizar en orden aleatorio las muestras definidas.
- Preparar suficiente cantidad de muestras y preservarlas adecuadamente para garantizar
su integridad.
- Analizar por duplicado las muestras de cada lote para disponer de un adecuado nmero
de datos.

6.3.2. Diseo experimental

Para cada mtodo analtico se recomienda preparar 6 lotes de muestras conformados cada
uno de la siguiente manera:

- Un blanco de reactivos (BK) o un patrn con una concentracin baja (
Eb
C ).

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- Dos estndares de concentracin conocida uno de concentracin baja y otro de
concentracin alta (E
alto
, E
bajo
). La concentracin se pueden estimar con base en el valor
de C que es el lmite mximo de concentracin del analito para el mbito del mtodo y
definido en la etapa preliminar de la validacin as: E
alto
0,9*C; E
bajo
0,09*C.
- Dos muestras rutinarias, M
1
de concentracin baja y M
2
de concentracin alta, cuyas
matrices correspondan al inters de la validacin.
- Dos muestras adicionadas (M
1
+A
1
y M
2
+A
2
) preparadas para los analitos que aplique.
- Un Material de Referencia Certificado (MRC) o patrn certificado, si est disponible.

Nota 1: El nmero de muestras por lote puede cambiar dependiendo del nmero de matrices
de inters para el laboratorio y de la amplitud del rango de concentracin de inters para
estandarizar.

Nota 2: Este diseo experimental no aplica para la validacin de la Demanda Bioqumica de
Oxgeno, grasas y aceites, su validacin se realiza con base en los lineamientos indicados en
los Anexos 1 y 2.

Nota 3: Este diseo experimental puede ser ms complejo dependiendo del nmero de
equipos disponibles y de analistas que intervengan en el proceso.

Se sebe seguir las siguientes recomendaciones a la hora del desarrollo analtico del diseo
experimental:

- Analizar las muestras de los lotes en forma aleatoria y por duplicado cada una, este
mecanismo permite eliminar los efectos de cambios sistemticos en factores que no
pueden ser controlados y que puedan dar lugar a falsas conclusiones.
- Antes de iniciar el anlisis de los lotes y para los mtodos en que aplique, determinar
primero las condiciones ptimas para obtener las mejores curvas de calibracin, aplicar
estas condiciones para analizar las muestras de los lotes.
- Analizar los seis lotes de muestras en das diferentes, si es posible (de acuerdo con la
estabilidad del analito), en caso contrario analizar los seis lotes durante el tiempo de
estabilidad. Registrar los datos primarios obtenidos en el formato de captura de
informacin diseado para cada mtodo analtico.

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6.3.3. Metas de precisin y exactitud

6.3.3.1. Meta de precisin

El coeficiente de variacin CV mximo aceptable para un grupo de mediciones individuales
es de 10%.

Existe el siguiente criterio alterno para establecer la meta de precisin: La desviacin
estndar mxima aceptable de un grupo de mediciones individuales es el valor
correspondiente al 25% de la concentracin mnima de inters (es decir 0,25*CL, en donde
CL = C/10, siendo C la concentracin mxima de inters o la concentracin mxima del
rango lineal) o el 5% del valor promedio de las mediciones, el que sea mayor. Este criterio
se puede utilizar cuando se estime conveniente.

6.3.3.2. Meta de porcentaje de recuperacin de muestras adicionadas

El rango aceptable de porcentaje de recuperacin de muestras adicionadas es entre el 80% y
el 120%. Este rango puede ser mayor si el estudio estadstico realizado con la Hoja de
Clculo Validar 1.1 HC-02; as lo demuestra, este estudio se basa en el clculo del intervalo
de confianza para una recuperacin del 80% y una del 120%.

Nota: Para verificar el cumplimiento de las metas de precisin y del porcentaje de
recuperacin, se utiliza la Hoja de Clculo Validar 1.1 HC-02; desarrollado por el Instituto
Nacional de Salud-Red Nacional de Laboratorios-Grupo de Red Salud Ambiental (Ver Anexo
3). Este software permite determinar la aceptabilidad de las desviaciones estndares y del
porcentaje de recuperacin para cada nivel de concentracin.

6.3.3.3. Meta de exactitud

El Error relativo mximo aceptable de un grupo de mediciones debe ser inferior al 10%.

Existe el siguiente criterio alterno para establecer la meta de exactitud: El error sistemtico
mximo aceptable expresado como Error absoluto (sesgo) para un grupo de mediciones es
el valor correspondiente al 50% de la concentracin mnima de inters (0,5*CL, en donde CL
= C/10, siendo C la concentracin mxima de inters o la concentracin mxima del rango
lineal) o el 10% del valor promedio medido, el que sea mayor. Este criterio se puede utilizar
cuando se estime conveniente.

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Nota: Para los mtodos que aplique y como un mecanismo alterno para evaluar la exactitud,
se puede utilizar el cumplimiento del criterio establecido para el porcentaje de recuperacin
de muestras adicionadas o el cumplimiento de la prueba de significancia Test de t student.
El porcentaje de muestras adicionadas se utiliza tambin para verificar la trazabilidad del
mtodo analtico.

6.3.3.4. Metas de precisin y exactitud para el anlisis de DBO
5

La meta de precisin expresada como desviacin estndar mxima es el 15% de la media
del valor obtenido (segn mtodo 5210 B, Standard Methods). La meta de exactitud
expresada como error relativo es de 15% del valor medido.

6.3.3.5. Metas de precisin y exactitud para el anlisis de pH y conductividad

La meta de precisin expresada como coeficiente de variacin CV mximo aceptable para un
grupo de mediciones individuales es de 10%.

La meta de exactitud expresada como error relativo mximo aceptable es de 5%.

6.4. CLCULO DE LOS ATRIBUTOS DE LOS MTODOS

Para realizar el clculo de los atributos de los mtodos analticos indicados en esta etapa del
procedimiento, tomar como base la Hoja de clculo validacin de mtodos analticos
Fisicoqumicos HC-01; la cual tiene proteccin de acceso del registro electrnico
especificado en el Listado Maestro de documentos RA-01.

Nota: Esta hoja de clculo podr ser ajustada de acuerdo a los equipos o analistas que
participen en el proceso y se le insertarn un nmero de fila segn sea el caso.

6.4.1. Rango de trabajo o rango lineal

Para los mtodos analticos en los cuales se utilice curva de calibracin (por ejemplo
espectrofotomtricos) para obtener la concentracin del analito, determinar el rango lineal
utilizando la curva de Ringbom. Para obtener esta grfica realizar los siguientes pasos:

- Abrir el archivo Excel que contiene la hoja de clculo Validacin de mtodos analticos
para el mtodo de inters, abrir la pestaa Rango lineal.

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- Ingresar la informacin solicitada en la tabla de valores, columnas Concentracin (Las
concentraciones de los patrones deben abarcar desde el blanco hasta el 140% del valor
de la concentracin mxima conocida o estimada para el rango lineal del mtodo) y
Absorbancia. En cada nivel de concentracin realizar por lo menos tres mediciones de
absorbancia para obtener su promedio.
- La grafica de la curva de Ringbom se genera tomando los datos de concentracin de
cada patrn en escala logaritmica (eje x) versus Absortividad (eje y). La Absortividad
(ABST) se calcula aplicando la siguiente ecuacin:

ABST = 100 %T, en donde %T = (1 / 10
(A)
)*100

- Visualmente buscar el conjunto de puntos de la curva de Ringbom en donde se presenta
un comportamiento lineal. Establecer el rango de concentraciones correspondiente para
definirlo como el rango lineal.
- Guardar los cambios antes de cerrar el archivo.

6.4.2. Curva de calibracin y linealidad

A) Curva de calibracin

Para los mtodos analticos en los cuales se utilice curva de calibracin (por ejemplo
espectrofotomtricos) para obtener la concentracin del analito, determinar la curva de
calibracin. Para obtener esta grfica realizar los siguientes pasos:

- Abrir el archivo Excel que contiene la Hoja de clculo Validacin de mtodos analticos
Fisicoqumicos HC-01, para el mtodo de inters, abrir la pestaa Rango lineal.
- Ingresar la informacin solicitada en la tabla de valores, columnas Concentracin
(Patrones definidos en la curva de Ringbom como los pertenecientes al rango lineal) y
Absorbancia correspondiente (por lo menos tres valores de absorbancia para obtener un
valor promedio, en la medida de lo posible los valores de absorbancia ingresados deben
corresponder a curvas de calibracin diferentes preparadas en tiempos diferentes).
- Despus de ingresados todos los datos requeridos, Excel genera la grfica de la curva de
calibracin y calcula los valores del coeficiente de correlacin, de la pendiente, del
intercepto con el eje y, la ecuacin de la curva de calibracin.

La recta de regresin se determina por el mtodo de mnimos cuadrados. La recta de
calibracin es del tipo: Y = bx + a

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Donde:
( )( )
( )
Pendiente
X X
Y Y X X
b
2

=

Intercepto
n
b Y
a

=
X

X: La concentracin de los patrones
Y: Respuesta de los patrones

X
: Promedio de las concentraciones de los patrones

Y
: Promedio de las respuestas (reas, absorbancias, etc.)
n: Numero de determinaciones

Calcular el coeficiente de correlacin (recomendable que sea mayor a 0.996), retirar los
puntos de la curva hasta obtener el mejor coeficiente de correlacin, como mnimo se deben
establecer 5 puntos para la curva de calibracin.

( )( )
( ) ( )
n Correlaci de e Coeficient
Y Y X X
Y Y X X
r
2 2

=

Para aquellos mtodos analticos en los cuales se utilice una frmula para obtener la
concentracin del analito (mtodos gravimtricos, volumtricos, etc) y para los cuales sea
necesario demostrar la existencia de relacin lineal entre la concentracin y las seales (por
ejemplo cuando se requieren condiciones analticas diferentes para varios rangos de
concentracin), establecer la linealidad del mtodo para los rangos de concentraciones
definidos calculando el coeficiente de regresin lineal entre las concentraciones de patrones
analizados y la respuesta promedio del equipo de medicin utilizado (por ejemplo volumen
gastado, peso de residuo, etc. y aplicando por lo menos el test de linealidad indicado en el
numeral 6.4.2. B).

B) Test de linealidad (Test del Coeficiente de Correlacin (r)):

El coeficiente de correlacin refleja el grado de relacin entre las variables X (concentracin)
y Y (respuesta).

El valor de r = 1 indica una recta perfectamente lineal, r = 1 una recta perfectamente lineal
de pendiente negativa y r = 0 la no correlacin entre X y Y.

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Valores muy elevados de r no deben tomarse errneamente como indicadores de linealidad,
la linealidad se demuestra estadsticamente por los procedimientos que se describen a
continuacin.

El cuadrado del coeficiente de correlacin se denomina coeficiente de determinacin e indica
la proporcin de la varianza total de la variable independiente Y.
Determinar la linealidad del sistema aplicando el siguiente test estadstico: Despus de
ingresar los valores de Concentracin y absorbancia correspondiente a la curva de
calibracin en la pestaa Linealidad sistema, Excel calcula el valor del t de Student
experimental t

exp con la siguiente frmula:

2
1
2 r
exp t
r
n
=

Comparar el valor del t

exp con el valor del t de Student de tablas t tablas a dos colas para
un nivel de confianza del 95% y con n2 grados de libertad (p = 0.05, Ver anexo 4), donde n
es el nmero de patrones utilizados para la curva de calibracin.

Evaluar el resultado de este test con base en el siguiente criterio: La hiptesis nula es la no
correlacin entre X y Y. Si el valor de t

exp es mayor que el valor de t de tablas se rechaza la
hiptesis, siendo la correlacin lineal significativa. La tabla de Hiptesis para r es la siguiente:

Parmetro Estadstico Valor Obtenido
r
r
2

t exp
t tablas (p=0.05, n2 gl) *
CRITERIO:
t exp > t tablas
Por lo tanto, hay correlacin entre la concentracin y la
respuesta
* Se sugiere como mnimo 5 puntos de calibracin, cada uno con tres mediciones de
absorbancia.

C) Test de varianza de la pendiente (b)

A mayor pendiente, mayor sensibilidad (repuesta del mtodo frente a los cambios de
concentracin del analito). La varianza de la pendiente Sb
2
se utiliza como expresin
matemtica de la linealidad, a menor varianza mejor linealidad.

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Despus de ingresar los valores de Concentracin y absorbancia correspondiente a la curva
de calibracin en la pestaa Linealidad sistema, Excel calcula la varianza de la pendiente
aplicando las siguientes formulas:

( )
( ) ( ) N
S S x y x y
/ X X
X X
S
2 2
,
2
2
,
2
b
=

Donde
( ) ( )
( ) 2 N
1 Y Y
2
2
,
2

=
r
S x y

Siendo S
2
y,x
la varianza del error experimental total, varianza residual o varianza de regresin
de Y sobre X debida a la variacin dentro de la serie mas la variacin debida a la falta de
ajuste entre la recta de regresin y los datos experimentales.

Con los datos ingresados, Excel calcula tambin los lmites de confianza de la pendiente as:

b = b t S
b

Determinar la existencia de regresin lineal sistema aplicando el siguiente test estadstico:
de calibracin en la pestaa Curva de calibracin, Excel calcula el valor del t de Student
experimental t

exp con la siguiente frmula

t

exp = b / S
b

Comparar el valor de t

n 2 grados de libertad a una probabilidad de 95 % (p= 0,05).

Evaluar el resultado de este test con base en el siguiente criterio: El valor de t tablas debe
ser menor que el t exp, indicando que la pendiente es significativamente diferente de cero y
existe regresin.

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Tabla de Hiptesis para la Pendiente
t exp
b
Sb
t tablas (p=0.05, n-2 gl) *
Limite de confianza Superior
Limite de confianza Inferior
CONCLUSIN
t exp > t tablas
Por lo tanto, la pendiente es significativamente diferente de cero y
existe regresin
* Se sugiere como mnimo 5 puntos de calibracin, cada uno con tres mediciones de absorbancia.

D) Test de la varianza de la ordenada o termino independiente (a)

El valor de a, intercepcin con el eje de ordenadas u ordenadas en el origen, ndica el error
sistemtico del mtodo. En el caso ideal debe ser cero.

de calibracin en la pestaa Linealidad sistema, Excel calcula la varianza del trmino
independiente con base en la siguiente frmula:

N
X
Sa
2 2
2
b S
=
La desviacin o error estndar del trmino independiente es calculada por Excel con base en
la siguiente frmula:
Sa = (Sa
2
)
1/2

Los lmites de confianza de la ordenada al origen se calculan as:

a = a t Sa

Siendo t el valor de distribucin de Student para n 2 grados de libertad a una probabilidad
de 0.05.

Evaluar los valores para los lmites obtenidos con base en el siguiente criterio: Si estos
lmites incluyen el cero, se cumple la condicin de proporcionalidad.

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Con los datos ingresados para la curva de calibracin, Excel realiza el siguiente test
estadstico para a, el cual consiste en calcular el valor del t de Student experimental t exp
as:
t

exp = a / S
a

Comparar ell valor de t

n 2 grados de libertad a una probabilidad de 95 % (p= 0,05).

Evaluar el resultado obtenido con base en el siguiente crterio: El valor de t tabulado en
las tablas t tablas debe ser mayor que el t exp indicando que el intercepto no es
significativamente diferente de cero.

Tabla de Hiptesis para a:
t exp
a
Sa
t tablas (p=0.05, n-2 gl) *
Limite de confianza Superior
Limite de confianza Inferior
CRITERIO:
t exp < t tablas
Por lo tanto, el intercepto no es significativamente diferente
de cero
* Se sugiere como mnimo 5 puntos de calibracin, cada uno con tres mediciones de absorbancia.

E) Limites de confianza para la recta

de calibracin en la pestaa Linealidad sistema, Excel realiza calcula los lmites de
confianza para la recta de calibracin con base en la siguiente frmula:

/Sxx) X) - (Xi + (1/n * Sxy * t Yi = Y
2 .

Donde, Yi
: Respuesta corregida
Xi: Concentracin terica
X: Promedio de concentraciones
t: t de Student para n1 grados de libertad y un 95% de confianza

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Tabla Lmites de confianza para la recta
Concentracin Lmite Inferior Lmite Superior y (Xi-X)
2

t tabla, n1 gl
Sxy
Sxx
n

6.4.3. Sensibilidad

La sensibilidad indica la capacidad de respuesta de un mtodo analtico a pequeas
variaciones en la concentracin del analito. La sensibilidad entre la seal medida y la
concentracin de analito es igual al valor de la pendiente de la curva de calibracin a una
concentracin determinada.

Nota: El clculo de este atributo solo aplica para mtodos analticos en los cuales se utilice
curva de calibracin para determinar la concentracin del analito.

Para determinar la sensibilidad del mtodo analtico, realizar las siguientes acciones:

Fisicoqumicos HC-01, para el mtodo de inters, abrir la pestaa Rango lineal.
- Ingresar en la Tabla 3, Intervalo de aceptacin para verificacin de curva de
calibracin-Pendiente de curvas la informacin correspondiente al estudio de curvas
de calibracin: nmero de la curva de calibracin, la fecha de realizacin, el coeficiente
de correlacin correspondiente a cada curva y la pendiente respectiva de las curvas de
calibracin elaboradas.
- Despus de ingresados todos los datos requeridos, Excel calcula el valor de la pendiente
promedio de las curvas de calibracin (Sensibilidad), la desviacin estndar de las
pendientes y los lmites de control mximo y mnimo para los valores de pendiente.

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6.4.4. Lmite de deteccin y de cuantificacin

Lmite de Deteccin: Es la concentracin de analito mas baja que puede ser detectada por
un procedimiento analtico dado pero no necesariamente cuantificada con precisin y
exactitud razonable.

Lmite de Cuantificacin: Es la concentracin de analito ms baja que puede ser medida
con una aceptable precisin (repetibilidad) y exactitud por un procedimiento analtico dado.

Existen diversas maneras de determinar el lmite de deteccin, estas pueden ser:

A) Anlisis de blancos de reactivos utilizando los valores de sus seales

Esta metodologa aplica para mtodos analticos que utilizan curva de calibracin, en los
cuales la lectura de la muestra se obtiene por comparacin con un blanco.

Determinar el valor del Lmite de Deteccin del Mtodo con base en las siguientes acciones:

Fisicoqumicos HC-01, para el mtodo de inters, abrir la pestaa Blancos LD LC.
- ingresar la informacin solicitada en la tabla de valores identificada como Tabla 5.1
Anlisis de blancos: En la columna llamada Absorbancia ingresar los valores de las
Absorbancias obtenidas para el blanco de reactivos, ingresar los 12 valores obtenidos
segn el diseo experimental de la validacin (ver numeral 6.3.2).
- Despus de ingresados todos los datos requeridos, Excel calcula el valor de la desviacin
estndar de las absorbancias de los blancos.
- Ingresar el valor de la pendiente de la curva de calibracin utilizada para medir las
absorbancias de los blancos.
- Excel calcula el valor del Lmite de deteccin del mtodo LDM y del Lmite de
cuantificacin del mtodo LCM, utilizando las siguientes frmulas:

LDM = 3 * Sbl / b

Donde: LDM: Lmite de Deteccin del Mtodo
Sbl: Desviacin estndar de las respuestas de los 10 blancos
b: Pendiente de la recta de calibracin utilizada.

LCM = 10 * Sbl / b

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Donde: LDM: Lmite de Deteccin del Mtodo
Sbl: Desviacin estndar de las respuestas de los 10 blancos
b: Pendiente de la recta de calibracin utilizada.

Si el valor del coeficiente de variacin para las seales de los blancos es mayor de 20%,
realizar el clculo del lmite de deteccin como se indica en el inciso c) de este numeral.

Si el valor del coeficiente de variacin para las seales de los blancos est entre 10% y 20%,
verificar experimentalmente los valores calculados para el LDM y para el LCM, preparando
patrones con concentraciones iguales o aproximadas a los valores calculados, analizar por lo
menos 10 fracciones de cada patrn aplicando el mtodo analtico completo.

El valor de concentracin determinado para el LDM se acepta si los resultados
experimentales presentan un coeficiente de variacin CV superior al 10% pero inferior al
20% y un error relativo entre 10% y 20%.

El valor de concentracin determinado para el LCM se acepta si los resultados
experimentales presentan un coeficiente de variacin CV igual o menor al 10% y un error
relativo igual o menor de 10%.

Cuando los resultados experimentales del patrn preparado con una concentracin
equivalente al valor del LDM calculado presentan un coeficiente de variacin mayor del 20%,
calcular el lmite de deteccin como se indica en el inciso C) de este numeral.

B) Anlisis de blancos de reactivos utilizando los valores de sus concentraciones

Esta metodologa aplica para mtodos analticos en los cuales se pueden obtener valores de
concentracin para blancos de reactivos con un nivel de precisin adecuada. Se considera
nivel de precisin adecuada cuando el coeficiente de variacin CV de los datos est entre 10
% y 20 %. Las acciones a realizar para obtener los lmites son las siguientes:

Anlisis de blancos de reactivos utilizando los valores de sus concentraciones:
En la columna llamada Concentracin ingresar los valores de las concentraciones
obtenidas para el blanco de reactivos, ingresar los 12 valores obtenidos segn el diseo
experimental de la validacin (ver numeral 6.3.2).

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- Despus de ingresados todos los datos requeridos, Excel calcula el valor de la desviacin
estndar de las concentraciones de los blancos Scb.
- Excel calcula el valor del Lmite Inferior de Deteccin LID as:

Lmite Inferior de Deteccin (LID) = 3,290 x Scb

- Excel tambin calcula el valor del Lmite Deteccin Instrumental LDI, del Lmite de
Deteccin del Mtodo LDM y del lmite de cuantificacin del mtodo LCM con base en la
siguiente relacin:

LDI : LID : LDM : LCM = 1 : 2 : 4 : 10.

Es decir: LDI = LID / 2
LDM = 2 * LID
LCM = 2,5 * LDM

Verificar experimentalmente los valores calculados para el LDM y para el LCM, preparando
patrones con concentraciones iguales o aproximadas a los valores calculados, analizar por lo
menos 10 fracciones de cada patrn aplicando el mtodo analtico completo.

El valor de concentracin determinado para el LDM se acepta si los resultados
experimentales presentan un coeficiente de variacin CV superior al 10% pero inferior al
20% y con un error relativo entre 10% y 20%.

El valor de concentracin determinado para el LCM se acepta si los resultados
experimentales presentan un coeficiente de variacin CV igual o menor al 10%y un error
relativo igual o menor de 10%.

Cuando los resultados experimentales del patrn preparado con una concentracin
equivalente al valor del LDM calculado presentan un coeficiente de variacin mayor del 20%,
calcular el lmite de deteccin como se indica en el inciso C) de este numeral.

C) Estudio de la menor cantidad detectable

Esta metodologa aplica para aquellos mtodos analticos en los cuales el anlisis de blancos
de reactivos (incisos A y B) presenta coeficientes de variacin CV mayores de 20%. La
metodologa se fundamenta en el anlisis de blancos dopados con el analito de inters y
preparados a la concentracin ms baja que sea posible preparar (puede ser la que
recomiende el mtodo analtico de referencia o la de inters segn normatividad). Las
acciones a realizar para obtener los lmites son las siguientes:

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Estudio de la menor cantidad detectable: En la columna llamada Concentracin
ingresar los valores de las concentraciones obtenidas para el blanco dopado, ingresar la
fecha de realizacin de cada medicin. Ingresar por lo menos 10 valores. Adems
ingresar el valor de la Concentracin estimada del blanco dopado en el ttulo de la tabla.
- Despus de ingresar los datos, Excel calcula el valor promedio de las concentraciones
(Ceb), la desviacin estndar de los datos s y el coeficiente de variacin CV.
- En este punto se pueden presentar las siguientes situaciones:

Si el CV es menor del 10%, preparar un nuevo blanco dopado pero con una concentracin
inferior, realizar su anlisis y evaluar el CV. Realizar disminucin en la concentracin hasta
cuando la evaluacin del CV de los resultados obtenidos se encuentre entre 10% y 20%.
Nota: (El archivo Excel proporciona suficientes tablas de datos para realizar las evaluaciones
del valor de CV)

Si el CV es est entre 10% y 20%, calcular el Lmite de Deteccin del Mtodo como se indica
ms adelante.

Si el CV es mayor del 20%, preparar una nueva solucin de blanco dopado pero
incrementado levemente la concentracin del analito (el incremento se debe poder preparar
fcilmente), analizarlo y nuevamente calcular y evaluar el coeficiente de variacin CV de los
resultados obtenidos. Realizar incrementos en la concentracin hasta cuando la evaluacin
del CV de los resultados obtenidos se encuentre entre 10% y 20%.

- Con la informacin ingresada y una vez definido el valor de CV adecuado, Excel calcula el
Lmite de Deteccin del Mtodo con base en la siguiente frmula:

LDM = Ceb + tn-1 * s

Donde: LDM: Limite de Deteccin Del Mtodo
tn1: t student al 99% de confianza para n1 grado de libertad
s: Desviacin estndar de las concentraciones de los 10 blancos dopados
Ceb: Promedio de las concentraciones del blanco dopado

Nota: El LDM debe ser recalculado cuando se produzca un cambio significativo en el mtodo
analtico o en el equipo utilizado.

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En el Anexo 5 se presentan algunos valores de referencia para realizar el clculo del lmite
de deteccin del mtodo utilizando blancos dopados, tambin se presenta la tabla con los
valores de t student al 99% de confianza.

- Excel tambin calcula el Lmite de Cuantificacin del Mtodo aplicando las siguientes
frmulas:
LCM = 2,5 * LDM o LCM = Ceb + 10 * s

De los dos valores seleccionar el que sea menor.

Verificar experimentalmente el valor calculado para el LCM, preparando un patrn con
concentracin igual o aproximada al valor calculado, analizar por lo menos 10 fracciones de
este patrn aplicando el mtodo analtico completo. El valor de concentracin determinado
para el LCM se acepta si los resultados experimentales presentan un coeficiente de variacin
CV igual o menor al 10% y un error relativo igual o menor a 10%.

Nota 1: Cuando para un mtodo analtico sea posible determinar los lmites de deteccin y
cuantificacin por varios mecanismos, seleccionar los valores ms bajos como lmites
representativos del mtodo.

Nota 2: Para los mtodos de pH y conductividad, no es posible obtener un blanco de
reactivos, por esta razn para el pH no se calcula el LDM. Para la conductividad se realiza la
estimacin del LDM utilizando un agua desionizada preferiblemente con una conductividad
menor de 1 S/cm.

6.4.5. Exactitud

La exactitud del mtodo indica la capacidad del mtodo analtico para dar resultados lo ms
prximos posibles al valor verdadero.

Calcular la exactitud del mtodo utilizando estndares preparados en el laboratorio o
utilizando Material de Referencia Certificado como se indica a continuacin.

La exactitud se puede calcular aplicando alguno de los siguientes mecanismos:

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A) Utilizando patrones preparados en el laboratorio:

- Abrir el archivo Excel Hoja de clculo Validacin de mtodos analticos Fisicoqumicos
HC-01, correspondiente al mtodo de inters y abrir la pestaa Exactitud.
- Ingresar la informacin solicitada en la tabla de valores identificada como Tabla 9.
Exactitud con estndares preparados en el laboratorio la siguiente informacin:
Fecha de anlisis, pendiente y coeficiente de correlacin (si el mtodo involucra curva de
calibracin), resultados del anlisis por duplicado de los Estndares bajo y alto definidos
en el diseo experimental (en las filas llamadas Patrn 1, Patrn 2 respectivamente, si se
utilizan ms patrones se puede utilizar ora fila).
- Despus de ingresados todos los datos requeridos, Excel calcula para cada Estndar el
error relativo y el sesgo con las siguientes frmulas:

Error relativo = (C
exp
C
Terica
) * 100 / C
Terica

Sesgo = C
exp
C
Terica

C
exp
= Concentracin promedio de los resultados obtenidos experimentalmente
para cada solucin patrn.
C
Terica
= Concentracin terica de cada solucin patrn preparada.

- Verificar si los errores calculados cumplen con la meta de exactitud establecida en el
numeral 6.3.3.3. de este procedimiento. Si la meta se cumple en el anlisis de las dos
soluciones patrn, seleccionar como exactitud del mtodo el valor de Error relativo ms
alto obtenido. Si la meta no se cumple en alguna de las soluciones patrn, revisar
clculos y si es necesario repetir los anlisis.

B) Utilizando materiales de referencia certificados

- Abrir el archivo Excel, Hoja de clculo Validacin de mtodos analticos Fisicoqumicos
Datos con Materiales de Referencia Certificados: El valor certificado para el Material
y el valor promedio de los anlisis del Material Certificado realizados en el laboratorio.
Excel calcula el porcentaje de Error Relativo y el Sesgo como se indica en el inciso A) de
este numeral.

Nota: Preparar el Material de Referencia Certificado MRC siguiendo las instrucciones del
fabricante o proveedor.

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- Verificar si el error calculado cumple con la meta de 3establecida en el numeral 6.3.3.3.
de este procedimiento. Si la meta se cumple, definir como Exactitud del mtodo el valor
del Error relativo calculado; si la meta no se cumple, revisar clculos y si es necesario
repetir el anlisis del MRC.

C) Utilizando muestras de ejercicios Interlaboratorio

Este mecanismo solo aplica para aquellos resultados de ejercicios Interlaboratorio para los
cuales se hayan obtenido resultados satisfactorios. El mecanismo es el siguiente:

Datos con patrones certificados: Valor de referencia para cada muestra, el valor
reportado por el laboratorio para cada una de ellas. Excel calcula el porcentaje de Error
Relativo y el Sesgo como se indica en el inciso A) de este numeral.
- Verificar si el error calculado cumple con la meta de exactitud establecida en el numeral
6.6.3.3. de este procedimiento. Si la meta se cumple, definir como Exactitud del mtodo
el valor del Error relativo calculado; si la meta no se cumple, evaluar los resultados
emitidos o evaluar los lmites de aceptacin definidos.

Nota: Cuando para un mtodo analtico sea posible determinar la exactitud por varios
mecanismos, seleccionar como exactitud del mtodo el valor ms alto que cumpla con las
metas establecidas.

D) Utilizando los resultados del porcentaje de recuperacin en muestras adicionadas

En el inciso E) de este numeral se presenta la aplicacin de la prueba estadstica t de
Student para los resultados de porcentaje de recuperacin en muestras adicionadas, con
este mecanismo se establece si la exactitud del mtodo es adecuada o no.

E) Utilizando los resultados del porcentaje de recuperacin de patrones

Verificar el cumplimiento de las metas de aceptacin (error relativo y sesgo) Utilizando los
resultados obtenidos en el anlisis de los patrones preparados en el laboratorio. Seleccionar
el valor relativo mas lato que cumpla las metas establecidas. Los resultados que se utilizan
que se utilizan para tal fin corresponden el resultado promedio, el ms alto y el ms bajo de
los datos repostados.

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Utilizar el Test G de Cochran (test para establecer si existe igualdad de varianza de varios
grupos mustrales del mismo tamao) para determinar si la concentracin de los patrones
tiene alguna influencia en los resultados y en su precisin. Aplicar las siguientes directrices:

HC-01, correspondiente al mtodo de inters, abrir la pestaa Rec patrn Cochran.
- Con los datos ingresados en la tabla Recuperacin de patrones, en la Tabla 2. Datos
para el Test de Cochran aparecen los datos bsicos para calcular el test: desviacin
estndar y la varianza de los resultados de cada grupo de datos.
- Excel calcula el estadstico Gexp como se indica a continuacin:

n
2
3
2
2
2
1
2
max
2
....S + S + S + S
S
= exp G

Donde: S
2
max
:Varianza mxima obtenida entre los grupos de datos de patrones analizados.
S
2
1
: Varianza obtenida para los resultados del primer grupo de datos.
S
2
2
: Varianza obtenida para los resultados del segundo grupo de datos.
S
2
3
: Varianza obtenida para los resultados del tercer grupo de datos.
S
2
n:
Varianza obtenida para los resultados del grupo n de datos.

- Comparar el valor del Gexp con el valor del G de tablas Gtabla y aplicar el siguiente
criterio: Si Gexp. < Gtablas la concentracin del patrn no influye en la variabilidad de los
resultados.

Nota: En el Anexo 6 se presenta la tabla con los valores de G tabla para un nivel de
confianza del 95% (P = 0.05), tener en cuenta los valores de K (nmero de patrones
analizados) y n (nmero de anlisis por cada patrn) para establecer el valor de G tabla.

Tabla de Test de Cochran.
Valor Mximo de Varianza
Sumatoria de las Varianzas
Gexp
G tabla p=0.05, para n, k
CRITERIO G exp < G tabla
Cumple, la concentracin no tiene influencia sobre la
precisin de los resultados, las varianzas son comparables

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6.4.6 Precisin

A) Coeficiente de variacin del mtodo CV

Establecer el coeficiente de variacin del mtodo de inters a travs de las siguientes
acciones:

HC-01, correspondiente al mtodo de inters, abrir la pestaa CV.
- Para cada lote de muestras analizadas, ingresar la siguiente informacin en la Tabla 6.
Coeficiente de variacin: Fecha de anlisis, pendiente y coeficiente de correlacin (si el
mtodo tiene curva de calibracin), en las filas correspondientes los resultados del
anlisis por duplicado de las muestras M1, M2, de las muestras adicionadas M1+A1, M2
+ A2, de los resultados de los estndares E1 y E2, incluir los resultados del MRC si estn
disponibles o los de otro estndar si se analiz.
- Verificar la existencia de datos atpicos (Ver metodologa en el Anexo 7) en la parte
derecha de la Tabla 1. Si existe algn dato atpico eliminarlo para que Excel recalcule (no
olvidar cambiar el valor del estadstico T de referencia para el nuevo nmero de datos).
Registrar los valores determinados como atpicos. Realizar como mximo dos rechazos.
Si existen ms de dos rechazos, es necesario repetir todos los anlisis correspondientes
a la muestra en cuestin.
- Despus de ingresados todos los datos requeridos y haber verificado si existen datos
atpicos, Excel calcula el coeficiente de variacin para cada nivel de concentracin de
muestras y estndares. Comparar los valores obtenidos con los criterios de aceptacin
indicados en el numeral 6.3.3.1 (seleccionar como criterio de aceptacin aquel cuyo valor
sea mayor). Entre los valores de desviacin estndar y/o coeficiente de variacin que
cumplan con el criterio de aceptacin definido, escoger como Coeficiente de variacin del
mtodo el valor correspondiente al coeficiente de variacin ms alto obtenido.

Nota: Antes de hacer oficiales los resultados de coeficiente de variacin, evaluar la
aceptabilidad de las desviaciones estndar en diferentes niveles de concentracin utilizando
la Hoja de Clculo Validar 1.1 HC-02, elaborada por el Doctor SAUL ANTONIO
PEARANDA CANOSA qumico del Instituto Nacional de Salud INS. La cual tiene
proteccin de acceso del registro electrnico especificado en el Listado Maestro de
documentos RA-01.

Los pasos a seguir son los siguientes:

- Abrir la Hoja de Clculo Validar 1.1 HC-02, y a travs de los mens Archivo - Guardar
como crear un archivo para el mtodo analtico de inters.

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- En la Hoja de Clculo Validar 1.1 HC-02, correspondiente al mtodo, abrir la pestaa
MENU DE INICIO.
- Con la ayuda del puntero del mouse (con un solo clic), abrir el hipervnculo llamado 1.
PARAMETROS ESTABLES.
- En la tabla de datos que aparece, ingresar la siguiente informacin: Resultados del
anlisis por duplicado del blanco (filas BK1 y BK2), resultados promedio de los anlisis de
los estndares (filas E 0,9C y E 0,09C), resultados promedio de los anlisis de las
muestras (filas M1 y M2) y de las muestras adicionadas (filas M1 + A1 y M2 + A2)
correspondientes a cada lote analizado; el valor C de la concentracin madre del patrn
utilizado para el adicionado en cada muestra, el valor del volumen v de solucin patrn
adicionado a cada muestra para preparar la muestra adicionada y el valor del volumen V
tomado de cada muestra para preparar cada muestra adicionada (Filas llamadas
Constantes M1 y Constantes M2 ubicadas en la parte superior e inferior de la tabla de
datos). Despus de ingresada la informacin Excel calcula el valor de U (Concentracin
promedio de cada muestra sin adicionar).
- Volver a la pestaa MENU DE INICIO y con el puntero del mouse hacer clic sobre el
hipervnculo llamado 6. ACEPTABILIDAD DE LAS DESVIACIONES ESTANDAR (St < W)
para abrir la hoja de clculo en donde se puede verificar si la meta de precisin definida
en la hoja de clculo se logra para cada muestra (Aparece SI o NO en la fila llamada
St < W). En el caso de que la desviacin estndar de alguna de las muestras aparezca
con un NO, es necesario revisar la metodologa analtica y repetir los ensayos
respectivos.

Utilizar el Test G de Cochran (test para establecer si existe igualdad de varianza de varios
grupos mustrales del mismo tamao) para determinar si la concentracin tiene alguna
influencia en los resultados y en su precisin. Aplicar las siguientes directrices:

HC-01, correspondiente al mtodo de inters, abrir la pestaa CV.
- Con los datos ingresados en la Tabla 6 de la pestaa Cv, Excel calcula el estadstico
Gexp y lo presenta en la Tabla Test de Cochran, all tambin aparecen los datos
bsicos para calcular el test: Sumatoria de varianzas y valor mximo de varianza.
- Excel calcula el estadstico Gexp como se indica a continuacin:

n
2
3
2
2
2
1
2
max
2
....S + S + S + S
S
= exp G

Donde: S
2
max
:Varianza mxima obtenida entre las muestras analizadas.
S
2
1
: Varianza obtenida para los resultados de la primera muestra.

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S
2
2
: Varianza obtenida para los resultados de la segunda muestra.
S
2
3
: Varianza obtenida para los resultados de la tercera muestra.
S
2
n:
Varianza obtenida para los resultados de la muestra n.

- Comparar el valor del Gexp con el valor del G de tablas Gtabla y aplicar el siguiente
criterio: Si Gexp. < Gtablas el factor de concentracin no influye en la variabilidad de los
resultados.

Nota: En el Anexo 6 se presenta la tabla con los valores de G tabla para un nivel de
confianza del 95% (P = 0.05), tener en cuenta los valores de K (nmero de muestras
analizadas) y n (nmero de anlisis por muestra) para establecer el valor de G tabla. Para el
diseo experimental indicado en el numeral 6.3.2., el valor de K es 7 y el valor de n es 6 sin
considerar el MRC, considerando MRC el valor de K es 8 y el de n es 6.

Tabla de Test de Cochran.
PARMETRO ESTADSTICO Valor Obtenido
Valor Mximo de Varianza
Sumatoria de las Varianzas
Gexp
G tabla p=0.05, para n, k
CRITERIO G exp < G tabla
Cumple, la concentracin no tiene influencia sobre la
precisin de los resultados, las varianzas son
comparables

B) Rango relativo entre duplicados RRD

Este atributo permite establecer un mecanismo de control para las mediciones por duplicado
realizadas sobre una muestra. En los anlisis de rutina el valor del RRD calculado no debe
exceder el valor del lmite mximo del RRD determinado durante la validacin del mtodo,
para determinar el valor de este lmite seguir las siguientes instrucciones:

HC-01, correspondiente al mtodo de inters.
- Ubicarse en la pestaa Muestras RRD,ADIC.
- Para cada lote de muestras analizadas, ingresar la siguiente informacin en la Tabla 7
Clculo lmite superior RRD: Fecha de anlisis, pendiente y coeficiente de correlacin
(si el mtodo tiene curva de calibracin), en las filas correspondientes los resultados del
anlisis por duplicado de los blancos BK, de las muestras M1, M2, de las muestras
adicionadas M1+A1, M2 + A2, de los resultados de los estndares E1 y E2 (Si se analiza

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un tercer estndar, incluirlo). No incluir las parejas de muestras que involucren un valor
como atpico.
- Despus de ingresados todos los datos requeridos, Excel calcula el valor relativo del
rango entre duplicados para cada pareja de muestras. Adems calcula el Rango relativo
promedio para cada nivel de concentracin y el Lmite de control alto (LCA) para el Rango
Relativo entre Duplicados RRD. Para realizar estos clculos se utilizan las siguientes
frmulas:
( ) 2 / X X
X - X
= RRD
2 1
2 1
+

Donde I X
1
- X
2
I significa valor absoluto de la resta entre X
1
y X
2
.

n
RRD RRD RRD
n
...
= Rp
2 1
+ +

Donde Rp es el valor promedio de RRD y n es el nmero de valores.

LCA = 3,27 * (Rp)

Donde LCA es el lmite de control para el rango relativo entre duplicados.

- Seleccionar como lmite mximo para el Rango Relativo entre Duplicados del mtodo el
mayor valor obtenido de dicho lmite calculado para cada nivel de concentracin de
muestras.

6.4.7. Recuperacin de muestras adicionadas

A) Preparacin de las muestras adicionadas

- Para cada nivel de concentracin de muestra, adicionar v mL de una solucin madre de
un estndar de concentracin conocida SM a un volumen V mL de la muestra de una
concentracin CM, de manera que la concentracin del analito de inters en dicha
muestra se incremente a un valor prefijado no mayor de 0,9C (C es la concentracin
mxima dentro del rango de aplicacin del mtodo establecido en las actividades
preliminares de la validacin). El volumen v no debe ser mayor de 0,05*V.

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Nota: Preparar suficiente volumen de muestra adicionada (V + v) para todo el proceso de
validacin.

Nota: Los valores de v, V y de SM deben ser tales que la concentracin del analito en la
solucin de muestra adicionada C
MA
(Muestra + Adicin) debe ser equivalente a la
concentracin de la muestra C
M
ms un incremento del 20% al 40% de su valor, es decir
C
MA
= C
M
+ 0,2* C
M
hasta C
MA
= C
M
+ 0,4* C
M.

Nota: Para cada nivel de concentracin de las muestras, se sugiere adicionarla de la
siguiente manera:
C
MAbaja
= C
Mbaja
+ (0,2 a 0,3)* C
Mbaja
= C
Mbaja
+ A1

C
MAalta
= C
Malta
+ (0,3 a 0,4)* C
Malta
= C
Malta
+ A2

Las siguientes relaciones pueden ser de utilidad para estimar el valor de alguna variable de
inters (normalmente la variable desconocida es SM):

v*SM + V* C
Mbaja
= (v + V) * [ C
Mbaja
+ (0,2 a 0,3) * C
Mbaja
]

v*SM + V* C
Malta
= (v + V) * [ C
Malta
+ (0,3 a 0,4) * C
Malta
]

- Analizar las muestras adicionadas por duplicado teniendo en cuenta el diseo
experimental (Ver numeral 6.3.2.).

B) Clculos con los resultados de las muestras adicionadas

- Ubicarse en la pestaa Muestras RRD, ADIC.
- Para cada lote de muestras adicionadas analizadas, ingresar la siguiente informacin en
la Tabla 8. Datos experimentales con muestras adicionadas: Fecha de anlisis,
pendiente y coeficiente de correlacin (si el mtodo involucra curva de calibracin),
resultados del anlisis por duplicado de las muestras M1 y M2 adicionadas (en las filas
llamadas Muestra M1 + A1 (C
MA
) y Muestra M2 + A2 (C
MA
) respectivamente). No incluir
las parejas de muestras que involucren un valor como atpico.
- Ingresar los valores requeridos en las tablas Adicin muestra M1 y Adicin muestra
M2.
- Despus de ingresados todos los datos requeridos, Excel calcula para cada nivel de
concentracin de muestra el porcentaje de recuperacin promedio, el rango del

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porcentaje de recuperacin y la desviacin estndar de los porcentajes de recuperacin.
Estos clculos se realizan con base en las siguientes frmulas:

100
C
C C
%R
A
M MA
=

Donde: %R = Porcentaje de recuperacin
C
M
= Concentracin promedio de la muestra no adicionada
C
MA
= Medida de la concentracin del analito en la muestra adicionada
C
A
= Recuperacin esperada, la cual se calcula as:

v V
) C (SM * v
C
M
A
+
=

Donde: C
A
= Concentracin esperada
v = Volumen tomado del patrn para adicionar
V = Volumen tomado de muestra a ser adicionada
SM = Concentracin de la solucin madre del patrn
C
M
= Concentracin promedio de la muestra que va a ser adicionada

n
%Ri ... %R2 %R1
%
+ +
= Rm

Donde: % Rm = Porcentaje de recuperacin promedio

Para establecer si el % Rm cumple con las metas propuestas (Ver numeral 6.3.3.2 y el
Anexo 3), utilizar la Hoja de Clculo Validar 1.1 HC-02 elaborada por el Doctor SAUL
ANTONIO PEARANDA CANOSA qumico del Instituto Nacional de Salud INS, la Hoja de
Clculo Validar 1.1 HC-02, (La cual tiene proteccin de acceso del registro electrnico
especificado en el Listado Maestro de documentos RA-01), aplicando las siguientes
instrucciones:

- Abrir la Hoja de Clculo Validar 1.1 HC-02 y a travs de los mens Archivo - Guardar
como crear un archivo para el mtodo analtico de inters.
- En la Hoja de Clculo Validar 1.1 HC-02 correspondiente al mtodo, abrir la pestaa
MENU DE INICIO.
- Con la ayuda del puntero del mouse (con un solo clic), abrir el hipervnculo llamado 1.
PARAMETROS ESTABLES.

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- En la tabla de datos que aparece, ingresar la siguiente informacin: Resultados promedio
de los anlisis de las muestras (filas M1 y M2) y de las muestras adicionadas (filas M1 +
A1 y M2 + A2) correspondientes a cada lote analizado; el valor C de la concentracin
madre del patrn utilizado para el adicionado en cada muestra, el valor del volumen v de
solucin patrn adicionado a cada muestra y el valor del volumen V tomado de cada
muestra para ser adicionado (filas llamadas Constantes M1 y Constantes M2 ubicadas
en la parte superior e inferior de la tabla de datos). Despus de ingresada la informacin
Excel calcula el valor de U (Concentracin promedio de cada muestra sin adicionar).
- Volver a la pestaa MENU DE INICIO y con el puntero del mouse hacer clic sobre los
botones llamados R1/d1 y R2/d2 para establecer si las recuperaciones fueron
satisfactoria o no. Si los resultados no son satisfactorios, revisar los clculos y si es
necesario repetir los anlisis de las muestras adicionadas.
- Si para las dos muestras adicionadas se obtiene RECUPERACIN SATISFACTORIA,
expresar el porcentaje de recuperacin del mtodo analtico como el promedio de los
dos porcentajes de recuperacin.

Con la informacin obtenida en la Tabla 8. Datos experimentales con muestras
adicionadas Incluida en la pestaa Muestras adicionadas de la hoja de clculo Validacin
de mtodos analticos, establecer con los resultados de las dos muestras adicionadas el
rango de valores de porcentaje de recuperacin (es decir establecer el valor mximo y el
valor mnimo de porcentaje de recuperacin) que cumple con el criterio de aceptacin
indicado en el Anexo 3.

Nota 1: El clculo del porcentaje de recuperacin de muestras adicionadas no aplica para
aquellos mtodos en los cuales el mensurando es un conjunto de sustancias, su medicin
depende de varios factores simultneos y obtener un patrn que represente una
concentracin especfica es complejo o imposible, por ejemplo pH, conductividad, DBO
5
, etc.

6.4.8. Estndar de control del mtodo y lmites iniciales para su carta de control

Con los resultados de anlisis de patrones (E
bajo
y E
alto
) preparados en el laboratorio (ver
numeral 6.4.2) o con estndar definido como estndar de control, realizar las siguientes
acciones:

- Ubicarse en la pestaa Lmites CC.
- En la Tabla 1. Datos de patrones analizados, ingresar la siguiente informacin:

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Frente a las celdas llamadas Conc. terica Ct ingresar las concentraciones
tericas de los patrones de concentracin baja y alta respectivamente.
En la columna Fecha ingresar las fechas en que se realizaron los anlisis.
En las columnas Valor 1 y Valor 2 ingresar los resultados correspondientes al
anlisis de los duplicados de los estndares de concentracin baja y alta.

- Despus de ingresados todos los resultados, Excel calcula los atributos definidos en las
Tabla 2. Lmites iniciales para la carta de control, Tabla 3. Coeficiente de variacin y
Tabla 4. Porcentaje de recuperacin promedio de patrones. Los valores de la Tabla 4 se
pueden utilizar como criterios para una grfica de control de calidad. Desplegar el men
Archivo y seleccionar el men Guardar.

- Seleccionar convenientemente como Estndar de control del mtodo, el estndar cuya
concentracin represente mejor el rango de concentraciones que se manejan
rutinariamente en el laboratorio o aquel cuyos resultados presenten un mayor coeficiente
de variacin. Los lmites determinados para el estndar seleccionado sern los Lmites
iniciales para la carta de control del mtodo.

Nota: Si el mtodo de referencia propone un estndar de control, este se debe analizar
dentro del proceso de validacin para establecer los lmites iniciales para su carta de control.

6.5. REGISTRO DE LOS RESULTADOS DE LA VALIDACIN

Registrar los resultados de la validacin de los mtodos en el Formato atributos de los
mtodos validados RO-09.

6.6. VERIFICACIONES DE LA VALIDACIN

Cuando se presente un cambio que pueda afectar la idoneidad del mtodo analtico
establecido por la validacin se proceder hacer una verificacin de la validacin, con el fin
de establecer si se mantienen los atributos inciales del mtodo (con respecto a propiedad
medida, matriz, rango, equipos utilizados, repetibilidad, etc.). Este estudio ser
fundamentado en un diseo experimental el cual se planteara cuando esta situacin se
presente. Si se comprueba que las variaciones con respecto a los atributos inciales son
significativos ser necesario volver a validar el mtodo para considerar las condiciones
actuales de trabajo. Lo anterior se aplicara si existen cambios reales o posibles en su
ejecucin, de acuerdo a los siguientes casos:

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- Con Cambios esperados como la sustitucin de lotes de reactivos, la modificacin del
tamao de la muestra (por slo citar algunos ejemplos) y no se puede demostrar que
sistema analtico permanece bajo control tras los cambios a travs de grficos de
control o herramientas equivalentes.

- Si un mtodo deja de utilizarse durante un perodo prolongado (mayor a un ao) se
requerir una demostracin del desempeo del mtodo antes de utilizarlo nuevamente
con fines rutinarios.

- Si existen cambios significativos como la sustitucin de equipos, cambios de personal,
cambios de formulas, cambios de las condiciones ambientales de trabajo o cambios
en el alcance (aplicacin a matrices que no se especifican o rangos de muestras
ensayadas no contempladas en la validacin inicial).

7. FORMATOS RELACIONADOS

- Formato atributos de los mtodos validados RO-09.
- Hoja de clculo validacin de mtodos fisicoqumicos, HC-01.
- Hoja de clculo validar 1.1. HC-02.
- Listado Maestro de documentos RA-01.

8. ANEXOS

ANEXO 1.Directrices especificas para la validacin de la Demanda Bioqumica de Oxgeno.
ANEXO 2.Directrices especificas para la validacin de grasas y aceites.
ANEXO 3.Descripcin de la hoja de clculo VALIDAR 1.1 del Instituto Nacional de Salud.
ANEXO 4. Valores de la distribucin t para un nivel de confianza del 95 %.
ANEXO 5. Clculo del lmite de deteccin del mtodo con blancos dopados.
ANEXO 6. Tabla de datos para el estadstico G (Test de Cochran).
ANEXO 7. Rechazo de datos atpicos.

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ANEXO 1.
DIRECTRICES ESPECFICAS PARA LA ESTANDARIZACIN DE LA DEMANDA BIOQUMICA DE
OXGENO.

- Preparar blancos con el agua de dilucin aireada sin inculo y con inculo.
- Analizar 10 fracciones de cada blanco en un mismo da.
- Calcular la desviacin estndar, el coeficiente de variacin, el LDM y el LCM.
- Analizar 10 fracciones del patrn de 1 mg O
2
/L (Estndar E1) sin inculo y con 2 ml de
inculo en un mismo da, obtenido por dilucin de una solucin madre. Se prepara
tomando 10 mL del estndar de control y aforar a 2000 mL con agua destilada.
- Analizar 10 fracciones del patrn de 50 mg O
2
/L (Estndar E2) sin inculo y con 2 ml de
inculo en un mismo da, Se prepara pesando 37,5 mg de cido glutmico y 37,5 de
Glucosa, disolver en agua destilada y aforar a 1 Litro (baln volumtrico clase A) con
agua destilada.
- Calcular la desviacin estndar el coeficiente de variacin y el porcentaje (%) de error
relativo.
- Teniendo en cuenta que las muestras cambian durante el tiempo de su almacenamiento,
la estandarizacin de la DBO
5
no se puede realizar durante un periodo de 6 das, por lo
tanto se deben analizar dos muestras naturales con valores de DBO
5
frecuentes en el
laboratorio. Analizar mnimo 10 fracciones de cada muestra seleccionada sin inculo y
con inculo (2 mL) en un mismo da y determinar los siguientes atributos del mtodo:
Promedio de la DBO
5
, desviacin estndar y el coeficiente de variacin de los resultados.
- Preparar en el laboratorio el estndar de control as: Disolver 150 mg de glucosa y 150
mg de Acido Glutmico en agua destilada y diluir a 1L. Analizar mnimo 10 fracciones del
patrn preparado sin inculo y con inculo en un mismo da, determinar los siguientes
atributos del mtodo: Promedio de la DBO
5
, desviacin estndar y el coeficiente de
variacin de los resultados.
- Analizar mnimo 10 fracciones de un material de referencia certificado (si est disponible)
sin inculo y con inculo en un mismo da y determinar los siguientes atributos del
mtodo: Promedio de la DBO
5
, desviacin estndar, exactitud y el coeficiente de variacin
de los resultados.
- A travs del anlisis de agua de dilucin y del patrn de 1 mg O
2
/L establecer como LDM
y LCM del mtodo el valor ms bajo obtenido para estos atributos y para los cuales se
cumple el criterio de precisin establecido para el mtodo.
- A travs del anlisis de las dos muestras de agua natural establecer como Coeficiente de
variacin del mtodo el valor ms alto obtenido para este atributo y que sea menor que el
criterio establecido (Ver Standard Methods), el criterio establecido est expresado como
desviacin estndar, por lo tanto los resultados experimentales primero se calculan en

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desviacin estndar, se comparan con el criterio y los que cumplan se convierten a
coeficiente de variacin para expresar la precisin del mtodo.
- A travs del anlisis de los estndares preparados en el laboratorio, establecer como
exactitud estimada del mtodo el valor ms alto obtenido para el porcentaje (%) de error
relativo y que sea menor que el criterio establecido (Ver Standard Methods).
- A travs del anlisis del Material de Referencia Certificado establecer como exactitud del
mtodo el valor ms alto obtenido para el porcentaje (%) de error relativo y que sea
menor que el criterio establecido (Ver Standard Methods). Tambin se puede determinar
el porcentaje (%) error relativo del mtodo a partir del porcentaje (%) de error relativo
obtenido en el ejercicio Interlaboratorio ms reciente y para el cual se hayan obtenido
resultados satisfactorios.

Nota: Antes de realizar los clculos estadsticos para obtener los atributos del mtodo,
realizar una prueba de datos atpicos; realizar como mximo dos rechazos.

Preparacin de las muestras naturales:

Preparar 500 ml de las muestras naturales con valores de DBO dentro del rango normal de
trabajo en el laboratorio, una baja y otra alta. Mantener refrigeradas las muestras a 4 C y
sembrar antes de 24 horas.

Preparacin de los patrones:

Prepararlos el mismo da que se va a realizar la siembra. Volumen de siembra: 6 ml de la
solucin de Glucosa Acido Glutmico.

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ANEXO 2. DIRECTRICES ESPECFICAS PARA LA ESTANDARIZACIN DE GRASAS Y ACEITES

- Preparar en recipientes volumtricos diferentes 12 soluciones de concentracin baja
(aproximadamente de 1 mg cido esterico/L) disolviendo el cido esterico en un volumen
pequeo de Hexano o ter de petrleo y aforar con agua destilada.
- Analizar las 12 soluciones en un mismo da.
- Preparar en recipientes volumtricos diferentes 12 soluciones patrn con una concentracin
aproximada a 0,09*C mg cido esterico/L.
- Analizar las 12 soluciones del patrn en un mismo da.
- Calcular la desviacin estndar, el coeficiente de variacin y el % error relativo.
- Preparar en recipientes volumtricos diferentes 12 soluciones patrn con una concentracin
aproximada a 0,9*C mg cido esterico/L.
- Analizar las 12 soluciones del patrn en un mismo da.
- Calcular la desviacin estndar, el coeficiente de variacin y el % error relativo.
- Recolectar, homogenizar y generar 12 fracciones de una muestra rutinaria M1 de
concentracin baja y 12 fracciones de una muestra rutinaria M2 de concentracin alta.
- Analizar las 12 fracciones de cada una de las muestras en un mismo da.
- Calcular la desviacin estndar, el coeficiente de variacin.
- A travs del anlisis del patrn de 1 mg/L establecer como LDM y LCM del mtodo
considerando si se cumple el criterio de precisin establecido para el mtodo. Si no se
cumple el criterio, incrementar la concentracin del patrn hasta cuando se cumpla el criterio
de precisin.
- A travs del anlisis de las dos muestras rutinarias establecer como Coeficiente de variacin
del mtodo el valor ms alto obtenido para este atributo y que sea menor que el criterio
establecido para error aleatorio, el criterio establecido est expresado como desviacin
estndar, por lo tanto para los resultados experimentales la precisin primero se calcula como
desviacin estndar luego se compara con el criterio y los valores de precisin que cumplan
se convierten a coeficiente de variacin para expresar la precisin del mtodo.
- A travs del anlisis de los estndares preparados en el laboratorio, establecer como
exactitud estimada del mtodo el valor ms alto obtenido para el % de error relativo y que sea
menor que el criterio establecido para el error sistemtico.
- A travs del anlisis del Material de Referencia Certificado establecer como exactitud del
mtodo el valor ms alto obtenido para el % de error relativo y que sea menor que el criterio
establecido para el error sistemtico. Tambin se puede determinar el % error relativo del
mtodo a partir del % error relativo obtenido en el ejercicio Interlaboratorio ms reciente y
para el cual se hayan obtenido resultados satisfactorios.
Nota: Antes de realizar los clculos estadsticos para obtener los atributos del mtodo, realizar
una prueba de datos atpicos; realizar como mximo dos rechazos.

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ANEXO 3
DESCRIPCIN DE LA HOJA DE CLCULO VALIDACIN 1.1 DEL INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

Desarrollo GRUPO DE SALUD AMBIENTAL-INS (Colombia)
Fundamento estadstico: Anlisis de varianza (ANOVA).
Fundamento
Tcnica estadstica usada para separar y calcular la variacin
debida a los errores aleatorios de la medicin de la variacin
causada por cualquier otro factor que podra introducir cambios en la
medida de la concentracin de la muestra.
Normas nacionales e
internacionales en que se
apoyan.
NTC-ISO 5725, parte 2;
NTC-ISO 3534
Otras: IEC,OIML,IUPAP
Equipo humano que intervino
en el desarrollo.
Saul Antonio Pearanda Canosa - GRSA-INS
Software utilizado como
plataforma para el desarrollo
y para la ejecucin de la
aplicacin.
MS-WINDOWS
Hoja electrnica EXCEL

El validar 1.1 asume: S
t
2
= S
d
2
+ S
e
2
, se cumple para S
d
2
= 0, y, S
e
2
= 0. Por lo tanto en el
validar 1.1 se puede ver que el error entre los lotes es mayor que el error dentro del lote,
para todos los niveles de concentracin exceptuando el blanco estadsticamente esto
significa:
Varianza dentro del lote < Varianza entre los lotes

Para que se cumpla en el validar 1.1: S
t
2
= S
d
2
+ S
e
2
, en todos los niveles de concentracin
se debe cumplir: S
d
2
= 0 y S
d
2
sea un mnimo.

Con este requerimiento matemtico se empieza a buscar un valor critico (W): a una cola,
a un nivel de confianza de 95% con un error tipo I de 0.05

El validar calcula el nmero de replicas necesarias para detectar alguna diferencia
predeterminada entre dos medias basadas en el estadstico de prueba F y se cumple:
2
2
05 . 0
W
S
F
t
>

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El validar 1.1 asume 1
05 . 0
~ F para todos los niveles de concentracin a excepcin del
blanco (ver TABLA DE DATOS), por lo tanto:

2
2
1
W
S
t
> que es lo mismo que 1
2
2
<
W
S
t

Despejando tenemos:
2 2
W S
t
< es decir: W S
t
<

Esto implica que en la prctica analtica todos los valores de St son menores que los valores
fijados como meta (W). Si los valores de St no son mayores que el valor fijado como meta,
entonces se ha obtenido la precisin requerida, designada como W y no se necesitan ms
clculos. Si los valores de St son mayores que los valores fijados como meta, antes de
comprobar si las desviaciones estndares totales son aceptables, es necesario obtener el
valor de la prueba F (para v1, v2 grados de libertad y 0.05 de error tipo I).

Para evaluar el porcentaje de recuperacin de muestras adicionadas, es necesario demostrar
que el promedio de recuperacin R, no difiere significativamente (con un nivel de
probabilidad de 0.05) del 95-105 % de la recuperacin esperada d. La recuperacin
promedio R es aceptable s:
0.95 s R/d s 1.05

La recuperacin tambin es aceptable si R se encuentra dentro del siguiente intervalo:

R = 0.95 * d s * tm-1 / m
1/2
(para valores de R/d < 0.95)

R = 1.05 * d + s * tm-1 / m
1/2
(para valores de R/d > 1.05)

tm-1 es la t estadstica de doble cola (bilateral) a un nivel de probabilidad de 0.10 y m1
grados de libertad. Aqu m (nmero de lotes) = 6 y tm-1 = 2.01.

Donde s se calcula con base en el siguiente diagrama:

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De acuerdo al programa validar 1.1. se hace el clculo de la recuperacin del adicionado en
las muestras 1 y 2 usando el esquema estadstico propuesto de doble cola ( bilateral).

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ANEXO 4
VALORES DE LA DISTRIBUCIN T PARA UN NIVEL DE CONFIANZA DEL 95 %

gl 95%
1 12,71
2 4,3
3 3,18
4 2,78
5 2,57
6 2,45
7 2,36
8 2,31
9 2,26
10 2,23
11 2,2
12 2,18
13 2,16
14 2,14
15 2,13
16 2,12
17 2,11
18 2,1
19 2,09
20 2,09
21 2,08
22 2,07
23 2,07
24 2,06
25 2,06
26 2,06
27 2,05
28 2,05
29 2,05
30 2,04
gl: grados de libertad

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ANEXO 5
CLCULO DEL LMITE DE DETECCIN DEL MTODO CON BLANCOS DOPADOS

Preparar una solucin con una concentracin aproximada a la sugerida a continuacin (en
algunos casos la concentracin deseada de la solucin no se puede obtener por clculo, es
necesario establecerla por prueba y error):

- Conductividad: Calcular el LDM con base en los resultados de la medicin de agua
Tipo I producida o adquirida por el laboratorio.
- Slidos Suspendidos Totales: Calcular el LDM con base en los resultados de la
medicin de una solucin patrn de 5 mg de Caolin usp/L.
- Slidos Totales: Calcular el LDM con base en los resultados de la medicin de una
solucin patrn de 5 mg/L de Caolin usp y Cloruro de sodio.
- Slidos Disueltos: Calcular el LDM con base en los resultados de la medicin de una
solucin patrn de 5 mg/L de Cloruro de sodio.
- Demanda qumica de oxgeno: Calcular el LDM con base en los resultados de la
medicin de soluciones patrn con una DQO de 5 a 10 mg O
2
/L preparada por dilucin
del estndar de 500 mg O
2
/L (preparada con Hidrgeno ftalato de potasio).
- Demanda Bioqumica de Oxgeno: Calcular el LDM con base en los resultados de la
medicin de una solucin patrn con una DBO de 1 mg O
2
/L preparada por dilucin de
la solucin estndar de control glucosa-cido glutmico de (150 mg de Glucosa y 150
mg de Acido Glutmico y disolver en un litro de agua destilada) o con base en la
medicin de la DBO
5
del agua de dilucin, el que cumpla con los criterios de precisin
establecidos para el mtodo.
- Grasas y aceites: Calcular el LDM con base en los resultados de la medicin de un
patrn de 1 mg/L preparado as: 1 mg de cido esterico, disolverlo en Hexano o ter
de petrleo y aforar a 1000 mL con agua destilada. Mantener esta solucin en
recipiente de vidrio bien tapado a temperatura ambiente y protegido de la luz. Puede
ser necesario calentar la solucin para solubilizar el cido esterico.
- Acidez: Calcular el LDM con base en los resultados de la medicin de una solucin
patrn de Hidrgeno ftalato de potasio (Potassium hydrogene phthalate) equivalente a
una acidez de 1 mg Carbonato de Calcio /L.
- Alcalinidad total: Calcular el LDM con base en los resultados de la medicin de una
solucin patrn de Carbonato de sodio o de Tris(Hidroximetil)-amino metano
equivalente a una Alcalinidad de 1 mg Carbonato de calcio/L.
- Cloruros: Calcular el LDM con base en los resultados de la medicin de una solucin
patrn de 1 mg Cl
-
/L preparado con cloruro de sodio.
- Dureza total: Calcular el LCM con base en los resultados de la medicin de una
solucin patrn de Calcio (obtenida a partir de una solucin acidificada de Carbonato
de Calcio o por dilucin de una solucin estndar de calcio) equivalente a una dureza

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de 1 mg/L de carbonato de calcio.
- Dureza clcica: Calcular el LCM con base en los resultados de la medicin de una
solucin patrn de Calcio equivalente a una dureza de 1 mg/L de carbonato de calcio.
- Hierro: Calcular el LCM con base en los resultados de la medicin de una solucin
patrn de 0.1 mg Fe/L preparado por dilucin a partir de una solucin madre.
- Sulfatos: Calcular el LCM con base en los resultados de la medicin de una solucin
patrn de 0.5 mg SO
4
=
/L preparado por dilucin a partir de una solucin madre.
- Color: Calcular el LCM con base en los resultados de la medicin de agua Tipo I
preparada en el laboratorio o adquirida y filtrada a travs de membrana de 0.2 micras.
- Turbiedad: Calcular el LCM con base en los resultados de la medicin de agua Tipo I
preparada en el laboratorio o adquirida.
- Nitritos: Calcular el LCM con base en los resultados de la medicin de una solucin
patrn de 0.002 mg NO
2-
/L preparado por dilucin a partir de una solucin madre.
- Nitratos: Calcular el LCM con base en los resultados de la medicin de una solucin
patrn de 0.01 mg NO
3-
/L preparado por dilucin a partir de una solucin madre

Tabla 1. Valores de la distribucin t de student para un 99 % de confianza

gl 99% gl 99%
1 31,82 20 2,53
2 6,96 21 2,52
3 4,54 22 2,51
4 3,75 23 2,50
5 3,36 24 2,49
6 3,14 25 2,48
7 3,00 26 2,48
8 2,90 27 2,47
9 2,82 28 2,47
10 2,76 29 2,46
11 2,72 30 2,46
12 2,68 40 2,42
13 2,65 50 2,40
14 2,62 60 2,39
15 2,60 70 2,38
16 2,58 80 2,37
17 2,57 90 2,37
18 2,55 100 2,36
19 2,54 2,33
gl: grados de libertad

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ANEXO 6
TABLA DE DATOS PARA EL ESTADSTICO G (TEST DE COCHRAN)

Tabled are critical values for the ratio of the largest of independent estimates of a variance, each
based on observations, to the sum of the estimates of the variances. Normality of the observations
is assumed. The null hypothesis is that all variances are the same; the test for equality of variances
is Cochran's test. The column headings are the values of .

Critical values for Cochran's test
Upper 0.05 significance level critical values
d f
N 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 17 37 145

K
2 .9985 .9750 .9392 .9057 .8772 .8534 .8332 .8159 .8010 .7880 .7341 .6602 .5813 .5000
3 .9669 .8709 .7977 .7457 .7071 .6771 .6530 .6333 .6167 .6025 .5466 .4748 .4031 .3333
4 .9065 .7679 .6841 .6287 .5895 .5598 .5365 .5175 .5017 .4884 .4366 .3720 .3093 .2500
5 .8412 .6838 .5981 .5441 .5065 .4783 .4564 .4387 .4241 .4118 .3645 .3066 .2513 .2000
6 .7808 .6161 .5321 .4803 .4447 .4184 .3980 .3817 .3682 .3568 .3135 .2612 .2119 .1667
7 .7271 .5612 .4800 .4307 .3974 .3726 .3535 .3384 .3259 .3154 .2756 .2278 .1833 .1429
8 .6798 .5157 .4377 .3910 .3595 .3362 .3185 .3043 .2926 .2862 .2462 .2022 .1616 .1250
9 .6385 .4775 .4027 .3584 .3286 .3067 .2901 .2768 .2659 .2568 .2226 .1820 .1446 .1111
10 .6020 .4450 .3733 .3311 .3029 .2823 .2666 .2541 .2439 .2353 .2032 .1655 .1308 .1000
12 .5410 .3924 .3264 .2880 .2624 .2439 .2299 .2187 .2098 .2020 .1737 .1403 .1100 .0833
15 .4709 .3346 .2758 .2419 .2195 .2034 .1911 .1815 .1736 .1671 .1429 .1144 .0889 .0667
20 .3894 .2705 .2205 .1921 .1735 .1602 .1501 .1422 .1357 .1303 .1108 .0879 .0675 .0500
24 .3434 .2354 .1907 .1656 .1493 .1374 .1286 .1216 .1160 .1113 .0942 .0743 .0567 .0417
30 .2929 .1980 .1593 .1377 .1237 .1137 .1061 .1002 .0958 .0921 .0771 .0604 .0457 .0333
40 .2370 .1576 .1259 .1082 .0968 .0887 .0827 .0780 .0745 .0713 .0595 .0462 .0347 .0250
60 .1737 .1131 .0895 .0765 .0682 .0623 .0583 .0552 .0520 .0497 .0411 .0316 .0234 .0167
120 .0998 .0632 .0495 .0419 .0371 .0337 .0312 .0292 .0279 .0266 .0218 .0165 .0120 .0083
.0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000

CODIGO PO-04
VERSION 01
FECHA 21/05/2011
Pgina 44 de 44

ANEXO 7
RECHAZO DE DATOS ATPICOS

Para cada serie de datos obtenidos, calcular el estadstico T para los valores extremos de
cada grupo (valor mximo y mnimo) de la siguiente manera:

- Calcular el valor promedio x
prom
y la desviacin estndar s.
- Calcular el estadstico T as:

T
alto
= (x
alto
x
prom
)/s para el valor alto;
T
bajo
= (x
prom
x
bajo
)/s para el valor bajo

- Si el valor de T calculado es mayor que el valor de T
crit
(Ver Tabla 1), el dato se rechaza.
De acuerdo con el tamao pequeo de las poblaciones que se van a manejar, se pueden
rechazar como mximo dos datos; si la aplicacin del criterio de rechazo da positiva para
ms de dos datos, el ensayo debe repetirse.

Tabla 1. Valores crticos del estadstico T para rechazo de datos

n 95% 99% n 95% 99%
3 1,15 1,15 19 2,53 ---
4 1,46 1,49 20 2,56 2,88
5 1,67 1.75 21 2,58 ---
6 1,82 1,94 22 2,6 ---
7 1,94 2,10 23 2,62 ---
8 2,03 2,22 24 2,64 ---
9 2,11 2,32 25 2,66 ---
10 2,18 2,41 26 2,67 ---
11 2,24 --- 27 2,69 ---
12 2,29 2,55 28 2,71 ---
13 2,33 --- 29 2,72 ---
14 2,37 2,76 30 2,74 3,10
15 2,41 2,71 40 2,87 3,24
16 2,44 2,75 50 2,96 3,34
17 2,47 --- 60 3,03 3,41
18 2,50 2,82 100 3,21 3,60
n: Nmero de medidas

Con los datos no rechazados se realiza el clculo de los atributos.

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