Isolation(culture)

Agarplate/
colonies
Liquidmediatest
tubebulk
Identication&taxonomy
Family
Genus
Species
Type
Strain

Biochemical(physiological)tests
Moleculartests
DNADNAhomology
16SrRNAsequencing
Chemicalproling
Nonculturebaseddetection
Polymerasechainreaction(PCR)
Agglutination(antigendetection)
Stain
Serology(antibodydetection)

 Familia:grupodegnerosrelacionados.
Gnero:grupodeespeciesrelacionadas.
Especies:grupodecepasrelacionadas.
Tipo:grupodecepasdentrodeunaespecie(e.g.biotipos,
serotipos).
Cepa:unorganismoaisladodentrodeunaespecieen
particular.

 Relacinentrecaractersticasiolgicayfuncincelular
Relacinentrelasactividadesquellevanacaboensu
ambientenatural
Relacinconlostrayectosmetablicosmicrobianos

FermentacindeAzcares

http://textbookoXacteriology.net/themicrobialworld/metabolism.html

 Utilizacindecompuestosorgnicoscomofuentede
carbonoyenerga
Catabolismooxidacindemolculasorgnicasparaproducir
energa
Fermentacin
Respiracin

Anabolismoutilizacindeenergaparasintetizarmaterial
celular

Bacteriasoxidativas
Molculadeazcarserompe
completamente

http://textbookoXacteriology.net/themicrobialworld/metabolism.html

 Oxidacinparcialdeuncompuestoorgnico
utilizandointermediariosorgnicoscomo
donantesyaceptadoresdeelectrones

TodoelATPesproducidoporfosforilacina
niveldesustrato

http://textbookoXacteriology.net/themicrobialworld/metabolism.html

http://textbookoXacteriology.net/themicrobialworld/metabolism.html

Homolctica

Mixta

Clostridia
cidoactico,CO2yH2

Butanolacetona

Klebsiella,Enterobacter

cidobutrico

MayormenteEnterobacteriaceae
Produccindecidolctico,actico,frmico,succinatoyetanol

Butanediol

Lactobacillus,LactococcusylamayoradelosStreptococcus

Clostridiumacetobutylicum

cidoproponico

PropionibacteriumandBidobacterium

 Glucosa

Amigdalina

Lactosa

Adonitol

Manitol

Arabinosa

Inositol

Dulcitol

Sorbitol
Ramnosa
Melibiosa

 Importanteenla
identicacinde
bactericasentricas
comolas
Enterobactericeae
Fermentadorasde
lactosa:Escherichia,
Klebsiella,Enterobacter
Nofermentadoras:
Salmonella,Proteusy
Shigella

 Aerbicosyfacultativosanaerbicos
Gramnegativo
Noformadoresdeesporas
Formadebacilo
Fermentanlactosa,conproduccindecidoygasdentro
de48hra35oC

 Produccindecidosrojo
fenolcomoindicadordepH
TuboDurhamproduccinde
gas
Pruebasdefermentacinen:
glucosa,lactosaymanitol

 Tresazcares:glucosa,
lactosaysucrosa
Rojofenolcomo
indicadordepH
Contienehierropermite
detectarlaproduccinde
H2Sapartirdeamino
cidos
Puededetectarse
produccindegas

A.Salmonellasp.
B.Escherichiacoli
C.Unknown
D.Proteusmirabilis

 Deteccindeactividadesenzimticasbacterianas

ONPGsustratoarticialanlogodelalactosa
Ureacompuestonitrogenadosencillo
Casenaprotenaprincipaldelaleche
Gelatinaprotenaderivadadelcolgenoanimal
Almidnpolisacridodeorigenvegetal
Lpidosograsas

 Produccindegalactosa
yonitrofenol
Amarilloencondiciones
alcalinas

 Ureasaatacaenlace
entrecarbonoy
nitrgenoprociendo
CO2,aguayamonaco
Rojofenol

Urea

 Pruebatilpara
distinguirProteusde
otrasbacteriasentricas
Gram

 Protenapredominanteenlaleche
Protenamuygrandeparapasarporlamembranapero
algunasbacteriasliberancaseinasaquedegradala
protenaeincorporanlosaminocidosqueseliberan

 Bacteriaspuedenproducirlaexoenzimagelatinasa,que
rompelaestructuradelagelatinaylalica
Lacapacidaddeunabacteriadeproducirgelatinasase
puedecorrelacionarconelgradodepatogenicidado
virulencia,yaquelaenzimapermitemoverseatravsdel
tejidoconectivoenelcuerpo.
Unapruebagelatinaseevalaobservandolaconsistencia
enfro
SeutilizaparadiferenciarentreS.aureusyS.epidermidis

 Algunasbacteriaspuedenproduciramilasa,produciendo
dextrinas,glucosaymaltosa

 Produccindelipasasparaproducircidosgrasosy
glicerol
PruebasellevaacaboenagarSpiritBluequetieneun
indicadordepH.LahidrlisisbajaelpHocurriendoun
cambiodecoloraazulintenso

 ParalosbacilosGramnegativos
Indol
Rojometilo(MR)
VogesProskauer(VP)
Citrato(C)

 Hidrlisisdetriptfanoproduciendoindol,cidopirvicoy
amonaco
Elindolseacumulaenelmedioporquenoestilala
bacteria
SeaadereactivodeKovacquereaccionaconelindol
produciendouncompuestorojizorosado

 Pruebaparalafermentacinmixtapresenciadecidos
acticos,lactico,frmicoysuccnico
Laadicinderojodemetilo,quedistinguegradosde
acidez:amarilloapH8,incoloroapH7yrojoapHde4

 Produccindealcoholy2,3butanodiolenlugardecidos
apartirdeunazcar
EspeciesdeEnterobacterySerratiayalgunasGram
positivocomoBacillus
Semideacetonaqueesunprecursorde2,3butanodiol
Luegodeperododeincubacinseaadeelreactivode
Barrit:alfanaftol5%yKOH40%enalcoholabsoluto
Pruebapositivaeslaformacindeuncomplejorojo
rosado

 Algunasbacteriaspuedenutilizarcitratocomonica
fuentedecarbonoencondicionesaerbicas
Lapermeasadecitratopermiteeltransportedecitratoal
interiordelaclulaylaenzimacitrasaconvierteelcitrato
encidopirvicoyCO2
Mediocontienecitratodesodio,salesdeamonioyazul
bromotimolcomoindicadordepH
ElCO2liberadosecombinaconelsodioyaguayforman
carbonatodesodioqueesalcalinocambiandoel
bromotimoldeverdeaazulintenso

TSITripleSugarIronAgar

SIMSuldeIndoleMotility

Fermentacindeazcares
yproduccindeH2S
ProduccindeH2Symotilidad

 Remocindelgrupoaminodefenilalaninaporfenilalanasa
produciendocidofenilpirvico
Diferenciaentregnerosdeenterobacterias
Seaadesolucin10%clorurofrrico

 Remocindelgrupocarboxilodelosaminocidosque
producenaminasyCO2
Seutilizancaldosquecontienenelaminocido
correspondiente,glucosayunindicadordepHcomo
bromocresolvioleta
Seaadeaceitemineralparacrearcondicionesanaerbicas
Loscidosproducidosporlafermentacinactivala
decarboxilasaqueproducenaminasalcalinasqueneutralizanel
mediolocualcambiaelmediodeamarillo(cido)avioleta
Pruebanegativamedioamarillo

 Pruebaquecombinadiferentesreacciones
Fermentacindeazcares
Lactosa

Reaccionesdehidrlisis
Casena

Lechedesnatadaal10%conlitmus(azolitmin)como
indicadordepH

 Bacteriasquimioorganoheterotrcasutilizanelnitrato
comoaceptadornaldeelectronesduranterespiracin
anaerbica

NO3+2e+2H+NO2+H2O

Relacinalciclonitrgeno
Elmediodecultivocontieneextractodecarne,peptonay
nitratodepotasio(KNO3)

 Serequierelaadicinde
cidosulfanlico(A)y
dimetilnaftilamina(B)
Sedetectalapresencia
denitrito
Pruebapositivacolor
rojo
Seconrmaprueba
negativaconZn

 Detectalaproduccinde
unaenzimaquecoagula
lasprotenasdelasangre
Sehaceenmedioque
tieneplasma
TpicadelasGram
positivo
S.aureus

 Detectapresenciade
deoxiribonucleasa
Pruebatpicaparacocos
Grampositivo
Tpicodebacterias
patgenasquerompen
DNAenclulasdel
hospedero
Eltintesepegaalascargas
negativasdelDNA;
ausenciadeltinte,ausencia
DNA

 Detectapresenciade
catalasaoperoxidasaque
rompeelperxidoen
aguayO2

 Pruebarepresentativadelosprocesosaerbicospropiosde
bacteriasoxidativas
Bacteriasoxidativasenergaapartirdecompuestosorgnicos
utilizandooxgenoyliberandoCO2yagua
Lasoxidasassonenzimasimportantesenlacadenade
transportedeelectronesduranterespiracinaerbica
Pruebaimportanteparadistinguirciertosgruposdebacterias
Pruebarequiereelusodetetrametilpfenilendiaminaque
reaccionanhaciauncolorazuloscuroalreaccionarconla
citocromacoxidada

Lasenterobacteriassonoxidasanegativa

EnterotubeII

API20E

 Pruebasrpidas:sistemaparalaidenticacin
bioqumicadeEnterobacteriacaeyotrasbacterias
Gramneg.
Consistedetirasplsticascon20uldesustratos
deshidratadosqueseutilizanparadetectar
caractersticasbioqumicas.
Lossustratossoninoculadosconcultivospuros
suspendidosensalina.
Luegodeunperodode5hr24hrslas20pruebasson
convertidasaunalecturade79dgitos.
55

 Limitadoabacterias
Gram,oxidasaneg

positive
negative

ONPG(galactosidase);ADH(argininedihydrolase);LDC(lysinedecarboxylase);ODC
(ornithinedecarboxylase);CIT(citrateutilization);H2S(hydrogendisulphideproduction);
URE(urease);TDA(tryptophandeaminase);IND(indoleproduction);VP(VogesProskauer
testforacetoin);GEL(gelatinliquefaction);thefermentationofglucose(GLU),mannitol
(MAN),inositol(INO),sorbitol(SOR),rhamnose(RHA),sucrose(SAC);Melibiose(MEL),
amygdalin(AMY),andarabinose(ARA);andOXI(oxidase).
57

OXI0

ARA22
+
AMY0

MEL4
+
SAC27
+
RHA1
+
SOR4
+
INO05

MAN1
+

normal7digitcode
5144572=E.coli

GLU4
+
GEL04

VP0
IND4
+
TDA04

URE0

H2S0

CIT01

ODC1
+
LDC4
+
ADH05

ONPG1
+
58

 EnterotuboIIenterobacteriasoxidasaneg
EntericTek
Oxi/FermGramNegativeRodsIdenticationpara
bacteriasoxidasaposyoxidasaquenofermentan
glucosa
APIStaphIdentpara13especiesdeestalococos
Biolog
MicroIDenterobacteriasoxidasaneg
Minitek