Estudioqumicocomputacionaldelintermediario LactiloThDPenelciclocatalticodelaenzima acetohidroxisintasa

G.Jaa,O.Alvarado,E.Delgado GrupodeQumicaBiolgicayComputacional,DepartamentodeFsicoQumica, FacultaddeCienciasQumicas,UniversidaddeConcepcin.EdmundoLarenasN 129,Concepcin,CHILE email:gonzalojana@udec.cl La cido acetohidroxi sintasa (AHAS) pertenece a la familia de las enzimas tiamina dependientes, debido a que uno de sus cofactores corresponde a una molcula de tiamindifosfato (ThDP). Esta enzima se encuentra en plantas, hongos y bacterias y est involucrada en los primeros pasos de la ruta biosinttica de los aminocidos de cadena ramificadaleucina,valinaeisoleucina.Porestemotivoeselprincipalblancodeaccinde herbicidas, principalmente aquellos pertenecientes a las familias de las sulfonilureas y de lasimidazolinonas. EnelprimerpasodelciclocatalticodelaAHAS,endondeelcicloestconstituidoporun total de cuatro etapas, el in iluro realiza un ataque nucleoflico sobre una molcula de piruvato para dar paso a la formacin del intermediario LactiloThDP (LThDP). Este intermediario al descarboxilarse genera el segundo intermediario del ciclo llamado HEThDP, pero adems y anteriormente a esto, el LThDP necesita para su formacin la presenciadeuninhidrogenoelcualenlaAHASesdeprocedenciadesconocida.Poreste motivo se estudi la formacin del LThDP, postulando que el in hidrgeno proviene desdeelgrupoaminodelanillopirimidnicodelcofactorThDP,cuandoesteseencuentra enlaforma APH + [2], figura1.
Glu COO 139
+

CH 3 N R S O
1

Glu COO 139

H C 3 N N NH
+

H N H C 3 N + APH Iluro

H N CH 3 Piruvato O H C 3

+ C NH 2

O IPLThDP H

CH 3 CO 2

F igura1: conR1correspondientealgrupohidroxietildifosfato.

Se realizaron estudios termodinmicos en fase gas y en solucin, adems de analizar las barrerasenergticasdelastransicionestantoparaelataquenucleoflicodelinilurosobre elpiruvatocomo tambinparalatransferenciaprotnicayparaladescarboxilaciondelL ThDP, considerando solo a los sustratos aislados. Los clculos se realizaronutilizandoel software GAUSSIAN 03 empleando DFT a nivel B3LYP/6311++G(d,p)//B3LYP/6 31++G(d,p) para los sistemas fase gas y B3LYP(CPCM)/6311++G (d,p)//B3LYP(CPCM)/631++G (d,p) para los sistemas en solucin. Los clculos de las barrerasdeactivacinserealizaronconMOPAC09usandoelhamiltonianoAM1. Agradecimientos: proyectoFondecytN1100064.