UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA Departamento de Bioqumica

Curso: Anlisis Clnico BACTERIOLOGIA

PROF. FRANCISCO ABANTO ZAMORA

BACTERIOLOGA
Estudio de las bacterias y enfermedades que stas provocan. Queda includa la cadena epidemiolgica (reservorio, mecanismos de transmisin, inmunidad, factores que hacen que existan ms o menos defensas contra ellas...). Las bacterias son seres microscpicos estudiadas mediante microscopios pticos en preparaciones teidas o sin teir (en fresco) para estudiar su estructura o morfologa, pero para estudiar su estructura interna se necesita un microscopio electrnico.

Bacteriologa

Objetivos del laboratorio

Entender la clasificacin de las bacterias de acuerdo a sus caractersticas Describir las estructuras y morfologa de las bacterias Prcticar tcnicas de cultivos de bacterias

LA CLULA
Unidad bsica de los organismos Unicelular
Caractersticas de los seres vivos: Movimiento Respiracin

Metabolismo
Reproduccin Responden a estmulos

Pluricelular

LA CLULA
Dos tipos de clulas: Eucaritica Procaritica

CLULA EUCARITICA
Eu = verdadero Karios = ncleo Organelos definidos Grande y compleja

CLULA PROCARITICA
Pro = Antes Karios = ncleo Pequea y simple

 Nivel taxonmico ms alto

Dominio

Dominio Archaea
Arqueas:

Halogeometricum borinquensis

Haloterrigena thermotolerans

ESTRUCTURA BACTERIANA
PARED CELULAR. Es una caracterstica de las bacterias y es una pared que est por encima de la membrana citoplasmtica con funcin exoesqueltica. La pared tiene poros y es una parte morfolgica que tienen TODAS las bacterias ya que es importante para su supervivencia porque incluso la presin osmtica interna hace que la pared le d una rigidez. A veces algunas bacterias pierden esta pared y se convierten en PROTOPLASTOS. Hay unas bacterias (slo de un tipo) que NO tienen pared celular: las del gnero Mycoplasma que tiene 2 especies: M. Hominis M. Pneumonie

ESTRUCTURA BACTERIANA
El mucopptido (polmero) ms importante que forma la pared celular y el ms caracterstico de las clulas procariotas es la MURENA, la clula sintetiza esta mucoprotena para hacer su pared y hay antibiticos que actan sobre la pared celular inhibiendo la produccin de la protena. MEMBRANA CITOPLASMTICA. Vital para la supervivencia de TODAS las clulas. Es semipermeable (sometida a las leyes de la OSMOSIS). Est formada por una estructura de lpidos (bicapa fosfolipdica) y protenas. CITOPLASMA. Donde se encuentran las substancias internas, orgnulos, ribosomas (encargados de la sntesis de protenas), inclusiones citoplasmticas (algunas de ellas puedes ser cromticas, pueden tener color), vacuolas... CPSULA. ALGUNAS bacterias pueden formarla.

Dominio Bacteria

Clulas procariotas (estructura simple) Carecen de ncleo u organelos

limitados por una membrana

Tienen importancia positiva y negativa

Cianobacterias
Eran conocidas como algas azulverdosas

Organismos fijadores de nitrgeno

Abundantes en charcas y lagos

CLASIFICACIN BACTERIANA
Las especies estn divididas en CEPAS y CLONES. Cepa: cultivo puro derivado de 1 SOLO aislamiento (grupo de grmenes) Clon: cultivo formado por los descendientes de 1 SOLA bacteria (1 slo germen) En una cadena epidemiolgica es muy importante saber cual es el FOCO de infeccin original, si es de una misma cepa o de diferentes para investigar su diseminacin en la poblacin. Hay una CEPA TIPO que ha partir de ella se hacen las comparaciones y se conocen las caractersticas y a partir de ella tambin se clasifican el resto. Las ESPECIES tambin se acaban dividiendo en subespecies, etc. Todo esto es importante desde el punto de vista epidemiolgico para saber el origen de las especies y saber en qu han variado como p.ej. patogeneidad, etc...

CLASIFICACIN BACTERIANA
Todas estas clasificaciones se hacen de acuerdo a muchos criterios y caractersticas: Fenotpicas: morfologa, tamao, etc. (perceptible) Genotipo: gen que contiene inf. de las caractersticas Fenotipo: es lo que manifiesta en el organismo Genotpicas: segmento de ADN en locus (cromosoma) Fisiolgicas (unas necesitan una temperatura de crecimiento determinado, otras son sensibles a unos ambientes...) Nutricionales (hetertrofos, auttrofos) Caractersticas de afinidad al medio de cultivo Bioqumicas; (pH, iones...) Tincin (gram +, gram -) Estructurales

CARACTERSTICAS DE TODAS LAS BACTERIAS.

Murena Membrana plasmtica Pared celular (tinciones de gram...) Citoplasma Otras caractersticas que unas s tienen y otras no: Cpsula Cilios

METABOLISMO DE LAS BACTERIAS

A travs del metabolismo de las bacterias tambin se puede hacer una identificacin bacteriana. El metabolismo comporta un cambio y con esta palabra se designan una serie de transformaciones que tienen lugar dentro de la clula. Se produce en dos partes: Anabolismo: procesos de construccin celular, biosntesis Catabolismo: constituido por las reacciones energticas con el fin de obtener energa qumica (ATP ADP + P) , se desprende energa, que se obtiene de los nutrientes, como la luz, etc.

MACRONUTRIENTES
CARBONO (C): La mayor parte de las bacterias necesitan una fuente de carbono y de ah que muchas bacterias utilicen una fuente de CO2 como fuente de carbono. NITRGENO (N): lo necesitan para formar AA de las protenas. FSFORO (P): para la sntesis de los c. Nucleicos, fosfolpidos, ATP... AZUFRE (S): ya que forma parte de las molculas de algunos AA como la Cistena, Metionina... POTASIO (K): activador de algunos encimas. MAGNESIO (Mg): interviene en la estabilizacin de los ribosomas, membrana celular, c. Nucleicos... SODIO Y CALCIO (Na, Ca): algunas bacterias los necesitan pero normalmente las patgenas no. HIERRO (Fe): en muchas de las bacterias es importante para el ciclo respiratorio. AGUA (H2O): nutriente muy importante, sin ella las bacterias no pueden completar su ciclo vital. Si no disponen de agua, algunas pueden dar lugar a formas de resistencia y esporular, viviendo de forma latente.

MICRONUTRIENTES. OLIGOELEMENTOS
Elementos qumicos indispensables para el crecimiento bacteriano, se requieren en cantidades muy pequeas, funcionan como antioxidantes. COBALTO (Co): forma parte de la vitamina B12 ZINC (Zn): para varios encimas COBRE (Cu): forma parte de los encimas respiratorios Mg En algunas bacterias especiales: Nquel, Tungsteno, Selenio... Adems de estos dos tipos de nutrientes, la bacteria tambin necesita para su metabolismo FACTORES DE CRECIMIENTO: compuestos que se requieren en muy pequeas cantidades y que normalmente la clula es capaz de sintetizarlos, pero a veces los necesitan tener en el medio que les rodea, como p.ej. las vitaminas, que se ponen ms de manifiesto cuando los cultivos son sintticos, ya que en c.n. las bacterias los pueden sintetizar o los tienen ya el medio. La necesidad de algunos factores de crecimiento especfico puede ser una caracterstica de una especie bacteriana.

CLASIFICACIN EN GRUPOS NUTRICIONALES

SEGN SUS FUENTES DE ENERGA Y DE CARBONO. Fotoauttrofas (fuente C es CO2 + luz) Fotohetertrofas (fuente de C es un compuesto orgnico + luz) Quimioauttrofas (CO2 + sales orgnicas) Quimihetertrofas (compuestos orgnicos + compuestos orgnicos)

TIPOS: AEROBIOS, ANAEROBIOS La energa se acumula en forma de ATP y todo se hace mediante reacciones de oxidacin y reduccin (REACC. REDOX), que en muchas de ellas va a haber una participacin de oxgeno (aerobios), pero en otras no (anaerobios), y dependiendo de ello, el metabolismo bacteriano libera energa mediante: Fermentacin (en ausencia de O2, hay prdida de electrones) Respiracin (en presencia de O2, por adicin de electrones)

Bacterias

Bacterias
Descubiertas por Anton Van Leeuwenhoek (1674) Clulas microscpicas que se miden en micras (u) Mayora presentan pared celular compuesta de peptidoglucano (polimero de protenas y carbohidratos) Reproduccin por fisin binaria (asexual) Material gentico encontrado en plsmidos Algunas poseen cpsula Pueden formar colonias

Bacterias
Crecimiento de las colonias Su morfologa y tamao se utilizan para identificar las especies de bacterias

Formas comunes

Mrgenes comunes

Caractersticas de la superficie

Tincin Bacteriana
Utilizacin de tintes para identificar bacterias Tincin Gram Clulas responden al tinte de acuerdo a la complejidad y composicin de su pared celular (pared delgada o gruesa) Bacterias Gram + Gram Gram variable (menos comn)

Tincin Gram
Bacteria Gram +
Pared celular simple Capa de peptidoglucano gruesa No capa externa de lipopolisacridos

Bacteria Gram Pared celular compleja Capa de peptidoglucano fina Capa externa de lipopolisacridos

Retienen cristal violeta/iodo- Retienen safranina-color color azul/violeta rojo/rosado

Enfermedades bacterianas
Enfermedades entricas de origen bacteriano (disentera, clera, salmonella, tifodea, etc.). Enfermedades transmitidas por contacto directo (sfilis y gonorrea, carbunco, la tularemia y la brucelosis). Enfermedades adquiridas al ingerir toxinas bacterianas (Clostridium botulinum, Staphylococcus aureus).

PROCESADO DE MUESTRAS transportarse y de mantenerse en condiciones adecuadas (por ejemplo, condiciones de temperatura y de contenido de oxgeno en ella). el procesamiento suele comenzar por la llamada "siembra (placa petri + agar). t/v. "incubacin" del medio ya sembrado (oxgeno, temperatura,). crecern "colonias" de bacterias (tienen caractersticas de color, forma, tamao etc., tambin pruebas bioqumicas).

EXTENDIDOS

Las muestras que contienen bacterias se extienden sobre una placa de vidrio que se denomina "portaobjetos", se deja secar y luego se fija (generalmente calentndola), para que no se desprenda y para preservar su morfologa.

EXTENDIDOS A continuacin la muestra suele teirse. Para ello existen muchos procedimientos, pero el ms usado es la denominada "tincin de Gram". Este sistema nos permite apreciar mejor la forma de la bacteria (los cocos son esfricos, los bacilos alargados, etc.) y nos permite dividirlas en dos grandes grupos segn el color que adoptan: bacterias gram positivas y gram negativas.

Bacterias gram positivas

Los estafilococos: pueden causar neumona, infecciones supuradas (con pus) en la piel y abscesos en otros lugares, sndrome del shock txico, meningitis, artritis, osteomielitis, enteritis, etc. Estreptococos: pueden ser responsables de infeccin en la sangre, faringitis, infeccin de las vlvulas del corazn, fiebre reumtica, escarlatina, neumona, etc. Corinebacterias: difteria, infeccin de orina, etc. Clostridios: ttanos, botulismo, gangrena gaseosa, infeccin de la sangre, etc. Bacillus: antrax.

Bacterias gram negativas

Salmonella, Shigella y Campylobacter: pueden provocar infeccin en el intestino. Escherichia coli y otras enterobacterias: pueden provocar neumona, infeccin de orina, infeccin en la sangre, etc. Legionella: puede provocar una neumona grave y atpica (la enfermedad del legionario). Meningococos: puede causar meningitis cerebroespinal. Haemophyllus: infeccin respiratoria, meningitis, etc.

Bacterias gram negativas Gonococo: causa la gonorrea. Brucella: brucelosis (fiebre de malta). Pseudomonas: infecciones de odo e infecciones en mltiples lugares en personas debilitadas (neumonas en pacientes de UVI, infeccin en los pies en diabticos, infeccin respiratoria en pacientes con fibrosis qustica, etc.). Bordetella: tosferina.

Parte experimental

Tcnicas de asepsia
Contaminacin de cultivos Trabajamos con posibles patgenos Limpiar mesas con Lysol Lavarse las manos Utilizar zafacn Utilizar guantes Utilizar bata

Ejercicio # 1: Preparacin de laminilla

Preparar laminilla con muestra de sarro
Procedimiento:
Gota de agua en laminilla Raspar sarro con palillo Pasar palillo en gota de agua Secar la laminilla utilizando lmpara de alcohol Derramar cristal violeta a la laminilla (2-3 gotas) Lavar exceso de tinte Secar con papel especial Observar preparacin a travs del microscopio Dibujar lo observado.

Ejercicio # 2: Observacin de laminillas

Observar laminillas
Bacterias - tincin gram Bacilos Cocos Otras morfologas

Dibujar lo observado

Ejercicio # 3: Morfologa bacteriana

Observar bajo estereoscopio las placas Petri para identificar la morfologa de las colonias

Ejercicio # 4: Exposicin de platos

Tomar muestra de aire, agua, suelo, entre otros, utilizando la tcnica a explicarse en el laboratorio Colocarla en las placas Petri conteniendo un medio de cultivo (TSA) utilizando las tcnicas aspticas correspondientes Cerrar con parafina y rotular las placas: nombre, seccin, clave, instructor. Incubar a 25C por 48 hrs Anotar y dibujar los resultados
Tomar en consideracin a las bacterias, no a los hongos

 Utilizar antibiticos, desinfectantes y/o antispticos para determinar su eficacia inhibiendo el crecimiento de bacterias

Ejercicio # 5: Control de crecimiento Bacteriano

Inocular de forma estriada la muestra de bacterias en el medio de cultivo Colocar 3 discos, impregnados con 3 diferentes sustancias qumicas, sobre el agar y un disco con agua (control) Rotular las placas Incubar a 37C, observar en 24 hrs y anotar/dibujar los resultados (medir la zona de inhibicin-cm)

 GRACIAS