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Universidad Nacional de Quilmes Fundacin Antorchas Programa de Becas para Jvenes Destacados del Polimodal
Volumen I
Noelia Fuente /Tutora: Sandra Goi Georgina Emmanuelli /Tutora: Giselle Ripoll Marcos Gabriel Daciw / Tutor: Jorge Wagner Mara Emilia dos Santos / Tutor: Luciano Gabbarini Joaqun Gabriel Wall /Tutora: Mara Alejandra Zinni
Florencia Mabel Rembado Coordinadora
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SERIE DIGITAL
Ciencia y Tecnologa
UNQ Editorial SERIE DIGITAL Ciencia y Tecnologa
Universidad Nacional de Quilmes Rector Daniel Gomez Vicerrector Jorge Flores
Editorial Serie Digital Coordinacin acadmica Mariano Belaich, Departamento de Ciencia y Tecnologa Margarita Pierini, Departamento de Ciencias Sociales Edicin Rafael Centeno ISBN 978-987-558-227-9 libro electrnico 2005
BEcAriOs Gabriel Daciw, Instituto Santa Luca, Florencio Varela, 2004. Mara Emilia dos Santos D., Instituto Santa Luca, Florencio Varela, 2003. Georgina Emmanuelli, Escuela de Educacin Media N 18 Prspero Alemandri, Avellaneda, 2003. Noelia Fuente, Escuela de Educacin Media N 14, Alejandro Korn, 2003. Joaqun Gabriel Wall, Bachillerato de Bellas Artes, La Plata, 2003. TUtOrEs Luciano Gabbarini. Licenciado en Biotecnologa. Becario de Doctorado UNQ (rea temtica interacciones biolgicas). Profesor instructor en la asignatura Bioqumica I. Sandra Goi. Licenciada en Biotecnologa. Becaria de Doctorado UNQ (rea temtica virologa humana). Profesor instructor en la asignatura Bioqumica II. Giselle Ripoll. Licenciada en Biotecnologa. Becaria de Doctorado UNQ (rea temtica oncologa molecular). Profesor instructor en la asignatura Fisiologa y Gentica de Microorganismos. Jorge Wagner. Doctor en Ciencias Qumicas (UNLP). Profesor Asociado Ordinario de Anlisis de Alimentos y Bromatologa y Bioqumica de Alimentos (UNQ). Investigador Independiente (CONICET). Mara Alejandra Zinni. Licenciada en Biotecnologa. Becario de Doctorado UNQ (rea temtica biocatlisis). Profesor instructor en la asignatura Taller de Qumica.
ndice
Presentacin, por Florencia Mabel Rembado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 Introduccin, por Mariano N. Belaich . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 Organismos genticamente modificados, por Noelia Fuente. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 Tutora: Sandra Goi Bases moleculares del cncer: nuevas estrategias antitumorales, por Georgina Emmanuelli . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28 Tutora: Giselle Ripoll Stevia rebaudiana bertoni: Ka-he, por Marcos Gabriel Daciw . . . . . . . . . . . . . . . . . 52 Tutor: Jorge Wagner Hidroponia y promocin del crecimiento de las plntulas de tomate inoculadas con bacterias PGPT, por Mara Emilia dos Santos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65 Tutor: Luciano Gabbarini Obtencin de colorantes y su aplicacin en el arte, por Joaqun Gabriel Wall. . . . . 75 Tutora: Mara Alejandra Zinni
Presentacin
Es con gran placer que publicamos como parte de la Serie Digital de la Editorial de la Universidad Nacional de Quilmes, la primera de dos entregas de los trabajos elaborados por los becarios del Programa de Becas para Jvenes Destacados del Polimodal. Desde el ao 1999, la Universidad Nacional de Quilmes, a travs de su Secretara Acadmica y con el apoyo de la Fundacin Antorchas, ha venido desarrollando el Programa de Becas para Jvenes Destacados del Polimodal. Este programa se ha propuesto alentar a jvenes talentosos, estimulando sus intereses con el propsito de orientarlos en su formacin y en su futuro ingreso a la vida universitaria. Las becas estn destinadas a alumnos destacados del ltimo ao del ciclo Polimodal u otro equivalente, que estn interesados en tener una aproximacin al mbito de la investigacin acadmica y la vida universitaria. Para ello se les asigna un tutor, que los gue y los oriente en esta experiencia. Los tutores son docentes-investigadores de la UNQ. No se trata de una beca social, sino que se propone alentar y estimular en los jvenes el espritu emprendedor y el inters por saber, al mismo tiempo que les ofrece un primer acercamiento al mundo universitario de la mano de algunos de sus actores. Los candidatos deben cursar sus estudios en escuelas de los partidos de Avellaneda, Ezeiza, Presidente Pern, Berazategui, Lans, Almirante Brown, Lomas de Zamora, Esteban Echeverra, Quilmes, Florencio Varela y La Plata, de la Provincia de Buenos Aires. Se han adjudicado un promedio de veinticinco becas acadmicas por ao lectivo. En el rea de Ciencia y Tecnologa se ha otorgado prioridad a los trabajos vinculados con matemtica, fsica, qumica, biologa, biotecnologa, ciencia y tecnologa de los alimentos, electrnica y automatizacin de procesos. En el mbito de las Ciencias Sociales se ha promovido la elaboracin de trabajos que aborden temas vinculados con historia, literatura, comunicacin social, educacin, psicologa, sociologa, economa y filosofa, administracin, comercio internacional, msica electroacstica, terapia ocupacional y administracin hotelera. La modalidad del trabajo de los estudiantes seleccionados es muy diversa, lo mismo han desarrollado una investigacin terica, que un trabajo experimental en los laborato-
rios de la UNQ, o la elaboracin de un video, de una obra musical, etc. Cada uno de los becarios se ha reunido con su tutor con una periodicidad variable, de acuerdo con las caractersticas del trabajo y de comn acuerdo. Hacia fines de diciembre de cada ao, los becarios hacen entrega en la Secretara Acadmica de la Universidad Nacional de Quilmes del trabajo realizado en el marco de su beca y, hacia fines del mes de marzo del ao siguiente, se presentan en pblico, en el auditorio de la Universidad. En momentos en que la nica imagen vlida que los medios de comunicacin pueden mostrar de nuestros jvenes es el consumo de alcohol y de droga, resulta sumamente estimulante ver el inters, la pujanza, la fe y la confianza de estos jvenes que se acercan a la Universidad en busca de un futuro mejor. Cada ao ms de cien estudiantes se presentan como postulantes, conocedores del esfuerzo que conlleva lograr la beca. Sin embargo, la posibilidad del contacto con un medio del que aspiran a formar parte en el futuro allana dificultades y temores. En muchos de los casos, esta experiencia ha sido de gran utilidad en la eleccin de su futura carrera y su mbito de ejercicio. El contacto de los becarios entre s y con jvenes tesistas de la UNQ es tambin de valiosa trascendencia, habida cuenta de que se trata de jvenes con intereses comunes, que disfrutan de la msica, los deportes y salidas de gente de su edad, pero que tambin hacen de la inquietud intelectual, de la lectura y de la reflexin, su forma de vida. El placer compartido de conocer y saber cada da ms, sin duda es un aliciente para ser mejor persona. Me ha correspondido, desde el ao 2003, fungir como coordinadora de este Programa de Becas, continuando con la tarea iniciada por otros docentesinvestigadores de nuestra Universidad. Es as que en esta oportunidad presentamos el resultado del trabajo de cinco becarios y sus respectivos tutores en temas vinculados al Departamento de Ciencia y Tecnologa. En la segunda entrega haremos lo propio con los trabajos vinculados al Departamento de Ciencias Sociales.
LIC. MABEL FLORENCIA REMBADO

Coordinadora Programa de Becas para Jvenes Destacados del Polimodal 2003-2005
Introduccin
La importancia del conjunto de textos que integran esta publicacin trasciende el objetivo primordial que consisti en promover el trabajo intelectual en adolescentes preuniversitarios, para instalarse como un excelente medio de divulgacin cientfica. Las temticas abordadas por estos jvenes investigadores fueron tan diversas como los campos en que se estn dividiendo las Ciencias Naturales. De este modo, la lectura de estas pginas nos interioriza en temas tan diversos como apasionantes. Noelia Fuente discute sobre los Organismos Genticamente Modificados (OGM), tanto sobre los mecanismos y procedimientos para generarlos como sobre las implicancias sociales que su existencia acarrea. Y su principal mrito reside, quizs, en los profundos cuestionamientos a que nos induce la lectura de su trabajo. Por otro lado, Georgina Emmanuelli nos da una excelente clase sobre el cncer, una enfermedad a la cual todos tememos. Pero si a ese temor le sumamos la ignorancia sobre su verdad biolgica, transformamos un autntico miedo en terror. Por ello, este trabajo nos ayuda a poner los pies sobre la tierra y a entender por qu se produce el cncer y cmo es posible tratarlo, y sobre todo, prevenirlo. Marcos Gabriel Daciw ha estudiado la Stevia rebaudiana bertoni, ms popularmente conocida como yerba dulce. Cuntos conocen esta planta que crece en nuestras tierras y que tiene un enorme potencial econmico en la produccin de alimentos? Seguramente no muchas personas, o no al menos los que podran hacer de este cultivo una alternativa interesante para nuestra agricultura e industria. Su lectura nos muestra un mundo de oportunidades en los pastos o mal llamados yuyos que crecen a nuestro alrededor. Mara Emilia dos Santos tambin se involucra con temas agrarios, ensendonos cmo es posible optimizar procesos productivos para determinadas hortalizas, como el tomate, a travs del sistema de hidroponia, y as lograr excelentes productos con costos reducidos. Joaqun Gabriel Wall nos sorprende con una interesante mezcla entre arte y ciencia. Jugando con diferentes sustancias qumicas y procedimientos cientficos, Joaqun desarrolla tinturas con las cuales nos deleita con originales obras de arte.
Invitamos a los lectores a introducirse en estos trabajos que muestran la pasin, la duda, el ingenio, la oportunidad y el mtodo de este grupo de jvenes mientras jugaron con rigor a ser cientficos, pero sin abandonar nunca la rebelda de su condicin adolescente.
MARIANO N. BELAICH
Organismos genticamente modificados

Noelia Fuente Tutora: Sandra Goi
OBJETIVOS
Conocer las tcnicas empleadas para generar organismos genticamente modificados (OGM). Discutir sobre la utilizacin y los beneficios de los OGM. Generar una bacteria recombinante mediante tcnicas tradicionales de ADN recombinante.
INTRODUCCIN
Los organismos genticamente modificados son producidos por tcnicas de ingeniera gentica y, en su mayor medida, principalmente representados por plantas de uso agrcola. En la actualidad, cuatro pases son los responsables del 99% de la produccin de OGM en el planeta, recayendo la mayor proporcin en los Estados Unidos y Argentina, con el 91%, mientras que el 8% se debe a Canad y China. El restante 1%, se reparte entre Sudfrica, Australia, Mxico, Uruguay, Indonesia, y otros pases de Europa. Entre todas estas naciones totalizaron 53 millones de hectreas sembradas, en 2001, en particular con cultivos de algodn, maz y soja. El argumento ms sostenido en la lucha contra los OGM es sobre su impacto ambiental y sanitario. Hasta el momento, no han aparecido pruebas cientficas que convenzan a todos acerca del prejuicio que pueden causar los transgnicos. Sin embargo, es cierto que debido a la constante presin ejercida, particularmente por las organizaciones ambientalistas de rechazar a dichos organismos, se ha causado un estancamiento en la produccin. Tambin han sido objeto de discusiones otras cuestiones, como el peligro del poder alergnico, o que sean generadas bacterias patgenas resistentes a antibiticos, daando as la salud humana. Tocando otro de los puntos clave que quedan por resolver respecto al debate multidisciplinario de los OGM, nos referimos al derecho que tiene el consumidor de poder conocer y elegir lo que come. Una consecuencia lgica de las implicancias que ello acarrea no slo ticas, sino tambin religiosas de la transgnesis, as como tambin la mejor
comercializacin de OGM radica en el etiquetado de los alimentos. Aun a pesar de los derechos que posee, el consumidor argentino (con respecto a los OGM), tiene un conocimiento nulo de los mismos. Este hecho habla de la falta de difusin adecuada por parte de las autoridades. Por otra parte, las empresas tampoco parecen preocuparse por las dudas o consultas que les surgen a los consumidores. Estas empresas se deben dar cuenta que tienen un rol social muy importante, no slo dando subsidios, sino tambin educando, informando, promoviendo que sus consumidores consuman con confianza, obviamente con la cooperacin del Estado y las instituciones educativas. En el aspecto econmico de este tema, las empresas biotecnolgicas han hecho hincapi en la importancia de los alimentos genticamente modificados para combatir el hambre de las naciones ms pobres. Pronosticar que la biotecnologa a travs de los OGM pueda acabar con uno de los grandes problemas a los que enfrentamos los seres humanos, no dejara de ser una brillante perspectiva para muchos. Tomando otras aristas de este controvertido tema, y entrando en el terreno de la tica nos podramos preguntar: tiene el hombre derecho a modificar formas de vida de manera radical? Hay ecologistas y conservacionistas que no observan con buenos ojos la manipulacin gentica y por extensin la clonacin de especies vivientes. Como pudimos ver, aspectos biolgicos, sanitarios, ambientales, tecnolgicos, ticos, econmicos, sociales, comerciales y hasta polticos, conforman al conjunto de opiniones contrapuestas que se escuchan en todo el mundo en torno a este tema.
RESEA HISTRICA
Son pocos los que efectan una mirada al pasado para estudiar cmo y por qu la agricultura ha evolucionado desde hace 10.000 aos hasta nuestros das. O cmo y en respuesta a qu las tendencias agrcolas se han modificado en este ltimo siglo, incluso en la Argentina. Viene bien sumergirnos en el ayer por unos breves instantes para hacer memoria y tratar de encadenar los distintos sucesos. Desde que el hombre hizo su irrupcin en este mundo y trajo consigo su permanente necesidad de alimento, vestimenta y materias primas, la bsqueda de un sistema de agricultura acorde con sus requerimientos no tard en comenzar. No obstante, miles de aos antes de la aparicin de la agricultura se haba comenzado un paciente trabajo de transformacin y adaptacin de varias plantas, entre ellas el trigo primitivo, utilizado por los egipcios, y originario del cercano oriente, cuya apariencia era la de un pasto silvestre.
Es as como a travs de varios procesos de hibridacin natural con otros pastos silvestres, el trigo primitivo deriv en la especie que hoy conocemos, con un nmero mayor de cromosomas: Lo que probablemente ocurri es que una helada acab con el polen masculino dejando vivo el receptculo femenino, afirma el agrnomo microbilogo y premio Nobel de la Paz, Norman Borlaug, en Los ngeles Times. Para Borlaug, el estigma femenino se forz a s mismo al exterior de la planta. As naci una nueva especie. Los alimentos fueron genticamente modificados por la propia naturaleza, lo que equivale que el 98% de las toneladas de trigo para pan que se producen hoy son de origen transgnico. Desde entonces y hasta el siglo XVIII, el agricultor haba efectuado mejoras en sus cultivos por medio de la seleccin haciendo uso de la polinizacin controlada de plantas. Por otro lado, tambin haba domesticado animales proveedores de carne, leche y lana, como las cabras y las ovejas. Con la Revolucin industrial, la mecanizacin, el crecimiento demogrfico y los avances cientficos all por fines del siglo XVIII y comienzos del XIX tuvieron su decisivo impacto en los campos. La agricultura fue racionalizada para aumentar los beneficios y comenzaron diversos ensayos para incorporar nuevas mejoras. Para entonces, ya se haban introducido las primeras variantes de trigo y de frutas, y se seleccionaban otros animales como los corderos. La ciencia haba dado pasos agigantados, figuras como Charles Darwin y el monje austraco Gregor Mendel hicieron su irrupcin dentro de la entonces incipiente Biotecnologa. Sus conclusiones acerca de las especies y de los caracteres de las mismas encendieron la mecha de una nueva era para la agricultura, con la que seguramente ni ellos mismos soaron. En el siglo XX no se hizo ms que acentuar esta impetuosa carrera rural que buscaba variedades que ofrecieran mejores rendimientos, mayor contenido nutritivo, facilidad de cultivo y cosechas estables. Pareca que ahora era el hombre quin deba darle una mano a la naturaleza acotando un trabajo de centurias a apenas unos pocos aos. A partir de 1900, el trigo fue modificado por medio de cruces artificiales y seleccin; 20 aos ms tarde aparecan los primeros hbridos de maz en Estados Unidos. Era el auge de los cultivares mejorados por medio de una tcnica gentica conocida como hibridacin sexual, en respuesta a nuevos descubrimientos efectuados en laboratorios biotecnolgicos. Los mtodos consistan en cruzamientos dirigidos entre plantas de la misma especie o especies relacionadas. Las que mejor respondan a dichos cruzamientos eran a su vez sometidas a un nuevo proceso proceso de cruzamiento o retrocruzamientos, hasta que finalmente se obtena la variedad mejorada o hbrido portando las caractersticas deseadas.
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En 1943 Norman Borlaug, que en aquel entonces era investigador de la Universidad de Minnesotta, Estados Unidos, fund en Mxico el Centro Internacional de Mejoramiento de Trigo y Maz (CIMMYT). Dicho centro responda a un programa de investigacin y adiestramiento, para aumentar la produccin de maz, trigo y frijol. Segn destaca Enrique Iez, del Instituto de Biotecnologa de la Universidad de Granada, Espaa, en Un papel para la biotecnologa?, las experiencias del CIMMYT se centraron en la obtencin de variedades de trigo de alto rendimiento capaces de resistir al hongo de la roya de los tallos, ensayando bajo distintas condiciones de latitud y altitud. As, es como surgi el trigo enano mexicano, que por cierto haca alarde de gigante: alto rendimiento, resistente al hongo de la roya de los tallos, mejor dotado para tolerar el viento y la lluvia, y con tallo corto, lo que permita aplicar dosis crecientes de fertilizantes y riego sin caerse (o volcarse) ni romperse bajo el peso de sus granos. Al trigo enano le siguieron variedades mejoradas de maz y de arroz, y los rendimientos no tardaron en multiplicarse a ritmo sostenido. Ya en la dcada de 1960 se hablaba de la Revolucin Verde, apadrinada por Borlaug, destinada a ser el elemento clave para terminar con el hambre del mundo. La agricultura de precisin haba dado paso a la agricultura continua. Fueron aos en que la produccin mundial de trigo y arroz se increment a razn de un 2,1% anual entre 1950 y 1990, es decir las cosechas se triplicaron en dicho perodo. Pases que tradicionalmente haban sido importadores de granos como India, Indonesia, Pakistn, Filipinas y China, ahora eran exportadores. Y quizs el rasgo mas espectacular de esta revolucin es que haban obtenido semejantes rendimientos por hectrea sin modificar sustancialmente la superficie cultivada. Evidentemente, las prcticas de cultivo fueron completamente diferentes a todo lo conocido hasta entonces. Se aument la produccin, s, pero a un cierto costo. La intensa roturacin de los suelos provoc serios problemas de erosin, con la consiguiente prdida de los mismos al ser arrastrados por las aguas o el viento. La necesidad continua de riego dio lugar, adems de la construccin de represas canales y sistemas de irrigacin, al agotamiento de acuferos y la salinizacin y anegamiento de los suelos. El intensivo uso de agroqumicos altamente txicos trajo consigo altos niveles de contaminacin de las aguas al ser arrastradas por la lluvia. La carrera por la competencia en los mercados mundiales dio pie a la introduccin de monocultivo, con el consiguiente empobrecimiento del ecosistema y biodiversidad gentica. La mecanizacin de la agricultura supuso el empleo de compleja y costosa maquinaria que consumi grandes cantidades de combustible y gener inusitadas emisiones de dixido de carbono (gas de invernadero) a la atmsfera.
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Por otra parte, este modelo tecnolgico no incluy a todos los protagonistas que se imaginaron en un principio. La alta dependencia de insumos dej de lado, como siempre, a los agricultores ms pobres, quienes al no poder competir con los poderosos debieron recurrir a una agricultura de subsistencia. En parte por esta razn y dada tambin la embestida de quienes buscaban ms tierras para una creciente produccin y competencia en los mercados, millones de hectreas de bosques fueron deforestados o quemados para tal fin. Adolfo Boy, agrnomo del Grupo de Reflexin Rural, sintetiza las mayores diferencias de la Revolucin Verde con estas palabras: Fue lineal y reduccionista: ms rinde a cualquier costa y costo. Con ella comenz la concentracin de tierras en busca de escala, la agricultura permanente y despoblamiento del campo. Sin embargo, el economista del INTA y Director de Investigacin de la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Catlica Argentina, Gabriel Parellada, mantiene una postura un tanto ms favorable: Lo que sabemos hasta el momento es que despus de casi 30 aos de la Revolucin verde se ha ms que triplicado la produccin de alimentos en el mundo, pero an persisten en muchas partes del globo situaciones de hambre y desnutricin. Quiere decir esto que el cambio tecnolgico producido por la Revolucin Verde no sirvi para nada? La respuesta es que el avance logrado posibilit reducir los efectos de una situacin que a todas luces hubiera sido peor. Desde este punto de vista diramos que su contribucin fue realmente positiva. En todo caso, puede decirse que la Revolucin Verde marc un antes y un despus. Sin duda, la agricultura no fue la misma desde entonces. Como tampoco lo fue el mundo desde que aparecieron los medios de transporte motorizados, la luz elctrica y las comunicaciones. En 1953, con la determinacin de la estructura del cido desoxirribonucleico (ADN) que permiti dilucidar cmo las clulas guardan la informacin gentica, cmo la duplican y cmo la trasmiten a travs de las distintas generaciones, el camino hacia la naciente ingeniera gentica qued definitivamente allanado. Para los expertos, las tcnicas de hibridacin, que implicaban transferir ciertos genes al azar (no todos necesariamente tiles) entre plantas de la misma familia o emparentadas, presentaban ciertos obstculos difciles de superar. El principal inconveniente de la produccin de hbridos resida en la incompatibilidad sexual entre las especies seleccionadas como progenitoras. Si existan grandes diferencias genticas entre las mismas, las posibilidades de obtener semillas viables por cruzamiento eran sumamente bajas. Pero haba otros inconvenientes tambin. Muchos opinaron que la tcnica resultaba insuficiente y extremadamente lenta para cubrir las urgentes demandas de alimentos impuestas por el crecimiento de la poblacin mundial. Por otra parte, la alta dependencia de agro-
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qumicos requeridos por estos cultivos hbridos no se condeca con un entorno ecolgico sustentable. La era de la biologa molecular, surgida en la dcada de 1950 tras el trabajo de los cientficos Watson y Crick (ambos luego premio Nobel) en la dilucidacin de la estructura de doble hlice del ADN, impuls un sinnmero de estudios durante la dcada siguiente. En los aos sesenta se pusieron en evidencia los principales mecanismos de regulacin de la expresin gnica, creando los instrumentos moleculares que permitieran intervenir sobre el ADN. En 1972, mientras se analizaba el mecanismo de infeccin de una bacteria del suelo (Agrobacterium tumefaciens), se comprob que esta era capaz de transferir ADN de uno de sus plsmidos al genoma de clulas vegetales. El estudio del mecanismo de esta transferencia dio pie para que se pensara en la transferencia gnica a plantas, en respuesta a caractersticas deseadas. Es as como diez aos despus, se haba logrado expresar un transgn (tal es el nombre que recibi el gen extrao o exgeno a transferir) en clulas vegetales. Y en 1984 surga la primera planta transgnica de tabaco con resistencia a antibiticos. El nacimiento de la era de los transgnicos, o de los organismos genticamente modificados, de las tcnicas del ADN recombinantes, es decir organismos portadores del material gentico de especies no emparentadas transferidos mediante ingeniera gentica. La transgnesis representa un cambio radical respecto del cruzamiento tradicional, ya que se apoya en el conocimiento previo de los genes a introducir (y de sus productos funcionales) y en la predicibilidad de los efectos que se procuran obtener, comenta Alejandro Mentaberry, del Instituto de Ingeniera Gentica y Biologa Molecular (INGEBI)CONICET de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la UBA. De esta forma, mientras la variedades obtenidas por cruzamiento sexual contienen combinaciones de genes que en su mayor parte estn indeterminadas, las plantas transgnicas solo difieren de sus parentales en un nmero determinado y conocido de genes. Adems de estos conceptos, el investigador de Instituto de Agroqumica y Tecnologa de Alimento del Consejo Superior de Investigaciones Cientficas de Valencia, Espaa, Daniel Ramn Vidal, menciona otros en un artculo difundido por internet a travs del grupo Licengen: Al construir un alimento transgnico es posible saltar la barrera de la especie, ya que todos los organismos vivos tienen el mismo material hereditario. No es posible cruzar sexualmente un tomate con una papa, pero se pueden expresar genes de tomates en papas o viceversa. No obstante, Vidal seala una consecuencia no precisamente resuelta an por la biotecnologa: Esta ltima diferencia tiene claras repercusiones ticas. Por ejemplo , un hipottico vegetal transgnico que porta un gen de un animal
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puede ser un problema para un vegetariano de dieta estricta. Los conflictos entre la biotecnologa y la tica no tardaran en hacerse presentes. Si bien a partir de 1975 la comunidad cientfica comenz a discutir los riesgos de la investigacin con ADN recombinante y propuso estrictas medidas de seguridad, en 1985 ya se hablaba de la posibilidad de patentar estas plantas genticamente modificadas. Al ao siguiente, las tcnicas del ADN recombinante fueron empleadas para que las plantas sean resistentes a insectos, bacterias y enfermedades.Y la carrera ya no encontr fin. En 1987 apareci en los Estados Unidos el primer cultivo transgnico del mundo: el tomate resistente a insectos. Para esa poca los investigadores de Monsanto ya haban descubierto el primer gen tolerante a su propio herbicida Round Up , y haban iniciado las pruebas de campo con soja y canola transgnicas resistentes a dicho herbicida. Durante la dcada de 1990 los cultivos transgnicos autorizados crecieron a ritmo febril en varias partes del mundo, particularmente en Estados Unidos, Argentina, Canad y Australia, y en nfima proporcin en China. Desde maz, soja y algodn tolerante a herbicidas y a insectos, hasta claveles con modificacin del color, quedando en el medio un nutrido muestrario de lo que la ingeniera gentica es capaz de hacer: soja con alto contenido de oleico, colza con sntesis incrementada de cido lurico, tomate con maduracin lenta, calabaza con resistencia a virus, achicoria con esterilidad masculina, y otros tantos.
TRANGNICOS: EL CONSUMIDOR Y EL ETIQUETADO
Uno de los puntos clave an por resolver en este debate multidisciplinario se centra en el derecho del consumidor de conocer y elegir lo que come. En todo el mundo se reclama el etiquetado de los alimentos transgnicos, aunque los nicos pases que cuentan con una legislacin al respecto son Japn, Australia, Nueva Zelanda, Corea y la Unin Europea. Las empresas no se vuelcan a favor del etiquetado de transgnicos. Es por eso que el consumidor, al menos en nuestro pas, desconoce si el alimento que acaba de comprar en un supermercado fue elaborado con materia prima genticamente modificada. Independientemente de que la informacin provista en la etiqueta pueda resultarle til o no, un gran porcentaje de consumidores defiende su derecho a saber y permanecer informado. Hasta el momento, las transnacionales se han pronunciado en contra del etiquetado por considerarlo superfluo, ya que genera un costo adicional. Esta posicin la han tomado muchas entidades locales. Las empresas alimenticias tampoco estn a favor del etiquetado. Antonio Brailovsky,
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un defensor ecologista, opina que al resistirse al etiquetado, tanto las empresas como el gobierno argentino, llevan adelante una poltica de ocultamiento de informacin, lo cual provoca daos en la sociedad y es una situacin de enorme peligro por el abuso que el poder entraa. Admite que hoy los productos alimenticios tienen impresa su fecha de vencimiento, lo que es una informacin elemental para el consumidor. Durante muchos aos no fue as, y muchas empresas se opusieron a ello, usando argumentos sobre la dificultad tcnica de hacerlo. Retomando el tema del derecho del consumidor, de saber lo que come, Brailovsky apunta que una mermelada de manzana es sustancialmente equivalente a, por ejemplo, una mermelada de peras. Las dos cumplen la misma funcin: de untar la tostada, y en muchas marcas tienen gustos que no se distinguen fcilmente. Sin embargo, si al consumidor, quien es el que paga y consume el producto, le interesa saber si est comiendo manzanas o peras, cul podra ser la razn para no decrselo? En la Argentina, la Asociacin de Semilleros Argentinos (ASA) no cree necesario el etiquetado cuando se trata de variedades sustancialmente equivalentes. Adems, han expresado por diversas razones existen mercados que requieren la discriminacin entre productos tansgnicos y no transgnicos, y la industria semillera repetir esta decisin. A pesar de los derechos que posee el consumidor argentino, es sorprendente comprobar que su conocimiento sobre los OGM es prcticamente nulo. Muchos ni siquiera saben lo que significa transgnico. Otros lo saben o algo han odo hablar de este tema en alguna parte, pero, en general, el tema no parece ser discutido, por ejemplo en una mesa de caf, en el hogar o en las escuelas. Este hecho habla de una falta de difusin adecuada por parte de las autoridades. Hasta hace un tiempo en el portal <ecodigital.com.ar> se public una noticia que contena posibles fuentes de OGM en las gndolas de supermercados. Entre ellas, se mencionaban alimentos como carnes, pastas, condimentos, cereales, golosinas, productos de panadera y otros como leche, chocolate, jugos, etctera. Dnde est el consumidor? Se interesa por el tema o slo ha adoptado la postura del no lo comas sin saber por qu? La actitud de muchos consumidores responde a un factor de confianza en algn referente. Dicho referente vara segn la zona geogrfica pero ante escndalos como lo sucedido en Europa con el mal de la vaca loca, el pblico suele perder la confianza en las autoridades de regulacin, los cientficos y los polticos. En nuestro pas, las encuestas revelan un elevadsimo porcentaje de poblacin a favor del etiquetado de OGM, ya que es un derecho a la informacin que les otorga la Constitucin Nacional y la ley de defensa da les derechos del consumidor.
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TRANGNICOS... PUEDEN ACABAR CON EL HAMBRE DEL MUNDO?
Cabe preguntarse si la solucin del hambre del mundo est realmente en manos de la ciencia. Rubn Vallejos, investigador del Centro de Estudios fotosintticos y Bioqumicos (CEFOBI), en su artculo Bioseguridad de cultivos sostiene que el hambre que sufren los 800 millones de seres humanos actualmente, no es consecuencia de una insuficiente produccin mundial de alimentos, sino de consideraciones polticas y socioeconmicas. El tema del hambre que se produce en la Argentina que por cierto no es el pas ms pobre del mundo, concentrada principalmente en el conurbano bonaerense y las provincias del noroeste, no es ni ser preocupacin de las organizaciones internacionales. Ms bien debera ser preocupacin de los propios gobernantes locales.
LA GENTICA Y LA TICA
Desde que la ingeniera gentica comenz a entrometerse en los organismos vivientes, revelando no slo sus secretos, sino tambin disponiendo de los mismos, las cuestiones ticas han ingresado en un terreno candente. Nunca la tica se separa de la ciencia y, de hecho, es una materia ms en muchas carreras cientficas alrededor del mundo. Tiene el hombre derecho a modificar formas de vida de manera radical? Es la constitucin gentica de los seres vivos herencia comn de todos, o puede ser adquirida por las corporaciones y de esta manera convertirse en propiedad privada de algunos? Estas y muchas otras preguntas son las que se han formulado ecologistas, cientficos, fundamentalistas, conservacionistas y todos aquellos que no observan con buenos ojos la manipulacin gentica y, por extensin, la clonacin de las especies vivientes. Tras la fusin de las empresas de agroqumicos y semillas con las farmacuticas, las restricciones y medidas de seguridad fueron perdiendo fuerza. En Bioseguridad de los cultivos, Rubn Vallejos escribe que actualmente la situacin ha cambiado drsticamente por la biotecnologa, que comenz a introducir vacunas, tests de diagnstico de protenas recombinantes, cultivos transgnicos, terapia gnica, etc. Muchos cientficos se han vuelto empresarios fundando nuevas compaas biotecnolgicas, o involucrndose en la industria. Por otra parte, el patentamiento de OGM implica una concepcin impensable para muchos. No solamente hoy en da las semillas trangnicas estn protegidas por patentes, sino tambin los animales. A tal efecto, en Estados Unidos en 1998 se patent un ratn
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transgenico, el oncomouse, sensible a sustancias cancergenas. Este sistema de patentes ha engendrado un fenmeno de concentracin de las principales firmas agroqumicas y es seriamente discutido. En efecto, el ser vivo patentado es difcilmente concebible. Una consecuencia lgica de las implicancias no slo ticas sino tambin religiosas de los transgnicos y posterior comercializacin de OGM recae, una vez ms, en el etiquetado de los alimentos. Hemos imaginado alguna vez qu podra opinar un musulmn que no sepa que est ingiriendo un gen de cerdo, por ejemplo? Han pensado en ellos las empresas? Cmo asumen esas razones vlidas y legtimas de determinados sectores de la poblacin si no se etiquetan los productos? La experta en ecologa, Dina Foguelman, manifiesta que las empresas no dan ninguna respuesta a esas inquietudes y dan por sentado que en un pblico consumidor no educado, ni entrenado a controlar los alimentos, ms an en un pblico empobrecido cuyo problema es comer lo que sea, pasan a segundo trmino razones de riesgo para la salud, a menos que sean absolutamente evidentes y con mas razn prevenciones ticas o religiosas.
LA TECNOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE
La revelacin de los numerosos mtodos mediante los cuales las clulas transfieren informacin gentica, abri el camino para que los bilogos moleculares desarrollaran sus propias manipulaciones genticas. Este campo suele llamarse simplemente ADN recombinante. Las tcnicas bsicas ms importantes son: Mtodos para obtener fragmentos especficos y uniformes de ADN; Clonacin de los mismos, posibilitando la produccin en gran cantidad y pureza; Hibridacin de cidos nucleicos para identificar segmentos especficos de ADN y ARN, y para estimar similitudes; Secuenciacin de ADN, la determinacin del orden exacto de los nucletidos en un segmento dado.
PCR: REACCIN EN LA CADENA DE LA POLIMERASA
La PCR es una metodologa que se utiliza para obtener ADN rpidamente, sin necesidad de clonarlo y en buenas cantidades y pureza. Gracias a la diversidad de microorganismos que nos rodean, podemos amplificar un fragmento de ADN mediante la utilizacin de enzi-
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mas. Existen numerosas especies de bacterias y arqueas que habitan en medios acuticos, a ms de 80 C e incluso a 100 C. Por lo tanto, cada una de sus enzimas son capaces de soportar tales temperaturas, sin perder su actividad. Puesto que son seres vivos como cualquier otro, poseen ADN polimerasas, o sea, protenas implicadas en la sntesis de ADN a partir de un molde del mismo cido nucleico. Contar con el ADN polimerasa termo resistente clonada en Escherichia coli, ha abaratado los costos, ya que puede generarse a gran escala. De esta manera, si nosotros colocamos un genoma cualquiera, y lo calentamos a 90 C, se producir la desnaturalizacin, separndose las dos cadenas; si a su vez agregamos en exceso dos oligmeros (que son ADN de simple cadena de entre 15 y 30 nucletidos), llamados primer (o cebadores); cada uno de ellos complementario a un extremo del gen que deseamos amplificar. Luego, bajamos la temperatura de la mezcla a unos 50 C, se producir la hibridacin entre cada primer y su zona complementaria en la cadena de ADN genmica, en forma ms frecuente que la renaturalizacin de la molcula problema, simplemente por una cuestin de tamaos y cantidades. Si despus elevamos la temperatura a 72 C, adems de tambin colocar en la mezcla original de la ADN polimerasa (TaqPol), nucletidos libres, se producir una sntesis de ADN a partir de cada primer y tomando como molde la zona del genoma deseada. Este ciclo puede ser repetido unas 40 veces, y as podemos amplificar en una forma exponencial (cada cadena generar dos y as sucesivamente) el gen deseado, en poco menos de dos horas, de acuerdo con cun largo sea ste. Mediante el uso de esta tcnica, se han puesto a punto protocolos de secuenciacin. Para tal fin, se coloca un tubo de ADN a secuenciar y un nico primer complementario al inicio de la regin (donde s conocemos los datos de la secuencia). Luego se hacen cuatro reacciones de PCR, con la diferencia de que uno de los cuatro nucletidos en cada caso ser una mezcla entre molculas normales y otros modificadas qumicamente de manera que no pueda proseguir la polimerizacin. As, cuando stas se incorporen, los fragmentos dejarn de crecer en longitud. Finalmente, se siembran cuatro muestras en una electroforesis, y simplemente leyendo el resultado, ser posible conocer la secuencia del fragmento en cuestin.
ELECTROFORESIS
Los cidos nucleicos son molculas de pH neutros, o ligeramente alcalinos o cidos. stos
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presentan una carga electrosttica de carcter negativo. Esto se debe a la presencia de los grupos fosfatos que se unen a los monmeros de azcar entre s, tanto ribosa para el ARN y desoxirribosa para el ADN. Puesto que la carga neta es igual para cada nucletido en particular (A, G, C, o T), a medida que sea ms larga la molcula tendr mayor masa, y poseer ms carga compensndose entre s ambos factores. Si colocamos una muestra de ADN de diferentes tamaos dentro de un gel (que se confecciona con un polisacrido proveniente de ciertas algas denominado agarosa, cuyo tenor de poro puede ser controlado de acuerdo a la cantidad que se coloque) o sustancia porosa bajo la accin de un campo elctrico, dichas molculas migrarn hacia el polo positivo (por tener carga negativa), a una velocidad dependiente de su masa. Es decir, que la mezcla original se separar a lo largo del gel, de manera que los segmentos ms pequeos se encontrarn ms cerca del polo positivo (pues les es ms fcil avanzar entre los poros), mientras que los mayores quedarn ms cerca de la zona de donde se sembraron. A su vez, si al inicio y al lado se coloca una mezcla de ADN de tamao conocido, fcilmente podr estimarse la longitud en pares de bases de nuestro segmento problema. Y no slo eso, sino que cortando la porcin del gel donde stos se hallan, y luego utilizando simples protocolos, podremos extraer cada cido nucleico y almacenarlo en forma pura del resto. Los cidos nucleicos no son visibles, es necesario revelarlos en el gel con la utilizacin de un compuesto qumico denominado Bromuro de Etidio, que tiene la particularidad de intercalarse entre las bases del ADN y ARN; emitiendo luz naranja o violeta, al ser colocados bajo lmpara de luz ultravioleta. El resultado final ser un rectngulo de agarosa de alrededor de 0,5-1cm de espesor; y con un largo y ancho que vara segn las necesidades (desde 5 cm x 10, hasta dimensiones mtricas) conteniendo en su zona superior (cercana al polo negativo) fosos o agujeros, llamadas calles, donde se colocan las muestras.
GENERACIN DE FRAGMENTOS DE ADN
Las herramientas para aislar segmentos especficos de ADN de cualquier tejido vivo, fueron suministradas por los mismos organismos. Hay que recordar que los obreros de la vida son las enzimas, protenas generalmente globulares que actan como catalizadores de reacciones qumicas especficas. Pues bien, un conjunto de ellas, abundantes en las bacterias, presentan una actividad particular, consistente en cortar la doble cadena de molcula de ADN al reconocer o leer secuencias definidas dentro de sta. En biologa se
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las conoce como enzimas de restriccin, pero popularmente se las denomin tijeras moleculares, funcionando en los microorganismos que las posean naturalmente como sistema de proteccin a la invasin de ADN extraos e invasores, como virus, protegiendo su propio genoma por modificacin de los nucletidos involucrados en las secuencias de recombinacin. Por ejemplo, una enzima llamada EcoR 1, parte la molcula de ADN en la secuencia GAATTC, protegindose la bacteria productora con una enzima metiladora especfica que aade un metilo a una de las adeninas de la secuencia. No todas ellas hacen cortes rectos en el medio de la regin reconocida, como Hpa 1. Algunas, incluyendo a EcoR 1, cortan la cadena con algunos nucletidos de diferencia, dejando extremos cohesivos o pegajosos. Normalmente, estas secuencias son palndromos, es decir que se leen de igual manera la cadena superior, de izquierda a derecha, que la anterior de derecha a izquierda. Los extremos son pegajosos porque las bases que quedan sueltas aparean entre s en orden perfecto. Por ello, estos extremos pueden volver a unirse entre s, o con cualquier otro segmento de ADN en ms de noventa secuencias de reconocimiento distintas. Ms adelante, otro conjunto de enzimas cerr el crculo que permiti realizar una gran cantidad de operaciones genticas. Las ms importantes son las que pertenecen a la clase de polimerasas, que sintetizan un ADN o ARN, utilizando a otro cido nucleico como molde, al que efectivamente copian y reproducen. Otro grupo particular e importante es el formado por las ligasas, protenas capaces de catalizar la unin entre dos molculas de ADN con extremos compatibles, es decir, ambos romos, o pegajosos producto de la digestin con la misma enzima de restriccin.
PLSMIDOS COMO VECTORES DE CLONADO
Los plsmidos son molculas de ADN circular de doble cadena que normalmente se encuentran en bacterias y en algunos eucariontes unicelulares. Los plsmidos naturales tienen la capacidad de replicarse autnomamente y nicamente dentro de la clula hospedadora adecuada. La especificidad de la replicacin est dada por los genes que se encuentran en el plsmido alrededor del origen de replicacin. Adems, estos vectores habitualmente portan genes que le confieren al hospedador resistencia a antibiticos tales como la tetraciclina y ampicilina. La resistencia a antibiticos se ha utilizado como una forma de seleccionar las clulas hospedadoras que contienen el vector de aquellas que no lo presentan. El tamao de los plsmidos est entre el rango de 5 kbp a 40 kbp. Dado su
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menor tamao con respecto al ADN bacteriano pueden ser fcilmente separados de ste. Uno de los vectores ms estudiados es el plsmido pBR322, que se obtuvo por modificaciones genticas de plsmidos naturales. En particular, este plsmido presenta un origen de replicacin y sitios de corte para distintas endonucleasas de restriccin dentro de las cuales el ADN extrao puede insertarse. Algunos de stos sitios de restriccin se encuentran dentro de genes propios del plsmido que le confieren resistencia a antibitico como la ampicilina y la tetraciclina. Cuando el ADN extrao se inserta en un sitio de restriccin que est incluido en uno de estos genes, el gen frecuentemente se inactiva. De forma tal que, un fragmento de ADN insertado en un sitio de restriccin incluido en el gen de resistencia a la ampicilina, llevara a la prdida de dicha resistencia y esta observacin indicara que efectivamente el inserto de ADN se incorpor en el sitio de restriccin deseado. Adems, posee un tamao pequeo que facilita su entrada a las bacterias. Los plsmidos pueden ser introducidos en las bacterias por un proceso llamado transformacin. Para ello las bacterias deben ser sensibilizadas a travs del tratamiento con una solucin de cloruro de calcio a 4 C en un procedimiento que se denomina preparacin de clulas competentes. Posteriormente, se incuban con el plsmido a 4 C hasta que la mezcla se estabiliza, y luego se produce un shock trmico a 37-43 C, con lo que las clulas se hacen permeables a pequeas molculas de ADN. Una vez incorporado el ADN en el hospedador, es necesaria la existencia de un mtodo que nos permita identificar las bacterias transformadas con el vector recombinante que no lo hayan incorporado. La estrategia habitual consiste en utilizar un vector que contenga un gen que la clula hospedadora normalmente no tiene, y que requiere para el crecimiento bajo condiciones especficas (por ejemplo un gen de resistencia a un antibitico en particular).
TCNICAS PARA HACER PLANTAS TRANSGNICAS
La utilizacin de plantas transgnicas en programas de Mejora se va incrementando da a da. Algunos expertos han llegado incluso a predecir que hacia el ao 2005, el 25% de la produccin agrcola en Europa lo ser de plantas transgnicas. En los programas de Mejora de Plantas interesa en ocasiones incorporar un gen determinado a una cierta variedad para dotarla, por ejemplo, de resistencia a un patgeno o darle cierta calidad. El mtodo convencional consiste en realizar un primer cruzamiento con un individuo que lleve el gen deseado y luego, mediante un proceso continua-
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do de cruzamientos con individuos del genotipo original (retrocruzamiento) y seleccin para el carcter (gen) que se quiere introducir, se puede llegar a obtener tras un proceso ms o menos largo individuos con el genotipo original al que se ha aadido el gen deseado. Este mtodo convencional tiene varios inconvenientes, como son las muchas generaciones necesarias y en ocasiones la limitacin que supone la reproduccin sexual cuando lo que interesa es introducir el gen de otra especie, y con ms razn si esta otra especie ni siquiera pertenece al reino vegetal sino que se trata de una especie bacteriana o animal!
LA INGENIERA GENTICA EN LA MEJORA DE PLANTAS
Las tcnicas de ingeniera gentica suponen un mtodo alternativo de incorporacin de un gen deseado en el genoma de una planta mediante la obtencin de plantas transgnicas. No obstante, no debe olvidarse que, una vez introducido el gen deseado, los procesos de seleccin son similares a los empleados en los mtodos convencionales de la Mejora. La transgnesis o transferencia gnica horizontal en plantas se puede realizar utilizando el ADN-T (transferible) del plsmido Ti (inductor de transformacin) de la bacteria Agrobacterium tumefaciens que produce los tumores o agallas en las heridas que se originan en las plantas. En el proceso de infeccin, el ADN-T tiene la propiedad de poder pasar de la clula bacteriana a las clulas de las plantas, incorporndose al ADN de los cromosomas de stas. Dicho de forma muy esquemtica, la manipulacin gentica en este caso consiste en incorporar al ADN-T el gen que se desee introducir en la planta. La mayor eficacia de la tcnica se consigue utilizando cultivos celulares de hoja o de tallo que son capaces de regenerar plantas adultas completas a partir de clulas que han sido genticamente modificadas (transformadas) usando como vector el ADN-T. Otras tcnicas de transferencia de genes consisten en la introduccin del ADN en protoplastos (clulas desprovistas de la pared celulsica por medios enzimticos o qumicos) utilizando el polietilenglicol o la electroporacin. Tambin se puede introducir el ADN en las clulas por bombardeo con microproyectiles (biobalstica) formados por partculas de oro o tungsteno recubiertas con ADN del gen deseado. En cualquier caso, despus se induce la regeneracin de la planta adulta a partir de los protoplastos o de las clulas tratadas. Con las tcnicas mencionadas (especialmente utilizando el ADN-T del plsmido Ti de Agrobacterium tumefaciens) se han obtenido plantas resistentes a virus, a insectos, a herbicidas, etc. Por ejemplo, desde hace ms de treinta aos se viene utilizando en agri-
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cultura y jardinera un insecticida especialmente eficaz contra las larvas de los lepidpteros, cuya eficacia reside en la protena Bt producida por la bacteria Bacillus thuringiensis. Pues bien, la ingeniera gentica ha permitido identificar y aislar el gen bacteriano que codifica para la protena Bt y se ha logrado transferirlo a plantas transgnicas de algodn, patata, tomate y maz, hacindolas resistentes a los insectos. Otro caso interesante ha sido la obtencin de plantas transgnicas de tomate, soja, algodn, colza, etc., a las que se les ha incorporado un gen que produce la resistencia al principio activo (por ejemplo, el glifosato) de los herbicidas de amplio espectro, lo cual permite eliminar las malas hierbas de especies de hoja ancha y crecimiento cespitoso tratando los campos con herbicidas que no daan al cultivo. Tambin se han obtenido plantas transgnicas de tomate con genes que alargan el periodo de conservacin y almacenamiento evitando la sntesis de la poligalacturonasa que produce el reblandecimiento del fruto. Por ltimo, podran citarse tambin las plantas transgnicas utilizadas como biorreactores para producir lpidos, hidratos de carbono, polipptidos farmacuticos o enzimas industriales.
PLAN DE TRABAJO EXPERIMENTAL
Metodologas y resultados Nuestro objetivo consisti en obtener una bacteria recombinante utilizando las herramientas de ingeniera gentica empleadas en el desarrollo de OGM. Para ello, lo que hicimos fue utilizar una bacteria, Escherichia Coli, y por medio de un vector de clonado cambiamos su conformacin gentica. En primer lugar, se amplific un fragmento de ADN a partir de un ADNc sintetizado especficamente a partir de clulas infectadas con el Virus Junn (VJ). Este virus posee dos segmentos genmicos, denominados S (small, 3500 nt), y L (large, 7000nt). La familia viral a la cual corresponde VJ es la Arenaviridae, que cuenta con 19 integrantes reconocidos en el mundo. Como tienen una amplia distribucin, se comenzaron a estudiar y se dividieron en dos grandes grupos: Arenavirus del Nuevo Mundo, y Arenavirus del Viejo Mundo. La mayora de los miembros de la familia se encuentran en el primer grupo, as como tambin VJ, que a su vez est inmerso en el denominado complejo Tacaribe, el virus prototipo del Nuevo Mundo, que no presenta patogenicidad para el hombre. En cambio, el VJ es el agente etiolgico de la Fiebre
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Hemorrgica Argentina. Dentro del marco de un trabajo de investigacin de la Universidad Nacional de Quilmes, en el cual se busca determinar la secuencia viral de cepas con distinto grado de virulencia (de mayor a menor patogenicidad), se obtuvo un producto de 900 pb pertenecientes a la zona central del ARN L de la cepa viral que es utilizada como vacuna (la de menor virulencia): Candid #1 (Cd#1) y que codifica para una porcin de la polimerasa viral. Seguidamente, este producto de PCR fue purificado y clonado en un plsmido, pZErO-2 (Invitrogene), previa digestin del mismo con endonucleasas de restriccin, y con la enzima ligasa generamos un plsmido recombinante poseedor del ADN en estudio. Una vez concluido el paso anterior, transformamos bacterias con este plsmido para generar grandes cantidades del mismo y poder as tener nuestro ADN de inters para posteriores ensayos. Luego, las bacterias que crecieron fueron analizadas, para comprobar si contenan la construccin recombinante en su constitucin genmica (Figura 1).
Figura 1. Construcciones plasmdicas obtenidas. Se muestra el inserto clonado en las dos orientaciones posibles (denominadas 1 y 2).
Anlisis de la secuencia Para corroborar la identidad del fragmento clonado, se realiz la secuenciacin del mismo mediante el mtodo de Sanger. Luego enviamos la informacin obtenida a la base de datos con la cual trabajamos, que es el BLAST (Basic Local Aligment Sequense Tool), donde pudimos corroborar que se trataba de Virus Junn, ya que posea mayor homologa con la cepa recientemente conocida XJ#13, y tambin con otros integrantes del Nuevo Mundo, tal como se esperaba. Una menor homologa fue observada con los integrantes
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del Viejo Mundo. La comparacin de secuencias con las de otros aislamientos por medio del programa Clustal X y la construccin de un dendograma (Figura 2) permiti agrupar al virus en estudio dentro de la familia compuesta por representantes de todo el planeta.
Figura 2. Dendograma realizado entre las distintas secuencias de arenavirus.
CONCLUSIN
Hoy en da no se sabe a ciencia cierta si los alimentos ordenados prolijamente en las gndolas de los supermercados de nuestro barrio contienen OGM en su composicin y en qu proporcin. En cuanto a esto ltimo, se sabe que los aditivos protenicos y las harinas son los que tienen mayor proporcin de modificaciones, mientras que los aceites son prcticamente iguales a los convencionales, dice Dina Foguelman, vicepresidenta del MAPO (Movimiento Argentino para la Produccin Orgnica). Ante la pregunta clave de cmo aconsejar a un consumidor acerca de los OGM?, es claro que tambin surgirn respuestas contradictorias. Con respecto al etiquetado de los OGM, en nuestro pas para muchos es cuestin de tiempo. En este punto es precisamente donde debe profundizarse la difusin de informacin al consumidor, que siempre va a ignorar lo que es un OGM, si las autoridades y las empresas no se lo explican, para que sea capaz de tomar una decisin basada en el conocimiento y no en la ignorancia. Alberto Daz, investigador y docente de la Universidad Nacional de Quilmes sugiere que los lugares de salud y los mdicos respondan a esas inquietudes, pero
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primero hay que ensearles estos temas a los mdicos generalistas. Los nutricionistas han hecho un importante trabajo sobre esto. Daz ha participado de las reuniones de difusin de informacin sobre biotecnologa en diferentes lugares donde el tema principal era el de los alimentos, la mayor parte eran nutricionistas que estaban preocupados por saber si las semillas transgnicas afectan a la calidad de la comida, la nutricin y la salud. Los conceptos de participar y educar son muy importantes para conocer y poder elegir qu hacer con respecto a los OGM. Debe destacarse que hay una escasez de fondos pblicos para promover investigaciones y estudios ecolgicos y de mercado. Ni el consumidor, ni el productor que adopt estas tecnologas contarn con las herramientas necesarias para una opinin concreta acerca del tema, observando que la informacin que proporcionan los medios de comunicacin representa slo las dos posiciones extremas. Muchos opinan que el debate sobre los transgnicos va a disminuir cuando el pblico, (y no las empresas o productores solamente) comience a percibir beneficios. Hay que ver cules transgnicos s, y cules no. Se ha generado una guerra poco til porque algunos transgnicos pueden ser utilizados sin perjudicarnos: si hay un desarrollo que permita curar la diabetes, el SIDA, el cncer o cualquier otra enfermedad, problemas de salinidad o riego, esto puede ser muy til. Pero hay que tener en cuenta todas las variantes, incluso las de largo plazo. Experimentalmente pudimos poner a prueba ciertas herramientas de generacin de transgnesis. Como los estudios realizados demostraron, la aplicacin de estas metodologas es de suma utilidad para el progreso del hombre. Pero este avance debe ser muy responsable incorporando en sus beneficios a toda la poblacin de manera equitativa e informando para permitir la libre decisin en la utilizacin de los productos generados.
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Bases moleculares del cncer: nuevas estrategias antitumorales

Georgina Emmanuelli Tutora: Giselle Ripoll
INTRODUCCIN
El trmino cncer abarca un grupo de trastornos genticos, capacitando a la o las clulas portadoras de estos trastornos una proliferacin desmedida que ignora los patrones de crecimiento presentes en el ambiente circundante. Si bien en el organismo humano existe un control que mantiene un equilibrio entre las tasas de crecimiento de las clulas nuevas y la muerte de las clulas viejas (apoptosis), el cncer es una patologa que logra evadir tal control, permitiendo que una clula crezca y se reproduzca de manera descontrolada. Para la mayora de las personas el trmino cncer es sinnimo de tumor, y ambas palabras se asocian con una enfermedad que da lugar a una temible situacin personal o familiar. Sin embargo, el significado mdico de la palabra tumor no se corresponde con esta visin. Estrictamente, la palabra tumor designa cualquier crecimiento anormal de clulas, ya sean de caractersticas malignas o benignas. Las inflamaciones, como sucede cuando se generan abscesos, la acumulacin de sangre fuera de los vasos sanguneos con la aparicin de hematomas, las malformaciones congnitas y tambin el aumento en la frecuencia con que determinadas clulas se reproducen, son algunas de las causas que dan origen a un tumor. Esta ltima condicin se define con el trmino neoplasia (palabra proveniente de neo, nuevo, agregado y plasia proliferacin) referida a un proceso cuyo resultado (el tumor) se agrega a las estructuras normales. Las neoplasias se catalogan bsicamente en dos grupos: benignas y malignas. En las neoplasias benignas, las clulas se dividen lentamente, son parecidas a las normales, los tejidos mantienen su disposicin ordenada y el tumor est siempre restringido a la zona donde se inici la proliferacin, presentando un lmite neto con los tejidos que lo rodean. Por el contrario, en las neoplasias malignas las clulas se dividen rpidamente y son poco diferenciadas remedando slo vagamente a las clulas de los tejidos normales. En este caso las clulas se infiltran e invaden los tejidos adyacentes, dando lugar a la aparicin de metstasis, esto es, pequeos focos tumorales en otros lugares del organismo.
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Sin tratamiento alguno, las neoplasias malignas terminan destruyendo el organismo en el que se desarrollan. Este tipo tumoral corresponde al conjunto de enfermedades que se agrupan bajo la denominacin de cncer. En el cncer se produce la proliferacin descontrolada de las clulas que han escapado al crecimiento en armona con el resto del organismo. Sus causas residen en los complejos procesos que regulan la proliferacin y diferenciacin celular. Es por este motivo que, en la actualidad, los investigadores concentran sus esfuerzos sobre todo en los procesos moleculares involucrados en el desarrollo y expansin de los diferentes tipos de cncer. El cncer ocupa el segundo lugar en frecuencia como causa de muerte a nivel global, ya que slo es superado por enfermedades cardacas. Se estima que hay ms de 10 millones de casos nuevos por ao en el mundo y que en el mismo perodo, ms de 7 millones de muertes son causadas por esta enfermedad. Existen diversos tipos de carcingenos o factores determinantes que favorecen la transformacin maligna. Se cree que 85% de los cnceres se relacionan con el medio. Son cientos los productos qumicos con capacidad carcinognica que nos afectan a travs del aire, el agua y la dieta. Su importancia es crucial, puesto que muchos de ellos se relacionan con los hbitos personales y las exposiciones profesionales. Mediante el uso de medicamentos no txicos que corrigen el comportamiento anmalo de las clulas cancerosas, y una nueva generacin de vacunas oncolgicas, sera posible combatir focos residuales de la enfermedad. Aunque hoy en da, existen mtodos convencionales para el tratamiento de esta enfermedad, se estn realizando estudios para obtener nuevos medicamentos mas efectivos y menos txicos de uso prolongado, que se adicionaran a las terapias preexistentes.
SURGIMIENTO Y DESARROLLO DE UN TUMOR
Surgimiento gentico del cncer El origen del cncer se ubica en el ADN celular. Todas las clulas normales poseen genes cuya informacin regula y determina todas las funciones celulares, entre otras, el crecimiento y la diferenciacin celular. A los genes involucrados en estas funciones se los conoce como protooncogenes y su integridad es primordial para el funcionamiento normal de los tejidos. El desarrollo y la acumulacin de varias lesiones genticas en el ADN celular
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provoca la alteracin de las funciones de regulacin de estos protooncogenes (Figura 1). En consecuencia, estos genes mutados, conocidos como oncogenes, le confieren a la clula propiedades nuevas que la capacitan para proliferar de manera diferente al resto de las clulas normales, dotndolas con caractersticas erosivas e invasivas.
Figura 1. Los oncogenes y el surgimiento del cncer
Caractersticas biolgicas generales de las clulas neoplsicas Pese a sus diferencias individuales, las clulas cancerosas comparten algunas caractersticas, tanto celulares como de comportamiento (Figura 2). En las clulas neoplsicas se ve alterada la membrana celular, lo que afecta el desplazamiento de lquido hacia el interior y el exterior de la clula. La membrana contiene, adems, antgenos de especificidad tumoral, en virtud de los cuales la clula resulta inmunolgicamente diferente de todas sus predecesoras normales. Su ncleo suele ser grande e irregular. Los nucleolos, estructuras que contienen el ARN celular, aumentan de tamao y nmero, por la mayor sntesis de dicho cido. Ahora bien, para comprender la historia natural del cncer se deben conocer algunos rasgos biolgicos caractersticos e indispensables para el crecimiento y desarrollo de las clulas neoplsicas. Por un lado, presentan una caracterstica comn, la clonalidad. sta debe entenderse como un proceso dinmico. En el desarrollo de una neoplasia, el genotipo y el fenotipo tumorales no son constantes, sino que presentan cambios evoluti-
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Figura 2. Caractersticas principales de las clulas neoplsicas.
vos, como por ejemplo su capacidad de invasin local, de producir metstasis, sus cambios de antigenicidad y la resistencia farmacolgica a citostticos. Cabe citar tambin que las clulas cancerosas son ms mviles que las normales del mismo tipo citolgico. La migracin de las clulas neoplsicas es ms rpida y repetida. Por otra parte, se encuentra la alteracin de la diferenciacin celular. En este proceso, conocido como desdiferenciacin o anaplasia, los tumores no conservan la arquitectura tisular normal, aunque tiendan a imitar histolgicamente al tejido a partir del cual se originaron. Las clulas neoplsicas presentan irregularidades nucleares y citoplasmticas, as como mitosis atpicas y otras anomalas que definen su grado de anaplasia. Cuanto ms alto sea ste, peor pronstico presentar el tumor. Crecimiento El desarrollo de la enfermedad neoplsica se caracteriza por una evolucin polifsica que se inicia con la transformacin de una clula (o un grupo celular) que concluye con un crecimiento descontrolado y la posible destruccin del husped. De un hecho al otro se debe considerar una serie de procesos que responden al crecimiento y desarrollo del tumor. En consecuencia podemos citar una etapa subclnica, una etapa de crecimiento celular, seguida por la angiognesis tumoral, la diseminacin a distancia (linftica o hematgena), derivando finalmente con la metstasis. Perodo subclnico El diagnstico clnico del cncer suele llevarse a cabo cuando el tumor alcanza un deter-
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minado tamao. Para ello es necesario que transcurra un lapso de tiempo conocido como perodo subclnico. Inicialmente, la clula cancerosa tiene un dimetro de 10 micrones (0,001 mm). En un clculo terico luego de 20 duplicaciones aproximadamente, el ndulo tumoral tiene 1 mm de dimetro, 1 mg de peso y un milln de clulas. Luego de 30 duplicaciones tumorales, el dimetro del ndulo alcanza a medir 1 cm, pesar 1 gr y estar compuesto por 1.000 millones de clulas. Es posible, en este momento, un diagnstico precoz. Las 10 duplicaciones posteriores generan una masa de 1 kg. sta es an compatible con la vida de husped, pero su equilibrio es altamente inestable, ya que unas cinco duplicaciones ms provocaran un tumor de aproximadamente 35 kg. A pesar de que siguiendo este patrn, la evolucin de un cncer abandonado a su evolucin espontnea equivaldra al tiempo necesario para que se produzcan 40 duplicaciones, se sabe que, en realidad un tumor sufre una explosin duplicativa al comienzo y luego esa velocidad disminuye rpidamente ya que la cantidad de clulas que se duplican es levemente mayor a las que mueren por causas diversas. Es por eso que este crecimiento explosivo en pocas generaciones nunca se da, debido a la cintica de crecimiento de las clulas cancerosas. La mitad de todo el proceso ocurre en una fase pocas veces detectable clnicamente. Cintica de crecimiento de las clulas tumorales Todas las definiciones existentes de cncer tienen como factor comn el crecimiento anrquico de las clulas, no sujeto a las leyes normales del organismo. Sin embargo, las clulas dentro de una masa tumoral, siguen una serie de hechos dinmicos de crecimiento, declinacin, movimiento y control de la poblacin y del ciclo celular. El conjunto de estos sucesos recibe el nombre de cintica celular. En cada tumor se pueden encontrar clulas en estado de proliferacin; clulas en reposo detenidas en G0 (fase G1 prolongada), y clulas que ni proliferan, ni pueden entrar en el ciclo celular (clulas no divisibles), condenadas a apoptosis, pero que producen efecto masa. En las fases iniciales del crecimiento tumoral, hay una fraccin de clulas proliferantes, de modo que la fraccin de crecimiento es alta. Se define como fraccin de crecimiento a la cantidad de clulas que se encuentran en ciclo celular (intervalo entre el punto medio de la mitosis de una clula y el punto medio de la mitosis siguiente de la misma clula) respecto a la cantidad total de clulas que integran el tumor. A medida que el tumor adquiere mayor masa la fraccin de crecimiento disminuye. Habitualmente, en las metstasis la fraccin de crecimiento es mayor que en el tumor primario.
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Angiognesis tumoral Si bien estos agentes son importantes, para que el tumor pueda desarrollarse es indispensable la creacin de una estroma que le d sustento y soporte. ste se origina a travs de un proceso denominado angiognesis. Originalmente, el tumor se desarrolla alimentando sus clulas con nutrientes a travs de difusin. Pero cuando la masa tumoral alcanza un tamao determinado (prximo a los 0,5 mm), el pasaje de nutrientes no es suficiente para alimentar a las clulas neoplsicas. Es as como se inicia el proceso de angiognesis tumoral donde los tumores reclutan clulas endoteliales para formar nuevos vasos. Este es el paso clave que determina el xito o no del desarrollo tumoral. El tumor secreta, o induce la secrecin por parte de clulas adyacentes, de una serie de factores proangiognicos, como el VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor) y el bFGF (basic Fribroblast Growth Factor). Estas sustancias actan adems sobre un grupo de clulas previamente reclutadas, provenientes de la mdula sea, haciendo que stas se transformen tambin en vasos sanguneos. La vascularizacin hace que cambien las perspectivas del tumor. Se convierte en clnicamente detectable, sintomtico, puede hacer metstasis y, en consecuencia, aumenta su grado de malignidad.
INVASIN Y METSTASIS
Invasin local Inicialmente, la neoplasia crece y aumenta su tamao, invadiendo slo las estructuras adyacentes, sin diseminarse a zonas alejadas del tumor original. La falta de cohesin entre las clulas tumorales ayuda a explicar este proceso y la tendencia de los cnceres a propagarse e introducirse en tejidos normales adyacentes al foco patolgico primario. En trminos generales, una clula tumoral tiene seis veces menor poder de adherencia que la clula normal. En circunstancias normales, las clulas crecen y se desplazan hasta encontrar un obstculo, con lo que se detiene su curso y, simultneamente, la sntesis de ADN. Es decir, la densidad celular constituye un freno para la expansin celular. Sin embargo, las clulas cancerosas no presentan tal inhibicin, por lo que continan proliferando, fueran cuales fueran las restricciones de presin en su lugar de desarrollo. Existe, adems, una ausencia de gua de contacto en las clulas cancerosas. Las clulas normales crecen siguiendo una red arquitectnica, que conserva un orden estructural de crecimiento. Las
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clulas neoplsicas se desarrollan constituyendo masas desordenadas, con la libertad de organizarse de cualquier modo. Un factor importante que facilita la invasin local es la secrecin, por parte de las clulas tumorales, de factores enzimticos y txicos. Los primeros actan disminuyendo la adhesividad celular y permitiendo que productos celulares neoplsicos penetren en las clulas normales. Adems, algunas de las enzimas secretadas son destructoras especficas (lticas), que destruyen el tejido circundante. La secrecin de sustancias txicas, una vez fagocitadas por las clulas normales, inducen la alteracin local y el crecimiento tumoral. La resistencia a la invasin depende de la estructura del tejido en cuestin. Aquellas estructuras constituidas por gran cantidad de tejido elstico, como el cartlago, los tendones, los ligamentos, los vasos linfticos y las venas son ms resistentes a la invasin. No ocurre lo mismo con los tejidos de sostn, los msculos y las arterias (dotados de una menor cantidad de tejido elstico) que son invadidas con mayor frecuencia. Los tumores poseen diferentes caractersticas invasivas que responden a la naturaleza de cada uno de ellos. Hay neoplasias con un alto poder de invasin local, mientras que su capacidad de metstasis es limitada. Otros tipos de tumores, si bien son capaces de invadir localmente, producen metstasis con gran rapidez. Pero, tambin existen algunos tumores que presentan tanto una gran capacidad para invadir localmente como una metstasis precoz. Todas estas caractersticas diferenciales de cada tipo tumoral, inciden ampliamente en el pronostico del paciente. Cadena metastsica (metstasis) La diseminacin y crecimiento de un nuevo foco tumoral a distancia (metstasis) es un complejo proceso que responde a las caractersticas de las clulas tumorales de cada neoplasia. Se calcula que aproximadamente el 0,01% de las clulas cancerosas llegan a establecerse en un sitio distante. Las clulas que logran sobrepasar los obstculos del sistema linftico y circulatorio, llegando a producir metstasis distantes, son lo suficientemente hbiles y adaptables para proliferar a distancia de su origen. Una vez que se produjo el desprendimiento y la invasin, ya sea de una va linftica o hematgena, la clula cancerosa viaja siguiendo el flujo venoso que drena el sitio, hasta alojarse en un rgano, donde dar origen a otros tumores (Figura 3). Cuando la diseminacin es hematgena, es comprensible, que el hgado y los pulmones sean los rganos que ms a menudo presenten focos invasivos, ya que toda el rea portal del drenaje fluye al hgado y toda la sangre de las venas cavas llega a los pulmones.
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Figura 3. Diseminacin de las clulas tumorales.
El proceso de diseminacin comienza cuando la clula maligna se desprende del tejido circundante. En un tejido normal, las clulas se adhieren entre s a una red protenica que rellena el espacio entre ellas. Esta red de protenas se conoce como matriz extracelular. La unin entre las clulas y la matriz extracelular es muy importante para la supervivencia y la comunicacin celular. Una clula necesita este anclaje para llevar a cabo sus principales funciones. Tal conexin es posible por medio de molculas de la superficie celular llamadas integrinas, que se fijan a la matriz extracelular. Slo luego que la clula se une a una superficie es que su ciclo reproductivo comienza. Las clulas que no pueden hallar anclaje, no slo dejan de reproducirse y crecer, sino que entran en apoptosis. La detencin del crecimiento y la reproduccin de las clulas sin anclaje es una de las defensas del cuerpo humano para conservar la integridad de los tejidos. Las clulas normales poseen sitios especficos en los que deben permanecer a fin de sobrevivir. Sin embargo, las clulas cancerosas pueden existir sin estar ancladas. Es posible que en las clulas cancerosas, protenas elaboradas por oncogenes puedan comunicar un mensaje falso en cuanto a que la clula se encuentra anclada cuando no lo est. Esto permite que la clula cancerosa siga creciendo y reproducindose cuando debiese llevar a cabo la apoptosis. Invasin hematgena Una vez que la clula cancerosa se desprende de otras y de la matriz extracelular, debe
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encontrar un medio que le permita autotransportarse. La sangre es un medio ordinario de transporte, dado que los vasos sanguneos a menudo se encuentran cerca y ofrecen vastas oportunidades para el traslado de estas clulas. Una vez en la sangre, la clula cancerosa tiene que combatir contra las defensas corporales e intentar reinsertarse en un nuevo sitio. Menos de 1 de cada 10.000 clulas cancerosas supera la circulacin para crear un tumor nuevo. La circulacin sangunea tiene una funcin importante en determinar hacia dnde viajarn las clulas cancerosas. stas, por lo general, quedan atrapadas en el primer paso de capilares que encuentran en el sentido de la circulacin desde su punto de entrada. A menudo, tales capilares se encuentran en los pulmones, dado que la sangre venosa desoxigenada que abandona muchos rganos vuelve a los pulmones para su reoxigenacin. De los intestinos, la sangre pasa primero al hgado, por lo que las clulas cancerosas que abandonan los intestinos se establecern all. Los pulmones y el hgado son los dos sitios ms frecuentes de metstasis en el cuerpo humano. Una vez en un sitio nuevo, las clulas tienen que repenetrar la membrana basal de los vasos sanguneos y establecerse en el nuevo tejido. No todas las clulas cancerosas tienen los recursos para sobrevivir el recorrido hasta otra zona corporal. Una gran cantidad de clulas cancerosas en circulacin mueren dado que no estn equipadas para superar todo el proceso de metstasis. Las clulas tumorales que llegan a su destino tal vez no puedan reaccionar ante factores orgnicos especficos, y esto tambin las elimina. Ciertos estudios llevan a concluir que algunos tumores slo producen metstasis en rganos especficos. Tales investigaciones muestran que si bien las clulas cancerosas pueden alcanzar todos los rganos del cuerpo, slo poseen afinidad por algunos. Es nicamente cuando las clulas alcanzan dichos rganos especficos que se anclan y reproducen. Invasin linftica Se considera a este proceso la va principal para la propagacin del cncer. A partir de la diseminacin linftica, las clulas neoplsicas se extienden a distancia del tumor de origen. La propagacin ganglionar tiene comienzo con el desprendimiento de las clulas tumorales de la neoplasia original, las cuales llegan a los vasos linfticos, debiendo pasar a travs de la pared capilar, enfrentando la presin hidrodinmica del vaso, que destruye a la mayora de las clulas que llegan all. Una vez que un nmero importante de clulas malignas llegan al vaso linftico, stas son cubiertas por una capa de fibrina, inicindose la formacin de un trombo neoplsico. Posteriormente, el trombo se desprende de la
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pared del vaso, comenzando a circular. All se encuentra con nuevas barreras. Si el trombo supera todas las dificultades, se ancla al vaso, donde comienza a crecer. La difusin hematgena (diseminacin de clulas cancerosas en el torrente sanguneo) se produce generalmente luego de haber invadido por va linftica. Sin embargo, algunos tumores invaden directamente el torrente sanguneo, sin haber invadido los ganglios linfticos previamente. La invasin hematgena guarda relacin con la vascularidad del tumor y las caractersticas del tejido a invadir. Las arterias son raramente invadidas a causa de poseer tejido elstico y muscular grueso en su estructura y una gran presin intraarterial. Ocurre lo contrario con las venas, que son invadidas con mayor frecuencia. Son pocas las clulas malignas capaces de sobrevivir la naturaleza turbulenta de la circulacin arterial o con oxigenacin insuficiente. Las clulas que logran sobrevivir a tales condiciones, son capaces de insertarse en el endotelio y atraer fibrina, plaquetas y factores de coagulacin. El endotelio se retrae, permitiendo a las clulas neoplsicas ingresar en la membrana basal y secretar enzimas que destruyen los tejidos adyacentes, facilitando la implantacin.
ESCAPE INMUNOLGICO
Respuesta inmunitaria normal En el organismo se producen constantemente mutaciones genticas. stas son detectadas y eliminadas por el sistema inmunolgico. Sin embargo, durante el desarrollo del cncer, la clula tumoral adquiere la capacidad de evadir al sistema inmunolgico. En circunstancias normales el sistema inmunitario reconoce las clulas tumorales a travs de una serie de antgenos que stas presentan en su superficie. La metodologa para detectarlos se inicia cuando las clulas T son activadas. stas liberan una molcula seal reclutadora de macrfagos, luego de interactuar con las clulas tumorales. A su vez, se estimula la proliferacin de clulas T de accin citotxica (TC), cooperadora (Th) o supresoras (Ts). A su vez, algunas linfocinas (elaboradas por los linfocitos) destruyen o lesionan algunas clulas cancerosas, mientras que otras movilizan clulas, como los macrfagos, para que ataquen a las clulas tumorales. Los interferones, compuestos que produce el organismo como respuesta a las infecciones virales, tambin poseen caractersticas antitumorales. Su funcin primaria consiste en la inhibicin directa de la replicacin. Los anticuerpos que sintetizan los linfocitos B, constituyen una parte importante de
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los mecanismos de defensa. Es destacable, tambin, la presencia de clulas asesinas naturales (NK), identificadas como una subpoblacion de linfocitos. Actan destruyendo directamente las clulas tumorales o produciendo linfocinas capaces de auxiliar en la destruccin de las clulas neoplsicas. Antgenos tumorales El tumor puede expresar en su superficie celular antgenos anmalos, no encontrados en la clula normal de la que deriva. Aunque pueden expresar, tambin, antgenos de diferenciacin de otro tipo celular surgidos durante las primeras etapas de su diferenciacin. Los antgenos pueden aparecer como especficos del tumor si la clula normal que experimenta transformacin constituye slo una pequea proporcin de las clulas normales del tejido donde surge la masa neoplsica. Evasin inmunolgica de las clulas neoplsicas Si bien el sistema inmunolgico humano est dotado de mecanismos que le permiten distinguir a clulas normales de las malignas para eliminarlas, el cncer es una enfermedad que se desarrolla gracias a su capacidad de evadir estas defensas. Para que se desencadene una respuesta inmunolgica con desarrollo de anticuerpos y activacin de clulas citotxicas, es necesario que, simultneamente, sean presentadas determinadas sustancias en la membrana de las clulas tumorales. Estas sustancias son protenas encargadas de transmitir seales entre las clulas del sistema inmune y tambin molculas coestimuladoras cuya funcin es la presentacin de antgenos (funcionando como inmunomediadores). El problema se suscita porque las clulas tumorales no exponen en su superficie ninguna de estas protenas. En consecuencia, no se producen interleuquinas, lo que conlleva al no desarrollo de la respuesta inmune. Debido a esta presentacin inadecuada de antgenos se produce un fenmeno de tolerancia especfica hacia las protenas del tumor (proceso en el que se adquiere la no reactividad hacia algunos antgenos). Otro factor que incrementa la inmunodeficiencia del sistema frente al cncer es la modulacin antignica. En presencia de anticuerpos, algunos antgenos tumorales son desprendidos de la superficie celular, endocitados, modulados y redistribuidos dentro de la membrana celular. As se eliminan los antgenos que podran ser reconocidos por las clulas del sistema inmunolgico. En algunos tumores, el antgeno no es eliminado de la
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superficie, sino que es enmascarado. Esto se debe a que ciertas molculas logran unirse a la superficie tumoral, evitando la adherencia de los linfocitos atacantes a los antgenos tumorales. La accin de los linfocitos atacantes tambin se ve truncada por el desprendimiento de los antgenos de las clulas tumorales, formando complejos con los anticuerpos. Estos complejos pueden unirse directamente a las clulas T, evitando que ataquen a las clulas tumorales. En la mayora de los casos, la accin de los anticuerpos es inefectiva y, aunque no lo fuera, si se unen al antgeno tumoral luego de que ste se desprenda de la superficie neoplsica, su efectividad resulta nula.
CARCINOGNESIS
Qu es la carcinognesis? La transformacin cancerosa es un complejo proceso que requiere la adquisicin de ciertas caractersticas que le permiten a la clula crecer descontroladamente. Esta transformacin ocurre en tres fases: iniciacin, estimulacin y progresin. En la primera etapa, los factores desencadenantes escapan al control de los mecanismos reguladores normales y alteran la estructura gentica de una clula (Figura 4). Si bien el sistema de reparacin del ADN est capacitado para revertir esta alteracin, puede suceder que la mutacin sea de carcter permanente y, aunque no genere un cambio espontneo, la accin de acumulacin de stas, sientan las bases para el desarrollo de un cncer. En la segunda fase, o estimulacin, el contacto reiterado con carcingenos ocasiona la expresin gentica anormal transformando a los protooncogenes en oncogenes, codificando la informacin de las clulas normales de forma equivocada. Ahora, los cambios producidos por las mutaciones genticas hacen que las clulas adopten una conducta maligna. Esta fase se conoce como progresin.
Figura 4. Influencias externas que afectan el ADN celular.
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Virus oncognicos Algunos virus poseen la capacidad de actuar como carcingenos. Estos virus se incorporan a la estructura gentica de las clulas introduciendo cambios permanentes que sern heredados por las generaciones futuras. De acuerdo a la molcula sobre la que actan los virus se dividen en dos grupos: virus ADN y virus ARN. Virus ADN: estn constituidos por ADN. Algunos miembros de esta familia viral son los virus papova, los virus herpes y los adenovirus, entre otros. La sntesis del ADN celular se estimulara paralelamente a la iniciacin de la sntesis del ADN viral. Las clulas infectadas no slo modifican su crecimiento de manera permanente, sino que tambin desarrollan nuevos antgenos. En el caso del virus herpes el ADN viral se incorpora al genoma celular modificndolo. Esta modificacin se presenta tambin en las clulas hijas que heredan el genoma viral. Ante una situacin de estrs sufrida por la clula, el genoma viral se activa expresando su fenotipo infectivo, dando lugar al comienzo de la enfermedad. Virus ARN: su material gentico e infectivo est compuesto por ARN. En ellos existe una transcriptasa inversa o polimerasa ADN-ARN dependiente, que estara ausente en los virus ARN no oncognicos. Esta polimerasa dara lugar a la sntesis del ADN de estructura complementaria a la del ARN viral. Entonces, ste podra integrarse en el genoma nuclear engaando a la clula para que sintetice las protenas virales como las propias. Agentes fsicos La accin de las radiaciones se ejerce directamente sobre el ADN y producen la fragmentacin del mismo, consiguiendo efectos carcinognicos. Las radiaciones ionizantes (partculas alfa, beta rayos X y gamma), son capaces de activar de forma negativa a los protooncogenes celulares. Son capaces de eliminar electrones de los tomos y, de este modo, alterar el material gentico celular, produciendo translocaciones y mutaciones. La accin carcinognica se ejerce en el lugar donde la radiacin actu, y el tiempo de latencia entre la irradiacin y la aparicin del tumor puede variar entre 15 y 20 aos, aproximadamente. Los tejidos ms radiosensibles son la mdula sea, la mama y la tiroides. Un claro ejemplo de la predisposicin al cncer que existe por consecuencia de las radiaciones es
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la aparicin de leucemias entre los afectados por las exposiciones nucleares de Hiroshima y Nagasaki, o la mayor incidencia de cncer de mama y sarcomas seos entre los trabajadores expuestos al radio. La radiacin ultravioleta con mayor efecto carcingeno es la UV-B. Constituye el mayor riesgo para desarrollar cncer de piel. El riesgo aumenta para aquellas personas de piel clara que se broncean con dificultad y sufren quemaduras solares con facilidad. El dao producido en el ADN por la radiacin UV-B puede ser reparado. Sin embargo, en individuos con mutaciones recesivas, esta radiacin provocara en ellos una gran propensin a desarrollar tumores malignos en reas fotoexpuestas y se supone que es un defecto enzimtico que incapacita la reparacin del material gentico, al no poder liberar dmeros de timina del ADN. Agentes qumicos De acuerdo con su mecanismo de accin, los agentes carcinognicos se clasifican en: Agentes primarios: son aquellos cuyo efecto se produce en el punto de aplicacin (actan por contacto). Agentes secundarios: necesitan de cambios qumicos en el organismo del husped. Pueden depender o no de sistemas enzimticos. Agentes dobles: son primarios y secundarios, es decir que actan por ambos mecanismos a la vez. Agentes cocarcingenos: son agentes que no actan por s solos, por lo que requieren de la interaccin con otros. Uno es empleado primero (activador) y, tras el empleo del segundo (promotor), surge la neoplasia. El tabaco es un carcingeno ahora reconocido relacionado con el 35% de las muertes por cncer. Es el principal carcingeno asociado con el cncer de pulmn, aunque tambin se lo conecta con el cncer de cabeza y cuello, esfago, pncreas, cuello uterino y vejiga. El tabaco tambin acta en concomitancia con otras sustancias, como alcohol, asbestos, uranio y virus oncognicos. Muchas sustancias qumicas presentes en sitios de trabajo han resultado ser carcingenos (o cocarcingenos). Dentro de la larga lista de carcingenos podemos citar a las nitrosaminas, hidrocarburos aromticos y algunos metales cromo, nquel, cadmio y uranio, como ejemplos que promueven distintos tipos de cncer. Algunos silicatos, como la crisolita y la antofilita (asbestos), tienen relacin con el cncer de pulmn; estos agentes se ven potenciados con el tabaquismo.
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En los ltimos aos la contaminacin ambiental del aire comenz a tomar un papel muy importante en la carcinognesis. Son varias las sustancias carcingenas presentes en el interior de algunos espacios cerrados, especialmente en ciertos edificios. Algunas de ellas son el benceno, el radn, el humo del cigarrillo y los formaldehdos. El radn es un carcingeno muy potente, considerado la segunda causa de cncer de pulmn despus del tabaco. La accin del radn es sinrgica con la del tabaco. Dieta Se cree que los factores de la alimentacin guardan relacin con aproximadamente 40 a 60% de los cnceres que dependen de algn elemento ambiental. Los alimentos pueden contener sustancias proactivas (protectoras) o carcinognicas. El riesgo de cncer aumenta si se ingieren durante un amplio lapso de tiempo, alimentos que contengan sustancias carcingenas o hay ausencia constante de sustancias proactivas. Las sustancias de la dieta relacionadas con mayor riesgo de cncer incluyen grasas, alcohol, carnes ahumadas o curadas con sal, alimentos que contienen nitratos y nitritos y alta ingestin calrica en la dieta. No podemos dejar de considerar tanto el sobrepeso como la obesidad. Ambos estn relacionados con la produccin de hormonas, ya que stas tambin son secretadas por el tejido graso, provocando una alta predisposicin a contraer cncer, ms usualmente, de mama. Las sustancias que parecen actuar como proactivas son aquellas contenidas en alimentos ricos en fibras, vegetales crucferos (brcoli, coliflor, etc.), los carotenoides (zanahoria, tomate, espinaca, durazno, vegetales verde oscuro y amarillo oscuro, etc.), las vitaminas A, E, C y el selenio. Las vitaminas A y E son capaces de inhibir la formacin de compuestos nitrosos y la vitamina C puede revertir la transformacin maligna (mutacin) inducida sobre el ADN celular. Tambin tienen relacin probada con la gnesis tumoral los nitritos y los nitratos utilizados como conservantes. stos son fuente de nitrosaminas al oxidarse en presencia de compuestos tipo amnico. Sin embargo, la presencia de estas sustancias se ha reducido en las dietas a raz de la aparicin de mecanismos de refrigeracin y congelacin. Tabaco y alcohol El tabaco constituye el mayor causante de problemas de salud pblica en el mundo occi-
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dental. Se halla relacionado con el 30% de las neoplasias, vindose implicado en el 90% de los cnceres de pulmn. Entre las partculas que conforman el humo del tabaco se encuentran diversos carcingenos, como el alquitrn, hidrocarburos aromticos policclicos, benzopireno y metales como el nquel, el arsnico o el plomo-210. La activacin metablica de las nitrosaminas puede ser determinante de la carcinognesis en rganos internos. Asimismo, existen otras sustancias en el humo del tabaco que actan como carcingenos, como el fenol, el cresol y el catecol. En la fase gaseosa del humo del cigarrillo se encuentra la hidracina, diversas nitrosaminas y el cloruro de vinilo. El tabaco multiplica por 10 el riesgo de contraer cncer de pulmn para un fumador de 10 a 15 cigarrillos diarios durante 30 aos (Figura 5). Sin embargo, el riesgo disminuye casi totalmente cuando trascurren 10 aos sin fumar. Los fumadores de pipa experimentan con mayor frecuencia cncer orofarngeos.
Figura 5. Relacin entre los cigarrillos y el cncer de pulmn en un perodo de 20 aos.
Junto con el alcohol, el tabaco se halla relacionado con la aparicin de cncer de cabeza y cuello y de esfago. Cuando ambos agentes coexisten, el riesgo de padecer cncer de esfago se multiplica por 48. Se halla tambin implicado en el surgimiento de cncer vesical, pancretico y renal. Por otra parte, el consumo de alcohol est relacionado en la gnesis de cnceres de la cavidad oral, faringe, laringe, esfago e hgado.
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El metabolismo del alcohol por medio de la alcohol deshidrogenasa conlleva a la produccin de acetaldehdo y numerosas alteraciones metablicas que alteran el equilibrio rdox de la clula. Factores genticos y edad Muchas neoplasias se desarrollan condicionadas por la constitucin gentica del husped. Esto no significa que el cncer se herede, sino que a travs de la herencia gentica, se transmiten mutaciones con potencial canceroso que deben ser tomadas en cuenta con fines preventivos. Es decir que lo que se hereda genticamente es la susceptibilidad al desarrollo del cncer. Los factores hereditarios a nivel gentico comprenden cuatro grupos fundamentales: genodermatosis (alteraciones cutneas que facilitan el desarrollo de cnceres cutneos), roturas cromosmicas, sndromes hematosos y sndromes por dficit inmunolgico. La incidencia del cncer aumenta de manera directamente proporcional a la edad. Ms del 80% de los cnceres mortales se observan en personas de ms de 55 aos. Las formas de cncer varan con la edad.
V. HACIA NUEVAS FORMAS DE TRATAMIENTO CONTRA EL CNCER
Importancia del diagnstico clnico e histolgico Una vez que se detect positivamente la presencia de cncer es necesario determinar las caractersticas del tumor. El estudio histolgico de la neoplasia brinda informacin anatomopatolgica de la enfermedad, indispensable para la elaboracin de una forma de tratamiento que responda a los rasgos celulares y de comportamiento de la masa tumoral. Tratamientos convencionales Ciruga La extirpacin del tejido tumoral sigue siendo la va teraputica ms utilizada. En mucho casos, la ciruga puede ser un elemento til para el diagnstico, de manera de obtener un fragmento de tejido considerado enfermo (biopsia), para un posterior estudio histopatolgico y la identificacin de clulas cancerosas.
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Cuando la ciruga se utiliza como terapia, se busca eliminar el total de la masa tumoral y los tejidos sanos circundantes a ella. De acuerdo a la extensin del cncer se utilizan dos procedimientos diferentes. Cuando la masa neoplsica es pequea y los mrgenes adyacentes de tejido afectado son reducidos se procede con una extirpacin local. Mientras que se utilizan cirugas radicales cuando se remueve no slo el tumor primario y el tejido circundante a l, sino que tambin estructuras adyacentes y todos los ndulos linfticos de la zona. Cuando la posibilidad de curar el cncer es imposible, la ciruga tiene como fin mejorar la calidad de vida del paciente eliminando las posibles complicaciones que surjan, como lceras, obstrucciones, hemorragias, dolor o infecciones. Su objetivo principal, es la mayor supervivencia posible del paciente. Abarca tcnicas como bloqueos nerviosos para aplacar el dolor o reseccin tumoral para eliminar obstrucciones. Tambin es factible que se extirpen glndulas productoras de hormonas, que podran estimular la proliferacin tumoral. Hormonoterapia Si bien la hormonoterapia no es un tratamiento que se aplique de manera independiente, es eficaz como terapia coadyuvante. Las clulas tumorales crecen ajenos a las seales de su ambiente. La hormonoterapia pretende modificar ese estado de homeostasis, disminuyendo los niveles del inductor hormonal tumoral, y a veces con la administracin de hormonas exgenas que alteren la homeostasis tumoral. Existen multitud de agentes hormonales utilizados en el tratamiento contra el cncer. Entre stos se destacan: los estrgenos, agentes progestacionales, andrgenos, corticoides, antiestrgenos, acetato de megestrol, aminoglutetimida y antagonistas de la LHRH. Radioterapia La radioterapia se basa en el tratamiento de la enfermedad mediante radiaciones. Este mtodo utiliza la energa cedida por una serie de elementos radioistopos, aparatos de rayos X, etc. stos transfieren energa para la destruccin hormonal. De acuerdo a la ubicacin de la zona a irradiar, la radioterapia puede ser interna o externa. En general, se utiliza como mtodo coadyuvante de otros tratamientos (con excepcin de cnceres en estados en extremo tempranos), ya que se utiliza para reducir tumores y convertirlos en operables o post-ciruga, para erradicar cualquier foco posible de metstasis o diseminacin. Se utiliza tambin con fines paliativos para aliviar los sntomas
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de la enfermedad metastsica, en especial cuando la enfermedad se ha propagado al cerebro, huesos o tejidos blandos. La radiacin ionizante rompe las molculas de ADN, ocasionando la muerte de las clulas. Si sta no se repara, la clula muere de inmediato o lo hace cuando intenta dividirse en la mitosis. Las clulas son ms vulnerables a los efectos de la radiacin durante la sntesis de ADN y la divisin celular, es por ello que, al igual que la quimioterapia, los tejidos afectados son los que se encuentran en alta proliferacin, como la mdula sea, tejido linftico, epitelio gastrointestinal y gnadas. Los tejidos de proliferacin ms lenta o inactivos son relativamente radiorresistentes y abarcan msculos, cartlago y tejidos conectivos. Quimioterapia La quimioterapia consiste en la aplicacin de medicamentos citostsicos agresivos con el fin de destruir las clulas tumorales. Este mtodo acta sobre las clulas en proliferacin, deteniendo la divisin celular y provocando su destruccin. Un porcentaje dado de las clulas tumorales (20 a 99% de acuerdo con la dosis) se destruye cada vez que el antineoplsico entra en contacto con el tumor. Se precisan dosis repetidas de ste durante un perodo prolongado para lograr la regresin del cncer. Su erradicacin completa es casi imposible, pero la eliminacin de la mayor cantidad de clulas posibles es necesaria para que las residuales sean eliminadas por otros mtodos. Las clulas que se reproducen aceleradamente en un tumor (fraccin activa) son las ms sensibles a los efectos de la quimioterapia, en tanto las que no estn en divisin, pero son capaces de estarlo en el futuro, son las menos sensibles y, por consiguiente, las ms peligrosas. Es as que se requiere la destruccin de stas para erradicar completamente la neoplasia. Muchos tratamientos combinan frmacos con distintos blancos moleculares, aumentando as el nmero de clulas tumorales vulnerables que se destruyen durante el tratamiento. Sin embargo, y a pesar de la toxicidad de la quimioterapia sobre las clulas, este tratamiento no diferencia entre clulas normales en crecimiento y clulas malignas en crecimiento, por lo que ejerce su accin sobre ambas. De esta forma se producen efectos colaterales en el organismo del husped, que pueden ser temporales o crnicos. Las clulas con proliferacin acelerada son las ms susceptibles a las lesiones que causan los frmacos quimioteraputicos. As, los epitelios con mayor renovacin son ms sensibles a los efectos de la quimioterapia, por lo que son comunes la estomatitis y la anorexia.
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Casi todos los agentes quimioteraputicos deprimen la funcin de la mdula sea, reduciendo el nmero de leucocitos, eritrocitos y plaquetas o trombocitos, adems de agravar el peligro de infecciones y hemorragias. La cada del nmero de estas clulas es la razn comn para limitar la dosis de agentes quimioteraputicos. Para contrarrestar estos efectos colaterales, se suelen administrar, luego de la quimioterapia otros agentes que estimulan la produccin de leucocitos. Dichos factores aminoran los episodios infecciosos y la necesidad de antibiticos, al tiempo que permiten el uso cclico ms pertinente de la quimioterapia sin necesidad de reducir la dosis. Nuevas estrategias inmunoteraputicas: vacunas oncolgicas Como regla general, las neoplasias no inducen una respuesta inmune efectiva. La inmunoterapia busca rescatar las diferencias entre las clulas malignas y las normales para generar una respuesta antitumoral competente. Es decir, que intenta activar el sistema inmunolgico del husped, para que ste pueda diferenciar las clulas tumorales de las normales y luego, destruirlas. Con este objetivo surgen las denominadas vacunas oncolgicas. Si bien se sabe que el objetivo de las vacunas es prevenir determinadas enfermedades, las vacunas oncolgicas no estaran desarrolladas con el fin de prever la aparicin de la enfermedad, sino que tenderan a constituir un modo de tratamiento. Su aplicacin buscara romper con la tolerancia del organismo frente a las clulas neoplsicas, mediante el reconocimiento de los antgenos tumorales. La importancia de este nuevo mtodo de tratamiento radica en desarrollar una respuesta inmune efectiva contra las clulas tumorales. En circunstancias ideales esta estrategia antitumoral tendra efectos masivos contra las clulas cancerosas. Sin embargo, cada tumor es diferente y existen diferencias inevitables entre el comportamiento de cada masa tumoral. Es as que, las vacunas oncolgicas se utilizan como terapias adyuvantes para reducir la masa neoplsica antes de la intervencin quirrgica o en el post-operatorio, para erradicar las posibles recidivas del tumor. La inmunoterapia sobre la que se sustenta la elaboracin de vacunas se puede dividir en dos grupos: especfica e inespecfica. En la primera se administra directamente un anticuerpo dirigido hacia un antgeno tumoral, mientras que la segunda busca despertar una respuesta inmune en el husped para que acte sobre el tumor. De modo ideal, la inmunoterapia debe aumentar la resistencia (tanto especfica como inespecfica) del husped y, al mismo tiempo, minimizar las posibilidades de escape al control inmunolgico por induccin de cambios potencialmente perjudiciales en la regulacin inmunitaria.
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Actualmente se estn estudiando dos vas principales de intervencin: actuar una vez desarrollada la enfermedad y evitar las recidivas a travs de la utilizacin de la inmunoterapia activa; o actuar para prevenir el desarrollo de la enfermedad mediante la inmunoterapia pasiva. Vacunas en desarrollo Vacunas de polisacridos Las diferentes estructuras de eptopes constituidos por molculas de hidratos de carbono particulares, una vez que se disuelven en agua, pierden su estabilidad y se establece un equilibrio conformacional con lo cual, disminuyen sus capacidades inmunognicas. Recientemente, estos inconvenientes se han llegado a resolver, mediante la conjugacin qumica del polisacrido antignico a pptidos, o formacin de preparados glicoproteicos que garantizan la linfocito T-dependencia . Vacunas de sntesis peptdica Cuando se conoce la identidad de los antgenos protectores, las vacunas pueden consistir en preparaciones purificadas de esas molculas. Las principales ventajas de las molculas peptdicas con propiedades inmunognicas radican en que sus estructuras son simples, ya que representan un solo eptope para los receptores de estmulo de los linfocitos B, o para los determinantes antignicos de los linfocitos T. Adems carecen de eptopes y de determinantes antignicos biolgicamente indeseables, por lo que en s mismos no tienen los riesgos de poder dar lugar a ningn trastorno de naturaleza autoinmune. Vacunas anti-idiotipos En algunos casos tales como el de los rinovirus, que desarrollan una importante variacin antignica, es extraordinariamente difcil encontrar una vacuna que sea eficaz frente a la infeccin causada por ellos. Por otra parte, cuando los receptores son antihiginicamente homogneos, es posible disear un anticuerpo que se fije fuertemente al receptor, previniendo de esta forma la infeccin. Las vacunas anti-idiotipos, en estos casos, al menos tericamente, podran inducir respuesta inmunitaria que imitara al receptor, y se uniera al agente infeccioso en el sitio de fusin de ellos, y as sucede en muchos casos. Vacunas de ADN recombinante La tecnologa de ingeniera gentica del ADN recombinante permite, en general, preparar
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cualquier secuencia proteica natural o imaginaria, en una gran variedad de sistemas in vivo (levaduras, bacterias, virus, clulas de insectos, cultivos celulares de mamferos). La expresin de genes que contienen la informacin que conduce a la expresin de antgenos deseados, se ha convertido en el mtodo ms prctico y limpio de conseguir vacunas puras. Terapia antiangiognica Las bases sobre las que se sustenta la terapia antiangiognica es interrumpir la circulacin sangunea intratumoral, fundamental para el aporte de nutrientes y oxgeno. Para lograr este objetivo se presentan dos caminos: inhibir la formacin de nuevos vasos tumorales (mediante frmacos o factores antiangiognicos) o bloquear los ya formados (tambin a travs de frmacos o factores antivasculares). La principal ventaja de estos frmacos es la dificultad que encuentran las clulas tumorales para adquirir resistencia al ataque, puesto que en realidad es una agresin indirecta. La nica forma en que se volveran resistentes es si pudieran crecer sin nutrientes. En la actualidad, uno de los frmacos ms utilizados como factor inhibidor de la angiognesis es el marismat. La accin antiangiognica de ste se comprob eficazmente en cnceres de pncreas, pulmn y cerebro. El marismat produce la inactivacin de la metaloproteasas, enzimas secretadas por el tumor que poseen un tomo metlico en su sitio de accin. stas actan sobre el tejido conectivo normal que rodea las clulas tumorales, provocando el clivaje de los componentes proteicos de la matriz extracelular, para permitir el avance de las clulas tumorales y endoteliales que formarn la nueva vasculatura. En consecuencia, el marismat, lentifica la creacin de los vasos de las masas tumorales. Otro de los frmacos que interrumpen la angiognesis tumoral es la interleuquina 12 (IL 12), que tambin funciona como activadora de las clulas NK. La terapia antiangiognica busca adems obstaculizar las seales que envan los tumores a las clulas endoteliales para formar la vasculatura neoplsica. Se descubri una integrina en la superficie de las clulas endoteliales, cuyo bloqueo alterara las seales que estimularan en tiempo y forma la capacidad migratoria y la diferenciacin de los endoteliecitos, evitando el desarrollo de un nuevo vaso. Pero la terapia antiangiognica se ve dificultada cuando el tumor ya origin su propia vasculatura. En este caso se busca obstaculizar la circulacin de tales vasos. En esta circunstancia la estrategia que se utiliza es la conjugacin de un factor inductor de trombosis con un anticuerpo capaz de reconocer especficamente las clulas endoteliales de
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los vasos que irrigan el tumor. As, mientras la circulacin de los vasos que irrigan el tumor es interrumpida, los anticuerpos reconocen de modo especfico las clulas que los forman, provocando trombosis. Si bien la efectividad de esta estrategia no est comprobada, las investigaciones realizadas en ratones revelaron esperanzadores resultados: trombosis inmediata del total de la vasculatura tumoral.
CONCLUSIN
Es cierto que las investigaciones cientficas han evolucionado de manera significativa en la lucha contra el cncer. Pero tambin es cierto que an no existe un tratamiento que garantice total efectividad en la cura de la enfermedad. Quiz el camino que ha tomado durante muchos aos la ciencia no sea el ms adecuado para ganarle al cncer. Desde siempre existi una tendencia muy marcada en el modo de atacar las neoplasias malignas: los tratamientos pretendan ser cortos y muy agresivos, culminando de forma drstica con la muerte o salvacin del paciente. Sin embargo, el descubrimiento de numerosos mecanismos de progresin y crecimiento del cncer han inclinado a los cientficos a la consideracin del cncer como un mal crnico. El objetivo primordial, adems de eliminar la enfermedad, estara basado en mantener contenido al cncer y disminuir las dolencias y malestares por l provocados. Esto no significa que las terapias ya existentes deban ser descartadas en su totalidad, slo se busca la utilizacin de mtodos menos txicos, que no slo se concentren en eliminar la enfermedad, sino tambin en mejorar la calidad de vida de los pacientes. As, la medicina se inclinara a tratar la patologa en forma individual, ya que cada cncer depende no slo del tipo histolgico de sus clulas y su comportamiento, sino tambin de la respuesta del husped frente a la enfermedad y a las terapias. Por otra parte, no podemos dejar de considerar que, en nuestra sociedad, existe un claro descuido, tanto individual como gubernamental, acerca del tema. La ausencia de campaas concientizadoras y la falta de educacin hacen que los individuos no estn al tanto de los potenciales carcingenos o de la necesidad de controles peridicos. Sumado a esto es inevitable meditar acerca de la conjuncin de factores tales como la urbanizacin acelerada y la contaminacin ambiental, asociadas a una enorme modificacin en los hbitos y las costumbres sociales, que hacen que exista una tendencia cada vez ms marcada con respecto a la incidencia del cncer en las sociedades. Es por eso que es necesario e indispensable, tomar conciencia sobre la importancia del conocimiento de la enfermedad.
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BIBLIOGRAFA
lvarez, C. A., R. D. Chacn y R. A. Estvez (1978), Oncologa Clnica, Ediciones Universidad del Salvador. Bare, B. G. y S. C. Smeltzer (1998), Enfermera medicoquirrgica de Brunner y Suddarth, vol. I, octava ed., McGraw-Hill Interamericana. Berg, L. R., D. W. Martin y E. P. Solomon, Biologa, quinta ed. Brostoff, J., D. Male e I. Roitt (1986), Inmunologa, Editorial Meds. Cncer hoy, 2: 30-33, 1995; 20: 18-22, 1997; 20: 24-30, 1997; 25: 36-40, 1998. Ciencia hoy, 74: 24-29 y 30-35, 2003. Daz Rubio, M., D. Espinos, Tratado de Medicina Interna, vol. II, Editorial Panamericana. Rozman, C., P. F. Valenti (1988), Medicina Interna, onceava ed., Ediciones Domina. Stites, D. P. y A. I. Ten Inmunologa bsica y clnica, sptima ed., Editorial El Manual Moderno.
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Stevia rebaudiana bertoni, Ka-he

Marcos Gabriel Daciw Tutor: Jorge R. Wagner
INTRODUCCIN
En la actualidad, la ingesta indiscriminada de glcidos es algo cotidiano. La endoculturacin se fortalece con los nuevos conceptos impuestos por la moda y la publicidad de comida chatarra a la que es sometida la poblacin mundial a travs de los medios de comunicacin masiva. Este consumo excesivo de dulces trae trastornos gravsimos al desarrollo y el equilibrio del organismo de los individuos. Es muy comn que los mdicos prescriban una dieta hipo-glucmica por problemas relacionados con desrdenes alimenticios, producto de una ingesta irracional de los mismos, tales como la diabetes o la obesidad. El objetivo del siguiente trabajo de investigacin es, por un lado, determinar los beneficios y efectos colaterales del uso de Stevia rebaudiana en pacientes que padecen anomalas relacionadas con el exceso de azcares en su dieta, y, por otro, sobre su produccin y comercializacin actual. Tambin, este trabajo se propone investigar si el uso de los estevisidos puede ser til en el tratamiento de la diabetes en pacientes adultos. Finalmente, en el anexo se exponen los resultados de estudios realizados sobre el cultivo de Stevia rebaudiana bertoni en la Facultad de Agronoma de la Universdidad de Buenos Aires y de las experiencias realizadas en la Universidad Nacional de Quilmes sobre la obtencin de extractos edulcorantes.
STEVIA REBAUDIANA BERTONI, KA-HE
La Stevia rebaudiana bertoni, conocida tambin como yerba dulce, es una planta arbustiva semiperenne que se propaga naturalmente, originaria del noreste de Paraguay. Su importancia econmica radica en que, en sus hojas, posee una sustancia denominada estevisido, constituida por una mezcla de por lo menos seis glucsidos diterpnicos,1 que
Glucsidos: molcula obtenida por condensacin entre dos monosacridos; Terpeno: molcula de
lpido derivado del hidrocarburo isopreno.
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es 100 a 400 veces ms dulce que la sacarosa y que por sus caractersticas fsico-qumicas y toxicolgicas permite su inclusin en la dieta humana para ser utilizada como un edulcorante diettico natural, sin efectos colaterales. Su inclusin en el Cdigo Alimentario Argentino (CAA, resolucin 101 del 22 de febrero de 1993) define al estevisido como un polvo blanco cristalino, inodoro, no higroscpico, no fermentescible, de sabor dulce an en soluciones muy diluidas, muy soluble en agua. La posibilidad de exportacin ha incrementado el inters de esta especie por parte de los productores. Sin embargo, el principal obstculo para su comercializacin es, adems de su retrosabor y su costo de produccin, la competencia con los otros edulcorantes sintticos que actualmente se encuentran a la venta. No obstante, este segmento del mercado est en franca expansin y admitira la coexistencia entre ellos, adems las ventajas del estevisido que le permiten competir con los dems son su falta de toxicidad, que es natural, estable y de muy alto poder edulcorante.
Stevia rebaudiana. Fuente: Base de datos, biblioteca de la Facultad de Agronoma de la Universidad de Buenos Aires.
Origen, usos e historia La Stevia rebaudiana es una planta originaria de la flora sudamericana, que creca espontneamente en el hbitat semirido de las laderas de las montaas del noreste paraguayo, en la regin de la Cordillera de Amambay. Muchos de los usos de la Stevia rebaudiana son conocidos. Se emplea como edulcorante de mesa, en la elaboracin de bebidas, dulces, mermeladas, chicles, en pastelera, confituras, yogures, etc. Algunos estudios indican su actividad antibitica, en especial con las bacterias que atacan las mucosas bucales y los hongos que dan origen a la vagi-
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nitis en las mujeres. Por sus propiedades curativas, sobre todo en Sudamrica se utiliza tambin para contrarrestar la fatiga, y para combatir dolencias en el hgado, el pncreas y el bazo. En Brasil, China, Japn, Corea, Tailandia, Taiwn, Israel, y otros pases ms donde su cultivo se realiza de modo extensivo, se utilizan los estevisidos como edulcorantes para comidas y bebidas, incluida la famosa gaseosa Coca-Cola. A pesar de que los conquistadores espaoles tuvieron conocimientos de esta planta (siglo XVI), no atrajo su atencin sino hasta fines del siglo XIX (1899), cuando fue descrita por primera vez en la literatura cientfica por el Dr. Moiss Santiago Bertoni, quien realiz los primeros estudios cientficos sobre esta planta hace aproximadamente 100 aos.2 Antes de conocerse por los europeos, esta planta ya era conocida por los indios guaranes desde la Antigedad. Como ya dijimos, la Stevia rebaudiana es originaria de sus campos. Los guaranes la llamaban Ka-he, que significa yerba dulce. Resulta razonable suponer que la usaban para endulzar sus comidas y bebidas. El sentido del gusto El sentido del gusto reside en la lengua. Este rgano est provisto de varios grnulos llamados papilas gustativas, que, segn donde se encuentren, perciben los distintos sabores bsicos: salado, amargo, dulce y agrio. El picante y el alcohlico no son considerados como gustos o sabores; el primero es una sensacin dolorosa y el segundo un adormecimiento de la lengua. Los grnulos que se encuentran a los lados de la lengua perciben el sabor salado y agrio, mientras que los que se hallan en la parte posterior de la lengua perciben el amargor de las sustancias . Las papilas ms importantes para el tpico de este trabajo son las fungiformes, las cuales son las responsables de la percepcin del gusto dulce de las distintas sustancias y stas se encuentran en la punta de la lengua. Se cree que la percepcin del gusto se debe a un reconocimiento qumico de la estructura de la sustancia. Esta hiptesis fue confirmada con la produccin de edulcorantes artificiales que a pesar de ser muy distintos qumicamente al azcar, tienen cierta semejanza en algunos carbonos asimtricos. De manera biolgica, este fenmeno se explicara de la siguiente forma: el gusto de
Moiss Santiago Bertoni, naturalista paraguayo que estudi el clima, el suelo y la flora de su pas, y
realiz descubrimientos arqueolgicos (1857-1929).
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un alimento, al ser detectado por la papila correspondiente, enva un mensaje nervioso al cerebro y ste lo interpreta. Se conoce como concentracin de umbral a la concentracin mnima de una disolucin acuosa de la sustancia que se ensaya, a la cual la mayora de los jueces (catadores) pueden percibir correctamente el gusto en cuestin (vase anexo). Los edulcorantes Debemos aclarar a qu nos referimos cuando llamamos a una sustancia edulcorante. Los edulcorantes son cualquier sustancia desarrollada para su utilizacin en bebidas y alimentos. Se los puede clasificar como nutritivos o no nutritivos. Los edulcorantes sin valor nutritivo o acalricos son aquellas sustancias que producen sabor dulce o mejoran la percepcin de los sabores dulces. Otra forma de clasificar a los edulcorantes es por sus caractersticas naturales o artificiales. Naturales: son aquellos que se extraen de la naturaleza y se los utiliza sin ninguna alteracin qumica. Existe una serie de productos naturales potencialmente tiles como edulcorantes, aunque no son muy utilizados. Los rebaudisidos y estevisidos son un ejemplo de ello. Artificiales: son aquellos que se sintetizan en un laboratorio, adems son mucho ms dulces que el azcar y se emplean en porciones muy pequeas. Los ciclamatos, la sacarina, el aspartamo, el acesulfamo k, la sucralosa y el alitamo son ejemplos de edulcorantes artificiales. Los estevisidos Las hojas de la Stevia rebaudiana contienen una mezcla de ocho glicsidos diterpnicos (entre los que se encuentran principalmente el estevisido y el rebaudisido). El estevisido es un edulcorante natural no nitrogenado extremadamente dulce. En estado puro es 300 veces ms dulce que la sacarosa. Entre sus propiedades fsico-qumicas deseables para la elaboracin de alimentos podemos destacar: La resistencia al calor. Su estructura no se modifica por su exposicin a altas temperaturas y por lo tanto no pierde su poder edulcorante. Es apto para alimentos calientes u horneados. Es estable a temperaturas normales empleadas en el procesamiento de los alimentos: pasteurizacin, esterilizacin, coccin.
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La alta solubilidad en agua y en soluciones hidroalcohlicas. La resistencia al pH. Es estable en un rango amplio de pH, 3 a 9, aun a 100 C. Por encima de pH 9 se produce una rpida prdida del dulzor, no obstante pocos alimentos muestran valores de pH > 9. En bebidas gasificadas que incluyen en su composicin cido ctrico y fosfrico, se detectan prdidas de dulzor del 36% y 17%, respectivamente, cuando se almacena a 37 C. No aporta caloras. El estevisido exhibe a altas concentraciones un retro-gusto algo amargo e indeseable, el cual se intentar quitar o por lo menos enmascarar manteniendo una hiptesis de que el factor responsable del retro-sabor sera una posible oxidacin de uno o ms componentes presentes en la Stevia rebaudiana bertoni (vase anexo). Por ltimo, en la medicina paraguaya se utiliza la Stevia rebaudiana como hipoglucemiante, digestivo, cardiotnico, diurtico, hipotensor, vasodilatador, anticido, etc. Tambin tiene efectos beneficiosos en la absorcin de grasas y la presin arterial. Podramos describir al estevisido como un glucsido integrado por una molcula de esteviol al cual se le adhiere la soforosa a travs de un grupo hidroxilo del carbono nmero 13. Su frmula emprica es C38H60O18 y su masa molecular es 804,2 g.
Diagrama molecular del estevisido. Fuente: Base de datos, biblioteca de la Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires.
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Proceso de extraccin y purificacin del estevisido Existe un gran nmero y variedad de patentes de procesos de extraccin y purificacin del estevisido, los cuales podran resumirse en los siguientes pasos: extraccin de las hojas de Stevia rebaudiana con agua o solventes orgnicos; filtracin; precipitacin de impurezas y coagulacin por cambio de pH; clean-up sobre resinas de intercambio inico; cristalizacin; secado. Es importante destacar que si en el proceso no se obtiene un producto con sabor aceptable se aplican otros tratamientos tales como modificaciones enzimticas o qumicas pero el producto resultante no podra llamarse natural. Avances que mejoraron el producto final El edulcorante obtenido tena un retrogusto amargo por lo que se optimizaron los procesos para eliminar los componentes que impartan ese sabor. Mediante ingeniera gentica se desarrollaron plantas con un alto contenido de estevisido y rebaudisido logrando un mejor sabor en al producto final, a la vez que se increment el rendimiento del proceso de extraccin. No obstante, el perfil y la concentracin del principio activo en las hojas varan con el lugar, la estacin y las condiciones de cultivo. Presentaciones El estevisido lo podemos encontrar de varias formas: Extracto obtenido por difusin: lquido denso de color oscuro resultado de hervir las hojas en agua (vase anexo), as se puede potenciar los sabores de los alimentos a los cuales se le es aadido este lquido. Extracto obtenido por maceracin: lquido preparado por macerado de las hojas en agua destilada o en una mezcla de licor alcohlico (apto para el consumo humano) y agua. Presentacin lquida obtenida por disolucin del estevisido purificado en agua (solucin). Todos los mtodos empleados son naturales y responden a un fin determinado: simple infusin, forma lquida o en forma de cristales solubles; cada una de ellas tendr distintas propiedades o aplicaciones.
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Beneficios La insercin de este edulcorante en la dieta puede ayudar a consumidores que deben controlar la ingesta de azcares por problemas de salud (individuos con desrdenes metablicos, como la diabetes, o con inconvenientes asociados a la ingesta excesiva de alguno de estos azcares) o bien para el control de peso (personas que desean restringir su ingesta calrica), ya que posee un valor cero en el ndice glicrico, por lo tanto no aade caloras a su ingestin de las mismas. Estos beneficios no fueron evaluados por la FDA (Food and Drug Administration). Este organismo de los Estados Unidos aprob en septiembre de 1995 a la Stevia rebaudiana, aunque slo podra venderse en tiendas naturistas, de modo de no interferir con los intereses de las industrias productoras de edulcorantes no naturales. Cultivo de Stevia rebaudiana en la actualidad Como ya se expres, Paraguay es la tierra natal de la Stevia rebaudiana. Slo hacia 1955, los japoneses comenzaron a realizar cultivos de la misma, y alrededor de la dcada de 1970, comienza a cultivarse en el sur de Japn y en sus pases vecinos. Hoy en da se cultiva en forma intensiva en Japn, Singapur, Taiwn, Corea del Sur y China. Adems, su cultivo se ha extendido hasta el sur de Brasil y en las regiones nordeste y noroeste de Argentina, lugares donde se siguen realizando nuevos emprendimientos con el fin de obtener el llamado edulcorante verde. En experiencias realizadas en la Facultad de Agronoma de la Universidad de Buenos Aires, se llev a cabo un trabajo con plntulas de Stevia rebaudiana bertoni, por el cual se descubri un mtodo para obtener una mayor cantidad de estevisidos por rea foliar, el cual puede ayudar a determinar una mayor rentabilidad al momento de la industrializacin y comercializacin de la misma como manufactura (edulcorante verde). Para ese trabajo, se utilizaron dos tipos de fertilizantes: uno de liberacin rpida y otro de liberacin controlada, mostrando diferencias significativas en los tratamientos fertilizados. Asimismo, se obtuvo con esta combinacin de tcnicas una mayor rea foliar y, por consiguiente, una mayor cantidad de estevisidos, en valores absolutos por hectrea.
CONCLUSIONES
La Stevia rebaudiana puede ser de gran ayuda para aquellas personas que deben dismi-
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nuir o controlar su ingesta de azcares, como es el caso de los diabticos tipo I, dado que este edulcorante no es metabolizado por el organismo. Esta sustancia permite mantener dentro de valores normales los niveles de glucosa en sangre, y como resultado de esto, se podra pensar en la eliminacin parcial o total de la insulina, en el caso de diabetes tipo II en pacientes adultos, para los cuales la ingesta de glcidos no es tan importante como en pacientes jvenes. Asmismo, podra ayudar a individuos que padecen obesidad, a equilibrar o disminuir su ingesta calrica facilitando su lucha en la prdida de peso. El gran desafo est en desarrollar productos naturales que, conteniendo estevisidos en su composicin, resulten atractivos y accesibles a los consumidores, aportando adems una alternativa de expansin econmica a los pases sudamericanos productores de Stevia rebaudiana, como Argentina y Paraguay.
ANEXO. INFORME
Trabajo experimental Se realizaron extractos de Stevia rebaudiana bertoni en medio cido, ya que se hallaron indicios de que en estos valores de pH se obtenan soluciones del edulcorante de color claro y, adems, se observ disminucin en la percepcin del retro-sabor. Sin embargo, el primer extracto que se realiz en esta investigacin fue hecho en agua hervida para descartar una posible oxidacin del extracto, la cual podra ocasionar el color oscuro y el retro-gusto. Las siguientes experiencias de obtencin de extracto fueron realizadas con hojas de Stevia rebaudiana bertoni. Primer extracto Se colocan en un vaso de precipitado 1,00 g de hojas secas de Stevia rebaudiana y 100 ml de agua potable previamente hervida durante 5 min para disminuir su nivel de oxgeno disuelto y as evitar una posible oxidacin del extracto (ya que esto podra ser lo que le otorga al mismo el color oscuro y su retro-sabor). Se dejan hervir las hojas del edulcorante en el solvente tambin durante 5 minutos. Conclusin: se obtiene una solucin muy oscura y se percibe el retro-sabor.
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2,5
Extractos 1 g stevia por 100 ml agua hervida (pH 7.2) Buffer fosfato 0.1 M pH 4.4 (pH final 4.9)
2,0
1,5
1,0
Absorbancia
0,5
0,0 300 400 500 600 700 800
longitud de onda (nm)
Extractos con Buffer en diferentes concentraciones El propsito de la variacin en la concentracin de la solucin reguladora fue obtener el mejor extracto, en el cual no se percibiese el gusto soso del buffer y el mejor espectro (solucin ms clara), por supuesto manteniendo el rango de pH en medio cido. Se preparan extractos con solucin reguladora 0,1M, 0,05M, 0,025M y 0,0125M de KH2PO4, con 1,00 g de Stevia rebaudiana hirvindolas 5 minutos. Conclusin: el extracto de mejor sabor y color fue el de concentracin 0,025M. El almacenamiento de los extractos a 4 C durante dos semanas produce un aumento del sabor amargo y del color pardo (vase extractos).
2,5
Extractos 1 g stevia en 100 ml buffer fosfato 0.0125M pH 5.43 fresco 0.0125M pH 4.6 (final 5.6) almacenado 2 sem 4C 0.025M pH 4.27 (final 5.16) fresco 0.025M pH 4.63 (final 5.37) almacenado 2 sem 4C 0.05M pH 4.4 (final 5.1) fresco 0.1M pH 4.4 (final 4.9) fresco
2,0
1,5
Absorbancia
0,5
1,0
0,0 300 400 500 600 700 800
60
Extracto alcohlico concentrado El objetivo de esta experiencia es descartar una posible decantacin por insolubilidad de componentes de las hojas de Stevia rebaudiana, los cuales podran ser los causantes del color y sabor indeseables presentes en el extracto. Se colocan en un vaso de precipitado 5,00 g de Stevia en 100 ml de alcohol etlico y se lo hierve durante 5 min. Se obtiene un extracto alcohlico color verde vivo (posiblemente esto se deba a que el solvente utilizado halla extrado gran parte de la clorofila de las hojas). A continuacin se procede al secado de las hojas utilizadas en el extracto anterior. Se las reutiliza para la elaboracin de un extracto con 100 ml de solucin reguladora 0,025 M. Conclusin: Se obtiene un extracto de color pardo claro-verde vivo. Se percibe retrogusto en ambos, indicando que el componente que le otorga el retro-sabor al extracto sera soluble tanto en agua como en el alcohol etlico.
Extracto 5 g stevia en 100 ml etanol Extracto hojas post etanol en buffer 0.0125M pH 6.28 Extracto 5 g stevia en 50 ml etanol + 50 ml buffer 0.0125M pH 6.28 2,5
2,0
1,5
Absorbancia
1,0
0,5
0,0 300 400 500 600 700 800
Agregado de sulfito al mejor extracto obtenido Se aade un inhibidor de oxidacin (Na2SO3) al mejor extracto obtenido hasta el momento para descartar la oxidacin de fenoles u otros componentes de las hojas de Stevia rebaudiana ya que este fenmeno podra ser el causante del retro-gusto y el color oscuro del extracto durante su coccin. Esta experiencia de realiz manteniendo las condiciones del mejor extracto obtenido anteriormente con la solucin buffer KH2PO4. Se colocan en un vaso de precipitado 1 g de Stevia rebaudiana, 25 ml de solucin
61
reguladora (0,025 M), 10 ml de solucin de sulfito de sodio (100 ppm) y 65 ml de H2O; se lo hace hervir durante 5 minutos. Conclusin: se obtiene un extracto de color claro que no cambia con el almacenamiento (los espectros de los extractos fresco y almacenado son similares). No se percibe retro-sabor.
Extracto 1 g stevia en 100 ml buffer fosfato 0.025M pH 4.27 (final 5.16) fresco 0.025M pH 4.63/5.37 almacenado 2 sem 4C 0.025M pH 5.55 + 100 ppm sulfito almacenado 2 sem 4C
2,5
2,0
1,5
1,0
Absorbancia
0,5
0,0 300 400 500 600 700 800
Umbral de concentracin y poder edulcorante Se prepar un extracto de sacarosa en las mismas condiciones que el mejor extracto de Stevia rebaudiana obtenido anteriormente. Se coloc en un vaso de precipitado 1 g de sacarosa, 25 ml de buffer fosfato, 10 ml de sulfito y 65 ml de H2O. La solucin obtenida carece de sabor dulce, por lo que se aumenta la concentracin de sacarosa (suponiendo que esto no vara considerablemente el volumen de la solucin). A los 1.5 g/100 ml se percibe un sabor dulce muy suave y a los 3 g/100 ml un netamente dulce. Se establece por lo tanto el umbral en 1.5% de sacarosa, es decir cuando se comienza a percibir el sabor adecuadamente dulce del extracto. A continuacin se procedi a la dilucin del mejor extracto de Stevia rebaudiana obtenido hasta el momento. Se hicieron diluciones al 50%, 25%, 12%, 6%, 3% y 1%. Es preciso aclarar que dichas diluciones se realizaron con buffer fosfato 0.025M para amortiguar el cambio de pH. En las soluciones obtenidas desde el 50% hasta el 3% se percibi el sabor dulce, estableciendo su umbral de concentracin en 3% (3 ml de extracto en 100 ml), ya que en la solucin diluida al 1% no se percibi sabor dulce.
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Dado que 100 ml de extracto se prepararon partiendo de 1 g de hojas de Stevia rebaudiana, en 3 ml de extracto estn contenidos los estevisidos correspondientes a 0.03 g de Stevia rebaudiana. Conclusin: se obtuvo un extracto de Stevia rebaudiana con sabor fuertemente dulce, bajo retrosabor y estable durante el almacenamiento bajo condiciones reductoras y pH cido. Los ensayos muestran que 1,5 g de sacarosa dan un dulzor equivalente a 0.03 g de Stevia rebaudiana (dilucin del extracto al 3%). En otras palabras, las hojas de Stevia rebaudiana seran aproximadamente 50 veces ms dulces que la sacarosa. Teniendo en cuenta que el contenido de estevisidos en las hojas secas de Stevia rebaudiana es inferior al 10%, resulta que los estevisidos son ms de 500 veces ms dulces que la sacarosa.
AGRADECIMIENTOS
Quiero agradecer al personal de biblioteca y docentes de la UNQ y a mi tutor Jorge Wagner, quien me gui y ayud en la elaboracin y profundizacin de este trabajo de investigacin sobre Stevia rebaudiana bertoni.
BIBLIOGRAFA
Anzalda-Morales, Antonio (1994), La evaluacin sensorial de los alimentos en la teora y la prctica, Zaragoza, Acribia. Badui Dergal, Salvador (199), Qumica de los alimentos, Mxico, Pearson. Belitz, Hans-Dieter y Werner Grosch (1997), Qumica de los alimentos, 2 ed., Zaragoza, Acribia. Cramona, Sofa (2001), Efectos de Diferentes tipos de Fertilizaciones y prcticas de manejo sobre el rendimiento de Stevia Rebaudiana Bertoni (Ka-he o yerba dulce), tesis de postgrado, Facultad de Agronoma de la Universidad de Buenos Aires. Fennema Owen, R. (2000), Qumica de los alimentos, 2 ed., Zaragoza, Acribia. Mitree-Suttajit (1991), Research on Stevia rebaudiana from the past to the present. Monograph and Conference, Universidad Chiang Mai (Tailandia), Facultad de Medicina, Depto. de Bioqumica.
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Taiariol Daro, R. (1995), Propagacin vegetativa de Stevia rebaudiana bertoni, tesis de postgrado, Facultad de Agronoma de la Universidad de Buenos Aires. Sitios web consultados <info@steviadulri.com>. <tanki@ciudad.com.ar>. <www.steviadulri.com>. <www.naturessunshine.com>.
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Hidropona y promocin del crecimiento de plntulas de tomate inoculadas con bacterias PGPR
Mara Emila dos Santos Tutor: Luciano Gabbarini
El objetivo de este trabajo es utilizar diferentes bacterias promotoras del crecimiento en plantas de tomate y estudiar su crecimiento en un sistema hidropnico. Otro objetivo es disminuir la cantidad de nutrientes en la solucin de riego para ver si las bacterias Plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) pueden suplir esa diferencia y as bajar el costo de la produccin de plantines.
FUNDAMENTOS TERICOS
La agricultura es una actividad indispensable para la vida y es la base de la economa argentina. Es por eso que la fertilidad de los suelos es un factor imprescindible para obtener una productividad ptima. En las ltimas dcadas el aumento de la produccin agrcola se ha conseguido a cambio de la reduccin del contenido de materia orgnica en las tierras de cultivo intensivo y el deterioro de la estructura del suelo, lo cual lo ha vuelto ms propenso a la compactacin y a la erosin, adems de los procesos de desertificacin, salinizacin, alcalinizacin y contaminacin con plaguicidas y fertilizantes. Se puede decir que la productividad actual slo se mantiene por la aplicacin de abonos qumicos en cantidades cada vez mayores. Los cultivos utilizados en la actualidad han evolucionado durante millones de aos tomando los nutrientes del suelo puestos a su disposicin mediante la actividad de los microorganismos edficos. Una solucin que propone la biotecnologa a los problemas actuales de la agricultura, teniendo en cuenta las capacidades de los microorganismos y su importancia, es potenciar y favorecer las PGPR en el suelo.
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QU SON LAS PGPR?
Las PGPR (Plant growth promotion rhizobacteria), o rizobacterias promotoras del crecimiento de las plantas, son aquellas bacterias que aparecen libres en el suelo, capaces de adaptarse, colonizar y persistir en la rizosfera de la planta favoreciendo el crecimiento o desarrollo de sta con su actividad. Las rizobacterias pueden ser beneficiosas, neutras o negativas para la planta. Por eso resulta importante resear que el grupo de PGPR slo lo conforman aquellas tiles para el crecimiento de la planta. El trmino PGPR fue introducido en el ao 1978 por Kloepper y Schroth. Desde entonces, se han sucedido los estudios que indicaban sus efectos positivos en plantas de gran importancia para el hombre, como: algodn, cebada, juda, patata, remolacha, trigo, lenteja, arroz, etctera. Pese a no disponer de un conocimiento exacto de los mecanismos de colonizacin de la zona radicular, se aceptan dos etapas: una en la que por mecanismos inespecficos, como fuerzas electrostticas, y especficos, en los que participan glucoprotenas de la superficie de la raz y exopolisacridos bacterianos, las rizobacterias se adhieren a las races; y la segunda, en la que las bacterias se multiplican y crean micro colonias en zonas ricas en nutrientes. Los microorganismos rizosfricos son capaces de mejorar la estructura del suelo y proteger al vegetal frente a tensiones de diverso origen. Adems, las PGPR aportan formas asimilables de los nutrientes minerales (pudindose llamar por tanto biofertilizantes), producen fitohormonas y suprimen patgenos de las races. Durante el siglo XX, los investigadores han avanzado en el estudio de las influencias y factores que afectan al suelo, y entre otras cosas, se ha entrado en el estudio de cmo alterar las poblaciones microbianas de los suelos agrcolas para favorecer la salud y el crecimiento de las plantas. Se ha utilizado el trmino bacterizacin para denominar la inoculacin de cultivos de bacterias, entre ellas de rizobacterias, en semillas y propgulos vegetales. Esas bacterias tienen que ser capaces de sobrevivir en el medio natural y competir con los microorganismos residentes, as como llevar a cabo su funcin en condiciones ecolgicas naturales. En muchos casos, se ha demostrado que las rizobacterias introducidas en la rizosfera son eficientes competidoras que pueden desplazar a los microorganismos nativos colonizadores de la raz. Por otra parte, el hecho de que las rizobacterias inoculadas sean grupos taxonmicos idnticos a los nativos, hace difcil diferenciarlos una vez en el suelo, y actualmente se recurre a marcadores de resistencia a antibiticos y se utilizan cepas de Pseudomonas fluorescentes.
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MECANISMOS DE ACCIN DE LAS PGPR
Las bacterias promotoras del crecimiento bacteriano pueden actuar sobre la planta de dos maneras diferentes, directa o indirectamente. Mecanismos directos. Las bacterias le proporcionan a la planta compuestos sintetizados por ella misma, y le produce as un beneficio a la planta. Estos compuestos pueden ser nitrgeno, hormonas del crecimiento y ciertos nutrientes como hierro o fsforo, provenientes del entorno rizosfrico. Mecanismos indirectos. Estas bacterias protejen a las plantas de microorganismos fitopatgenos como pueden ser otras clases de bacterias u hongos. Estos agentes fitopatgenos causan numerosas enfermedades en los campos de cultivo provocando grandes prdidas econmicas. Estas epidemias son muy difciles de combatir. Hasta ahora se combatan a base de plaguicidas qumicos como rgano fosforados y carbamatos, entre otros con el consiguiente problema de acumulacin en el medio natural, adems de su poca especificidad. Por tanto, estos mtodos implican una alternativa con un gran potencial porque suponen un importante mtodo de control biolgico y su utilizacin como herramienta biotecnolgica parece una esperanzadora realidad que reduzca los impactos adversos de agroqumicos, y permita una gestin ms razonable y sostenible de los recursos agrcolas y forestales.
Mecanismos directos Mecanismos indirectos
Solubilizacion del fsforo
Produccin de antibiticos
Fijacin de nitrgeno
Agotamiento de hierro en la rizosfera
Produccin de fitohormonas
Sistema de resistencia inducida
Disminucin de la concentracin de etileno
Sntesis de metabolismos antifngicos
Secuestro de hierro por sideroforos
Produccin de enzimas que lisan la pared celular de los hongos Competicin por sitios en la raz
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BACTERIAS
Son una coleccin de diversos microorganismos procariotas que poseen diferentes morfologas y fisiologas. Las bacterias pueden ser, segn su forma: esfricas (cocos), bacilares (bacilos) o retorcidas en hlice (vibriones y espirilos). Algunas poseen flagelos o cilios que les permite moverse en un medio lquido. Unas son fotosintticas, como las cianobacterias, que obtienen energa de la luz solar y carbono del dixido de carbono de la biomasa. Otras bacterias obtienen energa del metabolismo de compuestos inorgnicos como el amonio y el sulfuro. Tambin algunas pueden degradar compuestos orgnicos y una gran variedad de azcares. Algunas son, nutricional y fisiolgicamente, demandadas y pueden crecer slo en ambientes muy especficos como en los tejidos del cuerpo humano, donde a veces causan enfermedades.
Anatoma de una bacteria sencilla.
RIZOBACTERIAS PROMOTORAS DEL CRECIMIENTO DE LAS PLANTAS
Las bacterias que se han elegido para realizar este proyecto de investigacin son: Azospirillum brasilence, Azospirillum BNM0160 y Pseudomona putida.
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Azospirillum En un principio se pens que el beneficio que aportaba a ciertas gramneas inoculadas con l se deba nicamente a su capacidad de fijar nitrgeno atmosfrico; pero ya que slo el 5% del nitrgeno fijado se incorpora a la planta, ciertos experimentos sugieren que el mayor desarrollo de los vegetales colonizados por Azospirillum es el resultado de una mayor captacin de nutrientes minerales presentes en el suelo, como consecuencia de un incremento del sistema radical de las plantas infectadas. El mecanismo que produce este efecto es la liberacin de ciertas fitohormonas por parte de Azospirillum. Pseudomonas Las pseudomonas actan en las plantas como un biocontrol, ya que secuestran el hierro y producen sideroforos de dos tipos generales: pyochelins y pyoverdins.
TOMATE
El tomate es una planta perteneciente a la familia de las solanceas y su nombre botnico es Solanum lycopersicum. Su origen es americano y se cultiva como anual, aunque tiene una vida de varios aos. Toda la planta posee pelos de naturaleza granular, que le dan su olor tan caracterstico.
CULTIVO HIDROPNICO
El sistema de cultivo hidropnico consiste en la sustitucin del suelo por un sustrato o medio natural o artificial, slido o lquido, que pueda proporcionar a la planta lo que de forma natural encuentra en el suelo, es decir anclaje, agua, aire y nutrientes. El cultivo hidropnico, por lo tanto, no slo se centra en los cultivos sobre el medio liquido, sino en todos aquellos que se cultivan en medios inertes como la perlita, tierra volcnica o arcilla expandida, y que se alimentan a travs de soluciones nutritivas. Presenta la ventaja ante el suelo que el sustrato utilizado puede ser elegido de acuerdo con las caractersticas apropiadas para el cultivo. La tcnica de este cultivo se basa ntegramente en el control de la composicin de
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la solucin nutritiva. sta es la base de la alimentacin de la planta, y debe cubrir en cada momento sus necesidades. Por eso slo se aadirn al agua los nutrientes minerales necesarios para su ptimo desarrollo. La solucin nutritiva tiene que tener adems el pH adecuado y debe permitir la buena aireacin de las races. Dentro de sistema de cultivo hidropnico distinguiremos dos tcnicas diferentes: cultivo sin suelo, ni sustrato inerte, y cultivo hidropnico en sustrato inerte como perlita, lana de roca, arena, etctera. Ventajas e inconvenientes del sistema hidropnico La ventaja principal de este sistema, adems del ahorro del agua, es el control preciso de la nutricin vegetal, lo que lleva, a su vez, a un mejor aprovechamiento de los fertilizantes. Otras ventajas son: menos problemas de fitopatas, debido a que el cultivo se desarrolla en un ambiente fitosanitario extraordinariamente bueno; se eliminan los problemas del cansancio del suelo y disminuye la posibilidad de que la planta sufra como consecuencia de la limitacin de agua; reduce las labores de cultivo; se consiguen producciones muy elevadas y de alta calidad. Los desventajas a destacar de este sistema son: en general, elevado costo de implantacin y de mantenimiento; mayor complejidad de uso y conocimientos tcnicos; mayor ataque de enfermedades criptogmicas; la crisis del transplante son ms fuertes en los cultivos hidropnicos que en el terreno, debido al lavado de las races realizado para limpiarlas de toda partcula de tierra.
PROYECTO DE INVESTIGACIN
El proyecto realizado se bas en la produccin de plantines de tomate en un sistema hidropnico, con la utilizacin de bacterias promotoras del crecimiento. Hemos tomado la planta de tomate para nuestra experimentacin ya que es uno de los vegetales ms producidos por su gran demanda en el mercado. Adems, el costo de produccin del fruto es muy elevado por sus necesidades y cuidados intensivos. Ante esta situacin, diseamos un experimento con un sistema de cultivo hidropnico con la utilizacin de bacterias PGPR, reduciendo as la concentracin de solucin nutritiva y en consecuencia, los gastos de la produccin de plantines.
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Materiales y mtodos Preparacin del cultivo de tomate Para realizar este proyecto se ha trabajado en el invernculo y en el laboratorio. Lo primero que se hizo fue preparar el cultivo de tomate, de la manera siguiente: esterilizacin superficial de las semillas con una solucin de hipoclorito de sodio al 30% y tritn x-100 (detergente) al 0.01% por tres minutos. Luego se las coloc en cajas de Petri con perlita humedecida en agua. Terminada la distribucin de las mismas en el nuevo medio se pusieron a germinar en el invernadero. Cuando ya tenamos las pequeas plntulas, se transplantaron en ocho bandejas plsticas con cavidades que estaban llenas con perlita (sustrato artificial inerte de color blanco). Este sistema hidropnico se comenz entonces a regar con una solucin nutritiva denominada Hoagland (cada 4 litros de agua: 0,4 ml de KH2PO4 1 M, 5 ml de MgSO4 0,2 M, 10 ml de K2SO4 0,5 M, 10 ml de CaSO4 0,25 M y 1 ml de Fe EDTA 145) en distintas proporciones: cuatro bandejas con solucin al 100% y cuatro bandejas con solucin al 10%. Esta solucin y todos los materiales utilizados fueron previamente autoclavados, esto se realiza en la autoclave a una atmsfera y por 15 minutos aproximadamente. Cultivo de bacterias e inoculacin Ya finalizado el sistema hidropnico se prepar el cultivo de bacterias con el caldo nutritivo (Merck). Se las coloc en cajas de Petri en una estufa a 28 C por 48 horas, luego se hizo un repique, se las pas a un medio acuoso y se pipeti 8 ml de la solucin bacteriana a cada planta. Para poder comparar los resultados se dejaron como control dos bandejas con plantas de tomate (una con Hoagland al 100% y otra al 10%) sin inocular:
1 2 3 4 5 6 Solucin nutritiva (control) Solucin nutritiva (control) Solucin nutritiva Azospirillum BNM0160 Solucin nutritiva Azospirillum BNM0160 Solucin nutritiva Azospirillum brasilense Solucin nutritiva Azospirillum brasilense Hoagland 10% Hoagland 100% Hoagland 10% Hoagland 100% Hoagland 10% Hoagland 100%
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7 8
Solucin nutritiva Pseudomona putida Solucin nutritiva Pseudomona putida
Hoagland 100% Hoagland 10%
Recopilacin de datos Despus de haberles colocado las bacterias a las plantas de tomate, se las dej actuar por unas semanas y luego comenz la recopilacin de datos, que consisti en la obtencin de datos numricos de altura y cantidad de hojas verdaderas (de cada una de las plantas) que fueron volcados en planillas semanales. Al finalizar el experimento se cortaron las plantas: por un lado, la raz y, por el otro, el tallo. Luego fueron envueltas en sobres rotulados y se las puso por 48 horas en estufa a 60 C para luego medir el peso seco. Resultados Con los datos que se obtuvieron en el transcurso del crecimiento de las plantas de tomate se ha realizado las lneas de tendencia que muestran la velocidad de crecimiento en altura y en cantidad de hojas por semana, grficos con el peso seco total, el de raz y del tallo y tambin se han tomado fotografas. Velocidad de crecimiento
Solucin Hoagland 10%
Altura por semana (cm) Solucin nutritiva Az BNM0160 Azospirillum brasilense Pseudomona putida 0,6657 1,3438 1,2583 1,1844 Cantidad de hojas verdaderas por semana 0,3756 0,575 0,5333 0,575
Solucin Hoagland 100%

Altura por semana (cm) Solucin nutritiva Az BNM0160 Azospirillum brasilense Pseudomona putida 1,6773 1,3179 1,0906 1,1063 Cantidad de hojas verdaderas por semana 0,6818 0,555 0,6 0,4125
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Peso seco
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Como se ha podido observar en los cuadros y grficos, cuando se utilizaron bacterias en plantas de tomate regadas con solucin Hoagland al 10%, los resultados obtenidos fueron muy elevados en comparacin con las no inoculadas. En cambio, con las de la solucin Hoagland al 100% no hubo diferencia, es ms, en algunos casos las que no estaban inoculadas obtuvieron mejores resultados.
CONCLUSIN
Podemos concluir entonces que las PGPR se ponen en evidencia cuando existe una disminucin de nutrientes, ya que cuando el cultivo hidropnico posee 100% de solucin Hoagland no hay diferencia, esto se debe a que la planta tiene los nutrientes a su disposicin. Por lo tanto, el uso del cultivo hidropnico de plantas de tomate con bacterias promotoras del crecimiento disminuye la cantidad de solucin nutritiva y disminuye los costos de la produccin de plantines de plantas de tomate.
BIBLIOGRAFA
Lorente Herrera, Juan (1998), Biblioteca de la Agricultura. Tomo 3. Horticultura y cultivo en invernadero, Editorial Idea Books. Glick, Patten, Holguin y Penrose (1999), Biochemical and Genetic Mechanisms Used by Plant Groxth Promoting Bacteria, Imperial College Press. Atlas, Ronald (1997), Principles of Microbiology, Brown Publishers.
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Obtencin de colorantes y su aplicacin en el arte

Joaqun Gabriel Wall Tutora: Mara Alejandra Zinni
PROYECTO
EL proyecto de trabajo se realiz en dos partes: la primera, principalmente experimental, se llev a cabo en los laboratorios de la Universidad Nacional de Quilmes. En esta etapa, luego de que el becario adquiriera conocimientos bsicos sobre seguridad en el laboratorio y sobre las tcnicas de laboratorio a utilizar, se busc obtener diferentes colorantes, con el objetivo de obtener una amplia gama de colores, y experimentar las diferentes tcnicas planteadas por el tutor. La segunda etapa, de aplicacin, sirvi para conectar la experiencia del becario en la Universidad Nacional de Quilmes con sus actividades en el taller de escultura del Bachillerato de Bellas Artes, a cargo del profesor A. de Santo, de la ciudad de La Plata. El objetivo fue aplicar los resultados de la experimentacin en un trabajo artstico. El profesor a cargo del taller supervis este trabajo, pese a que la investigacin no formaba parte de las actividades obligatorias de dicha materia.
INTRODUCCIN AL COLOR
El color de una sustancia depende de la capacidad de la misma de absorber o reflejar las radiaciones lumnicas correspondientes al espectro visible. Se llama espectro visible a la zona del espectro electromagntico a la que es sensible el ojo humano. Las longitudes de onda de las radiaciones correspondientes a este espectro van desde los 4.000 a los 7.500 . Un compuesto que absorba luz en todas las longitudes de onda excepto la del azul (4.900 5.100 ) reflejar la luz azul y podr ser percibido de ese color. Al contrario, si absorbiese slo la luz en la longitud de onda del azul y reflejase todo el resto, aparecer del color complementario a la luz absorbida, percibindose ahora de color naranja. En el caso de que una sustancia absorba ms de un color, el efecto visual resultante ser la combinacin de los colores complementarios de los absorbidos. Aquellas que absorban
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todas las radiaciones del espectro visible sern negras, las que no absorban ninguna sern incoloras y sern blancas las que reflejen todas. La siguiente tabla muestra la longitud de onda correspondiente a cada color y lista los colores complementarios correspondientes. Las longitudes de onda menores a 4.000 pertenecen a la regin espectral del ultra-violeta, mientras que las que superan los 7.500 corresponden a la regin del infrarrojo.
Longitud de onda (Unidades ngstrom) Color absorbido Color complementario
4.000 4.200 4.200 4.450 4.450 4.900 4.900 5.100 5.100 5.300 5.300 5.450 5.450 5.800 5.800 6.300 6.300 7.200 7.200 7.500
Violeta ndigo Azul Azul-verdoso Verde Amarillo-verdoso Amarillo Naranja Rojo Prpura
Amarillo-verdoso Amarillo Naranja Rojo Prpura Violeta ndigo Azul Azul-verdoso Verde
ETAPA EXPERIMENTAL. OBTENCIN DE COLORANTES
1. Colorante verde. Pigmentos de remolacha Para el primer colorante (verde) utilizamos el mtodo de extraccin por solvente orgnico, con el objetivo de obtener los pigmentos de las hojas de remolacha.
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Procedimiento Se toman 10 g de hojas de remolacha, la cual debe ser cortada en pequeos trozos y se tritura en un mortero con agregado de arena. Se procede luego a eliminar el agua contenida en la hoja, para lo cual se aaden 20 ml de metanol y se macera durante 5 minutos imprimiendo un movimiento de rotacin al piln. La solucin verdosa formada se escurre lo mejor posible del material vegetal presionndolo dentro de un lienzo. Esta solucin se desecha, y el material vegetal queda prcticamente seco. Este procedimiento se repite una vez ms. Se macera luego otros 5 minutos, ahora con una mezcla de 12 ml de ter de petrleo y 8 ml de metanol; se vuelca la solucin resultante en un vaso de precipitados de 150 ml presionando fuertemente para extraer todo el solvente que sea posible. Se repite la extraccin con 10 ml de ter de petrleo y 4 ml de metanol. La solucin se une a la anterior. Se filtra el extracto obtenido a travs de un trozo de algodn, recogindose el filtrado directamente en una ampolla de 250 ml. La fase inferior (metanol), que contiene parte de los colorantes y agua se desecha. La fase superior (ter de petrleo) es lmpida, de color verde-azulado y contiene los pigmentos. Dichos pigmentos extrados se concentran luego mediante evaporacin en campana, con el objetivo de obtener un colorante ms intenso, y obtener mejores resultados en su utilizacin posterior. 2. Colorante verde. Pigmentos de espinaca Para la obtencin de este segundo colorante, se utiliz nuevamente el mtodo de extraccin por solventes orgnicos, con la nica diferencia que se utilizan hojas de espinaca, para luego comparar la tonalidad de ste colorante con la del extrado de la remolacha. Resultados
Figura 1
Figura 2
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En la Figura 1 se observa el proceso de eliminacin de agua, con la utilizacin de metanol y de un pao. El agua desechada se encuentra en el vaso de precipitados. En la Figura 2, la solucin final, luego de ser filtrada con algodn, se coloca en una ampolla. La fase inferior contiene el metanol y restos de agua, y es desechada (vaso de precipitados). La fase superior (ter de petrleo) de color verde intenso, contiene los colorantes extrados y se conserva en un erlenmeyer, para luego ser concentrada. 3. Colorante violeta. Pigmentos de repollo Para la obtencin de un tercer colorante (violeta) se utiliza un mtodo de extraccin directa con etanol. Procedimiento Las hojas de repollo se cortan en pequeos trozos, que luego son sumergidos en un vaso de precipitados con etanol. Esto es dejado en reposo por aproximadamente una hora, hasta que se observa que las hojas de repollo (antes violetas) han quedado completamente blancas, encontrndose sus pigmentos ahora disueltos en el etanol, que ha tomado dicha tonalidad violcea. Los pigmentos extrados se concentran al evaporar gran parte del etanol. 4. Colorante azul. Colorante bord Con el objetivo de obtener otros colores partiendo de un colorante sinttico, se cambia el pH de la solucin del colorante, agregando un cido. Procedimiento
Figura 3
Figura 4
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Se utiliza colorante Coomasie Blue (polvo), que se disuelve en etanol, dando origen a una solucin azul. Debido a la gran intensidad de dicho colorante, una parte de la solucin inicial se pasa a otro vaso de precipitados al cual se le agrega ms etanol, con el objetivo de diluir an ms el colorante. Se procede entonces a agregar gotas de HCl a dicha solucin. Se observa, a medida que se agrega cido, un cambio de color que pasa primero por verde, obtenindose luego un bord oscuro. Resultados Se observa en la Figura 3 el vaso de precipitado con el pigmento puro disuelto en etanol (vaso de la derecha). Parte de esta solucin es volcada en otros vasos de precipitados a los que se les agrega diferentes concentraciones de HCI. La Figura 4 permite comparar el color original del pigmento (azul), y los otros colores obtenidos por agregado de cido a la solucin. El cambio de color observado podra explicarse por un cambio en la resonancia electrnica de la molcula debido a la unin de los H+ en exceso agregados con el cido. 5. Colorante rojo. Pigmentos de rosa Con el objetivo de obtener colorante rosa, se extraern los pigmentos de los ptalos de rosa, que tomarn dicha tonalidad en medio cido. Procedimiento Se realiza una extraccin directa con etanol, similar a la del repollo, con los ptalos de dos rosas. Se obtiene una solucin levemente rosada, casi incolora. 10 ml de dicha solucin se pasan a un vaso de precipitados al cual se le agrega 10 gotas aproximadamente de HCI 1 N obtenindose un colorante rojo intenso.
ETAPA DE APLICACIN. RESINAS COLOREADAS. ACRLICO
Para la realizacin de esta produccin se utilizan los colorantes obtenidos durante la experiencia anteriormente detallada, con el objetivo de teir resina polimrica. Procedimiento Se utiliza resina polimrica que luego de ser teida se le agrega un catalizador que permite su solidificacin. La resina an lquida se vuelca sobre pequeos tubos acrlicos
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transparentes. Una vez solidificada, se disponen los tubos sobre una plancha de acrlico formando una imagen basada en un pequeo encuadre de una fotografa pixelada. El trabajo consta de tres imgenes, utilizndose un colorante diferente para cada una de ellas. La imagen siguiente muestra la fotografa pixelada de donde se obtendrn los encuadres para la realizacin del trabajo.
Las imgenes muestran los tres encuadres seleccionados de la fotografa original, con los colores asignados. La decisin de trabajar en bicromas se debe a la intencin de resaltar la importancia del color en cada composicin.
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Las fotografas del trabajo permiten ver el resultado final del proceso. La abstraccin de la imagen es an mayor debido que los pxeles originales han pasado de ser cuadrados a redondos.
Los paneles de acrlico de 35cm x 35 cm fueron expuestos en la exposicin final de 4 ao del taller de escultura del Bachillerato de Bellas Artes.
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE QUILMES EDITORIAL
Serie Digital
1. Promoviendo la transferencia de conocimientos a la sociedad. Premio Ro Universitario/UNQ-2003, coordinado por Alberto Daz Agua limpia para todos, de Mara Pilar Ballio (profesora a cargo: Graciela Pose) Inclusin estratgica de las NTIC aplicadas a la educacin media, de Bruno Nizzoli, (profesora a cargo: Laura Manolakis) Proyecto InSyTU, de Paula Abregu, Soledad Pitis y Luciana Malavolta (profesora a cargo: Mara Esther Fernndez). 2. La hora del Juicio. Mansilla, Quiroga, Arlt, Di Benedetto ante la prensa de su poca, coordinado por Margarita Pierini La muerte de Lucio V. Mansilla en la prensa argentina, de Luciano Manolio La muerte de Horacio Quiroga en la prensa argentina, de Patricia Felipe y Banesa Estigarribia La muerte de Roberto Arlt en la prensa argentina, de ngel Del R La muerte de Antonio Di Benedetto en la prensa argentina, de Carina Alejandra Morbelli 3. Programa de Becas para Jvenes Destacados del Polimodal. Universidad Nacional de Quilmes/ Fundacin Antorchas, coordinadora Florencia Mabel Rembado Organismos genticamente modificados, de Noelia Fuente (tutora: Sandra Goi) Bases moleculares del cncer: nuevas estrategias antitumorales, de Georgina Emmanuelli (tutora: Giselle Ripoll) Stevia rebaudiana bertoni, Ka-he, de Marcos Gabriel Daciw (tutor: Jorge Wagner) Hidroponia y promocin del crecimiento de las plntulas de tomate inoculadas con bacterias PGPT, de Mara Emilia dos Santos (tutor: Luciano Gabbarini) Obtencin de colorantes y su aplicacin en el arte, de Joaqun Gabriel Wall (tutora: Mara Alejandra Zinni)

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Bases moleculares del cncer: nuevas estrategias antitumorales

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SURGIMIENTO Y DESARROLLO DE UN TUMOR

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Figura 1. Los oncogenes y el surgimiento del cncer

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Figura 2. Caractersticas principales de las clulas neoplsicas.

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Figura 3. Diseminacin de las clulas tumorales.

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Figura 4. Influencias externas que afectan el ADN celular.

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