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UNIDAD 4 CRECIMIENTO MICROBIANO

Crecimiento microbiano
En microbiologa el crecimiento se define como el incremento en el nmero de clulas. !La biparticin (fisin binaria) es el proceso por el cual una clula se divide para formar dos clulas iguales. !El intervalo que transcurre en la formacin de dos clulas a partir de una clula se llama generacin y el tiempo requerido para esto es el tiempo de generacin o tiempo de duplicacin.

Fisin binaria
Durante la fisin binaria cada clula hija recibe una copia del cromosoma, de los ribosomas, complejos macromoleculares, as como monmeros y iones inorgnicos para existir como una clula independiente. El ADN se ancla a la membrana y as, cada clula hija se queda con una copia. Se forma un septo que dar lugar a cada una de las clulas, las envolturas rodean a cada copia del ADN y finalmente se da la separacin de las clulas.

Protenas Fts

Durante la divisin celular intervienen varias protenas que han sido llamadas: Fts, filamentous temperature sensitive Se encuentran ampliamente distribuidas en procariotas incluyendo Arqueas FtsZ tiene una estructura similar a la tubulina (divisin celular de eucariotas).

Protenas Fts
Las protenas Fts (filamentous temperature sensitive) interactan para formar el aparato de divisin llamado divisoma. !FtsZ polimeriza y forman una anillo en el centro de la clula. !FtsA es una enzima ATP hidrolasa que provee la energa para ensamblar protenas en el divisoma. !ZipA ancla a FtsZ a la membrana citoplasmtica. !FtsI es una protena involucrada en la sntesis de pptidoglucano y es tambin llamada protena de unin a penicilina (su actividad es bloqueada por el antibitico).

FtsZ se encuentra en diferentes puntos del citoplasma y desaparece de ste en el momento de la divisin celular ubicndosele en el centro formando el anillo

Cuando la clula se alarga se sintetiza la nueva pared celular. Este material se aade a la pared preexistente sin que se pierda la integridad celular. En la zona del anillo FtsZ se forman poros que son creados por autolisinas presentes en el divisoma. El nuevo material se aade a travs de estas aberturas.

A medida que progresa la elongacin celular las dos copias del cromosoma se separan y cada uno termina en una clula hija. Cuando ocurre la constriccin, el anillo FtsZ comienza a despolimerizarse y se dispara la sntesis de pared celular para sellar una regin con la otra.

Autolisinas
Pequeas aberturas son llevadas a cabo por las enzimas autolisinas que tiene una funcin similar a la lisozima. Las autolisinas se encuentran presentes en el complejo divisoma. La sntesis del nuevo peptidoglocano deja en la clulas Gram positivas una cicatriz. Las aberturas y la sntesis debe ser coordinada para evitar la autolsis de la clula.

Protenas Min

La replicacin del DNA ocurre antes de que se forme el anillo FtsZ, el cese de esta sntesis parece ser la seal para la formacin del anillo y esta estructura aparece precisamente en el espacio situado entre los dos nucleoides. La localizacin del punto medio real parece ser debida a una serie de protenas llamadas Min, especialmente MinE A medida que progresa la elongacin celular las dos copias del cromosoma se separan y cada uno termina en una clula hija.

Protena MreB y la forma de las bacterias


La presencia de la protena MreB se ha relacionado con la forma de las bacterias no cocoides. !FtsZ tubulina bacteriana. !MreB actina bacteriana.

Nature Cell Biology !5, 175 - 178 (2003)

Crecimiento exponencial
Cuando un cultivo se duplica de manera regular durante un intervalo de tiempo, se denomina crecimiento exponencial. Una grfica aritmtica del crecimiento muestra un incremento constante mientras una logartmica (log10) permite observar con respecto al tiempo cuando el crecimiento es exponencial y puede entonces calcularse el tiempo de generacin.

Tiempo de generacin
Tiempo de generacin es el tiempo requerido para que una clula se divida o una poblacin se duplique. t G = -------n
G= Tiempo de generacin t= tiempo de crecimiento exponencial n= nmero de generaciones

Si partimos de una clula, al cabo de una generacin habr duplicado su nmero y as sucesivamente en cada generacin. Como se puede comprobar el crecimiento se produce en progresin geomtrica: 1 generacin -------------> 2 clulas 2 generaciones -------------> 4 clulas 3 generaciones -------------> 8 clulas 4 generaciones -------------> 16 clulas 5 generaciones -------------> 32 clulas

Tiempo de generacin
To -------------> No 1 generacin -------------> 2No = No21 2 generaciones -------------> 4No = No22 3 generaciones -------------> 8No = No23 4 generaciones -------------> 16No = No24 5 generaciones -------------> 32No = No25 n generaciones (T) -------------> N = No2n
N = No2n log N = log No + n log 2

n=

___________________

log N - log No log 2

n=

____________________

log N - log No 0.301

n = 3.3 (log N - log No)

G = ___________________________ 3.3 (log N - log No)

Tiempos de duplicacin
Bacteria Medio Tiempo de duplicacin (minutos)
17 25 26 27-30 48 66-87 344-461 762-932 1980

Escherichia coli Bacillus! megaterium Streptococcus lactis Staphylococcus aureus Streptococcus lactis Lactobacillus acidophilus Rhizobium japonicum Mycobacterium tuberculosis Treponema pallidum

Glucosa-sales Sacarosa-sales Leche Medio de infusin de corazn Medio con lactosa Leche Manitol-sales-extracto de levadura Medio definido Testculos de conejo

Log del nmero de microorganismos A B C D E Tiempo

Curva de crecimiento

Curva de crecimiento
!A (Fase Lag). Periodo de latencia o adaptacin: no hay aumento significativo de la densidad celular, el crecimiento es asincrnico. !B (Fase Log). Periodo de crecimiento exponencial, el crecimiento es sincrnico y se alcanza la mxima velocidad de crecimiento. !C (Fase pre-estacionaria). Periodo de retardo desaparece el crecimiento exponencial, los microorganismos entran en estrs. !D (Fase estacionaria). Periodo estacionario: no hay cambios significativos de la densidad celular con respecto al tiempo, existe un equilibrio entre los microorganismos vivos y muertos. !E (Fase de muerte). Fase en la que el equilibro desaparece y predominan los microorganismos muertos. No hay nutrientes para el recambio y las condiciones del medio de cultivo son adversas para el crecimiento.

Tipos de cultivo
!Cultivo en lote !Cultivo en lote alimentado !Cultivo en contnuo

Cultivo cerrado
! El cultivo cerrado se realiza en sistemas con medio de cultivo en volumen fijo no renovado. Es decir el crecimiento ocurre hasta que el medio de cultivo modificado por los microorganismos ya no permite su desarrollo. ! En cultivos cerrados la concentracin de nutrientes afecta la velocidad de crecimiento

Cultivos contnuos: Quimiostato


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Para el cultivo contnuo se utiliza un sistema abierto con volumen constante al que se adiciona medio de cultivo fresco para renovar el que ha sido usado por los microorganismos. En ste tipo de cultivo se trata de conservar la poblacin en constante crecimiento, es decir en fase logartmica. El quimiostato es el aparato que se utiliza para obtener un cultivo contnuo, controla la densidad celular y la velocidad de crecimiento.

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Cultivos contnuos: Quimiostato

Ventajas : !Permite mantener al cultivo en fase exponencial durante das e incluso semanas. !Pueden aislarse microorganismos.

Efectos ambientales sobre el crecimiento bacteriano

Temperatura
Velocidad de crecimiento (2)

ptimo

(3)

(1). Gelificacin de la Mnimo membrana; los Mximo procesos de transporte se llevan a (1) (4) cabo lentamente y Temperatura no hay crecimiento. (2). Las reacciones enzimticas aumentan su velocidad. (3). Las reacciones enzimticas se llevan a cabo a su mxima velocidad. (4). Desnaturalizacin de protenas y membrana citoplasmtica. Lisis trmica.

Temperatura.

Temperatura. Clasificacin.
Clasificacin de microorganismos de acuerdo a su temperatura ptima de crecimiento
Psicrfilos Mesfilos Termfilos Hipertermfilos Termfilos extremos 0 - 20C 20 - 40C 40 60C 60 80C > 80C Flavobacterium sp. 13C Escherichia coli 37C Geobacillus stearothermophylus 60C ( Thermococcus celer Pyrodictium brockii

Psicotrficos: Microorganismos que crecen a temperatura ambiente pero causan contaminacin en condiciones de refrigeracin.

Temperatura.

Nature 409, 1092-1101 (22 February 2001)

Cepa 121

!! !!

Una gran aplicacin: La enzima fundamental para la Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR), que permite la amplificacin de pequesimas cantidades de ADN, procede de una bacteria termfila aislada de fuentes termales. Su enzima soporta ciclos repetidos de calor que alcanzan los 80C. (son condiciones desnaturalizantes para la mayora de las enzimas) 1993
Half to Dr Kary B. Mullis, La Jolla, California, U.S.A., for his invention of the polymerase chain reaction (PCR) method, and half to Professor Michael Smith, University of British Columbia, Vancouver, Canada, for his fundamental contributions to the establishment of oligonucleotide-based, sitedirected mutagenesis and its development for protein studies.

Microorganismos patgenos

E. coli

Candida albicas

Trichomonas vaginalis

Helicobacter pylori

pH
Microorganismos pH
1 2 Acidfilos 3 4 5 6 Neutrfilos 7 8 9 10 Alcalfilos 11 12 13 14

pH

Nature 409, 1092-1101 (22 February 2001)

pH 3.33.5

pH 8.88.3

Temperature and pH requirements for growth distinguish thermophilic bacteria and archaea.
Zona en la que las bacterias estn mejor adaptadas. Zona en la que las arqueas estn mejor adaptadas. Zona en la que ambas estn bien adaptadas.

Nature Reviews Microbiology 5, 316-323 (April 2007)

Oxgeno
Enzimas Aerobios
Obligados Facultativos Es necesario para el crecimiento, contiene SOD y catalasa. Crecen mejor en presencia de oxgeno, presentan SOD y catalasa. Requieren baja concentracin de O2, presentan SOD y catalasa. Respiracin aerobia Respiracin aerobia, anaerobia y fermentacin Respiracin aerobia Micrococcus luteus P. aeruginosa Enterobacter sp. S. cerevisiae

Metabolismo

Ejemplos

Microaeroflicos

Spirillum vollutans

Anaerobios
Aerotolerantes Obligados No requieren O2, pero crecen en su presencia. Slo SOD. El O2 es letal, no contiene enzimas destoxificantes Fermentacin Fermentacin o respiracin anaerobia S. pyogenes Clostridium sp. Metanobacterium formicicum

Relacin con el O2
Crecimiento en medio fluido de Tioglicolato.

Aerobio obligado

Aerobio facultativo

Microaeroflico

Anaerobio aerotolerante

Anaerobio obligado

Cultivo de anaerobios
Jarra de anaerobiosis NaHCO3 + NaBH4 + O2 CO2 + H2O + H2

Enzimas destoxificantes
O2 + e- O2- + e- + 2H+ H2O2 + e- + H+ HO. + e- + H+ Reaccin general: O2- Superxido H2O2 Perxido de hidrgeno H2O + OH. Radical hidroxilo H2O Agua O2 + 4e- + 4H+ 2H2O

Superxido dismutasa (SOD) O2- + O2- + 2H+ ! H2O2 + O2 Catalasa H2O2 + H2O2 2H2O + O2 Peroxidasa H2O2 + NADH + H+ ! 2H2O + NAD+

Concentracin de solutos
Concepto
No Halfilos Halfilos moderados Halfilos extremos Halotolerantes

Definicin
Crecen en concentraciones de 1-6 % de NaCl Crecen en concentraciones de 6-15% de NaCl Crecen en concentraciones de 15-30% de NaCl Toleran disminuciones en el aw pero crecen mejor en ausencia de solutos. Son capaces de vivir en altas concentraciones de azcares. Crecen en condiciones de aw bajo.

Osmfilos Xerfilos

Actividad del Agua


aw es la relacin entre la presin de vapor del aire
aw
1.000 0.995 0.980 0.950 0.900 0.850 0.850 0.800 0.750

en equilibrio con una sustancia o solucin a la presin de vapor a la misma temperatura del agua pura. Medio de crecimiento
Agua pura Sangre humana Agua salada Pan Miel de maple, jamn Salami Pastel de frutas, jalea Lagos salados Cereales, dulces, frutas secas

Microorganismos que desarrollan


Caulobacter, Spirillum Streptococcus, Escherichia Pseudomonas, Vibrio Muchos cocos G+ Cocos GSaccharomyces rouxii Saccharomyces bailii, Penicillium Halobacterium, Halococcus Xeromyces bisporus y otros hongos xerfilos.

En la mayora de los casos, el citoplasma tiene una conc. de solutos mayor a la del medio, sin embargo, cuando es al revs, existe la tendencia a salir agua de la clula. !! El agua de mar tiene aprox 3% de NaCl. Los "oos marinos tienen una alta dependencia del in Na+: halfilos. !! Halfilos discretos: 1-6% NaCl !! Halofilos moderados: 6-15% NaCl !! Halfilos extremos: 15-30% NaCl
!!

!!

Halotolerantes: Pueden soportar alguna reduccin de la aW del medio, pero generalmente crecen mejor en ausencia de solutos aadidos

Solutos compatibles
Son compuestos que forman los microorganismos para compensar la concentracin de solutos exterior. !Aminocidos: Glicina-betana y ectoina
CH3 CH3 N CH2 CH3
Glicina-Betaina

CH2 N COOC CH3 N


Ectoina

CH2 C COO-

!Carbohidratos: Sacarosa y trehalosa !Poli alcoholes: Manitol y glicerol !Otros: KCl y propionato dimetilsulfnico (PDS)

Formacin de solutos compatibles


Organismo
Bacterias no fottrofas Cianobacterias de agua dulce Cianobacterias marinas Algas marinas Cianobacterias de lagos salados Bacterias fototrpicas, anoxignicas haloflicas ( Ectothiorhodospira) Arqueas halfilas extremas (Halobacterium) y algunas bacterias (Haloanaerobium) Alga verde haloflica (Dunaliella) Levaduras xerfilas Hongos filamentosos xerfilos

Soluto principal
Glicina betana , prolina (G+), glutamato (G-) Sacarosa, trehalosa !-glucosilglicerol Manitol, glucsidos, prolina, PDS Glicina betana Glicina betana. Ectona, trehalosa KCl

aw mximo
0.97 0.90 0.98 0.92

0.90 0.75

0.75

Glicerol Glicerol Glicerol

0.75 0.83 0.62 0.72 0.61