Que indicaban los experimentos de fusin celular? RLFs Como se descubri que haba un sitio de inicio?

Caractersticas de los orgenes eucariotes Como se supo quien reconoca el sitio de inicio? Genes de mating en levaduras Mutaciones MCM

FASE S DNA
ORIGEN DE REPLICACION ATTTAATATTTT TAAATTATAAAA PROTEINAS ORC (1-6) G1-M

CDC6 M-G1

CDT1

PROTEINAS MCM (2-7)

G1-S

CDC6 M-G1

CDT1

CDC6: Acumulacin desde anafase. Regulacin por CDKs Degradacion por proteasoma dependiente de M-CDKs y S-CDKs Posicionamiento en G1 tarda, salida en distintos tiempos de S Transporta a MCM7 Estabilizacin causa re-duplicacin Trabaja en conjunto con CDT1

PROTEINAS ORC (1-6) G1-M

Seis protenas ORC, todas esenciales Protenas ORC: Marca permanente de los sitios de origen. Todas tienen sitios de unin a ATP, pero solo Orc1 es ATPasa Orc2 tiene unin mas estable en el origen. Orc6, unin a DNA? Orc1 entra y sale del sitio. Se UB y se P por Cdks Orc4 es peculiar en S. pombe y quizs Xenopus Contacto con Cdc6 y con MCMs Participaran en silencing y en control de transcripcin

CDC6 M-G1

CDT1

CDT1: Corresponde a lo que se llam RLF-B Presente en fase M en forma inactiva: degradacin-inhibicin Sustrato del proteasoma Inhibido por la protena geminina en G1-S, auxiliado por MCM9 Acumulacin provoca re-duplicacin Fundamental para el cargado de MCMs (MCM7?) y su actividad de desapareo Trabaja en conjunto con CDC6

PROTEINAS MCM (2-7)

G1-S

Seis protenas diferentes, todas esenciales Todas contienen motivos de unin a ATP. ATPasa slida solo estando las 6 MCM4, 6, 7 son una helicasa; MCM2, 3, 5 controlan la actividad Fosforilables por S-CDKs y por DDK en forma cooperativa Se acumulan desde G1 temprana, pero sobre DNA hasta G1 tarda Requieren forzosamente la presencia de CDC6 y CDT1 Corresponden a lo que se llamo RLF-M

CICLO DE CICLINAS Fase M ORC Fase G1

PROTEASOMA G1 G1-Cycs

Cycs-Cdks de G1 Cycs-Cdks de M P

M-Cycs

Cdc6

Cdt1

PROTEASOMA M-G1

Fase G1 Cycs-Cdks de G1 E2F MCMs P-RB Transcripcin p27 CycE, Cdc7, Dbf4 Cks1 P Pre-replication CAKs Complex P CycE-Cdk2 Cdc7-Dbf4

Metabolismo centrosomal Cargado de MCM (sin CDK) CycE-Cdk2 Cdc7-Dbf4 Transicin a S

CycE-Cdk2

Cdc7-Dbf4

CycE-Cdk2 P

Cdc7-Dbf4 P (MCM 2 y 4) P P

CDK2/CIC E,

CDC 45 SLD1, MCM1, MCM10 SLD2, SLD3

CDC7/DBF 4, (asociacin a MCM4, MCM7, MCM2, MCM6) y P

pp

ACTIVACION DEL ORIGEN

ppp

pp

ppp

ACTIVACION DEL ORIGEN

RPA, Cdc45, Sld1, DNA pol alfa-primasa

RP-A PCNA GINS

DNA POL ALFA-PRIMASA CDC45-MCM10-MCM8

RF-C

DNA POL DELTA-cadena discontinua DNA POL EPSILON- cadena continua FEN-1 RNASA H

DNA LIGASA
Al menos 30 protenas en la horquilla!!

Ciclina A/Cdk2

Cadena continua

Polimerasa Helicasa

Cadena discontinua

Primasa Cebador de RNA

Protena de unin a cadena sencilla

PCNA (matchmaker) e interacciones

Monmero Interactua con:

Dmero

DNA ligasas, DNA polimerasas, RPA, RFC, CAF, Fen1, CDks, ciclinas, p21, p27, Cdt1, etc. Modificacin por ubiquitinacion, sumoilacion, fosforilacin

Otras funciones: Protenas de remodelaje de la cromatina Factores de ensamblaje de la cromatina (CAF) Cohesinas (protenas SCC y SMCORC2) DNA topisomerasas

Tipos de orgenes: Orgenes tempranos Orgenes tardos Como se regulan???? Montaje y activacin de orgenes: Rad53