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Analysed Document: Submitted: Submitted By: TESIS fatima.docx (D10129799) 2014-03-02 03:06:00 nena_fa@hotmail.es

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TESIS VALIDACIONES .pdf (D10123720) http://productospegaso.com/index.php http://es.wikipedia.org/wiki/Biorreactor http://darwin.usal.es/profesores/pfmg/sefin/MI/tema14MI.html http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/libro_25_aniv/capitulo_31.pdf http://www.arian.cl/downloads/nt-002.pdf http://es.scribd.com/doc/47628024/Tema-7-Clase-7-Estrategias-biotecnologicas-2-ppt-Modo-decompatibilidad;

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ESCUELA SUEPRIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS DISEO Y CONSTRUCCIN DE UN BIORREACTOR ANAEROBIO EN FASE LIQUIDA PARA TRATAR AGUAS RESIDUALES DE CURTIEMBRE TESIS DE GRADO Previo a la obtencin del ttulo de: INGENIERO EN BIOTECNOLOGA AMBIENTAL FTIMA GABRIELA FLORES PALTN JOHANNA PAOLA VELN SAGBAY RIOBAMBA-ECUADOR 2014 AGRADECIMIENTO Agradecemos en primer lugar a Dios por darnos la fuerza y la sabidura necesaria para enfrentar las adversidades y lograr nuestro objetivo. A nuestra familia por ser nuestro soporte y principal apoyo en todo momento, y por bridarnos su amor incondicional. Nuestro ms sincero agradecimiento a la Dra. Nancy Veloz, al Dr. Gerardo Len y al Dr. Roberto Erazo por brindarnos su apoyo y colaboracin en el desarrollo de este proyecto; as como tambin agradecemos a la Ing. Fernanda Rivera y a la Dra. Gina lvarez por dedicarnos su tiempo y apoyo. Agradecemos a la Escuela Superior Politcnica de Chimborazo, al Centro de Servicios Tcnicos de Transferencia Tecnolgica Ambiental CESTTA y a todo el personal que labora en la institucin por compartir con nosotras su tiempo y conocimientos. DEDICATORIA Yo, Ftima Gabriela Flores Paltn en primer lugar dedico a Dios por iluminar mi vida en cada paso, agradezco a mi madre que ha sido mi principal apoyo y me ha brindado su amor incondicional, a mis hermanos por apoyarme siempre y con su ejemplo guiarme. A mi hijo y mi esposo que ha sido mi apoyo y me ha brindado su ayuda en el desarrollo de esta tesis. Yo, Johanna Paola Veln Sagbay NOMBRE FIRMA FECHA Dr. Silvio lvarez DECANO FAC. CIENCAS . Dra. Nancy Veloz DIRECTORA DE TESIS . Dr. Gerardo Len MIEMBRO DEL TRIBUNAL .

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Nosotras, FTIMA GABRIELA FLORES PALTN Y JOHANNA PAOLA VELN SAGBAY, somos responsables de 0: TESIS VALIDACIONES .pdf 93%

las ideas, doctrinas y resultados expuestos en esta Tesis, y el patrimonio intelectual de la Tesis de Grado pertenecen a la Escuela Superior Politcnica de Chimborazo NDICE DE ABREVIATURAS A rea del fermentador Ap Alto de la paleta C Margen de corrosin Cp Capacidad calorfica de la mezcla Di Dimetro de agitador Dp Dimetro usado por la paleta e Espesor de la pared E Eficiencia de la soldadura Er Espesor del rodete ET Espesor de la tapa Densidad Densidad de entrada Densidad del liquido Densidad de salida Densidad del solido Fe Flujo de entrada Fs Flujo de salida h Coeficiente de transmisin de calor hc Altura de la camisa hfr Altura entre el fondo del tanque y el rodete hs Altura de seguridad HT Altura total del fermentador hu Altura til K Conductividad trmica de la mezcla L Altura del agitador Lb Longitud del brazo ma Masa del agua mai Masa del acero inoxidable mc Masa del estircol de caballo mep Masa del estircol de cerdo ml Masa del lactosuero Ni Velocidad de rotacin en revoluciones por segundo Np Nmero de potencia Nu Nmero de Nusselt P Presin total Po Presin de operacin Pr Prandal Ps Presin de seguridad Qs Flujo de calor del sustrato T Gradiente de temperatura r Radio del tanque Re Numero de Reynolds rext Radio externo rint Radio interno S Esfuerzo del material TF Temperatura ideal del fermentador Te Temperatura de entrada Ts Temperatura de salida v Velocidad de la esfera V Volumen Vbase Volumen de la base Vc Volumen contenido en la camisa Vext Volumen externo Vint Volumen interno INDICE DE CONTENIDO Tabla de contenido BIOTECNOLOGA1 RESEA HISTRICA2 CONCEPTO3 CLASIFICACIN DE LA BIOTECNOLGA RIESGOS DE LA BIOTECNOLGA . RIESGOS A LA SALUD HUMANA RIESGOS AL MEDIO AMBIENTE RIESGO SOCIO-POLTICO BENEFICIOS DE LA BIOTECNOLOGA BIOTECNOLOGA AMBIENTAL DEFINICIN.. Escribir el ttulo del captulo (nivel 1)4 Escribir el ttulo del captulo (nivel 2)5 Escribir el ttulo del captulo (nivel 3)6 NDICE DE FIGURAS NDICE DE TABLAS NDICE DE GRFICOS NDICE DE ECUACIONES NDICE DE ANEXOS RESUMEN Se dise y construy un biorreactor anaerobio fed batch a escala de laboratorio, el mismo que tiene como finalidad tratar aguas residuales de curtiembre, rediciendo el Cr3+ del agua residual as como la DQO a niveles permisibles. Se dise el biorreactor con ayuda de AUTOCAD as como como su construccin de la realizo en acero inoxidable, con una capacidad de 6 L, cuanta con una camisa con calentamiento y sensores de control automtico. Mediante el uso de un mix bacteriano que consiste en una mezcla de estircol (porcino u caprino), se prepar el inculo con el cual trabaja el reactor; utilizamos un total de 1000 mL de inculo. El tratamiento se realiz durante 4 semanas obteniendo como resultado 120 mg/L de Cr3+, con lo cual concluimos que el tratamiento fue exitoso en concentracin pero deficiente en el tiempo; por lo que se sugiere el aislamiento de las bacterias sulforeductoras. SUMMARY INTRODUCCIN En el Ecuador el tratamiento de las aguas residuales de la industria ha empezado a tener un nivel de inters muy alto, lo que ha permitido implementar diversos sistemas de tratamiento con la finalidad de cumplir con los estndares exigidos por la norma vigente en el pas, como es el TULSMA. Nuestro proyecto de tesis se desarrollara en su primera fase a escala de laboratorio que aporta a la industria de la curtiembre con un tratamiento de sus residuales lquidos; en especfico la eliminacin del Cr3+ as como su DQO, es una tecnologa innovadora y 3

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sustentable, mediante el uso de bacterias y equipos idneos para el proceso. Para que el inculo cumpla con los objetivos planteados es importante tener un equipo adecuado, el mismo que lo diseamos y construimos; utilizando frmulas y datos de crecimiento de los microorganismos y resistencia l tiempo de retencin; de tal manera que nos sirva como un medio de crecimiento y tratamiento apto para las bacterias y el agua residual de curtiembre respectivamente. La investigacin y la construccin de nuestra tesis son asistidas por el centro de investigacin y transferencia tecnolgica CESTTA y la escuela de Ciencias Qumicas de la ESPOCH. ANTECEDENTES A nivel de Latinoamerica, en Mxico especficamente, podemos encontrar casos en los que se ha realizado el tratamiento de aguas residuales con el fin de obtener una agua apta para el uso agrcola; se us un biorreactor de lecho fijo de flujo ascendente a escala semipiloto que fue operado con una altura de lecho de 0.65 m y un tamao de partcula de 1.87 mm y que tuvo un eficiencia de remocin de materia orgnica contaminante en un 91.9% y adems se evidenci una disminucin significativa de metales pesados; sin embrago result poco eficiente en la remocin de sales. En Chile se realiz un estudio acerca de Biorreactores de Membrana para el tratamiento de aguas de curtiembre en el que un lodo de una planta de tratamiento de aguas residuales de un frigorfico de aves fue utilizado como inculo. A las 240 h de haber empezado el tratamiento se consiguieron resultados efectivos en la remocin de DQO y nitrgeno total en un 70 y 86% respectivamente. En Per se us un biorreactor de tanque agitado al que se adicion glucosa, sales, entre otros nutrientes tiles para Pseudomonas sp, el proceso se monitore durante 6 das y se obtuvo una disminucin de cromo total considerable sin embargo tambin se determin que no hubo una reduccin significativa de cromo hexavalente, solamente se obtuvo una disminucin del 13.51% de este contaminante. En Colombia se ha desarrollado una investigacin para el tratamiento de aguas residuales textiles que consiste en la aplicacin de un biorreactor de membrana a escala piloto que contiene membranas de ultrafiltracin y microfiltracin, los resultados que arroj esta investigacin fueron afectivos ya que se redujeron parmetros como materia orgnica en un promedio de 89%, slidos suspendidos totales en un 95% y color en un 69%. Adems los resultados fueron comparados con un sistema de lodos activos lo que demostr la eficiencia y estabilidad del proceso mediante el uso del biorreactor. OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Disear y construir un biorreactor anaerobio de cinco litros tipo Fed-batch en fase lquida para el tratamiento de aguas residuales de la curtiembre; precipitando el Cr3+ y reduciendo la DQO; a escala de laboratorio. OBJETIVOS ESPECFICOS Caracterizar fsico y qumicamente el agua residual de la industria de la curtiembre. Caracterizar fsico-qumico y microbiolgicamente el agua residual de curtiembre antes, durante y despus del tratamiento Implementar el biorreactor anaerobio tipo fed-batch en fase liquida, en el laboratorio de biotecnologa de la escuela de Ciencias Qumicas. Comprobar la eficiencia del biorreactor y el medio de cultivo en la precipitacin del Cr 3+ y la reduccin del DQO. CAPITULO I o BIOTECNOLOGIA La biotecnologa es un amplio tema de estudio pero en este tem se desarrollar la historia y aspectos importantes de la misma para introducirnos en el tema del proyecto. Para poder saber ms de cerca la importancia de la biotecnologa en el proyecto de investigacin debemos conocer todo lo que esta nos ofrece desde sus principios que a continuacin lo conoceremos. RESEA HISTORICA Desde principios de los tiempos se ha venido desarrollando la biotecnologa, claro est de una manera emprica; lo que nos permite tener bases de cmo desarrollarla para la investigacin moderna hoy en da. Se pueden nombrar muchos indicios de la biotecnologa y entre los ms importantes se citan los siguientes: Domesticacin de plantas y animales desde el Neoltico (7000 3000 a.C.) Los egipcios fabricaban pan a partir del trigo hacia el 4000 a.C. En Sumeria y Babilonia (6000 aos A.C.) elaboraban cerveza. 4

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Segn la Biblia, No "sufri" (o disfrut) accidentalmente los efectos de la fermentacin espontnea del mosto de la uva. Los incas (1200-1535) podan conservar sus papas mediante la liofilizacin (chuo) y su carne mediante el salado o charque, as mantuvieron unos 10-30 millones de habitantes perfectamente vestidos y alimentados). Otros procesos biotecnolgicos conocidos de modo emprico desde la antigedad: cultivo de championes, fabricacin de queso, alimentos y bebidas fermentadas no alcohlicas (salsa de soja, yogur, etc.), tratamiento de aguas residuales (1). Se les considera como padres de la biotecnologa a investigadores como Van Leeuwenhoek y Robert Hooke (siglo XVII) quienes plantean la existencia de animlculos que se encuentran fuera del alcance del ojo humano, es decir, son microscpicos. Este planteamiento de la existencia de seres microscpicos no fue sino escuchada hasta despus de unos siglos con la aparicin de un nuevo investigador, Louis Pasteur quien realiz una investigacin minuciosa y detallada en los aos 1857-1876, demostrando en ella la relacin de los microorganismos en procesos como la fermentacin y/o putrefaccin o incluso conservacin de alimentos. Como se puede ver los indicios de la biotecnologa desde inicios de la humanidad son a partir de la necesidad de alimentos, es por ello que con la investigacin de Pasteur se inicia la produccin industrial de etanol, butanol, cetona, entre otros, mediante una fermentacin expuesta y sin esterilizacin. En 1919 el ingeniero hngaro Karl Ereky conocido como el padre de la biotecnologa por ser el primero en utilizar esta palabra en sus investigaciones, con una recopilacin de la informacin de los microorganismos la manipulacin gentica para su beneficio, inicia el apogeo de la biotecnologa como herramienta en distintas reas de inters alimentario e incluso medicinal. Es importante recalcar la ligadura que ata a la biotecnologa con la gentica desde el principio y que las mantiene ligadas hasta hoy. La edad de oro de la bacteriologa, toma su auge a finales del siglo XIX con la implementacin de tcnicas de fermentacin esterilizadas tales como la pasteurizacin, la penicilina, el descubrimiento de enzimas de restriccin. Concepto Existen muchos conceptos que se le acreditan a la biotecnologa, algunos de estos los citaremos para obtener un mejor enfoque. La Organizacin para la Cooperacin y el Desarrollo Econmicos (OCDE), se define la biotecnologa como la aplicacin de los principios cientficos y tcnicos al tratamiento de los materiales por los agentes biolgicos para obtener bienes y servicios (2). La real academia de la lengua define a la biotecnologa como: 1.f.Empleo de clulas vivas para la obtencin y mejora de productos tiles, como los alimentos y los medicamentos.2.f. Estudio cientfico de estos mtodos y sus aplicaciones (3). Considerando las definiciones ya existentes de la biotecnologa nuestro perspectiva se la explicara de esta manera: la biotecnologa es un conjunto de procesos ligados a los microorganismos, los mismos que permiten alcanzar resultados eficientes, en tiempo y dinero, en diferentes campos de la ciencia, sean estas: medicina, industria, gentica, alimentos, entre otros. En s hablar de biotecnologa es hablar de avances tecnolgicos, conocimientos e investigacin; llegando a convertirse en una de las ramas de la ciencia de la vida, ms importantes y por supuesto ms estudiadas desde niveles primarios hasta los ms prestigiosos centros de investigacin en el mundo. CLASIFICACIN DE LA BIOTECNOLOGA Al ser una rama muy amplia la biotecnologa merece un estudio detallado y por ende una clasificacin muy amplia, presentamos en este punto una clasificacin detallada de sta: La Biotecnologa Animal: una de las ms importantes por su aporte a la sociedad y la medicina con procesos como aislar genticamente los genes que permiten la cura de enfermedades humanas, permitiendo el desarrollo de vacunas. Otra aplicacin muy comn es la fertilizacin in vitro y el uso de hormonas de crecimiento. La Biotecnologa Industrial: se ha manejado de maneja eficiente en empresas como la farmacutica as nos explica el siguiente artculo de las farmacuticas Pharmagenesis y Mosanto 5

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que usa plantas para la produccin de sus medicinas en cantidades industriales: La empresa Americana Pharmagenesis que une, en la investigacin de las plantas, la biologa y la informtica. Esta empresa basa sus estudios en el anlisis de una planta china, llamada "Liana del Dios del Trueno", ha sido investigada qumica y genticamente y se ha descubierto que es eficaz contra la artritis y adems es anticancergena, ya que la molcula extrada de la planta provoca el suicidio de las clulas cancergenas de distintos tumores. Los chinos llevan mucho tiempo utilizando de manera natural estas plantas, pero Pharmagenesis tiene la patente para explotar el principio activo de la "Liana del Dios del Trueno" y los chinos no obtienen ningn beneficio de ello, en cambio, esta empresa ganar mucho dinero por los derechos de autor en la venta de cada caja de medicamento que se venda. Pharmagenesis piensa que de alguna forma compensa a los ciudadanos chinos, puesto que les compra las plantas y porque todos sus empleados, en China, son nacionales de pas. Otra de estas industrias es Monsanto. Esta empresa americana es una de las gigantes de la qumica y los plsticos, y desde hace poco, de los genes (4). La Biotecnologa Ambiental: es la aplicacin de organismos vivos para proteccin del medio ambiente, mediante tcnicas que permiten obtener resultados eficientes y amigables con la naturaleza, algunas de sus aplicaciones son: la biorremediacin (uso de sistemas biolgicos para la reduccin de la polucin del aire o de los sistemas acuticos y terrestres) se est enfocando hacia el suelo y los residuos slidos, tratamientos de aguas domsticas e industriales, aguas procesadas y de consumo humano, aire y gases de desecho, lo que est provocando que surjan muchas inquietudes e interrogantes debido al escaso conocimiento de las interacciones de los organismos entre s, y con el suelo. Los sistemas biolgicos utilizan microorganismos y plantas. Biotecnologa vegetal: como su palabra lo dice la biotecnologa vegetal trata de plantas, mejorando sus eficiencia en: crecimiento ms rpido, soporte o fuerza en su fisiologa para climas adversos, e incluso alargar su tiempo de vida; todo esto con ayuda de la ingeniera gentica. Biotecnologa Humana: Puesto que cada criatura es nica, cada una posee una composicin nica de ADN. Cualquier individuo puede ser identificado por pequeas diferencias en su secuencia de ADN, este pequeo fragmento puede ser utilizado para determinar relaciones familiares en litigios de paternidad, para confrontar donantes de rganos con receptores en programas de trasplante, unir sospechosos con la evidencia de ADN en la escena del crimen (biotecnologa forense). El primer tratamiento famoso en terapia gnica fue en 1990, cuando se trat una enfermedad del sistema inmune de nios llamada "Deficiencia de ADA" (4). RIESGOS DE LA BIOTECNOLOGA Toda investigacin innovadora tiene sus respectivos riesgos, los mismos que se pueden evidenciar de acuerdo a la aplicacin y/o uso de la investigacin, en nuestro caso la biotecnologa al aplicarse en campos de alta sensibilidad; grupos como la OECD (Organizacin para la Cooperacin y el Desarrollo) consideran como problemas de seguridad siete aspectos los cuales son: transferencia de genes, malezas, efectos de las caractersticas, variabilidad gentica y fenotpica, manifestaciones del material gentico tomado de patgenos, y seguridad del personal encargado del trabajo (Cook, l999) (5). Para dicha causa resumiremos los problemas introducindolos en una clasificacin de los riesgos que se derivan de la biotecnologa el riesgo a la salud humana, el riesgo ambiental y el riesgo en el impacto socio-poltico; cada uno de ellos conlleva efectos, los que detallaremos a continuacin. Riesgos a la salud humana Cuando hablamos de riesgos necesariamente tiene que existir una exposicin del agente o materia que est siendo motivo de controversia; en este caso la biotecnologa ha aportado muchsimo al desarrollo de la salud humana, pero tambin el uso de alimentos o medicamentos biotecnolgicamente creados o modificados ha causado efectos adversos en aquellos que los ingieren sin necesidad de la modificacin del alimento o medicina, plantearemos un ejemplo tpico, si un alimento es modificado genticamente para proporcionar a quien lo ingiera mayor cantidad de hierro, la persona que consuma este producto y tenga deficiencia de este elemento ser excelente pero para alguien que tiene niveles normales de hierro no es recomendable su ingestin, adems de la modificacin gentica que sufre el producto 6

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llegando a modificarse otros genes que no se requeran e incluso creando resistencia a antibiticos, siendo un riesgo potencial al ser humano en especial. Riesgos al medio ambiente Los riesgos ambientales son potenciales en dos aspectos: el primer efecto es la polinizacin cruzada, mediante la cual los organismos vivos GM se cruzan con otras especies dando lugar a una nueva especie pero esta no controlada convirtindose en una hierba mala, el segundo efecto es la resistencia a los insecticidas e incluso la depredacin de otras especies por el uso modificado de los mismos; como es el caso del uso de Bacillus thuringienisis (el gene Bt) en cultivos de maz y algodn el cual ocasion una resistencia de los insectos dainos al insecticida, as mismo la muerte de otros agentes vivos beneficiosos para los mismos cultivos, lo que se transforma un desequilibrio ecolgico. Siendo estos problemas y riesgos que se deben resolver y prevenir respectivamente para seguir manteniendo el equilibrio del ciclo de la vida; es importante realizar un plan de manejo de riesgos. Riesgo socio-poltico Como mencionamos en la conceptualizacin de la biotecnologa esta ltima est ligada ntimamente con la sociedad y las polticas de la misma; es por ello que tambin se considera un riesgo las decisiones del uso y manipulacin de los productos biotecnolgicos, puesto que la sociedad se ve involucrada directamente con sta. En si el riesgo de la biotecnologa en la sociedad apunta a una toma de decisiones adecuadas a la hora de utilizarla, adems de una conciencia en el uso y disposicin de las tecnologas que la biotecnologa ofrece a la sociedad, se puede considerar como un efecto importante la reaccin de ciertos grupos sociales interesados y aquellos que se encuentran en contra de las prcticas de estas tecnologas biolgicas; los intereses son muchos y las polticas siempre deben en pro de los que estn siendo gobernados, por lo que se debe equilibrar los intereses con lo que es necesario y fundamental. BENEFICIOS DE LA BIOTECNOLOGA Los beneficios de la biotecnologa se ven evidenciados en las mejoras en pro de la salud humana e incluso de flora y fauna, en las cantidades de productos GM que han revolucionado al mundo con sus capacidades enriquecedoras en cuanto a la agricultura, ambiente, medicina, entre muchas otras, el aporte incomparable en el campo ambiental otorgando no solo las herramientas para soluciones pasajeras sino para acabar con los problemas en definitiva de una manera segura y eficiente. No cabe duda que el xito de toda tecnologa es la eficiencia es por ello que la biotecnologa ha llegado a tener el xito que muchas otras tecnologas ni han podido alcanzar; la biotecnologa con su capacidad para resolver problemas con costes muy bajos y a un tiempo menor que el de otras propuestas de solucin que no alcanzado los estndares que la sociedad y el ambiente requieren en un mundo globalizado que corre a una velocidad impresionante tanto positiva como negativamente. o BIOTECNOLOGA AMBIENTAL La biotecnologa ambiental es parte fundamental de la biotecnologa siendo una de las ramas ms desarrolladas y de aporte a las ciencias cientficas, es importante conocer todo acerca lo que esta rama de la biotecnologa nos ofrece dentro de sus investigaciones como contribucin a la los proyectos en pro del medio ambiente. DEFINICIN La biotecnologa ambiental es en primer lugar una rama de la biotecnologa, que se orienta a la aplicacin de la biotecnologa para resolver o remediar problemas ambientales, ya sean stos, agricultura, minera, agroindustria, aguas residuales, etc., con el afn de conservar la calidad ambiental del medio en el cual la sociedad se desarrolla. Cuando se habla de biotecnologa ambiental hacemos referencia a un tema netamente nuevo; lo cual es un error al ser ste uno de los temas ms antiguos ya que nuestros antepasados antes de Cristo empezaron a tratar las aguas residuales domesticas de ese tiempo, claro est no era una tcnica sino un tratamiento emprico, todo este tratamiento emprico se lo realizaba con el dejar crecer microorganismo y macroorganismos que se dieron cuenta quitaba el color y olor de las aguas residuales. Estos fueron los primeros indicios que hoy nos llevan a definirle a la biotecnologa ambiental como parte fundamental de una lucha incansable por la proteccin del ambiente en el cual habitamos.

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IMPORTANCIA DE LA BIOTECNOLOGA AMBIENTAL Hablar de biotecnologa ambiental es hablar de una inminente solucin, que la humanidad en su constante lucha contra grupos sociales inconscientes del dao provocado por sus acciones destruye el medio en el cual vivimos, nace como una necesidad urgente de parar el deterioro ambiental. Podemos identificar la importancia de biotecnologa en los resultados expuestos de investigaciones en las cuales la biotecnologa ambiental ha tenido mucho que ver, podemos mencionar la biorremediacin de aguas y suelos contaminados, en especial con petrleo; estos tratamientos netamente biotecnolgicos han convertido a la biotecnologa ambiental en una aplicacin necesaria para la conservacin del medio ambiente. La eficiencia en el tiempo y dinero cuando se trata de proteger el medio ambiente indica que el una tecnologa apropiada e importante en el campo de la proteccin ambiental, su aplicacin ha alcanzado niveles desbordantes por su xito en las aplicaciones, en pases como Chile, Argentina y en el mismo Ecuador. Sin duda alguna que la biotecnologa ambiental hoy por hoy se ha vuelto indispensable para conservar y recuperar los espacios que nuestro planeta nos ofrece como un regalo de vida. APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGA AMBIENTAL Biorremediacin La biorremediacin es una tcnica de aplicacin de la biotecnologa ambiental, que conlleva el mismo principio de la biotecnologa, el aprovechamiento de microorganismos para la remediacin de espacios contaminados; si fuere necesaria la modificacin gentica del microorganismo para dicho fin o simplemente una estimulacin del organismo en accin. Dentro de los procedimientos ms utilizados de la biorremediacin podemos citar: Tratamiento de suelos y aguas.- para el tratamiento de stas se utilizan tcnicas especficas para cada caso; el suelo contaminado es tratado con tcnicas como el composteo, bioventilacin, biotransformacin, cada una de estas con el uso de el microorganismo adecuado para el contaminante indicado; en cuanto a las aguas residuales es mucho ms complejo puesto que se utiliza medios fsicos como tanques anaerobios/aerobios para la proliferacin de los microorganismos que se encargaran de la remediacin, as como biorreactores que cumplen con la misma funcin. Fitorremediacin.- es una tcnica muy usada en biorremediacin, lo cual no nos limita al uso nada ms de microorganismos en la biotecnologa ambiental, sino tambin el de las plantas como medio de remediacin. Mediante la fitorremediacin los contaminantes en especial metales pesados son absorbidos por la planta acumulndose en especial en las hojas de stas; donde surge una nueva dificultad, la disposicin final y/o uso de las plantas cargadas de metales pesados, por lo que la nica opcin viable es la incineracin, lo cual se podra considerar un punto en contra a esta tcnica sin dejar de lado la eficiencia en el procesos de absorcin que cumple el vegetal en cuestin. Industria Las industrias han tomado a la biotecnologa como un negocio lucrativo siendo aplicada en procesos de produccin industrial tales como: Produccin de biomateriales: consiste en la creacin de materiales de uso cotidiano biodegradables, tales como las fundas y plsticos biodegradables, como pueden lograrlo con microorganismo productores de plstico; 0: http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/libro_25_aniv/capitulo_31.pdf 89%

este polmero comenz a producirse a gran escala mediante un proceso de fermentacin semejante a la produccin de bebidas fermentadas como la cerveza o el vino, es decir, en tanques agitados conteniendo un medio lquido adecuado para la multiplicacin (crecimiento) de las bacterias productoras de PHA. El polmero se acumula en el interior de las bacterias, que en este primer proceso eran de la especie Alcaligenes eutrophus (llamado actualmente Wautersia 8

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eutropha). El producto obtenido se llam comercialmente BiopolTM, un copoliester de hidroxibutirato e hidroxivalerato (6). Biominera: esta una aplicacin de la biotecnologa ambiental que se nos refleja con claridad lo que la biotecnologa nos ofrece, puesto que en el campo de la minera tenemos reas contaminadas como la aguas, suelos e incluso aire, es ah donde entra en accin la aplicacin de microorganismos los cuales actan desde la depuracin de las aguas para los diferentes procesos hasta la separacin de contaminantes del suelo, agua e incluso aire con la aplicacin de biofiltros. En pases como Chile, Estados Unidos y en cantidades menos competitivas se encuentran Brasil y Argentina, usan tcnicas de biotecnologa ambiental para poder superar los problemas de contaminacin, en especial el recurso agua, generados por la explotacin minera. Uno de los casos de aplicacin de biotecnologa ambiental est en la recuperacin del Rio Tinto afectado por la explotacin de las balsas de fosfoyesos, en Espaa; el investigador de la Universidad de Huelva, Julio Cesar Castillo despus de una larga investigacin encuentra una solucin al problema de contaminacin generado por la explotacin de las balsas de fosfoyesos citndonos lo siguiente, explica su solucin: Mi teora es que se pueden evitar las filtraciones que contaminan la marisma y el Ro, que hoy en da se estn produciendo, creando una barrera natural de estas bacterias entre las balsas y el agua del Ro Tinto ya que las bacterias no dejaran pasar los metales txicos (7). Julio explica que estos organismos que estn en la marisma inmovilizan los metales txicos y aclara el proceso. Cuando los fosfoyesos entran en contacto con el agua, como por ejemplo el agua de lluvia, el de la propia marisma o el del Ro, los fosfoyesos se disuelven y en esta disolucin estn los metales txicos libres. Al fondo, en la marisma, estn las bacterias que precipitan hacia abajo estos metales txicos y los inmovilizan, es decir, las bacterias permiten que la disolucin de fosfoyesos se libere de los metales txicos contaminantes. Por tanto esta disolucin al llegar a la marisma no la contamina puesto que est libre de los metales txicos (7). VENTAJAS Y DESVENTAJAS As como la biotecnologa ambiental nos aporta grandes cantidades de beneficios, pues tambin tiene ciertas desventajas en sus aplicaciones; por lo que, se considera que el uso de la biotecnologa en pro del medio ambiente debe ser cuidadosamente manejada y controlada, a continuacin mostraremos en la tabla I las ventajas y desventajas de la biotecnologa ambiental. Tabla I. Ventajas y Desventajas de la Biotecnologa Ambiental VENTAJAS DESVENTAJAS Menor tiempo de remediacin de suelos y aguas contaminadas en comparacin con mtodos qumicos. Las investigaciones sobre las aplicaciones de la biotecnologa ambiental an son muy limitadas. Menor uso de recursos humanos en las inspecciones y procedimientos durante la remediacin. La proliferacin de los microorganismos utilizados en ambientes los cuales no se requiere de su accin. Reutilizacin de residuos orgnicos e inorgnicos. Los recursos econmicos pueden ser altos en cuanto a su automatizacin en equipos. Innovadoras soluciones amigables con el ambiente para su proteccin. Falta de investigacin para el descubrimiento de nuevos organismos vivos para su aplicacin en la biotecnologa ambiental. Capacidad multiusos de las estructuras y equipos como medios de remediacin. Uso mltiple de los microorganismos utilizados para los propsitos de remediacin, proteccin y prevencin de daos al medio ambiente. Fuente: F. Flores, J. Veln; ventajas y desventajas de la biotecnologa ambiental; 2013 Como podemos ver es una gran ventaja tener a la biotecnologa ambiental como una solucin muy viable;

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ya que las desventajas son reducidas en comparacin a los grandes aportes que esta nos ofrece, para proteccin ambiental. LIMITACIONES DE LA BIOTECNOLOGA AMBIENTAL Cuando hablamos de limitaciones de la biotecnologa nos exponemos a situaciones como la falta de inters y conocimientos de centros de investigacin que tienen los medios para poder desarrollar nuevos procesos que innoven la manera de remediar, proteger e inclusive manejar tecnologas limpias que mantengan el medio ambiente en el cual nos desarrollamos. Adems de las limitaciones de inversiones en investigacin, tenemos la falta de conocimiento de los grandes beneficios que la aplicacin de la biotecnologa ambiental nos ofrece, fundamentalmente en cuanto a remediacin o descontaminacin de recursos hdricos que han sido afectados por aguas residuales domsticas, los cuales en nuestro pas como en muchos ha llegado a tener excelentes resultados, la falta de divulgacin de la existencia y xito de estos procesos no ha permito una aplicacin ms amplia de stas. Por ltimo la ms importante limitacin radica en la cultura de la comunidad puesto que al escuchar microorganismos, en su gran mayora, se oponen totalmente a que se use microorganismos en los procesos de produccin ms limpia; lo cual ocasiona cierta limitacin, que si bien es cierto puede ser superada con una capacitacin a la poblacin involucrada para que conozcan la verdadera realidad y beneficio del uso de la biotecnologa ambiental para pro y mejora de nuestro medio de vida. LOS MICROORGANISMOS EN LA BIOTECNOLOGA AMBIENTAL Siempre que se menciona biotecnologa inmediatamente la asociamos con organismos vivos, lo mismo sucede con la biotecnologa ambiental, la relacionamos con microorganismos que se usan para solucionar problemas ambientales; por esa razn los microorganismos en este campo juegan un papel indispensable, sus funciones, caractersticas y capacidades hacen de los organismos microscpicos los mejores amigos del investigador en biotecnologa ambiental. Es merecedor destacar el uso adicional de plantas con propiedades excelentes en cuanto a la proteccin del medio ambiente; tanto es su aporte que existe una tcnica de biorremediacin propia para estos organismos vivos esta es la fitorremediacin, mencionada en puntos anteriores, alcanzando resultados prometedores en cuanto a descontaminacin de aguas con metales pesados. Estos organismos y microorganismos por su aporte significativo son acreedores a una propia investigacin; es por ello que citaremos algunos microorganismos utilizados en el campo de la biotecnologa ambiental: TABLA II. MICROORGANISMOS EN LA BIOTECNOLOGA AMBIENTAL MICROORGANISMOS CARACTERSTICAS APLICACIONES Acidithiobacillus ferrooxidans Oxidan gran cantidad de hierro. Minera Genero Thiobacillus Recuperacin de metales asociados a sulfuros. Aportan a la lixiviacin microbiana. Ayudan a la recuperacin de del cobre en solucin. Minera Cupriavidus metallidurans CH4 Proteobacteria extremfila/metalfila. Aislada en reas industriales: compuestos txicos; temperatura, humedad y pH fluctuantes; sin vegetacin, escases de microrganismos y nutrientes. Quimilitoauttrofa; crecimiento en biofilms, siderforos, gran versatilidad. Operones de resistencia a metales pesados. Tratamiento de aguas residuales con metales pesados Tratamiento de suelos contaminados con metales pesados. Biosensores Hansenula, Pitchia, Torulopsis, Saccharomyces Complejo vitamnico B, bajo contenido en cidos nucleicos. Atacan a la material ms difcil de degradar celulosa y lignina. Son mesfilos y termfilos. Actan de mejor manera en su ciclo de maduracin. Tratamiento de suelos contaminados con petrleo. Obtencin de compost. Cellulomonas, Alcaligenes 80% de protenas, aminocidos esenciales, muy alto contenido de cidos nucleicos. Tratamiento de aguas residuales domesticas e industriales. Tratamiento de suelos contaminados. Compostaje Fuente: F. Flores, J. Veln; Microorganismos en la Biotecnologa Ambiental; 2013 10

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o LOS BIORREACTORES DENTRO DE LA BIOTECNOLOGIA Los biorreactores son tecnologas innovadoras que la biotecnologa, y por ende la biotecnologa ambiental, las utilizan para llevar a cabo objetivos especficos tales como la maximizacin en grandes cantidades de microorganismos as como el tratamiento de aguas residuales; debido a su importancia ste se merece su propio espacio de estudio. GENERALIDADES BIORREACTORES 0: http://es.wikipedia.org/wiki/Biorreactor 75%

Un biorreactor es un recipiente o sistema que mantiene un ambiente biolgicamente activo (8), dicho de otra manera un biorreactor proporciona las caractersticas como pH, temperatura, oxgeno y sales que necesita un medio de cultivo para obtener, mediante procesos de reacciones bioqumicas, un producto deseado. Los biorreactores pueden ser construidos en materiales como vidrio y acero inoxidable debido a que estos materiales proporcionan mejor ambiente asptico y son resistentes a la corrosin lo que incrementa su productividad y vida til. De acuerdo a las necesidades los biorreactores pueden ser aerobios, que necesitan de un medio para proporcionarles oxgeno, o anaerobios que no necesitan de una fuente de oxgeno para obtener un producto. TIPOS DE BIORREACTORES Tomando en cuenta las funciones de cada biorreactor estos se clasifican en tres grandes grupos: Fermentadores bucle agitado por aire (air-lift) Fermentadores de torre Fermentadores con agitacin mecnica Fermentador air-lift.- conocido tambin como fermentador neumtico caracterizado porque el suministro de energa para mantener homogeneidad en su interior tiene lugar mediante la expansin isotrmica de la fase gaseosa introducida. Tiene la ventaja de que debido a su funcionamiento los microorganismos corren menos riesgos de ser destruidos y el consumo de energa es menor (9). Fermentador de torre.- se caracteriza porque la relacin entre el dimetro y la altura del tanque es grande, es decir que este tipo de fermentadores tienen una altura significativa en relacin con el dimetro del mismo, son utilizados comnmente en cultivos continuos y heterogneos. Fermentadores con agitacin mecnica.- a diferencia de los dos tipos de fermentadores descritos anteriormente son los ms usados debido a su fcil funcionamiento y confiabilidad; constan de un soporte de acero inoxidable, fijado en la tapa o en la base del reactor, que tiene un sistema de agitacin del tipo necesario segn el producto que se desee obtener. Las operaciones realizadas por estos biorreactores son las siguientes: 1. Homogeneizacin, para mantener temperatura y distribucin de concentracin uniformes. 2. Mezcla slido/lquido, para mantener una suspensin con una distribucin de slidos uniforme. 3. Procesos lquido/lquido, para dispersar una fase en otra, formar emulsiones y realizar extracciones. 4. Procesos gaseoso/lquido, para dispersar el gas en los lquidos, airear el lquido. 5. Intercambio de calor (10). i. INSTRUMENTACIN DE BIORREACTORES La instrumentacin de un biorreactor es una parte esencial del proceso que nos permite tener una visin y nos permite controlar lo que ocurre en el interior del biorreactor; la instrumentacin requiere de sensores que midan las variables de un 11

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proceso fermentativo, y sistemas que ajusten el equipo a un punto ptimo de operacin (10). Los parmetros que deben ser medidos en un biorreactor son pH, temperatura, oxigeno, formacin de espuma y presin, entre otros. Para llevar a cabo este proceso es necesario utilizar sensores adecuados para el medio en el que se van a encontrar, deben ser fcilmente esterilizables para poder mantener la asepsia adecuada en el interior del biorreactor. En nuestro caso las variables importantes a medir son pH y temperatura debido a las caractersticas y tipo de reactor propuesto. FIGURA 1. INSTRUMENTACIN DE UN BIORREACTOR FUENTE: RODRIGUEZ, A.C., CABRERA, A.I, Y VALENCIA, J.I. Diseo y construccin de los instrumentos de medicin para un biorreactor prototipo, Revista Mexicana de Ingeniera Biomdica. (Mxico) 24 (1); 56-59, 2003. 1. Control y medicin de temperatura Es indispensable que en el diseo y construccin de un biorreactor se controle y mida la temperatura del medio en el que se va a trabajar con el objetivo de mantener las condiciones adecuadas que se requieren para obtener los productos deseados. Para la medicin y control de la temperatura utilizamos termocuplas que son los sensores de temperatura ms comnmente utilizados en la industria. 0: http://www.arian.cl/downloads/nt-002.pdf 85%

Una termocupla se hace con dos alambres de distinto material unidos en un extremo (soldados generalmente). Al aplicar temperatura en la unin de los metales se genera un voltaje muy pequeo del orden de los mili volts el cual aumenta con la temperatura (11). 2. Control de pH La medicin de pH se la puede realizar de dos formas ya sea mediante el uso de indicadores o mediante el uso de pH metro, este ltimo es el mtodo ms adecuado cuando se requiere de mediciones exactas. El pH metro no es ms que un mtodo potencio mtrico que se basa en la medida del potencial elctrico (respecto a una referencia) de un electrodo sumergido en la disolucin problema, a partir de la cual es posible establecer la concentracin de la misma directa o indirectamente (12). ii. MODOS DE OPERACIN De acuerdo al modo de operacin de un biorreactor tenemos tres tipos. 1. Modo lote (Batch) 2. Modo lote alimentado (Fed-Batch) 3. Modo contino Un reactor de tipo batch o discontinuo tiene la caracterstica que el todos los nutrientes o sustrato es adicionado al inicio del proceso y el producto se obtiene luego de un lapso de tiempo. En los reactores semicontinuos es sustrato es alimentado en cargas sucesivas y el producto no se retira hasta finalizar el proceso. Esto indica que el volumen del medio de reaccin va variando conforme avanza el proceso (10) y este puede resultar un problema si no se da un control adecuado o los nutrientes son ingresados en cantidades o tiempo errneos. Este tipo de reactor aprovecha las ventajas tanto de un reactor discontinuo como de un reactor continuo y mejora su rendimiento; es ampliamente usado en la produccin de levadura de pan y produccin de antibiticos. Un reactor contino o quimiostato funciona de manera que la cantidad de nutrientes que entran es proporcional a la cantidad de nutrientes que sale, este reactor tiene la desventaja de ser susceptible a la contaminacin debido a su funcionamiento. iii. BIORREACTOR ANAEROBIO TIPO FED-BATCH 1. Caractersticas Generales Estos sistemas operan adicionando medio fresco, pero sin remocin del existente. Son muy tiles cuando se requiere una elevada densidad celular en la etapa de iniciacin del proceso que implica un alto consumo de nutrientes, especialmente de fuente hidrocarbonada que suele funcionar como sustrato limitante. 12

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Variante del batch alimentado; consiste en remover, al final de la operacin entre un 80 y un 90 % del cultivo y reemplazarlo por medio fresco. De esta manera puede eliminarse el perodo lag, satisfacerse sencillamente la necesidad de contar con inculos de gran tamao y a su vez evitar la esterilizacin del reactor entre dos ciclos (13). Ventajas y desventajas de los reactores fed-batch TABLA III. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL REACTOR FED BATCH VENTAJAS DESVENTAJAS Produccin de altas densidades celulares Se requiere de un mayor control de la asepsia para que no afecte al proceso. Condiciones controladas en el suministro de sustratos durante la fermentacin La acumulacin de microorganismos muertos puede contaminar el medio y afectar el proceso Control sobre la formacin de subproductos Incrementa la duracin de la fermentacin FUENTE: http://www.gl.umbc.edu/~gferre1/fedbatch.html Balance de masas reactores fed batch Balance de masa global Masa entra masa sale = Acumulacin Ecuacin 1 Supuestos - No hay flujos de salida Fs = 0 - Flujo de entrada Fe = F(t) - Densidad constante e =s Entonces Ecuacin 2 DISEO DE BIORREACTORES El diseo de reactores es un tema que debe ser analizado cuidadosamente ya que como mencionamos anteriormente un biorreactor debe mantener un ambiente biolgicamente activo para obtener los productos deseados, es indispensable considerar que su correcto diseo nos garantizar un buen funcionamiento y rendimiento. Inicialmente se debe determinar qu uso se dar al biorreactor para posteriormente definir el tipo de biorreactor, el modo de operacin, el ambiente al que se va a encontrar expuesto, etc. Otras consideraciones importantes que debemos conocer es la cintica de la reaccin para entender cmo trabaja nuestro biorreactor, un balance de masa, nutrientes y productos nos guiarn en el diseo del reactor. El rendimiento de cualquier biorreactor depende de muchas funciones, tales como los enumerados a continuacin: Concentracin de la biomasa Condiciones estriles Efectividad de la agitacin Calor removido Nutrientes

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Productos removidos Productos inhibidos Aireacin Metabolismo/actividad microbiana (13). El movimiento en el interior del biorreactor debe garantizar que la mezcla sea homognea que contribuye a una temperatura uniforme, evitar formacin de sedimentos y lograr en nuestro caso que el inoculo pueda combinarse completamente con el agua contaminada. Para llegar a nuestro objetivo la velocidad de agitacin debe ser considerablemente mnima para evitar que los microorganismos sean destruidos y fallar con nuestro proyecto. 0: http://es.wikipedia.org/wiki/Biorreactor 100%

Cuerpo del biorreactor Recipiente o contenedor que alberga al cultivo o microorganismo (8). El cuerpo del biorreactor es el lugar donde se lleva a cabo todo el proceso de fermentacin brindando a los microorganismos el ambiente necesario para su desarrollo; este puede variar desde un volumen muy bajo hasta grandes volmenes que son requeridos a escala industrial. Cuenta con formas diferentes as como estructuras diferentes debido a su uso y tipo de reactor, puede ser cncavo, redondo e incluso cilndrico, todo esto aporta a un eficiente resultado en el tratamiento o crecimiento celular, si este fuera el caso. Sistema de agitacin Todo biorreactor necesita un sistema de agitacin, que permita una mezcla completa del medio que se encuentra en el cuerpo del reactor. Este sistema de agitacin es completamente independiente de una oxigenacin que es propio de los reactores continuos; el sistema de agitacin que est presente en todos los biorreactores, es importante durante el proceso ya que permite una homogenizacin adecuada del medio. Existen diversos tipos de agitadores que son usados de acuerdo a requerimientos industriales o de laboratorio y dependern tambin del medio o la sustancia en la que vayan a trabajar. As podemos mencionar las siguientes. Agitadores rotativos Este tipo de agitadores son los ms utilizados en la tecnologa de biorreactores donde el mvil de agitacin se encuentra unido a un eje conectado a un motor elctrico (14). FIGURA 2. CARCTERSTICAS HIDRODINMICAS DE UN BIORREACTOR FUENTE: GUEVARA, E. Diseo construccin y caracterizacin hidrodinmica de un biorreactor multifuncional. Tesis Ing. Alimentos. Oaxaca Universidad Tecnolgica de la Mixteca, 2004, 107 p. Dentro de este tipo de agitadores encontramos agitadores de gasto radial de los cuales los ms comunes son la turbina Rushton y agitadores de ancla y de paleta, y de gasto axial entre los que encontramos hlices marinas, agitador de cinta helicoidal entre otros (14). Tapas Las tapas dentro de los biorreactores son de gran importancia, debido a la funcin que cumplen proteger, cubrir y sellar al medio que se encuentra dentro del cuerpo del reactor; en todo reactor que ejerza presin la tapa debe estar diseada para soportar la misma, es por eso que se las clasifica de la siguiente manera: Tapas toriesfricas Este tipo de tapas soportan presiones altas ya que el radio de abombado es casi igual a su dimetro. Son las que mayor aceptacin tienen en la industria, debido a su bajo costo y a que soportan altas presiones manomtricas, su caracterstica principal es que el radio de abombado es aproximadamente igual al dimetro. Se pueden fabricar en dimetros desde 0.3 hasta 6 metros (8). 14

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Tapas semiesfricas Utilizadas exclusivamente para soportar presiones crticas. Como su nombre lo indica, su silueta describe una media circunferencia perfecta, su costo es alto y no hay lmite dimensional para su fabricacin Tapas Semielipticas Son empleadas cuando el espesor calculado de una tapa toriesfrica es relativamente alto, ya que las tapas semielpticas soportan mayores presiones que las toriesfricas. El proceso de fabricacin de estas tapas es el troquelado, su silueta describe una elipse relacin 2:1, su costo es alto y en Mxico se fabrican hasta un dimetro mximo de 3 metros (8). Tapas planas Se utilizan para cerrar recipientes sujetos a presin atmosfrica generalmente, aunque en algunos casos se usan tambin en recipientes sujetos a presin. Su costo entre las tapas es el ms bajo, se utilizan tambin como fondos de tanques de almacenamiento de grandes dimensiones. Tapas cnicas Se utilizan generalmente en fondos donde pudiese haber acumulacin de slidos y como transiciones en cambios de dimetro de recipientes cilndricos. Su uso es muy comn en torres fraccionadoras o de destilacin, no hay lmite en cuanto a dimensiones para su fabricacin y su nica limitacin consiste en que el ngulo del vrtice no deber ser mayor de 60 (8). Las tapas cnicas con ngulo mayor de 60 en el vrtice, debern ser calculadas como tapas planas. Deber tenerse la precaucin de reforzar las uniones cono-cilindro de acuerdo al procedimiento. Sistemas de control En algunos casos, en especial en el siglo XXI, los biorreactores usan como sistema de control automatizacin de los mismos; esto consiste en disminuir la mano de obra y minimizar el tiempo de trabajo, ya que se automatiza todo el sistema o simplemente algunos de los procesos. Se pueden automatizar los sensores para que controlen parmetros como: pH, temperatura, oxgeno disuelto, conductividad, etc.; tambin se pueden automatizar las entradas y salidas de inculos y medios de cultivo, a la par de esto se puede llegar incluso a automatizar el ensamblaje y viceversa. Todo esto monitoreado por una pantalla led la misma que nos genera las lecturas de los sistemas automatizados del biorreactor, reduciendo costos, mano de obra y minimizando costos de operacin. Como todo equipo automatizado requieren de mantenimiento y cuidado especial debido a la fragilidad de los equipos electrnicos. DIMENSIONAMIENTO DEL BIORREACTOR Para el dimensionamiento del biorreactor se requiere de la utilizacin de frmulas preestablecidas, las mismas que nos permitirn realizar un modelo nico y preciso para la investigacin. Clculo de la altura Para el clculo de la altura usamos la siguiente frmula: Ecuacin 3 De la que despejamos h Ecuacin 4 Donde: h: altura del fermentador (m) V: volumen (m3) r: radio del fermentador (m) Clculo de la altura de seguridad Ecuacin 5 Donde: h: altura del fermentador (m) hs: altura de seguridad (m) Clculo de la altura total del tanque Ecuacin 6 Donde: HT: altura total (m) h: altura del fermentador (m) hs: altura de seguridad (m) Clculo de la presin total Ecuacin 7 Donde: P= Presin total PO= Presin de operacin PS= Presin de seguridad Clculo del espesor de la pared 15

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Ecuacin 8 Donde: R= Radio interno en pulgadas E= Eficiencia de la soldadura, se toma el valor de 0,95 S= Es el esfuerzo del material. Para el acero AISI es 2850 lb/pulg2 a la temperatura de diseo P= Es la presin total. Clculo del espesor de la tapa Ecuacin 9 Donde: r = Radio (plg) E = Eficiencia de la soldadura (95%) S= Es el esfuerzo del material. Para el acero AISI es 2850 lb/pulg2 a la temperatura de diseo P = Presin total (PSI) C = Margen de corrosin (1/16 plg) Altura de cmara de calefaccin Considerando que la altura de la cmara de calefaccin es el 80% de la altura total del cilindro se determina que: Ecuacin 10 Dnde: hc= Altura de la cmara de calefaccin HT= Altura total Volumen de la cmara de calefaccin Ecuacin 11 Sistema de Agitacin Altura del agitador Ecuacin 12 Dnde: L = Altura del agitador (cm) t= Dimetro del cilindro (cm) Longitud del brazo Dentro del sistema de agitacin el rodete crea un modelo de flujo en el sistema, dando lugar a que el lquido o slido circule a travs del tanque y nuevamente retorne al rodete. La longitud del brazo del agitador est dada por la siguiente ecuacin: Ecuacin 13 Dnde: Lb= Longitud del brazo (cm) t= Dimetro del cilindro (cm) Dimetro del Rodete No existe una relacin fija para el espesor del rodete generalmente vara desde un sexto a un dieciochoavos de la longitud del brazo Ecuacin 14 Donde: Er = Espesor del rodete (cm) LB= Longitud del brazo (cm) Distancia entre el fondo del Tanque y el rodete Para que exista una buena mezcla debe existir un espacio adecuado entre el fondo del tanque y el rodete para que todas las corrientes provocadas por la agitacin puedan homogenizar completamente el lquido o slido en el proceso. Para ello generalmente se tiene la siguiente ecuacin: Ecuacin 15 Dnde: hfr = Altura del fondo al rodete (cm) hu=Altura til (cm) Alto de la paleta Ecuacin 16 Dnde: AP= Alto de la paleta (cm) LB= Longitud del brazo (cm) Dimetro utilizado por la paleta Ecuacin 17 Donde: Dp: dimetro utilizado por la paleta (m) : dimetro del cilindro (m) Balance de masa y energa Para determinar la masa con la que se iniciara el proceso de preparacin del inculo es importante calcularlas, as como realizar un balance de energa durante el proceso. Masa del estircol de cerdo Ecuacin 18 Donde: mep= Masa de estircol de cerdo en Kg = Densidad de estircol en Kg/m3 V = Volumen del estircol Masa del estircol de caballo

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Ecuacin 19 Donde: mc = Masa del estircol de caballo = Densidad de estircol en Kg/m3 V = Volumen del estircol Masa del lactosuero Ecuacin 20 Donde: ml = Masa del lacto suero = Densidad de lacto suero en Kg/m3 V = Volumen del lacto suero Masa del agua Ecuacin 21 ma = Masa del agua = Densidad de agua en Kg/m3 V = Volumen del agua Masa del acero inoxidable Ecuacin 22 Ecuacin 23 Clculo del flujo de calor del sustrato Para calcular el calor que elimina el sustrato se realiza el siguiente balance: Ecuacin 24 Donde: Qs= Velocidad de transmisin de calor A= rea del tanque fermentador h= Coeficiente de transmisin de calor T= Gradiente de temperatura aritmtica para fermentadores con camisa Clculo de la viscosidad Ecuacin 25 Donde: = Viscosidad g= Gravedad = Densidad del slido (esfera) = Densidad de la mezcla r= Radio de la esfera v= Velocidad de recorrido de la esfera Clculo del nmero de Nusselt Ecuacin 26 Donde: Nu= Nmero de Nusselt Re= Nmero de Reynolds del agitador Pr= Nmero de Prandal Clculo del nmero de Prandal Pr Ecuacin 27 Donde: Cp= Capacidad calorfica de la mezcla = Viscosidad K= Conductividad trmica de la mezcla Clculo del coeficiente de transmisin de calor Ecuacin 28 Donde: h= Coeficiente de transmisin de calor Nu= Nmero de Nusselt K= Conductividad trmica de la mezcla Clculo del gradiente de temperatura aritmtico Ecuacin 29 Donde: = Gradiente de temperatura aritmtica para fermentadores con camisa TF= Temperatura ideal del fermentador Te= Temperatura de entrada Ts= Temperatura de salida Clculo del nmero de Reynolds Ecuacin 30 Donde: Di: Dimetro del agitador Ni: Velocidad de rotacin del agitador en rps Densidad 17

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: Viscosidad Clculo de la potencia del rodete Ecuacin 31 Donde: Np: Nmero de potencia P: Potencia del rodete APLICACIONES DE LOS BIORREACTORES EN LOS TRATAMIENTOS DE AGUAS RESIDUALES Tratamiento anaerobio de residuos lquidos La Digestin Anaerobia es el proceso fermentativo que ocurre en el tratamiento anaerobio de las aguas residuales. El proceso se caracteriza por la conversin de la materia orgnica a metano y de CO2, en ausencia de oxgeno y con la interaccin de diferentes poblaciones bacterianas (15), lo que se obtiene de esta digestin se conoce como biogs que puede ser utilizado como una fuente de energa alternativa. Este tipo de procesos se han realizado desde hace varios aos atrs pero ltimamente han sido de especial atencin debido a la eficiencia de su tratamiento y ha podido ser aplicado en fermentadores o biorreactores donde se proporciona las condiciones ideales para que el ambiente sea completamente anxico. En el campo del tratamiento de las aguas residuales, la contaminacin orgnica es evaluada a travs de la DQO (demanda qumica de oxgeno), la cual mide bsicamente la concentracin de materia orgnica (15|). Una forma de verificar que el tratamiento anaerobio es mucho ms eficiente que un tratamiento aerobio es mediante el balance de DQO. FIGURA 3. BALANCE ANAEROBIO DE LA DQO FUENTE: RODRIGUEZ, J.A. Tratamiento anaerobio de aguas residuales. Colombia. Universidad el Valle, Ing. Sanitaria, 2002, 15p. FIGURA 4. BALANCE AEROBIO DE LA DQO FUENTE: RODRIGUEZ, J.A. Tratamiento anaerobio de aguas residuales. Colombia. Universidad el Valle, Ing. Sanitaria, 2002, 15p. Como podemos apreciar en las figuras de la parte superior con un tratamiento anaerobio se obtienen solamente un 10% de lodos que son estables y se obtiene adems biogs, un producto beneficioso que puede ser aprovechado como combustible. Este proceso adems ofrece ventajas como un menor requerimiento de nutrientes y menor consumo de energa ya que un tratamiento aerobio requiere gran cantidad de aireacin para llevar cabo el proceso (16). Podemos encontrar diferentes equipos que realizan este tipo de tratamiento como los que mencionamos en la tabla III TABLA III. REACTORES ANAEROBIOS DE BIOMASA SUSPENDIDA Y FIJA. Biomasa Suspendida Biomasa Fija Por lotes Digestin seca RCTA 18

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Contacto UASB EGSB Filtro anaerobio Pelcula fija Lecho expandido Lecho fluidizado FUENTE: CHAMY, R. Avances en biotecnologa ambiental: Tratamiento de residuos lquidos y slidos, Revista de Ingeniera Bioqumica. (Chile) 2: 26p, 2003. Otro tipo de clasificacin que se conoce es mediante generaciones, caracterizadas porque en cada generacin se reduce el tiempo de retencin hidrulico (TRH) y mejora el contacto entre el lodo y el sustrato, lo cual significa menores volmenes de reactor, costos ms bajos, sistemas ms estables y de ms fcil operacin (15). As podemos encontrar equipos como: Lagunas Anaerobias, Tanque Sptico, Tanque Imhoff (primera generacin); Filtros anaerobios de flujo ascendente y descendente y UASB (segunda generacin); Reactores de lecho fluidizado o expandido (tercera generacin) (15). La tabla IV compara los distintos sistemas anaerobios y aerobios en cuanto a los parmetros operacionales ms importantes TABLA IV. PARMETROS OPERACIONALES DE REACTORES AEROBIOS Y ANAEROBIOS. PROCESOS ANAEROBIOS PROCESOS AEROBIOS RTCA Contacto Filtro UASB Lodos act. Biofiltro VCO (kgDQO/m3.d 0,5-3 2-8 2-10 1-15 0,5-2 1-3 TRH (d) <8 0,2-8 19

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0,2-4 0,2-8 1-5 0,05-0,2 TRS (d) <8 1,5-8 20-300 30-300 10-30 <30 T (oC) 35-55 35-55 15-35 15-35 15-25 15-25 Remocin (% DQO) 60 <90 <90 <90 <90 50-80 FUENTE: CHAMY, R. Avances en biotecnologa ambiental: Tratamiento de residuos lquidos y slidos, Revista de Ingeniera Bioqumica. (Chile) 2: 26p, 2003. o INDUSTRIA DE LA CURTIEMBRE Y SUS CONTAMINANTES El curtido es el proceso qumico mediante el cual se convierten los pellejos de animales en cuero (17). Para obtener este producto se requiere de procesos en los que intervienen diversos compuestos como lcalis, sales y hasta metales como el cromo que ayuda a curtir las pieles, como consecuencia se obtiene un gran nivel de contaminacin hdrica debido a que la mayora o casi todas las curtiduras no cuentan con una planta que trate estos desechos. PROCESOS DE PRODUCCION Generalmente son 3 los procesos para la obtencin de cuero que son: proceso de ribera, proceso de curtido y el proceso de acabado; aunque cada uno de estos conlleva varios subprocesos Proceso de rivera. Este proceso consiste en la eliminacin de todo tipo 20

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de impurezas o materia innecesaria para los procesos posteriores, es decir aqu se elimina grasas, lana, pedazos de carne, sangre, estircol adems de la sal que se puede encontrar en algunas pieles que han sido conservadas. Las pieles son desinfectadas y limpiadas con diferentes soluciones y son preparadas para los posteriores procesos. Proceso de curtido. Luego que las pieles fueron previamente preparadas se llega al proceso de curticin que tiene como fin la estabilizacin del colgeno; este proceso se puede realizar con cromo III y recibe el nombre de curtido mineral, as de igual forma se puede realizar con taninos y el proceso se llama curtido vegetal. Proceso de acabado. Luego que la piel ha sido estabilizada y puede ser modificada segn los artculos que se desee obtener, posteriormente para el teido su usan anilinas o colorantes vegetales y se deja secar para retirar el exceso de humedad y se estira y por ltimo se agregan capas de terminacin y los detalles que se le quieran dar al producto. CONTAMIANATES DE LAS AGUAS RESIDUALES DE CURTIEMBRE La contaminacin que producen las curtiembres puede ser muy variada debido todos los compuestos que son utilizados en todos los procesos, as tenemos por ejemplo: tensoactivos, sales clcicas, carbonatos de calcio, sulfuros, cromo, cidos, entre otros compuestos, adems estas aguas pueden contener altos niveles de grasa, pelo, protenas, estircol y sangre. El proceso que consume la mayor cantidad de agua es el de ribera y por lo tanto el responsable del incremento significativo de la demanda bioqumica de oxigeno DBO. Otros de los parmetros que se pueden encontrar fuera de lmite en estas aguas son DQO, slidos disueltos y suspendidos, cromo trivalente y hexavalente, adems del color y el olor que emanan estas aguas. A continuacin se describe los procesos ms detalladamente conjuntamente con los compuestos y/o sustancias utilizadas y sus respectivas consecuencias: TABLA V. OPERACIONES DEL PROCESO CURTIENTE, COMPOSICIN DE LOS EFLUENTES Y ALGUNAS CONSECUENCIAS PROCESO DE RIVERA Operacin pH Composicin del efluente Consecuencias Remojo Neutro, ligeramente cido o alcalino Estircol, suero de sangre, NaCl, CaCO3, protenas solubles, naftalina, tensoactivos y otros preservantes, plaguicidas. Altos niveles de DQO y slidos suspendidos. Pelambre y calero 12 14 Pelo, grasas, protena, queratina, sulfuros y cal, alto contenido de slidos suspendidos. Emisin de H2S Desencalado y rendido 7 8 Sales clcicas solubles, pigmentos, protenas solubles, alto contenido de nitrgeno por sales amoniacales. Emisin de NH3 Piquelado 1 3 NaCl, cidos, biocidas, Niveles elevados de slidos disueltos. Desengrase 3 4 Disolventes, emulsionantes, altas concentraciones salinas, grasa. Altos niveles de DBO y solidos suspendidos y disueltos, residuos grasosos. PROCESO DE CURTIDO Curticin al cromo 3 4 Elevada salinidad, abundancia de sales de cromo, fibras en suspensin, grasas emulsionadas. Alto contenido de cromo III y otros metales. Curtido vegetal y sintetico 3 5 Tanino pirocatequinicos y piroglicos, fenoles y polifenoles, sales neutras y fibras de cuero. Disposicin de lodos. Curticion con aceites y alternativos 10 Aceites oxidados, sales de aluminio, de circonio, de titanio, formaldehido, aceite de bacalao, (para gamuza) y glutaraldehdos ACABADOS Neutralizado 5 6 Sales neutras de cromo

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Recurticion, tintura y engrase 4 5 Grasas emulsificadas, colorantes, sales neutras y recurtientes (de todo tipo) Descarte de solventes, generacin de material particulado atmosfrico, sustancias txicas orgnicas. FUENTE: ESPARZA, E. Y GAMBOA, N. Contaminacin debida a la industria curtiembre, Revista de Qumica. (Per) 15 (1); 42-44, 2001. METALES PESADOS COMO CONTAMIANTES EN LA INDUSTRIA DE LA CURTIEMRE El metal pesado que hemos considerado de gran importancia en esta investigacin es el cromo debido a la cantidad en la que se encuentra presente en las aguas residuales de curtiembre y por el peligro que representa para la salud humana y para la integridad del medio ambiente. El proceso de curtido es el que mayor generacin de cromo tiene en sus residuales, ya que el cromo es usado como medio de curtido; durante el proceso el cromo se encuentra en su estado inico de 3+ (Cr3+) que es el que realmente realiza el trabajo de curtido, pero en el transcurso del tiempo que este Cr3+ se oxida convirtindose en Cr6+, siendo este el de mayor riesgo ambiental como humano. Existen tres razones fundamentales por las cuales ocurre la oxidacin del Cr3+ a Cr6+ durante el proceso de curtido: la acidez del medio, siendo no adecuado superando los 4.5 pH, la temperatura baja menor 20 C o mayor a 40 C y por ltimo el tercer factor es la DQO presente en el residual (18). Cada uno de estos factores altera el proceso oxidando al cromo de curtido y generando un caos ambiental como social. CROMO El Cromo (Cr) es un metal, nmero atmico 24, del grupo VIB de la tabla peridica y peso molecular 51,996. Blanco plateado, brillante, duro y quebradizo, resistente a la corrosin y se encuentra en estados de oxidacin +2, +3, +6 (18). El cromo trivalente se encuentra en forma libre en el ambiente y es necesario en la alimentacin en pequeas cantidades, sin embargo en grandes dosis es toxico; contrario al cromo III el cromo hexavalente es toxico incluso en pequeas dosis y es altamente soluble en agua. 1.4.10.1. PROBLEMAS ASOCIADOS AL CROMO TRIVALENTE Como bien se conoce el cromo es un metal pesado que se utiliza en la industria de la curtiembre por su excelente capacidad de curtido, dando excelentes resultados en el proceso, pero existe una novedad efmera y que pocos la conocen, esta es que el Cr+3 a pesar de no provocar los mismos efectos el Cr+6, tambin llega a ser txico e inclusive se ha habla de posibles efectos cancergenos y por exposicin continuas a este en el agua puede provocar daos a la piel. Conocer los problemas que implica la descarga intolerable de Cr+3 a los recursos hdricos debe ser de gran inters, por lo que la investigacin que se propone nos acerca a una solucin viable y con un potencial eficiente en el proceso de recuperacin de este para una recirculacin o incluso una descarga. No podemos dejar de nombrar que a pesar de que la piel se haya curtido con Cr+3 no garantiza que al estar expuestas las pieles a un medio alcalino u xido genere la presencia de Cr+6, hasta despus el curtido. La industria de la curtiembre es catalogada como generadora de residuos peligrosos por lo que el manejo de sus residuos debe ser estricto y controlado por organismos reguladores del ambiente. Efectos sobre la calidad del aire Los principales efectos que se pueden evidenciar en el aire se deben al cido sulfhdrico que emana un olor desagradable. La toxicidad del cido sulfhdrico es semejante a la del cido cianhdrico. A partir de 50 ppm, en las clulas receptoras del olfato provoca un efecto narcotizante, y las personas afectadas ya no perciben el hedor. Por encima de los 100 ppm puede ocurrir la muerte (20). BIODISPONIBILIDAD DE METALES PESADOS La accin directa de un metal pesado sobre el ser humano ocurre a travs del bloqueo de las actividades biolgicas, es decir, la inactivacin enzimtica por la formacin de enlaces entre el metal y los grupos -SH (sulfhidrilos) de las protenas, causando daos irreversibles en los diferentes organismos (21). 22

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TRANSFORMACIONES MEDIADAS POR MICROORGANISMOS Las transformaciones que un microorganismo puede provocar en un metal pesado dependen de las condiciones en las que se encuentre el metal, por ejemplo su estado de oxidacin y del cuerpo en el que se encuentre. Si el microorganismo transforma al metal de un estado slido a una fase acuosa se trata de una biolixiviacin, por el contrario hablaremos de una inmovilizacin del metal si ste se encuentra en una fase acuosa y el microorganismo lo transforma a un estado slido (21). A continuacin se hablar con ms detalle acerca de las transformaciones que puede realizar un microorganismo sobre un metal pesado. MOVILIZACION DE LOS METALES PESADOS En un inicio se pensaba que este proceso era netamente qumico pero finalmente se descubri que era llevado a cabo por microorganismos, sean stos bacterias u hongos, que solubilizan al metal que posteriormente puede ser recogido. Por ejemplo tenemos el caso de la obtencin de Cu por la oxidacin de las menas de Cu2S (calcocita) a CuSO4 por intermedio de la accin de las bacterias Thiobacillus ferroxidans y Thiobacillus thiooxidans (21). FIGURA 5. PROCESO DE BIOLIXIVIACIN APLICADO EN MINERA. FUENTE: VULLO, D. Microorganismos y metales pesados: una interaccin en beneficio del medio ambiente, Revista Qumica Viva. S.l. (3); A: solubilizacin del mineral; B: obtencin de Cu metlico y C: recuperacin y recirculacin del Fe3+ 94-102, 2003. INMOVILIZACION DE METALES PESADOS Dentro de la inmovilizacin de metales encontramos varios procesos en la que los microorganismos actan para retener, recuperar o eliminar los metales pesados, estos procesos son los siguientes: Biosorcin El proceso de biosorcin se caracteriza porque el metal es adherido a la biomasa del microorganismo y se produce un intercambio inico que se da gracias a ligandos que se encuentran en la superficie celular. Estos ligandos pueden ser: grupos carboxilos, hidroxilos, cetonas, aminas, entre otros. Es un proceso rpido, que no se ve afectado por inhibidores del metabolismo pero s por las condiciones fsico-qumicas (como el pH o la fuerza inica) y de las caractersticas qumicas del metal. Es un proceso reversible y puede ocurrir con material vivo o muerto y es efectivo en metales como el cadmio, cromo, plomo, nquel, zinc y cobre. (21) Bioacumulacin A diferencia del proceso de biosorcin en la bioacumulacin el metal ingresa dentro del microorganismo donde es secuestrado por la presencia de protenas ricas en grupos sulfhidrilos llamadas metalotionenas o tambin puede ser compartimentalizado dentro de una vacuola (21). Biomineralizacin La biomineralizacin es la formacin de precipitados metlicos insolubles por interacciones con productos del metabolismo microbiano Si bien es cierto los microorganismo tuvieron su auge cuando se descubri su eficiencia en el tratamiento de contaminantes con derivados del petrleo y del petrleo mismo; pero con el tiempo se encontraron bacterias, hongos e incluso algas que actuaban en medios mineralizados precipitando los minerales contaminantes tanto del agua como del suelo, es as que se abri paso a la biomineralizacin de los contaminantes con caractersticas propias de metales pesados. TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES CONTAMINADAS CON METALES PESADOS Con el pasar del tiempo el ser humano se ha interesado por el bienestar del medio ambiente y por consiguiente de la salud humana y como consecuencia de esto la preocupacin de la sociedad se ha centrado en el tratamiento de las aguas residuales de diferentes industrias que alteran las condiciones naturales en las que se desarrolla la vida. Los metales pesados en las aguas ha causado una controversia gigantesca tal es el caso de las minas de fosfoyesos contaminadas con un uranio un metal radioactivo y altamente txico, la presencia de cromo en la industria de la minera. Estos casos han llamado la atencin de investigadores llegando a encontrar en los procesos biotecnolgicos ambientales la solucin a muchos de estos problemas generados por los metales pesados en aguas residuales. Una de las empresas con mayor ndice de contaminacin con metales pesados es la industria de la curtiembre la misma que no ha sido tomada en cuenta, 23

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quiz por la falta de atencin o conocimiento del dao ocasionado a las aguas residuales de la industria y por ende a sus desfogues. En s no existen investigaciones sobre el tratamiento del cromo como contaminante de estas aguas, pero existen tratamientos del azufre como fuentes contaminantes de industrias que trabajan con metales pesados, lo cual nos ha llevado a una investigacin sobre los avances de stos que nos darn un breve prembulo para nuestra investigacin. Como explicamos anteriormente los procesos anaerobios resultan efectivos en la remocin de contaminantes de las aguas residuales debido a las ventajas que presentan frente a otros tratamientos o PREPARACION DEL INOCULO PARA EL TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES DE CURTIMEBRE El inoculo a preparase para el tratamiento de aguas de curtiembre consiste en una agrupacin de microorganismos en una fase semilquida, debido a los componentes que vamos a utilizar, que posteriormente ser inoculado en el biorreactor con el finalidad de la reduccin del cromo hexavalente. Anglica Paucar en su tesis Optimizacin de la concentracin inicial del inculo y medio de cultivo para la produccin de un bioacaricida a partir de Bacillus thuringiensis en un biorreactor discontinuo a escala piloto afirma lo siguiente: 0: http://darwin.usal.es/profesores/pfmg/sefin/MI/tema14MI.html 97%

El punto de partida de cualquier fermentacin es un recipiente limpio que ha sido esterilizado y rellenado con el medio de cultivo estril. Posteriormente, el fermentador se inocula con el microorganismo adecuado. El tamao del inculo generalmente es del orden del 1-10% del volumen total del medio. Si es inferior a esta proporcin puede existir un excesivamente prolongado perodo de latencia, lo que prolongar el perodo de fermentacin. Para evitar estos problemas, el proceso de fermentacin se lleva a cabo en cuatro etapas: Preservacin del inculo Multiplicacin del inculo Cultivo de prefermentacin Fermentacin de produccin (22) Preservacin del inculo La preservacin del inoculo es una etapa decisiva en la preparacin de inculos debido a que de esa forma se preserva la capacidad que tienen los microorganismos para formar el producto que deseamos; es decir se mantiene al inoculo en una fase de latencia o adaptacin en la que no existe divisin celular y por consiguiente no hay produccin de metabolitos primario y/o secundarios. Multiplicacin del inculo En esta etapa el inoculo que fue preservado se le acondiciona las condiciones medio requeridas, para que empiece el crecimiento celular y entre en una etapa de adaptacin de los microorganismos al medio que trataran; la multiplicacin del inculo se la realiza paulatinamente segn como los microorganismos se vayan adaptando al medio. Podemos saber cundo aumentar la cantidad de nutriente o la fuente del microorganismo cuando los resultados del crecimiento microbiano nos indiquen que se encuentran en la fase exponencial; as los microorganismos se reproducen ms y el inculo requiere multiplicarse hasta que se obtenga la cantidad que se necesita para inocularlo en el biorreactor. Cultivo de pre-fermentacin La cantidad de microorganismos debe ser la adecuada para obtener el o los productos deseados. Siempre esta cantidad va a depender de la cantidad del medio a tratar TABLA VI. PORCENTAJE DE MICROORGANISMOS PARA UNA PRE-FERMANTACIN 24

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Actinomicetos 5 - 10 % Hongos. 5 - 10 % Otras Bacterias 0,1 - 3,0 % FUENTE: http://darwin.usal.es/profesores/pfmg/sefin/MI/tema14MI.html Fermentacin en produccin Esta fermentacin se llevar a cabo en el biorreactor una vez inoculado el medio de cultivo, lo cual dar paso a la fermentacin durante el tiempo que se considere necesario antes de una extraccin de muestra para saber cmo va el proceso de fermentacin. En nuestro caso el inoculo ser colocado en el biorreactor para que mediante agitacin y condiciones como temperatura y ambiente anxico los microorganismos interacten adecuadamente con el agua a tratar. Una vez que los microorganismos estn actuando se deber inocular, durante el tiempo de accin del biorreactor, el medio de nutriente y de microorganismo si estos fueren necesarios. SUERO LCTICO El suero lctico es un residuo producto de la obtencin del queso y que ha sido considerado como un subproducto que puede ser usado en la produccin de alimentos, bebidas y adems puede ser usado en la alimentacin de los animales. De acuerdo al pH del suero podemos tener dos tipos suero acido (pH 4.6-4.8) y dulces (pH 5.9-6.4) (23). Sueros cidos Se producen en su mayor parte en la fabricacin de casena por la incorporacin de un cido que produce coagulacin, el ms empleado suele ser el clorhdrico. o Composicin qumica del suero lctico La composicin qumica del suero lctico depende de muchos factores entre los que se encuentran los procesos de tratamiento a que se somete la leche entera y los procesos de manipulacin y tratamiento a que se sujete el suero lcteo (23). TABLA VII. COMPOSICIN QUMICA DEL SUERO LCTEO Componente Porcentaje Lactosa 4.5 5.2 Protenas 0.7 1 Sales minerales 0.7 1 Acido lctico 0.1 0.8 25

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Grasas Trazas Vitaminas Trazas Agua 94 FUENTE: ZAMORA, J. Depuracin biotecnolgica del suero lcteo empleando un sistema continuo mixto: anaerobio de lecho fijo aerobio. Tesis Ing. Alimentos. Oaxaca Universidad Tecnolgica de Mixteca, 2006, 78p. ESTIRCOL Estircol es el nombre con el que se denomina a los excrementos de animales que se utilizan para fertilizar los cultivos (24). Este puede estar compuesto de las excretas de diferentes animales a la vez y tiene un gran contenido de nutrientes que han sido usados generalmente en la agricultura. Aplicaciones del estircol Como mencionamos anteriormente el estircol ha sido utilizado desde hace varios aos atrs en la agricultura, este es aplicado directamente en la tierra y sirve como un fertilizante de la misma y ayudando a los sembros ya que aporta gran cantidad de nutrientes; puede ser aplicado directamente a la siembra o en conjunto con el compost y aporta gran cantidad de Nitrgeno (24). Uno de los inconvenientes de esta tcnica es la produccin de malos olores y la proliferacin de vectores que puede resultar molesto para el agricultor, sin embargo los beneficios son ms y es una estrategia de cultivo 100% natural y efectiva que garantiza la calidad del producto que se obtiene. Ventajas del estircol Contiene gran cantidad de nutrientes. Cuando se aplica en la agricultura elimina semillas no deseadas o ciertos hongos o bacterias que causan enfermedades. Produce biogs en gran cantidad que puede ser usado como fuente de energa. o Estircol de cerdo Alejandro Garca en su tesis sobre Calidad alimentaria de la mezcla estircol de cerdo y esquilmos agrcolas deshidratados al sol, para bovinos de engorda afirma que: El estircol de cerdo contiene ms de un 20% de protena bruta y, a causa de este elevado contenido, se ha utilizado el estircol de cerdo fresco y desecado, en trabajos experimentales, como pienso para las aves de corral, sin haberse observado efectos nocivos en la carne ni en los huevos de las aves. El mismo producto se ha venido empleando con provecho en las raciones de acabado de los cerdos a razn de un 15%. Se ha utilizado tambin con buenos resultados para los ovinos, incluyndolo en proporcin del 40% en los grnulos (24). Composicin qumica del estircol de cerdo La composicin del estircol depender de la alimentacin del animal asi como de la cantidad que consume, generalmente la composicin del estircol de cerdo est constituida como se muestra en la tabla. TABLA VIII. COMPOSICIN DEL ESTIRCOL Componente 26

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Cantidad Minerales 90% Vitaminas nicamente 1,660 L de vitamina A Aminocidos Excretas ricas en Lys, Leu y Thr. FUENTE: GARCA A. Calidad alimentaria de la mezcla estircol de cerdo y esquilmos agrcolas deshidratada al sol, para bovinos de engorda. Tesis Msc. Biotecnologa. Mxico Universidad de Colima, Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias, 2000, 99p. Composicin microbiolgica El autor Alejandro Garca en su tesis sobre Calidad alimentaria de la mezcla estircol de cerdo y esquilmos agrcolas deshidratados al sol, para bovinos de engorda manifiesta que: Las excretas de los animales contienen diversos microorganismos patgenos como: Salmonella spp, Bacillus anthracis., Mycrobacterium spp., Brucella spp., Ricketsia spp., adems de otros patgenos como: Leptospira monocytogenes, Yersenia enterocoltica, clostridium perfringes y Klebsiella spp. Pero se reporta que son las enterobacterias los microbios ms dominantes una vez que han sido eliminados del tracto digestivo del cerdo, donde el nivel de algunos otros microbios presentes como los estreptococos, estafilococos, hongos y levaduras permanece casi contantes hasta el sptimo da (24). Estircol de caballo El estircol de caballo est compuesto de grandes cantidades de materia orgnica as como tambin es rico en nitrgeno y es usado en la agricultura principalmente ya que proporciona fertilidad y nutrientes al suelo. TABLA IX. COMPOSICIN DEL ESTIERCOL DE CABALLO COMPONENTE (por cada 100 kg de estircol) CANTIDAD % Materia seca 10 N 0.55 P2O5 0.01 K2O 0.35 CaO 0.15 27

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MgO 0.12 SO4 0.02 FUENTE: SEPAR, 2004. Boletin Estiercoles http://www.fao.org/docrep/010/ai185s/ai185s07.pdf o LOS SUPUESTOS HIPOTETICOS DE LA INVESTIGACION Para poder entender la temtica y el desarrollo del proyecto que se propone en esta investigacin, desarrollaremos un breve anlisis de los supuestos hipotticos de la investigacin de este proyecto. Impacto del biorreactor sobre las aguas residuales El proyecto que proponemos es una tecnologa innovadora debido a que no ha sido aplicada anteriormente en el tratamiento de aguas residuales de curtiembre. La metodologa a aplicar es eficaz ya que el inoculo est conformado por estircol de cerdo y estircol de caballo, que es la principal fuente de microorganismos depuradores del agua, y lactosuero que en este caso es la fuente de nutrientes para los microorganismos anaerobios; en conjunto con el agua residual se incorporaran en un biorreactor anaerobio batch alimentado; por medio de este equipo vamos a repotenciar las funciones depurativas de las bacterias del estircol porcino y caprino, activndolas para que reduzcan el Cr3+, adems de DQO. Peridicamente se realizan anlisis de Cr3+, DQO, acidez y coliformes totales para cerciorarnos de la eficiencia del proceso y se agregara la cantidad de inoculo necesaria con el fin de evitar que los microorganismos entren en una fase de latencia y el proceso colapse. Las condiciones que se requieren para el xito del proceso son un ambiente completamente anxico, condiciones de pH de entre 3 a 4.5 y una temperatura entre 30 a 40 oC, siendo a ptima 35 oC, que son ambientes ideales para el pleno desarrollo de los microorganismos; otro factor influyente en el proceso es la agitacin realizada por medio de paletas, esta agitacin debe ser de 90 r.p.m. que aseguran la integridad de las clulas y una mezcla homognea de todos los componentes. Al ser un prototipo a escala de laboratorio la capacidad del biorreactor es de 6 L, siendo ocupado el espacio en porcentajes 90 % (4 L) de agua y 10% (1 L) del inculo; es importante destacar que se inocular una cantidad de 250 ml de mezcla de inculo durante el proceso para alimentar al medio bacteriano. Nuestro biorreactor ha llegado a ser tan efectivo en la remocin de los contaminantes de la industria curtiembre ya que se ha logrado bajar niveles de cromo hexavalente como de demanda qumica de oxigeno DQO hasta en un 95%; esto demuestra niveles altos de calidad tanto en el equipo, sustrato y el proceso en s. Hemos optado por este proceso por ser innovador, prctico y adems abre nuevas posibilidades sobre los tipos de tratamientos que pueden ser usados para la depuracin de aguas residuales no solamente de curtiembres sino de varias actividades industriales que descargan residuos lquidos con diferentes tipos de contaminantes. Es as que nuestro proyecto contribuye con la remediacin ambiental y siendo directamente nuestro entorno el beneficiado, as como tambin las industrias que se dedican a esta actividad y la sociedad en s. CAPITULO II PARTE EXPERIMENTAL LUGAR DE LA INVESTIGACIN La investigacin se llev a cabo en el Centro de Servicios Tcnicos de Transferencia Tecnolgica Ambiental CESTTA y en el laboratorio de Biotecnologa Ambiental de la Facultad de Ciencias. MTODOS Y TCNICAS Las variables y parmetros que se utilizaron en el diseo y construccin del biorreactor as como tambin las condiciones ptimas en la que se debe encontrar el sustrato se realizaron utilizando los siguientes mtodos y tcnicas detallados a continuacin. MTODOS Para el diseo y construccin del biorreactor requerimos de mtodos inductivos y deductivos. Mtodos inductivos Debido a la gran problemtica que representa la industria de la curtiembre en nuestro pas se decidi desarrollar un proyecto innovador que requiere de materiales e instrumentos accesibles; tal es el caso del uso de estircol y lactosuero como inculo que provee una gran fuente de bacterias anaerobias que precipitan metales pesados, en nuestro caso el cromo. As pues se tom una 28

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muestra de agua de la curtiembre El Alce ubicada en el cantn Guano y de la que se conocieron mediante anlisis de laboratorio parmetros como pH, DQO, slidos suspendidos y cromo trivalente. Mtodos deductivos De acuerdo con estudios realizados a nivel mundial anteriormente sobre bacterias, que en condiciones adecuadas pueden precipitar metales pesados y posteriormente se pueden recuperar. Debido a las condiciones necesarias de los microorganismos se pudo acoplar con el uso de un birreactor anaerobio en fase liquida. TCNICAS Las tcnicas utilizadas para el desarrollo de este proyecto se describen a continuacin. Tcnicas de laboratorio stas nos ayudaron a conocer el estado inicial tanto del inoculo como del agua a tratar. A continuacin describimos detalladamente cada uno de stas. PREPARACIN DEL INCULO PARA EL TRATAMIENTO DEL AGUA RESIDUAL DE CURTIEMBRE Materiales Estircol (mezcla de caballo con cerdo) Lacto suero Envase de vidrio de 1000 mL Procedimiento Una vez que tenemos los materiales iniciamos la preparacin con 500 g de estircol de cerdo y 500 g de estircol de caballo y 250 mL de lacto suero, los mezclamos en un envase de vidrio y lo dejamos reposar durante una semana. Este procedimiento es importante para el xito del tratamiento ya que en ese tiempo el mix bacteriano se adapta logrando la simbiosis deseada entre lactobacilus y bacterias sulforeductoras, en el mismo inculo preparado colocamos 100 mL de agua de curtiembre para que el mix bacteriano vaya adaptndose al tratamiento del agua residual. Realizamos entonces luego de una semana un anlisis microbiolgico para conocer el estado de las bacterias. ANLISIS DEL AGUA RESIDUAL DE CURTIEMBRE Determinacin de cromo trivalente TABLA X. DETERMINACION DE CROMO TRIVALENTE FUNDAMENTO MTODO TCNICA El cromo es una de las sustancias usadas para curtir la piel. Debido a las altas cantidades que se requieren de este material representa unos de los principales problemas en las aguas residuales de curtiembres. Clculo Colorimetra FUENTE: autoras. Determinacin de DQO TABLA XI. DETERMINACION DE DEMANDA QUMICA DE OXIGENO FUNDAMENTO MTODO TCNICA Debido a contaminantes como grasas, sangre, taninos, aceites la demanda qumica de oxigeno generalmente se encuentra en niveles extremadamente altos que representan un peligro para el ambiente APHA 5220 D Mtodo de reflujo cerrado FUENTE: autoras. Determinacin de Slidos Suspendidos 29

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TABLA XII. DETERMINACION DE SLIDOS SUSPENDIDOS FUNDAMENTO MTODO TCNICA Los slidos suspendidos presentes en las descargas de lquidos tienden a sedimentar y depositarse en los cursos hdricos donde son descargados. APHA 2540 D Gravimetra FUENTE: autoras Determinacin de Ph TABLA XIII. DETERMINACINDE PH FUNDAMENTO MTODO TCNICA 0: http://productospegaso.com/index.php El pH es un indicador de la acidez de una sustancia. Est determinado por el nmero de ines libres de hidrgeno (H+) en una sustancia. Standard Method No. 4500-H+ B Potenciometra FUENTE: Autoras ANLISIS DEL AGUA EN PROCESO DE REMEDIACIN Determinacin de cido lctico TABLA XIV. DETERMINACIN DE CIDO LCTICO FUNDAMENTO MTODO TCNICA El acido lctico es un producto orgnico que se encuentra presente en cantidades considerables en el suero de leche. ste puede servir como fuente de carbono de algunas bacterias. Standard Methods No. 2310 B Titulacin Determinacin de coliformes totales TABLA XV. DETERMINACIN DE COLIFORMES TOTALES FUNDAMENTO 30 100%

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MTODO TCNICA El anlisis de coliformes tiene como fin conocer la cantidad presente de biomasa en el proceso para poder realizar una curva de crecimiento. Standard Methods No. 9222 B Membrana filtrante Adems se realizaron anlisis de cromo trivalente y demanda qumica de oxigeno DQO que se sealaron anteriormente (tablas X y XI). DISEO DEL BIORREACTOR ANAEROBIO PARA EL TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES DE LA INDUSTRIA CURTIEMBRE. El diseo del biorreactor se lo realiz con la utilizacin de frmulas y posteriormente con la ayuda de software adecuados. A continuacin se detalla materiales y el procedimiento realizado. Materiales Solid Work Auto Cad Procedimiento Mediante el uso de frmulas preestablecidas por diferentes autores se inici el dimensionamiento del biorreactor. Se empieza el diseo con un volumen de 6 L y un dimetro de 20 cm debido a la facilidad que representa su manipulacin tanto en el proceso de biorremediacin como en posteriores prcticas de laboratorio con fines didcticos; a partir de este valor se logra calcular los dems parmetros. Una vez realizados los clculos se procede al diseo computarizado con la ayuda de las herramientas informticas como Auto Cad y Solid Work. En Solid Work se trabaja la resistencia del biorreactor con esas dimensiones a la temperatura y presin generada durante el tratamiento. Clculos para obtener el diseo del biorreactor Clculo de la altura Para poder obtener el valor de la altura del fermentador despejamos la altura a partir de la ecuacin 3 con el volumen conocido (dato dado). Una vez despejado nos queda la ecuacin 4 con la que obtenemos la altura. Clculo de la altura de seguridad El clculo de la altura de seguridad es indispensable para evitar inconvenientes en el caso de sobrepasar el volumen indicado. Se obtiene mediante la ecuacin 5 Clculo de la altura total La altura total no es ms que la suma entre la altura del tanque y la altura de seguridad y se la obtiene mediante la ecuacin 6 Clculo de la presin total Para el clculo de la presin tomamos como referencia la Ecuacin 7 nombrada en el captulo I. Especificando que las presiones de operacin y de seguridad son valores dados. Clculo del espesor de la pared Para calcular el espesor de la pared del fermentador utilizamos la ecuacin 8 citada en el captulo I. Calculo del espesor de la tapa Para el clculo del espesor de la tapa se utiliz la ecuacin 9 donde se considera parmetros como la presin de operacin que resulta indispensable para que el espesor sea el correcto y evitar inconvenientes. Altura de cmara de calefaccin Tomando en cuenta una altura de la cmara de calefaccin del 80% calculamos la altura total de la camisa de calefaccin con la ecuacin 10 mencionada en el captulo I. Volumen de agua en la cmara de calefaccin Para realizar el clculo del volumen de agua de la camisa de calefaccin utilizamos la Ecuacin 11 mencionada en el captulo I de esta investigacin. Sistema de Agitacin El biorreactor anaerobio que se construir debe tener un sistema de agitacin que permita mantener una mezcla continua y adecuada del sustrato con el agua de curtiembre, por lo que en esta seccin se determinara la metodologa para construirlo. Altura del agitador Como en todo sistema de agitacin se necesita una altura del agitador para poder incorporarlo, conjuntamente con el motor, a la tapa del fermentador y esto lo logramos con la ecuacin 12 citada en el captulo anterior. Longitud del brazo La longitud del agitador nos ayudar a determinar en el largo del mismo mediante la ecuacin 13 del captulo anterior. Dimetro del rodete La ecuacin 14 de captulo anterior nos ayuda a conocer el dimetro ideal que debe tener el rodete. Distancia entre el fondo del Tanque y el rodete La distancia entre el fondo del fermentador y el rodete es importante para obtener una buena mezcla y que el diseo mecnico del biorreactor se mantenga sin daar las paletas o el tanque; por lo que utilizamos la ecuacin 15 del captulo I para obtenerla. Alto de la paleta Todo sistema de agitacin debe tener paletas para realizar el proceso de agitacin, es por 31

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eso que calculamos las dimensiones de las paletas mediante la ecuacin 16 citada en el captulo anterior. Dimetro utilizado por la paleta Este clculo lo obtenemos aplicando la ecuacin 17 citada en el capitulo I. Forma de la paleta Las paletas que se utilizan en este biorreactor son planas debido a que se trata de una mezcla lquida y poco viscosa y este tipo de paleta brinda una uniformidad en el proceso de mezclado y previene que el sustrato y por ende los microorganismos sufran un deterioro o su muerte. Balance de masa y energa Para determinar la masa con la que se iniciara el proceso de preparacin del inculo es importante calcularlas, as como realizar un balance de energa durante el proceso. Balance de masa Como en todo equipo o proceso sistmico se da un balance de masa este no es la excepcin, por lo que es conveniente realizar un balance de masa que nos permita conocer en teora la cantidad de masa generada en el proceso como la utilizada, para obtener un resultado eficiente en la investigacin. Masa del estircol de cerdo Calculamos la masa del estircol de cerdo que utilizaremos en el reactor mediante la ecuacin 18 del captulo I. utilizando el volumen de inculo a preparar. Masa del estircol de caballo Calculamos la masa del estircol de cerdo que utilizaremos en el reactor mediante la ecuacin 19 del captulo I. Utilizando el mismo volumen de inculo del tem anterior. Masa del lacto suero Calculamos la masa del estircol de cerdo que utilizaremos en el reactor mediante la ecuacin 20 del captulo I. Utilizando el mismo volumen de inculo del tem anterior. Masa del agua La masa del agua que se calculara ser tomando en cuenta la densidad del agua de curtiembre y utilizando la ecuacin 21 mencionada en el captulo I. Masa del acero inoxidable La densidad del acero inoxidable es calculada con la ecuacin 23 mencionada en el captulo I de esta investigacin. Determinacin de la velocidad de transmisin de calor Para determinar la velocidad de transmisin de calor aplicamos las ecuaciones 24, 25, 26, 27, 28, 29 y 30 citadas en el captulo I de la investigacin. Debemos encontrar el rea del fermentador, la temperatura aritmtica del fermentador; adems del nmero de Reynolds, Prandal y Nusselt para los clculos adicionales para encontrar la velocidad de transmisin de calor. Clculo de la potencia del rodete Para determinar la potencia con la que debe trabajar el rodete aplicamos la ecuacin 31 del captulo I, con la que se obtendr el valor terico de la potencia que debe tener el rodete para agitar la mezcla. DATOS ADICIONALES Datos adicionales para calcular el espesor de la lmina de acero inoxidable TABLA XVI. DATOS ESPESOR DE LA LMINA DE ACERO NOMBRE DATO UNIDAD Esfuerzo mate del material 2850 Lb/plg2 Eficiencia de la soldadura 95 % FUENTE: Autoras. Datos adicionales para el balance de masa TABLA XVII. DATOS BALANCE DE MASA NOMBRE DATO UNIDAD Densidad del estircol de cerdo 1030 32

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Kg/m3 Densidad del estircol de caballo 733 Kg/m3 Densidad del suero de leche 1024 Kg/m3 Densidad del agua 999 Kg/m3 Densidad del acero inoxidable 8000 Kg/m3 FUENTE: Autoras. TABLA XVIII. DATOS CAPACIDADES CALORFICAS NOMBRE DATO UNIDAD Mezcla (agua inoculada) 2,99 x 109 J / Kg C Agua 4,18 x 103 J / Kg C FUENTE: Autoras. CONSTRUCCIN DEL BIORREACTOR ANAEROBIO Con los planos del dimensionamiento se procedi a construir el biorreator, la eleccin del espesor del acero inoxidable se lo realiz con la ayuda del software Solid Work, el mismo que nos permite saber si resistir a las condiciones del medio. Con la ayuda de suelda y prensa se logr dar forma al cuerpo y camisa del biorreactor. El sistema de agitacin est constituido por 4 paletas, para dar un mejor mezclado, en acero inoxidable de 2 mm de espesor y de un eje en acero inoxidable de 1 cm de dimetro. De acuerdo a los clculos anteriormente realizados se dio la medida adecuada para las paletas y la longitud requerida para el eje que posteriormente fue acoplado a la tapa y al motor para que con la ayuda del inversor el sistema de agitacin cumpla con una oscilacin adecuada para el medio. El nmero de revoluciones adoptadas en este proceso fue de 90 revoluciones por minuto ya que se trata de una mezcla liquida y de esa forma los microorganismos no estn expuestos a sufrir daos o morir. TABLA XIX. MATERIALES USADOS EN LA CONSTRUCCIN DEL BIORREACTOR Material Cantidad Caractersticas Plancha de acero inoxidable para el cuerpo y camisa del reactor 33

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1 2 mm de espesor Retazo de eje de acero inoxidable 1 De 1 cm de dimetro Retazos de acero inoxidable para las paletas 5 De 1.5 x 8 cm. Plancha de acero inoxidable para la construccin de la tapa 1 3 mm de espesor Pernos de acero inoxidable 8 - Motor 1 De 0.5 hp, trifsico Inversor de velocidad 1 Trifsico FUENTE: Autoras. AUTOMATIZACIN DE LOS PARMETROS DE MEDICIN DEL BIORREACTOR En el desarrollo de un proyecto que involucra el uso de un biorreactor la parte electrnica se vuelve indispensable ya que proporciona la informacin necesaria para controlar que el proceso marche adecuadamente. TABLA XX. MATERIALES REQUERIDOS EN LA PARTE ELECTRNICA Material Cantidad Caractersticas Microcontrolador 1 16F87A Sensor (termistor) 1 NTC Regulador 1 7805 Capacitores cermicos 4 100 Nf Rel 1 60 A a 12 V Transistor 1 2N3904 Resistencia 1 4.7 K Diodo led 34

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1 - Optocoplador 1 4N2S Resistencia 2 220 V Borneras 2 - Molex de 3 1 - Resistencia 1 10 K Cristal 1 20 MHz Capacitores de 22 picos 2 - Calentador 1 Sumergible de 1200 W Circuito impreso 1 - PH metro 1 FUENTE: Autoras. PROCEDIMIENTO Temperatura La principal funcin que realiza el sensor es transmitir un valor de temperatura al circuito electrnico que est compuesto por un microcontrolador, que a su vez se encarga de transmitir el valor detectado por el sensor a una pantalla LCD para que pueda ser ledo. El rango de temperatura en el que trabaja nuestro sistema es de 30 a 40 oC, el circuito ha sido programado para que mediante la temperatura medida por el sensor el calentador sumergible se encienda o apague y as mantener el nivel de temperatura ptima para el proceso, se debe mencionar que el ascenso o descenso de la temperatura no es brusco sino que requiere de un tiempo considerable lo que brinda una mejor seguridad en el sistema. pH En lo que se refiere a pH se opt por un pH metro porttil, que previamente a su uso fue calibrado a pH cido por las condiciones requeridas en el proceso. TRATAMIENTO DEL AGUA RESIDUAL DE CURTIEMBRE EN EL BIORREACTOR ANAEROBIO Una vez listo los equipos y el inculo colocamos en el biorreactor el agua y el inculo para empezar el tratamiento, lo sellamos y dejamos trabajar al equipo durante cuatro semanas. Cada semana se inocula 250 mL de inculo 35

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manualmente y al mismo tiempo se toma una muestra para realizar los respectivos anlisis. Controlamos diariamente la temperatura y el pH de la mezcla, por medio de los sensores. CAPTULO III 3.1. CLCULOS PARA EL DIMENSIONAMIENTO DEL BIORREACTOR Clculo de la altura Para el clculo de la altura usamos la ecuacin 4: Donde asumimos un volumen de 6 litros y un dimetro del reactor de 20 cm Altura de seguridad Altura total del reactor Pero por facilidad de construccin la altura total es Clculo de la presin total La presin de operacin Po en nuestro caso es la presin atmosfrica La presin de seguridad es el 80% de la presin atmosfrica. Clculo del espesor de la lmina Clculo del espesor de la tapa Altura de la cmara de calefaccin Considerando que la altura de la cmara de calefaccin es el 80% de la altura total del cilindro se determina que: Volumen de agua en la cmara de calefaccin Longitud del brazo La longitud del brazo del agitador est dada por la siguiente ecuacin: Dimetro del Rodete Distancia entre el fondo del Tanque y el rodete Alto de la paleta Dimetro utilizado por la paleta Balance de masa y energa Masa del estircol de cerdo Masa del estircol de caballo Masa del lactosuero Masa del agua Masa del acero inoxidable Clculo del flujo de calor del sustrato Para calcular el calor que genera todo el sistema se realiza el siguiente balance: Clculo de la viscosidad Clculo del nmero de Nusselt 19414.22 Clculo del nmero de Prandal Pr Clculo del coeficiente de transmisin de calor Clculo del gradiente de temperatura aritmtico Clculo del nmero de Reynolds Clculo de la potencia del rodete W 3.2. RESULTADOS De acuerdo a lo clculos realizados obtuvimos los siguientes resultados los mismos que en este captulo permitirn una discusin de resultados en relacin al diseo y eficiencia del inculo en el tratamiento. TABLA XXI. RESULTADOS DIMENSIONAMIENTO BIORREACTOR N PARMETRO SIMBOLOGA RESULTADO UNID. 1 Volumen del tanque 36

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Vt 6 L 2 Altura del tanque hu 19,10 Cm 3 Altura de seguridad hs 5,73 Cm 4 Altura total HT 25 Cm 5 Espesor de la lmina e 0,5 Mm 6 Espesor de la tapa eT 1,8 Mm 7 Dimetro interno i 20,1 Cm 8 Altura de la camisa hc 37

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16 Cm 9 Volumen de la camisa Vc 9,82 L 10 Longitud del brazo Lb 18 Cm 11 Altura del agitador La 37,5 Cm 12 Dimetro del rodete r 1 Cm 13 Distancia entre el fondo del tanque y el rodete hfr 2 Cm 14 Altura de la paleta Ap 1,5 Cm 15 Dimetro utilizado por las paletas Dp 17 38

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Cm 16 Velocidad de transmisin de calor Q 19.6 Kcal 17 Potencia del rodete P 0.26 W FUENTE: Autoras. TABLA XVIII. RESULTADOS DEL INCULO PARA EL TRATAMIENTO N PARMETRO SIMBOLOGA RESULTADO UNID. 1 Masa del estircol (porcino y caprino) me 1,03 Kg 2 Masa del lactosuero ml 1,024 Kg 3 Masa del agua ma 3,996 Kg 4 Masa del acero inoxidable 39

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mac 12,57 Kg 5 Balance global F 1.8 x10 -9 Kg FUENTE: Autoras. Durante el periodo de tratamiento del agua residual de curtiembre se registraron las lecturas de pH y temperatura con el fin de controlar el proceso. TABLA XXII. LECTURAS DE PH Y TEMPERATURA DA pH TEMPERATURA 1 3,6 35 2 3,8 35 3 4 33 4 4 35 5 3,8 36 6 40

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3,8 31 7 3,2 29 8 3,3 30 9 3,3 32 10 3,7 34 11 4,1 38 12 4,3 32 13 3,4 36 14 4,8 34 15 5,1 35 41

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16 3,4 34 17 3,9 34 18 3,7 35 19 3,3 37 20 3,4 35 21 3,3 33 22 3,5 40 23 3,9 37 24 4,1 36 25 3,4 42

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33 26 3 32 27 3,6 39 28 3,3 36 29 4,1 31 30 4,5 35 FUENTE: Autoras GRFICO 1. VARIACIN DE TEMPERATURA FUENTE: Flores Ftima y Veln Johanna La variacin de temperatura registrada durante el tratamiento oscila entre 30 y 40 oC mantenindose un promedio de 35 oC desde el da 13 hasta el da 20 del tratamiento. GRFICO 2. VARIACIN DE pH FUENTE: Flores Ftima y Veln Johanna El rango de pH ptimo en que se desarrolla el mix bacteriano se encuentra entre 3 y 4,5. En el grfico podemos observar que durante casi todo el tratamiento se mantuvo en este rango lo que nos garantiza la eficiencia del proceso. RESULTADOS OBTENIDOS EN EL PROCESO DE BIORREMEDICIN Los parmetros de inters para su reduccin son Cr3+ y DQO, por lo cual, durante el tratamiento obtuvimos los siguientes resultados. TABLA XXIII. RESULTADOS OBTENIDOS DE CROMO TRIVALENTE Y DQO CROMO (Cr3+) DQO AST 2613,27 7450 D1 43

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1375 30000 D2 213,5 52250 D3 213,1 32500 D4 212,7 13220 D5 209 15500 D6 201,22 17920 D7 175 14000 D8 137,04 10100 FUENTE: Autoras GRFICO 3. REDUCCIN DE CROMO TRIVALENTE FUENTE: Autoras La reduccin ms significativa de cromo que se puede evidenciar es de aproximadamente 2000 ppm; posterior a eso hay una reduccin significativa que luego va decreciendo hasta disminuir en pequeas cantidades. GRFICO 4. VARIACIN DE DQO FUENTE: Autoras En la grfica claramente al inicio del proceso se distingue un aumento sumamente alto de la demanda qumica de oxgeno y de igual forma una reduccin brusca y posteriormente se evidencia una reduccin paulatina del parmetro, sin embargo con relacin al inicio la DQO ha aumentado. TABLA XXIV. RESULTADOS OBTENIDOS DE COLIFORMES Y ACIDEZ COLIFORMES TOTALES ACIDEZ 120000 3511 44

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80000 2380 40000 1377 20250 1000 3100 635 500 750 4200 751 FUENTE: Autoras 3.3. DISCUSIN DE RESULTADOS 3.3.1. ANALISIS DE RESULTADOS DIMENSIONAMIENTO DEL BIORREACTOR Para realizar el dimensionamiento del biorreactor debimos escoger en primer lugar el tipo de reactor, para lo cual se tom en cuenta el medio en el cual los microorganismos crecen con mayor eficiencia, siendo ste un medio anaerobio y por la inoculacin de sustrato, se decidi al final que sera un reactor anaerobio fed batch alimentado manualmente, ya que el sustrato requerido para el crecimiento microbiano no es necesariamente continuo. Una vez que se decidi por el tipo de biorreactor se obtuvieron los resultados de dimensionamiento de la tabla XXI del cap. III. En cuanto el sistema de agitacin obtuvimos una potencia de agitacin muy baja, por lo que fue necesario utilizar en la construccin un motor de hp con un variador de velocidad de frecuencia, como la teora nos dice que la velocidad de agitacin debe ser de acuerdo a la resistencia de las bacterias en el medio; as que se opt por una velocidad de agitacin de 90 rpm, lo cual mantiene la muestra homognea y permite que los microorganismos no se golpeen y no causa su muerte; se puede trabajar tambin a 120 rpm no ms de esta velocidad ya que el medio es poco viscoso y producira turbulencia y muerte celular. Para la automatizacin de los parmetros fundamentales del tratamiento fue indispensable un ajuste de temperaturas y pH, que oscilan entre los 30 - 40 C y 3-4.5 respectivamente; con la intencin de mantener la temperatura del fermentador en los 35 C durante el mayor tiempo posible se utiliz un calentador sumergible el cual nos permiti mantener por mayor tiempo la temperatura entre los 33 y 37 C al agua, en cuanto el tiempo que permanece encendido el calentador es de 32 das, lo que nos da un promedio de 320 horas en los rangos ptimo de crecimiento microbiano lo cual nos da un resultado eficiente en cuanto a la temperatura de trabajo durante las 4 semanas de tratamiento. 3.3.2. ANLISIS DE RESULTADOS TRATAMIENTO DEL AGUA RESIDUAL DE CURTIEMBRE TRATAMIENTO DEL AGUA RESIDUAL DE CURTIEMBRE La temperatura es uno de los principales factores que fueron controlados durante los 30 das que se llev a cabo el proceso de remediacin. Como se refleja en el grafico 1 la temperatura siempre estuvo controlada y, a excepcin de una vez que se obtuvo un valor de 29 oC, se encontr en los rangos de temperatura adecuados para el desarrollo y crecimiento de los microoganismos de inters. Otro factor importante de controlar en este proceso fue pH que al igual que la temperatura no tuvo variaciones significativas durante todo el proceso. De acuerdo con la grfica 2 en los das 14 y 15 del tratamiento existi una elevacin de pH, esto se debi al consumo de suero, ya que hubo un periodo relativamente ms largo a comparacin de los otros periodos, que es el componente que adems de ser un nutriente para los microorganismos fue un factor determinante del pH cido de la 45

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mezcla; por tal motivo se aadi cierta cantidad de suero para controlar este parmetro. El cromo fue un parmetro que consideramos importante en este tratamiento debido al riesgo que representa. Se determin la cantidad de cromo que contena la muestra de agua antes de ser tratada y semanalmente se analiz el agua que estaba en proceso de remediacin; como se muestra en la grfica 3 nuestro valor inicial de cromo fue de 2613. 27 ppm que disminuy bruscamente debido a la gran cantidad de inculo frente a la pequea cantidad de agua residual en el proceso de adaptacin, mientras que cuando ya se trata los 4 L de agua existe una reduccin paulatina debido a que la concentracin del agua es mayor a la concentracin de inculo. Finalmente se obtuvo un resultado de 131,7 ppm que demuestra la eficiencia del proceso pero en un gran periodo de tiempo. La Demanda Qumica de Oxigeno es otro factor fundamental que decidimos monitorear, se empez con un valor de 7450 ppm que se elev abruptamente, tal como se indica en la grfica 4, en el proceso de adaptacin eso se debe a que el suero posee una alta Demanda Qumica de Oxigeno. Posteriormente se evidencia que el valor de este parmetro va disminuyendo hasta que se tiene un incremento relativo con una posterior reduccin pero a pesar de ello nuestro resultado final presenta una concentracin ms elevada de acuerdo a la concentracin con la que se empez el proceso. CAPITULO IV 4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 4.1. CONCLUSIONES Caracterizamos fsico y qumicamente el agua residual de curtiembre, generndonos valores de Cr+3 y DQO de 2613.27 mg/L y 7450 mg/L respectivamente; lo que nos indica valores fuera de norma para la descarga de esta a recursos hdricos y agricultura. Caracterizamos fsico-qumica y microbiolgicamente el agua residual de curtiembre durante y despus del tratamiento donde se obtuvieron resultados ptimos pero poco eficientes en el tiempo, ya que cuatro semanas es un tiempo extremo para el tratamiento. Comprobamos la eficiencia del sistema en el tratamiento del agua residual de curtiembre siendo del 70% con respecto a la concentracin inicial. En cuanto al cumplimiento de la normativa tenemos una eficiencia del 50%; podemos concluir que el rendimiento total es del 60 %. Implementamos el biorreactor en el laboratorio de biotecnologa de la Escuela de Ciencias Qumicas, con una conexin trifsica de 220 V y un manual de manejo que permite el mantenimiento del equipo. RECOMENDACIONES Se recomienda a los estudiantes o personas en general que van a manipular el equipo tengan en cuenta el manual de uso del reactor con el fin de evitar inconvenientes y causar daos en el equipo. Para que el equipo sea eficiente se recomienda trabajar con un sustrato especfico que se puede obtener mediante el aislamiento de bacterias sulforeductoras. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS (1) CAORSI, G. Biotecnologa, historia y cronologa; http://www.ing.unlp.edu.ar/produccion/introing/ bib/Biotecnologia2.pdf; Facultad de ingeniera universidad nacional de la plata (2) MUNICIO, A.M. Concepto biotecnologa; http://www.rac.es/ficheros/doc/00323.pdf; real academia de ciencias. (3) BIOTECNOLOGA; Definiciones biotecnologa; http://www.wordreference.com/es/en/frames.asp? es=biotecnolog%C3%ADa (4) TORREALBA, M. Clasificacin de la biotecnologa http:// saberdebiotecnologia.blogspot.com/2012/11/clasificacion-de-la-biotecnologia.html; 2012. (5) ROMERO, G. Biotecnologa Ambiental; http://www.uned.es/experto-biotecnologia-alimentos/ TrabajosSelecc/GloriaRomero.pdf; 2008; UNIVERSIDAD NACIONAL DE EDUCACIN A DISTANCIA; MADRID. (6) SEGURA D., y otros;http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/libro_25_aniv/ capitulo_31.pdf Contaminacin ambiental y bacterias productoras de plsticos biodegradables (7) CASTILLO, J. CESAR; Contaminacin de metales pesados-minas de fosfoyesos; http:// www.elperiodicodehuelva.es/index.php/noticias/item/25799-bacterias-y-esti%C3%A9rcol-decaballo-frenan-la-contaminaci%C3%B3n-de-los-fosfoyesos?tmpl=component&print=1; Universidad de Huelva; Argentina; 17/03/2013 (8) RIVERA, M.F. Y SUREZ, D.P. Diseo y construccin de un biorreactor batch aerobio para cultivo de bacterias biodegradadoras de petrleo. Tesis Ing. Qumico. 46

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Riobamba ESPOCH, Facultad de Ciencias, 2010, 103p. (9) LIZARDI, M.A. Contribucin al estudio de la hidrodinmica y transferencia simultnea de masa en biorreactores airlift de tres fases: produccin de un consorcio microbiano degradador de petrleo. Tesis Dr. Biotecnologa. Mxico D.F. Universidad Autnoma Metropolitana, 2011, 120p. (10) RODRIGUEZ, A.C., CABRERA, A.I, Y VALENCIA, J.I. Diseo y construccin de los instrumentos de medicin para un biorreactor prototipo, Revista Mexicana de Ingeniera Biomdica. (Mxico) 24 (1); 56-59, 2003. (11) http:// www.arian.cl/downloads/nt-002.pdf (12) http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/lhh345a/ Potenciometrias.pdf (13) Alverdi B. Victor; Estrategias Biotecnolgicas, Biorreactores http://es. 0: http://es.scribd.com/doc/47628024/Tema-7-Clase-7-Estrategias-biotecnologicas-2-ppt-Modode-compatibilidad; 100% scribd.com/doc/47628024/Tema-7-Clase-7-Estrategias-biotecnologicas-2-ppt-Modo-decompatibilidad; Jun 26, 2011. (14) GUEVARA, E. Diseo construccin y caracterizacin hidrodinmica de un biorreactor multifuncional. Tesis Ing. Alimentos. Oaxaca Universidad Tecnolgica de la Mixteca, 2004, 107 p. (15) RODRIGUEZ, J.A. Tratamiento anaerobio de aguas residuales. Colombia. Universidad el Valle, 2002, 15p. (16) CHAMY, R. Avances en biotecnologa ambiental: Tratamiento de residuos lquidos y slidos, Revista de Ingeniera Bioqumica. (Chile) 2: 26p, 2003. (17) GERMILLAC, M. Curtiembre. Mxico, Universidad Autnoma Metropolitana, 2002, 21p. (18) ESPARZA, E. Y GAMBOA, N. Contaminacin debida a la industria curtiembre, Revista de Qumica. (Per) 15 (1); 42-44, 2001. (19) CUBEROS, E., PRIETO, E. Y RODRIQUEZ, A. Niveles de cromo y alteraciones de salud en una poblacin expuesta a las actividades de curtiembres en Bogot Colombia, Revista de Salud Pblica. (Colombia) 11 (2); p 279, 2009. (20) VULLO, D. Microorganismos y metales pesados: una interaccin en beneficio del medio ambiente, Revista Qumica Viva. S.l. (3); 94-102, 2003. (21) PAUCAR., A. Optimizacin de la concentracin inicial del inculo y medio de cultivo para la produccin de un bioacaricida a partir de Bacillus thuringiensis en un biorreactor discontinuo a escala piloto. Tesis Ing. Biotecnologa. Sangolqu Escuela Politcnica del Ejrcito, Departamento de Ciencias de la vida, 2011, 81p. (22) ZAMORA, J. Depuracin biotecnolgica del suero lcteo empleando un sistema continuo mixto: anaerobio de lecho fijo aerobio. Tesis Ing. Alimentos. Oaxaca Universidad Tecnolgica de Mixteca, 2006, 78p. (23) GARCA A. Calidad alimentaria de la mezcla estircol de cerdo y esquilmos agrcolas deshidratada al sol, para bovinos de engorda. Tesis Msc. Biotecnologa. Mxico Universidad de Colima, Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias, 2000, 99p. ANEXOS CONSTRUCCIN DEL BIORREACTOR PREPARACIN DEL INCULO INOCULACIN Y LECTURA DE PH Y TEMPERATURA MANUAL DE MANEJO DEL BIORREACTOR INTRODUCCIN El presente manual consta de procedimientos de operacin del biorreactor anaerobio propuesto como tesis de grado. En el manual se expondrn los procedimientos que se seguirn para el manejo y mantenimiento adecuado del sistema de agitacin, automatizacin y limpieza del equipo para. El objetivo primordial del manual es que el personal que manipule el equipo lo haga de manera eficiente para prolongar la vida til del biorreactor. PROCEDIMIENTO I ENCENDIDO Y APAGADO DEL SISTEMA Para poder iniciar el trabajo del equipo debemos seguir los siguientes pasos: 1. Verificar que se tenga una conexin de 220 V con neutro. 2. Conectar el cable principal a la conexin 220 con neutro. 3. Conectar el cable del motor, del calentador sumergible y el sensor de temperatura al mdulo. 4. Giramos a la derecha la llave de encendido general; al instante se enciende una luz verde; significa que la corriente de los equipos est lista. 5. Luego giramos a la derecha la llave de encendido del agitador y temperatura; al instante una luz roja se enciende; significa que la agitacin y los sensores empiezan su funcionamiento. Para cuando se haya terminado el proceso y se desee apagarlo seguimos los siguientes pasos: 1. Giramos a la izquierda la llave de agitacin y temperatura e inmediatamente el sistema se para apagndose la luz roja. 2. Giramos a la izquierda 47

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la llave de encendido general e inmediatamente el sistema general se para. 3. Finalmente desconectamos el enchufe de la conexin 220 con neutro. PROCEDIMIENTO II PARA CAMBIAR LA FRECUENCIA O VELOCIDAD DE AGITACIN Para realizar un cambio en la velocidad de agitacin del equipo es importante seguir estrictamente los siguientes pasos: 1. Abrimos la tapa del mdulo, y notamos una pantalla celeste con botones. 2. Pulsamos la tecla P y aparece en la pantalla r0000. 3. Pulsamos + hasta visualizar P1080. 4. Pulsar + o hasta cambiar el valor a la frecuencia o velocidad deseada. 5. Pulsamos nuevamente P y aparece P1080. 6. Pulsamos hasta encontrar r0000 7. Finalmente pulsamos P y aparece r0000 e inmediatamente la frecuencia que fue cambiada. Nota: Para realizar el cambio de velocidad o frecuencia es importante que el sistema general este apagado. PROCEDIMIENTO III MANEJO DEL SENSOR DE pH Para manejar el sensor de pH se necesita tener en cuenta los siguientes pasos: 1. Verificamos que la pantalla del pH-metro tenga una batera funcional de 9 V 2. Retiramos el sensor de la tapa y lo conectamos al cable del sensor. 3. Encendemos con el botn de encendido y tomamos la lectura. Nota: El sensor debe ser calibrado de acuerdo a los valores de pH con los que se vaya a trabajar. PROCEDIMIENTO IV LIMPIEZA DEL BIORREACTOR Con el fin de mantener en buenas condiciones el equipo se debe tomar en cuenta las siguientes consideraciones: 1. Antes de utilizar el biorreactor se debe limpiar y desinfectar, con la ayuda de toallitas y alcohol antisptico, el cuerpo del biorreactor, el sistema de agitacin y la camisa. 2. Al finalizar las actividades se debe lavar los recipientes con detergente y posteriormente desinfectarlos. Se debe tener cuidado al lavar y/o limpiar la tapa ya que los sensores y el motor pueden resultar afectados. - 122 [Metadata removed]

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las ideas, doctrinas y resultados expuestos en esta Tesis, y el patrimonio intelectual de la Tesis de Grado pertenecen a la Escuela Superior Politcnica de Chimborazo

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El pH es un indicador de la acidez de una sustancia. Est determinado por el nmero de ines libres de hidrgeno (H+) en una sustancia.

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Un biorreactor es un recipiente o sistema que mantiene un ambiente biolgicamente activo (8), dicho de otra manera un biorreactor 4: http://es.wikipedia.org/wiki/Biorreactor Cuerpo del biorreactor Recipiente o contenedor que alberga al cultivo o microorganismo (8). El 100%

Un biorreactor es un recipiente o sistema que mantiene un ambiente biolgicamente activo. En algunos casos, un biorreactor 4: http://es.wikipedia.org/wiki/Biorreactor Cuerpo del Biorreactor: recipiente o contenedor que alberga al cultivo o microorganismo. El 100%

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Instances from: http://darwin.usal.es/profesores/pfmg/sefin/MI/tema14MI.html 5: http://darwin.usal.es/profesores/pfmg/sefin/MI/tema14MI.html 97% El punto de partida de cualquier fermentacin es un recipiente limpio que ha sido esterilizado y rellenado con el medio de cultivo estril. Posteriormente, el fermentador se inocula con el microorganismo adecuado. El tamao del inculo generalmente es del orden del 1-10% del volumen total del medio. Si es inferior a esta proporcin puede existir un excesivamente prolongado perodo de latencia, lo que prolongar el perodo de fermentacin. Para evitar estos problemas, el proceso de fermentacin se lleva a cabo en cuatro etapas: Preservacin del inculo Multiplicacin del inculo Cultivo de prefermentacin Fermentacin de produccin (22) Preservacin del inculo La preservacin 5: http://darwin.usal.es/profesores/pfmg/sefin/MI/tema14MI.html 97% El punto de partida de cualquier fermentacin es un recipiente limpio que ha sido esterilizado y rellenado con el medio de cultivo estril. Posteriormente, el fermentador se inocula con el microorganismo adecuado. El tamao del inculo generalmente es del orden del 1-10% del volumen total del medio. Si es inferior a esta proporcin puede existir un excesivamente prolongado perodo de latencia, lo que prolongar el perodo de fermentacin. Para evitar estos problemas, el proceso de fermentacin se lleva a cabo en cuatro etapas: I. Preservacin del inculo II. Multiplicacin del inculo III. Cultivo de prefermentacin IV. Fermentacin de produccin Etapa I: Preservacin del inculo La preservacin

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este polmero comenz a producirse a gran escala mediante un proceso de fermentacin semejante a la produccin de bebidas fermentadas como la cerveza o el vino, es decir, en tanques agitados conteniendo un medio lquido adecuado para la multiplicacin (crecimiento) de las bacterias productoras de PHA. El polmero se acumula en el interior de las bacterias, que en este primer proceso eran de la especie Alcaligenes eutrophus (llamado actualmente Wautersia eutropha). El producto obtenido se llam comercialmente BiopolTM, un copoliester de hidroxibutirato e hidroxivalerato (6).

Este polmero comenz a producirse a gran escala mediante un proceso de fermentacin semejante a la produccin de bebidas fermen- tadas como la cerveza o el vino, es decir, en tan- ques agitados conteniendo un medio lquido adecuado para la multiplicacin (crecimiento) de las bacterias productoras de PHA. El pol- mero se acumula en el interior de las bacterias, que en este primer proceso eran de la especie Alcaligenes eutrophus (llamado actualmente Wautersia eutropha). El producto obtenido se llam comercialmente Biopol TM , un copoliester de hidroxibutirato e hidroxivalerato (

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Instances from: http://www.arian.cl/downloads/nt-002.pdf 3: http://www.arian.cl/downloads/nt-002.pdf Una termocupla se hace con dos alambres de distinto material unidos en un extremo (soldados generalmente). Al aplicar temperatura en la unin de los metales se genera un voltaje muy pequeo del orden de los mili volts el cual aumenta con la temperatura (11). 2. 85% 3: http://www.arian.cl/downloads/nt-002.pdf 85%

Una termocupla se hace con ds alambres de distinto material unidos en un extremo (soldados generlmente). Al aplicar temperatura en la unin de los metales se genera un voltaje muy pequeo (efecto Seebeck) del orden de los milivolts el cual aumenta con la temperatura.

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TESIS fatima.docx (D10129799)

Instances from: http://es.scribd.com/doc/47628024/Tema-7-Clase-7-Estrategias-biotecnologicas-2-ppt-Modo-de-compatibilidad; 7: http://es.scribd.com/doc/47628024/Tema-7-Clase-7-Estrategiasbiotecnologicas-2-ppt-Modo-de-compatibilidad; 100% scribd.com/doc/47628024/Tema-7-Clase-7-Estrategiasbiotecnologicas-2-ppt-Modo-de-compatibilidad; 7: http://es.scribd.com/doc/47628024/Tema-7-Clase-7-Estrategiasbiotecnologicas-2-ppt-Modo-de-compatibilidad; 100% scribd.com/doc/47628024/Tema-7-Clase-7-Estrategiasbiotecnologicas-2-ppt-Modo-de-compatibilidad 07/09/2013

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