Metodologa de la Tcnica Histolgica DEFINICIN: Se denomina Tcnica Histolgica al conjunto de ope aciones a !

ue se somete una mate ia o gani"ada# a $in de !ue sea posi%le su estudio po medio del mic oscopio# posi%ilitando la o%se &acin de est uctu as no &isi%les al ojo 'umano(

MET)D)*)+,- DE EST.DI): *os mtodos pa a el estudio de una mate ia o gani"ada son: /0 E1amen inmediato o in &i&o: a0 -l estado $ esco: -nimales mic oscpicos uni o multicelula es# clulas li% es de animales supe io es 2descamadas natu almente# po aspado o po e1t accin# po pincelamiento# etc(0# componentes celula es !ue !uedan li% es po mtodos !ue desinteg an la clula 2mitocond ias# n3cleo# mem% ana plasm4tica0# ganos mu5 delgados 2mesente io# o co tes $inos di ectos de tejidos como el ca tilaginoso0# clulas o%tenidas de culti&os de tejidos( En stos casos# pa a e&ita la desecacin 5 p olonga las posi%ilidades de o%se &acin# se ag egan l!uidos como sue o sanguneo# sue o $isiolgico a tempe atu a semejante a la del animal# usando platinas calientes a 678 9 6:8 C( %0 E1amen con colo acin &ital: .sando soluciones mu5 diluidas de colo antes no t1icos# !ue se int oducen po &a digesti&a o po in5ecciones# o !ue act3an so% e clulas li% es# mtodo !ue se desc i%e m4s adelante( 2;e p4gina <0( =0 E1amen mediato o de post > mo tem: E1igen la mue te de las clulas 5 segui una se ie de pasos !ue constitu5en la Tcnica Histolgica .ni&e sal# 5a !ue se utili"a en todos los la%o ato ios 5 sus esultados se inte p etan de la misma mane a(

?-S)S DE *- T@CNIC- HIST)*+IC- C)AAIENTE 2?a a$ina > Hemato1ilina > Eosina0: En el desa ollo de la misma# se pueden distingui la sucesin de los siguientes p ocesos: /0 )%tencin del mate ial 'istolgico( =0 ? oceso de $ijacin( 60 ? oceso de inclusin( B0 )%tencin de co tes( C0 ? oceso de colo acin(

70 Montaje $inal(

/0 )DTENCIN DE* M-TEAI-*: El mismo gene almente p o&iene de: a0 Diopsias !ui 3 gicas( %0 Mate ial o%tenido de nec opsias( c0 .tili"acin de animales de la%o ato io( d0 Estudios e1pe imentales en animales o &egetales( e0 Mate ial o%tenido po culti&o de tejidos( $0 F otis o e1tendidos(

En la o%tencin del mate ial 'istolgico 'a5 !ue cumpli con &a ias eglas# como se : E Aeali"a la toma del tejido del luga co ecto( E Es p eciso o% a con cuidado 5 p ecaucin# a $in de e&ita la dest uccin de los tejidos( E Co ta la pie"a de ganos maci"os en t o"os pe!ueFos 2ent e / 5 6 cm( 1 G#C cm(0# teniendo en cuenta la con$igu acin anatmica( E *os ganos 'uecos no de%en se mu5 distendidos pa a !ue se conse &e su aspecto no mal( E Aeali"a ste p oceso con la ma5o apide" posi%le pa a e&ita la autodest uccin del tejido 2autlisis0(

=0 ?A)CES) DE FIH-CIN: ?o medio de la $ijacin se %usca inte umpi el desa ollo de los p ocesos o g4nicos $ijando 5 conse &ando de la mane a m4s $idedigna posi%le el estado 5 la situacin en !ue se encont a%an los tejidos en &ida( *os tejidos de%en se $ijados inmediatamente despus de e1ti pa losI sta es la 3nica $o ma de inte umpi instant4neamente los p ocesos &itales( Si la $ijacin se p oduce alg3n tiempo despus de la o%tencin del mate ial# puede sucede !ue 5a 'a5an comen"ado los p ocesos de post > mo tem( En un o ganismo mue to pueden tene luga &a ios tipos de desinteg acin# como po ejemplo# Jla autlisisK# !ue consiste en la dest uccin de los tejidos po sus p opias en"imas locales p oducidas po los lisosomas( El segundo tipo de desinteg acin consiste en la Jput e$accinK# en donde se p oduce la dest uccin de los tejidos en accin conjunta con las %acte ias(

?o lo enunciado# podemos de$ini a la JFijacinK como un p oceso !ue consiste en alcan"a una situacin esta%le de los constitu5entes tisula es# de%ido a la inte upcin de las eacciones en"im4ticas(

FIH-D)AES L.,MIC)S SIM?*ES: E Fo mol al /G M: Es el m4s utili"ado( Su empleo de%e aconseja se en todos los casos en !ue no se disponga de un $ijado especial# p incipalmente cuando se t ata de $ija ganos o tejidos pa a estudios 'istolgicos( Conse &a %ien los tejidos 5 po ello est4 indicado en el estudio del sistema ne &ioso 5 es mu5 utili"ado en anatoma patolgica pa a la $ijacin de pie"as ope ato ias o de %iopsias( En el come cio se lo encuent a a una solucin de Fo malde'do al BG M( E +luta alde'ido 5 Tet 1ido de osmio 24cido smico0: Son mu5 %uenos $ijado es# mu5 utili"ados en mic oscopa elect nica# 5a !ue p ese &an las est uctu as $inas 5 algunos sistemas en"im4ticos( E -lco'ol etlico# a%soluto 5 de <7 M: Son malos $ijado es( Su uso se indica so% e todo en mic o!umica# pues conse &a sin alte a los a muc'os componentes celula es 2glucgeno# mucina# etc(0 5 en citologa( E -lco'ol metlico: Se emplea pa a $ija e1tendidos de sang e 5 de l!uidos de puncin# !ue se colo ean poste io mente con mtodos especiales(

FIH-D)AES L.,MIC)S C)M?.EST)S ) MENC*-S FIH-D)A-S: En su composicin ent a un n3me o &a ia%le de $ijado es simples# elegidos seg3n sus cualidades( Ellas son: E *!uido de Douin: Consiste en una me"cla pic o > $o mol > actica( Es el mejo $ijado # 5a !ue es mu5 penet ante 5 pe mite $ija pie"as de 'asta / cm( la du acin de la $ijacin es de 'asta O das# pe o el tiempo ptimo es 6 das( No se de%e la&a la pie"a al saca la del $ijado ( E *!uido de Fleming( E *!uido de NenPe (

FIH-D)AES F,SIC)S: E Desecacin: Se lo utili"a en e1tendidos de sang e# l!uidos de puncin( Si se e$ect3a 4pidamente detiene los p ocesos de post > mo tem 5 pe mite el empleo poste io de $ijado es !umicos o calo seco pa a completa la $ijacin( E Calo seco: Es utili"ado a menudo en %acte iologa so% e e1tendidos desecados# poco empleado en 'istologa( E Calo '3medo: En $o ma de agua 'i &iente es utili"ado en algunas in&estigaciones mic o!umicas o pa a $ija in&e te% ados(

E F o: No es un &e dade o $ijado # pe o detiene los p ocesos &itales 5 los cada& icos de nec osis 5 autlisis# pe o en cuanto deja de actua # se eanudan las acti&idades &itales si la clula no 'a mue to# o se desa ollan los p ocesos de post > mo tem( E Congelacin > desecacin 2Mtodo de -ltmann > +e s'0(

Aeglas de la $ijacin: E El mate ial de%e se co tado en t o"os pe!ueFos 5 no demasiado g ueso# pa a $acilita la penet acin del $ijado ( E *a elacin del &olumen ent e el o%jeto a $ija 5 el $ijado # &a a seg3n el $ijado empleado# pe o como mnimo la elacin de%e se de / a =G( E El l!uido $ijado se de%e &e te p ime o en el $ asco 5 luego se int oducen los t o"os de tejidoI en caso cont a io !uedan stos pegados en el $ondo 5 no se $ijan po ese lado( Si son tejidos !ue tienden a i al $ondo 2'gado# m3sculo# gl4ndulas0# se de%e agita el $ asco du ante unos minutos( *os tejidos !ue $lotan 2pulmn# g asas0# se ecu% en con un t o"o de algodn o papel de $ilt o pa a !ue se pongan totalmente en contacto con el $ijado ( E *a du acin del tiempo de $ijacin &a a seg3n el $ijado utili"ado# el tamaFo 5 la te1tu a del tejido( El gene al 5 como p omedio# =B 'o as es su$iciente# pe o puede !ueda en el l!uido $ijado # so% e todo con el $o mol taponado du ante &a ios aFos( E la osmo alidad es un $acto impo tante 5 de%e en lo posi%le tene una concent acin inica en el $ijado simila al tejido !ue se &a a $ija ( *as &a iaciones de la osmo alidad se log an po la adicin de clo u o de sodio# saca osa o de1t 4n(

Mecanismo de accin de los $ijado es: ;a a depende de la sustancia utili"ada# pueden desc i%i se B mecanismos de accin: a0 ?o coagulacin de las p otenas: Sin com%ina se con ella# como po ejemplo lo 'ace el alco'ol# 4cido pc ico# 5odo# $o mol# etc( %0 Fo mando com%inaciones !umicas con las sustancias o g4nicas de las clulas o tejidos como po ejemplo el 4cido c mico 5 sus sales# %ic omato de potasio# %ic omato de amonaco# etc( c0 ?o educcin al contacto con las sustancias o g4nicas $o mando un p ecipitado mu5 $ino# como po ejemplo el 4cido smico# %iclo u o de me cu io# etc( d0 ?o o1idacin# como po ejemplo el %ic omato de potasio(

/0 ?A)CES) DE INC*.SIN:

?a a o%tene co tes delgados# en un solo plano 5 uni$o mes# es necesa io !ue las pie"as ad!uie an una du e"a dete minada Si %ien en sta gua de estudio se desc i%e los pasos de la Tcnica Histolgica co iente# en la cual se utili"a pa a la o%tencin del co te el mtodo de inclusin# es necesa io acla a !ue e1isten = p ocedimientos $undamentales pa a la o%tencin del co te# ellos son: a0 ? e&ia congelacin del mate ial de estudio: Este p ocedimiento con$ie e a los tejidos un endu ecimiento uni$o me 5 pe mite eali"a diagnsticos inmediatos de pie"as ope ato ias 5 estudios 'isto!umicos# 5a !ue la congelacin no alte a la composicin !umica de los componentes 'istolgicos del mate ial a e1amina ( %0 ? e&ia inclusin del mate ial en una sustancia denominada ?a a$ina: El mate ial congelado no e3ne de mane a su$iciente las condiciones ptimas# 5a !ue los co tes o%tenidos po congelacin son siemp e m4s g uesos !ue los o%tenidos po inclusin( ?o lo dic'o 5 si se cuenta con el tiempo necesa io# es p e$e i%le imp egna los tejidos con una sustancia l!uida !ue luego pasa a una $ase slida 5 'omognea( Este p ocedimiento se denomina JInclusinK( En su t anscu so# se deposita el medio de inclusin en todos a!uellos luga es en donde se encuent a el agua# o donde sta 'a sido e1t ada( *os medios o sustancias de inclusin pueden se : Solu%les en el agua: Como se la JCeloidina# +elatina# ?le1iglas# o %ien Insolu%les en el agua: Como po ejemplo la J?a a$inaK 5 ot os( En la Tcnica Histolgica co iente# solo nos inte esa el empleo de la pa a$ina como medio de inclusin# 5 dado !ue no es solu%le en agua# su empleo condiciona la p e&ia e1t accin del agua contenida en el tejido !ue se &a a somete al p oceso de inclusin( Es as !ue la inclusin consta de los siguientes pasos: a0 Des'id atacin( %0 -cla acin( c0 Imp egnacin en pa a$ina 5 con$eccin del taco o %lo!ue(

a0 Des'id atacin: Tiene po $inalidad la e1t accin del agua del tejido pa a !ue la pa a$ina ocupe su luga ( Si el mate ial no se des'id ata su$icientemente# la inclusin es de$ectuosa( En ste paso se emplea una se ie de alco'oles en concent acin c eciente: :G8# OG8# <78# /GG8( *as pie"as se dejan en la se ie c eciente de alco'oles adaptando el tiempo de pe manencia al contenido de agua de la pie"a# a su tamaFo 5 a la pu e"a de los alco'oles( *as pie"as de%en pe manece en la capa supe io colg4ndolas( El tiempo &a a seg3n el tamaFo de la pie"a de / a /= 'o as en cada alco'ol gene almente(

%0 -cla acin:

.na &e" o%tenida la des'id atacin a%soluta de la pie"a# se coloca a la misma en el seno de un l!uido# !ue me"cl4ndose con el alco'ol# tenga al mismo tiempo la p opiedad de disol&e la pa a$ina# es po sta p opiedad !ue eci%e el nom% e de J*!uido inte media ioK( ?e tenecen a ste g upo de sustancias el clo o$o mo# toluol# 1ilol 5 %en"ol# siendo ste 3ltimo el m4s utili"ado( -l se la pa a$ina insolu%le en alco'ol# es necesa io !ue el l!uido inte media io lo eemplace po completo# po tal moti&o con&iene eno&a lo una o dos &eces pa a asegu a nos !ue todo el ast o de alco'ol 'a desapa ecido( ?a a da nos si la penet acin del l!uido inte media io es completa# de%emos o%se &a la pie"aI ste al penet a en el tejido an'id o# p oduce una t anspa encia ca acte stica en el mismo# 5 es po sta a"n !ue tam%in se los llama J-cla antesK( El tiempo &a a seg3n la sustancia usada 5 el tamaFo de la pie"a# gene almente de / a 6 'o as en cada %aFo(

c0 Imp egnacin en pa a$ina 2inclusin p opiamente dic'a0: *a pa a$ina utili"ada en la Tcnica Histolgica es una me"cla de cadenas de == ca %onos 'asta =< ca %onos# &a iando su punto de $usin ent e BC8 a 7G8 C# seg3n su composicin( Como su nom% e lo indica# es una sustancia !umicamente inacti&a# po lo !ue puede conse &a se inde$inidamente en la estu$a( Se li!ue$acta con $acilidad a los C78 C 5 a tempe atu a am%iente se encuent a en estado slido( *as pie"as# despus de 'a%e sido acla adas# se pasan a una me"cla de pa a$ina l!uida 5 l!uido inte media io en pa tes iguales 5 se las lle&a a la estu$a du ante una 'o a( *uego se las int oduce en un ecipiente !ue tenga pa a$ina l!uida 5 se gua da en la estu$a pa a !ue la pa a$ina imp egne totalmente el tejido en toda su intimidad( *a inclusin completa de las pie"as du a ap o1imadamente B 'o as(

Con$eccin del taco o %lo!ue: Despus de los pasos a i%a mencionados# &iene la inclusin de$initi&a del t o"o de tejido# !ue nos da 4 no9solo la solidi$icacin de la pa a$ina inte na de la pie"a# sino tam%in una en&oltu a !ue $acilita 4 su ulte io manejo 5 co te# utili"4ndose pa a cumpli con lo cometido# un molde especial de metal denominado J%a as de *eucPa tK# dent o del cual se &ie te pa a$ina l!uida a 7G8 C( -ll se deposita la pie"a !ue se saca del %aFo de pa a$ina en !ue se encont a%a# cuidando de o ienta la con&enientemente pa a sa%e despus la di eccin en !ue de%e se co tada( Se deja a en$ ia a tempe atu a am%iente du ante 6G minutos o m4s# 5 una &e" solidi$icada se eti a del molde o%tenindose de ste modo el taco !ue !ueda listo pa a se co tado po el mic tomo( En sta situacin la pie"a puede conse &a se inde$inidamente( El o%jeto de la inclusin en pa a$ina es p opo ciona al tejido la consistencia su$iciente 5 necesa ia pa a !ue pueda se educido a co tes $inos !ue posean un g oso tal en mic as pa a !ue pe mita el paso de la lu" 5 se e1aminados con el mic oscopio(

/0 )DTENCIN DE *)S C)ATES:

Con el o%jeto de eali"a los co tes adecuados pa a el estudio al mic oscopio# se utili"an distintos mtodos 5 &a iados apa atos de g an p ecisin# a los !ue se denominan JMic tomosK( Su empleo est4 condicionado al estudio !ue se desee eali"a en los di&e sos tejidos( -s se cuenta con mic tomos de desli"amiento# mic tomo Tetande # mic tomo de pa a$ina tipo Minot 2cuc'illa $ija0# el ult amic tomo# c itomo# ent e ot os( El de cuc'illa $ija o tipo Minot es el m4s utili"ado en la Tcnica Histolgica co ienteI es uno de los m4s pe $ectos# pues nos da co tes se iados autom4ticamente en $o ma de cintaI el espeso del co te puede &a ia de = a =G um( *os espeso es m4s utili"ados &an desde C a O um( *a eleccin del g oso depende de la te1tu a del tejido 5 de los elementos 5 detalles !ue se !uie an o%se &a 5 estudia ( El mic tomo de tipo Minot consta de dos g andes pa tes: E El ca il de la cuc'illa: Es una pie"a $ija du ante el co te# p o&ista de to nillos en su %ase# de la !ue eme gen dos pila es pa alelos en cu5a pa te supe io se encuent an dos discos cilnd icos anu ados 5 m&iles p o&istos de to nillos( En la anu a se int oduce la cuc'illa po su %o de menos anc'o# se la o ienta con elacin a la supe $icie del co te 5 se la ajusta( la calidad de los co tes# depende 4 de las p opiedades de la cuc'illa( E1isten &a ios tipos de cuc'illas: ?lanocnca&as# plano 'ipe cnca&as# %iplano simple# %iplano cono$acetada# de &id io# de diamante# ent e ot as( E *a platina: Es una pie"a de metal !ue posee canales e1ca&ados en la supe $icie dispuestos concnt icamente# su tamaFo es &a ia%le 5 $o ma es cuad angula o ci cula ( En la platina se de%e $ija la pie"a a co ta # lo !ue se log a $undiendo la pa a$ina con una esp4tula de metal calentada a la llama 5 !ue tend 4 contacto con la supe $icie canaliculada( Siemp e el lado elegido pa a esto se 4 el lado opuesto al !ue se desea co ta ( *a platina conjuntamente con el ca o en !ue se encuent a montada es lo !ue se desli"a &e ticalmente cuando se 'ace gi a la manija 5 al mismo tiempo cada &e" !ue llega a su e1t emidad supe io # se co e 'acia delante en un n3me o de mic as p e&iamente elegido# !ue nos da 4 el espeso del co te(

Montaje del co te: *os co tes se eti an del mic tomo con un pincel de pelo $ino 5 se e1tienden en agua co iente contenida en una %andeja o c4psula de ?et i( *uego de se la&ados# se &ie te en el mismo ecipiente agua a BC8 C pa a !ue los co tes se e1tiendan %ien 5 uni$o memente( *uego en esa misma agua se int oducen los po tao%jetos desg asados 5 %ien limpios# so% e los cuales ante io mente se 'a depositado una $ina capa de al%3mina glice inada o al%3mina de Ma5e 2me"cla en pa tes iguales de cla a de 'ue&o 5 glice ina con un c istal de timol como antisptico0# pa a !ue la ad'e encia del tejido sea ma5o 5 con la a5uda de una aguja 'istolgica se empujan los co tes !ue $lotan en el l!uido 'asta coloca los en el po tao%jeto( ?oste io mente se lle&an los po tao%jetos u%icados en una escale illa de made a a la estu$a pa a mejo a su ad'e encia po coagulacin de la al%3mina(

/0 ?A)CES) DE C)*)A-CIN: De$inicin: Colo acin es el p oceso po el cual un cue po toma colo %ajo la accin de un colo ante 5 no desapa ece con la&ados de la misma sustancia en !ue se disol&i el colo ante( Fundamentacin: *as est uctu as contenidas en las p epa aciones 'istolgicas# poseen poco cont aste o ca ecen de l completamente# po lo !ue no &an a pode se distinguidas al mic oscopio( Este incon&eniente !ueda sal&ado po la p opiedad !ue tienen los distintos componentes celula es 5 tisula es de inco po a con &a ia%le intensidad sustancias colo antes( En la Tcnica Histolgica co iente solo nos inte esa dos colo antes: Hemato1ilina 5 Eosina( De$inicin de colo antes: Son todas a!uellas sustancias !ue pueden comunica su colo a ot os cue pos# sea el mismo colo !ue ellas tienen 2colo antes o toc om4ticos0# o %ien teFi de un colo distinto 2colo antes metac om4ticos# ejemplo: -"ul de Toluidina# tiFe de ojo dete minados g upos !umicos de las clulas 5 a"ul todo lo dem4s0

ESustancias %as$ilas: Son los componentes de las est uctu as !ue se tiFen con colo antes %4sicos( ESustancias acid$ilas: Son los componentes de las est uctu as !ue se tiFen con colo antes 4cidos( ESustancias neut $ilas: Son los componentes de las est uctu as !ue se tiFen con colo antes neut os( ESustancias a"u $ilas: Son los componentes de las est uctu as !ue se tiFen con a"ul de metileno( ESustancias osmi$ilas: Son los componentes de las est uctu as !ue se tiFen con tet 1ido de osmio( ESustancias a gi $ilas: Son los componentes de las est uctu as !ue se tiFen con sales de plata(

Mtodos de colo acin: E Colo acin di ecta o sustanti&a: Cuando e1iste una &e dade a a$inidad ent e el o%jeto 5 la sustancia colo ante( E Colo acin indi ecta o adjeti&a: Cuando e!uie e la inte &encin de inte media ios o mo dientes pa a !ue la colo acin tenga luga ( El mo diente puede actua antes del %aFo con el colo ante o $o ma pa te de l( En ste 3ltimo caso# la com%inacin $o mada eci%e el nom% e de J*acaK( Ejemplo: -lum% e de ?otasio o de Sodio(

E Colo acin p og esi&a: Se 'ace actua al colo ante 'asta !ue llegue 'asta su punto ptimo( E Colo acin eg esi&a: Se eali"a p ime o una so% ecolo acin 5 luego se elimina el e1ceso de colo ante po medio de di$e enciado es( Este p oceso se denomina Jdi$e enciacinK 5 se lle&a a ca%o con agua# alco'oles# %ases o soluciones met4licas( E Colo acin simple: Cuando se colo ean solamente algunos elementos del p epa ado( Como n3cleos# $i% as el4sticas# glucgeno# etc( E Colo acin com%inada: Cuando se tiFen los elementos nuclea es 5 citoplasm4ticos# ecu indose en gene al al empleo sucesi&o de colo es %4sicos 5 4cidos !ue cont astan po sus colo es( Ejemplo: Hemato1ilina# tiFe de &ioleta el n3cleoI Eosina# tiFe de osado el citoplasma( E Colo acin panptica: Es una colo acin com%inada eali"ada sucesi&amente po colo antes neut os( Ejemplo: Ma5 > + QnRald > +iemsa( E Colo acin panc mica: Cuando en un solo %aFo colo ante act3an todos los colo antes neut os !ue se necesitan( Ejemplo: ?anc mico de *a&e man# de ?appen'eim( E Colo acin en %lo!ue: Colo ea a la pie"a en su conjunto antes de co ta la( Es poco utili"ada( E Colo acin en co tes: Colo ea cada co te po sepa ado( Es el mtodo m4s la go pe o de esultados supe io es(

Tcnica de colo acin con Hemato1ilina 5 Eosina: Hemato1ilina: Es un colo ante nuclea # est4 ca gado positi&amente 5 es po lo tanto un colo ante %4sico( Se deposita en los g upos $os$atos del -DN 5 -AN !ue tienen ca ga negati&a( Es el colo ante nuclea m4s utili"ado( Se lo o%tiene a pa ti de la e1t accin del palo de campec'e 2'emato1ilon campec'ianum0( *a sustancia es incolo a 5 'a de se t ans$o mada p ime o po o1idacin en 'ematena !ue es el autntico colo ante( *a 'ematena es un colo ante indi ecto# po lo !ue e!uie e el uso de un mo diente# !ue en la p 4ctica el m4s usado es el Hemalum% e de Ma5e # !ue $o ma pa te de la colo acin 'emato1ilina > eosina# 5 !ue est4 compuesto po 'ematena# alum% e de potasio 5 4cido ct ico( Colo ea al n3cleo de colo &ioleta( Es una colo acin p og esi&a( Eosina: Es un colo ante a ti$icial# d%ilmente 4cido !ue pe tenece al g upo de las $luo escenas( Es $4cilmente solu%le en agua( Colo ea al citoplasma# tejido conjunti&o# $i% as col4genas de osado intenso( Lumicamente es un eosinato de potasio# siendo el 4cido eosnico el !ue act3a en la colo acin( Es una colo acin eg esi&a 5 di ecta(

? ocedimientos pa a colo ea la muest a:

a0 Despa a$ini"acin e 'id atacin del co te: Dado !ue los colo antes se 'allan en soluciones acuosas# la pa a$ina impedi 4 su ent ada( Como sol&ente de la pa a$ina se utili"a Den"ol o Silol# completando con el pasaje po alco'oles en o den dec eciente /GG8# <78# OG8# :G8# $inali"ando con agua destilada( %0 Colo acin p opiamente dic'a: comien"a con la 'emato1ilina# &i ado con agua co iente 2d%ilmente alcalina0 o ag egando ca %onato de litio( Se pasa luego a la eosina# con la cual se so% ecolo ea# pa a luego elimina el e1ceso(

Colo acin &ital: Consiste en el empleo de soluciones mu5 diluidas de sustancias colo antes no t1icas# pa a estudia a una muest a de clulas o tejidos( *os colo antes utili"ados son el ;e de Hano# -"ul t ip4n# Aojo congo# Aojo neut o# -"ul pi ol# etc( *a colo acin &ital se clasi$ica en: a0 Colo acin int a&ital: Se %asa en la int oduccin de colo antes no t1icos en el o ganismo &i&o po &as digesti&a# su%cut4nea# al to ente sanguneo o lin$4tico( *uego se mata al animal 5 se sigue los pasos de la Tcnica Histolgica co iente( En la o%se &acin mic oscpica se &e 4n dete minadas est uctu as !ue contienen el colo ante( %0 Colo acin sup a&ital: Se eali"a so% e clulas li% es# e1t adas del o ganismo# como el caso de clulas sanguneas# clulas de aspado de la mucosa %ucal o &aginal# co tes $inos de tejido ca tilaginoso !ue conse &a su &italidad( Ha5 !ue p ocede a la o%se &acin 4pida antes de !ue comiencen los p ocesos de post > mo tem(

Colo aciones especiales: ETcnica de ?apanicolaou: Se la utili"a pa a citologa e1$oliati&a( El mtodo pe mite estudia cantidad# $o ma 5 colo de las clulas de la mucosa &aginal# o%tenidas con $ines diagnsticos( *os colo antes utili"ados son: Hemato1ilina > o ange +# &e de % illante# eosina pa do de Disma cP( *as clulas !ue se o%se &an desde la supe $icie 'asta la p o$undidad son: -cid$ilas 5 %as$ilas supe $iciales 2ca iopicnticas0# Inte medias# 5 ? o$undas 2%as$ilas0( ETcnica T ic mica de Masson: Se la utili"a pa a di$e encia tejido conjunti&o del tejido muscula ( El p ime o se tiFe de a"ul o &e de 5 el muscula de distintos tonos de ojo( *os colo antes utili"ados son: ?un" de 1ilidina 5 a"ul de anilina( ETcnica panptica de ?appen'eim 2colo antes de Ma5 + QmRald +iemsa0: Se la utili"a pa a e1tendidos de sang e( *a tcnica consiste en: E )%tene una gota de sang e pe i$ ica( E Hace el e1tendido( E Seca a tempe atu a am%iente(

E Cu% i con /C gotas de Ma5 + QmRald# /C minutos( E -g ega igual cantidad de agua destilada en gotas# deja / minuto 5 &olca sin la&a ( E Cu% i con solucin de +iemsa 26G cc de agua destilada 5 6C gotas del colo ante0# deja /G > /C minutos( E Enjuaga con agua destilada# seca 5 monta ( ETcnica de Imp egnacin - gntica: Colo acin especial !ue utili"a sales met4licas como clo u o de o o# nit ato de plata# sales de c omo# o iginando p ecipitados met4licos( *a tcnica consiste en t ata el mate ial 2ejemplo $i% as eticula es0 con una solucin de una sal educi%le de plata 5 a continuacin con un agente educto # !ue act3a como lo 'acen los e&elado es de $otog a$as# con&i tiendo la sal de plata en plata met4lica# !ue to na de neg o a los componentes !ue la toman( .na sustancia es J- genta$nK cuando educe la plata# 5 es J- gi $ilaK cuando la imp egnacin es posi%le luego de una educcin con mo dientes o $o malina(

Tcnicas Histo!umicas: a0 Tcnicas de colo acin pa a p otenas: Se %asan en el econocimiento 5 locali"acin de dete minados amino4cidos o %ien se utili"an anticue pos espec$icos ma cados pa a dete minadas p otenas( %0 Tcnicas de colo acin pa a nucleop otenas 5 4cidos nucleicos: ?a a identi$ica al -DN 5 -AN se cuenta con dos mtodos: E Mtodos comunes a am%os 4cidos nucleicos: - t a&s del uso de colo antes nuclea es o %4sicos como la Hemato1ilina# -"ul de metileno o de ToluidinaI a t a&s la a%so cin de a5os ult a&ioletas de dete minadas longitudes de ondaI o %ien# con el empleo de istopos adioacti&os# como timidina t itiada !ue pone en e&idencia la Timina del -DN# o u idina t itiada pa a demost a . acilo en el -AN( E Mtodos de identi$icacin di$e encial: AE-CCIN DE FE.*+EN ) DE FE.*+EN > A)SEMDECT: Es espec$ica pa a -DN# pues depende del a"3ca Deso1i i%osa( T as una 'id lisis lige a po la accin % e&e so% e los co tes de 4cido clo 'd ico diluido# se log a la e1t accin del -AN 5 la desinteg acin de la unin deso1i i%osa > pu ina# con li%e acin de g upos alde'dos# so% e los cuales act3a el eacti&o de Sc'i$$ 2$ucsina %4sica decolo ada con an'd ido sul$u oso0# con el !ue se t atan los co tes( Se o%tiene un colo p3 pu a o &ioleta oscu o en las est uctu as !ue contienen -DN# colo tanto m4s ma cado# cuanto ma5o es su concent acin( Se demuest a as la u%icacin del -DN en la c omatina de n3cleos inte $4sicos# en c omosomas du ante la mitosis# 5 mu5 pe!ueFa cantidad en mitocond ias 5 en los clo oplastos de las clulas &egetales(

c0 Tcnicas de colo acin pa a Hid atos de Ca %ono 2Ca %o'id atos o +l3cidos0: Se utili"an los siguientes mtodos:

E Aeaccin de ?-S 2?e 5odic acid Sc'i$$0: Se %asa en la li%e acin de g upos alde'dos po la accin o1idante del 4cido pe idico 5 su e&idencia ulte io po medio del eacti&o de Sc'i$$( TiFe de ojo o ojo p3 pu a a las est uctu as !ue 'an li%e ado los alde'dos( Se 4 positi&a pa a las siguientes est uctu as: Mem% ana %asal# clulas calici$o mes# clulas !ue contengan glucgeno como po ejemplo los Hepatocitos 5 las clulas muscula es( E1isten ot as sustancias !ue no son 'id atos de ca %ono pe o !ue son ?as positi&as como los lpidos no satu ados# $i% as col4gena 5 eticula ( E Mtodo de -lcian Dlue: TiFe selecti&amente los polisac4 idos 4cidos en solucin de pH de =#= o menos( Tiene tam%in especial a$inidad po los g upos sul$atados# colo eando de a"ul a los mucopolisac4 idos 4cidos# 5 no tiFe a los neut os(

d0 Tcnicas de colo acin pa a lpidos: .tili"ando colo antes tipo Sud4n III# insolu%les en agua 5 mu5 solu%les en g asa( No es un &e dade o mtodo de colo acin# sino un p oceso de t ans$e encia de colo po disolucin de la sustancia empleada en el lpido( )t os colo antes son Sud4n I;# Aojo esca lata# Sud4n neg o D# ent e ot os( Tene en cuenta !ue cuando se !uie e p ocede al econocimiento de lpidos# es necesa io elegi un $ijado !ue no los disuel&a# aconsej4ndose $o mol al /G M o l!uido de Douin en co tes con mic tomo de congelacin(

/0 M)NT-HE FIN-*: Tiene po o%jeto mejo a la o%se &acin# $acilita el manejo 5 aumenta la du acin de los p epa ados 'istolgicos( *a colo acin deja totalmente em%e%ido en agua al p epa ado 5 de%e se eliminada( Esta pa te de la Tcnica Histolgica consta de B pasos: a0 Des'id atacin: - t a&s de alco'oles en $o ma c eciente :G8# OG8# <78# /GG8( %0 Homogeni"acin 2acla acin o dia$ani"acin0: Con %en"ol o 1ilol# adicionando 4cido ca %nico o $nico# mu5 4&idos de agua( c0 Colocacin del cu% eo%jeto: ?a a p otege la p epa acin# se ecu% e con una laminilla de &id io mu5 $ina 5 de di&e sos tamaFos( ?a a ad'e i el cu% eo%jeto al po ta# !uedando ent e am%os el co te# se utili"a D4lsamo de Canad4# sustancia solu%le en %en"ol o 1ilol# de modo !ue di$unde %ien en el co te acla ado( -dem4s su ndice de e$ accin es semejante al del &id io# lo cual e&ita la des&iacin de los a5os luminosos( d0 Fijacin de la colo acin: Solo en el caso de usa colo antes l4%iles# poco esta%les# como po ejemplo los colo antes %4sicos de anilina(

T@CNIC- HIST)*+IC- ?-A- MICA)SC)?I- E*ECTANIC/0 .tili"a $ agmentos de menos de / mm(

=0 Fija con tet 1ido de osmio# o alde'do glut4 ico# con el ag egado o no de 4cido t4nico( 60 Des'id ata la muest a( B0 Inclusin en esina epo1i# !ue dan la du e"a necesa ia pa a o%tene co tes de =GG -8 a G#/ um( C0 Co ta con ult amic tomo de a&ance mu5 lento 5 cuc'illas de &id io o diamante( 70 Aecepcin de los co tes en agua 5 luego en una ejilla de co% e ecu%ie ta po una delgada ejilla pl4stica 2Fo m&a 0# !ue se 4 la !ue sostenga el co te( :0 ?asa po 4cido smico# acetato de u acilo# sales de plomo# etc(# !ue se deposita 4n so% e dete minados componentes celula es( O0 )%se &acin en pantalla $luo escente( <0 Toma de $otog a$as 5 ampliaciones a &oluntad( *a Tcnica es la misma pa a la mic oscopia de %a ido(

M@T)D)S INM.N)HIST)L.,MIC)S U .sa anticue pos pa a molculas espec$icas pa a detecta su p esencia en los tejidos U *os anticue pos se o%tienen inoculando p otenas a animales 5 e1t a5ndolos luego del sue o U *a eaccin -ntgeno 9 -nticue po se e&idencia mediante una colo acin ma n do ado(

Di%liog a$a Histologa Mtodos e inst umentos de estudio de la Histologa ?a te I Tcnica Histolgica# +ua de -cti&idad N8/ =GGC# ? o$( Titula : D a( )( N( de +o odne # ? o$( -djunta: D a( A( A( de +odo5# Facultad de Medicina de la .ni&e sidad Nacional del No este(