Está en la página 1de 8

1.

Secuencia palindrmica

Estructura de un ADN palndromo A: palndromos, B: Loop, C: Stem. Una secuencia palindrmica es una secuencia de nucletidos de uncido nucleico ( ADN o ARN ) que es igual a leerlo en la direccin 5 ' 3' o una cadena (tambin) en la direccin 5 ' 3' en la hebra complementaria, que puede formar la una doble hlice. El significado de palndromo en el contexto de la gentica es algo diferente de la definicin que se da en las secuencias de palabras y frases.Una palabra o frase capica es simplemente leer empezando por el final es el mismo (por ejemplo, "radar" o "la torre de la derrota"), pero en los cidos nucleicos debe revertir secuencia complementaria primero, es decir, para revertir su complemento . Como la doble hlice consiste en dos cadenas de nucletidos apareados para funcionar en la direccin opuesta (5 ' 3' y de otro modo), y los nucletidos siempre aparearse de la misma manera ( adenina (A) con timina (T) en el ADN, o A con uracilo (U) en el ARN, citosina (C) con guanina (G)), se dice que una secuencia de una sola cadena de nucletidos a ser un palndromo si es igual a su complemento inverso . Por ejemplo, la secuencia de ADN ACCTAGGT es palindrmica porque su base complementaria de nucletidos hasta el nucletido haraTGGATCCA , y invertimos ltima secuencia, es decir, Lemola comenzando al final, sera ACCTAGGT , que es idntica a la secuencia original. En las secuencias de ARN bases palindrmicas permiten que se produzca la unin complementarios antiparalelas regiones de la molcula, que forman una estructura secundaria en el ARN de doble hlice, que puede ser importante en la determinacin de la [1] forma en que un ARNm se procesa por la clula. secuencias palndromo de ARN estn separados por un nmero de nucletidos que no pertenecen a la palndromo. Una secuencia palindrmica de nucletidos puede formar una estructura de tallo-bucle (o tenedor tallo-bucle ). Las razones palindrmicos de ADN se encuentran en la mayora de los genomas . Las razones son palindrmicos causados por el orden de sus nucletidos. Fueron estudiados especialmente en los cromosomas bacterianoselementos en los llamados Mosaico dispersa bacteriana (o BIME bacteriana interpersed Mosaico Elementos ) que ellos se dispersan. Recientemente, un proyecto de secuenciacin del genoma de investigacin encontr que muchas de las bases del cromosoma Y se disponen formando palndromos, [2][3] lo que podra permitir una "recombinacin" del cromosoma Y con ella misma (la conversin de genes). Palndromos en protenas
[4][5]

Palindrmico tambin aparecen con frecuencia en las secuencias de aminocidos de las protenas, pero su funcin no se les [6] conoce bien. Dos ejemplos son palndromos con la sistemina pptido y p53 supresor de tumor humano. Recientemente, sugerido que la existencia frecuente de palndromos en pptidos podra estar relacionado con las regiones de baja complejidad frecuentes observados en las protenas , ya que existe una asociacin entre los dos. Su frecuencia podra ser tambin relacionado con la [6] [7] tendencia a formar hlices alfa de esas secuencias, o la frecuencia de la formacin de complejo de protena / protena. 1. 2. Saltar CE Creutz. Longitudes y nmero mximo de palndromos en los ARN mensajeros. Biopolmeros. Volumen 17, Nmero 7, pginas 1815 a 1819, julio de 1978. DOI:. 10.1002/bip.1978.360170715 [1] Saltar Rozen S, Skaletsky H, Marszalek JD, Minx PJ, Cordum SA, Waterston RH, Wilson RK, DC Page. Abundante conversin gnica entre los brazos de palndromos en humanos y simios Cromosoma. Naturaleza. 2003 Jun 19, 423 (6942) :873-6. PMID 12815433 . [2] Saltar palndromos del cromosoma Y [3]

3.

4. 5. 6.

7.

Saltar Ohno S (1990). "Evolucin intrnseca de las protenas. Papel del pptido palndromos." Riv. . Biol. 83 (2-3):. 287-91, 405-10 PMID 2128128 . Saltar Giel-Pietraszuk M, Hoffmann M, S Dolecka, Rychlewski J, J Barciszewski (febrero de 2003). "palndromos en protenas" . J. . Chem Protein 22 (2):. 109-13 DOI : 10.1023 / A: 1.023.454.111.924 . PMID 12760415 . Ir a:6.0 6.1 Sheari A, M Kargaran, Katanforoush A, . et al (2008). "Historia de dos colas simtricas: caractersticas estructurales y funcionales de las protenas en Palindromes" . BMC Bioinformatics 9 : 274. DOI : 10.1186/1471-2105-9274 . PMC 2474621 . PMID 18547401 . Saltar Pinotsis N, M Wilmanns (octubre de 2008). "asambleas de protenas con estructura palindrmica motivo." celulares. Mol. . Life Sci. 65 (19):. 2953-6 DOI : 10.1007/s00018-008-8265-1 . PMID 18791850 .

2.

Tinciones y reconocimientos histoqumicos

El proceso de tincin de corte o tejidos completos es ms un arte que una ciencia. La tincin es un resultado de la sinergia entre la adicin de tincin, frecuente mente una sal metlica aadida (mordiente), la cantidad de tiempo de tincin, la tincin "diferencial" por componentes adicionales, la cantidad de decolorante (si es necesario), la temperatura durante la tincin (para colorantes "reactivos"), y por supuesto el propio tejido. Algunos colorantes trabajan mejor cuando dan una sobretincin y a continuacin son lavados para revelar la estructura celular (tincin regresiva). Otros colorantes tien los tejidos tan lentamente que se puede observar la progresin en la tincin y pararlo en el momento ms apropiado ( tincin progresiva). Los colorantes regresivos son perdonados en esta sobretincin, y la prdida de detalles celulares, es casi imposible. Las tinciones progresivas, por otra parte, son bastante imperdonables. Una vez se han sobreteido, los detalles del tejido generalmente se pierden de forma permanente. Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada en microscopa para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que usualmente se utilizan en biologa y medicina para resaltar estructuras en tejidos biolgicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios. Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definicin y examinar grandes cortes de tejido (resaltando por ejemplo fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones celulares (por ejemplo clasificando diferentes clulas sanguneas) o incluso para resaltarorganelas dentro de clulas individuales.

En bioqumica, esto implica agregar un colorante especfico (esto significa que se una de manera selectiva ya sea a ADN, protenas, lpidos, carbohidratos, etc.) a un sustrato para cualificar o cuantificar la presencia de un determinado compuesto. Tanto la tincin como el marcado fluorescente pueden servir para los mismos propsitos. Tincin in vivo e in vitro

Una tincin in vivo (tincin supravital) es el proceso de teir tejidos vivos. Al provocar que determinadas clulas o estructuras adquieran los colores de contraste, se puede estudiar su ubicacin y morfologa mientras estn desempeando su funcin. El propsito ms comn es revelar detalles de la citoestructura que de otra manera no resultaran evidentes, sin embargo, la tincin supravital puede revelar adems donde aparece un determinado producto qumico o donde se lleva a cabo una determinada reaccin qumica dentro de las clulas o tejidos. A menudo estas tinciones son llamadas tinciones vitales o supravitales. Se introducen en el organismo mientras las clulas an se encuentran vivas. Para conseguir el efecto deseado, el colorante usualmente se utiliza en soluciones muy diluidas que van entre 1:5.000 a 1:50.000. A pesar de esto las tinciones son eventualmente txicas para los organismos, algunas ms que otras. Una tincin in vitro involucra el coloreo de clulas o estructuras que han sido removidas de su contexto biolgico. Se utiliza a menudo una combinacin de varios colorantes para revelar ms detalles y caractersticas de las que se obtendran con la utilizacin de uno solo. Combinados con protocolos especficos de fijacin y de preparacin de muestras, los cientficos y profesionales de la salud pueden utilizar estas tcnicas estandarizadas como una herramienta diagnstica repetible y consistente. Una contratincin es una tincin que consigue que las clulas o estructuras sean ms visibles, cuando no se consigue que sean totalmente visibles con la tincin principal. Por ejemplo, el cristal violeta tie nicamente a las bacterias Gram positivas en la tincin de Gram. Se utiliza una contratincin desafranina (que colorea todas las clulas), para permitir tambin la identificacin de bacterias Gram negativas. Es de notar que muchas tinciones pueden ser utilizadas tanto en clulas vivas como en clulas fijadas. Mtodos de tincin in vitro Preparacin Las etapas preparatorias involucradas en una tincin van a depender del tipo de anlisis planeado; bajo estas premisas se puede considerar que algunos o todos de los siguientes pasos podran requerirse.

Fijacin: de por si, esta etapa puede consistir en varios pasos. La fijacin es una modificacin de las propiedades fisicoqumicas de las protenas que forman una clula o tejido y que tiene por finalidad preservar las formas de las clulas o tejidos tanto como sea posible. A veces se puede utilizar una fijacin por calor para matar, adherir y alterar un espcimen de modo que acepte la tincin. La mayor parte de las veces se utiliza un fijador qumico. Los fijadores qumicos en general causan la formacin de enlaces cruzados entre protenas, o entre protenas y otras sustancias presentes en la muestra, incrementando su resistencia mecnica. Entre los fijadores qumicos ms comunes se encuentran el formaldehdo, etanol, metanol, y/o el cido pcrico. Pequeos bloques de tejido pueden ser embebidos en parafina o algn polmero, proceso conocido como inclusin, para incrementar su resistencia y estabilidad, y para hacer ms fcil cortarlos en rodajas extremadamente delgadas, ya que cuanto ms delgado es un corte histolgico, ms definicin se obtiene en las imgenes microscpicas. Permeabilizacin este paso implica el tratamiento de las clulas con un surfactante suave. Este tipo de tratamiento tiene como finalidad disolver la membrana celular para permitir que las grandes molculas de colorante puedan acceder a las estructuras del interior de las clulas. Montaje frecuentemente implica adherir los cortes histolgicos a un portaobjetos de vidrio para su observacin al microscopio o anlisis. En algunos casos, se puede cultivar a las clulas directamente sobre le portaobjetos. En muestras de clulas sueltas, como las que se presentan en un extendido de sangre o de fluidos biolgicos, la muestra puede ser aplicada directamente sobre el portaobjetos. Para piezas de tejido de mayor tamao, se utiliza un micrtomo que corta la muestra en rodajas sumamente delgadas. Estas rodajas son luego adheridas al portaobjetos por medio de una substancia que funciona como pegamento, ya sea una resina transparente, gelatina o clara de huevo. El montaje tiene por finalidad aumentar la resistencia mecnica de una muestra que de otra manera sera extremadamente frgil, para que soporte el proceso de teido conservando lo ms posible su estructura original. Tincin adecuada

En su forma ms simple, el verdadero proceso de tincin puede implicar la inmersin de la muestra (antes o despus de la fijacin y el montaje) en la solucin colorante, seguido del aclarado que es un lavado para eliminar el exceso de colorante y la observacin. Muchos tintes, sin embargo, requieren del uso de un mordiente, esto es, un compuesto qumico que reacciona con el colorante para formar un precipitado coloreado insoluble. Cuando la solucin de colorante en exceso se elimina durante el aclarado, la tincin mordentada permanece. La mayora de los colorantes utilizados en microscopa se encuentran disponibles como colorantes certificados. Esto significa que los colorantes ofrecidos por el fabricante han sido evaluados por un organismo independiente, la Biological Stain Commission, y que este organismo ha determinado que el producto ofrecido cumple o excede ciertos estndares de pureza, concentracin de sustancia colorante y desempeo en las tcnicas de tincin empleadas. Estos estndares son publicados detalladamente en la 1 revistaBiotechnic & Histochemistry. Muchos colorantes presentan una composicin diferente entre diferentes fabricantes. La 2 utilizacin de colorantes certificados elimina una fuente de resultados inesperados. Tincin directa

Hablamos de tincin directa cuando el colorante interacciona directamente con el sustrato, sin otro tratamiento previo. Tincin indirecta
3

Se denomina de este modo a las tinciones que hacen uso de un mordiente. Un mordiente habitual es el cido tnico.

Afinidad de diferentes tejidos por diferentes colorantes Cuando un tejido u estructura subcelular presenta una afinidad por un determinado colorante se suele designar por los sufijos -filoo -flico. Por ejemplo, los tejidos que se tien con azure suelen ser nombrados como azurfilos o azuroflicos. Tambin puede ser utilizado para designar propiedades tintoriales ms generalizadas, por ejemplo los tejidos que se tien con colorantes de naturaleza cida (por ejemplo la eosina) suelen ser denominados como acidoflicos, basoflicos cuando se tien con colorantes de naturaleza bsica (tales como por ejemplo el azul de metileno o la 4 hematoxilina), y anfiflicos cuando aceptan ambos colorantes. Por el contrario, los tejidos cromfobos no toman colorante con facilidad. Tincin negativa

Un mtodo sencillo de tincin para bacterias, que adems es un claro caso de cromofobia y que por lo tanto funciona an cuando los mtodos de tincin positiva fallan, es la tincin negativa. Esto puede ser conseguido simplemente extendiendo la muestra en un portaobjetos y aplicando directamente sobre ella una gota de nigrosina o tinta china y cubriendo luego la muestra humedecida con un cubreobjetos. Luego de esto, los microorganismos pueden ser observados fcilmente por medio de microscopa en campo claro 5 como inclusiones claras muy bien contrastadas contra el medio oscuro que las rodea. Adicionalmente, la tincin negativa es una tcnica suave que no destruye a los microorganismos, permitiendo por lo tanto un recultivo posterior para el estudio de patgenos.

Clasificacin qumica de los colorantes.

Los colorantes y las microtcnicas en tincin pueden ser agrupadas en clases de acuerdo a su especificidad y estructura qumica. Las clases que se enumeran aqu pertenecen especficamente a microtcnicas e histoqumica. Ciertos colorantes muestran un cambio en los picos de absorcin (color) despus de de unirse a polianiones (bien en solucin, o en la clula). Este cambio de color en fluorescencia se denomina metacromasia y el colorante se llama colorante metacromtico.Erhlich us el trmino "matriz ortocromtica" para referirse al color de la solucin de colorante y "matriz metacromtica" al color del complejo colorante-tejido. No confundir con colorante "policromtico", el cual es un colorante compuesto o una mezcla de colorantes que consisten en ms de un colorante, y por tanto ms de un color. Ejemplos son el TBO, violeta de metilo, y algunos colorantes de Acridina. Por ejemplo tejidos teidos con Azul de Toluidina O puenden variar de azul oscuro/ prpura hata azul muy claro a rosa, dependiendo de los cmponentes celulares a los que se une el TBO. Otros colorantes metacromticos son Tionina, Azul A, B, C, Violeta de Cresilo, Violeta de Metilo y Azul Celestina. Hay cientos de mtodos de tincin, sin embargo, todos los mtodos siguen ciertos procedimientos generalizados dependiendo si los cortes a teir fueron encastrados en parafina o plstico. Los tejidos encastrados en parafina deben ser desparafinadso usando HistoClear o xileno, mientras que los cortes encastrados en plstico mantienen la matriz durante los pasos de tincin. De los muchos pasos de tincin diseados por los investigadores, slo unos pocos son usados generalmente en microtcnicas vegetales. Entre las innumerables tinciones qumicas disponibles para investigacin hitolgica, las microtcnicas vegetales han tendido a limitar su uso a slo unas pocas- Safranina, Verde Rapido, y Hematoxilina siendo las ms destacables. Colorantes qumicos

Las molculas de colorante deben reaccionar con componentes celulares bien por uniones no covalentes (innicos, puentes de hidrgeno, hidrofbicas) o covalentes. El pH de la solucin del colorante puede determinar la extensin de la tincin mientras que la reactividad de una molcula colorante con el tejido es dependiente a mendudo del cambio. Las tinciones no covalentes, particularmente asociaciones inicas, cueden ser inestables y el colorante puede perderse del tejido, resultado en una tincin dbil. Adems, las diferencias en el pH y la concentracin en sales dentro del tejido pueden dar como resultado en tinciones diferenciales. Por tanto, la interaccin inica de la molcula colorante al componente del tejido puede ser inherentemente inespecfica, y depende del estado inico de la molcula diana (componente celular) y el ambiente en el cual la diana resida. Los colorantes catinicos ("colorantes bsicos") son atrados a los componentes celulares que son cidos de forma natural (cargados negativamente, basoflicos). Ejemplos son la Safranina O, Cristal Violeta, acetocarmn, y Azul de Toluidina O. Colorantes aninicos ("colorantes cidos") son atrados por componentes celulares que son bsicos (cargados positivamente; acidfilos). Un ejemplo es el Verde Rpido FCF, que preferentemente tie componentes tales como la celulosa y el citoplasma. Otros colorantes cidos son el Naranja G y el Azul de Anilina. Como contraste, los enlaces covalentes de las molculas de colorante resultan en un complejo excesivamente estable que puede ser bastante especfico. Ivanov se refiere a colorantes que reaccionan covalentemente como colorantes reactivos ya que contienen un grupo que reacciona con grupos funcionales en los componentes celulares. Los colorantes reactivos son usados extensivamente en la industria textil pero no frecuentemente en biologa. Los colorantes reactivos ms prometedores son los colorantes diclorotriazina en el grupo Promocin M de colorantes comerciales. Mordientes

El trmino mordiente se refiere a cualquier compuesto, aadido antes o despus de la tincin, que realza las propiedades de tincin de un colorante. Los mordientes son generalmente metales como el manganeso, crmico, alumnico. Sin embargo, un mordiente tambin debe ser un compuesto tal como el cdio actico o el pcrico que es aadido para lavar la solucin para realzar el brillo de una tincin como la eosina o el eritrosin (cido actico) o colorantes violeta (cido pcrico). Los tomos metlicos (ligandos) pueden formar un complejo multitomo con molculas de agua in situ. Durante la tincin, algunas de estas molculas de agua pueden ser intercambiadas por los grupos ligando de la molcula colorante formando un quelato entre el colorante y el metal, al que se refieren algunas veces como "lago". Tradicionalmente, los metales quelantes se han denominado mordientes, y han sidu usados para facilitar la tincin principalmente de cidos nucleicos. Los do complejos colorante/mordiente ms comunos son las tinciones nucleares Hematoxilina y Gallocianina, y 3+ 3+/2+ 3+ el metal quelante usado puede ser Al , Fe o Cr . El agente quelante puede determinar la selectividad del colorante. La Hematoxilina-cromica es especficapara cidos nucleicos, pero tie ms bien poco. La Hematoxilina Frrica tie rpidamente, pero puede producir una tincin de fondo mayor.

Interacciones covalentes- colorantes reactivos Una molcula de colorante reactivo est formada generalmente por dos componentes: el revelador de color (cromforo) y el componente reactivo (auxocromo) generalmente reaccionando con un grupo hidroxil, amino o tiol del sustrato. Si el componente del cromforo de la molcula es fluorescente se conoce entonces como fluorforo. 3 .Colorantes histolgicos ms comunes Los diferentes colorantes reaccionan o se concentran en diferentes partes de las clulas o tejidos, y estas propiedades son utilizadas como una ventaja para revelar partes o reas especficas. Algunos de los colorantes biolgicos ms comunes se listan ms abajo. A menos que se indique lo contrario la mayora de estos colorantes se utilizan con clulas y tejidos fijados. Las tinciones vitales (que pueden ser utilizadas con organismos vivos) se encuentran destacadas. Azul brillante de Coomassie[editar] Coomassie blue (tambin conocido como azul brillante) es un colorante que tie en forma no especfica a todas las protenas con un fuerte color azul. Se utiliza frecuentemente para teir las corridas de protenas en las electroforesis en gel. Azul de metileno[editar] Azul de metileno se utiliza para teir clulas animales, para hacer ms visibles sus ncleos. Es tambin utilizado para teir los extendidos de sangre para ser utilizados en citologa y como colorante vital en el recuento de reticulocitos. Azul Nilo[editar] El Nile blue (o Nile blue A), es decir azul Nilo, tie a los ncleos de color azul. Tambin puede ser utilizado para teir clulas vivas. Bismarck brown[editar] Bismarck brown, Marrn Bismarck, (tambin conocido como Bismarck brown Y o Manchester brown) le imparte un color amarillo a las mucinas cidas. Se puede utilizar con clulas vivas. Bromuro de etidio[editar] El bromuro de etidio (BE) se intercala en el ADN y le otorga un color rojo naranja fluorescente. A pesar de que no es capaz de teir clulas vivas ya que no atraviesa las membranas intactas, puede ser utilizado para identificar clulas que se encuentran en las etapas finales de la apoptosis, ya que tales clulas poseen unas membranas mucho ms permeables. Por el mismo motivo, el bromuro de etidio es utilizado como un marcador de apoptosis en poblaciones celulares y para localizar las bandas de ADN en una corrida enelectroforesis en gel. Este colorante puede ser utilizado en combinacin con naranja de acridina (NA) en el conteo de clulas viables. Esta tincin combinada BE/NA le otorga a las clulas vivas un color verde fluorescente mientras que las clulas apoptticas aparecen con la distintiva fluorescencia rojo-naranja. Carmn[editar] El carmn es un colorante de un intenso color rojo que puede ser utilizado como sal de litio para teir glicgeno, mientras que las sales de alumbre-carmn son colorantes que se adhieren al ncleo. Las tinciones con carmn requieren del uso de un mordiente, que usualmente es aluminio o alumbre. Cristal violeta[editar] El cristal violeta, al ser combinado con un mordiente adecuado, tie las paredes celulares de color prpura. El cristal violeta es un componente importante en la coloracin de Gram. DAPI[editar] El DAPI es un colorante nuclear (tie el ncleo) fosforescente, se excita con luz ultravioleta para producir una fuerte fluorescencia azul cuando se encuentra unido al ADN. El DAPI se une a las regiones de alta repeticin A=T en los cromosomas. Adems no es visible cuando se utiliza con un microscopio de transmisin corriente. Puede ser utilizado en clulas vivas o fijadas. La tcnica de 6 tincin con DAPI es especialmente adecuada para el recuento celular. Eosina[editar] La eosina se utiliza ms frecuentemente como contracoloracin de la hematoxilina, impartiendo un color que va del rosado al rojo al material citoplasmtico, membrana celular, y algunas estructuras extracelulares. Adems imparte un fuerte color rojo a loseritrocitos. La eosina puede ser utilizada tambin en algunas variantes de la coloracin de Gram, y en muchos otros protocolos de tincin. De hecho existen dos compuestos muy estrechamente relacionados (aunque no iguales) conocidos como eosina. El ms frecuentemente utilizado es la eosina Y (tambin conocida como eosina amarillenta) ya que posee una tonalidad amarillenta muy

suave. El otro compuesto conocido como eosina es la eosina B, tambin conocida como eosina azulada o rojo imperial, la cual posee una suave tonalidad azul. Los dos colorantes son intercambiables, y el la utilizacin de uno u otro es ms una cuestin de preferencia y tradicin. Fucsina cida[editar] La fucsina cida puede ser utilizada para colorear colgeno, msculo liso o mitocondrias. Forma parte de la coloracin tricrmica de Mallory donde se utiliza para colorear ncleo y citoplasma. En la tincin de Van Gieson (picrofucsina), la fucsina es la responsable de dar el color rojo a las fibras de colgeno. Tambin es una coloracin tradicional para colorear mitocondrias (mtodo de Altmann). Hematoxilina[editar] La Hematoxilina es un colorante nuclear. Utilizado con un mordiente, la hematoxilina tie a los nucleos celulares de color azul violeta a negro. Mayormente se utiliza en combinacin con eosina en la coloracin H&E (Hematoxilina y Eosina), una de las mas comunes utilizadas en histologa. Hoechst[editar] Hoechst es un compuesto derivado bis-benzimidazol que se une al surco menor del ADN. Se utiliza con frecuencia en microscopa de fluorescencia para colorear el ADN. Hoechst tiene color amarillo cuando se encuentra disuelto en agua, y emite luz azul cuando recibe luz ultravioleta. Hay dos tipos principales de colorantes Hoechst. Hoechst 33258 y Hoechst 33342. Ambos compuestos son funcionalmente similares, aunque poseen pequeas diferencias en su estructura. El Hoechst 33258 contiene un hidroxilo terminal, y por lo tanto es mas soluble en solventes acuosos, aunque esta caracterstica disminuye su habilidad para penetrar la membrana plasmtica. El Hoechst 33342 contiene un grupo etilo sustituyendo al grupo hidroxilo terminal (un grupo etileter), lo que lo hace mas hidrofbico, y con mejor penetracin en la membrana plasmtica. Lugol[editar] El yodo se utiliza en qumica analtica como indicador para el almidn. Cuando se mezcla almidn con una solucin de yodo, se desarrolla un color intensamente azul, representando la formacin del complejo de inclusin yodo/almidn. El almidn es una sustancia muy comn en la mayor parte de las clulas vegetales, de modo que una solucin diluida de yodo puede colorear el almidn presente en las clulas. El yodo tamben es componente de la coloracin de Gram utilizada en microbiologa. La solucin de Lugol o Lugol yoduro (IKI) es una solucin de color marrn que se torna negra en presencia de almidones y puede ser utilizada para colorear clulas, haciendo mas visible el ncleo. En la coloracin de gram el yoduro se utiliza como mordiente, aumentando la capacidad del colorante para entrar en las clulas a travs de los poros presentes en la membrana o pared celular. Naranja de acridina[editar] El naranja de acridina es un colorante fluorescente, catinico y selectivo para cidos nucleicos til para demostraciones sobre el ciclo celular. Es capaz de atravezar la membrana celular e interacta con el ADN y el ARN por intercalacin o interacciones electrostticas. Cuando se une al ADN presenta un espectro muy similar al de la fluorescena. Al igual que la fluorescena, se puede utilizar tambin como una tincin inespecfica para dar un trasfondo fluorescente (contraste) a tinciones convencionales en la superficie de muestras 7 slidas de tejidos (coloracin de contraste fluorescente) ) Plata[editar] Una tincin argntica es el uso de plata para colorear preparados histolgicos. Este tipo de coloracin es especialmente importante para demostrar protenas (por ejemplo el colgeno tipo III) y ADN. Se utiliza para facilitar la visualizacin de ambas sustancias tanto dentro como fuera de las clulas. Tambin se utiliza la tincin argntica en la electroforesis en gel en gradiente de temperatura. Algunas clulas argentafines, reducen las soluciones de plata a plata metlica, luego de la fijacin con formalina. Este mtodo fue descubierto por el fisilogo italiano Camillo Golgi, utilizando una reaccin entre el nitrato de plata y el dicromato de potasio, para precipitar cromato de plata en algunas clulas (mtodo de Golgi). Otras clulas son argiroflicas. Estas clulas reducen la plata a su forma metlica luego de ser expuestas a una tincin que contiene un agente reductor, tal como la hidroxiquinona o formalina. Rodamina[editar] La rodamina es una tincin fluorescente especfica para protenas utilizada comunmente en microscopa fluorescente. Rojo neutro[editar] El rojo neutro (toluylene red) colorea de rojo a la substancia de Nissl. Con frecuencia se utiliza como contracoloracin en otras tcnicas de tincin. Rojo Nilo[editar] El Rojo Nilo (tambin conocido como oxazona del azul nilo) se produce hirviendo el Azul Nilo con cido sulfrico. Este tratamiento produce una mezcla de Rojo y Azul Nilo. El Rojo Nilo es una coloracin lipoflica, y se acumula en los glbulos lipdicos en el interior

de las clulas, colorendolos de rojo. El Rojo Nilo puede ser utilizado con clulas vivas. Fluoresce fuertemente cuando se encuentra particionado en lpidos, pero practicamente no presenta fluorescencia en soluciones acuosas. Safranina[editar] La safranina (o safranina O) es un colorante nuclear. Colorea los ncleos celulares de rojo, y se utiliza principalmente como contracoloracin. Tambin puede ser utilizada para darle una coloracin amarilla al colgeno. Sudan[editar] La coloracin de Sudan se utiliza para destacar sustancias "sudanoflicas", por lo comn, lpidos. Tambin se utiliza para determinar los niveles de grasa en materia fecal para diagnosticar esteatorrea. Hay varios colorantes de la familia sudan, por ejemplo: Sudan III, Sudan IV, Oil Red O, y Sudan Black B. Tetrxido de osmio[editar] El tetrxido de osmio se utiliza en microscopa ptica para colorear lpidos. Se disuelve con facilidad en las grasas y se reduce aosmio metlico al interactuar con material orgnico, dejando un color marrn o negro caracterstico. Verde de metilo[editar] El verde de metilo se utiliza frecuentemente en microscopia de campo claro, para teir la cromatina de las clulas y facilitar as su visualizacin. Verde malaquita[editar] El verde malaquita (conocido tamben como diamond green B o victoria green B) puede ser utilizado como contracoloracin azulverdosa en combinacin con la safranina un ejemplo es la coloracin de Gimenez para bacterias. Tambin se puede utilizar directamente para colorear endosporas. En microscopa electrnica[editar] Al igual que en la microscopa ptica, se puede hacer uso de sustancias que aumentan el contraste en la microscopa de transmisin electrnica. Por lo general se utilizan sustancias electrondensas, o metales pesados. cido fosfotngstico[editar] El cido fosfotngstico es un colorante negativo comn utilizado para resaltar virus, nervios, polisacridos, y otros tejidos y materiales biolgicos. Tetrxido de osmio[editar] El tetrxido de osmio se utiliza en microscopa ptica para teir lpidos. Se disuelve en grasas y se reduce por la presencia de materiales orgnicos a osmio metlico, dejando un residuo negro fcilmente visible. Debido a que es un metal pesado, que absorbe los electrones, es quizs la coloracin mas comn para resaltar morfologas en la microscopa electrnica. Tambin se utiliza para la tincin de varios polmeros para el estudio de los mismos por TEM. El OsO4 es muy voltil y extremadamente txico. Es un agente oxidante fuerte, ya que en l el osmio tiene un estado de oxidacin +8. Oxida agresivamente muchos materiales, dejando un depsito de osmio no voltil en un estado de oxidacin bajo. Tetrxido de rutenio[editar] El tetrxido de rutenio es igualmente voltil e incluso mas agresivo que el tetrxido de osmio, lo que permite colorear materiales que se resisten a la coloracin con osmio. Por ejemplo el polietileno.

4. TINCIN DE GRAM
Explicacin[editar] El cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las clulas bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a travs de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales estn presente para solubilizar el yodo, y actan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta.. La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya que en la misma es soluble el complejo I 2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos s lo hacen. Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen violetas.

La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve para hacer una tincin de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al trmino del protocolo, las Gram positivas se vern azul-violceas y las Gram negativas, se vern rosas (si no se hizo la tincin de contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina). Esta importante coloracin diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. En este mtodo de tincin, la extensin bacteriana se cubre con solucin de uno de los colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado. Se escurre luego el exceso de violeta de metilo y se aade luego una solucin de yodo, que se deja durante el mismo tiempo que la anterior; despus se lava el portaobjetos con alcohol hasta que ste no arrastre ms colorante. Sigue a tal tratamiento una coloracin de contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida, pardo Bismarck, pironin B o hasta inclusive verde de malaquita. Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, an despus de tratarlos con un decolorante, y el color no se modifica al aadir ste; otros pierden con facilidad el primer tinte, y toman el segundo. Los que fijan el violeta, se califican de grampositivos, y los que pierden la primera coloracin y retienen la segunda, de gramnegativos. Basndonos pues, en la reaccin Gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos. Los colorantes de p-rosanilina son los que mejores resultados dan en la coloracin Gram. Los representantes ms usados de este grupo son violeta de metilo y violeta cristal o de genciana. En realidad, violeta de metilo es el nombre atribuido al compuesto tetrametil-p-rosanilina. El matiz de color de la p-rosanilina se intensifica al aumentar el nmero de grupos metilo en la molcula; por consiguiente, de los tres grupos, el tono ms oscuro es la hexametil-p-rosanilina (violeta cristal), y el tinte ms ligero, la tetrametil-p-rosanilina (violeta de metilo). Los nombres violeta de metilo 3R, 2R, R, B, 2B, 3B, etc., se refieren al nmero de grupos metilo contenidos. La letra R indica matices rojos, y la letra B, tonos azules. El violeta de cristal contiene seis grupos metilo, y se considera como el mejor colorante primario para teir por el mtodo de Gram. La facultad de las clulas para tomar la coloracin Gram no es propia de toda sustancia viviente, sino que se limita casi en absoluto a hongos y bacterias. As vemos que las clulas de plantas y animales superiores no conservan la primera coloracin; los mohos se tien con cierta irregularidad; los grnulos de micelios propenden retener el colorante. La reaccin de Gram no es infalible ni constante; puede variar con el tiempo del cultivo y el pH del medio, y quiz por otras causas.

Productos que se utilizan

Reaccin y coloracin de las bacterias GRAM + GRAM Clulas color violeta

1) Cristal violeta Clulas color violeta

2) Lugol solucin Se forma el complejo CV-I. Las clulas Se forma el complejo CV-I. Las clulas iodada 3) Alcohol continan teidas de color violeta. Se deshidratan las paredes celulares. Se contraen los poros. Disminuye la continan teidas de color violeta. Eliminacin por extraccin de grasas de las paredes celulares. Aumenta la

permeabilidad. El complejo CV-I no sale porosidad. El complejo CV-I se separa de las clulas que continan teidas de de la clula. color violeta. 4) Safranina Clulas no decoloradas; quedan teidas Clulas decoloradas; se tien de color de color violeta. rosado.