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RIVERA ALARCON LUIS DANIEL AGROINDUSTRIAS Practica N 05 ACCION DE LOS MICROORGANISMOS SOBRE DIFERENTES COMPUESTOS

I-. INTRODUCCION

Existen muchos ejemplos de la accin de microorganismos sobre diferentes compuestos como los que presentan a continuacin los cuales son de mucha importancia. Los microorganismos no se encuentran aislados, sino que su nmero suele ser muy elevado por unidad de volumen o por unidad de superficie. Por consiguiente, all donde se encuentran son muy abundantes. !dem"s suelen formar agrupaciones de varios microorganismos que interaccionan entre s # unos pueden usar como alimento los productos residuales de otros, o pueden ser atacados por los vecinos que compiten por el mismo alimento. Estas interacciones dan lugar a sucesiones de microorganismos# la microflora de una superficie, de un alimento o del interior de una cavidad abierta del cuerpo puede variar con el tiempo. Las pruebas de hidrlisis y fermentacin de carbohidratos son muy importantes para la identificacin de las bacterias. Los medios, para estudiar la degradacin de estos compuestos, se preparan por lo general a$adiendo %.&' del carbohidrato ()' si la lactosa* a un medio b"sico sin carbohidratos .Para detectar si hubo actividad en+im"tica se anali+a la aparicin de productos o la desaparicin del sustrato. Entre los productos prpura de bromocresol, o a+ul de bromotinol. Los carbohidratos diferenciales m"s comunes usados son de glucosa, maltosa, sacarosa, lactosa, xilosa, arabinosa, almidn, inulina y salicina.

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RIVERA ALARCON LUIS DANIEL AGROINDUSTRIAS II-. OBJETIVOS ,emostrar y comprobar si hay accin de microorganismos sobre diferentes compuestos qu micos y determinacin de la accin y efecto de las en+imas que caracteri+an a los diferentes compuestos qu micos.

III-. MARCO TEORICO

Agente !"#$ic% Existen ciertas sustancias qu micas que influyen negativamente sobre las bacterias, pudiendo ejercer dos tipos de efectos diferentes# -acteriost"ticos# cuando impiden el crecimiento bacteriano. -actericidas# cuando destruyen (matan* las bacterias. En general, si no slo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de microorganismos, hablamos respectivamente de agentes $icr%&i% t'tic% y $icr%&ici(a . !hora bien, para una misma sustancia qu mica, la l nea de demarcacin entre un efecto microbiost"tico y otro microbicida depende muchas veces de la concentracin de dicha sustancia y del tiempo durante el que acta. ./mo podemos saber que un microorganismo est" 0muerto12 El nico criterio v"lido es la p3rdida irreversible de la capacidad de divisin celular, es decir, de la )*r(i(a (e +ia&i,i(a(, y se suele comprobar empleando t3cnicas con placas de Petri (es decir, confirmando que no crecen en medios slidos adecuados*. !ntes de proceder al estudio de las diversas mol3culas que pueden afectar el crecimiento o la viabilidad de los microorganismos, veamos unas cuantas definiciones b"sicas. 4odos los d as usamos agentes qu micos para controlar el crecimiento microbiano# detergentes y jabones para el cuerpo y la ropa, cloracin de las aguas potables, antis3pticos para la piel y el tratamiento de heridas, desinfectantes para tratar superficies en la industria y en los laboratorios, quimioter"picos y antibiticos para tratar enfermedades bacterianas, etc. Agente e teri,i-ante son aquellos que producen la inactivacin total de todas las formas de vida microbiana (o sea, su 0muerte1 o p3rdida irreversible de su viabilidad*. (4ambi3n existen agentes f sicos esterili+antes, como ya vimos en los dos cap tulos anteriores*.

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RIVERA ALARCON LUIS DANIEL AGROINDUSTRIAS Agente (e in.ectante /% ger$ici(a 0 son agentes (sobre todo qu micos* antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patgenos (infecciosos* de un material. Pueden (y en muchos casos suelen* presentar efectos txicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen emplear slo sobre materiales inertes. Agente anti *)tic% son sustancias qu micas antimicrobianas que se oponen a la sepsis o putrefaccin de materiales vivos. 5e trata de desinfectantes con baja actividad txica hacia los tejidos vivos donde se aplican. IV-. MATERIALES 1 E2UIPOS 6 6 6 6 6 6 6 6 !sa de siembra. alcohol. matra+. 7echero de alcohol. 4ubos de ensayo. 7icropipeta. 4ubos con agar 8liger. /ultivo de microorganismo de# o Eschericha coli. o Proteus vulgaris. o 5erratia marcecens.

V-. PROCEDIMIENTO 34 /on una aguja de 8olle inocular por picadura central profunda y por estrias en superficie. 54 9ncubar los tubos a :;</ por => hrs. 64 ?acer lectura se los medios en la forma siguiente# 74 El cambio de color del medio del cultivo de rojo a amarillo en la superficie indica fermentacin de L!/4@5!. 54 El cambio de color en profundidad indica fermentacin de ALB/@5!. 84 5i hay produccin de gas aparecer" ruptura del medio. 94 !note sus resultados e interprete.

MEDIO AGAR CITRATO DE SIMMOS /AISLAMIENTO DEL CITRATO0 OBJETIVO: Estudiar las caracter sticas de alguna bacteria de utili+ar el trato como nica fuente de carbono. RIVERA ALARCON LUIS DANIEL

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MATERIALES: 6 6 4ubos con agar citrato de 5immons. /ultivos de medio solido de# Eschericha coli. Enterobacter aerogenes.

PROCEDIMIENTO: 34 5embrar el agar citrato de 5immons con aguja de 8olle, a partir de un medio solido Cnunca a partir de un medio liquido*. 54 4ra+ar una sola l nea en la superficie del medio, no sembrar en forma abundante. 64 9nocubar a :;</ por => o >D hrs (hasta ; ds *. 74 /onsiderar la prueba positiva cuando el color verde del medio cambia a a+ul.

CALDO MR;VP /PRUEBA DE ROJO DE METILO0 OBJETIVOS: ,emostrar que algunos microorganismos al fermentar la glucosa producen y mantienen alta acide+, mientras que otros bajan inicialmente la acide+ y despu3s viran a la neutralidad. MATERIALES: 6 6 4ubos con caldo 7E6FP. /ultivos de microorganismos# Escherichia coli. 5taphylococcus aureus. PROCEDIMIENTO: 34 /on el an+a de 8olle sembrar el medio respectivo. 54 9ncubar el medio a :;</ por ;= hrs. 64 ,espu3s del periodo de incubacin a$adir & gotas del reactivo de rojo de metilo al %#%>'. RESULTADO:

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RIVERA ALARCON LUIS DANIEL AGROINDUSTRIAS /onsiderar la prueba positiva cuando el medio mantiene un color rojo (microorganismo que producen y mantiene alta acide+*, un color anaranjado se considera reaccin intermedia y un color amarillo es una reaccin negativa.

REACCION DE VOGUES PROS<AUER OBJETIVOS: @bservar la produccin de acetil6metil carbinol a partir de la glucosa. MATERIAL: 6 6 4ubos con caldo 7E6FP. /ultivo de microorganismos# Escherichia coli. 5taphylococcus aureus. PROCEDIMIENTO: 34 /on el asa de 8olle inocular el medio 7E6FP. 54 9ncubar a :;</ por & d as. 64 ,espu3s del tiempo de incubacin a$adir unos miligramos de creatina y %.&ml de la solucin de soda al >%', agitar vigorosamente durante = minutos. RESULTADO: /onsiderar la reaccin como positiva si una coloracin rojo carm n aparece al cabo de )% minutos anotar sus resultados.

AGAR ALMID=N />IDR=LISIS DEL ALMID=N0 La hidrlisis del almidn se puede ensayar sobre medios l quidos o slidos. Los medios slidos se siembran haciendo estr as radiales o sembrando la superficie en botn. OBJETIVOS: ,emostrar que el almidn es hidroli+ado por las en+imas alfa amilasa o beta amilasas. MATERIAL: 6 6 Placa con agar almidn. 5olucin del lugol (yodo al )'*.

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RIVERA ALARCON LUIS DANIEL AGROINDUSTRIAS 6 /ultivo de microorganismos de # -acillus subtilis. 5taphylococcus aureus. Escherichia coli. PROCEDIMIENTO: 34 ,ividir la placa de agar almidn en tres sectores. 54 7arque e inocule (con aguja de 8olle, una estr a radial* la superficie del agar. 64 9nocubar a :;</ por ;= hrs. 74 ,espu3s del tiempo de incubacin cubrir la placa con la solucin iodada y eliminar el exceso. RESULTADO: /onsiderar la prueba positiva, cuando el medio en contacto con el lodo forma una aureola transparente o color marrn roji+o alrededor de colonia.

CALDO TRIPTONA /FORMACION DE INDOL0 OBJETIVOS: Estudiar algunos microorganismos que degradan los compuestos proteicos, hasta triptfano, con produccin de indol. MATERIAL: 4ubos con caldo triptnado. Eeactivos de 8ovacs. /ultivo de microorganismos# Proteus vulgaris. Escherichia coli. PROCEDIMIENTO: 34 /on cada uno de las cepas, inocular los tubos respectivos. 54 9ncubar a :;</ por => y >D horas. 64 ,espu3s del tiempo de incubar a$adir & gotas de reactivo de Govacs y hacer la lectura respectiva 6 6 6

CALDO ?REA OBJETIVO: ,emostrar que algunos microorganismos elaboran la en+ima ureasa, y que esta hidroli+a la urea hasta convertirla en amoniaco. MATERIAL: RIVERA ALARCON LUIS DANIEL

RIVERA ALARCON LUIS DANIEL AGROINDUSTRIAS 6 6 4ubos con caldo rea /ultivo de microorganismos# Proteus vulgaris Escherichia coli

PROCEDIMIENTO: ). 9nocular los medios de cultivo =. 9ncubar a :;</ por >D horas :. ?acer la lectura del medio en la forma siguiente# El viraje del medio (p? H.D* a rojo grosella indica hidrlisis de la rea (p? D.) o mas*

AGAR NUTRITIVO OBJETIVO: ,emostrar que algunas bacterias son capaces de descomponer el perxido de hidrgeno, por accin de la en+ima catalasa. MATERIALES: 6 Perxido de hidrgeno al :' preparado extemponeamente 6 Placas con agar nutritivo 6 7icroorganismos. 5taphylococcus sp -acillus subtilis Escherichia coli PROCEDIMIENTO: ). =. :. >. ,ividir la placa de agar en : secciones 7arcar las placas o inocular por estrias en las cepas, en estudio 9ncubar las placas a :;</ por => hrs !gregar = I : gotas de perxido de hidrogeno sobre la +ona de desarrollo &. @bservar si son liberadas algunas burbujas de gas y anotar en 3ste caso la prueba como positiva.

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VI-. RESULTADOS

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RIVERA ALARCON LUIS DANIEL AGROINDUSTRIAS VII-. CONLUSIONES La descomposicin de prote nas y compuestos a+ufrados da lugar con frecuencia a la produccin a la produccin de "cido sulfh drico. El volumen suele ser tan peque$o que solamente se descubre mediante el uso de indicadores qu micos pero en la descomposicin de huevos, y la reduccin de sulfatos en lados marinos, suele producirse en cantidad suficiente para causar mal olor. 7uchas de las bacterias a+ufradas poseen la capacidad de oxidar al acido sulfh drico o el a+ufre libre, para producir acido sulfh drico. =?=5 J @= = ?=@ J =5 =5 J =?=% J :@= =?=5@> Puede producirse este fenmeno qu mico a favor de reacciones qu mico o fotosint3tico. Bna en+ima puede reaccionar con un solo sustrato o en algunos casos con un grupo particular de sustratos relacionados qu micamente. En concreto esto significa que las c3lulas producen generalmente diferentes en+imas para cada compuesto que metaboli+an. !dem"s cada en+ima interviene en un paso o cambio de sustrato. Las pruebas de hidrlisis y fermentacin de carbohidratos son muy importantes para la identificacin de las bacterias. En este laboratorio las caracter sticas respectivas del microorganismo a identificar es Escherichia /oli comparando nuestros resultados con la tabla de identificacin de microorganismos.

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RIVERA ALARCON LUIS DANIEL AGROINDUSTRIAS VIII-. BIBLIOGRAFIA KKK.unex.esCedafoCmicroorganismosbacterias

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