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Facultad Medicina
Av. 12 de Octubre 1076 y Roca
Apartado postal 17-01-2184
Telf: 593 2 299 15 21
1. DATOS INFORMATIVOS:
MATERIA O MDULO:
LABORATORIO CLNICO PRCTICAS
CARRERA:
MEDICINA
NIVEL:
SEGUNDO
N CRDITOS:
1,5 (UNO COMA CINCO)
CRDITOS TEORA:
1
CRDITOS PRCTICA:
0,5
DATOS DEL PROFESOR:
Nombre: Celia Annabel Bowen Fernndez
Grado Acadmico o Ttulo Profesional: Dra. Bioqumica y Farmacia opcin Bioq. Clnica
Breve indicacin de la lnea de actividad acadmica: Docencia en diferentes en diferentes ramas
de la patologa clnica (Laboratorio clnico y Microbiologa), coordinadora de los laboratorios
en el rea de Destrezas Clnico Quirrgicas
Indicacin de horario de atencin a estudiantes: Martes, Mircoles y Viernes 12:00 a 13.00 horas
Correo Electrnico: bowencelia@yahoo.es
Telfono: 084678618
PROFESOR:
Grado acadmico o ttulo profesional: Dra. Bioqumica y Farmacia opcin: Bioq. Clnica/ Diploma
Superior en Pedagogas Innovadoras
2. DESCRIPCIN DE LA MATERIA:
En este nivel de la carrera se estudian los fundamentos bsicos del laboratorio clnico, su estructura y
organizacin dentro de un servicio de salud, sus funciones y se dan las primeras correlaciones de las
pruebas de laboratorio con casos clnicos. Se aprende el uso racional de las pruebas ms comunes y
se pretende incentivar al estudiante a tomar con conciencia crtica las solicitudes de laboratorio y
rescatar la interpretacin clnica como elemento fundamental de la Medicina de Laboratorio.
3. OBJETIVOS GENERAL:
Reconocer la metodologa y realizacin de las pruebas bsicas de laboratorio clnico con el fin de
corroborar la presencia y las concentraciones de los diferentes analitos en las muestras biolgicas,
con la morfologa y fisiologa del individuo normal, estudiadas en las dems reas de las ciencias
morfofuncionales del segundo nivel de la carrera.
4.
ESPECFICOS:
4.1. ACTITUDINALES:
a. Compartir conocimientos y experiencias durante el proceso de aprendizaje
b. Manejar adecuadamente el manejo del microscopio segn las normas indicadas
c. Identificar y cumplir las normas de bioseguridad
4.2. PROCEDIMENTALES:
a. Revisar el mtodo de la puncin venosa y capilar y realizar el procedimiento
b. Aprender a preparar soluciones y diluciones y su aplicacin para deducir las
unidades de medida utilizadas en el laboratorio
c. Realizar y explicar los pasos del examen elemental y microscpico de orina y
del coproparasitario y su respectiva interpretacin
d. Realizar exmenes de glucosa, colesterol, rea, transaminasas y bilirrubinas as
como relacionarlos con el respectivo diagnstico en caso de haber alteraciones
4.3. COGNITIVOS:
a. Revisar los anticoagulantes y tubos de ensayo utilizados en las pruebas ms
comunes
b. Especificar el fundamento de las pruebas bioqumicas enzimo-colorimtricas,
de la espectrofotometra y los clculos matemticos necesarios
c. Conocer la tcnica de electroforesis y las diferentes fracciones proteicas
sanguneas
5. CONTENIDOS
1. Laboratorio clnico: Normas de bioseguridad
PRIMERA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SEMANA 2 rotacin
2. Toma de muestras de sangre, anticoagulantes, tubos al vaco
PRIMERA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SEMANA 2 rotacin
3. Soluciones y diluciones, unidades de medida
SEGUNDA SEMANA 1 rotacin, DCIMA PRIMERA SEMANA 2 rotacin
4. Elemental y microscpico de orina
TERCERA SEMANA 1 rotacin, DCIMA TERCERA SEMANA 2 rotacin
5. Parasitologa, coprolgico-coproparasitario
CUARTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA CUARTA SEMANA 2 rotacin
6. Carbohidratos: glucosa
QUINTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA QUINTA SEMANA 2 rotacin
7. Lpidos: colesterol
QUINTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA QUINTA SEMANA 2 rotacin
8. Protenas: electroforesis y examen qumico
SEXTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SEXTA SEMANA 2 rotacin
9. Funcin renal: urea
SPTIMA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SPTIMA SEMANA 2 rotacin
10. Pruebas de funcin heptica: transaminasas, bilirrubinas
OCTAVA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SPTIMA SEMANA 2 rotacin
6. METODOLOGA, RECURSOS:
6.1. Mtodos didcticos
a. Charla de fundamentacin terica
b. Explicacin prctica y observacin
c. Realizacin de prcticas de pruebas de laboratorio
Autora: Dra. Celia Bowen
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6.2. Recursos
a. Uso de manual de prcticas de Laboratorio Clnico
b. Toma de fotos con respecto a las prcticas realizadas en clases (smartboard)
c. Uso de Atlas de sedimento urinario y parsitos
d. Equipos de Laboratorio de Clnico (Microscopios, incubadora,
centrfuga, espectrofotmetro, etc.)
e. Reactivos varios
f. Muestras biolgicas varias
7. EVALUACIN:
7.1. CRONOGRAMA DE EVALUACIONES:
1era. Evaluacin (promedio de lecciones): Cada semana
2da. Evaluacin (terica): Octava semana
3ra. Evaluacin (prctica + carpeta): Novena semana
SISTEMA DE CALIFICACIN:
EVALUACIONES PARCIALES PRCTICA Y TERICA: 30 puntos
10 puntos de cada una de las evaluaciones ms trabajos o promedios de
lecciones indicadas en el cronograma
Nota final: 20 puntos
Primera parte: 10 puntos con un examen final del rea de Prcticas en la
semana 8 y 18 de la rotacin
Segunda parte (examen integrador de la Macrorea de Morfofuncin):
semana 9 y 18 de la rotacin
8. BIBLIOGRAFA:
TEXTOS DE REFERENCIA:
ngel M., G. y M. ngel R., Interpretacin Clnica del Laboratorio, 6. edicin,
Editorial Mdica Panamericana, Bogot, 2.001
Manual de Bioseguridad en el Laboratorio, O. M. S., Ginebra, 1.994
TEXTOS RECOMENDADOS:
Henry, J. B., Diagnstico y Tratamiento Clnicos por el Laboratorio, 9. Edicin,
Editorial Salvat Mdica, Mxico, 1.993
Mtodos Bsicos de Laboratorio en Parasitologa Mdica, O. M. S., Ginebra,
1.992
Morn Villaroto, Obtencin de Muestras Sanguneas de Calidad Analtica,
Editorial Mdica Panamericana, Mxico, 2.001
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PRCTICA No. 1
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLINICO
Definicin: Conjuntos de normas y procedimientos para obtener una situacin carente
de riesgos o con riesgos limitados.
PRECAUCIONES UNIVERSALES:
1. Acceso restringido, permitido solo a personas autorizadas
2. Prohibido usar el celular, comer, fumar, beber o almacenar comidas o cualquier
objeto de uso personal dentro del laboratorio.
3. Usar ropa protectora de trabajo como mandil, mascarillas, guantes (de ltex) la
misma que debe ser retirada antes de abandonar el laboratorio. Botas y gorra en
casos de exposicin a microorganismos de alta peligrosidad.
4. Antes de iniciar cualquier actividad en el laboratorio asegurarse de que en la
mano no existan escoriaciones. En caso contrario cubrir las mismas de manera
adecuada.
5. Cambio inmediato de los guantes en caso de rotura y lavado de manos.
6. No tocarse la boca ni los ojos con las manos enguantadas
7. Evitar la formacin de aerosoles y gotas.
8. Manejo adecuados de los objetos corto punzantes. Una vez utilizados se deben
almacenar en recipientes rgidos y eliminarse luego de ser decontaminados.
9. Terminantemente prohibido pipetear con la boca. Debe utilizarse
los
pipeteadores automticos.
10. Decontaminar las superficies de trabajo una vez terminado el trabajo diario.Se
recomienda el uso de hipoclorito de sodio al 10%
11. Evitar conductas inseguras y de riesgo.
12. Manejo adecuado de los desechos desde el lugar de origen y realizar tratamiento
adecuado especialmente de los infecciosos.
13. Los desechos de los fluidos corporales pueden eliminarse por las caerias
habituales una vez que hayan sido decontaminados.
14. Lavarse las manos con abundante agua y jabn luego de haber terminado el
trabajo diario.
15. Plan de inmunizaciones para el personal de laboratorio
TRABAJO EN CLASE:
Poner en prctica las normas anteriores durante cada sesin de laboratorio
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PRACTICA No. 2
Tema: Toma de muestras de sangre (venosa y capilar)
Objetivos:
1. Conocer la tcnica para la obtencin de muestras de sangre como medio para
mantener la integridad del profesional de salud y la del paciente
2. Adiestramiento adecuado para el manejo de instrumentos necesarios en la toma
de muestras sanguneas
3. Aplicar las precauciones universales de bioseguridad en el laboratorio con
respecto al manejo de lquidos biolgicos y material infeccioso
4. Conocer los usos de los diferentes anticoagulantes empleados en el laboratorio
Fundamento terico:
La relativa facilidad con que se obtiene la sangre venosa hace de esta tcnica el
principal mtodo de obtencin de sangre en los laboratorios de anlisis clnicos. A partir
de la sangre sin anticoagulante se obtiene suero, si la sangre contiene anticoagulante, se
obtiene plasma. Del plasma forma parte el fibringeno, sustancia de la que carece el
suero.
Materiales:
-Torniquete
-Algodn
-Alcohol antisptico (isoproplico al 70%)
-Jeringuillas
-Sistema vacutainer: capsula, tubos alvaco, agujas de toma mltiple
- Lancetas
-Tubos capilares heparinizados
-Plastilina
Tcnica de la puncin venosa:
1. Se identifica al paciente comprobando que la solicitud de exmenes corresponda
al mismo
2. Si se solicita una muestra en ayunas, debe comprobarse que efectivamente el
paciente no ha ingerido alimentos
3. Hay que dirigirse al paciente e informarle sobre el procedimiento a que va a ser
sometido. Se debe tranquilizarle, eliminando en lo posible su tensin.
4. Se ha de colocar adecuadamente al paciente, segn ste se encuentre sentado, o
en decbito prono, para tener acceso fcil y cmodo a la fosa antecubital.
Autora: Dra. Celia Bowen
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5. Hay que preparar todo el material, incluidos los tubos para recogida de la
muestra, el torniquete, los objetos que se emplean para limpiar la piel, las
jeringas, cuando sea necesario, la aguja estril para extraccin de sangre y
dispositivo utilizado para fijar la aguja al tubo de extraccin al vaco.
6. Se solicita al paciente que cierre el puo para que las venas resulten ms
palpables.
7. Se seleciona una vena adecuada para la puncin. Se prefieren las venas de la
fosa antecubital, en particular la cubital interna y la ceflica. Tambin pueden
utilizarse las venas de la mueca, el tobillo y la mano. Si existiera ya un catter
intravenoso en un brazo, se utilizar el otro para la extraccin de la muestra.
8. Preparar la cpsula insertando la aguja pero dejando un poco flojo la capucha de
la parte externa de la misma para retirarlo al momento de la puncin.
9. Se aplica un torniquete varios centmetros por encima de la zona de puncin
(aproximadamente a cuatro dedos sobre el doblez del brazo). No hay que dejar
nunca el torniquete ms de 1 minuto. En casos excepcionales no debe usarse el
torniquete, por ejemplo cuando en el pedido est el Calcio.
10. Se limpia la zona de la venopuncin con una torunda embebida en solucin en
alcohol antisptico. Se comienza en el punto de la puncin y se prosigue la
limpieza hacia fuera siguiendo un movimiento en espiral. Se deje que la zona se
seque y no se toca con ningn objeto que no haya sido esterelizado previamente.
11. Se fija firmemente la vena tanto por encima como por debajo del lugar de
puncin, con la ayuda de los dedos pulgar y medio, o ndice y pulgar.
12. Se realiza la venopuncin. a) Se penetra a travs de la piel con la aguja
formando un ngulo de aproximadamente 15 con el brazo y con el bisel hacia
arriba. Se sigue la direccin de la vena con la aguja. B) Se introduce la aguja con
suavidad pero con la suficiente rapidez para reducir las molestias del paciente.
No hay que enterrar la aguja. C) Si se utiliza una jeringa, se tira hacia atrs del
mbolo, con tensin lenta y uniforme a medida que la sangre va fluyendo en su
interior. No debe realizarse este movimiento con excesiva rapidez, ya que podra
hemolizarse la sangre o colapsarse la vena. d) Si se utiliza un tubo al vaco, en
cuanto la aguja haya penetrado en la vena, se dirigir el tubo todo lo posible
hacia delante en el dispositivo de sujecin. Al mismo tiempo se sujeta
tenuemente la aguja en su lugar. Una vez que haya llenado el tubo, se retira,
cogindolo por su extremo y tirando suavemente de l.
13. Cuando la sangre comience a fluir, se suelta el torniquete.
14. Una vez que se haya extrado toda la muestra, hay que indicar al paciente que
relaje el puo y que no bombee con la mano.
15. Se coloca suavemente sobre el punto de la puncin una bola de algodn estril.
Se extrae la aguja y a continuacin se ejerce presin sobre la zona.
16. Se venda el brazo. En general es suficiente una tira de esparadrapo sobre la bola
de algodn, para detener la hemorragia.
17. Se mezclan los tubos con el anticoagulante. Si la muestra ha sido extrada con
jeringa, se transferir la sangre a los tubos correspondientes tomando las debidas
precauciones para evitar la hemlisis de las muestras.
18. Se comprobar el estado del paciente; por ejemplo, si se ha mareado y si la
hemorragia est controlada.
Autora: Dra. Celia Bowen
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Volumen mayor
=
Volumen menor (alcuota)
50 =
2,5
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PRACTICA No. 4
Tema: Elemental y microscpico de orina
Objetivos:
1. Analizar la orina realizando exmenes macrscopico, qumicos y microscpicos
en la misma
2. Correlacionar los parmetros analizados con enfermedades renales o del tracto
urinario
Definicin de examen rutinario de orina: Es un examen fsico y/o qumico de la
orina y comprende una serie de pruebas qumicas y microscpicas para evaluar
infecciones del tracto urinario, enfermedad renal y enfermedades de otros rganos
que provocan la aparicin de metabolitos anormales (productos de descomposicin) en
la orina.
El examen elemental y microscpico de orina consta de tres partes:
1) Macroscpico: color, aspecto
2) Qumico (tira reactiva): pH, leucocitos, protenas, glucosa, urobilingeno,
bilirrubina, cuerpos cetnicos, sangre
3) Microscpico: leucocitos, eritrocitos, clulas bajas, clulas altas (se reporta
numero por campo en 10 camposcon lente de 40x), moco, bacterias, cristales,
parsitos, hongos (se reporta por cruces en 10 campos con lente de 40 x) y
cilindros se reporta nmero por placa (con lente de 10x).
1. Instrucciones para recoger una muestra parcial de orina
a. El frasco tiene que ser suministrado por el Laboratorio, o adquirir en la farmacia
uno estril apropiado para la recoleccin de orina.
b. Es preferible que la orina sea la primera orina de la maana.
c. Practicar previo aseo genital, con agua y jabn, sin dejar residuos. Esto es
especialmente importante en la mujer que debe lavarse el rea entre los labios de
la vagina y evitar la contaminacin de la muestra con crema, antispticos y
secreciones vaginales. Los hombres y nios deben limpiarse la cabeza del pene
d. Deje escapar la porcin inicial de la miccin al inodoro, a continuacin recolecte
en el frasco la porcin media (10 ml) y descarte la porcin final de la miccin
nuevamente en el inodoro.
e. Tape bien el frasco y entrguelo rpidamente al Laboratorio (mximo dos horas
luego de tomar la muestra).
f. NO recoger la muestra durante el Periodo Menstrual
2. Mtodo para el anlisis de orina macroscpico y qumico:
a. Despus de recibir la orina en el laboratorio, analizarla tan pronto como sea
posible. Antes del anlisis las muestras de orina deben estar a la temperatura
ambiente
b. Realizar la homogenizacin de la orina
Autora: Dra. Celia Bowen
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g.
h.
i.
j.
k.
OBSERVACIN: Para el siguiente literal por favor revisar el atlas para segundo
nivel ubicado en el internet cuya pgina es ftp.puce.edu.ec
3.1.
Elementos que se observan en el examen microscpico:
TAREA EN CLASE:
Cada estudiante debe traer su muestra de orina siguiendo las instrucciones anteriores,
realizar el anlisis clnico durante la prctica y realizar el reporte de la misma para
archivar en la carpeta.
PRACTICA No. 5
Tema: Parasitologa : Coproparasitario
Objetivos:
1. Observacin macroscpica y microscpica de las heces para aprender a
reconocer diferentes patologas gastrointestinales
2. Aprender a realizar la tcnica para la preparacin de un coproparasitario
Materiales y rectivos:
A. Materiales
-Placa portaobjetos
Autora: Dra. Celia Bowen
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-Placa cubreobjetos
-Microscopio
-Guantes
-Palillos de dientes
B. Reactivos
-Solucin fisiolgica al 0.85%
-Solucin de lugol (dilucin 1:5 de lugol)
-Muestra de heces
Procedimiento:
Recoleccin de la muestra:
Debe recogerse en un recipiente limpio, debe tenerse cuidado de no mezclarse con
orina, descartar los provenientes de pacientes tratados con bismuto y bario. Las
muestras obtenidas deben enviarse rpidamente al laboratorio especialmente si son
lquidas o semilquidas ya que las formas trofozoicas de los protozoos pierden
movilidad y mueren poco despus de enfriarse.
Procesar la muestra antes de dos (2) horas. Si esto no es posible, mantener las muestras
en refrigeracin o temperatura de 4 Centgrados.
1. Examen macroscpico (fsico) heces:
La inspeccin de las heces es importante, ya que puede conducir a un diagnsrtico
de infectacin parasitaria, ictericia obstructiva, diarrea, malabsorcin, obstruccin
rectosigmoidea, disentera o colitis ulcerosa, o prdida de sangre en el conducto
gastrointestinal.
a. Debe anotarse la consistencia (especificando si son pastosas, blandas,
semilquidas lquidas duras) y color del excremento (caf, amarilla, rojiza,
negruzca, verdes, etc)
b. Los progltides o gusanos adultos se pueden detectar en el examen general,
manchas de sangre o moco, y, la presencia de restos alimenticios.
Color: Normalmente las heces son de color pardo de diferente intensidad, este color se
debe a la presencia de urobilina, varia de acuerdo a la ingestin de alimentos y
medicamentos.
Olor: Las sustancias aromticas provenientes de la desaminacin y descarboxilacin del
triptofano por las bacterias son las que le dan a la materia fecal el olor caracterstico.
Consistencia: Normalmente las heces son blandas aunque moldeadas. Se observan heces
extremadamente duras en el estreimiento y lquidas por accin de purgantes, o por
causas que originen diarrea. Esta consistencia puede ser : Lquida, blanda o dura.
Aspecto: Hay diferentes aspectos como son : Diarreico, cremoso, mucoide, granuloso,
pastosa,caprino.
Reaccin: La reaccin y el pH de la materia fecal depende del rgimen alimenticio.
Autora: Dra. Celia Bowen
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POD (peroxidasa)
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Punto final de una reaccin: Las reacciones catalizadas por enzimas son nicas en el
sentido de que presentan aumentos muy grandes de la velocidad en relacin a las
reacciones no catalizadas y muestran una cintica de saturacin, es decir la velocidad de
la reaccin alcanza un valor mximo a una concentracin determinada de sustrato, no
dan por resultado aumento de la velocidad de la reaccin. La medida se realiza siempre
en las condiciones ptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc. En estas
condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad mxima (V max). La
velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los productos o la
desaparicin de los reactivos.
En el caso de la reaccin de la glucosa catalizada por la enzima glucosa oxidasa y la
peroxidasa llega a su punto final cuando todo el sustrato (glucosa) se ha oxidado, y
despus se mide el cambio de color.
Espectofotmetro:
La absorbancia y la transmitancia de una sustancia en disolucin se miden con un
aparato denominado espectrofotmetro, el cual consta bsicamente de los siguientes
componentes:
Fuente de luz: Lmpara que emite una mezcla de longitudes de onda.
Colimador: Conjunto de lentes que enfocan la luz convirtindola en un haz de rayos
paralelos.
Monocromador: Dispositivo que selecciona luz de una nica longitud de onda.
Detector fotoelctrico: Transductor de luz en electricidad. La luz provoca el
desplazamiento de electrones en el metal del detector, produciendo una corriente
elctrica que es proporcional a la intensidad de la luz recibida.
Registrador: Mide la seal del detector, la compara y genera una medida en una escala
determinada.
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Blanco de reactivo
STD muestra
STD muestra
5 ul
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Materiales y reactivos:
Materiales
Reactivos
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Gradilla
Pipetas automtica
Puntas de plstico para pipetas automt..
Reloj
Cubetas de plstico para espectrofot.
Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las
absorbancias.
3. Clculo de la concentracin de la glucosa
C (mg/dl)= 100 x A muestra
A Estndar
Valores de referencia: 70 100 mg/dl
TRABAJO EN CLASE:
Realizar el anlisis de glucosa en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en la
carpeta con la respectiva interpretacin del resultado
PRCTICA No 7
LPIDOS: Determinacin de colesterol en sangre
1. Objetivos:
3. Conocer la tcnica mediante la cual se determina el colesterol en sangre
Autora: Dra. Celia Bowen
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Colesterol + O2
Blanco de reactivo
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STD muestra
STD muestra
5 ul
Materiales y reactivos:
Materiales
Reactivos
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Gradilla
Pipetas automtica
Puntas de plstico para pipetas automt..
Reloj
Cubetas de plstico para espectrofot.
Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las
absorbancias.
4. Clculo de la concentracin de colesterol
C (mg/dl)= 200 x A muestra
A Estndar
Valores de referencia: hasta 200 mg/dl
TRABAJO EN CLASE:
Realizar el anlisis de colesterol en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en
la carpeta con la respectiva interpretacin del resultado
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CONSULTA:
Criterios de la OMS para:
- Sndromes metablicos
- Factores de riesgo cardiovascular
Nota: Archivar en la carpeta y estudiar para la evaluacin parcial
PRCTICA No. 8
TEMA: Mtodo para electroforesis de protenas en suero
Objetivo:
Aplicar la tcnica de electroforesis para separar las diversas fracciones protecas del
suero humano
Fundamento terico:
La electroforesis es una tcnica basada en los movimientos de molculas cargadas en un
campo elctrico, cada molcula se mueve hacia el electrodo de carga opuesta (ctodo y
nodo), este movimiento denominado electroforesis da nombre a la tcnica. En el
transporte electrofortico, a la fuerza del campo elctrico se opone la resistencia viscosa
del medio, producindose, cuando se igualan una velocidad constante de
desplazamiento de las partculas.
En resumen, puede decirse que cuando una molcula cargada se coloca en un campo
elctrico se mover hacia uno u otro electrodo dependiendo de: 1) su carga elctrica, 2)
su tamao, 3) la intensidad del campo elctrico y 4) la temperatura del medio.
La electroforesis se aplica en el campo de la Bioqumica a la separacin de compuestos
que poseen grupos ionizables (aminocidos, pptidos, protenas, cidos nucleicos)
teniendo en cuenta que la carga neta de estas sustancias depende del pH del medio en
que se encuentren. Si la molcula tiene carga positiva migrar hacia el ctodo, si tiene
carga negativa hacia el nodo. La fuerza inica de la solucin tampn tiene una
importancia fundamental en la electroforesis, puesto que cuando es baja, permite
velocidades de migracin de los solutos ms rpidas y con menor desprendimiento de
calor.
Las protenas estn compuestas de aminocidos que poseen grupos ionizables
(principalmente -COO- y NH+ 3), pueden encontrarse cargadas positiva o
negativamente, o bien de permanecer elctricamente neutras segn la proporcin de los
diversos grupos ionizados a un determinado pH. En su punto isoelctrico (pI o pH I), la
protena tiene carga neta cero. Por debajo de pI las protenas estarn cargadas
positivamente y por encima del pI negativamente.
El porcentaje normal de estas protenas en el suero humano es:
-Albmina54-62%
Autora: Dra. Celia Bowen
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--globulinas9-15%
--globulinas14-19%
--globulinas14-19%
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(NH4+)2 + CO2
Nitroprusiato (no es enzima)
(NH4+)+salicilato+ClONa+ 2-oxoglutarato
NH2 CO NH2 + H2O
Indofenol (verde)
Parte experimental:
1.Procedimiento (en suero o plasma):
1.1. En cuatro tubos de ensayo marcados como B (blanco), S (Standard), M1 (muestra
1) y M2 (muestra 2) agregar:
B
S
M1
M2
Standard
10 ul
Suero o plasma
10 ul
10 ul
Reactivo 1
1000 ul
1000 ul
1000 ul
1000 ul
Enzima ureasa
5 ul
5 ul
5 ul
5 ul
Mezclar por agitacin suave e incubar 10 minutos a 20-25 C o por 3 minutos a 37C
Reactivo 2
1000 ul
1000 ul
1000 ul
1000 ul
Mezclar por agitacin suave e incubar 10 minutos a 20-25 C o por 5 minutos a 37C.
Leer la absorbancia de la muestra (A muestra) y del estndar (A Estndar) en
espectrofotmetro a Hg 578 nm frente a un blanco reactivo antes de 60 minutos
Clculos de concentracin de urea:
C (mg/dl)= A_muestra x 80
A estandar
Valores de referencia en suero: 10 50 mg/dl
Parmetros a considerar:
Autora: Dra. Celia Bowen
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1.Procedimiento (en suero o plasma) tanto para TGO como para TGP:
Longitud de onda: Hg 334 nm
Temperatura: 25 C
Cubeta: 1 cm paso de luz
Ajuste cero: contra el aire
Reactivo de trabajo
Muestra
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PRCTICA No. 11
TEMA: Determinacin de bilirrubina total y directa
El 80-85% de la bilirrubina se origina de la degradacin de la hemoglobina con un 1520% que es derivada del citocromo, mioglobina y catalasas. La bilirrubina no
conjugada, la cal se liga a la albmina del plasma, es producida en el curso de la
degradacin en el sistema reticuloendotelial, clulas Kupffer del hgado, bazo y mdula
sea. Los ensayo de bilirrubina son posible para evaluar el grado de severidadad de los
sntomas clnicos de la ictericia as como para evaluar la funcin y el estado del hgado.
Significado de los resultados anormales
La ictericia es la coloracin amarillenta de la piel y de la esclertica del ojo, que ocurre
cuando la bilirrubina se acumula en la sangre a un nivel mayor a 2.5 mg/dL
aproximadamente. La ictericia se presenta porque los glbulos rojos se estn
descomponiendo demasiado rpido para que el hgado los procese, lo cual podra
suceder debido a una enfermedad heptica o a una obstruccin de las vas biliares.
Si hay una obstruccin de las vas biliares, la bilirrubina directa se acumular, escapar
del hgado y terminar en la sangre. Si los niveles son lo suficientemente altos, una
parte de ella aparecer en la orina. Slo la bilirrubina directa aparece en la orina. El
aumento de la bilirrubina directa generalmente significa que las vas biliares (secrecin
heptica) estn obstruidas.
El aumento de la bilirrubina indirecta o bilirrubina total pueden ser un signo de:
Sndrome de Crigler-Najjar
Eritoblastosis fetal
Enfermedad de Gilbert
Cicatrizacin de un hematoma grande (moretn o sangrado bajo la piel)
Anemia hemoltica
Enfermedad hemoltica del recin nacido
Hepatitis
Ictericia fisiolgica (normal en los recin nacidos)
Anemia drepanoctica
Reaccin a una transfusin
Anemia perniciosa
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En presencia del acelerador cafena, la bilirrubina total se acopla con el cido sulfnico
para formar un complejo azobilirrubinado rojo, la intensidad del color es proporcional a
la concentracin de la bilirrubina. La determinacin de la bilirrubina directa es
desarrollada sin aditivo de cafena. La adicin de tartrato alcalino causa una
transformacin del complejo rojo de la azobilirrubina a un complejo azul y las lecturas
de las absorvancias son entre 546-578 nm.
Bilirrubina total:
Acido sulfanlico + NaNO2
cafena
azobilirrubina (rojo)
complejo verde
1. Esquema de pipeteo:
Bilirrubina total
Microdeterminacin
Pipetear en las cubetas
Blanco de reactivo
Muestra
Reactivo 1
100 ul
100 ul
Reactivo 2
------
25 ul
Reactivo 3
500 ul
500 ul
Muestra
100 ul
100 ul
500 ul
500 ul
Blanco de reactivo
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Muestra
Reactivo 1
100 ul
100 ul
Reactivo 2
------
25 ul
1000 ul
1000 ul
Muestra
100 ul
100 ul
Reactivos
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Gradilla
Pipetas automtica
Puntas de plstico para pipetas automt..
Reloj
Cubetas de plstico para espectrofot.
Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las
absorbancias.
Valores de referencia:
Bilirrubina total: hasta 1.0 mg/dl
Bilirrubina directa: hasta 0.25 mg/dl
Pgina 29
TRABAJO EN CLASE:
Realizar el anlisis de las bilirrubinas en un suero sanguneo y luego reportar los
clculos en la carpeta con la respectiva interpretacin del resultado
BIBLIOGRAFIA:
ngel M., G. y M. ngel R., Interpretacin Clnica del Laboratorio, 6. edicin, Editorial
Mdica Panamericana, Bogot, 2.001
Henry, J. B., Diagnstico y Tratamiento Clnicos por el Laboratorio, 9. Edicin, Editorial
Salvat Mdica, Mxico, 1.993
Manual de Bioseguridad en el Laboratorio, O. M. S., Ginebra, 1.994
Mtodos Bsicos de Laboratorio en Parasitologa Mdica, O. M. S., Ginebra, 1.992
Morn Villaroto, Obtencin de Muestras Sanguneas de Calidad Analtica, Editorial Mdica
Panamericana, Mxico, 2.001
Pgina 30