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2008

MANUAL DE BIOLOGA CELULAR PARA LA CARRERA DE ENFERMERA. Fidelina Gonzlez Muoz Eugenio Arriagada Maldonado

Registro Propiedad Intelectual N 169.912 I.S.B.N. 978-956-8029-77-7 Primera Edicin Marzo 2008 Impresin: Talleres Direccin de Docencia Edmundo Larenas 64-A Barrio Universitario Concepcin IMPRESO EN CHILE / PRINTED IN CHILE

Prlogo Como resultado de una encuesta aplicada en dos aos sucesivos, en generaciones anteriores del curso de Biologa Celular Bsica (251.121) dictado a los estudiantes de Biologa Celular Bsica de la Carrera de Enfermera de la Universidad de Concepcin, con el fin de averiguar posibles carencias que hubieran en el curso con el objetivo de lograr un mejor rendimiento de los estudiantes, surgi la idea de hacer un manual de apuntes para este ramo.

Este manual de apuntes es un material de apoyo para

las clases

expositivas de dicha asignatura (con el apoyo de presentaciones digitales). Se ha privilegiado el texto a la figura por razones de economa en nmero de pginas. Los estudiantes acceder a las figuras pertinentes en las clases.

Se incluye adems todos los cuestionarios que los estudiantes deben desarrollar durante el curso sobre las materias de las clases expositivas. Tambin se incluyen los cuestionarios relativos a seminarios (sobre Virus y Cncer), pelculas y sesiones de laboratorio. Estas ltimas actividades son

complementarias a las clases expositivas.

Este material impreso puede adems ser utilizado por cualquier estudiante del rea biolgica que requiera complementar informacin sobre biologa celular actualizada hasta el ao 2005, en espaol.

CAPTULO I MEMBRANAS BIOLGICAS


H. Eugenio Arriagada M. Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad de Concepcin. Concepcin. Chile.

Todas las clulas poseen al menos una membrana externa, la membrana plasmtica, que separa el citoplasma (parte de la clula que, en las clulas eucariontes, se ubica fuera del ncleo) del medio extracelular. El citoplasma, contiene un gran nmero de diferentes enzimas. Las clulas eucariontes tienen adems membranas internas que delimitan los diversos organelos y compartimientos intracelulares. Cada tipo de organelo, posee un complemento particular de protenas, algunas inmersas en sus membranas, otras en su espacio interior acuoso, o en el lumen. Estas protenas permiten a cada organelo desarrollar sus funciones caractersticas. Las membranas biolgicas pueden separar estos diferentes medios porque ellas son generalmente impermeables a macromolculas y selectivamente permeables a solutos. Al microscopio electrnico de transmisin (TEM), las membranas biolgicas presentan una apariencia trilaminar como una lnea de ferrocarril (Figura 1), con dos zonas electrodensas (oscuras) separadas por una zona central menos densa (clara).

Figura 1. La apariencia trilaminar de la membrana plasmtica. Micrografa de membrana de eritrocito humano, teida con tetraxido de osmio, obtenida al TEM.

El espesor de la mayora de las membranas de mamferos es de 6-10 nm, pero algunas de ellas son significativamente ms delgadas. Las membranas intracelulares son normalmente de menor espesor que las membranas plasmticas. La base estructural del diseo particular de cada tipo celular en lo referente a su forma y a la ubicacin de sus organelos, descansa en su citoesqueleto, una densa red compuesta de tres clases de protenas fibrilares: microfilamentos, filamentos intermedios y microtbulos, desplegada en todo el citoplasma y que sustenta mecnicamente a las membranas celular y nuclear. Las protenas del citoesqueleto, estn entre las protenas ms abundantes en una clula eucarionte. Las distintas membranas que tienen las clulas nucleadas animales son especializadas debido a que poseen protenas y lpidos especficos que les permiten efectuar tareas nicas.

Diversidad funcional de las membranas. Las membranas biolgicas son ms que un lmite fsico como se seal ms arriba, son estructuras que tienen funciones complejas y diversas. La funcin ms general de las membranas es la de separacin de distintos compartimientos celulares o subcelulares. Esta compartimentacin permite que procesos celulares especializados tengan lugar sin interferencia externa y posibilita que las actividades celulares se regulen en forma independiente. Hay varias ventajas de la formacin de compartimientos en el interior de la clula. Cuando las molculas de una reaccin catalizadas por enzimas se concentran en un espacio pequeo del volumen celular total los reactivos pueden "encontrarse" con mayor facilidad, lo cual aumenta la velocidad de la reaccin. Los compartimientos separados por membranas tambin mantienen alejados de otras estructuras, ciertos reactivos qumicos que pueden afectar a las reacciones qumicas de manera adversa. Los compartimientos tambin permiten el almacenamiento de energa cuando se produce una diferencia en la concentracin de una sustancia a

cualquier lado de la membrana que los separa; la energa puede as, convertirse a otras formas de energa mientras las molculas se mueven a travs de las membranas desde el lado de mayor concentracin hacia el de menor concentracin. Este proceso de transduccin de energa (cambio de una forma de energa en otra), es el mecanismo bsico que utiliza la clula para convertir y almacenar energa. En el interior celular, las membranas mitocondriales sustentan procesos de transduccin de energa. Las membranas celulares tambin desempean la importante funcin de superficie de trabajo, as, algunas reacciones qumicas son catalizadas por enzimas ligadas a las membranas. Las membranas proporcionan un andamiaje que permite organizar en la superficie celular a las enzimas que participan en reacciones sucesivas, ordenando los reactantes para una interaccin ms efectiva, pudindose generar ms rpidamente algunas molculas requeridas por la clula. Las membranas biolgicas son estructuras muy dinmicas (flexibles) permitiendo a los componentes celulares y subcelulares los cambios de forma que acompaan al crecimiento celular y al movimiento (movimiento ameboideo). Gracias a la fluidez de las membranas sus componentes lipdicos y proteicos son capaces de moverse e interactuar. Las membranas son autosellantes (por razones termodinmicas), lo que permite entre otras cosas que dos membranas se fusionen como ocurre en el fenmeno de la exocitosis. En las membranas, hay protenas integrales que atraviesan la bicapa lipdica tales como: protenas transportadoras o portadoras (carriers) que translocan iones y solutos orgnicos a travs de la membrana; receptores que se combinan con molculas especficas externas (ligandos o primeros mensajeros) tales como hormonas, neurotransmisores, factores de crecimiento, provocando que la membrana genere una seal que puede estimular o inhibir una respuesta celular (transduccin de seales); molculas de adhesin que hacen posible que las clulas se reconozcan y se adhieran entre s y con componentes de la matriz extracelular.

En las superficies de la bicapa lipdica, se encuentran protenas perifricas. Algunas de estas protenas participan en reacciones enzimticas y en vas de sealizacin intracelular. Otras forman un esqueleto sobre la superficie citoplasmtica que refuerza la frgil bicapa lipdica y la une a microfilamentos o a filamentos intermedios del citoesqueleto. La membrana plasmtica funciona como una barrera de

semipermeabilidad entre la clula y el medio extracelular, es decir, restringe y regula el paso de solutos hacia y desde el interior celular. Las membranas tambin controlan el paso de sustancias hacia y desde los organelos celulares. La membrana plasmtica, se caracteriza tambin por presentar una continuidad transitoria con el sistema endomembranoso a travs de las vesculas de exocitosis.

Cmo las membranas biolgicas pueden realizar diferentes funciones? Un enfoque experimental que se ha utilizado para responder la anterior interrogante, ha sido determinar primero qu componentes qumicos son comunes y cules son nicos en las diferentes membranas biolgicas. Despus, se han estudiado las propiedades qumicas y fisicoqumicas de los distintos componentes de las membranas biolgicas y cmo estos componentes se asocian e interaccionan entre ellos para formar estructuras moleculares estables y dinmicas. Finalmente, considerando los aspectos anteriores, se han elaborado modelos de membranas biolgicas que permitan explicar dicha diversidad funcional. Dichos modelos son muy importantes en el estudio de los organismos biolgicos. Un buen modelo incorpora lo que se conoce acerca de una entidad y agrega la mejor aproximacin acerca de aquellas partes que faltan y/o las formas en que se interrelacionan. Los modelos, al igual que las hiptesis, pueden resultar errneos, pero ellos sirven como un valioso elemento si estimulan los experimentos y la investigacin necesaria para confirmar la evidencia. No

obstante, los modelos son hipotticos y no deben ser considerados ms all de lo que son. As, a pesar de su gran utilidad, los modelos no pueden sustituir las mediciones y los experimentos en un sistema real.

Constituyentes qumicos principales de las Membranas Biolgicas. Para la determinacin de los componentes qumicos presentes en las diferentes membranas biolgicas fue necesario previamente contar con preparaciones de membranas puras provenientes de diversas fuentes. Las membranas bajo estudio fueron primero aisladas como una entidad separada (deben retener alguna o la mayora de las propiedades apreciadas en observaciones morfolgicas o estudios de permeabilidad en clulas intactas o en organelos celulares) a partir de homogenizados de tejidos (hgado, rin, etc.) obtenidos por diferentes tcnicas, mediante centrifugacin diferencial y/o centrifugacin en gradiente de densidad y luego procesadas para su purificacin. Una preparacin muy estudiada, ha sido la de membranas de glbulos rojos maduros de mamferos (fantasmas). Posteriormente, se realiz el anlisis qumico de los constituyentes de las membranas empleando entre otras tcnicas, las cromatogrficas. Los resultados obtenidos, mostraron los diversos componentes lipdicos, proteicos e hidratos de carbono existentes en aquellas. Despus de alcanzar el conocimiento de la composicin qumica de las membranas, se realizaron estudios fsicoqumicos de los componentes puros, los cuales han ido revelando la organizacin de las membranas y la forma cmo los constituyentes de ellas interactan mutuamente y cmo se afectan unos a otros. Todas las membranas biolgicas estn compuestas principalmente de lpidos y protenas. Los componentes lipdicos no slo afectan la forma celular sino que desempean roles importantes como en el anclaje de protenas a la membrana, en la modificacin de actividades de protenas de membrana (microambiente lipdico) y en la transduccin de seales (fosfatidilinositol). La funcin principal de cada membrana, est determinada esencialmente por el complemento de protenas que posee y por las protenas adyacentes a aquella.

La mayora de las membranas plasmticas de mamferos presentan adems carbohidratos (2-10% en peso). Con la excepcin de las membranas del aparato de Golgi, la mayora de las membranas intracelulares tienen muy bajo contenido de hidratos de carbono. Los carbohidratos no estn en las membranas animales como componentes individuales sino que en su mayora unidos covalentemente al OH de una serina o treonina (enlace O-glicosdico o unin O) o al grupo amida de una asparagina (enlace N-glicosdico o unin N) pertenecientes a protenas de membrana a la forma de glicoprotenas y en menor proporcin tambin covalentemente unidos a lpidos de membrana, como glicolpidos. La proporcin entre lpidos y protenas vara considerablemente

dependiendo del tipo de membrana, del organismo y del tipo celular (Tabla 1).

Tabla 1. Composicin (% en peso) de membranas plasmticas e intracelulares.


Membrana Mielina (SNC humano) Eritrocito (humano) Hgado (rata) Mitocondria (cerdo) Membrana interna membrana externa Microsomas (bovino) RE rugoso RE liso B. subtilis 55 47 80 45 53 20 76 55 24 45 (1-2) Protena 18 49 58 Lpido 79 43 42 Carbohidrato 3 8 (5-10)

En la tabla anterior, se puede apreciar que en las membranas plasmticas de clulas animales la relacin entre protenas y lpidos es aproximadamente 1:1, mientras que en las membranas internas el contenido de protenas suele ser mayor. Por otro lado, las membranas que forman la vaina de mielina, cuya funcin principal es ser un aislante elctrico, presenta alrededor de 80% de lpidos. Estas diferencias sealadas y otras pueden ser correlacionadas con las funciones bsicas de estas membranas. La membrana interna de la mitocondria,

presenta numerosas protenas relacionadas con procesos como la fosforilacin oxidativa, la cadena transportadora de electrones y el transporte de metabolitos. Lpidos de las membranas. Los componentes lipdicos de las membranas contribuyen a la funcin de barrera de las membranas. El lpido es tambin responsable de la fluidez y la flexibilidad/curvatura de las membranas. La flexibilidad de las membranas es esencial para la formacin de vesculas provenientes de membranas y para la fusin de membranas como se indic anteriormente. Los lpidos son tambin muy importantes en numerosas vas de sealizacin celular. Hay tres clases de lpidos de membranas celulares animales:

fosfoglicridos, esfingolpidos, y colesterol. La cantidad y el tipo de lpidos que se encuentran en las membranas de clulas diferentes de un organismo determinado son variables, incluso en las diversas membranas de un mismo tipo celular. Los lpidos de membrana son molculas anfipticas, esto es, parte de la molcula es hidrofbica; y parte es hidroflica pudiendo por tanto interaccionar con molculas apolares y con molculas polares (agua). Debido a la forma y la naturaleza anfiptica los lpidos (excepto el colesterol), forman espontneamente bicapas en solventes acuosos, en las cuales las zonas hidroflicas estn expuestas al medio acuoso y las zonas hidrofbicas alejadas del contacto con el agua. La estructura de la bicapa lipdica es mantenida por interacciones hidrofbicas entre las cadenas alifticas de los cidos grasos de los fosfolpidos. Los fosfoglicridos juegan un papel esencial en la sntesis de lipoprotenas plasmticas y eicosanoides. Ellos funcionan tambin en la transduccin de mensajes desde los receptores de la superficie celular a segundos mensajeros que controlan los procesos celulares. Tambin juegan un rol fisiolgico muy importante como surfactante pulmonar (Dipalmitoil fostatililcolina). El colesterol es principalmente de origen animal y es un constituyente esencial de las membranas celulares, especialmente en la membrana plasmtica.

Fosfoglicridos.

Los fosfoglicridos son comnmente llamados fosfolpidos, pero este trmino es impreciso ya que otros lpidos tambin contienen fosfato. Son la clase ms abundante de los lpidos de las membranas biolgicas. Son derivados acilados del sn-glicerol-3-fosfato. En trminos estrictos, esta definicin es la de cido fosfatdico, el cual est virtualmente ausente en la mayora de las membranas. En general, los cidos grasos en el C-1 del glicerol son generalmente saturados pero pueden presentar un doble enlace y habitualmente tienen 16 o 18 tomos de carbono, mientras los cidos grasos en el C-2 tienen 1 a 4 dobles enlaces y con 18 a 24 tomos de carbono (cada doble enlace genera una curvatura, kink, permanente en la cadena aliftica de los cidos grasos). La anterior regin es de naturaleza hidrofbica y se le suele denominar cola o tallo. Los fosfoglicridos ms abundantes contienen a su vez un radical hidrfilo, que puede ser un grupo polar nitrogenado (colina, serina o etanolamina), inositol o bien glicerol, unido mediante enlace ster al grupo fosfato del cido fosfatdico. Esta ltima regin es hidroflica y se le llama cabeza polar. Tambin es considerado como fosfolpido por su parecido estructural el difosfatidilglicerol o cardiolipina, presente en las membranas mitocondriales interna y externa, que tiene dos cidos fosfatdicos unidos a glicerol. Los fosfoglicridos son, por lo tanto, molculas anfipticas o anfiflicas con colas apolares o hidrofbicas y cabezas polares o hidroflicas (Figura 2).

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Figura 2. Estructura qumica de un fosfoglicrido, 1,2-dipalmitoilfosfatidilcolina (1,2dihexadecanoil-sn-glicero-3-fosfocolina). Se muestra en rectngulos, la cabeza polar y la cola apolar del fosfolpido (molcula anfiptica).

El signo de la carga elctrica de la cabeza polar depende del pH. A pH fisiolgico, fosfatidilserina y fosfatidilinositol presentan una carga negativa neta, fosfatidiletanolamina (nombre trivial, cefalina) y fosfatidilcolina (nombre trivial, lecitina) son neutros. Lo anterior, se ilustra en la Figura 3.

Figura 3. Representacin de la estructura qumica de los fosfolpidos: fosfatidilserina (PS), fosfatidilinositol (PI), fosfatidiletanolamina (PE) y fosfatidilcolina (PC).

De los fosfolpidos, la fosfatidilcolina y la fosfatidiletanolamina son los ms abundantes, representando entre los dos, el 30 a 40% (en peso) de todos los lpidos de la membrana plasmtica, y hasta el 75% en algunas membranas

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internas. La fosfatidilserina y el fosfatidilinositol, estn tambin presentes en las membranas, pero en menor proporcin (1 a 10%). Los fosfolpidos que contienen inositol (un hexahidroxil alcohol) referidos generalmente como fosfoinositidos, tienen un rol destacado en la comunicacin intracelular. Fosfatidilinositol 4-fosfato (PIP) y fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PIP2) estn presentes en membranas plasmticas. El PIP2 es la fuente de inositol trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG o DG), sealados como segundos mensajeros y que estn involucrados en la accin de algunas hormonas. Otro grupo de lpidos derivados de los fosfoglicridos son los plasmalgenos, que poseen una cadena aliftica unida a glicerol por un enlace ster, y una larga cadena aliftica unida al C-1 del glicerol por un enlace ter , insaturado. Los plasmalgenos que contienen etanolamina o colina esterificados al fosfato son abundantes en cerebro y corazn. En tejido cardiaco ms del 50% de los glicerofosfolpidos conteniendo etanolamina son plasmalgenos. Se ha informado de altos niveles de plasmalgenos en membranas plasmticas de clulas cancerosas metastsicas, sugiriendo con esto que estas molculas pueden tener un rol en las caractersticas invasivas de estas clulas.

Los esfingolpidos son derivados de esfingosina. Los esfingolpidos tienen una estructura diferente a la de los fosfolpidos. En vez de glicerol, los esfingolpidos contienen ceramida (Figura 4b), unidad estructural fundamental de todos los esfingolpidos, la cual es una molcula de esfingosina, amino alcohol de 18 tomos de carbono (Figura 4a), unida a un cido graso por su grupo amino. Es frecuente que presenten cidos grasos saturados de cadena larga (20 a 24 tomos de carbono). Los diferentes esfingolpidos, tienen grupos adicionales unidos al alcohol de la esfingosina. Si este grupo adicional es fosforilcolina o fosfoetanolamina, la molcula resultante es una esfingomielina (Figura 4c), la cual a pH fisiolgico es una molcula neutra. Las esfingomielinas son tambin molculas anfipticas.

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La esfingomielina que es considerada como fosfolpido, porque contiene fsforo, es el esfingolpido ms abundante en los tejidos de mamferos, representando 10-20% de los lpidos de membranas plasmticas y 1-5% en la mayora de las membranas internas. La mielina que rodea y asla elctricamente a muchos axones en las neuronas del tejido nervioso, es particularmente rica en esfingomielinas. Las propiedades fsicas de los esfingolpidos son similares a los de los fosfoglicridos, con los cuales ellos son encontrados en muchas membranas biolgicas. El tallo hidrocarburo de esfingosina y el cido graso contribuyen a la bicapa hidrofbica, y los grupos de las cabezas polares son expuestos hacia la superficie.

c
Figura 4. Representacin de la estructura de: a) esfingosina, b) ceramida, y c) esfingomielina (SM).

Si el grupo adicional unido al alcohol de esfingosina es un azcar, se genera un esfingoglicolpido o glicoesfingolpido. Los esfingoglicolpidos son derivados de ceramida, que presentan monosacridos u oligosacridos, unidos mediante un enlace -glicosdico al grupo 1-OH de la esfingosina en una ceramida; no contienen fosfato y son con mucha frecuencia elctricamente

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neutros. Los glicolpidos, se hallan en la superficie externa de la membrana y son los lpidos que presentan la mayor asimetra en su distribucin en las membranas. Dependiendo de la naturaleza del azcar, se distinguen diversos glicoesfingolpidos: cerebrsidos, sulftidos, globsidos y ganglisidos. Los cerebrsidos que tienen glucosa o galactosa unida a la cermida dan origen a los glicocerebrsidos y galactocerebrsidos respectivamente. Son compuestos neutros. Los galactocerebrsidos, se encuentran en cantidad apreciable en el cerebro y tejido nervioso (mielina tiene un alto contenido de un galactocerebrsido), mientras que pequeas cantidades de cerebrsidos presentes en tejidos no neuronales normalmente contienen glucosa. Los sulftidos son los steres sulfricos de los cerebrsidos. Los ms frecuentes son los derivados de los galactocerebrsidos, donde el grupo sulfato esterifica el C3 del azcar. Galactocerebrsido 3-sulfato, es el principal sulfolpido en el cerebro, dando cuenta de aproximadamente 15% de los lpidos de la materia blanca. Los cerebrsidos y los sulftidos normalmente contienen cidos grasos con 22-26 tomos de carbono. Estos ltimos compuestos son inicos. Los globsidos, son glicoesfingolpidos neutros con dos o ms azcares, normalmente D-glucosa, D-galactosa o N-acetil-D-galactosamina. Los globsidos y los cerebrsidos son a veces llamados glicolpidos neutros, ya que a pH fisiolgico no presentan carga elctrica neta. Los ganglisidos (Figura 5), los glicolpidos ms complejos contienen un grupo oligosacrido (el nmero de hexosas vara entre uno y cuatro) que tiene de uno o varios residuos de cido N-acetilneuramnico (cido silico); son compuestos anfipticos con una carga negativa a pH fisiolgico. Los ganglisidos son abundantes en las membranas plasmticas de las neuronas donde constituyen 5-10% del total de los lpidos. Ellos tambin se encuentran en menores cantidades en membranas plasmticas de clulas de la mayora de los tejidos extraneuronales. Su nomenclatura abreviada hace referencia al nmero de cidos silicos que contienen (M: un cido silico; D: dos cidos silicos; etc.), y el nmero, a su posicin relativa de migracin en cromatografa de capa fina.

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Figura 5. Frmula estructural del ganglisido GM1.

La porcin oligosacrida de los ganglisidos, se extiende ms all de la superficie de la membrana, participa en el reconocimiento clula-clula, y sirve como sitio de unin para hormonas y toxinas bacterianas. El ganglisido GM1 (Figura 5), sirve como un receptor de la membrana celular para la toxina del clera, una protena secretada por el patgeno Vibrio cholerae. Tambin las toxinas de las bacterias del ttanos, del botulismo y de la difteria, se unen selectivamente a ciertos oligosacridos de los ganglisidos presentes en la superficie celular. Algunos desrdenes de almacenamiento de lpidos (gangliosidosis), implican acumulacin de ganglisidos en las clulas. Las dos gangliosidosis ms comunes, conducen al almacenamiento de los gangliosidos GM1 (gangliosidosis generalizada) y GM2 (enfermedad de Tay-Sachs) Por lo anterior, los ganglisidos tienen adems una importancia mdica.

Colesterol. El colesterol es un componente mayoritario de las membranas plasmticas animales. En las membranas de organelos, se encuentra en menor cantidad. Las

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membranas de procariontes no contienen colesterol (ver Tabla 2). Un poco ms de la mitad del colesterol del cuerpo proviene de sntesis y el resto es proporcionado por la dieta promedio. El colesterol es una molcula planar rgida, ms pequea y con un carcter anfiptico menor que el de otros lpidos. El colesterol al igual que los esteroides, que son predominantemente de origen eucarionte, es derivado de un compuesto llamado ciclopentanoperhidrofenantreno (Figura 6a).

a
orientadas e intercaladas en ambas monocapas lipdicas.

Figura 6. a) La estructura qumica del colesterol, b) Las molculas de colesterol estn

El colesterol, es una molcula antiptica y como tal se orienta con su pequeo grupo OH polar hacia la superficie de la membrana interaccionando con las cabezas polares de los fosfolpidos, y con su regin hidrofbica (anillo esteroidal) embebida en el interior de la membrana (Figura 6b). El colesterol, es un modulador o tampn de los cambios de la fluidez de la bicapa lipdica. El efecto neto del colesterol en la fluidez de la membrana depende la proporcin de fosfolpidos (PC, PE) y esfingolpidos (SM). Adems, el colesterol restringe el movimiento de las colas de los fosfolpidos en la zona cercana a los grupos polares y hace a la membrana menos deformable, esto es, refuerza la estabilidad de la membrana.

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El colesterol es un precursor de los cidos biliares formados en el hgado. Es tambin precursor de hormonas esteroidales (cortisol, aldosterona, andrgenos, estrgenos, progestgenos), y glicsidos cardacos. El colesterol est presente en los tejidos y en el plasma ya sea como colesterol libre o como una forma almacenable, combinado con un cido de cadena larga a la forma de ster de colesterilo. En el plasma, ambas formas son transportadas en lipoprotenas. Los porcentajes de algunos de los principales tipos de lpidos de una variedad de membranas, se muestran en la tabla 2.

Tabla 2. Composicin lipdica (% en peso lpido total) de membranas tpicas. Mielina Colesterol PC (lecitina) PE (cefalina) SM PS PG Resto* 25 11 14 6 7 0 37 G. R. 25 23 20 18 11 0 3 Mitocondria 5 48 28 0 0 1 18 Microsoma 6 55 18 0 9 0 13 E. coli 0 0 82 0 0 7 11

*Principalmente cerebrsidos en el caso de mielina, y cardiolipina (difosfatidilglicerol) en el caso de mitocondria y E. Coli.

Bicapa lipdica. A pesar de la variabilidad en la composicin fosfolipdica de las membranas biolgicas, la unidad estructural es siempre una bicapa (Figura 7), una estructura laminar compuesta de dos capas de molculas de fosfolpidos en aposicin cuyas cabezas polares enfrentan el medio acuoso y cuyas colas alifticas forman un medio hidrofbico de alrededor de 3 nm (30 ) de espesor. La bicapa lipdica, es una consecuencia de la orientacin espontnea energticamente ms favorable de las molculas de fosfolpidos (tienen forma

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cilndrica) y de esfingolpidos en un medio acuoso. Las cabezas hidroflicas de los lpidos estn en contacto con el agua en cada superficie de la bicapa, y las colas hidrofbicas de cada monocapa estn excluidas del contacto con el agua en el interior, interaccionando entre ellas. La estabilidad de la bicapa depende de las interacciones hidrofbicas entre las cadenas acil lipdicas de los fosfolpidos: las interacciones de van der Waals entre las cadenas alifticas que favorecen el empaquetamiento de las colas. Tambin contribuyen los enlaces de hidrgeno y las interacciones electrostticas entre las cabezas polares de los fosfolpidos y el agua. Otros lpidos que poseen grupos de la cabeza hidratados ms anchos que las cadenas alifticas tales como cidos grasos libres, lisofosfolpidos (slo tienen un cido graso) y detergentes tales como el dodecil sulfato de sodio (SDS), tienen forma cnica, y forman micelas (estructuras esfricas constituidas por molculas con sus regiones hidrofbicas agregadas en el interior excluidas del contacto con el agua y sus regiones polares en la superficie interaccionando con el agua) cuando se colocan en un medio acuoso. El colesterol no forma bicapas por s slo, pero se integra fcilmente en las bicapas formadas por otros lpidos anfipticos. Las mismas fuerzas impulsoras de la formacin de bicapas lipdicas proveen otra propiedad importante, el autosellado. Si se interrumpe mecnicamente la continuidad de una bicapa, sta se cierra o autorrepara por razones termodinmicas ya que es energticamente desfavorable que un borde libre con cadenas alifticas est expuesto al agua. La bicapa lipdica es un fluido bidimensional, en que los fosfolpidos, difunden rpidamente en el plano de la membrana. La difusin lateral de lpidos en las membranas, se ha estudiado cuantitativamente con tcnicas espectroscpicas, y la de lpidos y protenas de membrana, por medio de la tcnica de recuperacin de fluorescencia despus de fotoblanqueado o FRAP (fluorescente recovery after photobleaching). Los fosfolpidos intercambian lugar con sus vecinos ~10
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veces por

segundo, lo que significa que una molcula puede difundir en el plano de la

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membrana 1-2 mm en 1 segundo. Los fosfolpidos pueden experimentar tambin movimientos de rotacin en torno a un eje perpendicular a la membrana y de flexin (Figura 8). Sin embargo, estudios recientes sugieren que no todos los lpidos difunden libremente en la membrana plasmtica. El flip-flop o difusin transversal de los fosfolpidos (Figura 7) rara vez ocurre espontneamente debido a que no est termodinmicamente favorecido. Sin embargo, las clulas poseen enzimas llamadas flipasas, que mueven activamente ciertos fosfolpidos desde una superficie de la membrana a la otra. Estas enzimas desempean un rol en el establecimiento de la asimetra lipdica en las membranas celulares.

Figura 7. Bicapa lipdica. Algunos de los movimientos que exhiben los fosfolpidos en la bicapa.

Fluidez de las membranas. La fluidez es un reflejo de la viscosidad dentro de la membrana. La viscosidad est determinada por la movilidad de los componentes qumicos individuales de la membrana. A baja temperatura, los fosfolpidos estn en un estado gel en que las colas hidrofbicas de los cidos grasos estn totalmente extendidas, y las interacciones de van der Waals entre colas adyacentes estn maximizadas conduciendo a una estructura rgida, cristalina. A medida que la temperatura aumenta, se produce una transicin de fase a un estado cristal-lquido, con un incremento de la fluidez como se muestra en la figura siguiente.

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Figura 8. Estructuras gel (rgida) y cristal-liquido (fluida) de la bicapa fosfolipdica.

Los doble enlaces cis de los cidos grasos, interfieren la transicin al estado gel porque impiden que las cadenas alifticas de las colas de los fosfolpidos se compacten y formen una estructura ms rgida, y disminuyen la temperatura de transicin de fase (Tm). El anterior fenmeno, ha sido estudiado en liposomas unilamelares (vesculas esfricas constituidas por una bicapa lipdica que separa el medio externo de un compartimiento acuoso interno) preparados a partir de un fosfolpido puro o de una mezcla de ellos. Tambin los liposomas, se han empleado en estudios de transporte biolgico aunque limitados por el pequeo tamao de estas vesculas. Para tal efecto, se incorporan protenas en los liposomas (proteoliposomas) al momento de prepararlos. As, los liposomas han sido utilizados como modelos de membrana siendo menos complejo su estudio que el de las propias membranas biolgicas. Otro tipo de preparacin de membranas sintticas o artificiales empleadas han sido las membranas planas (black lipid membranes) las que se forman al pincelar con una solucin de lpido un orificio de 1-2 mm de dimetro existente en un tabique de material hidrofbico (tefln) que separa dos compartimientos acuosos. Esta tcnica se ha empleado en estudios de permeabilidad de dichas membranas, o de la funcin de canales o protenas transportadoras incorporadas a estas membranas artificiales. El interior de una bicapa lipdica de una membrana, es normalmente altamente fluido, ya que los cidos grasos estn a una temperatura sobre sus Tm. En el estado fluido, las colas hidrofbicas de los fosfolpidos estn desordenadas y en constante movimiento.

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Los organismos poiquilotermos o hibernadores y los procariontes pueden regular la composicin lipdica, y as la fluidez de la membrana, a fin de responder a cambios de temperatura en el medio externo. El grado de fluidez puede ser controlado en dichos organismos por modificacin de: a) la longitud de las cadenas alifticas de los cidos grasos; mientras ms corta es la cadena menor la Tm y viceversa, y b) la cantidad de doble enlaces presentes en dichas cadenas; la introduccin de doble enlace baja la Tm.

Importancia de la fluidez. Muchos procesos celulares bsicos dependen del movimiento de componentes de la membrana, lo que es posible gracias a la fluidez de la membrana. La fluidez permite que ocurran entre otros procesos celulares: el ensamblaje de membranas, la asociacin de protenas de membrana, la unin de ligandos a sus receptores y que se genere la transduccin de seales, el funcionamiento correcto de los sistemas de transporte y las enzimas (transduccin de energa), la distribucin de los lpidos y protenas de membrana desde sus sitios de sntesis, y la distribucin de molculas de membrana entre clulas hijas cuando una clula se divide.

Rafts o microdominios lipdicos. Por muchos aos, se asumi que la distribucin de los lpidos en las membranas, si bien asimtrica era al azar. Recientes evidencias indican que islas de esfingolpidos y colesterol pueden segregarse de los otros lpidos para formar los rafts (balsas) o microdominios lipdicos. La cara externa del raft consiste principalmente de: esfingolpidos, glicoesfingolpidos y colesterol e influye en la organizacin de la cara interna que presenta principalmente colesterol y fosfolpidos con cidos grasos saturados. Debido a que las cadenas alifticas de sus lpidos son ms largas y rectas que la mayora de los lpidos de membrana, los rafts poseen un mayor grosor y son ms ordenados, menos fluidos que los microdominios vecinos ricos en fosfolpidos. Los rafts tienen un tamao aproximado 50 a 70 nm. Se cree que protenas ancladas

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por GPI y protenas miristoiladas estn asociadas a rafts. Los rafts participaran en: polarizacin y trfico de membranas, transduccin de seales e infeccin viral. A partir de rafts lipdicos por polimerizacin de caveolina, protena integral con dos dominios globulares con un dominio hidrofbico con forma de horquilla que une la protena a la cara citoslica de la membrana plasmtica, se forman las caveolas, pequeas invaginaciones locales de las membranas plasmticas de clulas endoteliales y epiteliales. Tienen un dimetro de 50 a 100 nm. Se relacionan con funciones tales como: endocitosis, transcitosis de albmina y otras protenas en endotelios, homeostasis del colesterol y transduccin de seales.

Alteraciones patolgicas de la composicin lipdica y de la fluidez de la membrana. Hay dos tipos de anormalidades reconocidas en los lpidos de membrana y ambos pueden ser atribuidos a causas hereditarias. El primer grupo incluye a la fibrosis qustica o cstica del pncreas, glicosuria renal, cistinuria y acidosis tubular renal, y el sndrome de Fanconi (disfuncin del tbulo proximal renal) entre otras patologas. El segundo grupo involucra defectos en las enzimas encargadas del metabolismo de esfingolpidos, de las cuales algunas estn confinadas principalmente en el sistema nervioso causando neurodegeneracin y acortamiento de la expectativa de vida, mientras otras tienen implicancia en una serie de otros tejidos. Las dolencias se caracterizan por una acumulacin de esfingolpidos especficos de membrana en el interior de las clulas; el defecto generalmente radica en la falla del catabolismo (hidrlisis) de los lpidos que tiene lugar en los lisosomas. Se conocen varias enfermedades de este tipo que se manifiestan a menudo en la infancia; Niemann-Pick (esfingomielinosis), Tay-Sachs (gangliosidosis GM2) y Gaucher (cerebrosidosis). Alteraciones del metabolismo de cerebrsido sulfato (Leucodistrofia metacromtica) y trihexsido ceramida (enfermedad de Fabri) han sido a su vez documentadas. Existen anormalidades de la fluidez de la membrana en ciertas enfermedades. En la cirrosis heptica provocada por la ingesta de alcohol, los eritrocitos se destruyen prematuramente en el bazo. El contenido de colesterol en

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las membranas de los glbulos rojos est aumentado en 25-65%. Tambin se ha informado que la razn de cidos grasos insaturados/saturados est disminuida significativamente. Estos cambios pueden afectar la fluidez de la membrana del eritrocito y eventualmente las funciones de la clula. As, el efecto intoxicante del alcohol en el sistema nervioso puede deberse a la modificacin de la fluidez y a la alteracin funcional concomitante de receptores y canales ubicados en las membranas. Individuos con abetalipoproteinemia que presentan falla en el transporte y absorcin de lpidos, tienen aumentado el contenido de esfingomielina y disminuido el de fosfatidilcolina en las membranas celulares, lo que produce una modificacin de la fluidez de la membrana de los glbulos rojos (acantocitosis, forma espinada).

Protenas de membrana. Todas las membranas celulares poseen la estructura de un bicapa

lipdica, sin embargo, mucha de las funciones claves de una membrana son debidas a las protenas que la atraviesan o que se asocian con ella. Todas las membranas biolgicas contienen protenas cuyas propiedades dependen del tipo de clula y de la localizacin subcelular. El tipo y cantidad de protenas que componen las membranas es muy variable. Por ejemplo, la membrana mitocondrial interna contiene poco ms de 70% de protenas y la mielina slo 18%. El alto contenido de lpido de la mielina posibilita que asle elctricamente a una neurona de su medio ambiente. En una membrana que contiene un 50% de protenas y ya que las protenas son mucho ms grandes que los lpidos, hay 50 a 100 molculas de fosfolpidos por molcula de protena. Las protenas de membrana son principalmente glicoprotenas.

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Asociacin de las protenas a las membranas biolgicas. Las protenas de membrana pueden clasificarse de acuerdo a sus interacciones con las membranas en: integrales o intrnsecas, perifricas o extrnsecas y unidas o ancladas por lpidos (Figura 9).

Figura 9. Tipos de protenas de membrana.

Protenas integrales. Las protenas integrales, requieren detergente a fin de ser extradas desde las membranas. Lo anterior pone de manifiesto que la interaccin de las protenas integrales con la bicapa lipdica es de tipo hidrofbico (Figura 9a). La insercin de protenas integrales en el interior apolar de la bicapa, se pudo visualizar mediante microscopa electrnica de transmisin (TEM) de superficies de fractura por congelamiento o criofractura (freeze-fracture). En esta tcnica la membrana en estudio es congelada rpidamente a 196C y luego es fracturada con una cuchilla de ultramicrotomo. La fractura ocurre por la parte central de la bicapa, separndose en las dos monocapas constituyentes con sus superficies hidrofbicas expuestas. Al observar al TEM, rplicas metlicas de las superficies, se aprecian en ellas partculas de 5-10 nm de dimetro, que corresponden a protenas integrales que penetran la bicapa. En general, las superficies expuestas de una misma membrana difieren en el nmero y tamao de

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las partculas, lo que significa que las protenas integrales no tienen una distribucin simtrica en las membranas. Al observar preparaciones de bicapas lipdicas, stas muestran slo superficies de criofractura lisas. Una protena integral unipaso, atraviesa la bicapa con un dominio hidrofbico interior, formado por alrededor de 20 residuos de aminocidos generalmente apolares, y con dominios extracelular y citoplasmtico hidroflicos, de tamao variable dependiendo de la funcin de la protena, hacia las fases acuosas. La glicoforina A, glicoprotena de la membrana del eritrocito, fue la primera protena de esta clase en la que se demostr por mtodos qumicos que atraviesa una vez la bicapa. Esta protena integral presenta: a) un dominio N-terminal hidroflico en el lado externo de la membrana, que consta de 72 residuos de aminocidos y de 16 cadenas de oligosacridos (~60% de la masa molecular), b) un dominio hidroflico de 40 residuos de aminocidos en el lado citoslico, con numerosos residuos de aminocidos con carga elctrica y el extremo C-terminal, y c) un segmento hidrofbico de 19 residuos de aminocidos que atraviesa la bicapa. Un aspecto destacable en esta glicoprotena es la presencia de cido silico y por tanto de carga negativa en el extremo de cada cadena de oligosacrido las que pueden permitir a los eritrocitos repelerse unos a otros y prevenir el agrupamiento de los mismos cuando circulan por vasos finos. Otras protenas transmembrnicas (canales y transportadores) atraviesan varias veces la bicapa. Por ejemplo, los transportadores de glucosa atraviesan 12 veces la membrana. Un tipo importante de receptores hormonales (receptor acoplado a protena G) atraviesan la membrana 7 veces. Algunas protenas integrales estn inmersas (alfa hlices hidrofbicas) slo parcialmente en la bicapa (Figura 9b), por aos se crey que este tipo de protena no exista, pero la melitina (veneno de abeja) y la prostanglandina H2 sintasa comprueban lo contrario. Muchas protenas transmembrnicas, se asocian a otras protenas transmembrnicas para formar dmeros, trmeros, tetrmeros, etc. Por ejemplo, receptores para protenas de la matriz extracelular (colgeno, fibronectina y lamininas) son conocidas como integrinas, protenas heterodimricas con una

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subunidad alfa y una beta, cada una de las cuales atraviesa la membrana slo una vez. Las subunidades se mantienen unidas por interacciones no covalentes. Adems de unirse entre s y con otros componentes de la membrana, las protenas pueden unirse a protenas del citoplasma que las anclan a los microfilamentos, microtbulos, filamentos intermedios o forman parte de alguna cadena de transduccin de seales. Anlogamente, hay protenas que reconocen y se unen a componentes de la matriz extracelular, o forman estructuras que les permiten asociarse a clulas vecinas, como es el caso de los desmosomas, uniones oclusivas y uniones comunicantes. La regin de la protena que atraviesa la membrana es en la mayora de los casos una a-hlice, pero en otros como el de las porinas de la membrana externa de bacterias Gram negativa (E. Coli) y las porinas de la membrana mitocondrial externa es un barril b, en el cual 8-22 hojas beta antiparalelas conforman una estructura cilndrica en forma de barril. Estas estructuras, presentan poros centrales que permiten el transporte de pequeas molculas hidroflicas que incluyen nutrientes y productos de deshecho. No todos los barriles beta son protenas de transporte. Algunas de estas ltimas protenas de bacterias funcionan como receptores o enzimas. Las mismas fuerzas termodinmicas que favorecen la formacin de una ahlice en el interior apolar de una bicapa lipdica estabilizan tambin los barriles beta. En estos barriles b de membrana, cada hoja beta est unida rgidamente a sus vecinas por uniones hidrgeno, de manera que es improbable que ocurran cambios conformacionales como sucede en las a-hlices de protenas de membrana.

Protenas perifricas. Las protenas perifricas (Figura 9d), pueden ser extradas desde las membranas por tratamientos suaves como soluciones de alta fuerza inica o con tampones de alto o bajo pH. Al removerlas o solubilizarlas, no se altera la estructura de las bicapas lipdicas.

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Este tipo de protenas de membrana, estn asociadas con la membrana a travs de interacciones dbiles no covalentes: puentes salinos e interacciones electrostticas. Aunque los puntos de interaccin podran ser las cabezas polares de los fosfolpidos, las protenas perifricas suelen estar unidas especficamente a determinadas protenas integrales por interacciones no covalentes. Es el caso de la ankirina unida al canal aninico presente en eritrocitos. Fosfolpidos de membranas cargados negativamente (PS) pueden interactuar con regiones positivas de protenas, permitiendo una interaccin electrosttica entre ellas que mantiene unida dichas protenas a la bicapa lipdica. Numerosas protenas perifricas, se unen a los dominios citoplasmticos de protenas integrales de membrana, tales como las cateninas unidas a protenas transmembrnicas de adhesin llamadas cadherinas. Estas interacciones protena-protena anclan el citoesqueleto a protenas transmembrnicas de adhesin. Las interacciones protena-protena, tambin proporcionan un modo de transmitir informacin a travs de una membrana. La unin de un ligando al dominio extracelular de un receptor transmembrnico puede cambiar la conformacin de su dominio citoplasmtico, propiciando interacciones con protenas citoplasmticas las que transmiten a su vez seales intracelulares.

Protenas ancladas por lpidos. En las clulas eucariontes, existen protenas que tienen uno o ms lpidos de diferentes tipos unidos a ellas covalentemente. Estos lpidos proporcionan una ancla hidrofbica que se inserta en la bicapa lipdica y mantiene a estas protenas unidas a una u otra superficie de la membrana plasmtica y a ciertas otras membranas celulares (Figura 9c). Las protenas de membrana, pueden estar asociadas a la cara citoslica de una membrana a travs de simple cadena aliftica de cido mirstico (14:0) que es unido postraduccionalmente al grupo amino de un residuo de glicina del extremo N-terminal del polipptido como ocurre en la protena tirosina quinasa Src (sarcoma de Rous) y otras protenas que participan en sealizacin celular o a

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travs de cido palmtico (16:0) unido va enlace tioster a un residuo interno de cisterna de la protena (Figura 10b).

Figura 10. Protenas de membrana ancladas a la bicapa.

Un segundo grupo de protenas citoslicas est asociada a membranas por un grupo prenilo (farnesil de 15 tomos de carbono o geranilgeranil de 20 tomos de carbono) que es aadido postraduccionalmente a travs de un enlace tioter al grupo SH de un residuo de cistena del extremo C-terminal (Figura 10a). En algunos casos, un segundo grupo geranilgeranil o un grupo palmitato est unido a un residuo cistena vecino reforzando la unin a la membrana (protena Ras). Las protenas ancladas por estas cadenas alifticas estn localizadas en la superficie interna de la membrana plasmtica. Algunas protenas de la superficie celular y proteoglicanos altamente glicosilados de la matriz extracelular estn unidas a la superficie externa de la membrana plasmtica por un tercer tipo de grupo de anclaje, un linker oligosacrido, GPI (glicosilfosfatidilinositol). Las anclas de GPI son derivados del fosfatidilinositol, el cual est inmerso en la bicapa mediante sus dos cadenas alifticas, y lleva una corta cadena oligosacrida unida covalentemente al residuo carboxi terminal de una protena a travs de fosfoetanolamina (Figura 10c). Las protenas ancladas por GPI estn siempre en la cara extracelular de la membrana plasmtica. El antgeno de superficie Thy-1 (linfocitos T), protenas de

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adhesin (T-cadherina) y varias enzimas (fosfatasa alcalina, acetilcolinoesterasa, 5-nucleotidasa) son algunos ejemplos de este tipo de protena de membrana. La fosfatasa alcalina placental est concentrada en rafts lipdicos. Aunque como ya se indic, esta ltima protena y otras ancladas por GPI se ubican en la cara opuesta de la membrana a la que se asocian las protenas ancladas por grupos acilos, ambos tipos de protenas se encuentran en los microdominios lipdicos. Por contraste, las protenas ancladas por grupos prenilados no se hallan concentradas en rafts (Figura 10a). Investigaciones recientes, han indicado que la asociacin de las protenas con membranas puede ser compleja y la definicin entre protenas integrales y perifricas de membrana ha llegado a ser confuso en ciertos casos, tales como aquellas que estn unidas a las membranas por tallos o anclas lipdicas. Aqu, este ltimo tipo de protenas sern consideradas como protenas integrales de membrana, aunque hay que sealar de igual forma que en algunos textos son consideradas como protenas perifricas de membrana.

Funciones de las Protenas de Membrana. La fisiologa celular, se sustenta fundamentalmente en las protenas de membrana. Las protenas de membrana son diferentes y caractersticas de cada tipo celular y tipo de membrana. Realizan numerosas funciones en las membranas, entre ellas se pueden citar: Estructural. Las clulas poseen un citoesqueleto de naturaleza proteica que constituye un armazn alrededor del cual se organizan todos sus componentes, y que dirige fenmenos tan importantes como el transporte intracelular o la divisin celular. En los tejidos de sostn (conjuntivo, seo, cartilaginoso) de los vertebrados, las fibras de colgeno forman parte importante de la matriz extracelular y son las encargadas de conferir resistencia mecnica tanto a la traccin como a la compresin. Transporte. Lo realizan protenas, generalmente integrales, cuya funcin es la translocacin (cambio de lugar) de molculas a travs de la membrana desde un compartimiento a otro. El transporte de solutos, es realizado por

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transportadores, bombas y canales. Por ejemplo, aminocidos necesarios para la sntesis de nuevas protenas ingresan a las clulas mediante transportadores. A menudo el transporte ocurre desde una regin donde el soluto est presente a ms baja concentracin a una regin donde est a mayor concentracin. Este tipo de transporte necesita de energa metablica. Recepcin de seales externas (transduccin de seales). Efectuada por protenas, generalmente integrales, llamadas receptores que reconocen molculas (ligandos) especficas (factores de crecimiento, neurotransmisores) y hormonas que no pueden penetrar la bicapa lipdica y transmiten dichas seales a travs de las membranas provocando estimulacin o inhibicin de actividades celulares internas. Por ejemplo, la hormona antidiurtica o vasopresina, se une a receptores ubicados en los riones y modifica la permeabilidad de las membranas plasmticas al agua aumentando su reabsorcin. Catlisis. Protenas, tanto integrales como perifricas, que catalizan reacciones en el interior o exterior celular. Por ejemplo, lactasa presente en la membrana plasmtica de las clulas epiteliales intestinales hidroliza lactosa. Unin clula-clula. La adhesin clula-clula en uniones adherentes y desmosomas, est mediada por protenas de adhesin transmembrnicas especficas pertenecientes a la familia de cadherinas. Unin clula-matriz. Interacciones clula-matriz (adhesiones focales y hemidesmosomas) son mediadas por protenas integrales de membrana heterodimricas (familia de integrinas). Reconocimiento y adhesin celular. Glicoprotenas transmembrnicas llamadas CAM (molculas de adhesin celular), participan en el reconocimiento y adhesin celular que ocurre en la formacin de algunos tejidos epiteliales durante el desarrollo embrionario antes de formar uniones estables (oclusivas, anclantes y comunicantes).

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Anclajes del citoesqueleto. Protenas perifricas situadas en la regin citoplasmtica de la membrana y que sirven de punto de unin o anclaje para los filamentos del citoesqueleto. Marcadores de identidad de la clula. Glicolpidos y glicoprotenas caractersticos de cada individuo y que sirven de reconocimiento para clulas procedentes de otro individuo. Las cadenas de carbohidratos procedentes, tanto de los glicolpidos, como de las glicoprotenas dan lugar a una especie de cubierta denominada glicocliz. Una clase importante de tales marcadores de identidad son los antgenos mayores de histocompatibilidad. Funciones reguladoras. Muchas protenas se unen al ADN y de esta forma controlan la transcripcin gnica. De esta forma el organismo se asegura que la clula, en todo momento, tenga todas las protenas necesarias para desempear normalmente sus funciones. Las distintas fases del ciclo celular son el resultado de un complejo mecanismo de regulacin desempeado por protenas como son las ciclinas. Movimiento. Todas las funciones de motilidad de los seres vivos estn relacionadas con las protenas. As, la contraccin del msculo resulta de la interaccin entre dos protenas, la actina y la miosina. El movimiento de la clula mediante cilios y flagelos est relacionado con las protenas que forman los microtbulos. Defensa. La propiedad fundamental de los mecanismos de defensa es la de discriminar lo propio de lo extrao. En los vertebrados superiores, las inmunoglobulinas se encargan de reconocer molculas u organismos extraos y se unen a ellos para facilitar su destruccin por las clulas del sistema inmunitario. Otras funciones. Los fenmenos de transduccin (cambio en la naturaleza fsico-qumica de seales) estn mediados por protenas. As, durante el proceso de la visin, la rodopsina de la retina convierte (o mejor dicho, transduce) un fotn luminoso (una seal fsica) en un impulso nervioso (una seal elctrica).

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Las protenas de membrana difunden lateralmente en la bicapa. El experimento de L. D. Frye y M. Edidin (1970), demostr que las protenas difundan lateralmente en las membranas (Figura 11). En este experimento realizado a 37C, se indujo la fusin de clulas humanas y de ratn con ayuda del virus Sendai inactivado, obtenindose una clula hbrida, heterocarin (clula con dos ncleos). Se prepar anticuerpos contra las protenas de membrana de ambos tipos celulares y se le unieron covalentemente sustancias fluorescentes. Los anticuerpos contra protenas humanas fueron marcados con rodamina (de color rojo) y los anticuerpos contra protenas de ratn marcados con fluorescena (de color verde). Los anticuerpos, se agregaron a las clulas fusionadas.

Figura 11. Movilidad lateral de protenas de membrana evidenciada por experimento de fusin celular.

Mediante microscopa de fluorescencia, se observ a tiempo cero que la membrana plasmtica del heterocarin apareca mitad roja y mitad verde, esto es, los dos tipos de protenas estaban segregados en las dos mitades del heterocarin. Al cabo de 40 minutos las protenas de membrana del heterocarin, se haban entremezclado completamente. El agregado de inhibidores del metabolismo o de sntesis de protenas no afect este proceso, pero si lo hizo la disminucin de la temperatura por debajo de

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15 C. Lo anterior, seala que las protenas de membrana haban difundido en el plano de la membrana, en un evento independiente de energa metablica y de la insercin en la membrana de protenas recin sintetizadas. El anterior experimento, mostr que aparentemente las protenas pueden difundir en el plano de la membrana sin restriccin, pero, actualmente se sabe que su movimiento puede estar restringido por razones funcionales. Entre el 30 y 90% de todas las protenas integrales de membrana son libremente mviles, dependiendo del tipo celular. Algunas protenas integrales estn unidas permanentemente al citoesqueleto subyacente; estas protenas son totalmente inmviles en la membrana.

Las clulas presentan dominios especficos en las membranas. La restriccin de protenas a una parte de la membrana constituye un dominio (en clulas funcionalmente especializadas). Los dominios de membrana son cruciales para las funciones de clulas polarizadas como las clulas epiteliales. Las clulas epiteliales alineadas en la pared intestinal o que constituyen los tbulos microscpicos del rin son clulas altamente polarizadas cuyas diferentes superficies (apical y basal) llevan a cabo funciones distintas (Figura 12).

Figura 12. Dominios en membranas de clulas epiteliales.

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As, existe evidencia que la membrana plasmtica apical de clulas epiteliales intestinales posee protenas integrales que funcionan como transportadores de solutos orgnicos (azcares y aminocidos) y otras como enzimas (por ejemplo, disacaridasas); la membrana lateral y la membrana basal de clulas epiteliales del intestino tienen bombas que mueven iones a travs de ellas. Tambin dicha membrana basal, posee protenas transportadoras que translocan azcares hacia el torrente sanguneo diferentes a las presentes en la membrana apical. La organizacin polarizada, depende de las uniones que las clulas epiteliales establecen unas con otras. Los dominios son creados por las uniones ocluyentes que las clulas epiteliales establecen con las vecinas.

Las membranas son estructuras asimtricas. Las membranas biolgicas son estructuralmente y funcionalmente asimtricas. Dependiendo del tipo celular y del organelo particular en la clula, una membrana contiene cientos de diferentes protenas. Los nexos, uniones oclusivas y sinapsis, ocupan regiones ms reducidas de la membrana y generan asimetras locales ms pequeas.

Asimetra de las protenas. Cada protena de membrana presenta una topologa definida relativa al citosol, de modo que las propiedades de una superficie de la membrana son muy diferentes a las de la otra superficie. Esta asimetra ha sido llamada lateralidad de la membrana. Las superficies interna y externa de todas las membranas biolgicas conocidas tienen diferentes componentes y diferentes actividades enzimticas. Un claro ejemplo de lo anterior es la bomba Na -K Na
+ + +

que regula la concentracin de

y K

en las clulas. Esta protena de transporte est localizada en la


+ +

membrana plasmtica de casi todas las clulas en organismos superiores. La bomba Na -K est orientada de modo tal que bombea activamente Na hacia
+

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fuera de la clula y K

hacia el interior. Adems, el ATP debe estar en el interior

celular para impulsar la bomba. La ouabana, un inhibidor potente y especfico de esta bomba es efectivo slo si acta externamente. En general, los dominios de las protenas expuestos en una cara de la bicapa son diferentes de aquellos expuestos en la otra cara, reflejando una asimetra funcional como sucede con las protenas transmembrnicas que atraviesan la bicapa con orientaciones especficas: receptores, transportadores, canales. Las protenas de membrana tienen una orientacin nica porque ellas son sintetizadas e insertadas en la membrana de una forma asimtrica. Esta asimetra absoluta es preservada porque las protenas de membrana no rotan desde un lado de la membrana al otro y porque las membranas son siempre sintetizadas por el crecimiento de membranas preexistentes. Adems, enzimas especficas estn exclusivamente en el exterior o interior de las membranas, como en las membranas mitocondriales y las plasmticas.

Asimetra lipdica. Una caracterstica de las membranas es la asimetra en la composicin de lpidos de la bicapa. Aunque la mayora de los fosfolpidos estn presentes en ambas monocapas, ellos son normalmente ms abundantes en una u otra superficie de las membranas. La asimetra de las bicapas lipdicas es consecuencia de su modo de biosntesis, pero esta asimetra no es absoluta, excepto para los glicolpidos. En la membrana plasmtica de los eritrocitos, los fosfolpidos que poseen un grupo colina (SM y PC), se encuentran predominantemente en la monocapa externa y los lpidos con grupos amino (PS y PE), se encuentran en la cara citoslica. Tambin el fosfatidilinositol, se halla en la cara citoslica de la

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membrana plasmtica. Grandes cantidades de colesterol, se hallan presentes en ambas monocapas de membranas plasmticas. Ya se seal que formas fosforiladas del fosfatidilinositol unidas a la cara citoslica de la membrana plasmtica, por ejemplo, PI(4)P y PI(4,5)P2, participan en vas de sealizacin intracelular. Fosfatidilserina, ms abundante en la cara citoslica, es translocada a la cara extracelular por accin probablemente de una flipasa, en aquellas clulas que van a experimentar muerte celular programada o apoptosis. La fosfatilserina expuesta en la superficie celular sirve como seal para que macrfagos fagociten linfocitos viejos, mientras su aparicin en la superficie externa de plaquetas lleva a la coagulacin sangunea. En las bicapas constituidas de fosfolpidos puros, stos no difunden de una monocapa a otra (flip-flop). En las membranas naturales, la difusin transversal o flip-flop es catalizada por flipasas, como ya se mencion anteriormente.

Asimetra de carbohidratos. Una asimetra interior-exterior es proporcionada por la ubicacin de carbohidratos unidos a protenas y lpidos de membrana. Las cadenas de carbohidratos de los glicolpidos y glicoprotenas, se ubican en la superficie externa de la membrana plasmtica. Hay tambin asimetras regionales en las membranas como las de las clulas mucosales intestinales. En las membranas plasmticas de las clulas epiteliales, los glicolpidos estn confinados a la superficie apical expuesta, donde estas molculas pueden ayudar en la proteccin de la membrana contra las difciles condiciones que presenta esta zona (bajo pH y enzimas degradativas).

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Los carbohidratos de membranas estn presentes en glicolpidos y glicoprotenas. Los hidratos de carbono presentes en las membranas varan de especie a especie, entre individuos de la misma especie y entre clulas del mismo individuo. Dependiendo del tipo celular, el contenido de carbohidrato de las membranas va de 2 a 10%. Ms del 90% de los hidratos de carbono de membrana estn unidos covalentemente a protenas formando glicoprotenas (mucoprotenas); el resto de los azcares estn covalentemente unidos a lpidos constituyendo los glicolpidos. Las glicoprotenas de membrana pueden contener oligosacridos o bien polisacridos. Los oligosacridos estn unidos a las protenas como ya se ha indicado antes por medio de enlaces covalentes N-glicosdicos o bien Oglicosdicos. Los polisacridos unidos covalentemente a protenas son

glicosaminoglicanos (mucopolisacridos, polisacridos largos, lineales y altamente cargados compuestos por una sucesin de una misma unidad disacrido en la que uno de los monmeros es siempre es un aminoazcar y el otro un cido glucornico, un cido idurnico o una galactosa) y constituyen las gliprotenas complejas denominadas proteoglicanos. Estas molculas prevalecen en el medio extracelular. Los proteoglicanos son los principales componentes del tejido conectivo y participan con otras protenas estructurales, colgeno y elastina, en la organizacin de la matriz extracelular. Las glicoprotenas tienen dominios de secuencias hidroflicas e

hidrofbicas. Son molculas anfipticas. Las glicoprotenas y glicolpidos son especialmente abundantes en la membrana plasmtica de clulas eucariticas y se ubican en la cara no citoslica de la membrana celular.

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La

membrana

que

cubre

las

microvellosidades,

es

altamente

especializada, y presenta una gruesa cubierta extracelular, rica en polisacridos, denominada cubierta celular o glicocliz (Figura 13). En el caso del epitelio intestinal, algunas glicoprotenas, que forman parte del glicocliz, corresponden a disacaridasas y a g-glutamiltranspeptidasas, enzimas que participan en el proceso digestivo. Adems, en muchas clulas contribuyen a esta estructura glicoprotenas y proteoglicanos adsorbidos a la superficie celular y que se han secretado al espacio extracelular.

Figura 13. Glicocliz de microvellosidades de clulas epiteliales intestinales visualizada por microscopa electrnica de transmisin.

Una de las funciones relevantes del glicocliz es proteger a la superficie de las clulas de agresiones qumicas y mecnicas. As, en el caso de las clulas ubicadas en la superficie de la mucosa intestinal, su cubierta celular las protege del contacto con los alimentos y de la accin de las enzimas digestivas. La presencia de cido silico en las cadenas de oligosacridos de los glicolpidos, proporciona a pH fisiolgico una carga negativa neta a la superficie de la clula. Esta carga elctrica atrae a los cationes del lquido extracelular los que quedan retenidos en la cara no citoslica de la membrana celular. Las cadenas de carbohidratos de glicolpidos y glicoprotenas, permiten el reconocimiento celular. Lo anterior es posible debido a la diversidad que tienen estas cadenas, las que pueden variar en el nmero de azcares (de 15 a varios

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cientos), en su ramificacin y en sus secuencias de azcares. Adems, los glicolpidos y las glicoprotenas varan de especie a especie, de individuo a individuo de la misma especie, y an de clula a clula del mismo individuo. El rechazo de tejidos transplantados por nuestro sistema inmune es debido al reconocimiento de glicolpidos y glicoprotenas nicos.

Funciones de los hidratos de carbono de membranas. Las glicoprotenas tienen una importante participacin en: reacciones antgeno-anticuerpo, funcin hormonal, catlisis enzimtica, fertilizacin. Tambin los oligosacridos del glicocliz sirven como marcadores para una variedad de interacciones clula-clula. Un ejemplo de interacciones clula-clula es la adhesin de leucocitos (neutrofilos) circulantes a las clulas endoteliales de vasos sanguneos en la respuesta inflamatoria de tejidos injuriados. El paso inicial es una dbil y reversible adhesin entre ligandos glicoproteicos (receptores) para selectinas que se hallan en la superficie del leucocito y selectinas (glicoprotenas que contienen un dominio lectina que se une especficamente a un ordenamiento particular de azcares en un oligosacrido) ubicadas en la membrana plasmtica de clulas endoteliales del rea daada. Cuando los neutrofilos encuentran las selectinas de las clulas endoteliales, ellos forman adhesiones transitorias que enlentecen dramticamente su movimiento a travs del vaso sanguneo. Mientras estas interacciones tienen lugar, se produce un proceso de activacin de integrinas de la superficie del neutrofilo, gatillado por varios agentes (incluyendo el factor de activacin de plaquetas liberado por el endotelio), las cuales se unen con alta afinidad a ICAMs (molculas de adhesin intercelular) de la superficie de la clula endotelial provocando la detencin del movimiento de los neutrofilos y la fuerte adhesin de ellos al vaso sanguneo, iniciando el proceso de extravasacin en el tejido daado. Debido a que las cadenas de carbohidratos de las glicoprotenas y glicolpidos en la membrana celular se proyectan hacia el espacio extracelular, ellas pueden interaccionar con componentes de la matriz extracelular, factores de crecimiento y anticuerpos.

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La especificidad de los grupos sanguneos ABO humanos es establecida por componentes oligosacridos de ciertas glicoprotenas y glicolpidos de la superficie de los eritrocitos. La porcin carbohidrato de estas molculas, la cual constituye el determinante antignico, est genticamente determinado en los humanos y otros animales. En la interaccin clula-clula, el rol de las glicoprotenas es la coordinacin y la regulacin de adhesin, crecimiento, diferenciacin celular, y tamao de las clulas. La alteracin de estos procesos puede conducir a la prdida del control de la divisin celular y del crecimiento, propiedad caracterstica de clulas cancerosas. Se cree que alteraciones en la estructura de glicoprotenas y otros glicoconjugados en la superficie de clulas cancerosas son importantes en el fenmeno de metstasis en que clulas cancerosas dejan su tejido de origen (por ejemplo, mama), y migran por el torrente sanguneo aun sitio distante en el cuerpo (por ejemplo, cerebro), y crecen de una manera no regulada, con resultados catastrficos para el individuo afectado.

Modelos de la Membrana Plasmtica. Los primeros indicios acerca de la naturaleza qumica de la membrana celular los obtuvo Overton en 1985. Este investigador, observ que aquellos solutos solubles en lpidos atravesaban ms rpidamente las membranas plasmticas que los no solubles. Los primeros modelos de estructura de membrana incorporaron una bicapa lipdica como el rasgo estructural sobresaliente. La evidencia para estos modelos, provino de experimentos realizados en fantasmas de eritrocitos por Gorter y Grendel en 1925. En esa misma poca, se realizaron estudios que mostraban que la solubilidad en lpidos no era el nico factor determinante en el paso de solutos a travs de las membranas, as mismo protenas en las membranas. mediciones de las tensiones superficiales en estructuras lipdicas indicaban la probable presencia de

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En 1935, Danielli y Dawson propusieron un modelo en el cual se incorporaban protenas. La membrana celular estaba constituida por una bicapa lipdica emparedada entre dos capas de protenas globulares. Posteriormente en 1954, estos investigadores modificaron el anterior modelo incorporando poros constituidos por protenas que se extendan a travs de la membrana para dar cuenta de la permeabilidad selectiva de las membranas que ellos haban estudiado. Estos modelos proponan membranas simtricas. Este modelo fue despus modificado por Robertson en 1959 a la luz de nueva informacin, especialmente relacionadas con aspectos ultraestructurales de membranas que l estudi al microscopio electrnico de transmisin. La mayora de esos estudios fueron en membranas plasmticas de mielina pero el modelo propuesto, habitualmente denominado como hiptesis de la membrana unitaria, fue sugerido como la estructura bsica de todas las membranas celulares. En este modelo, las protenas que cubren las superficies de la bicapa lipdica tienen una estructura extendida ms que una configuracin globular, y estn asimtricamente distribuidas en la membrana. A pesar del efecto unificador de la hiptesis de Robertson, surgieron ciertas inconsistencias como que cada membrana de los organelos tena su propia funcin particular. La pregunta que surgi en ese momento fue: cmo las membranas pueden variar en funcin si todas ellas tienen la misma estructura? Tambin se realizaron observaciones que mostraban variaciones en el espesor de las membranas y que ponan en duda la generalizacin hecha por Robertson. Al inicio de la dcada del 70, dos enfoques experimentales

complementarios

demostraron que las protenas atraviesan la bicapa lipdica.

Primero, como ya se mencion, micrografas electrnicas de membranas congeladas y fracturadas en dos mediante un cuchillo (tcnica denominada criofractura), mostraron protenas embebidas en la bicapa lipdica. Segundo, el marcaje qumico de las protenas de membrana mostr que muchas atraviesan la bicapa, exponiendo diferentes partes del polipptido a la fase acuosa en ambos lados. La microscopa fluorescente usando etiquetas (tags) fluorescentes demostr que los lpidos de membrana y algunas protenas de membrana difunden en el plano de la membrana. Estudios espectroscpicos cuantitativos mostraron que la difusin lateral de lpidos es un proceso rpido, pero la difusin transversal es lenta. Esta informacin fue incorporada en 1972 por S. Jonathan

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Singer y Garth Nicholson en su modelo de Mosaico Fluido (Figura 14) para la estructura de las membranas biolgicas. El modelo de mosaico fluido, es hasta ahora aceptado generalmente como el modelo de organizacin estructural de todas las membranas biolgicas.

Figura 14. Modelo de mosaico fluido.

En este modelo de membrana, se propone que el elemento estructural fundamental de las membranas biolgicas es una bicapa lipdica continua formada por fosfolpidos, la cual aparece interrumpida por protenas inmersas en ella mantenidas por interacciones hidrofbicas entre los lpidos de membrana y los dominios hidrofbicos en las protenas. La bicapa lipdica, es de carcter Fluido debido a que la mayora de las interacciones de sus componentes son no covalentes, lo que permite tanto a los lpidos como a las protenas de las membranas difundir lateralmente, conservando su orientacin con respecto al plano de la bicapa. Las protenas que median la mayora de las funciones de la membrana forman un Mosaico que es libre de cambiar constantemente. Algunas protenas emergen slo a un lado de la membrana; otras tienen dominios expuestos a ambos lados de la membrana. El modelo de mosaico fluido de las membranas, ha probado ser una muy til hiptesis para explicar muchos, pero ciertamente no todos los fenmenos que tienen lugar en las membranas biolgicas.

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Nuevos datos experimentales muestran que la compartimentacin de los componentes de membrana puede ser tan importante para una efectiva transduccin de seales como es la fluidez de la membrana. Tcnicas actuales muestran por ejemplo que hay protenas de membrana que difunden de una forma compleja que indica que hay una considerable heterogeneidad lateral en la estructura de las membranas, otras estn confinadas, al menos transientemente, a pequeos dominios, y unas pocas protenas de membrana experimentan un rpido transporte hacia el borde celular, quizs impulsadas por protenas motoras. Todo lo anterior, ha hecho necesario la revisin del modelo de membrana elaborado por Singer y colaboradores.

Dinmica de las membranas. En este contexto el trmino dinmica es usado para describir el hecho que la estructura de la membrana cambia en el tiempo. Las membranas y sus componentes son estructuras dinmicas. Los lpidos y protenas en membranas tienen un recambio tal como sucede en otros compartimientos de la clula. Lpidos distintos presentan diversas velocidades de recambio y las velocidades de especies individuales de protenas de membrana pueden variar ampliamente. En tiempos cortos (horas), esta capacidad para el cambio puede visualizarse por las modificaciones en la posicin de molculas individuales dentro de la membrana como resultado de su energa cintica y de la naturaleza fluida de las membranas. En tiempos largos (das), estos cambios pueden implicar significativas modificaciones en los componentes de las membranas. Por ejemplo, la introduccin de ms colesterol al inicio del invierno (variaciones estacionales o geogrficas), o el cambio en las clases de protenas de membrana que afectan las propiedades de intercambio de las membranas. Los procesos principales responsables para estos cambios son la endocitosis y la exocitosis. La parte de la clula que est ms directamente

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implicada en estos procesos es el sistema de endomembranas con vesculas responsables de aadir/remover partes de la membrana.

Resumen. Las membranas son estructuras complejas y dinmicas que establecen lmites cerrados entre diferentes compartimientos. El espesor de la mayora de las membranas es de 6 a 10 nm. Las membranas estn compuestas principalmente de lpidos y protenas. La razn lpido/protena vara de 1:4 a 4:1. Dicha variacin depende del tipo de membrana, del tipo de organismo y del tipo de clula. Las membranas tambin contienen carbohidratos que forman parte de glicolpidos y glicoprotenas. La composicin en lpidos y protenas vara de una membrana a otra. Los componentes lipdicos principales de las membranas animales son fosfoglicridos, esfingolpidos y colesterol. Los lpidos de membrana son molculas relativamente pequeas que poseen regiones hidroflicas e hidrofbicas molculas anfipticas. Forman espontneamente capas bimoleculares cerradas en medio acuoso. Las bicapas lipdicas son barreras al flujo de molculas polares con carga o sin carga. Las diferentes membranas tienen protenas especficas que son responsables principales de las distintas funciones de las membranas. Funcionan como transportadores, bombas, canales, receptores, enzimas, transductores de informacin y energa. Estas protenas estn inmersas en las bicapas lipdicas que proporcionan un microambiente adecuado para su funcionamiento. Las membranas presentan protenas integrales y perifricas. Algunas protenas estn unidas a lpidos de cadena larga que las anclan a una u otra superficie de la membrana. Las membranas son ensamblajes no covalentes. Las protenas y lpidos que las componen, se mantienen unidos por numerosas interacciones no covalentes, las cuales son de carcter cooperativo. Las membranas son altamente asimtricas. Las dos caras de las membranas biolgicas siempre difieren en composicin una de otra. Las membranas son estructuras fluidas. Los lpidos difunden lateralmente en las membranas, al igual que numerosas protenas.

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La mayora de las membranas celulares estn polarizadas elctricamente, el interior es negativo. El potencial de membrana juega un rol protagnico en el transporte de molculas con carga elctrica (iones), conversin de energa y excitabilidad celular.

Bibliografa Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. Biologa Molecular de la Clula. Ediciones Omega, Barcelona. 4 edicin. 2003. Cooper, G. M. La Clula. Editorial Marbn, Madrid. 2 edicin. 2002. Lodish, H., Berk, A., Zipursky, S. L., Matsudaira, P., Baltimore, D., & Darnell, J. Biologa Celular y Molecular. Editorial Panamericana. 4 edicin, 2002. Nelson, D. L, & Cox M. M. Principios de Bioqumica. Ediciones Omega S.A. Tercera Edicin, 2000.

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CAPTULO II SISTEMAS DE ENDOMEMBRANAS (RE Y GOLGI), SISTEMA VACUOLAR Y LISOSOMAS


Fidelina Gonzlez, Gabriela Sconzo, Giussepina Turturici, Fabiana Geraci, Giovanni Giudice. Depto Biologa Celular. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad de Concepcin. Concepcin. Chile. Dipartamento di Biologia Cellulare e dello Sviluppo. Universit di Palermo. Palermo. Italia.

Temas. 1. Retculo endoplsmico rugoso. 2. Retculo endoplsmico liso. 3. Golgi. 4. Vesiculacin y secrecin. 5. Formacin de los lisosomas y funcin. 6. Endocitosis y exocitosis. 7. Proyecto Genoma Humano y la va secretora. Aplicacin al rea de la salud. 1. Enfermedad de Parkinson. 2. Enfermedades producidas por defectos enzimticos en los lisosomas. 3. Fibrosis qustica o fibrosis cstica. Retculo Endoplsmico Rugoso. 1. Generalidades. 2. Pptido seal. 3. Traslocacin cotraduccional. Traslocn. 4. Protenas solubles y la insercin de protenas transmembrana. Peptidasa seal. Complejo peptidasa seal. 5. Control de calidad en el retculo endoplsmico. Chaperonas. Plegamiento de las protenas. Glicosilacin. Complejo oligosacariltransferasa. 6. Formacin de puentes disulfuro. Retculo endoplsmico liso. 1. Generalidades. 2. Sntesis de lpidos y fosfolpidos. Vitamina A. 3. Sntesis de hormonas esteroidades 4. Calcio y sodio.

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5. Metabolismo de Glcidos. 6. Detoxificacin. 7. Formacin de vesiculas que van del RE al Golgi. Golgi. 1. Generalidades. 2. Glicosilacin de protenas. 3. Grupos fosfato protenas lisosmicas 4. Sulfatacin de protenas. 5. Empaquetamiento. 6. Condensacin. 7. Acumulacin. 8. Protelisis final. 9. Distribucin especfica. 10. Vesiculacin. Lisosomas. 1. Generalidades. 2. Formacin de lisosomas. 3. Endosoma primario. 4. Membrana plasmtica del lisosoma. 5. Funciones de los lisosomas.

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INTRODUCCIN

Direccionamiento de protenas en la clula: biognesis de organelos y secrecin de protenas. Una clula de mamfero contiene alrededor de 10.000 protenas diferentes y el funcionamiento adecuado de cada clula depende de la correcta ubicacin de las protenas ya sea como parte de una membrana o dentro del compartimiento etc. Cuando el mensajero, ARN o cido ribonucleco que lleva la informacin para la sntesis de la protena, ingresa al citoplasma proveniente del ncleo, se une a la subunidad menor de los ribosomas, al que luego se une la subunidad mayor, para iniciar la lectura del mensajero y por tanto la sntesis de protena. Por otro lado una protena madura, como la conocemos y funcionalmente normal, en la mayora de los casos tiene que pasar por una serie de modificaciones que estn relacionadas con el transporte y destino hacia organelos y vesculas. La clasificacin de cada protena hacia su compartimiento es de importancia fundamental para la organizacin y funcionamiento de la clula eucaritica. Hay distintos niveles de secrecin de una protena lo que define dos vas distintas: la va secretoria y la va citoslica. En la va secretoria se sintetizan las protenas destinadas al Golgi, lisosomas y secrecin al exterior de la clula sea tanto constitutiva, que siempre se est produciendo, y regulada, cuya secrecin obedece a una seal. En la va citoslica se sintetizan las protenas destinadas al citoesqueleto, peroxisomas, mitocondrias y ncleo. En este captulo se hace referencia a las protenas que van a la va secretoria y en el captulo siguiente a las protenas de la va citoslica. En la clula, las funciones desarrolladas por el sistema de apropiado, formando parte del contenido de estos compartimientos, como puede ser la matriz mitocondrial, el citosol, los lisosomas,

endomembranas retculo endoplsmico y Golgi estn asociadas a la formacin de membranas, sntesis de las protenas y exportacin de sustancias hacia el exterior y a la sntesis y al empaquetamiento de las protenas destinadas a lisosomas. Las

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funciones desarrrolladas por los lisosomas estn orientadas a la degradacin de mltiples sustancias y estructuras. En tanto que la detoxificacin y sntesis de esteroides se sitan en el retculo endoplsmico liso entre otras funciones tan importantes como almacenamiento de calcio, sntesis de fosfolpidos, sntesis y almacenamiento de glicgeno, degradacin de glicgeno (glicogenolisis) y transformacin de pigmentos biliares, entre otras funciones. El sistema endoplsmico est formado por membranas que permite la separacin del contenido interno del externo que es el citosol con el que se comunica a travs de canales protecos. En tanto que la intercomunicacin entre retculo endoplsmico rugoso y Golgi es a travs de formacin de vesculas que yeman desde la superficie de los organelos y se fusionan con otra cisterna cercana liberando el contenido interno al lumen de la cisterna receptora ms cercana. Estas vesculas forman parte del Aparato de Golgi y almacenan y transportan las sustancias que van a formar tanto parte de los lisosomas como de aquellas destinadas a la secrecin al exterior de la clula. Este proceso se conoce como la va secretoria en oposicin a la va citoplasmtica en la cual los ribosomas, asociados a travs del mensajero conformado por polirribosomas libres hacen la sntesis de protenas en el citosol.

Retculo Endoplsmico Rugoso

1. Generalidades. La descripcin morfolgica de estos organelos se debe principalmente a la microscopa electrnica de transmisin. El retculo endoplsmico es una red de tbulos y cisternas o sacos ramificados e interconectados. El dimetro de los tbulos y cisternas oscila entre 400 y 700 A (A = 1 Angstrom es igual a 10
-10

m). La

membrana del retculo endoplsmico es de 50 a 60 A de espesor. Sobre la cara citoplasmtica del RER se pueden contabilizar alrededor de 13 millones de ribosomas en los hepatocitos. El retculo endoplsmico (RE) es una red que ocupa gran parte del citoplasma de las clulas. Los sculos y tbulos se encuentran interconectados a travs de la membrana continua que rodea un espacio interno, el lumen, este puede llegar a ocupar el 10% del volumen total de la clula. La membrana del

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retculo permite mover selectivamente las sustancias entre el lumen y el citosol. Esta se conecta tambin con la envoltura nuclear, que est conformada por una doble membrana. La membrana del retculo es una membrana que tiene bajo contenido en colesterol, menor que el contenido de colesterol de la membrana plasmtica que rodea a la clula y que en el resto de las membranas de la va secretoria, esto permite mayor fluidez de la membrana (visto en el captulo de membranas celulares). Se ha demostrado experimentalmente que una mayor concentracin de colesterol en la membrana del retculo impedira la traslocacin del polipptido sintetizado por el ribosoma, debido a una desorganizacin de los componentes del traslocn. La funcin del retculo endoplsmico rugoso es participar en la sntesis de protenas, plegamiento, control de calidad, glicosilacin primaria y transporte de las protenas mediante el proceso de formacin de vesculas (vesiculacin) al Aparato de Golgi. La superficie del retculo endoplsmico rugoso est cubierto por ribosomas en la cara citoplasmtica de la membrana del retculo. Aqu ocurre la produccin y procesamiento de protenas que van a ser exportadas, o secretadas de la clula. Los ribosomas son el mesn de la formacin de la protena. La protena ingresa al interior del retculo endoplsmico rugoso a travs de la membrana, y puede seguir dos vas: como protena soluble o formando parte de membranas. Estas ltimas pueden anclarse a la membrana como una protena transmembrana, pudiendo ser unipaso, bipaso o multipaso. Todo el proceso depende de las seales, que en este caso corresponden a secuencias hidrofbicas, que lleve la protena en formacin. En el retculo endoplsmico ocurre tambin la glicosilacin primaria de las protenas que van a ser transportadas, esto es la agregacin de azcares a residuos aminoacdicos de la protena.

2. Pptido seal. Una vez asociadas las subunidades de los ribosomas al mensajero, se inicia la sntesis de protenas en el citoplasma, que se detiene si en la secuencia de aminocidos se lee la correspondiente a un pptido seal, que es reconocido por la protena citoplasmtica SRP (es una sigla derivada del ingls que significa partcula de reconocimiento de la seal) que se une a la secuencia del pptido seal y ancla al ribosoma a la membrana del retculo endoplsmico a travs del receptor de la partcula (RP) situado en el retculo endoplsmico. La secuencia

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seal se encuentra en el extremo NH2-terminal de la cadena polipeptdica en crecimiento. Esta secuencia de alrededor de 15-35 aminocidos, en el extremo amino terminal N-terminal se inicia con un trecho de aminocidos hidroflicos, seguidos de una secuencia de aminocidos hidrofbicos (8-15), que forman una estructura de alfa hlice, denominado core hidrofbico, seguidos por aminocidos bsicos, es rico en metionina (dominio M), que se ha demostrado conforman un sitio de reconocimiento del pptido seal. Esta secuencia distingue a las protenas que van a la va secretora de aquellas que van a la va citoslica. La partcula receptora de la seal (SRP) reconoce y se une a la secuencia seal de anclaje de la protena en formacin y se integra al ribosoma. La protena SRP est formada por 6 polipptidos y una molcula corta de ARN (ARN7sl). La regin que interacta directamente con el core hidrofbico es un polipptido de 54 kDa (SRP54). En su estructura tiene una regin altamente hidrofbica, que forma un bolsillo hidrofbico a la que se ancla el core hidrofbico del pptido seal recin formado, y un sitio de unin para GTP. El ARN contenido en esta partcula tiene por misin interrumpir la lectura del mensajero, al aparearse las secuencias complementarias del mensajero con el ARN del SRP, mientras se asienta el ribosoma al RER. La unin de la protena SRP a la secuencia inhibe la traduccin (lectura del ARN mensajero), por lo cual esta se detiene transitoriamente. La SRP con el pptido seal, integrados a la subunidad mayor del ribosoma, se une al complejo receptor de SRP o protena de anclaje de SRP. El receptor SRP es un complejo de dos protenas, la subnidad alfa y la subunidad beta, esta ltima es una protena integral de membrana del retculo endoplsmico rugoso, en tanto que la subunidad alfa es la encargada de unir GTP, para lo cual tiene un sitio de unin. Tanto la SRP como el receptor de SRP son protenas que requieren de la unin de GTP, para lo cual tienen una regin de unin de GTP, y liberan GDP luego de escindirse del pptido seal. La partcula que ancl al ribosoma a travs del pptido seal se libera y la sntesis de protenas se reanuda. El proceso de traslocacin cotraduccional de la protena culmina con el final de la traduccin (proceso de sntesis de protena). En el momento que se ancla el ribosoma a travs de receptor de SRP, se asienta sobre el complejo de traslocacin de membrana, a travs de la cual la protena que va a ser sintetizada pasa al lumen del retculo para insertarse en la membrana (si es protena integral de membrana) o para ingresar al lumen (si es

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protena soluble) y es a la vez anclado a la cara externa del retculo endoplmico rugoso a travs de la subunidad mayor que se une a la riboforina I y II, protenas pertenecientes a otro complejo de protenas integrales de la membrana del RER, que participan en la glicosilacin de la protena, denominado OST.

3. Traslocacin cotraduccional. Traslocn. Existen dos tipos descritos de traslocacin en eucariontes, una es la traslocacin cotraduccional que ocurre en mamferos y la otra es la traslocacin posttraduccional que ocurre en levaduras. En la traslocacin cotraduccional, la subunidad mayor del ribosoma queda asentada sobre el traslocn, que es un complejo proteico a la forma de canal que contiene un poro acuoso y que est bloqueado en la cara interna por una protena, que cierra el poro, se ha demostrado que esta es una chaperona. A travs del traslocn ingresar la protena en formacin (Figura 1).
Figura 1. Estructura del ribosoma eucaritico unido al complejo traslocn en la membrana del retculo endoplsmico (Modificado de Cell 107:361 (2001). (Con permiso de la editorial*).

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El traslocn est conformado por un core de complejos heterotrimricos y protenas asociadas. Estos complejos se conocen como Sec61, y las protenas que lo conforman se denominan alfa, beta y gamma. La protena alfa atraviesa la membrana, atravesndola 10 veces, la subunidad beta y gama slo una vez. Otro componente importante del traslocn es la protena TRAM, que cruza la membrana al menos 8 veces. Cuando el ribosoma est anclado al traslocn, se reinicia la sntesis de la protena que haba sido interrumpida al unirse la partcula SRP a la secuencia seal. La secuencia seal de la protena en crecimiento se introduce a travs del poro del traslocn. Luego que la partcula SRP se ha unido al receptor de SRP, la cadena polipeptdica es ubicada en el canal acuoso del traslocn que se encuentra cerrado en la cara interna del retculo endoplsmico, se ha postulado que es una protena soluble, una chaperona de la familia HSP70, BiP, la que cierra el poro en la cara luminal, pero tambin hay evidencias que el cierre del poro se hara efectivo a travs de una regin de protenas integrales de membrana, asociadas al traslocn, que son la riboforina I y la riboforina II. Estas protenas integrales forman parte del complejo oligosacarltransferasa (OST). A medida que la cadena polipeptdica crece hasta 70 residuos pasa a travs del poro del traslocn al lumen del retculo endoplsmico rugoso. Al finalizar la traduccin, el ribosoma permanece unido al traslocn hasta que la protena pueda ser completamente liberada al lumen. El poro acuoso entonces se cierra en un proceso que requiere energa a la forma de ATP. El dimetro del poro es de 40 a 60 A. En algunos trabajos cientficos se ha sealado que este poro cambia de tamao durante la traslocacin cotraduccional, inicialmente el tamao de poro sera de 9 a 15 A, cuando el traslocn no est unido al ribosoma y luego se expande el dimetro interno a 40 a 60 Angstrom. Este proceso impide la liberacin de iones, especialmente iones calcio, desde el lumen del retculo al citoplasma, conservndose as los gradientes inicos crticos durante la traslocacin.

La protena TRAM. La protena TRAM (protena de membrana asociada a la traslocacin de la cadena polipeptdica) es una protena glicosilada multipaso que cumple un rol

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adicional en el proceso de traslocacin cotraduccional. Participa en un paso inmediatamente posterior al inicio de la traslocacin. Inicialmente la interaccin entre el traslocn y el ribosoma es dbil y luego se intensifica, es en este instante donde participa la protena TRAM, en el proceso de traslocacin. La protena TRAM funciona de una forma dependiente de la secuencia seal de la protena en formacin, en los pasos iniciales de la traslocacin para algunas protenas. Las protenas que requieren de TRAM son aquellas que tienen menos residuos de aminocidos en el extremo amino terminal que preceden al core hidrofbico (alrededor de 5 aminocidos) y tienen un core hidrofbico de menor longitud. Las protenas que traslocan independiente de TRAM son aquellas que tienen alrededor de 9 aminocidos antes del core y este core es ms largo. El rol de la protena TRAM es orientar al pptido seal hacia el traslocn, interactuando con el extremo N-terminal de pptido seal. Los elementos necesarios bsicos para el ingreso de pptido seal son el complejo sec61p, la protena Tram y el receptor de SRP. En el lumen del RER ocurre la escisin del pptido seal, mediada por una peptidasa seal que es una protena integral de membrana que se encuentra cercana al traslocn y luego tienen lugar los procesos posttraduccionales, que ocurren en el retculo endoplsmico y culminan en el Complejo de Golgi y la adicin de oligosacridos a los residuos de asparragina de la cadena polipeptdica (oligosacridos N-ligados). La adicin de oligosacridos es realizada por enzimas como riboforina I y II, que son tambin protenas integrales de membrana. En el lumen del RER las protenas solubles y las integradas a la membrana son sometidas a un control de calidad por chaperonas.

4. Protenas solubles y la insercin de protenas transmembrana. Peptidasa seal. Complejo peptidasa seal. Insercin de protenas en la membrana del retculo endoplsmico. Si la protena sintetizada es una protena unipaso, bipaso o multipaso que va a formar parte de la membrana plasmtica, de la membrana del retculo endoplsmico, del Golgi o de los lisosomas, estas se insertan en la membrana en vez de ser liberadas al lumen. As, el ingreso de la protena a medida que se va sintetizando, se interrumpe, formando bucles que se extienden al citosol o al lumen del retculo. As la insercin de las protenas integrales a la membrana del retculo es una

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insercin cotraduccional. Adems, las diferentes protenas integrales pueden tener expuestos hacia el citosol el extremo N-terminal o extremo C-terminal. Estas orientaciones estn establecidas en la cadena polipeptdica. Para protenas con el extremo C-terminal expuesto al citosol, la insercin en la membrana implica dos eventos secuenciales: una secuencia seal que inicia la traslocacin y que posteriormente es escindida y una secuencia de interrupcin de la transferencia que ancla la protena a la membrana. En el caso de las protenas multipaso el anclaje a la membrana se efecta mediante varias secuencias internas de anclaje que interrumpen la traslocacin de la protena. Estas seales no son escindidas por la peptidasa seal, porque no son reconocidas por esta enzima. As las protenas multipaso resultan como una serie de bucles que continan en ambos lados de la membrana del retculo, atravesando la membrana desde la cara citoslica al lumen del retculo y viceversa. Las secuencias hidrofbicas que anclan la protena a la membrana no son transferidas al lumen, sino que son insertadas en los lpidos de la membrana, y se les denomina secuencias de detencin de la transferencia o secuencias de anclaje. El traslocn abre un espacio lateral, entre los trmeros que conforman la protena, permitiendo que tales secuencias entren a la membrana lipdica. Para protenas con mltples dominios transmembrana, no est claro si los dominios son liberados secuencialmente o todos de una vez. Por lo tanto el traslocn es responsable de la orientacin correcta de los dominios transmembrana (enfrentando la direccin adecuada desde adentro hacia afuera o viceversa). El complejo peptidasa seal est compuesto de 6 polipptidos de masa molecular de 25, 23, 22, 21,18 y12 kDa. Los polipptidos de 23 y 22 kDa son glicoprotenas. Dos de estos polipptidos son los responsables de la actividad cataltica, cuyo sitio activo se encuentra orientado hacia el lumen del retculo. Dos de los polipptidos tienen ubicacin citoslica (12 y 25 kDa), y los otros probablemente sean responsables de la interaccin con el traslocn, de hecho se ha demostrado que el traslocn interacta con la subunidad de 25 kDa. El complejo peptidasa seal acta en asociacin con el traslocn.

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5. Control de calidad en el retculo endoplsmico. Glicosilacin: Complejo oligosacariltransferasa (OST). Chaperonas: Plegamiento de las protenas. Vias ERCQ, UPR, ERAD.

Glicosilacin de protenas. La adicin de carbohidratos o glicanos a la protena cumple roles esenciales en el destino de la protena. Es as que se ha demostrado que la composicin de carbohidratos codifica la informacin crucial sobre la estructura, localizacin y edad de las protenas, promueve la maduracin y facilita el control de calidad de las protenas en el lumen de la va secretoria. Adems actan de forma estrica (en el espacio) impidiendo el acceso de proteasas. Los glicanos agregados a las protenas en el retculo endoplsmico constituyen el 50% de la masa de la protena, son por lo tanto modificaciones voluminosas, que le dan flexibilidad a la protena y a la vez le confieren propiedades hidroflicas, se ha comprobado que se extienden aproximadamente 3 nm desde la protena. En el retculo endoplsmico ocurre la glicosilacin N-ligada de protenas mientras la traslocacin est en progreso: glicosilacin cotraduccional. Las unidades de oligosacridos de 14 residuos de azcares son agregadas al aminocido asparragina de la cadena polipeptdica en crecimiento por el complejo oligosacrido transferasa (OST). Previamente el oligosacrido es sintetizado en un lpido que est anclado a la membrana del retculo endoplsmico, dolicol, que porta el oligosacrido, a la forma de dolicol pirofosfato. Este oligosacrido es transferido a la protena en el residuo asparragina en una secuencia de consenso Asn-X-Ser/Thr de la protena, por el complejo oligosacrido transferasa. La OST tiene al menos dos sitios de unin, uno para el sitio de consenso y el otro para el oligosacrido unido al dolicol, es probable que exista otro sitio de unin al traslocn. Posteriormente son removidos cuatro residuos de azcar: tres glucosas y una manosa del glicano. La Figura 2 indica claramente la composicin del glicano transferido a asparagina, con sus respectivos enlaces y se indican las enzimas que participan en forma posterior a la unin del glicano N-ligado (a asparagina). En la Tabla 1, se detallan las funciones de cada uno de los pasos.

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Figura 2. Composicin del glicano transferido al residuo asparragina (Asn) de la protena en formacin de acuerdo a Herbert, DN, Garman, SC, Molinari, M. 2005. Trends in Cell Biology 15(7):364-370.

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Tabla 1. Funcin de cada unidad de glicano que se une a la protena en formacin en el Retculo Endoplsmico Rugoso (de acuerdo a Herbert, DN, Garman, SC, Molinari, M. 2005. Trends in Cell Biology 15(7):364-370.). Glicano Modo de generacin Funcin El glicano es transferido por OST desde OS-PP-Dol Glc2Man9GlcNAc2 Glucosidasa I Inhibicin de la unin a OST. Libera la glicoprotena plegamiento Glc1Man9GlcNAc2 Glucosidasa II y GT Une las chaperonas del RE: calnexina y calreticulina; ayuda al reclutamiento de la Oxidoreductasa ERp57. Evita la agregacin de protenas. Inhibe el plegamiento global y retiene a las glicoprotenas en el RE. Man9 GlcNAc2 Glucosidasa II Libera las chaperonas y ocurre el plegamiento y la maduracin de la protena Man8 GlcNAc2 Manosidasa I del RE Marca al sustrato para la va ERAD, cuando esta es una protena mal plegada ManX GlcNAc2 Manosidasa II del RE Se une a ERGIC-53 en el RE y lo marca con destino ERGIC cuando est acoplada a una protena plegada apropiadamente. La oligosacrido transferasa es un complejo de protenas integrales de membrana que ha sido estudiada en levaduras y en mamferos. En las levaduras comprende ocho unidades Ost1p, Ost2p, Ost3p/ Ost6p, Ost4p, Ost5p, Wbp1p, Swp1p y Stt3p. En eucariontes pluricelulares se han identificado los homlogos de las protenas Ost4p y Ost5p. En mamferos se ha determinado la presencia del homlogo de Stt3p y Ost3p/Ost6p. Se ha determinado que la protena Stt3p es la subunidad central implicada en la transferencia del glicano al polipptido en formacin. La transferencia oportuna del oligosacrido al polipptido en formacin es facilitada por la proximidad que existe entre el complejo OST y el traslocn. para iniciarse el

Glc3Man9GlcNAc2 Transferido por OST

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La glicosilacin de las protenas permite el correcto plegamiento de las protenas, por lo tanto es necesaria que sea completa, ya que es requisito del control de calidad de la protena en el lumen del retculo endoplsmico. Desde ya se puede sealar que la ausencia de algunos de los aminocidos Ser o Thr en la secuencia de la protena en el orden sealado, impide la glicosilacin de la protena.

Formacin del dolicol-pirofosfato-oligosacrido dador del glicano. El dolicol es un lpido que forma parte de la membrana del retculo, y transporta el oligosacrido formado por 14 residuos de monosacridos que cede a la oligosacaril transferasa para ser unido a la asparragina del polipptido en formacin. El primer paso para la formacin del oligosacrido es la fosforilacin del dolicol. Este se fosforila para formar un dolicol pirofosfato, que son dos grupos fosfatos unidos que contienen una muy alta energa. El primer fosfato proviene de CTP, y el segundo fosfato proviene de UDP-N-acetilglucosamina (GlcNAc), incorporndose junto con el fosfato la primera molcula de sacrido al dolicol que ya contena un fosfato. Luego se incorpora otra GlcNAc proveniente de UDP-Nacetilglucosamina, esta vez sin el fosfato, a la GlcNAc ya unida. Luego se incorporan 5 manosas de una por una, provenientes de GDP-manosa. Todos los sacridos unidos al dolicol estn orientados hacia el citoplasma y en este punto mediante un movimiento de "flipping" o flip-flop en la membrana del retculo quedan enfrentados hacia el lumen del retculo, donde se siguen agregando 4 manosas provenientes de GDP-manosa, y luego las tres glucosas que provienen de UDP-glucosa.

Chaperonas y plegamiento de las protenas. Luego de la traslocacin al lumen del RE y la glicosilacin, las protenas se encuentran con las chaperonas que facilitan el proceso de maduracin y deteccin de un producto proteco defectuoso. Las chaperonas constituyen una clase de protenas que se unen a polipptidos no plegados o parcialmente plegados, que tienen la funcin de ayudar al plegamiento de las cadenas polipeptdicas en formacin, ayudar al replegamiento de las protenas denaturadas o evitar la agregacin de las superficies hidrofbicas expuestas de

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las protenas que presentan problemas en el plegamiento evitando la agregacin y promoviendo el plegamiento. Estn presentes tanto en eucariontes como en procariontes. Las chaperonas ayudan a las protenas a plegarse, acelerando el proceso, estabilizando intermediarios inestables y decreciendo las barreras de activacin del plegamiento. Reconocen superficies hidrofbicas de las protenas, se unen a ellas, evitando la agregacin de protenas. Juegan un rol importante en la transduccin de seales, en la mantencin del la organizacin del citoplasma y de compartimientos intracelulares ya que no slo estn presentes en el interior del retculo sino que tambin en el citoplasma, ncleo, mitocondrias, etc. Se ha estimado que alrededor del 30% de las protenas sintetizadas en una clula son defectuosas o aberrantes. Las protenas mal plegadas son inherentemente txicas al organismo. Adems estas protenas si no son eliminadas pueden tender a la agregacin, debidos a interacciones hidrofbicas. Las chaperonas que interactan en forma inmediata con el polipptido recin formado son la calnexina y la calreticulina, ambas son chaperonas tipo lectina. La calnexina es una protena de membrana y la calreticulina es soluble. Ambas tienen un sitio para unir al glicano de la glicoprotena que est al estado monoglucosilado, tiene slo una glucosa en la ramificacin A (ver Tabla 1). La unin a la calnexina o calreticulina aumenta la eficiencia del plegamiento, ya que enlentecen el proceso para dar tiempo a un plegamiento correcto, evitando la agregacin con otras protenas en el interior del RE. Si la interaccin es con una protena aberrante, esta protena permanecer mayor tiempo unida a estas chaperonas. Por lo tanto la ubicacin de los glicanos es esencial para dirigir el plegamiento correcto, el dominio de la protena donde se ubica el glicano que est unido a la chaperona es el ltimo en plegarse. La importancia de la transferencia del glicano N-ligado completo tambin influye en la calidad de una protena ya que aquellos incompletos no sern reconocidos por la chaperona. Es as que el retculo endoplsmico rugoso juega un papel primordial en el control de calidad de las protenas, solubles o transmembrana; esta va de estricto control de calidad de las protenas se denomina ERQC (que significa control de calidad en retculo endoplsmico) y tiene asociada una va de degradacin de protenas ERAD (ERAD, que significa degradacin de protenas asociado al retculo endoplsmico) que es el reconocimiento de las protenas defectuosas en el RE, su marcaje para exportacin y la degradacin en el citoplasma y que consta de tres pasos:

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1) reconocimiento de los polipptidos aberrantes por chaperonas presentes en el lumen del retculo endoplsmico, esto se inicia desde el momento de entrada del pptido al lumen del retculo, cuando la sntesis de protena est en progreso. 2) exportacin de las protenas solubles al citoplasma a travs del poro del traslocn (retrotraslocacin) 3) degradacin de los polipptidos aberrantes, mal plegados, previa ubiquitinacin, en el proteasoma que se encuentra en el citoplasma. La degradacin de los polipptidos ubiquitinados produce oligopptidos y unidades de ubiquitina. El proteasoma es un complejo proteasa citoslico muy abundante que consta de una partcula core 20S que tiene actividad proteoltica y uno o dos RP19S, que le da el aspecto de un tubo con tapas abatibles en ambos extremos del tubo. El proteasoma es una macroestructura que recicla protenas a pptidos pequeos, que luego son degradados a aminocidos en el citoplasma. Cabe sealar que en algunos casos, las protenas transmembrana pueden ser degradadas directamente por el proteasoma o por proteasas en la cara citoslica. Cmo se detecta una protena mal plegada? Se ha postulado un mecanismo molecular primario de deteccin de protenas mal plegadas denominado con la sigla UPR (que significa respuesta a protenas mal plegadas), asociada a la va ERAD, mediante este mecanismo las clulas eucariticas contrarrestan la acumulacin de protenas mal plegadas en el lumen del retculo endoplsmico, evitando la agregacin de protenas en el interior del retculo. Hay evidencias que la presencia de protenas mal plegadas en el lumen del retculo, inducen mediante un complejo mecanismo al aumento de la sntesis de chaperonas. Esto implica que habra seales que partiran desde el interior del retculo hasta el ncleo, que aumentaran el nmero de mensajeros de las chaperonas, que luego seran traducidos en el RE. Se postula que la protelisis activara factores que entraran al ncleo y se uniran al ADN facilitando la sntesis de mensajeros de las chaperonas.

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Dnde ocurre la degradacin de protenas? Como ya se ha sealado, las protenas secretadas son marcadas y traslocadas al interior del lumen del RE a travs de un canal proteco ubicado en la membrana del RE. En el lumen estas protenas son plegadas correctamente antes de ser transportadas a travs de vesculas que las trasladar hacia el siguiente compartimiento de la va secretora. En tanto, las protenas mal plegadas sern retenidas en el RE, y finalmente sern degradadas, en el citosol. Las protenas mal plegadas vuelven al citosol a travs del mismo poro del traslocn y pasan al citosol. Las chaperonas BiP o calnexina y PDI (protena disulfuro isomerasa) que estn en el lumen del RE evitan la agregacin de protenas e intervienen en la decisin de transportar las protenas para ser secretadas, o bien para ser degradadas. As, las chaperonas pueden recubrir la seal de salida de las protenas o anclar estas proteinas defectuosas en el lumen del retculo endoplsmico rugoso. Las chaperonas en el citosol a la vez participan en la exportacin de las protenas defectuosas provenientes del RE, y para marcarlas con residuos de ubiquitina (poliubiquitinacin, visto en el captulo de protenas) y dirigirlas hacia los proteasomas citoslicos para su degradacin por el proteasoma que se encuentra en el citoplasma.

Reglucosilacin. La calreticulina y la calnexina, son ayudadas en el reconocimiento de las protenas mal plegadas por la glucosil transferasa (GT) dependiente de UDP. GT es una protena de 174 kDa que tiene dos dominios, uno para la actividad transferasa de la glucosa a la glicoprotena, en el glicano, especficamente en la ramificacin A (Figura 2, Tabla 1), y el otro dominio es el sensor de plegamiento, que comprende alrededor del 75% de la protena. La protena GT reconoce los residuos hidrofbicos expuestos en glicoprotenas en formacin, realizando as una actividad complementaria con calnexina y calreticulina, que se asocian a la porcin hidroflica de la protena, es decir a la porcin glicanos N-ligados. La GT agrega glucosa a aquellas molculas que detecta como glicoprotenas mal plegadas. Esta es una marca de retencin en el RE y que da tiempo para que la protena mal plegada pueda plegarse correctamente. Los siguientes son los pasos que se siguen en el lumen del retculo: 1) La enzima Glucosidasa I remueve la glucosa terminal de la ramificacin A del glicano de una protena.

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2) La enzima Glucosidasa II remueve la siguiente glucosa. En este punto se une la calnexina, que es la chaperona unida a la membrana. 3) La enzima Glucosidasa II remueve la tercera glucosa, siempre que la glicoprotena est bien plegada, y la protena enseguida es empaquetada para salir del RE al Golgi, por formacin de vesculas con cubierta de coatmero COP I. Si la protena no est bien plegada, entonces ineracta con calreticulina seguida por la adicin de tres nuevas glucosas obtenidas de UDP-glucosa. Un nuevo ciclo da la posibilidad de un plegamiento correcto.

Formacin de puentes disulfuro. El estado de oxidacin del reticulo endoplsmico promueva la formacin de los puentes disulfuro que estabilizan la estructura de la protena. Es as que las protenas que estn en el RE son modificadas covalentemente por la formacin de enlaces o puentes disulfuro. Esta reaccin es catalizada por protenas que actan como agentes oxidantes o aceptores de electrones, en el RE antes que las protenas nativas puedan seguir su curso hacia el Golgi. Tambin estas oxidoreductasas tienen la facultad de reducir los puentes disulfuro para facilitar la retrotraslocacin de las protenas defectuosas a travs del traslocn hacia el citosol. La calnexina y la calreticulina participan en el proceso guiando las oxireductasas como la ERp57 a los sitios de formacin de puentes disulfuro en la protena en formacin o en la maduracin de la protena. Adems la enzima denominada proteina disulfuro isomerasa (PDI) presente en el lumen del retculo, es la responsable de reubicar los puentes disulfuro a lo largo de la protena. La proteina disulfuro isomerasa contiene dos cistenas en su secuencia que estn muy cercanas entre s, y que tienen la propiedad de interconvertirse fcilmente entre la forma reducida (SH) y la forma oxidada (S-S). La PDI oxidada facilita la formacin de puentes disulfuro (S-S) en la protena en maduracin, actuando como un oxidante que reduce. La PDI reducida ayuda a la formacin de puentes disulfuros correctos dentro del sustrato. Sale inalterada de la reaccin.

Control de calidad de la sntesis proteca: Va ERAD. La va ERAD (ERAD, significa degradacin asociada al retculo endoplsmico) es la exportacin desde el RE al citosol de las protenas mal

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plegadas para su posterior degradacin. En este mecanismo de reconocimiento y unin a las protenas mal plegadas en el lumen del retculo participan las chaperonas. Las chaperonas probablemente estn implicadas en la distincin de intermediarios de plegamiento de las protenas terminalmente defectuosas y en la iniciacin del marcaje para su degradacin. En el retculo endoplsmico, las protenas no glicosiladas mal plegadas son reconocidas por BiP, pero la interaccin subsecuente es con protenas miembros de la familia PDI, anclada a la membrana del retculo endoplsmico. Los miembros de la familia PDI forman los puentes disulfuro en la protena, PDI es requerida para exportar sustratos con puentes disulfuro al citoplasma. En la va ERAD, la interaccin con PDI u otros miembros de la familia es un requisito para la exportacin al citoplasma, tenga o no puentes disulfuro el sustrato. El plegamiento incorrecto lleva a una asociacin prolongada con chaperonas, escindindose un residuo de manosa del N-glicano de la protena por manosidasa I del RE (Mns1p) y el reconocimiento del glicano sin este residuo de manosa por Htm1p, que marca a la glicoprotena mal plegada para su degradacin. El marcaje para la exportacin de las protenas mal plegadas no glicosiladas puede ser mediada directamente por PDI. Las protenas mal plegadas son exportadas al citosol a travs de un canal formado por Sec61p y mltiples protenas accesorias. Durante la exportacin las protenas son oligoubiquitinadas por un conjunto de enzimas E2-E3. Rmisch (2005) seala tres escenarios mediante los cuales una protena mal plegada llega hasta el proteasoma, de acuerdo al nivel de ubiquitinacin de la protena: 1. Cuando los sustratos pobremente ubiquitinados se encuentran en el canal Sec61p con destino al citoplasma, son ayudados por E4 que aumenta el tamao de la cadena de ubiquitina y posterior deglucosidacin por otras enzimas citoslicas antes de ser reconocido por la subunidad regulatoria del proteasoma 19SRP. 2. Alternativamente la ubiquitinacin puede ser mediada por el complejo ubiquitn ligasa: SCF-N-glicano. SCF (sigla del ingls, protena Skp1-Cul1-caja F) es un receptor perteneciente a una familia de ubiquitin ligasa que reconoce y agrega ubiquitina a protenas N-glicosiladas que han sido transportadas al citosol. Estas protenas constan de 4 subunidades y la subunidad que contiene un lugar que

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reconoce y se une al sustrato. En mamfero se han reconocido dos miembros de la familia SCF
FBS1

y SCF

FBS2

. FBS1 se expresa principalmente en neuronas y se une

fuertemente a la fraccin quitobiosa de glicoprotenas desnaturalizadas. FBS2 se expresa en gran cantidad de clulas distintas. 3. A un alto nivel de ubiquitinacin del sustrato, el proteasoma se une directamente al canal Sec61p y extrae la protena mal plegada desde el RE.

Retculo endoplsmico liso

1. Generalidades. El retculo endoplsmico liso es ms tubular que el retculo endoplsmico rugoso, y estos tbulos se encuentran profusamente anastomosados formando una verdadera red de tbulos. El retculo endoplsmico liso no tiene ribosomas en su superficie externa. Est conformado por canales tubulares que se anastomosan, facilitando la intercomunicacin de los contenidos del mismo. El retculo endoplsmico liso est implicado en la produccin de lpidos, sntesis de bloques de carbohidratos (glicgeno) destinados al metabolismo de carbohidratos, detoxificacin de drogas y venenos y almacenamiento de calcio. Por lo tanto, en algunas clulas como neurona y clulas musculares se encuentra muy desarrollado porque requieren del metabolismo de lpidos y carbohidratos, o en hepatocitos, donde contribuye a la detoxificacin, metabolizando drogas como barbitricos o alcohol. En las clulas musculares el retculo endoplsmico libera el calcio almacenado y gatilla la contraccin muscular. En las clulas de los diferentes tejidos el retculo endoplsmico liso juega un rol muy importante en la regulacin del calcio, y de lo iones cloruros, en el transporte de los lpidos y la sntesis y circulacin de fosfolpidos y glicoprotenas de membrana, en el metabolismo de los lpidos, lipoprotenas y glicgeno, en la sntesis de hormonas esteroidales y en la detoxificacin.

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2. Sntesis de lpidos y fosfolpidos. Vitamina A. En las clulas pigmentadas de la retina, el retculo endoplsmico liso est implicado en la esterificacin de la vitamina A, la rodopsina, el pigmento visual, est compuesto de un aldehdo de la vitamina A.

3. Sntesis de hormonas esteroidades. Participa en la produccin de esteroides, como sucede en la glndula adrenal y en las gnadas, formados a partir de colesterol se sintetizan estrgenos, testosteronas, cortisol y progesterona, vas en las que intervienen las enzimas mencionadas anteriormente. Los esteroides en las clulas de la corteza adrenal difunden, no van incorporados a grnulos de secrecin como en el caso de las protenas.

4. Calcio y sodio. En las clulas regula la distribucin de los iones calcio, ya que el lumen del retculo endoplsmico es el principal sitio de almacenamiento de la clula. En las clulas musculares, se denomina retculo sarcoplsmico, regula la contraccin. Contiene en su interior una AT pasa dependiente de Calcio. La liberacin de los iones calcio promueve la contraccin.

5. Metabolismo de Glcidos. En el retculo endoplsmico liso de hepatocitos, la presencia de Glucosa 6 fosfato interviene en el metabolismo del glicgeno (heptico). En el retculo endoplsmico liso de los hepatocitos ocurre la sntesis de glicgeno y almacenamiento como grnulos en el exterior del retculo endoplsmico liso disponible para la degradacin de glucgeno con la liberacin de glucosa 1 fosfato.

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6. Detoxificacin. Aumenta en los hepatocitos luego de la exposicin a barbitricos; transforma los frmacos liposolubles en productos hidrosolubles que pueden ser excretados por el rin. Tambin metaboliza el alcohol producto de beber en exceso. Contiene hidrolasas, lipooxidasas y metilasas que son responsables de estos procesos.

7. Formacin de vesiculas que van del RE al Golgi. La mayor parte de las protenas exportadas desde el retculo

endoplsmico salen del organelo en vesculas que yeman desde la porcin lisa de retculo endoplsmico, esta regin carece de ribosomas. El retculo endoplsmico liso no se encuentra tan desarrollado en algunas clulas y por esto es denominado retculo endoplsmico de transicin. Por qu se produce la retencin de protenas en el RE? Algunos autores se refieren a esto como regulacin de los sitios de salida de los productos proteicos en los que intervendran dos estructuras protecas, una el coatmero COP II que forma la cubierta externa de la vescula que sale del RE con destino a las cisternas cis del Golgi y una protena SAR, una GTPasa (intercambia GTP por GDP, pudiendose de esta manera hacer el movimiento de vesculas entre compartimientos) de la familia Ras. En estos sitios de salida, tambien denominados RE de transicin (ERGIC), se inicia la yemacin de las vesculas, con la incorporacin de los coatmeros en la parte externa, que van unidos a otras protenas integrales de membrana, como lo muestra el esquema. Micrografas electrnicas muestran que en estos sitios se producen numerosas vesculas que migran hacia el Golgi, y se fusionan con las cisternas cis del Golgi. Las vesculas tienen dimensiones de alrededor de 50 nm. A nivel de la exportacin del RE, la clasificacin de las protenas en los sitios de salida determina si una protena puede abandonar el RE. Aqu las seales de exportacin y retencin, los efectos de la movilidad de protenas en el RE y la inclusin selectiva en los sitios de salida del RE son factores cruciales. Como conclusin se debe sealar que en el retculo el plegamiento y la maduracin estn constantemente sujetos a procesos de ensayo-error, y una

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fraccin sustancial de protenas es degradada rpidamente despus de la sntesis. Es as como el proceso de plegamiento y ensamble de proetnas est asociado a la exportacin por transporte vesicular.

El Aparato o Complejo de Golgi

1. Generalidades. El aparato o complejo de Golgi es un organelo constitudo por una serie de sacos aplanados o cisternas y vesculas asociadas, cuya funcin principal es la modificacin postraduccional y clasificacin de protenas sintetizadas en el RE y destinadas por medio de vesculas a: lisosomas, membrana plasmtica o a secrecin. El Golgi est ubicado cerca del ncleo, del retculo endoplsmico y del centrosoma. Su tamao es variable y su desarrollo depende del tipo celular y de su estado metablico y del ciclo celular. La unidad bsica del organelo es el sculo, que consiste en una vescula o cisterna aplanada con una regin central de 0,5-1 mm de dimetro. Las cisternas o sculos presentan una forma curva concntrica, con una cara convexa y otra cncava, se disponen en pilas paralelas separadas por 20 a 30 nm. Esta serie de sculos apilados conforman un dictiosoma. En las clulas animales, el nmero de dictiosomas vara entre 3 y 7. El Golgi est compuesto de una asociacin de dictiosomas. Los dictiosomas estn polarizados. Tienen una cara cis (proximal o formadora), generalmente convexa y cercana a la envoltura nuclear y al retculo endoplsmico, y una cara trans, (distal o de maduracin), cncava, rodeando la regin que contiene vesculas grandes que contienen el material procesado. Forman tambin parte del Golgi, una serie de vesculas regularmente esfricas que se forman a ambos lados de los extremos del Golgi, y entre los sculos. En la cara cis se localizan las denominadas vesculas de transicin y en la cara trans las vesculas de secrecin. Es frecuente encontrar la denominacin con la sigla TGN, que significa red trans Golgi, al lugar donde emergen las

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vesculas de secrecin. Es posible diferenciar tambin tbulos tanto en la cara distal como en la cara proximal del Golgi. El Aparato de Golgi tiene la caracterstica de ser un organelo muy dinmico dentro de la clula. Todas las protenas que lo componen son transitorias, llegan al Golgi desde el retculo endoplsmico y salen del Golgi con diversos destinos en la clula. Consta con una enorme diversidad de protenas, ms de 1000 tipos distintos. Los microtbulos asociados a protenas motoras constituyentes del citoesqueleto mantienen la localizacin, la forma y, por tanto las funciones del aparato de Golgi. En el curso de la mitosis, el Golgi se fragmenta en pequeas vesculas que se diseminan por todo el citoplasma. Los microtbulos tambin participan en el reciclaje de membranas hacia el RE y en el transporte de material de secrecin de la red trans del Golgi. El Aparato de Golgi realiza tres funciones principales, esenciales para el crecimiento, la homeostasis y la divisin de la clula. Opera como proveedor de carbohidratos en el procesamiento y modificacin de protenas y lpidos que se mueven a travs de la va secretoria. Sirve de centro de transporte y direccionamiento de protenas en la clula y recibe membranas desde el retculo endoplsmico y las enva a la membrana plasmtica u otros sitios celulares. Acta como andamiaje membranoso donde se anclan las protenas del citoesqueleto y las sorteadas con distintas seales. Los siguientes mecanismos transcurren en el Aparato de Golgi en las clulas animales: 1. maduracin de las glicoprotenas provenientes de retculo. 2. intervencin en los procesos de secrecin, almacenamiento, transporte y transferencia de glicoprotenas. 3. Formacin de membranas: membrana plasmtica, membrana del retculo y la membrana de la envoltura nuclear. 4. Formacin de los lisosomas. En el Golgi ocurren una serie de modificaciones postraduccionales (modificaciones que ocurren luego que las protenas han sido sintetizadas), procesos de empaquetamiento y distribucin de sustancias que ocurren en determinadas cisternas:

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ERGIC (compartimiento intermedio Golgi- Retculo Endoplsmico) o VTC (complejo Tubulo Vesicular) o compartimiento pre GOLGI intermedio. Corresponde a un compartimiento que se encuentra entre el retculo endoplsmico rugoso y el Golgi. 1. Cisterna cis o CNG. Adicin de Grupos fosfato a las protenas destinadas a los lisosomas. Se agregan en la cisterna cis del Golgi. Fosforilacin de las glicoprotenas destinadas a los lisosomas, fosforilacin de la manosa del oligosacrido de las protenas y remocin de manosa no fosforilada. 2. Cisterna media. Sulfatacin de protenas, estos grupos sulfatos se agregan a residuos de oligosacridos unidos las protenas, sulfatacin de residuos especficos de tirosina. Sntesis de proteoglicanos. Los proteoglicanos corresponden a glicoprotenas altamente glicosiladas. Remocin de manosa, y se agregan residuos de N-acetilglucosamina al oligosacrido. Glicosilacin de protenas en residuos de treonina o serina, conformando los grupos glicanos O-ligados a las glicoprotenas. 3. Cisterna trans y red trans Golgi o TNG. Empaquetamiento, distribucin de las molculas en regiones de la cisterna donde va a ocurrir la vesiculacin para el transporte de las sustancias, dependiendo del destino de las protenas. Es la organizacin de las sustancias para ser exportadas posteriormente en lugares especficos de la cisterna. Remocin de galactosa y se agrega cido silico o N-acetilneuramnico (NANA). procesamiento del oligosacrido N-unido termina con el agregado de los ltimos cidos silicos. Condensacin, prdida de agua necesaria para el empaquetamiento, esta prdida de agua de las sustancias permite reducir el volumen para la exportacin desde el Golgi. Acumulacin de las protenas en regiones especficas de la cisterna, necesario para el empaquetamiento. Protelisis final, ejemplo protelisis especfica de proprotenas (ej., proinsulina). Es el procesamiento de protenas que pasan a travs del Golgi, donde pierden parte de la cadena polipeptdica para transformarse a la forma activa.

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Normalmente la parte de las protenas que son escindidas del producto final corresponde a regiones donde se encuentran pptidos seales que han enviado a la protena como preprotena hasta la cisterna donde es procesada. Ejemplo de esto es la insulina. La insulina es transportada desde el retculo endoplsmico rugoso como proinsulina al Golgi, y tiene como parte de la cadena polipeptdica a un pptido C, adems del pptido A y pptido B. Este pptido C es escindido de la cadena polipeptdica antes de abandonar el Golgi. La funcin de esta parte de la cadena polipeptdica es asegurar el paso por el Golgi. Distribucin especfica de los productos a travs del proceso de vesiculacin, est dada por seales peptdicas principalmente que envan a las protenas en distintos tipos de vesculas y de compartimientos endocticos (endosomas, lisosomas, vacuolas).

En resumen. Todas las cisternas participan en los procesos de vesiculacin: formacin de pequeos cuerpos rodeados por membranas y que contienen sustancias que van a ser transportadas dentro de la clula o hacia afuera de la clula. Glicosilacin de protenas. En el Golgi ocurre la glicosilacin en los residuos de aminocidos de la protena serina o treonina. Estos aminocidos contienen un grupo hidroxilo al que se agregan cadenas de azcares a las protenas.

Vesiculacin o Trfico vesicular Las etapas en un paso de transporte mediado por vesculas (trfico vesicular): 1. Clasificacin y acumulacin del material a ser transportado en el organelo, debajo de la membrana. 2. Vesiculacin o yemacin, mediante el reclutamiento de protenas citoslicas que recubrirn la vescula formada y facilitarn la formacin de la vescula. Estas protenas citoslicas incluyen a protenas de la cubierta sea de clatrina o coatmeros y a sus protenas adaptadoras.

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3. Desprendimiento, escicin o liberacin de la vescula mediante la intervencin de una protena: la dinamina y una vez libre la vescula de su organelo formador de la vescula se liberan las protenas de la cubierta. 4. Direccionamiento / transporte de la vescula, a un destino especificado por las protenas de direccionamiento. 5. Reconocimiento de la membrana de destino de la vescula, mediante protenas integrales de membrana del complejo SNARE tanto en la vescula como en el organelo blanco y fijacin de estos complejos con protenas solubles citoslicas SNAP y NSF. 6. Fusin de las membranas de la vescula y de la membrana de destino y liberacin del contenido del orgnulo al organelo blanco. En la va secretora es posible diferenciar distintos tipos de vesculas, como las que van del RE de transicin al Golgi y viceversa, entre las cisternas del Golgi y dos tipos diferentes de secrecin celular: Un tipo de secrecin constitutiva y otro tipo de secrecin regulada. Ambos tipos de secrecin se diferencian porque la vescula puede vaciar su contenido en cuanto alcanza la membrana celular al abandonar la cara trans del Golgi, y en este caso hablamos de secrecin constitutiva o bien se almacena transitoriamente en el citosol cerca de la membrana esperando una seal que indique que la vescula debe vaciar su contenido al exterior, y en este caso hablamos de secrecin regulada. Este ltimo caso podemos ejemplificarlo con la secrecin de insulina en las clulas beta de los islotes de Lagerhans en el pncreas. Las vesculas que participan en la secrecin constitutiva tienen cubierta de coatmero COP I, en tanto que las de la secrecin regulada tienen cubierta de clatrina.

Sistema vacuolar. Las distintas vesculas se pueden diferenciar por las cubiertas protecas que llevan en el lado citoplasmtico. Hay tres tipos de vesiculas de acuerdo a la cubierta proteca: vesculas con cubiertas de clatrina, vesculas recubiertas por coatmero COP I y vesculas cubiertas por coatmero COP II.

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Vesculas recubiertas de clatrina. Aisladas por primera vez en oocitos del zancudo Aedes aegypti, las vesculas con cubiertas de clatrina tienen un dimetro entre 50 y 100 nm, siendo el elemento bsico la clatrina, protena heterodimrica formada por 3 cadenas pesadas (1675 aminocidos, 180 Kda, codificada por el gen HC17) y tres livianas (35-40 Kda), organizadas en una estructura denominada trisquelin. Existen dos tipos de cadenas livianas, alfa y beta. La sntesis de las subunidades que conforman la clatrina ocurre en el citoplasma, en polisomas libres, es decir en la va citoplasmtica y luego se organiza la clatrina a la forma de trisqueliones. Luego ocurre la polimerizacin de clatrina para conformar los canastillos de clatrina alrededor de las yemas en formacin que conformarn las vesculas. Este proceso ocurre en la cisternas trans y red trans del Golgi y tambin en la cara citoslica de la membrana plasmtica, por lo tanto las vesculas revestidas por clatrina participan en el transporte de sustancias entre la red trans del Golgi a la membrana plasmtica, y desde la membrana plasmtica en los procesos de endocitosis y tambin en la formacin de lisosomas. La polimerizacin de la clatrina es dependiente de su concentracin en el citoplasma, definindose as una concentracin crtica de trisqueliones que hace posible la polimerizacin de estas unidades que forman la cubierta o canastillo de clatrina. Las vesculas recubiertas por clatrina dan origen a las vesculas que participan en la secrecin regulada por receptor. Otros procesos donde se forma cubierta de clatrina son la endocitosis mediada por receptor, la fagocitosis, la transcitosis y la pinocitosis.

Por qu no se autopolimeriza la clatrina en la clula? En la clula la autopolimerizacin de la clatrina no es posible porque los trisqueliones solubles estn asociados a una chaperona citoslica (hsp70), en un mecanismo anlogo al de respuesta a las protenas mal plegadas del RER, por lo tanto su polimerizacin siempre est asociado a la formacin de vesculas intracelulares recubiertas. La clatrina se une a las membranas mediante unas protenas denominados adaptadores o adaptinas, de las cuales las ms importantes son las adaptinas AP, GGA. Las adaptinas AP tambin se les

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denominan "Ratn Mickey", porque su estructura molecular se asemeja a la cara de este personaje de Disney. Entre la red de clatrina y la membrana de la vescula hay un espacio de 20 nm en el que se encuentran las partculas de protenas adaptadoras, de 350 Kda.

Se han descrito 4 complejos de adaptadores diferentes: 1) Los adaptadores que reconocen las regiones de membrana que contienen receptores con la seal de transporte. 2) Los adaptadores que reconocen la carga a transportar, es decir el contenido de la vescula. 3) Los adaptadores que reclutan los trisqueliones de clatrina. 4) Los adaptadores que reclutan las protenas auxiliares.

Vesculas recubiertas por coatmeros. Las vesiculas con cubierta de coatmeros COP I y COP II dirigen el trfico de protenas y membranas entre los compartimientos iniciales de la va secretoria. Estas cubiertas protecas participan en la seleccin de las protenas a transportar y deformar la membrana de la cisterna dadora, para formar yemas al inicio del proceso y luego vesculas. Las vesculas cubiertas por la protena COP II salen del retculo endoplsmico con destino a la red cis del Golgi. Las vesculas con cubierta COP I, median la va retrgrada que recicla selectivamente las protenas desde la cara cis del Golgi al retculo endoplsmico, tambin de retorno entre cisternas vecinas del Golgi, participando en el traslado de protenas y sustancias entre las cisternas del Golgi y mantienen la estructura normal del complejo Golgi interfsico.

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Proceso de vesiculacin. Adems de las protenas de cubierta mencionadas anteriormente y las molculas adaptadoras, tambin en el proceso de vesiculacin participan pequeas molculas que unen GTP en el caso de la formacin del canastillo de clatrina, que son necesarias para la formacin de la vescula revestida.

Formacin del canastillo o jaula de clatrina. La formacin de la vescula con cubierta de clatrina a la forma de canastillo o jaula est dirigida por partculas de ensamble que promueven la polimerizacin de los trisqueliones dependiendo de la concentracin de estos en el citoplasma una vez iniciada la yemacin. El contenido de protenas a transportar tambin se acumula en este punto, donde se encuentran mayormente concentradas. Una vez formada la vescula interviene la dinamina, una protena citoslica que liga y cierra la vescula, liberndola definitivamente de su sitio de formacin hidrolizando GTP a GDP.

Formacin de cubierta de coatmero COP I y COP II. La formacin de la vescula COP I y COP II se inicia cuando una enzima asociada al Golgi cataliza el intercambio de GDP por GTP en una protena en la cara citoplasmtica del Golgi, ARF (ARF corresponde a un factor de ribosilacin de ADP), iniciando la polimerizacin de los coatmeros COP I que a su vez induce la yemacin de la vescula.

Sistema endoctico. Cmo se orienta una vescula que contiene material a transportar desde el sitio que se genera al sitio donde debe depositar su carga? La opcin del destino de la vescula, especialmente en el sistema endosoma-lisosoma est dado por pptido seales contenidos en los dominios citoslicos de las protenas transmembrana. Como parte de estas seales estn

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los voluminosos residuos hidrofbicos que contienen tirosina o leucina. Son seales cortas, con arreglos lineales de aminocidos. No son conservadas, son motivos degenerados donde 2 3 tienen importancia crtica en la funcin desempeada. Las seales de direccionamiento de protenas en la va endoctica permiten que desde la membrana plasmtica las protenas permanezcan formando parte de ella o sean internalizadas en los endosomas, que en la red trans Golgi viajen hasta la membrana plasmtica o a los endosomas, o bien que desde los endosomas sean reciclados a la membrana plasmtica o a los lisosomas. En estas decisiones de direccionamiento en la clula participa tambin una maquinaria molecular que reconoce a aquellas seales y libera las protenas a sus destinos tentativos.

Lisosomas

1. Generalidades. Los lisosomas son organelos rodeados de membrana de alrededor de 250 a 500 m, su nombre se debe a que el organelo puede lisar es decir romper o degradar productos dentro de la clula, como protenas, cidos nuclecos (ADN, ARN), carbohidratos y lpidos. Su ruptura en una clula causara la destruccin total de sta. Tienen una membrana que rodea al lisosoma y que contiene una mezcla de enzimas hidrolticas que sirven como el principal compartimiento degradativo para macromolculas dentro del sistema vacuolar. Son el destino final de muchos materiales celulares endocticos, autofgicos y secretorios marcados debidamente con una seal para su destruccin. La degradacin en los lisosomas es crtica en muchos procesos fisiolgicos incluyendo el recambio de protenas normales de la clula, los productos de la degradacin de las protenas pueden ser reutilizados por la clula, la regulacin en cadena de los receptores, la liberacin de los nutrientes endocitados, la inactivacin de organismos patgenos y el procesamiento de antgenos. Los lisosomas juegan un rol fundamental en la homeostasis de iones metlicos y en la reparacin de membranas. La identificacin de los lisosomas al microscopio basado en la apariencia es difcil debido a la heterogeneidad de formas. La identificacin de los lisosomas

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es ms precisa a travs de protenas integrales de membranas altamente glicosiladas, denominadas Lamp (protenas de membrana asociada al lisosoma), Limp (glicoprotena de lisosomas de rata de 35 a 50 kDa), Lgp (glicoprotenas lisosmicas). Los lisosomas tienen la caracterstica del lumen cido, albergando numerosas hidrolasas dependientes de un medio cido. El gran espectro de enzimas degradativas contenidas en los lisosomas asegura la completa digestin de los materiales liberados a los lisosomas. En los lisosomas estn ausentes los receptores manosa fosfato catin dependiente (cd) y catin independiente (ci) que los distingue del ltimo compartimiento endosmico.

2. Formacin de lisosomas. Los lisosomas se forman a partir del Golgi a travs de compartimientos endosmicos. Hay dos modelos propuestos para la biognesis de los lisosomas, uno es el modelo de maduracin de los lisosomas que implica la formacin de endosomas tempranos por coalescencia de vesculas originadas en la membrana plasmtica. La remocin de vesculas reciclables y la adicin de vesculas de la red trans Golgi transforma estos endosomas en endosoma tardos y eventualmente lisosomas. El otro modelo de transporte vesicular propone que los endosomas tempranos, los endosomas tardos y los lisosomas son compartimientos estables. El transporte procede desde los endosomas tempranos a travs de vesculas transportadoras de endosomas con caractersticas de un cuerpo multivesicular, a endosomas tardos los cuales maduran a lisosomas. Las interacciones entre endosomas tardos y lisosomas incluyen el modelo "kiss and run", contacto transiente entre endosomas tardos y lisosomas. Este modelo propone que los endosomas y los lisosomas sufren ciclos repetidos de fusin y fisin permitiendo la transferencia de materiales y mantencin de los lisosomas maduros. Una reciente variacin de este modelo propone la fusin de endosomas tardos con lisosomas, dando origen a un organelo hbrido con una subsecuente reformacin de los lisosomas.

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Vas de direccionamiento de protenas desde red Trans Golgi al lisosoma. Las hidrolasas destinadas a los lisosomas llevan covalentemente unida la marca de manosa-6-fosfato que se une a los receptores de manosa-6-fosfato ubicados en la membrana de la red trans Golgi. El complejo hidrolasa-receptor va incorporado a vesculas hasta los endosomas tempranos o tardos. Aqu en los endosomas, las hidrolasas se disocian del receptor y son liberadas a los lisosomas, mientras los receptores se reciclan de regreso a la red trans Golgi. Otras vas independientes de manosa-6-fosfato existen aparentemente como vas directas y son las de las protenas integrales del lisosoma, como las protenas Lamp-1 (Lamp: protenas de membrana asociadas al lisosoma), que van directamente desde la red trans Golgi al lisosoma o tambin como va indirecta desde el Golgi a la membrana plasmtica y luego a los endosomas. El direccionamiento de protenas de los receptores de manosa fosfato y de las protenas lisosmicas es mediado por seales presentes en los dominios citoplasmticos de estas protenas. Las seales son reconocidas por molculas citoslicas que son reclutadas en las membranas en los sitios de formacin de las vesculas como red trans Golgi, membrana plasmtica y endosomas. Las molculas que reconocen las protenas a transportar son los complejos adaptadores AP-1, AP-2, AP-3 y AP-4. AP-1 juega un rol como reciclador de receptores de manosa-6-fosfato y como mediador del transporte de receptores de manosa-6-fosfato y protenas integrales de los lisosomas desde la red trans Golgi a los lisosomas. AP-2 est implicado en una rpida internalizacin desde la membrana plasmtica y probablemente participan en la endocitosis de los receptores de manosa-6-fosfato y trfico de las protenas de las membranas lisosmicas a travs de la va indirecta hasta los lisosomas. AP-3 ha sido implicada principalmente en la biognesis de organelos relacionados a los lisosomas y participara tambin en el direccionamiento de protenas de algunas protenas de membrana lisosmica a los lisosomas desde sitios intracelulares (red trans Golgi o endosomas). AP-4 se localiza en la red trans Golgi y podra estar implicada en el direccionamiento de protenas de molculas a los lisosomas, pero no hay

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evidencias para confirmar esto. El complejo COP I media el direccionamiento de protenas de protenas entre los endosomas tempranos y tardos. As los complejos AP y COP I participan en el direccionamiento en la ruta a los lisosomas, aunque todava no es muy claro cuales de estos complejos son responsables primariamente del marcaje del volumen de protenas lisosmicas a los lisosomas. Otra familia de protenas de cubierta que facilitan el transporte de protenas desde la red trans Golgi al sistema endosoma/lisosoma son las protenas GGA, con tres miembros en los mamferos: GGA1, GGA2 y GGA3. Esta protenas se localizan en las yemas y en las vesculas con cubiertas en el rea de la red trans Golgi. El reclutamiento de las GGA a la red trans Golgi es mediada por factores de ADP-ribosilacin de la familia de protenas ARF(que significa factor de ribosilacin de ADP), en virtud de una interaccin directa entre la regin GAT, una regin de unin de ligandos variable de las GGA y el GTP unido a ARF. El dominio GAE en el carboxilo terminal de las GGA interacta con gama-sinergina, una potencial molcula regulatoria. Algunas GGA tienen una regin GAT que se une a la clatrina.

Rabs y SNARE implicadas en el transporte a los lisosomas. Una vez que las vesculas transportadoras se forman con las protenas cargo direccionados en el interior, las vesculas deben ser marcadas y fusionadas a compartimientos aceptores. Una clase de protenas pequeas que unen GTP, denominadas Rab, se localizan en la membrana plasmtica y en los organelos de las vas secretoras y endocticas y funcionan en el transporte de vesculas y en el proceso de anclaje y fusin. En la etapa de unin de GTP, las protenas rabs unen las membranas y reclutan las molculas regulatorias y efectoras del anclaje y fusin. Rab-7 y Rab-9 se localizan en la superficie de los compartimientos endocticos tardos. Rab-7 se requiere para el transporte al lisosoma y Rab-9 media el reciclaje de los receptores de manosa fosfato desde el endosoma tardo a la red trans Golgi. El marcaje y la fusin de membranas requieren tambin de las protenas de membrana asociadas a vesculas VAMP/sinaptobrevina, sintaxina y familias de protenas asociadas a sinaptosoma SNAP-25, de 25 kDa. Estas protenas son

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denominadas en conjunto como receptores de protenas de anclaje (SNAP) factor N-etilmaleimida sensibles (NSF) o SNARE. Sintaxina-7 y VAMP-7 median la fusin heterotpica y homotpica que implican a los lisosomas. Sintaxina-8 se encuentra en los endosomas, lisosomas y posiblemente en la red trans Golgi y media el direccionamiento desde los endosomas tempranos a los endosomas tardos. El grado en que estas u otras SNARE se requieren para el direccionamiento de los lisosomas maduros es incierto. Las interacciones funcionales entre las v-SNARE (SNARE de membrana de vesculas) y t-SNARE (SNARE del organelo blanco) en mltiples vas de direccionamiento y entre las vSNARE o t-SNARE con varios otros sistemas sugiere la participacin de efectores Rab y lpidos modificados.

Rutas para la liberacin de materiales desde la vacuola de la levadura. Al menos seis vas estn implicadas en el trfico vacuolar de la levadura: 1. Endocitosis desde la superficie celular 2. Va del citoplasma a la vacuola 3. Autofagia 4. Herencia de vacuolas durante la divisin celular 5. Va de la carboxipeptidasa Y (CPY) desde el trans Golgi 6. Va de la fosfatasa alcalina (ALP) desde el trans Golgi La endocitosis es esencial en la regulacin de los niveles de protenas de membranas que funcionan como receptores y requiere de una comunicacin regulada entre los mediadores endocticos y el citoesqueleto de actina.

3. Endosoma primario. El sistema endosmico juega un importante rol en el procesamiento de nutrientes derivados extracelularmente, en la regulacin de receptores activados de la superficie celular, mantencin de la homeostasis de la membrana y defensa contra patgenos. Los ligandos internalizados son vaciados al inicio a los endosomas, donde ocurre una serie de eventos de clasificacin o direccionamiento. Subsecuentemente, los ligandos o complejos ligando-receptor

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son vaciados a los lisosomas para su degradacin o bien reciclados a la membrana plasmtica o al Golgi.

4. Membrana del lisosoma. La membrana limitante de los lisosomas est conformada por una familia de protenas altamente glicosiladas cuya funcin sera mantener la estabilidad y la integridad de la membrana del lisosoma, a estas protenas ms abundantes en la membrana del lisosoma se les denomina protenas mayores de la membrana del lisosoma, esta funcin es atribuda a la alta glicosilacin de estas protenas. La superficie interna de la membrana limitante del lisosoma est completamente tapizada por una capa de carbohidratos, generando un glucoclix continuo. El principal rol de estas protenas, presentes en lisosomas y endosomas tardos, es la proteccin de la membrana lisosmica de la degradacin de las hidrolasas cidas que contiene el lisosoma. Los lisosomas contienen adems en sus membranas un cido graso especial que no es atacado por las lipasas, es el cido liso-bis-fosfatidico. Adems la membrana del lisosoma participa en los procesos de autofagia, en la fusin de membranas de organelos secretorios, en la biognesis de lisosomas y endosomas e interaccin de las vesculas del sistema fusinfisin vesicular. En comn son protenas integrales de membrana que tienen dominios altamente glicosilados al interior del lumen y un pequeo dominio citoplasmtico de 10-11 aminocidos como Lamp-1, protena de membrana asociada al lisosoma de 120 kDa. Lamp1 se encuentra distribuda en la membrana de los endosomas tardos y los lisosomas. A veces tambin se ha detectado en bajas concentraciones en la membrana plasmtica y en los endosomas tempranos. Lamp1 se integra a los lisosomas a travs de la va endoctica a partir del Golgi, el mecanismo de integracin al lisosoma es distinto a la integracin de las protenas solubles que lo hacen a travs del receptor de manosa-6-fosfato. En el caso de Lamp-1, y de las otras protenas de membrana del lisosoma es a travs de la seal ubicada en el dominio citoplasmtico de la protena, en el extremo carboxilo terminal y es separada en la cisterna trans del Golgi de las dems protenas destinadas a otros compartimientos y de aqullas lisosmicas solubles. Desde all son transportadas hasta los endosomas tardos y enseguida a los lisosomas.

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La fusin de los lisosomas con la membrana de otros organelos es un paso clave para la adquirir los materiales internalizados o biosintetizados a ser degradados. Los lisosomas se fusionan con endosomas tardos y fagosomas (fusin heterotpica, a la fusin que ocurre entre distintos organelos) y tambin con otros lisosomas (fusin homotpica, fusin que ocurre entre dos organelos iguales). La membrana de los lisosomas est compuesta de fosfolpidos y colesterol y una abundante cantidad de carbohidratos. Ms an algunas protenas de membrana deben mediar la funcin de acidificar el lumen del lisosoma como es la bomba de protones ubicada en la membrana del lisosoma. Adems debes ser traslocados a travs de la membrana los aminocidos, cidos grasos y carbohidratos productos de la actividad degradativa del lisosoma y los nutrientes como la vitamina B12 y el colesterol.

Componentes menores en la membrana del lisosoma: Los componentes menores de la membrana del lisosoma tienen roles tan importantes como la mantencin del pH cido interno del lisosoma. Esta funcin es desarrollada por una bomba de protones vacuolar que es una protn-ATPasa tipo V ubicada en la membrana del lisosoma que usa la energa derivada de la hidrlisis del ATP para impulsar la traslocacin de protones desde el citoplasma al lumen lisosmico. La bomba de protones es un complejo proteco conformado por 13 subunidades. Ocho de estas subunidades se encuentran en el lado citoslico de la membrana del lisosoma y es responsable de la hidrlisis del ATP. Cinco subunidades forman la parte integral del complejo y median la traslocacin de protones. Este proceso es contra gradiente, por esto necesita del ATP. Las personas que presentan una de las subunidades de la fraccin del complejo encargada de la traslocacin de protones defectuosa, especficamente la subunidad de 116 kDa, producto de una mutacin, desarrollan severas osteopetrosis, por una inhibicin de la desmineralizacin en la matriz del hueso, producida a raz de este defecto de una deficiente acidificacin de los lisosomas. Otros componentes menores de la membrana del lisosoma son los transportadores de aminocidos que transladan los aminocidos resultantes de la degradacin de protenas que tiene lugar en el lisosoma al citoplasma, para

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ser usados en la sntesis de protenas. Uno de estos transportadores es el transportador de cistena. El transportador defectuoso producto de mutacin del gen CTNS que codifica al receptor de cistena, causa cistinosis que afecta la funcin renal. Otro transportador identificado es el transportador de lisina. Los transportadores de monosacridos envan al citoplasma los monosacridos resultantes de la degradacin de oligosacridos en el lisosoma, como el transportador de cido silico denominado sialina. Una mutacin en el gen AST que codifica la sialina, produce la enfermedad de Salla. Un posible transportador de nucletidos es la protena LAPPTM4 alfa. Un transportador de colesterol, codificado por el gen NPC-1, cuya mutacin causa el sndrome de Niemann- Pick tipo C. Un transportador de vesculas sinpticas en las neuronas y sensor del pH cido del lisosoma, codificado por el gen CLN3, cuya mutacin causa la lipofuscinosis ceroide neuronal o enfermedad de Batten. Un transportador de hierro, NRAMP2, asociado a transferrina. Algunas protenas de membrana del lisosoma estn implicadas en funciones enzimticas como LALP70 implicada en el metabolismo de los nucletidos di- y trifosfato. LAP es una fosfatasa cida implicada en desfosforilacin. La enzima acetil Co A: alfa glucosamida N-acetil transferasa, responsable de la transferencia de los grupos acetilos al heparan sulfato. Una mutacin en el gen de esta enzima causa la enfermedad de San Filippo Tipo C (MPS III C), esta en una enfermedad de almacenamiento lisosmico en los cuales el heparan sulfato no digerido y la heparina se acumulan en los lisosomas.

Bomba de Protones. La bomba de protones dependientes de ATP de endosomas tardos y lisosomas corresponde a ATPasas que son responsables de la acidificacin de estos compartimientos. La acidificacin de los compartimientos vacuolares juega

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un rol importante en una variedad de procesos de trfico de membrana como la endocitosis mediada por receptor, la acidificacin de endosomas que sirve como una seal que activa la liberacin de los ligandos internalizados de sus respectivos receptores, como ocurre en las lipoprotenas de baja densidad (LDL) o insulina. Este desacoplamiento permite que los receptores ocupados ya liberados de sus ligandos reciclen a la superficie celular donde pueden ser reutilizados, mientras que los ligandos pueden ser marcados con destino a los lisosomas para ser degradados. La acidificacin de los endosomas es requerida tambin para la formacin de vesculas transportadoras de endosoma que estn implicados en el movimiento de ligandos en la va endoctica, y tambin favorece la fusin de membranas endosmicas y envoltura del virus de la influenza, en este ltimo caso provoca la infeccin viral. En el marcaje intracelular de enzimas lisosmicas recientemente sintetizadas, la acidificacin vacuolar juega un rol similar al de la endocitosis. En este caso, las enzimas lisosmicas unidas al receptor manosa-6-fosfato son liberadas al ltimo compartimiento de reciclaje (endodoma tardo) donde el pH cido causa la disociacin, receptor manosa-6-fosfato-ligando (donde el ligando es una protena con la marca manosa-6-fosfato), permitiendo que los receptores reciclen al trans Golgi y a las enzimas ser dirigidas a los lisosomas. En los lisosomas y en la vacuola de las levaduras el pH interno cido permite la activacin de las hidrolasas cidas implicadas en la degradacin de macromolculas. El pH cido es generado por bomba de protones que tienen dos dominios funcionales, el dominio citoplasmtico V1 de 570 kDa y el dominio de membrana V0 de 260 kDa. El dominio citoplasmtico es el responsable de la unin del nucletido, ATP, y de la actividad cataltica. Este dominio est compuesto por 9 subunidades diferentes, 2 de las cuales, con tres molculas cada una forma un hexmero, responsable de la hidrlisis y unin del ATP, las restantes participan en la activacin y ensamble de este dominio para conformar la molcula completa, que en su forma general se asemeja tanto en estructura y conformacin de las subunidades a las partculas F de la membrana interna de la mitocondria, al estar conformada por una base anclada a la membrana, un pednculo y una cabeza rotatoria. El dominio V0 de la ATPasa del sistema

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endoctico, participa de la traslocacin del protn a travs de la membrana. Este dominio consta de protenas altamente hidrofbicas, denominadas proteolpidos, cuya rotacin permite la entrada del protn. Adems, es posible que en este dominio se puedan formar canales de agua que permiten a los protones tener acceso a grupos carboxilos escondidos de los proteolpidos.

5. Funciones de los lisosomas. Los lisosomas contienen numerosas enzimas que cumplen funciones degradativas, algunas de estas son: Nucleasas: degradan cidos nucleicos, rompen enlace fosfodister. Proteasas: degradan protenas, rompen enlace peptdico. Lipasas: degradan lpidos. Glucosidasas: degradan carbohidratos.

Exocitosis y endocitosis Autofagia. La autofagia es un complejo proceso celular que implica rearreglos dinmicos de membrana en condiciones fisiolgicas. Luego de la induccin de la autofagia, en condiciones de hambruna, el citoplasma es secuestrado en vesculas y vaciado a organelos de degradacin, el lisosoma en mamferos y la vacuola en la levadura. El proceso es nico y convierte el material intracelular en uno extracelular. Constituye un proceso de adaptacin a condiciones ambientales diferentes. Cuando en condiciones experimentales se cultivan clulas sin los nutrientes adecuados a su sobrevivencia, en el citoplasma se forman rpidamente vacuolas o vesculas en el citosol conteniendo un gran volumen de protenas y organelos. Estas vesculas se denominan autofagosomas y tienen corta vida media, de alrededor de minutos, antes que las hidrolasas lisosmicas inicien la degradacin del contenido de macromolculas, permitiendo la liberacin de unidades monomricas desde el lumen lisosmico al citosol. Esta forma de autofagia se denomina macroautofagia. La membrana del autofagosoma se caracteriza por una relativa ausencia de protenas

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transmembrana, lo que la hace una vescula transportada al lisosoma, destinada a la degradacin hidroltica del lisosoma. La autofagia inducida por hambruna no es selectiva ya que tiene el propsito de generar bloques de construccin necesarios para que la clula pueda sobrevivir a la inanicin. En los mamferos el hgado, que es un rgano muy noble, tiene una alta capacidad de autofagia, lo que permite en condiciones de hambruna suministrar bloques de construccin molecular durante hambrunas. La autofagia, junto con el proteasoma son los dos mecanismos degradativos que permiten la degradacin de protenas, siendo la autofagia el principal mecanismo para la degradacin de protenas de larga vida, y el nico mecanismo para el recambio de organelos, incluyendo mitocondrias y peroxisomas, que ocurre cuando estos organelos estn en desuso o funcionan mal. La membrana que rodea a organelos en desuso proviene del retculo endoplsmico liso. La perixofagia es otra forma de autofagia, destinada exclusivamente a la degradacin de peroxisomas. Se ha descrito la macropexofagia y la micropexofagia dependiendo si el peroxisoma es englobado completamente o parcialmente.

Fagocitosis. Rutas endocticas en mamferos. Johannes y Lamaze (2002) han propuesto 5 rutas en mamiferos. Macropinocitosis es una respuesta transitoria a factores de crecimiento y agentes mitgenos (que promueven o estimulan la mitosis) que contribuye a la incorporacin de la fase fluda a travs de la formacin de grandes vesculas de tamao heterogeneo. Los macropinosomas corresponden a estructuras grandes heterogeneas, vesiculares, dinmicas de rango 0,5-2 micrmetros. La macropinocitosis puede ocurrir en forma constitutiva en algunas lneas celulares. Contribuye a la incorporacin de antgenos y marcaje de clulas que presentan antgenos. La formacin de macropinosomas sigue al plegamiento de la membrana plasmtica, y conduce a la internalizacin

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masiva de membrana desde la superficie celular y es probable que sea regulada por vas de reciclaje en la endocitosis. Probablemente en la activacin de este proceso participa ARF6-GTPasa. Endocitosis asociada a clatrina, es la formacin de fositas o depresiones en la superficie de la membrana plasmtica que en la cara citoplasmtica est recubierta de clatrina formando un canastillo que da soporte a la fosita o depresin. Se forman vesculas del rango de 120 nm. Invaginaciones sin cubierta proteca, se hunden para formar vesculas lisas que comnmente se observan a la microscopa convencional en diversas clulas y participan en la incorporacin de la fase fluda a la clula. Balsas lipdicas (lipid rafts), son conjuntos de lpidos en las membranas ricos en colesterol que son capaces de invaginarse formando vesculas de muy pequeo tamao a travs de cual ingresan sustancias a las clulas. Caveolas son vesculas no originadas por endocitosis que ingresan sustancias a la clula por un proceso no mediado por clatrina.

Endocitosis y Pinocitosis. Endocitosis mediada por clatrina Endocitosis mediada por receptor Caveolas y caveosomas Las caveolas son depresiones planas de superficie lisa de 50-80 nm de dimetro que cubren la superficie de clulas de diferentes tejidos, cubriendo hasta el 35 % de la superficie celular. Las caveolas son estructuras estacionarias y permanecen en el lugar debido a que son sustentadas por citoesqueleto cortical de actina subyacente a la membrana plasmtica. Slo luego de algunas seales especficas se desprenden de la membrana como vescula endoctica. Las caveolas son abundantes en adipocitos, endotelio, msculo, pero no se han detectado en linfocitos y algunas clulas nerviosas, su forma vara dependiendo de la clula donde se encuentren. Participan en los procesos endocticos constitutivos aparentemente y se caracterizan por la presencia de caveolina-1, denominada tambin VP21, una protena integral de membrana que consta de 33 aminocidos que forman un dominio central hidrofbico, que forma un loop o vuelta en la capa bilipdica de la membrana, flanqueado por dominios citoplasmticos expuestos N- o C-terminales. Esta protena une colesterol y

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cidos grasos y es palmitoilada (une cido palmtico, un cido graso de 16 carbones) en su extremo C terminal y forma oligmeros de alto peso molecular. Se cree que esta propiedad es importante para la formacin de las caveolas pero el mecanismo exacto no es conocido an. El ingreso de las sustancias a travs de caveolas desembocan en caveosomas, y desde el caveosoma pueden ingresar al Golgi o al Retculo endoplsmico o al ncleo. No est claro si estas sustancias pueden volver a la membrana plasmtica o a endosomas. En la formacin de la vescula que va al interior de la clula, o caveosoma, participa la dinamina, una GTPasa que tambin participa en la formacin de las vesculas endocticas con cubierta de clatrina, unindose al cuello de la caveola. La dinamina une los extremos de la depresin y cierra la vescula, formando el caveosoma. En este proceso, estudiado en el ingreso del virus SV40 ("simian virus"), que gatilla una cascada de seales que induce a la fosforilacin de tirosin quinasas lo que produce en las caveolas unidas a actina del citoesqueleto, se depolimerice la actina transitoriamente, reclutndose los monmeros de actina alrededor de la caveola que transporta el virus, formando un parche de actina. Concomitantemente la dinamina es reclutada en la caveola que transporta el virus producindose una explosiva polimerizacin de actina en el parche de actina. La vescula cargada con el virus se desprende de la membrana plasmtica y se puede mover al citosol. Luego de la internalizacin, el citoesqueleto de actina vuelve a su posicin normal. El caveosoma es un compartimiento interno preexistente de pH neutro, no degradativo, que contiene caveolina en la membrana plasmtica y esta es rica en colesterol y glicoesfingolpidos. Participan en la internalizacin de componentes de membrana como glicoesfingolpidos, protenas con anclaje GPI, ligandos extracelulares como cido flico, albmina, toxinas bacterianas (clera, ttanos). Los caveosomas son estructuras tubovesiculares, heterogeneas en tamao y forma y las partculas virales aparecen como porotos en una vaina, como se ha visualizado a la microscopa electrnica. Durante la acumulacin de partculas virales se hacen muy dinmicos, desprendindose desde el caveosoma extensiones tubulares ms grandes cuyas membranas carecen de caveolina 1. Estas vesculas son transportadas a lo largo de microtbulos hasta el retculo endoplasmtico.

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Cabe sealar que la caveolina est presente adems en caveosomas, membrana plasmtica y TGN (del ingls, red Trans Golgi). En resumen, la funcin de las caveolas en la clula es mantener la homeostasis de colesterol, reciclaje de las protenas con anclaje GPI, transporte de glicoesfingolpidos, transcitosis de componentes del plasma sanguineo (albmina). La transcitosis es el paso de las sustancias a travs de vesiculacin en las clulas epiteliales o endoteliales desde la superficie apical de la clula a la regin basal, o viceversa, como ejemplo adicional se puede citar el paso de inmunoglobulina G a travs del epitelio mamario desde el plasma sanguneo a la leche materna.

Balsas lipdicas ("lipid rafts"). Son regiones de la superficie celular organizados como microdominios basados en lpidos que participan en procesos endocticos independientes de dinamina. Las balsas lipdicas de la membrana plasmtica son consideradas como islas altamente ordenadas de colesterol y lpidos saturados, son mviles lateralmente en el plano de la bicapa desordenada ms fluda de lpidos no saturados. Las balsas lipdicas son relativamente resistentes a la accin de detergentes no inicos que solubilizan las regiones lipdicas adyacentes a las balsas. En las balsas se incluyen protenas con anclaje GPI, glicerol fosfofinositol, a aquellas protenas con doble grupo acilo como tirosn quinasa, las de la familia Src, y subunidades de las protenas G, tambin protenas palmotoiladas y asociadas a colesterol como caveolinas. Algunas protenas pueden asociarse en forma regulada a las balsas lipdicas como las protenas Hras. La endocitosis mediada por balsas, es una va micropinoctica especfica para protenas con anclaje GPI, es un proceso independiente de caveolina 1, caracterstico de las caveolas, por lo tanto es un ingreso a la clula independiente de caveolas, independiente de dinamina y de clatrina. Se les ha definido como conjuntos dinmicos de colesterol y glicoesfingolpidos que estn presentes en el plano lateral de las membranas, tienen importancia en el transporte lateral de membranas. Se ha demostrado

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experimentalmente que el colesterol y los esfingolpidos pueden organizarse en dominios de fase lquida ordenada separados. Estos microdominios se estabilizan a travs de interacciones con el citoesqueleto y pueden agregarse entre ellos para formar plataformas mayores en respuesta a variados estmulos. Dada su naturaleza, existe la posibilidad del transporte endoctico de sustancias especficas al interior de la clula, de hecho hay transporte, pero este no ha sido comprobado experimentalmente. Mutaciones de genes implicados en la biosntesis de esteroides o ceramidas bloquean totalmente la incorporacin endoctica. Exocitosis, ectocitosis. Ambos procesos implican la salida de sustancias desde la clula, y regulan la composicin proteca de la membrana. En ambos procesos es posible que se liberen vesculas. En el proceso de exocitosis, se liberan exosomas, e tanto que en la ectocitosis, ectosomas. Exosomas y ectosomas. Ectocitosis lleva a la formacin de ectosomas, tambin denominados micropartculas. Estas vesculas generadas por yemacin desde la clula hacia el exterior y posterior desprendimiento de la vescula. Los exosomas son vesculas generadas por proceso endoctico que genera vesculas que se acumulan dentro de cuerpos multivesiculares (MVB) y son liberados por exocitosis. Exosomas y ectosomas difieren en tamao y composicin. La mayora de las clulas produce exosomas y ectosomas, excepto los eritrocitos que producen slo ectosomas en condiciones de estrs. En la formacin de los eritrocitos, sin embargo, la prdida de los receptores de transferrina ocurre por exocitosis. Otro ejemplo de liberacin de ectosomas ocurre en los condrocitos que liberan continuamente ectosomas cargados con anexina I, que induce la precipitacin del calcio y formacin de hueso.

Retrmero. El retrmero es un complejo proteco que participa en la va de recuperacin de receptores desde el sistema endoctico al TGN. Se ha demostrado su participacin en la recuperacin de un tipo de MPR (CI-MPR: receptor de manosa fosfato catin independiente). El retrmero se encuentra presente en endosomas tempranos y de maduracin intermedia entre endosoma temprano y tardo, principalmente. El retrmero impide la liberacin de los

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receptores a los lisosomas. El retrmero es un complejo heteropentamrico tanto en levaduras como en mamferos. En levaduras est formado por Vps5p, Vps17p, Vps26p, Vps29p, Vps35p. La subunidad Vps35p reconoce un dominio citoslico de Vps10p, que es equivalente de MPR de mamferos, y forma un subcomplejo estable con Vps29p. Vps5p y Vps17p unen PIP (fosfoinositol fosfato). Estos dominios tienden a oligomerizar y por lo tanto sirven como andamio para el ensamble de posibles cubiertas de membrana que conducen a la formacin de vesculas. Vps26 se ha propuesto que promueve el ensamble de carga selectiva del subcomplejo Vps35p-Vps29p con el subcomplejo estructural Vps5p-Vps17p. En los mamferos las subunidades se denominan hVps26p, hVps29p, hVps35p y dos homologos de Vps5p de la levadura que son las nexinas de direccionamiento o clasificacin 1 y 2 (Snx1, Snx2). La unin del retrmero al receptor de manosa 6 fosfato (MPR) se produce en TGN en mamferos o en su equivalente en la levadura el Golgi Tardo. El dominio citoslico de MPR en el Golgi, contiene seales agrupadas de dileucina en el carboxilo terminal, protenas que unen ARF que contiene orejas gama y AP1. Estas interacciones cooperan al empaquetamiento de los complejos MPR-hidrolasas en vesculas con cubierta de clatrina que yeman desde TGN y llevan los complejos hasta endosomas tempranos o ms avanzados. En la levadura los complejos MPR-hidrolasa se disocian por causa del pH cido de los endosomas, luego de lo cual las hidrolasas son transportadas junto con la fase fluda al lumen del lisosoma mientras que los MPR reciclan al TGN. En mamferos la subunidad hVps35 reconoce el dominio citoslico de CIMPR, que no corresponde a la seal YSKV que es la seal implicada en la endocitosis, ni la seal de agrupamiento o cluster de dileucina, responsable del direccionamiento del receptor del TGN al endosoma. La funcin del retrmero es extraer los MPR desocupados desde vescula intraluminales en endosomas a travs de la captura de un compartimiento tubular de reciclamiento. En el reconocimiento de membranas altamente curvadas participan las sintaxinas del retrmero.

Proyecto Genoma Humano y la va secretora Las investigaciones realizadas con vistas a dilucidar la ubicacin e identificacin de los genes en la especie humana han logrado esclarecer la

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participacin de 103 genes en la va secretoria: 7 genes participan en la glicosilacin 10 genes participan en el metabolismo de lipidilinositol 17 genes en la glicosilacin primaria en el retculo plasmtico 10 genes en el plegamiento de las protenas 6 genes en la degradacin de protenas 11 genes en el transporte RE- Golgi 5 genes en el transporte retrgrado o inverso Golgi- RE 6 genes en la glicosilacin en la cisterna media del Golgi 4 genes en la vesiculacin 7 genes en la secrecin 11 genes en la formacin de membranas

Aplicacin al rea de la salud 1. Enfermedad de Parkinson (PD), un ejemplo de una patologa conformacional. La enfermedad de Parkinson, junto con la enfermedad de Alzheimer, encefalopatas producidas por priones, pertenecen a las denominadas enfermedades conformacionales (por conformacin o disposicin espacial defectuosa de una protena), y demuestran una clara evidencia de la relacin entre la funcionalidad coordinada del retculo endoplsmico y del UPS (sigla traducida del ingls que significa sistema ubiquitn-proteasoma). Este ltimo sistema probablemente no est funcionando bien, es decir, la degradacin de protenas marcadas con ubiquitinas mediada por este sistema sera poco eficiente, acumulandose protenas en la clula que con el tiempo conllevara a la muerte celular. La funcionalidad de UPS en estado normal se evidencia por una eficiente degradacin de las protenas. En estas patologas, a travs de los aos, se van acumulando selectivamente sustratos debido al estrs oxidativo, desregulacin transcripcional, acumulacin de protenas txicas, induccin a la apoptosis debido al estrs del retculo endoplsmico, finalmente agregacin de protenas (denominados agregasomas, cuerpos que son producto de la acumulacin de protenas), causas por las cuales se produce la muerte celular.

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La enfermedad de Parkinson, es una enfermedad neurolgica que se manifiesta principalmente en adultos mayores que no se puede detener, controlar, ni prevenir, slo los sntomas pueden ser reducidos mediante el uso de frmacos u otro. Una de las manifestaciones de la enfermedad a nivel celular es la acumulacin de protenas (alfa sinucleina en la enfermedad de Parkinson) a nivel de la neurona, lo que tambin es caracterstico de la enfermedad de Huntington (donde se acumula huntingtina), y de la enfermedad de Alzheimer (donde hay acumulacin de beta-amiloide). Investigaciones de los ltimos 5 a 10 aos han demostrado que estas acumulaciones de protenas en el caso del Parkinson se deben a mutaciones del gen de la protena, que afectan el correcto plegamiento, y adems por la naturaleza hidrofbica de la protena, esta tendera a formar acmulos (agregasomas), favorecido por modificaciones posttraduccionales de la protena como glicosilacin, nitracin y fosforilacin. En el caso de PD las mutaciones producidas en el gen pueden afectar la secuencia primaria de la protena a causa de delecin, sustitucin, adicin o duplicaciones internas en el gen; puede ocurrir tambin duplicacin del gen normal completo, lo que produce una sobreexpresin del gen. La alta concentracin de la protena tambin favorecera la formacin de agregasomas. Otra forma por la cual se manifiesta la enfermedad es por alteracin de genes responsables de la ubiquitinacin, aunque en el caso de mutaciones en el gen parkin, que produce la protena parkina, no se acumula como agregasomas. La parkina tiene actividad de ubiquitn ligasa, es decir es responsable de catalizar la formacin de la unin de molculas de ubiquitina a las protenas que van a ser degradadas por el proteasoma en el citoplasma. Recientes ensayos in vitro han demostrado que al incentivar la accin de chaperonas (HSP70), mediante el uso de frmacos es posible disminuir el tamao de los agregasomas. Hay otras formas de Parkinson a nivel gentico pero las mencionadas arriba tienen directa relacin con la va secretoria.

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2. Enfermedades producidas por defectos enzimticos en los lisosomas. Estas enfermedades corresponden a defectos en las enzimas contenidas en los lisosomas y que producen acumulacin de sustancias en la clula que son nocivas a la homeostasis celular. Casi todas estas enfermedades son causadas por defectos genticos recesivos, es decir quienes manifiestan la enfermedad son homocigotos recesivos en este locus. Entre estas enfermedades se pueden mencionar Mucopolisacaridosis I (MPS I), enfermedad de Pompe, enfermedad de Gaucher, entre otras. La mucopolisacaridosis I es causada por un gen recesivo que codifica la enzima alfa-L-iduronidasa. Las mutaciones causan ausencia de la enzima o una enzima defectuosa. Esto da por resultado la acumulacin progresiva de glicosaminoglicanos (GAG) en el lisosoma que causa en el tiempo la destruccin por dao irreversible de las clulas y por ende del rgano afectado. La enfermedad de Pompe es una enfermedad debilitante en adultos y en nios que manifiestan debilidad muscular y dificultades respiratorias, por prdida de fuerza del diafragma. La causa de la enfermedad reside en una enzima la alfa glucosidasa cida deficiente. Esta enzima es la responsable de degradar el exceso de glucgeno en el lisosoma, resultando por tanto la acumulacin de glucgeno que interfiere con el funcionamiento del msculo. La enfermedad de Gaucher es una enfermedad recesiva autosmica desencadenada por la presencia de dos alelos mutados del gen de la glucocerebrosidasa, localizado en el brazo largo del cromosoma 1, en la regin 21. Se han identificado a la fecha ms de 100 alelos que al estado homocigoto causan la enfermedad debido a una disminucin de la actividad cataltica de la enzima total o parcialmente o bien reducen su estabilidad o vida media. En individuos normales la glucocerebrosidasa degrada glucocerebrsido, un glucolpido proveniente de las membranas celulares de los leucocitos y eritrocitos envejecidos dentro de los lisosomas de las lneas de los monocitos/ macrfagos. En individuos con esta enfermedad se produce gran acumulacin de glucocerebrsido dentro de los monocitos/macrfagos, estas se conocen como clulas de Gaucher que muestran un citoplasma con aspecto de papel arrugado debido a las fibrillas y depsitos acordonados de glucocerebrsido. Estas clulas se acumulan progresivamente en hgado, bazo y mdula sea.

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Las mutaciones ms comunes corresponden a mutaciones de punto que afectan la actividad enzimtica, estas son designadas como N370S y L144P. Otras dos mutaciones de mayor envergadura no producen la enzima. Esta enfermedad tiene graves consecuencias neurolgicas. Existen al menos 3 tipos sobre la base de su severidad neurolgica. El tipo 1: no implica al sistema nervioso central, el tipo 2 y 3 implica al sistema nervioso central de forma aguda el primero y subaguda el segundo respectivamente. Estas son enfermedades multisistmicas, es decir afectan a varios rganos a la vez. Uno de los ms afectados es el hgado que aumenta varias veces su volumen causando una hepatomegalia.

3. Fibrosis qustica o fibrosis cstica. La fibrosis qustica es una enfermedad hereditaria codificada por un locus ubicado en el brazo largo del cromosoma 7. Su manifestacin ocurre en individuos que son homocigotos para el alelo recesivo que produce la enfermedad. La manifestacin fenotpica corresponde a la alteracin de la forma de un canal de cloruros. Es una protena defectuosa que no cumple con la funcin. Las mutaciones en el gen que produce la fibrosis qustica pueden ser de varios tipos. Se han descrito al menos una veintena de mutaciones agrupadas en 4 clases que implican a productos defectuosos que son degradados en la clula antes de alcanzar la membrana plasmtica (Tabla 2, Figura 3). El canal tiene distintos dominios que conforman el poro, dos dominios que fijan ATP y el dominio regulador, que es una especie de tapn que se articula por un brazo y abre o cierra el poro. Las mutaciones por lo tanto bloquean el paso de cloruros desde el interior de la clula epitelial al exterior. Los canales de cloruro se encuentran en forma normal en la cara apical de la clula epitelial.

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Tabla 2. Mutaciones recesivas que producen fibrosis qustica. (Welsh MJ & AE Smith. 1993. Molecular mechanisms of CFTR chloride channel dysfunction in cystic fibrosis. Cell 73 (7): 1251-1254.).
Clases de Mutacin I Produccin de protena defectuosa causada por mutaciones sin sentido y corrimiento lectura II Procesamiento o maduracin de la protena en la va secretora III Regulacin del transporte de cloruros. Falta de reconocimiento de nucletidos IV Conduccin defectuosa del cloruro NBD: dominio que une nucletidos MSD: dominio de la protena que atraviesa la membrana D: (delta): letra griega que indica delecin, es decir mutacin que causa la ausencia de uno o varios desoxinucletidos en la secuencia de ADN (*) causa un procesamiento defectuoso y tambin afecta la regulacin del canal de sodio. Esta es la mutacin ms frecuente (**) causa una conduccin defectuosa y disminucin del tiempo que el canal se mantiene abierto R117H (**) MSD1 Suficiencia pancretica G551D G1244E NBD1 NBD2 Insuficiencia pancretica marco de 621+G-T MSD1 DI507 DF508 (*) N1303K NBD1 NBD1 NBD2 Insuficiencia pancretica 3905InsT NBD2 G542X Defecto Ejemplo Dominio afectado en la protena NBD1 Insuficiencia pancretica Aspectos clnicos

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Figura 3. Modelo propuesto para explicar el camino que sigue en la clula la formacin de un canal de cloruros y la forma como se manifiestan las mutaciones. Modificado de Welsh MJ & AE Smith. 1993. Molecular mechanisms of CFTR chloride channel dysfunction in cystic fibrosis. Cell 73 (7): 1251-1254.(Con permiso de la editorial)*.

*Agradecimientos: Agradecemos a los autores y a la editorial la facilitacin de las figuras en este captulo.

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Bibliografa: Herbert, DN, Garman, SC, Molinari, M. 2005. The glycan code of the endoplasmic reticulum: asparagine-linked carbohydrates as protein maturation and quality-control tags. Trends in Cell Biology 15(7):364-370. Johannes y Lamaze (2002). Clatrin-dependent or not: Is it still the question? Traffic. 3:443-451. Rmisch, K. 2005. Endoplasmic Reticulum-associated degradation. Annu Rev Cell Dev. Biol. 21: 435-456. Welsh MJ & AE Smith. 1993. Molecular mechanisms of CFTR chloride channel dysfunction in cystic fibrosis. Cell 73 (7): 1251-1254.

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CAPTULO III ARMAZN CELULAR Y ORGANELOS: CITOESQUELETO, MITOCONDRIA, PEROXISOMAS Y NCLEO


Fidelina Gonzlez, Gabriela Sconzo, Giussepina Turturici, Fabiana Geraci, Giovanni Giudice Depto Biologa Celular. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad de Concepcin. Concepcin. Chile. Dipartamento di Biologia Cellulare e dello Sviluppo. Universit di Palermo. Palermo. Italia.

1. Citoesqueleto, organizacin para la arquitectura y los movimientos de la clula. 1. Microtbulos. 2. Centrosoma. 3. Filamentos intermedios. 4. Microfilamentos. 5. Protenas motoras asociadas. 2. Mitocondria, organizacin para la produccin de energa y participacin en la herencia. 1. Compartimentos mitocondriales. 2. Transporte de protenas de la mitocondria codificadas en el ncleo. 3. Origen de los fosfolpidos en las membranas de la mitocondria. 4. ADN y genes mitocondriales. 3. Peroxisomas, organizacin para la destoxificacin celular, metabolismo de lpidos y de hormonas esferoidales. 1. Biognesis de los peroxisomas y transporte de las protenas peroxisomales. 2. Funciones de los peroxisomas: Metabolismo y Destoxificacin. 4. Ncleo, organizacin para el almacenamiento y procesamiento de la informacin gentica. 1. Envoltura y poros nucleares. 2. Lmina nuclear. 3. Cromatina y cromosomas. 4. Compartimientos nucleares y funcin en el procesamiento de la informacin gentica. mitocondriales, localizacin de funciones

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5. Enfermedades producidas por mutaciones en protenas que conforman el citoesqueleto. 6. Enfermedades producidas por mutaciones mitocondriales. 7. Enfermedades producidas por defectos en los peroxisomas,

peroxisomopatas: Enfermedad de Zellwegger. 8. Laminopatas.

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Citoesqueleto

Citoesqueleto organizacin para la arquitectura y los movimientos de la clula. Es una estructura celular dinmica que est compuesta por filamentos y microtbulos que se extienden por todo el citoplasma. Cumple diversas funciones en la clula entre las cuales est el mantener la forma celular, regular la posicin de los organelos, dirigir y ejecutar el movimiento celular y el control transmembrana de la clula, el transporte intracelular, la endocitosis y fagocitosis, la direccin de crecimiento de la neurona, el desarrollo de la capilaridad, la migracin de los leucocitos, la quimiotaxis celular, la migracin de fibroblastos en cicatrizacin de heridas, la mecanosensibilidad del odo interno, la morfognesis de embriones, la invasin y la metstasis de clulas cancerosas y el movimiento intracelular de bacterias. Componentes de citoesqueleto. Los componentes del citoesqueleto son microfilamentos, filamentos intermedios y microtbulos.

Microfilamentos de actina de 5 a 9 nm de dimetro. Componentes estructurales: En la clula podemos distinguir los

monmeros de actina, los filamentos de actina, correspondientes a la disposicin lineal de los monmeros de actina para formar unidades filamentosas. Los manojos de filamentos de actina, que son filamentos organizados paralelamente y sustentados por protenas que mantienen unidos a los filamentos de actina unos a otros. La red ramificada, que es la organizacin tridimensional en el espacio intracelular.

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Tabla 1. Estructura y funcin de elementos del citoesqueleto (Modificado de W.M. Becker, I.J. Kleinsmith & J. Hardin. The World of the Cell (San Francisco, Ca. B Cummings). 2000 p. 753).

Microtbulos Estructura Tbulos huecos Pared consistente de 13 columnas de molculas de tubulinas Dimetro Subunidad proteca 25 nm, con lumen de 15 nm Tubulinas que constan de tubulina y -tubulina

Microfilamentos Dos bandas de actina entrelazadas

Filamentos intermedios Protenas fibrosas superenrrolladas fprmando cables engrosados

7 nm Actina

8- 12 nm Una o varias protenas diferentes de la familia de las queratinas, dependiendo del tipo celular

Funcin principal

Mantencin de la forma celular: estructuras que resisten la compresin Motilidad celular (como cilios y flagelos) Movimientos cromosmicos en la divisin celular Movimientos organelares

Mantencin de la forma celular (estructuras que soportan tensin) Cambios en la forma celular Motilidad celular (como pseudpodos en amebas y macrfagos) Contraccin muscular Ciclosis: movimiento del citoplasma Divisin celular: formacin del surco de clivaje o de divisin celular.

Mantencin de la forma celular (estructuras que soportan tensin) Anclaje del ncleo y de algunos otros organelos Formacin de la lmina nuclear

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Forma celular: El esqueleto de actina es el ms importante componente del citoesqueleto celular. La actina se localiza en la periferia de la clula, por debajo de la membrana plasmtica formando una red que la sustenta. Al tener propiedades de gel viscoso elstico, el citoesqueleto de actina mantiene la forma celular y sustenta los cambios de la forma. La dinmica de la actina permite la extensin de la membrana plasmtica. Los manojos de actina de la red de filamentos sustentan la estructura celular. Los motores de miosina asociados permiten la contractilidad y transporte de vesculas. Los manojos de actina y los filamentos intermedios permiten la adhesin celular. La red de lmina sustenta la estructura nuclear. En el caso del citoesqueleto de actina, este es una matriz porosa, formando un andamio como sendas o caminos a lo largo de las cuales las miosinas transportan sus cargamentos o se deslizan para realizar la contractilidad celular. Los manojos de filamentos de actina (fibras de estrs o soporte) estn unidas a la matriz extracelular mediante las integrinas. Las integrinas son protenas integrales de membrana de aproximadamente 160 kDa que participan en el anclaje a la matriz extracelular unindose a las protenas fibronectina y laminina. Las integrinas estn conformadas por dos subunidades, alfa y beta. La subunidad alfa tiene un dominio de unin del calcio. Dos enfermedades humanas se originan por defectos genticos de las integrinas. La trombostenia de Glanzmann, en las que las plaquetas carecen del receptor celular para el fibringeno GpIIb/IIIa lo que lleva a la agregacin anormal y tiempos de sangrado prolongados. La deficiencia de adhesin de leucocitos producido por la ausencia de la subunidad beta de la integrina de leucocitos y causa infecciones bacterianas recurrentes, adems de retardar la curacin de heridas. Esto es a causa que la ausencia de integrina dificulta el movimiento de estas clulas defensivas, perjudicando su capacidad de migrar hacia los lugares de infeccin y fagocitar los microorganismos invasores.

Control de la motilidad no muscular. Los filamentos dinmicos producen la fuerza protrusiva necesaria para el movimiento rpido de ensamble y desensamble. Para esto es necesaria la intervencin de numerosas protenas accesorias que juegan importantes roles

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regulando la dinmica de los filamentos de actina. Entre estas protenas estn las aquellas que unen monmeros, las que permiten el crecimiento del filamento, las adaptadoras, las protenas que cortan el filamento y las protenas que desestabilizan el filamento. Ejemplo Timosina beta 4, es una pequea protena de masa molecular de 5000, une G-actina, la actina monomrica globular, est presente en alta concentracin en la clula (aproximadamente 0,5 mM) y secuestra G-actina manteniendo un gran volumen de actina no polimerizada en la clula. Otro ejemplo es la profilina, una protena de masa molecular de 15000, se une al extremo de la G-actina en una proporcin 1:1, promueve el intercambio de ADP por ATP. El complejo actina-profilina puede agregarse al extremo positivo o de crecimiento de un filamento, y compite con la timosina beta 4 por la actina.

Filamentos intermedios (FI).

Tienen un tamao de alrededor de 10 nm de dimetro, son los componentes ms rgidos, responsables de mantenimiento de la forma general de la clula. Se caracterizan por tener una composicin variable.

Existe una alta diversidad de filamentos intermedios en cuanto se refiere a estructura mostrando una organizacin tripartita de dominios. Un dominio central de ubicacin fija caracterizada por la presencia de segmentos de alfa hlices formados por residuos apolares, conformado una varilla central flanqueada lateralmente por los dominios de longitud variable, cabeza y cola, los cuales no estn formados por hlices.

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Tabla 2. Clasificacin de los filamentos intermedios.


Nombre Nmero de Genes que codifican FI Tipo FI, de acuerdo a la forma de la varilla central Keratina (cida) Keratina (Bsica) Vimentina Desmina GFAP >25 >25 1 1 1 I II III III III Grupo de ensamble de polimerizacin de los FI A A B B B 40-64 52-48 55 53 50-52 Epitelio Epitelio Heterogneo Msculo AstrocitoAstroglia Periferina Sincoilina NF-L NF-M NF-H Alfa-Internexina Lamina A/C Lamina Beta 1 Lamina Beta 2 Nestina Sinemina Desmosina Fakinina/CP49 Filensina 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 III III/IV IV IV IV IV V V V VI VI VI Orfan Orfan B B B B B B C C C B B B D D 54 54 62 102 110 66 72/62 65 78 240 182 140 46 83 Neuronas SNP Msculo Neuronas SNC Neuronas SNC Neuronas SNC Neuronas SNC Ncleo Ncleo Ncleo Heterognea Msculo Msculo Lentes Lentes Tamao kDa Distribucin

Tomado de Coulombe PA. 2001 J Cell Science 114:4345-4347

Microtbulos de 25 nm de dimetro. Microtbulos: cilindros huecos de 25 nm de espesor y pared de 5 nm de grosor. Tienen longitud variable.

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Filamentos y tbulos que se extienden por todo el citoplasma, es una estructura altamente dinmica. Tiene como funcin el mantenimiento de la forma celular, la regulacin de la posicin de los organelos, los movimientos celulares, el control transmembrana de la actividad celular.

Morfologa. Microtbulos lbiles y microtbulos estables. Axonema de cilios y flagelos. Centrolos. Microtbulos lbiles se observan luego de la fijacin con glutaraldehdo (>4C). Se originan del centro organizador de microtbulos (MTOC). Se agrupan en haces. Microtbulos estables se observan despus de la fijacin con distintos fijadores y a diversas temperaturas. Axonema de cilios y flagelos. Centrolos. Los cilios y flagelos se caracterizan por contener un axonema. El axonema est constitudo por un haz central de microtbulos, que incluye 9 microtbulos dobles dispuestos en crculo alrededor

CENTROSOMA El centrosoma o centro celular est conformado por dos centrolos dispuestos cercano al ncleo. Los centrolos son organoides formados por microtbulos organizados en tripletes, revelado por estudios de ultraestructura. El centrosoma determina la polaridad de la clula y el eje de la clula. Los microtbulos se observan en el centro organizador de microtbulos (MTOC). El MTOC, corresponde a cualquier estructura que en la clula cumple la funcin de agrupar y organizar los microtbulos. En las clulas animales el MTOC es un centrosoma, protenas que forman una red que puede contener un par de centrolos. El MTOC puede nuclear la polimerizacin de subunidades de tubulina o puede unir los extremos de los microtbulos, que se ensamblan en forma independiente en el citosol. Es probable que el MTOC sea la principal estructura organizadora de la clula y contribuya a determinar la organizacin de las estructuras y organelos asociados a microtbulos como por ejemplo las mitocondrias, el Complejo de Golgi y el reticulo endoplsmico. En la mayora de

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las clulas el MTOC se encuentra en el centro de la clula, o cercano al ncleo. Uno de los principales componentes del material pericentriolar es la -tubulina, capaz de formar in vitro el ncleo de polimerizacin de las subunidades de tubulina que constituyen los microtbulos. Composicin qumica: citoqumica y anlisis qumico. Organizacin molecular. Composicin qumica. Los microtbulos se forman a partir de la polimerizacin de heterodmeros de alfa y beta tubulina, contienen dinena ciliar y flagelar (formando parte del axonema), nexina (axonema) y MAPS (conjunto de diversas protenas asociadas a los microtbulos). La tubulina alfa y la tubulina beta se alternan para formar los protofilamentos, un conjunto de protofilamentos forma un microtbulo. Las tubulinas forman la pared del tbulo. Los microtbulos se caracterizan por mostrar polaridad estructural y funcional. En la mayora de los casos el extremo negativo (-) de un microtbulo es adyacente al MTOC desde el cual se ensambla, y el extremo positivo (+) est en posicin distal. El ensamblaje y disociacin de los microtbulos depende de la concentracin crtica de los dmeros de alfa y beta tubulinas. Por sobre la concentracin crtica, ocurre el ensamblaje y por debajo, la disociacin de los microtbulos. Los microtbulos tienen dos fenmenos dinmicos: en uno se agregan subunidades por un extremo y pierden subunidades por el otro extremo y en el otro caso experimentan inestabilidad dinmica, entre alargamiento o acortamiento. En todos los casos hay participacin de GTP o GDP intercambiable. Las protenas asociadas a cada uno de los tipos de filamentos corresponden a MAPs (Protenas asociadas a los microtbulos). Estas protenas pueden ser protenas de ensamblaje que tienen dos dominios, uno de fijacin a los microtbulos y el otro es un brazo filamentoso que se extiende desde la pared del microtbulo. Este brazo se puede fijar a membranas, filamentos intermedios u otros microtbulos, y su longitud separa los elementos. Su funcin es evitar la despolimerizacin de los microtbulos en el citosol, los organizan en haces o manojos y establecen enlaces cruzados entre ellos y las membranas o los filamentos intermedios ya que cuando las MAP recubren la pared externa de un microtbulo, las subunidades de tubulina son incapaces de disociarse de los extremos del tbulo. Debido al efecto de las MAP sobre la dinmica de los microtbulos, en la clula estas se pueden encontrar fosforiladas, y en este caso

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las MAPs fosforiladas son incapaces de unirse a los microtbulos o MAPs sin fosforilar asociada a los microtbulos. Las MAPs son fosforiladas por una MAP quinasa y desfosforilada por una fosfatasa. Las MAP se encuentran asociadas a microtbulos de dendritas y axones son las MAP del tipo I: MAP1A, MAP1 B y las MAP del tipo II: MAP2A, MAP2B, en dendritas; MAP2C, en dendritas embrionarias, MAP4 en clulas no neuronales y Tau en dendritas y axones.

Transporte intracelular. Las vesculas limitadas por membranas dentro de la clula son transportadas a lo largo de vas bien definidas. Uno de los movimientos que son mediados por microtbulos que sirven de carriles dentro de la neurona, es el transporte axnico que puede ser de dos tipos: antergrado, desde el cuerpo de la neurona hacia las uniones sinpticas o retrgrado, en sentido contrario. Puede ser transportado material rodeado por membranas en vesculas, protenas del citoesqueleto y organelos como las mitocondrias. El transporte de pigmentos en melanforos es otro ejemplo donde el material transportado usando a microtbulos como carriles son pigmentos. Las vesculas del Golgi y el retculo endoplsmico, tambin son transportadas a travs de los carriles formados por microtbulos en la clula. Si se desorganizan los microtbulos mediante la adicin de colchicina, se desorganiza la conformacin reticular del RE, in vitro. El transporte de las vesculas antergrado a lo largo del microtbulo es dirigido por protenas motoras asociadas al microtbulo. Una de estas protenas es la quinesina que dirige el movimiento hacia el extremo positivo del microtbulo, este transporte requiere de ATP. La quinesina es un dmero que consta de dos cabezas globulares conectadas por un largo tallo central. La cabeza se une a los microtbulos y al ATP y la cola se une la membrana de las vesculas transportadas. La vescula se conoce con el nombre de carga. Hay distintos tipos de quinesinas como las quinesinas del citosol que transportan vesculas del citosol exclusivamente hacia el polo positivo del microtbulo, en tanto, las quinesinas del huso mittico transportan como carga microtbulos del huso y astrales, centrosomas, quinetocoros hacia el polo positivo o negativo de los microtbulos. Las dinenas son protenas motoras asociadas a los microtbulos que transportan exclusivamente la carga hacia el extremo negativo del microtbulo,

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como por ejemplo el transporte axnico retrgrado o el trnsito de vesculas de endocitosis desde la membrana plasmtica hacia los lisosomas. Son protenas multimricas compuestas por dos o tres cadenas pesadas que forman complejos con un nmero variado de cadenas livianas e intermedias. Hay dinenas del citosol que transportan vesculas del citosol y quinetocoros (protenas asociadas a los centrmeros de los cromosomas a los cuales se anclan los microtbulos del huso mittico y permiten la traccin de los cromosomas hacia los polos de la clula en anafase) durante la mitosis y la meiosis. Tambin estn las dinenas del axonema que son de dos tipos: las dinenas de brazo externo y las dinenas de brazo interno, transportan un tbulos de los microtbulos dobles de cilios y flagelos y por lo tanto es responsable del movimiento de estas estructuras. Este movimiento requiere de ATP. Mutaciones de los genes que codifican a la dinena del axonema o a otras protenas asociadas del axonema producen cilios o flagelos inmviles provocando cuadros de bronquitis crnicas y esterilidad en hombres y mujeres, esto porque no funcionan los cilios del rbol respiratorio, el flagelo del espermatozoide o los cilios de las trompas uterinas. Este sndrome se conoce como el sndrome de Kartagener o de los cilios inmviles.

Los microtbulos en la mitosis. Durante la mitosis se organiza el aparato mittico que tiene dos componentes: el huso mittico, una estructura simtrica bilateral situada a ambos lados de la placa metafsica y un par de steres, un conjunto de microtbulos situados en ambos polos de la clula. El huso contiene 3 tipos de microtbulos cuyos extremos negativos se ubican hacia el centrosoma. Los microtbulos astrales, forman el ster e irradian desde el centrosoma hacia la corteza celular, ubicando el aparato mittico, determinando as el proceso de citoquinesis o divisin del citoplasma. Los microtbulos de los quinetocoros se fijan a los quinetocoros ubicados en el centrosoma de cada cromosoma. Los microtbulos polares no interactan con los cromosomas, van de polo a polo de la clula. Origen de las protenas del citoesqueleto. Las protenas del citoesqueleto se originan en polirribosomas libres y son las ms abundantes de la clula. La secuencia del polipptido carece de secuencias seales o secuencias de insercin.

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MITOCONDRIA

Mitocondria organizacin para la produccin de energa, participacin en la herencia y apoptosis. La mitocondria es uno de los organelos ms grandes en las clulas eucariticas. Al microscopio electrnico de transmisin aparece como estructura esfrica o con forma de bastn de 0,5-1 m de dimetro y longitud variable. La forma de la mitocondria en la clula podra estar determinada por su asociacin a elementos del citoesqueleto, pero no es afectada por agentes disruptores de microtbulos como nocodazol. Adems las mitocondrias aisladas mantienen su forma tubular en medio isotnico, por lo tanto la forma tubular de la mitocondria est dada por estructuras internas de la mitocondria. El nmero de mitocondrias en la clula es variable; en hepatocitos hay entre 1.000 y 2.000 mitocondrias. Su ubicacin es de preferencia en la regin donde la clula tiene mayor demanda de energa metablica (ATP); en el msculo se ubican alrededor de las bandas A de las miofibrillas, en los bastones retinianos en el segmento interno, en los tbulos renales en la regin basal de la clula. Las mitocondrias son estructuras dinmicas que estn constantemente cambiando de forma, dividindose, fusionndose y movindose. Los movimientos de desplazamiento y las modificaciones morfolgicas dependen de los elementos del citoesqueleto los microtbulos y los microfilamentos y las protenas motoras asociadas a este (quinesina y dinena). Sin embargo, en algunas clulas como espermatozoides, clulas musculares y clulas adiposas las mitocondrias se encuentran fijas, permaneciendo en lugares bien definidos de la clula. Las mitocondrias se mueven rpidamente a lo largo de microtbulos, son transportadas a las sinapsis o conos de crecimiento en neuronas. Las protenas motoras juegan un rol preponderante en el direccionamiento del transporte. En las clulas de mamfero hay al menos dos quinesinas especficas asociadas a la mitocondria. La asociacin entre mitocondria y microtbulo permite ubicar a las mitocondrias cerca de la membrana del retculo endoplsmico de donde puede intercambiar iones calcio y lpidos. Estos ltimos necesarios para la composicin de la membrana de la mitocondria como fosfatidilcolina y fosfatidilserina que son sintetizados en el retculo endoplsmico y transferidos a la membrana externa de

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la mitocondria. Tambin existe asociacin de la mitocondria con filamentos intermedios y con el citoplasma circundante, desconocindose los mecanismos. La mitocondria promedio duplica su masa y se divide en dos en cada ciclo celular manteniendo de esta forma el "pool" mitocondrial en las clulas hijas; sin embargo, algunas mitocondrias se dividen ms rpidamente, mientras otras no se dividen durante este perodo. La masa mitocondrial aumenta al inicio de la fase S y a lo largo de la fase M del ciclo celular. Por lo tanto, el proceso de divisin de las mitocondrias est regulado y coordinado con el ciclo celular. La excepcin a la regla son las mitocondrias del msculo que proliferan durante la miognesis (formacin de la clula muscular en el desarrollo), pero tambin luego del ejercicio. La divisin de la mitocondria puede ser inducida por un amplio rango de sustancias como inhibidores de la fosforilacin oxidativa o flujos de iones calcio, entre otras. En vertebrados podra estar controlada por T3, una hormona de la glndula tiroides que regula las tasas metablicas y puede inducir la divisin de mitocondrias. Este organelo tiene una doble membrana que alojan espacios donde se desarrollan las funciones que conducen a la produccin de energa, estos compartimientos son seis en total: la membrana externa, la membrana interna, el espacio intermembrana, la matriz mitocondrial y otros dos compartimientos que sern discutidos ms adelante.

La membrana externa, lisa, permeable que presenta las siguientes estructuras: 1 Protenas que forman un canal acuoso denominadas porinas a travs de los cuales pasan pasivamente iones y molculas de hasta 5 kDa. Las porinas son las protenas ms abundantes de la membrana externa de la mitocondria, y una de las diez protenas ms abundantes de la mitocondria, es tambin denominada canal aninico dependiente de voltaje (VDAC). Es una protena integral de membrana de unos 35 kDa que es importada a la mitocondria desde la va citoslica sin la presencia de presecuencia a la mitocondria desde el citosol a travs de traslocasas de la membrana externa de la mitocondria, denominadas Tom especficamente Tom20, Tom22 y con participacin de la subunidad

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pequea de Tom5 que ayuda en la transferencia de la porina hasta el canal Tom40. Intentos por caracterizar las posibles pptidos seales en la protena precursora de la porina han llevado a la identificacin de algunas regiones responsables de su ensamble. Esta protena tiene estructura beta- barril que permite el paso de pequeas molculas a travs de la membrana. 2 Receptores de importacin de las que reconocen citoslicas secuencias destinadas a de las direccionamiento protenas

mitocondrias (Tom). Corresponden a protenas de membrana que reconocen presecuencias de protenas ya sea secuencias internas de la protena como aquellas ubicadas en el extremo amino terminal de la protena. Entre estos estn Tom70, Tom22 y Tom20 que expone grandes dominios hacia el citosol. Las protenas que llevan secuencias seales en el extremo amino terminal son reconocidas por Tom20 y aquellas que llevan secuencias seales internas de la protena son reconocidas por Tom70 y transferidas al receptor central Tom22. 3 Elementos de translocacin de protenas codificadas en el ncleo y destinadas a las mitocondrias (Tom, Gip). Las protenas sintetizadas en la va citoslica requieren ser traslocadas al interior de la mitocondria a travs de traslocasas con mltiples subunidades, las que estn ubicadas en la membrana externa de la mitocondria se les denomina Tom, o complejo Tom que contiene en su superficie receptores para el reconocimiento especfico de precursores de protenas y un poro general de importacin/ insercin (GIP) que media la traslocacin de la protena precursora al interior o a travs de la membrana externa. El componente que forma el poro central, Tom40 y tres pequeas protenas Tom7, Tom6 y Tom5 estn embebidas integralmente en la membrana externa de la mitocondria. Junto con Tom22 forman un core estable de 400 kDa que corresponde al complejo traslocasa externa Tom o complejo Gip (poro general de importacin o de insercin). A travs de este complejo son insertadas o importadas las protenas codificadas en el ncleo y sintetizadas en la va citoslica que van destinadas a la insercin en las membranas externa o interna o destinadas a la matriz mitocondrial o espacio intermembrana. El destino de las protenas est sealado en las secuencias seales de la protena. 4 Complejos de importacin de colesterol. Estos complejos de importacin del colesterol han sido descritos en clulas de Leydig tumorales en

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ratones y humanos. Transportan el colesterol hacia la membrana interna de la mitocondria destinado a la sntesis de hormonas esteroidales. El colesterol en la membrana interna es convertido a pregnenolona por rompimiento de la cadena lateral de la molcula por la enzima citocromo P-450, localizada en la membrana interna de la mitocondria. La protena que lleva el colesterol se encuentra en la membrana externa de la mitocondria se denomina receptor benzodiazepina de tipo perifrico y se abrevia con la sigla PBR, fu descubierto originalmente porque une diazepan con alta afinidad en neuronas del sistema nervioso central. PBR est localizado en la membrana mitocondrial de todas las clulas y en especial en aquellas que hacen sntesis de esteroides. Es una protena de 18 kDa que une isoquinolina y que media la liberacin del colesterol desde la membrana mitocondrial externa a la membrana mitocondrial interna. Se ha demostrado que la reduccin en el nmero de PBR en las clulas adrenales disminuye los niveles de glucocorticoides en circulacin. En las clulas de Leydig la interrupcin del gen PBR da por resultado el bloqueo del transporte del colesterol en la mitocondria y por lo tanto cesa la formacin de esteroides. PBR est conformado por cinco alfa hlices que transportan el colesterol acomodndolo en su interior y funcionando como un canal, mediando el transporte entre las membranas de la mitocondria.

La membrana interna que presenta un 75% de protenas. La membrana interna debe ser capaz de formar un gradiente electroqumico en el espacio intermembrana. Esta membrana interna de la mitocondria muestra alta resistencia al paso de iones o solutos para facilitar una eficiente conversin de energa, ya que el gradiente electroqumico de protones a travs de la membrana interna es la fuerza impulsora de la sntesis de ATP que ocurre en la membrana interna de la mitocondria en la cara que enfrenta a la matriz de la mitocondria. Sin embargo, la permeabilidad de la membrana interna de la mitocondria se hace extremadamente elevada cuando en presencia de fosfato inorgnico se acumula cierta cantidad de iones calcio. Esta es una permeabilidad transitoria (PT), y se cree que se debe a la formacin transitoria de poros protecos (poros PT) en la membrana interna de la mitocondria, cuyas aperturas facilitan la permeacin de solutos o iones de hasta 1500 Da.

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En la mayora de la mitocondrias la membrana interna presenta repliegues que penetran profundamente en la matriz mitocondrial denominados crestas y que aumentan la superficie de dicha membrana. La membrana interna posee una permeabilidad selectiva, es decir, presenta protenas transportadoras para el paso de iones y otras molculas. Las dos membranas de la mitocondria crean 2 compartimientos: un espacio intermembrana que las separa, y una matriz que es el compartimiento incluido por la membrana interna y que tiene una consistencia muy viscosa. En espacio intermembrana acumula protones, crendose de esta manera el gradiente electroqumico que es la fuerza o energa potencial que permite la sntesis de ATP. En la matriz mitocondrial tiene lugar el ciclo de Krebs o de los cidos tricarboxlicos. En trabajos recientes se han propuesto otros dos compartimientos en la mitocondria, se ha demostrado que las crestas estn unidas con la membrana interna del lado opuesto de la mitocondria a travs de contactos semejantes a poros, por lo tanto no slo son invaginaciones. Estos dos nuevos compartimientos corresponden a la membrana de las crestas y al espacio intercresta. A estos compartimientos los caracteriza la funcin que cada uno desarrolla y la caracterstica composicin de protenas, lo que queda por definir es como estas protenas se organizan en complejos, se pueden mencionar algunos ya definidos como los complejos de la cadena respiratoria, la ATP sintasa, el nucleoide mitocondrial, los ribosomas, los poros de traslocacin de protenas, los poros de permeabilidad transicional y an posiblemente las enzimas del ciclo de Krebs. En las crestas mitocondriales se ubican los complejos de la cadena respiratoria asociados a la membrana. Las partculas F que forman parte de la ATP sintasa que une la oxidacin con la fosforilacin del ATP, en una protena de membrana con dos regiones, la regin F0 de cruza la membrana, consta de 4 cadenas polipeptdicas que forman un canal que conduce protones. La subunidad F1 enfrenta la matriz y consta de 5 diferentes cadenas polipeptdicas. Esta subunidad lleva a cabo la fosforilacin del ATP que es generada por el flujo de protones que cruza el canal desde el espacio intermembrana a la matriz mitocondrial.

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En general, la membrana interna contiene unas 60 protenas, la mayora de naturaleza hidrofbica que participan en: 1. La cadena respiratoria o cadena transportadora de electrones. La fosforilacin oxidativa ocurre en la mitocondria en un proceso que se desarrolla en conjunto entre la matriz mitocondrial, donde ocurre el ciclo de los cidos tricarboxlicos o ciclo de Krebs y la fosforilacin oxidativa que ocurre en la membrana interna de la mitocondria. La cadena respiratoria consta de cuatro complejos, tres bombas de protones y una unin fsica al cido ctrico. Los transportadores de electrones en el ensamble respiratorio de la membrana mitocondrial son quinonas, flavinas, complejos azufre-fierro, grupos heme de los citocromos y iones cobre. Complejo I: es una ubiquinona oxidoreductasa dependiente de NADH con un grupo prosttico FMN (flavn mononucletido). Esta oxidoreductasa tambin contiene un centro Fe-S. El electrn proveniente del NADH reduce la ubiquinona. Complejo II: es el complejo succinato Q reductasa que es la parte integrante del ciclo de Krebs que se ubica en la membrana interna de la mitocondria. Los electrones son transferidos desde FADH2 a Q para formar QH2 del complejo III. El complejo II tiene la caracterstica de ser altamente hidrofbico. Complejo III: es una oxidoreductasa Q citocromo C que contiene los citocromos b y c1 y un centro Fe-S. Este complejo reduce al citocromo C, una protena perifrica de membrana soluble en agua. El citocromo C como Q, es un transportador mvil de electrones, los cuales son transferidos a la citocromo C oxidasa (Complejo IV). Complejo IV: este complejo contiene a los citocromos a y a3 y tres iones cobre. Un in Fe heme y un in cobre en esta oxidasa transfiere los electrones al oxgeno, el ltimo aceptor para formar agua. 2. La sntesis de ATP (ATP sintasa o ATP sintetasa), ubicada en la membrana interna de la mitocondria e impulsado por un gradiente de protones. El flujo de electrones a travs de los complejos I, III y IV, ubicados en la membrana interna de la mitocondria, conduce la transferencia de protones desde el lado de la matriz a la cara del espacio intermembrana de la membrana interna. La fuerza impulsora

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de protones generada se debe a un gradiente de pH, teniendo la matriz mitocondrial un pH bsico vecino a la membrana interna, y en el espacio intermembrana un pH cido. El flujo de protones de regreso a la matriz desde el espacio intermembrana a travs de la ATP sintetasa impulsa la sntesis de ATP. El complejo enzimtico es un motor molecular conformado por dos unidades operacionales: un componente rotatorio y uno estacionario. La rotacin de la unidad F1 induce cambios estructurales en la subunidad F0, anclada en la membrana que dan por resultado la sntesis y liberacin de ATP en la matriz mitocondrial. La entrada del flujo de protones provee la fuerza para la rotacin. 3. El transporte de solutos (piruvato, cidos grasos, calcio, fosfato). La protena responsable del transporte de piruvato a la mitocondria es el transportador de piruvatos mitocondrial (MPC) ha sido identificado en las levaduras es un miembro de la familia de transportadores mitocondriales que constan de seis hlices transmembrana de masa molecular de 41.9 kDa. El transporte de piruvato a la mitocondria es esencial para la oxidacin de glucosa, lipognesis y gluconeognesis y tambin para el metabolismo de algunos aminocidos. El transportador tambin juega un rol importante en el transporte de cuerpos cetnicos tales como acetoacetato y beta hidroxibutirato a travs de la membrana interna de la mitocondria. El transportador de fosfatos mitocondrial PTP es una protena integral de membrana que es responsable del transporte de fosfato inorgnico a travs de la membrana interna de la mitocondria. El fosfato inorgnico es usado en la matriz mitocondrial en la fosforilacin oxidativa del ADP. Este transportador funciona como homodmero y como un cotransportador electroneutro de protones. Recientemente se ha identificado una traslocasa de cidos grasos (FAT/CD36) es una protena de transporte con alta afinidad por cidos grasos de cadena larga (LCFA) en el msculo esqueltico de rata y se ha encontrado que se requiere para la incorporacin del palmitato y su oxidacin en la mitocondria. Este transportador tambin est presente en mitocondrial del msculo esqueltico humano. 4. El transporte de ADP hacia la matriz y de ATP hacia el citosol. La traslocasa nucletido adenina (abreviada con la sigla ANT) juega un rol en el intercambio de ATP por ADP a travs de la membrana interna de la mitocondria, suministrando as al citoplasma de ATP nuevamente sintetizado en la fosforilacin oxidativa. ANT es una protena integral de membrana que comprende seis segmentos transmembrana y que es codificada por un gen nuclear que tiene una masa de 32

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kDa y se piensa que funciona como homodmero. Durante el transporte de ADP y ATP la protena cambia de conformacin a travs del cual el sitio de unin al sustrato est orientado hacia el citoplasma y la matriz respectivamente. Aparte de su rol en el transporte o traslocacin de nucletidos, ANT es un componente core del poro de transicin de la permeabilidad de la mitocondria (MPTP). Este es un complejo proteco encontrado en los sitios de contacto de la mitocondria que cuando estn abiertos actan como canal carente de especificidad, permitiendo el paso libre de molculas bajo 1,5 kDa a travs de la membrana interna. Como consecuencia, la mitocondria pierde su potencial de membrana y se hincha. En general la permeabilidad de transicin es un proceso complejo con inductores, moduladores e inhibidores. El calcio tiene un rol regulador de MPTP ya que hay un requerimiento de acumulacin de iones calcio en la matriz mitocondrial previo a la apertura del poro transitorio. 5. Los complejos de importacin Tim formadas por al menos 3 protenas distintas que se ubican en la membrana interna de la mitocondria y que participan en la transferencia o traslocacin de protenas sintetizadas en la va citoslica y codificadas en el ncleo. La membrana interna se caracteriza por tener una composicin lipdica particular. Como componente especial est la cardiolipina (tambin denominado bisfosfatidilglicerol), este es un lpido caracterstico de la mitocondria de una estructura inusual que es biosintetizado en la membrana interna de la mitocondria, este es un doble fosfolpido. Su concentracin en la membrana interna alcanza al 20% de los lpidos. La cardiolipina interacta con numerosas protenas de la membrana interna, incluyendo varios sistemas transportadores aninicos y algunos complejos de transporte de electrones, entre estos est la interaccin de la cardiolipina con la citocromo oxidasa, el complejo enzimtico terminal de la cadena transportadora de electrones. Se ha asociado en algunos estudios realizados con el proceso de envejecimiento, habra una disminucin de la actividad de la citocromo oxidasa con el avance de la edad en mamferos. Experimentalmente se ha demostrado usando la citocromo oxidasa en experimentos de reconstitucin en liposomas que la remocin de cardiolipina decrece el transporte de electrones entre un 60 y 70% de la actividad original. Este efecto no se logra con otros fosfolpidos, por lo tanto la cardiolipina acta modificando el ambiente lipdico asociado a la citocromo oxidasa, facilitando de esta forma su funcin enzimtica.

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La matriz mitocondrial contiene las enzimas que participan en: 1 2 3 4 Oxidacin de piruvato producido en la gliclisis en el citoplasma. -oxidacin de cidos grasos. Ciclo de Krebs (excepto la succinato deshidrogenasa). Replicacin, transcripcin y traduccin del ADMmit.

En los espacios intercrestas se ubica uno de los mayores complejos protecos de la mitocondria, y es el complejo PDH que tiene una masa molecular de 8x10 Da. La organizacin del complejo PDH es un ejemplo de una va metablica integrada. Est conformado por tres enzimas: 1) Piruvato deshidrogenasa E1, representada por 30 copias. 2) Deshidrolipoamida acetiltransferasa E2, representada por 60 copias. 3) Deshidrolipoamida deshidrogenasa, representada por 12 copias.
6

Como

parte

del

complejo

tambin

hay

diferentes

componentes

regulatorios incluyendo una quinasa y una fosfatasa. Todava queda por definir la mayor parte de las unidades funcionales de la mitocondria para establecer un modelo de compartimentacin metablica. Adems en la matriz se encuentran: varias copias de ADN circular carente de histonas y representa entre el 1 y el 5% del ADN celular total, ARNm, ARNt, ribosomas mitocondriales o mitorribosomas (55S) y grnulos densos e irregulares de 50 nm de dimetro y compuestos principalmente por calcio. Los nucleoides, asociacin del ADN mitocondrial con protenas, se ubican en lugares bien precisos de la matriz mitocondrial en las levaduras. En las clulas somticas humanas hay de una a varios cientos de copias de ADNmt circular ubicado en la matriz mitocondrial y asociado a la cara interna de la membrana interna de la mitocondria a travs de la regin D-loop. Datos de microscopa electrnica han sealado que las molculas de ADN circular mitocondrial forman una especie de roseta con un denso core central que es mantenido por protenas asociadas. La carencia de histonas es una de las causas que el ADN mitocondrial

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sea altamente susceptible a sufrir mutaciones debido a presencia de radicales libres en la mitocondria producidos durante el proceso de respiracin celular. El ADN mitocondrial humano es una doble hebra circular de ADN de 16.5 kDa presente de una a varios cientos por clula. Todas las protenas de mantencin del ADN mitocondrial son codificadas por el genoma nuclear. Estas son las protenas de la replicacin y de la segregacin del ADN y de reparacin tales como la polimerasa mitocondrial POLG. El genoma mitocondrial es diferente al nuclear. As tambin, el cdigo gentico mitocondrial es ligeramente diferente al nuclear y puede codificar 2 ARNr (12S y 16S), 22 ARNt, 13 ARNm y 13 polipptidos involucrados en el transporte de electrones y fosforilacin oxidativa. Estos genes son traducidos en ribosomas dentro de la matriz. Por esta razn la mitocondria es descrita como semiautnoma. Las protenas restantes (90-95%) son codificadas por ADN nuclear, y son traducidas en ribosomas citoplasmticos e importadas a la mitocondria como cadenas polipeptdicas terminadas y traslocadas desde el citoplasma a la mitocondria. El transporte y la traslocacin de las protenas va acompaado de chaperonas. En total la mitocondria contiene alrededor de 600 a 1000 protenas. Los fosfolpidos de las membranas mitocondriales provienen de la membrana citoslica del REL desde son transferidas por protenas de intercambio a la superficie citoslica de la membrana externa. Las mutaciones del ADNmt pueden provocar enfermedades, y los tejidos ms afectados son aquellos dependientes de la produccin de ATP como son el nervioso y el muscular. Adems, se ha sugerido que la progresiva acumulacin de mutaciones en el ADNmt durante la vida de un individuo puede contribuir al proceso de envejecimiento. Un hecho interesante es que en los mamferos casi todo el ADNmt es heredado de la madre, pues virtualmente todas las mitocondrias son aportadas por el ovocito en el momento de la fecundacin. Por tanto, las enfermedades mitocondriales son de herencia materna. Adems, la mitocondria de una clula puede contener una mezcla de ADNmt normal y ADNmt mutante, condicin conocida como heteroplasmia. Las

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investigaciones en este campo indican que estas enfermedades surgen slo cuando hay una preponderancia de mitocondrias que poseen informacin gentica defectuosa. Debido a lo anterior, los diferentes miembros de una familia que presentan mutaciones en el ADNmt pueden exhibir sntomas diferentes. Aquellos que tengan un mayor porcentaje de mitocondrias mutantes presentarn una forma ms severa de la patologa. Cabe destacar una diferencia importante entre el ADN nuclear y el ADNmt; el primero est protegido del dao por una serie de sistemas de reparacin de ADN, los cuales estn generalmente ausentes en la mitocondria. Adems, el ADNmt puede estar sometido a altos niveles de radicales libres mutagnicos. As, la velocidad de mutacin del ADNmt es mayor que la del ADN nuclear. El ADN mitocondrial humano es una molcula circular, de ADN de doble cadena que consta de 16.569 pares de bases y contiene una regin codificante y otra no codificante. La regin codificante lleva la informacin gentica para 13 protenas, 22 ARN de transferencia y dos ARN ribosomales, todos implicados en el proceso de la fosforilacin oxidativa que ocurre en la membrana interna de la mitocondria. Una multitud de enfermedades asociadas al ADN mitocondrial han sido correlacionadas con polimorfismos nucleotdicos tales como deleciones o inserciones de la regin codificante. La mayora de estas enfermedades son neuromusculares, sorderas, diabetes, epilepsia, disfuncin renal y cegueras.

Si bien es cierto que la principal funcin de la mitocondria es la produccin de ATP, realiza otras funciones como ser: 1. Remocin de calcio del citosol. Este transporte que realiza una ATPasa Ca
2+

dependiente presente en la membrana interna de la mitocondria opera bombeando el calcio hacia la matriz cuando la concentracin citoslica de este in aumenta hasta niveles peligrosos para la clula. 2. Sntesis de esteroides. La sntesis de glucorticoides y mineralocorticoides (en la corteza adrenal), y la de los esteroides sexuales (en la corteza adrenal y gnadas) requiere la participacin de citocromos P450 ubicados en la membrana interna de la mitocondria. La sntesis de las hormonas esteroidales se inicia con la transformacin de colesterol que ha sido transportado a la mitocondria en

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pregnenolona, la cual es posteriormente transportada al REL donde es convertida en progesterona, donde prosigue su metabolismo va una serie de reacciones enzimticas secuenciales. 3. Sntesis de aminocidos. En las mitocondrias de hepatocitos 2 grupos de aminocidos son sintetizados a partir de intermediarios del ciclo de Krebs, un grupo desde -cetoglutarato y el otro desde oxalacetato. 4. Produccin de radicales libres. Las especies qumicas de oxgeno reactivas, denominadas con la sigla ROS, son generados continuamente en el interior de la mitocondria a travs de reduccin de electrones del oxgeno, el oxgeno queda con una carga negativa adicional, esto sucede en los pasos intermedios de la cadena de transporte de electrones y ha sido implicado en el dao celular y enfermedades del envejecimiento. Los radicales libres causan dao a membranas, protenas y cidos nucleicos. 5. Homeostasis de iones metlicos, especialmente en el caso de iones de fierro. El fierro es almacenado principalmente en el citosol, y la mayora del fierro metablicamente activo es procesado en la mitocondria de la clula. El fierro es un elemento vital para todos los organismos desde bacterias hasta organismos superiores, dado que juega un rol esencial en numerosos procesos metablicos incluyendo transporte de oxgeno, sntesis de ADN, transporte de electrones. En condiciones fisiolgicas, la solubilidad del Fe
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es muy baja (alrededor de 10 ),

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por lo que la clula debe tener mecanismos de transporte y almacenamiento eficiente de fierro. El exceso de fierro ha sido implicado en enfermedades neurodegenerativas, apoptosis y tambin en la generacin de los dainos radicales libres ya mencionados. Esta funcin de detoxificar y secuestrar el fierro est a cargo de las ferritinas que se encuentran en la matriz de la mitocondria. Dado que la mitocondria est expuesta a intenso trfico de fierro para la sntesis de gupos heme y grupos azufre-fierro, requiere de un eficiente mecanismo para evitar la toxicidad del fierro. Si el fierro estuviera libre en la mitocondria podra interactuar con los ROS mencionado arriba en el punto anterior para producir un radical hidrxilo txico. La ferritina mitocondrial es una protena homopolimrica formada por 24 subunidades idnticas, que a diferencia de la ferritina citoslica es ms lenta y de menor actividad en la unin del fierro; es codificada por un gen nuclear carente de intrones ubicado en el brazo largo del cromosoma 5 (5q23.1). En general, las ferritinas son protenas abundantes en la clula destinadas a evitar

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la toxicidad del fierro, contribuir a su solubilidad y biomineralizacin y al almacenamiento de este metal. Otra protena mitocondrial implicada en el secuestro de fierro es la frataxina, una protena de membrana que une Fe , evitando la participacin de este in metlico en la formacin de los dainos radicales libres.
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Cmo las protenas sintetizadas en el citosol son direccionadas hacia la matriz, membrana externa, membrana interna y espacio intermembrana? El direccionamiento de estas preprotenas hacia la matriz mitocondrial, se debe a un pptido seal (presecuencia) que consiste de un segmento localizado en el extremo N-terminal de la cadena polipeptdica que presenta mltiples residuos de aminocidos cargados positivamente (bsicos). La translocacin ocurre en lugares donde las membranas externa e interna mitocondriales estn muy cercanas. Las preprotenas son mantenidas en un estado parcialmente desplegado por asociacin a una chaperona Hsp 70 citoslica y son reconocidas por un receptor de importacin que pertenece al complejo Tom (compuesto por varias protenas con secuencias cidas) de la membrana externa, e interaccionan electrostticamente con el complejo proteco. Las cadenas polipeptdicas desplegadas son entonces translocadas a travs del complejo Tom en la membrana externa, y transferidas al complejo Tim en la membrana interna. La translocacin del polipptido a travs de la membrana interna, requiere del gradiente electroqumico (generado por el transporte de protones desde la matriz hasta el espacio intermembrana) a travs de la membrana interna. La presecuencia es removida por una proteasa de la matriz, y una chaperona Hsp 70 mitocondrial asociada al complejo Tim, se une a la cadena polipeptdica a medida que atraviesa la membrana interna, impulsando la posterior translocacin. Finalmente, el polipptido es transferido a una chaperona Hsp 60 mitocondrial, en cuyo interior ocurre el plegamiento de la protena y la liberacin posterior en la matriz mitocondrial. En todo este proceso hay requerimiento de ATP. Las protenas destinadas a las membranas mitocondriales o al espacio intermembrana necesitan de mecanismos adicionales para ser dirigidas al compartimiento submitocondrial correcto. Estas protenas adems de la

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presecuencia cargada positivamente que dirige la importacin mitocondrial presentan una segunda seal a continuacin de la primera. El direccionamiento de protenas hacia las membranas mitocondriales parece estar mediado por secuencias hidrofbicas de terminacin que detienen la translocacin de las cadenas polipeptdicas a travs de los complejos Tim o Tom, provocando la insercin de ellas en las membranas interna o externa respectivamente. Las protenas cuyo destino es el espacio intermembrana pueden ser direccionadas por varios mecanismos. Algunas protenas son transferidas a travs de la membrana externa por el complejo Tom pero son liberadas en el espacio intermembrana en vez de ser transferidas al complejo Tim. Otras son transferidas a travs del complejo Tim pero entonces son liberadas como resultado de la remocin de secuencias hidrofbicas de trmino de transferencia. Incluso algunas protenas pueden ser completamente importadas a la matriz y reexportadas a travs de la membrana interna hacia el espacio intermembrana.

Apoptosis y mitocondria. La mitocondria juega un rol fundamental en la regulacin de la apoptosis, acta como un centro de control de la apoptosis. En la mitocondria daada se forma un poro de transicin de permeabilidad mitocondrial (mt PTP) que al parecer consiste en un traslocador de nucletidos de adenina (VDAC) y de varias otras protenas mitocondriales incluyendo a miembros de la familia Bcl2. Uno de los ms potentes activadores de la apoptosis es el citocromo C derivado del espacio intermembrana de la mitocondria. Su presencia en el citosol activa una cascada de enzimas protelticas denominadas caspasas, en conjunto con otras protenas. La activacin de las caspasas lleva a la destruccin de protenas claves en la mantencin de la estructura celular, como ejemplo se puede citar la degradacin de una protena que inhibe la enzima que destruye el ADN (DNAasa activada por caspasas, CAD), liberando CAD para clivar el material gentico. Los miembros de la familia de protenas Bcl2 estn ubicados preferentemente en la membrana externa y se ha demostrado que la fraccin citoplasmtica enriquecida de mitocondrias es capaz de inducir la apoptosis nuclear. El estrs oxidativo que induce la apoptosis es frenado por las protenas Bcl2, es por lo tanto un factor antiapopttico.

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En la mitocondria tambin se encuentran distribudas las caspasas mitocondriales, cistn-proteasas que una vez activadas constituyen un punto de no retorno. As, las caspasas 2 y 3 estn ubicadas en el espacio intermembrana de la mitocondria, asociado con la membrana interna. La caspasa-9 est asociada con la membrana externa y est expuesta al compartimiento citoslico.

PEROXISOMAS Peroxisomas organizacin para la destoxificacin celular, metabolismo de lpidos y de hormonas esferoidales. Los peroxisomas (microcuerpos) son organelos presentes en todos los tipos celulares, con la excepcin de los glbulos rojos. Son cuerpos de forma ovalada o esfrica, limitados por una nica membrana lisa. La matriz se aprecia granulosa y homognea. Normalmente son esfricos, pero tambin hay de formas elongadas, tubulares o reticuladas tienen un dimetro vara de 0,1 a 1 m, y su nmero vara entre 100 y 1000 por clula, siendo en las clulas hepticas y renales normalmente muy numerosos. La membrana del peroxisoma es impermeable a la mayora de las molculas, incluyendo NAD , NADP , protones y acetil CoA, creando as un ambiente nico dentro de la clula. La matriz del peroxisoma contiene enzimas involucradas en numerosos procesos metablicos. Son responsables de la -oxidacin de cidos grasos de cadena muy larga, de la sntesis de plasmalgenos. Los plasmalgenos son una importante clase de fosfolpidos del tejido cerebral en los cuales uno de los cidos grasos est unido al glicerol por un enlace ter en vez de un enlace ster. Los peroxisomas intervienen en el metabolismo de los radicales oxigenados libres, en la sntesis de colesterol, en el metabolismo del estradiol, en la formacin de cidos biliares, en el catabolismo de las purinas, prostaglandinas y leucotrienos.
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Biognesis de los peroxisomas. El modelo de ensamble del peroxisoma implica tres pasos: 1. Formacin de la membrana del peroxisoma, probablemente desde el retculo endoplsmico.

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2. Importacin de las protenas de membrana del peroxisoma. Estas protenas de membrana son sintetizadas fuera del peroxisoma, en la va citoslica, en polirribosomas libres, son plegadas y enseguida transportadas e insertadas en la membrana del organelo. Son codificadas por los genes pmp. 3. Importacin de las protenas de la matriz del peroxisoma a travs de la membrana del peroxisoma. Dado que los peroxisomas tienen una vida media de 5-6 das (son destruidos por autofagia), los nuevos peroxisomas se forman por el crecimiento y fisin (de un peroxisoma se originan dos) posterior de peroxisomas existentes. El peroxisoma no tiene un genoma propio ni ribosomas; por lo que todas las protenas y lpidos de membrana son sintetizados fuera del peroxisoma, en la va citoslica. Los fosfolpidos provienen de la membrana citoslica del REL y son transportados a la membrana del peroxisoma por protenas intercambiadoras. Las protenas destinadas a los peroxisomas, ya sea a sus membranas o matriz, provienen de ribosomas libres en el citosol (va citoslica) y son selectivamente conducidas al peroxisoma. Los fosfolpidos de la membrana del peroxisoma son principalmente fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina, con una tendencia hacia los cidos grasos de cadena ms larga que otras membranas. Los fosfolpidos son sintetizados en el retculo endoplsmico y transportados a la membrana del peroxisoma por un mecanismo an desconocido. Este caso ocurre tambin en la mitocondria. Los fosfolpidos de la mitocondria se sintetizan en el retculo endoplsmico y tal vez se mueven desde el retculo endoplsmico a la mitocondria en sitios muy vecinos. Este mecanismo se puede aplicar a los peroxisomas, y esta sugerencia est apoyada por datos morfolgicos de vecindad entre retculo endoplsmico y peroxisomas. Alternativamente, se ha especulado que vesculas especializadas pueden contener una o pocas protenas que especifican su destino. Pequeas vesculas diferentes de los peroxisomas maduros han sido identificados en la levadura Pichia pastoris, que llevan dos protenas Pex1p y Pex6p. Estas peroxinas son miembros de la familia de las AAA ATPasas, algunos miembros de los cuales estn implicados en los eventos de fusin de membrana. Se ha intentado especular que estas vesculas podran transportar los fosfolpidos a los peroxisomas.

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La biognesis de los peroxisomas es controlada por protenas codificadas por los genes pex, denominadas peroxinas, que se encuentran distribuidos en varios pares de cromosomas en el genoma humano. Las peroxinas pueden ser receptores solubles o unidos a la membrana del peroxisoma. Se han descrito al menos 14 peroxinas (Tabla 2) que cumplen distintas funciones en el transporte de las protenas a la matriz o a la membrana, fusin de peroxisomas, proliferacin de peroxisomas y reconocimiento de otras peroxinas. Las protenas destinadas a los peroxisomas contienen un pptido seal, denominado PTS (seal de transporte al peroxisoma). Esta seal puede ser en la mayora de las protenas importadas al peroxisoma (95 %) que consta de 3 aminocidos (Ser-Lys-Leu) prximo a su extremo carboxilo, y se denomina PTS1. Un nmero limitado de protenas de la matriz del peroxisoma contiene una seal en el extremo amino terminal, PTS2, que es un nonapptido (Arg-Leu- X(5)-HisLeu, X(5) corresponde a 5 posiciones de aminocidos en la secuencia de la protena, puede ser cualquier aminocido). Ejemplo de protena que lleva la seal PTS2 es la mevalonato quinasa humana. Dichas seales son reconocidas por las peroxinas Pex5p que reconoce la seal PTS1 y Pex7p que reconoce la seal PTS2, ambas peroxinas se ubican en el citosol. A diferencia de la mitocondria cuyas protenas son importadas en un estado desplegado, los peroxisomas son capaces de importar protenas a su matriz en un estado plegado.

3. Transporte de las protenas de la matriz del peroxisoma. Las protenas destinadas a la matriz del peroxisoma son sintetizadas en la va citoslica de manera inducible, es decir los genes nucleares que sintetizan estas protenas son activados cuando se necesitan estas protenas. Una vez sintetizadas estas protenas son transportadas a los peroxisomas por protenas especiales.

Transporte de protenas que llevan la seal PTS1. El transporte de las protenas sintetizadas en la va citoslica que llevan la seal PTS1 con destino a la matriz del peroxisoma siguen los siguientes pasos:

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1. Unin receptor-ligando. Las protenas destinadas a la matriz del peroxisoma que llevan la seal PTS1 son reconocidas por la peroxina Pex5p citoslica, una protena que contiene TPR en el extremo carboxilo. La seal PTS1 se une al extremo carboxilo terminal de la peroxina formando un complejo Protena transportada (PTS1)- Pex5p. 2. Transporte y anclaje al peroxisoma de los complejos receptor-ligando en la membrana peroxisomal. Anclaje al receptor. El complejo luego se une a peroxinas ubicadas en la membrana del peroxisoma por el extremo amino terminal de Pex5p. Las peroxinas de la membrana del peroxisoma Pex13p, Pex14p, Pex17p sirven de sitio de anclaje para el complejo Protena transportada (PTS1)-Pex5p. Pex5p se asocia a Pex14p inicialmente y luego con Pex13p y con Pex17p. El aparato de traslocacin ubicado en la membrana del peroxisoma permite la liberacin de las protenas a la matriz del peroxisoma. Tabla 2. Peroxinas y su funcin en el peroxisoma. (Kurbatova EM, Dutova TA, Trotsenko, YA. 2005. Structural, functional, and genetic aspects of peroxisome biogenesis. Russ J Gen 41(2): 149-165.)
Peroxina Ubicacin o Funcin Pex1p Implicada en la fusin de peroxisomas y transporte de protenas a la matriz del peroxisoma Pex2p Protena integral de membrana, contiene Zinc, implicada en el transporte de protenas a la matriz del peroxisoma Pex3p Protena integral de membrana, implicada en el ensamble de la membrana del peroxisoma Pex5p Pex6p Receptor de la protena de la matriz PTS1 Pex7p, Pex12p, Pex13p, Pex14p Implicada en la fusin de peroxisomas y transporte de protenas a la matriz del peroxisoma Pex7p Receptor PTS2 Pex5p, Pex13p, Pex14p 6q21-q22.2 Pex1p 6p22-p11 12p13.3 Pex19p 6q23-q24 Pex12p 8q21.1 Interaccin con otras Locus peroxinas Pex6p 7q21-q22

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Pex10p

Protena integral de membrana, contiene Zinc, implicada en el transporte de protenas a la matriz del peroxisoma

Pex12p

1p36.32

Pex11p

Protena integral de membrana, contiene Zinc, implicada en el transporte de protenas a la matriz del peroxisoma

Pex19p

Pex12p

Protena integral de membrana, implicada en el transporte de protenas a la matriz del peroxisoma

Pex5p, Pex10p, Pex19p

17q21.1

Pex13p

Protena integral de membrana, contiene Zinc, implicada en el transporte de protenas a la matriz del peroxisoma

Pex5p, Pex7p, Pex14p 2q14-p16

Pex14p

Protena perifrica o integral, sitio primario Pex5p, Pex7p, de unin de receptores PTS1 y PTS2 Pex13p, Pex14p Pex17p Pex19p Diferentes peroxinas de la membrana del peroxisoma Pex1p, Pex6p 22q11.21 11p11.2 1q22

Pex16p Pex19p

Protena integral de membrana Protena citoslica, implicada en el transporte de protenas a la matriz del peroxisoma

Pex26p

Protena integral de membrana

3. Traspaso del ligando a la maquinaria de traslocacin, a travs de la membrana. 4. Reciclamiento del receptor de regreso al citosol. Pex5p es un receptor reciclable o recuperable. Este proceso es mediado por un conjunto de peroxinas: las AAA Atpasas: Pex1 y Pex6; Pex 4, una enzima conjugada con ubiquitina; y probablemente un sitio de anclaje de las peroxinas Pex4 y Pex22. Pex1 y Pex6 actan luego de la traslocacin, seguidas de Pex4 y Pex22.

Transporte de protenas que llevan la seal PTS2. Tambin las Pex13p y Pex14p son sitios de anclaje para Pex7p, una protena que contiene WD-40, el receptor de las protenas con destina a la matriz del peroxisoma y que llevan la seal PTS2.

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Transporte de protenas de membrana y de lpidos del peroxisoma. Adems de las protenas de la matriz, la proliferacin de los peroxisomas requiere de protenas de membrana y de fosfolpidos. Los fosfolpidos son sintetizados en el retculo endoplsmico y transportados a los peroxisomas. La va de transporte no est muy clara an y se han sugerido dos hiptesis. La primera que habran protena de intercambio directo de fosfolpidos entre las membranas de los organelos (retculo endoplsmico y peroxisomas) y la segunda es que los fosfolpidos seran traslocados por vesculas especiales que contendran protenas sintetizadas en el retculo endoplsmico y que determinaran los sitios de liberacin de los lpidos. Las protenas de membrana del peroxisoma son sintetizadas en forma constitutiva, es decir los genes que las codifican estn siempre activos y las protenas que son sintetizadas en la va citoslica, con una sola posible excepcin, son incorporadas directamente a la membrana en el citosol. El mecanismo de incorporacin est poco claro an, aunque se ha demostrado que existen seales de transporte en algunas protenas. Hay tres peroxinas implicadas en el proceso de insercin de las protenas de membrana del peroxisoma: Pex3p, Pex16p y Pex19p.

Las protenas de membrana del peroxisoma tienen las siguientes funciones: 1. Interactuar con las protenas del citoesqueleto. Debido a esta interaccin, las membranas pueden afectar la morfologa del peroxisoma, el movimiento y la distribucin de los peroxisomas durante la mitosis. 2. Intervienen en la importacin de sustratos, intermediarios metablicos y cofactores de enzimas como FAD y NADH. 3. Son responsables de la degradacin selectiva de peroxisomas. 4. Forman complejos para la importacin de protenas, especficamente anclaje y traslocacin de las protenas destinadas a la matriz del peroxisoma. Adems, los peroxisomas desempean un papel importante en la destoxificacin celular, contienen enzimas oxidativas, las que en conjunto son

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alrededor de 50. Las ms comunes son: catalasa, urato oxidasa, D-aminocido oxidasa y -hidroxicido oxidasa. La catalasa degrada rpidamente al H2O2 producida en los peroxisomas por la oxidacin de sustratos orgnicos (RH2 + O2 siguiente reaccin: catalasa 2 H2O2 2 H2O + O2 R + H2O2 ), mediante la

El H2O2 (perxido de hidrgeno o agua oxigenada) es un poderoso agente oxidante muy reactivo que puede formar radicales hidroxilos (HO) que atacan las macromolculas celulares. En las mitocondrias, RE y citoplasma ocurren reacciones en vas metablicas normales que originan aniones superxidos (radicales libres), muy reactivos y que pueden producir alteraciones de la bicapa lipdica de las membranas, dao en el ADN, modificaciones en las protenas generando disfuncin celular. La reaccin de dismutacin producida por la superxido dismutasa transforma a los aniones superxido en H2O2 y O2 , siendo neutralizado el perxido de hidrgeno por accin de la catalasa peroxisomal. La catalasa en clulas hepticas y renales usa H2O2 para oxidar otros sustratos que son txicos (TH2), tales como fenoles, alcoholes, formaldehdo y cido frmico, y as neutraliza su toxicidad. La reaccin general es: catalasa H2O2 + TH2 2 H2O + T

Desrdenes en peroxisomas: Peroxisomopatas Se pueden clasificar en tres grupos: 1. Grupo I: asociados a la biognesis de los peroxisomas. Existe un desorden gentico, el sndrome cerebro hepatorrenal de Zellweger, en el que hay una falla en la protena que incorpora las enzimas

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oxidativas a la matriz del peroxisoma y que est caracterizado por la existencia de peroxisomas vacos en las clulas de los afectados por esta enfermedad, los que mueren antes del primer ao de vida. 2. Grupo II: asociados a la deficiencia de una enzima en particular. 3. Grupo III: asociados con deficiencias enzimticas mltiples.

NCLEO Ncleo, organizacin para el almacenamiento y procesamiento de la informacin gentica El ncleo es el organelo que contiene la informacin gentica de la clula a la forma de secuencias de ADN que en los organismos eucariontes discretamente organizada en cromosomas. En esta parte del captulo se hace referencia a la organizacin del ncleo en la interfase del ciclo celular, que es la etapa del ciclo celular en que se encuentra organizado para que tenga lugar el flujo de informacin gentica hacia el citoplasma, a travs de la transcripcin en el ncleo hacia el citoplasma donde se realiza la traduccin. En el ncleo se sintetiza la molcula de ARN teniendo como molde la informacin contenida en el ADN de los cromosomas y ocurre tambin la maduracin o procesamiento del ARN heteronuclear o transcrito primario para formar el ARN mensajero. La organizacin de los genes, la regulacin de la expresin gnica y la generacin de traslocaciones cromosmicas (intercambio de segmentos de cromosomas no homlogos), tiene lugar durante la interfase en el ncleo. Durante la mitosis se interrumpe la organizacin del ncleo, los cromosomas se condensan y se congregan en la placa metafsica, desaparece la organizacin espacial tridimensional del ncleo. El ncleo es, por lo tanto, el organelo ms dinmico de la clula. Almacena la mayor parte del material gentico y es el sitio donde ocurre la mayor parte de los procesos regulatorios del genoma. El ncleo contiene adems una variedad de estructuras dinmicas que lo hacen un organelo con varios subcompartimientos que han sido delimitados claramente aunque la interaccin funcional entre ellos an se desconoce.

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El ncleo est conformado por una matriz, la cariolinfa o nucleoplasma y una envoltura continua con el retculo endoplsmico, denominada carioteca o envoltura nuclear. La envoltura nuclear que una estructura conformada por dos membranas, la membrana externa es contigua con el retculo endoplsmico rugoso y frecuentemente est cubierta de ribosomas. La membrana interna y la externa de la envoltura nuclear se fusionan en algunos trechos conformando los poros nucleares que sirven en el trnsito de materiales entre ncleo y citoplasma. El complejo de poro nuclear se ha demostrado que tiene una estructura de canastillo que se prolonga hacia el nucleoplasma. Est conformado por grandes complejos protecos embebidos en ambas membranas de la envoltura nuclear. En las clulas de los mamferos estn compuestos por al menos 30 protenas denominadas nucleoporinas. Slo dos de las nucleoporinas Pom121 y gp210, son protenas integrales y por lo tanto anclan al complejo de poro a las membranas de la envoltura nuclear, mientras todas las dems son sintetizadas como protenas solubles en la va citoplasmtica. Estas protenas solubles se agrupan en bloques como subcomplejos que posteriormente se ensamblan para conformar el poro nuclear. Las nucleoporinas cumplen un rol especfico, se han clasificado 19 nucleoporinas basado en estudios de tiempo de residencia de las protenas, en tres grupos: las nucleoporinas que cumplen funcin de andamiaje o de soporte fsico, estas corresponden a alrededor de 10 nucleoporinas; las que cumplen una funcin de adaptador estructural, alrededor de 6 y otras 3 que cumplen una funcin regulatoria o transporte. Las molculas ms pequeas que 40 kDa pueden difundir libremente a travs de los poros pero las de mayor tamao deben ser transportadas a travs de los poros nucleares. Transporte de sustancias a travs de los poros nucleares: Importinas y Exportinas, intercambio ncleo citoplasma. Una familia de protenas conocidas como importinas o exportinas, tambin denominadas en conjunto carioferinas, median el movimiento de protenas y ARN entre citoplasma y ncleo. Las protenas o ARN que son transportados (cargamento o carga) contienen seales. Las protenas o ARN contienen la secuencia seal de ubicacin nuclear (NLS) o secuencia seal de exportacin nuclear (NES) que son reconocidas por importinas o exportinas respectivamente La interaccin de la carga con su transportador es modulado por la pequea GTPasa Ran. Para las importinas, la unin de la carga y Ran GTP es antagonista y para exportinas la unin del cargo y RanGTP es cooperativa. El estado de unin

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al nucletido de Ran, en efecto determina la identidad del compartimiento: RanGTP en el nucleo y RanGDP en el citoplasma; y permite que el transportador se una o libere la carga en el compartimiento apropiado. En este proceso del ciclo de la Ran GTPasa participan numerosos factores accesorios incluyendo el factor intercambiador de nucletidos RCC1, la protena activante citoplasmtica Ran GTPasa RanBP1 y el factor de transporte nuclear 2 NTF2, todos ayudan en el transporte manteniendo a Ran en su apropiado estado de unin a GTP o GDP o modulando la interaccin de Ran con los transportadores. La familia importina/exportina comparte varias caractersticas que incluyen un dominio amino terminal de unin a Ran y la capacidad de moverse entre citoplasma y ncleo. Otra estructura importante es la lmina perifrica nuclear fibrosa, compuesta por microfilamentos intermedios, que rodea el interior de la cavidad de ncleo adosada a la membrana interna de la envoltura nuclear. La lmina est compuesta de las protenas denominadas lamina A/C y Beta 1 y Beta 2, y juega un rol de regulacin en la estructura de la envoltura nuclear y anclaje de la cromatina interfsica en la periferia nuclear. Las protenas de la lmina nuclear pueden interactuar entre ellas, con protenas asociadas a la lmina, con protenas del andamiaje nuclear y con la cromatina. Probablemente la mayora de las protenas asociadas a la lmina interacten directamente con la cromatina. La lmina nuclear se requiere para la regulacin apropiada del ciclo celular, organizacin de la cromatina, replicacin del ADN, diferenciacin celular y apoptosis. Las mutaciones en las protenas de la lmina nuclear pueden interrumpir estas actividades y causar enfermedades genticas, denominadas laminopatas. La membrana nuclear interna y la lamina nuclear tienen una composicin proteica nica que incluye laminas nucleares, diferentes variantes polipeptdicas de splicing asociados a la lmina (LAP1 y LAP2), emerina, Man1, receptor de lmina B (LRB), otefina, nurima, "young arrest" y posiblemente UNC-84, quinasa del receptor de la lamina B, p34 y p18. Las lminas corresponden a filamentos intermedios del citoesqueleto del tipo V. La lamina A se expresa en clulas diferenciadas, y es soluble en el citoplasma durante la mitosis. La lmina B se expresa en todas las clulas y durante la mitosis tiende a permanecer unida a la membrana. Los genomas de vertebrados contienen dos tipos de genes de lamina B1 y B2 y un tipo de gen de lamina A. Estos tres genes codifican al menos 7 polipptidos distintos: lmina A, una lmina variante de A, C1 y C2, que son variantes de splicing del gen lmina A y las lminas B1, B2 y B3. Lamina B3 es

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una variante de splicing del gen B2. Las laminas B3 y C2 son especficas para clulas germinales, donde probablemente juegan un rol en la reorganizacin de la cromatina durante la meiosis. LAP1, LAP2, emerina, MAN1, LBR, nurima y UNC84 son todas protenas integrales de membrana. LAP2, emerin y Man1 comparten un dominio homlogo de 43 residuos de aminocidos cerca del extremo N-terminal denominado dominio LEM. LBR es una protena de unin a la lmina B que es homloga de la reductasa esterol C14 ubicada en el retculo endoplsmico SR1 y SR2. Nurima tiene cinco dominios transmembrana que median su marcaje a la membrana interna, donde interacta con el andamiaje nuclear. La protena arresto joven (YA o young arrest) es una protena codificada por genes maternos en la mosca de la fruta, Drosophila y se requiere para la transicin desde meiosis a mitosis. YA o protena de arresto joven es una protena perifrica de membrana asociada a la lamina y la cromatina. Diversas actividades nucleares requieren de la lmina nuclear, as por ejemplo, durante la mitosis, el adecuado ensamble y desensamble de la lamina nuclear se requieren para el progreso del ciclo celular. La lmina nuclear juega un rol esencial en la organizacin nuclear por anclaje de la cromatina a la envoltura nuclear. Se ha demostrado interaccin especfica entre histonas y laminas, entre protenas con dominios LEM y BAF (BAF: barreras a factores de autointegracin) y tambin entre LBR y HP1 (HP: protena asociada a heterocromatina). As las interacciones entre estas protenas y sus respectivas protenas de interaccin en la lamina estn probablemente implicadas en la organizacin del silenciamiento de la cromatina en la periferia del ncleo, que da origen a la heterocromatina. Cabe sealar que las histonas y las protenas HP-1 y BAF se distribuyen ampliamente en el ncleo y no son especficas de la lmina. La protena UNC-84 facilita la interaccin ncleo-centrosoma requerida para migracin y anclaje de nucleos durante procesos del desarrollo de algunos invertebrados.

Tanto la envoltura nuclear, los complejos de poro nuclear y la lamina nuclear son desensamblados de manera coordinada. El complejo COP I, que juega un rol preponderante en el remodelamiento del Golgi, con la formacin de vesculas, ha sido implicado en el proceso de la desorganizacin de la envoltura nuclear y requiere de la interaccin del complejo de poro nuclear para ser reclutado. Nup153 y Nup358/RanBP1, protenas residentes en el canastillo del poro nuclear son las encargadas de reclutar COP I, la primera en el lado nuclear

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del poro y la segunda (Nup358/RanBP1) en la cara citoplasmatica del poro, a travs de la interaccin de los dedos de Zinc de estas protenas con el complejo coatmero COP I. Se ha comprobado mediante el uso de anticuerpos contra estas protenas impide la desorganizacin de la envoltura plasmtica en la mitosis. El nucleoplasma est organizado en compartimientos que cumplen funciones especficas, y se les ha definido como compartimientos porque: 1. Contienen subconjuntos de protenas residentes. 2. Pueden ser identificados morfolgicamente a travs del microscopio y han sido experimentalmente visualizados en clulas vivas. 3. Algunos de estos compartimientos pueden ser aislados y ser caracterizados bioqumicamente. La eficiencia de la multitud de procesos que tienen lugar en el ncleo es explicable slo si en ese espacio hay una organizacin de la matriz nuclear. Los compartimientos descritos hasta ahora son el nuclelo, el compartimiento de los factores de maduracin del ARN o de splicing (SFC), los cuerpos de Cajal o cuerpos enrollados, los cuerpos de oncoprotena de leucemia promieloctica o cuerpos PML, los dominios PTF, los dominios o territorios cromosmicos, los canales intercromosmicos, los cuerpos PcG o polycomb, las manchas nucleares IGC, Cuerpos Gemin, Cuerpos de Clivaje, entre otros.

El Nuclelo. El nuclelo es la nica estructura subnuclear que es visible a la microscopa ptica, como se puede apreciar claramente en las neuronas, en hepatocitos, en oocitos de anfibios, etc. El nuclelo est conformado por una regin fibrilar y una regin granular, el compartimiento perinucleolar, componente fibrilar denso. Los nuclelos se forman en las regiones organizadoras del nuclelo (NOR) ubicados en cromosomas especficos, en los cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22. Las NOR contienen genes codificantes que transcriben activamente el ARN ribosmico (ARNr).

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El nuclelo est organizado en tres compartimientos: 1. El centro fibrilar, regin plida a la microscopa electrnica de transmisin que est compuesta por fibrillas de 50 Angstrom de dimetro. Los centros fibrilares contienen los genes de ARN ribosmico, en los cuales se realiza la transcripcin. Cada gen activo contiene alrededor de 100 a 120 molculas de la enzima ARN polimerasa que sintetizan cada transcrito primario en la periferia del centro fibrilar, es decir en la interfase con el componente fibrilar denso. 2. El componente fibrilar denso regin que rodea al centro fibrilar est formado de un material fibrilar denso que forma capas compactas. 3. El componente granular regin que contiene al centro fibrilar y al componente fibrilar denso es una regin con abundante granulacin.

Esta arquitectura nucleolar refleja la maduracin vectorial de las partculas pre-ribosmicas que se inicia en el centro fibrilar, pasan al centro fibrilar denso y migran progresivamente al componente granular. A medida que ocurre el procesamiento del ARNr (maduracin del ARN ribosomal) ocurren las modificaciones del transcrito primario y el ensamble del ribosoma. El nuclelo humano se encuentra rodeado por un casquete de cromatina condensada que ocasionalmente penetra profundamente en el organelo alcanzando el centro fibrilar, la cromatina perinuclear condensada y los centros fibrilares son contiguos, y se ven como intersticios nucleolares.

Territorios o dominios cromosmicos. Los cromosomas son las mayores subunidades fsicas del genoma. Su naturaleza discreta es ms aparente durante la mitosis cuando se condensa la cromatina. Sin embargo, entre el perodo G1 y G2 de la interfase tambin es posible evidenciar la existencia de estas unidades discretas, dentro del nucleoplasma se organizan los territorios de los cromosomas, de manera no al azar. En las clulas de mamferos los territorios cromosmicos ocupan de preferencia posiciones radiales en relacin al centro del ncleo de acuerdo a su densidad de genes y posiblemente tambin a su tamao. Cada territorio corresponde a la regin del ncleo ocupado por un cromosoma, es un lugar que

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ocupa un cromosoma en el espacio del ncleo, que no se traslapa con el territorio de otro cromosoma. As cada cromosoma ocupa una regin dentro del ncleo. Se piensa que los genes activos de cada cromosoma se encuentran en territorios libremente empaquetados en la superficie del nucleoplasma, hacia el centro del ncleo; esta corresponde a la cromatina que replica tempranamente en la fase S (eucromatina). La cromatina que replica tardamente en la fase S del ciclo celular (Ver Captulo IV), que corresponde a la heterocromatina, ocupa la periferia nuclear, cerca de la envoltura nuclear y la regin perinuclear. Algunos tipos celulares muestran una banda de heterocromatina (cromatina inactiva) asociada a la lmina nuclear. En adicin, cantidades variables de heterocromatina se observan en las regiones ms internas del ncleo. As, la cromatina que replica tempranamente (eucromatina) est separada de la cromatina que replica tardamente (heterocromatina). Una caracterstica de esta fase del ciclo celular es que los cromosomas homlogos no estn apareados en la interfase. Sin embargo, los detalles estructurales de los territorios cromosmicos no se ha establecido claramente an, pero la fibra de cromatina est probablemente plegada en una compleja estructura de orden superior que es permeada por canales de diferentes tamaos. Esto crea un cuerpo poroso de cromatina con una gran superficie y permite el acceso de factores regulatorios a las secuencias tanto en la superficie externa de un territorio cromosmico como dentro del territorio cromosmico. Se define tambin los dominios intercromosmicos que son las regiones del ncleo no ocupados por cromosomas, tienen la forma de canales, por lo que se les denomina tambin canales intercromosmicos. Los canales intercromosmicos contienen la cola de poliA que se agrega a los ARN en el paso final de la maduracin del mensajero, antes de ser transportado desde la periferia del ncleo al citoplasma para ser traducido en los ribosomas. La traduccin ocurre luego que el mensajero ha abandonado el ncleo al pasar por el poro nuclear. Tambin es posible encontrar all, factores de transcripcin, de maduracin del ARN (splicing), de replicacin y reparacin del ADN, etc. Esta organizacin de la arquitectura del ncleo permite el ordenamiento de las funciones de la informacin gentica en la cromatina del ncleo, como tambin la regulacin gnica como un modelo territorio cromosmicodominio intercromosmico.

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Una clasificacin de los territorios nucleares o subcompartimientos nucleares hasta ahora no mencionados que se da a continuacin: Los cuerpos policomb (del ingls comb= peineta) contienen grupos de protenas asociadas con la heterocromatina pericentromrica, que es la cromatina que no transcribe en ARN y que se ubica alrededor del centrmero del cromosoma. Estos dominios varan en nmero, tamao y composicin proteca. No est claro si estos dominios son compartimientos de almacenamiento o estn implicados en el silenciamiento de genes, como en el caso del silenciamiento prolongado de genes hometicos Hox en Drosophila. Se han descrito grupos policomb en humanos y ratones. Los factores de maduracin del ARN transcrito primario a mensajero se encuentran reunidos en pequeos grupos de 25 a 50 distribuidos en todo el nucleoplasma, se denominan manchas nucleares. Las manchas nucleares son un tipo de grnulos de intercromatina. Corresponden a estructuras que almacenan y pueden llegar a ensamblar los componentes de la maquinaria de maduracin del ARN (splicing). Un cuerpo de Cajal (o cuerpo enrollado) es una estructura subnuclear definida por la presencia de la proteina coilina, contiene protenas adicionales y molculas de ARN, en particular, snRNA7 se encuentra en altas concentraciones; y podra ser el sitio de ensamble de ARN pequeos: snRNA y snoRNA que ensamblan protenas en el procesamiento del ARN. El ARN snRNA7, participa en el procesamiento del transcrito primario de las histonas. Coillina y snRNA7 participaran en la nucleacin de los Cuerpos de Cajal. Los cuerpos de Cajal se consideran organelos nucleares que juegan un rol fundamental en la transcripcin y procesamiento del ARN. En el nucleo de Xenopus se han descrito de 50 a 100 Cuerpos de Cajal de 10 micrmetros de dimetro. Al someter a un estrs trmico a los oocitos de Xenopus, se originan los Mini Cuerpos de Cajal, de 2 micrmetros de dimetro. Se ha planteado que los los mini cuerpos de Cajal se originan desde la superficie de B-snurposomas. Los Bsnurposomas son cuerpos esfricos de 2 a 4 micrmetros de dimetro dispersos por el nucleoplasma del ncleo o vescula germinal del oocito de Xenopus. Corresponden a las manchas nucleares de los nucleos interfsicos. Cabe sealar que el oocito es un gameto producto de la meiosis.

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Los cuerpos de Cajal y los nuclelos comparten varias caractersticas biolgicas que incluyen una estrecha proximidad fsica, similar composicin de protenas, desensamble durante la mitosis y asociacin con loci polimrficos especficos. Los Cuerpos de Cajal estn asociados preferencialmente con sitios cromosmicos especficos en cromosomas (locus) que codifican para histonas y para varios tipos de ARN nuclear pequeos (del ingls: small nuclear RNA). Sin embargo, la mayor parte de los Cuerpos de Cajal estn en forma libre en el nucleoplasma. Un cuerpo Gem es una estructura subnuclear, similar a los cuerpos de Cajal y frecuentemente adyacentes a estos; tambin contiene protenas especficas y pequeos ARN. Tienen estrecha asociacin con las protenas SMN y gemin2. Se encuentran frecuentemente yuxtapuestos a los cuerpos de Cajal y aunque alguna vez se consideraron dos estructuras separadas pero relacionadas, los cuerpos gem y de Cajal son considerados ahora dos manifestaciones de la misma estructura. La comunicacin entre los cuerpos de Cajal y los cuerpos gem es mediante coilina. La coilina contiene residuos de arginina dimetilada dentro de una caja que modula la afinidad con SMN (protenas motoras neuronales). La inhibicin de la metilacin o mutacin de la caja RG decrece la interaccin de coilina con SMN, dando por resultado los cuerpos Gem separados de los cuerpos de Cajal. Cuando la coilina est metilada, los cuerpos de Cajal y los cuerpos Gem son coincidentes. La funcin de los cuerpos de Cajal y los Gem es estar involucrados en la biognesis y el trfico de snoRNP y snRNP, que se mueven a travs de los cuerpos de Cajal en ruta a los nuclelos o manchas de splicing o de maduracin del ARN. Evidencias recientes indican que los Cuerpos de Cajal podran ser el sitio de la biognesis de ARN de la telomerasa. Tambin contienen fibrillarina, una posible ARN metiltransferasa. Los cuerpos de clivaje aparecen con frecuencia como 1 a 4 focos de 0,3 a 1 micrmetro y contiene varios factores que estn implicados especficamente en los pasos de clivaje y poliadenilacin del procesamiento del transcrito primario. Estos factores incluyen el factor de estimulacin de clivaje (CstF) y el factor de especificidad de la poliadenilacin (CPSF), ambos necesarios para el procesamiento de terminacin 3 de la poliadenilacin de los mensajeros. Los factores de clivaje generalmente se traslapan o se localizan adyacentes a los

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cuerpos de Cajal, con un subconjunto no asociado a los cuerpos de Cajal que contienen el ARN transcrito primario. Tambin se ha demostrado que la protena DEAD reside en los cuerpos de clivaje donde no hay ARN transcrito primario, sugiriendo que podran existir diferentes subclases de cuerpos de clivaje. La asociacin de los cuerpos de clivaje y los cuerpos de Cajal es dinmica y dependiente del ciclo celular. Los cuerpos de clivaje aparecen coincidentes con los Cuerpos de Cajal en G1, luego adyacentes a estas estructuras en la fase S y finalmente aparecen menos definidos o ausentes ambos en G2. Heterocromatina. El ADN en las clulas eucariticas se encuentra organizado asociado a protenas denominadas histonas formando la cromatina. La cromatina es un complejo de nucleoprotenas que cumple la funcin de facilitar la regulacin gnica, la replicacin del ADN, la cohesin de las cromtidas entre otros aspectos de organizacin celular. Se pueden distinguir mediante tinciones en el ncleo dos regiones de cromatina que se tien con distinta intensidad, la regin teida con mayor intensidad corresponde a heterocromatina y aquella menos intensa a eucromatina. La heterocromatina se encuentra distribuida en centrmeros (banda C-positiva), en el brazo largo del cromosoma Y de humanos y de ratones. La heterocromatina tiene una estructura ms compacta que el resto de la cromatina. Los factores responsables de esta caracterstica no han sido completamente caracterizados, uno de estos factores corresponde a la protena de la heterocromatina HP1 que se une a la fibra de cromatina mediante un residuo metilado en lisina 9 de la cola de la histona H3. De acuerdo a estudios recientes el termino heterocromatina es usado en forma incorrecta al describir como cromatina transcripcionalmente silenciada. Los genes reprimidos tienen factores protecos similares asociados a ellos como heterocromatina pero en muchos casos slo una corta regin de la fibra de cromatina est cerrada. Por lo tanto estas regiones no constituyen dominios de heterocromatina cuando es posible reabrir estas secuencias y expresar los genes de estos loci. La verdadera heterocromatina cubre grandes regiones de la cromatina que es capaz de formar un dominio represivo dentro del ncleo. El silenciamiento de otros genes puede ser facilitado traslocndolos al interior de estos dominios silenciados, generalmente en la regin central de los dominios cromosmicos, mientras que los genes transcripcionalmente activos y los genes que pueden ser reactivados se encuentran hacia el exterior de estas regiones silenciadas, frecuentemente en la

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superficie de estos territorios. Existira un complejo de remodelamiento de la cromatina HuCHRAC localizado en la heterocromatina que facilitara el posicionamiento regular de los nucleosomas dentro de la heterocromatina permitiendo por lo tanto la formacin estable de la estructura de cromatina o bien la heterocromatina funcionara como un estanque de complejos protecos que son requeridos para reprimir la transcripcion de genes tales como histona desacetilasa y complejos de remodelacin de nucleosomas. Los dominios OPT (Oct/PTF/Transcripcin) son dominios

transcripcionalmente activos ricos en PTF, Oct1, TBP, SP1 y ARN polimerasa II. Estos dominios tienen 1 a 1,5 micrmetros de dimetro y adems de los factores de transcripcin, contienen tambin transcritos primarios en formacin. Cada ncleo de clulas de mamfero contiene de uno a tres dominios OPT que aparecen en G1, en estrecha proximidad al ncleolo, y desaparecen en fase S. Los dominios OPT aparecen asociados con una banda del brazo corto del cromosoma 6 (banda 6p10) y al cromosoma 7, por lo tanto estara asociado a genes especficos en estos cromosomas donde se concentran factores de procesamiento y transcripcin que facilitan la expresin de estos genes. La funcin precisa de estas estructuras nucleares es desconocida. Con el nuclelo adems comparten otro rasgo similar aparte de la asociacin con genes especficos, y es la de contener ARN polimerasas. El nuclelo contiene ARN polimerasa I que transcribe genes ribosomales. Los dominios OPT contienen ARN polimerasa II y III. Los dominios OPT y los nuclelos pueden aparecer prximos entre s en el ncleo, pero no se traslapan. Nucleoplasma propiamente tal contiene protenas nucleares difusas que no se encuentran presentes en los nucleolos como por ejemplo muchos factores de transcripcin con motivo dedos de zinc.

Miopatas mitocondriales. Las miopatas mitocondriales muestran a la microscopa electrnica mitocondrias de morfologa anormal como por ejemplo escasez de crestas dando a la mitocondria un aspecto vacuolar o bien apareciendo como remolinos formado panales al interior de la mitocondria. Estos cambios estructurales tienen repercusin en transtornos en el transporte de electrones o en la ATP sintasa.

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Peroxisomopatas. Los peroxisomas que presentan un malfuncionamiento son la causa de numerosas enfermedades genticas humanas causadas ya sea por la deficiencia en la actividad de alguna enzima, que por tanto bloquea una va metablica o bien por defectos en el transporte hacia la matriz del peroxisoma de los componentes de este compartimiento. Las vas metablicas principales que ocurren en la matriz del peroxisoma son: a) beta oxidacin de cidos grasos b) alfa oxidacin de cidos grasos c) sntesis de colesterol y varios isoprenoides d) sntesis de ter fosfolpidos e) biosntesis de cidos grasos poliinsaturados

Algunas de las enfermedades mejor descritas son las denominadas de acumulacin de cidos grasos de cadena muy larga como la Adenoleucodistrofa ligada al cromosoma X (X-ALD), que implica alteraciones en la va de la beta oxidacin de los cidos grasos, acumulndose en este caso cidos grasos saturados de 24 y 26 carbones. Se han descrito seis fenotipos distintos. Algunos de los cuales se caracterizan por una progresiva prdida de mielina cerebral, inicindose en la infancia, alrededor de los 3 a 10 aos, es una enfermedad muy severa, muriendo los nios que la padecen en dos o tres aos del inicio de los primeros sntomas. Todos los enfermos corresponden a nios que han heredado el gen defectuoso de su madre portadora sana. Hay otro fenotipo correspondiente a la enfermedad iniciada en la adolescencia entre los 10 y 21 aos de edad. Un tercer fenotipo corresponde a enfermas heterocigotas que desarrollan la enfermedad en la etapa adulta, muchas de ellas mal diagnosticados confundindose los sntomas con psicosis o esquizofrenia. El gen ald codifica una protena sintetizada en la va citoslica, ALD, semejante a una protena que forma el canal de cloruros cuyo defecto causa la fibrosis qustica, perteneciente a las denominados protenas ABC. La protena ALD es un semitransportador con seis dominios transmembrana que funciona como homodmero o heterodmero con otros transportadores ABC. Este transportador ALD est involucrado en el transporte de steres Coenzima A-C26:0 a travs de la

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membrana del peroxisoma, por lo que su defecto es causa de acumulacin de estos cidos grasos en la clula. Las personas que presentan la enfermedad XALD, tienen un gen alterado por mutaciones de distinta naturaleza tales como deleciones, inserciones y mutaciones de punto, lo que a nivel molecular puede manifestarse como ausencia total de la protena en la membrana del peroxisoma.

Laminopatas, como ejemplos de disfuncin patolgica del ncleo. Las laminopatas son enfermedades causadas por mutaciones en las lminas tipo A en diferentes procesos celulares, afectan principalmente los tejidos de origen mesodmico. Las lminas, estn directamente implicadas en procesos de divisin celular y apoptosis, principalmente porque la lmina debe desintegrarse a fin de permitir que transcurran estos procesos. Los niveles celulares, vale decir la concentracin de las lminas A/C estn directamente relacionadas con la actividad proliferativa de la clula. La expresin de las lminas es incrementada en clulas altamente diferenciadas, con el fin de mantener la estructura del ncleo, mientras que su expresin es disminuida en clulas con alta capacidad proliferativa. El gen que codifica para las lminas de tipo A (LMNA) produce por splicing alternativo cuatro protenas distintas que son lamina A, lamina Adel10, lamina C, lamina C2. Se ha demostrado en al menos nueve patologas, las mutaciones en este gen es responsable de la manifestacin de estas enfermedades. Entre ellas hay algunas de envejecimiento temprano como un caso atpico de Sndrome de Werner y la progeria de Hutchinson-Gilford. Hay algunas distrofas musculares, que se heredan en forma autosmica dominante como la distrofia muscular Emery-Dreifuss y la distrofia muscular cintura-piernas que presenta problemas de conduccin atrioventricular. La enfermedad de Charcot-Marie-Tooth tipo 2, una enfermedad autosmica recesiva que se manifiesta como una neuropata axonal.

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CAPITULO IV CICLO CELULAR, APOPTOSIS Y ENVEJECIMIENTO


Fidelina Gonzlez, Gabriela Sconzo, Giussepina Turturici, Fabiana Geraci, Giovanni Giudice Depto Biologa Celular. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad de Concepcin. Concepcin. Chile. Dipartamento di Biologia Cellulare e dello Sviluppo. Universit di Palermo. Palermo. Italia.

1. Ciclo celular. 1. Mitosis. 2. Meiosis. 3. Genes y control del ciclo celular. 4. Genes supresores y protooncogenes. 2. Ciclo celular y apoptosis. 1. Apoptosis versus necrosis. 2. Cambios morfolgicos. 3. Mitocondria y apoptosis. 4. Formacin del apoptosoma. Estructura del apoptosoma humano. 5. Caspasas. 3. Tipos de apoptosis. 1. Apoptosis mediada por el ligando Fas. 2. Apoptosis inducida por TNF (factor necrtico tumoral). 3. Apoptosis estimulada por linfocitos T citotxicos. 4. Apoptosis por disminucin de factores de crecimiento. 5. Lesin del ADN mediada por apoptosis. 4. Envejecimiento.

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DESARROLLO DE LOS TEMAS

Ciclo celular. Una de las propiedades de la materia viviente es la capacidad de autoreplicarse. La clula se reproduce duplicando su contenido y dividindose en dos. En los organismos multicelulares los ciclos de divisin celular se requieren para reemplazar las clulas que se pierden en forma natural, en los organismos unicelulares es la forma de aumentar el nmero de individuos de la poblacin, esto incluye a eucariontes y procariontes. Se puede definir el ciclo celular como una serie ordenada de eventos que culmina en la duplicacin celular. El rol del ciclo celular en eucariontes se puede resumir en los siguientes puntos: a) Aumento del nmero de clulas en un organismo. b) Reparacin de clulas que se han perdido en forma natural, incluyendo a aquellas que se pierden por apoptosis. c) Participacin en la diferenciacin y el desarrollo de los organismos. d) Forma de reproduccin de unicelulares.

Fases o etapas del ciclo celular. El ciclo celular est dividido en cuatro fases principales: G 1, S, G2 y M. Las fases G1, S, G2 son parte de la interfase y M corresponde a la mitosis. Fase G1. En esta etapa, la clula aumenta de tamao, incluyendo aumento de organelos, estructuras protecas y enzimas. Es una etapa caracterizada por una intensa actividad metablica. La clula aumenta el nmero de ribosomas y algunas estructuras como los elementos de citoesqueleto son sintetizados. Las estructuras membranosas (organelos) como los componentes de la va secretora: Complejo de Golgi, vacuolas y vesculas se forman a partir del retculo endoplsmico que aumenta de tamao por sntesis de protenas y lpidos

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generndose as nuevas membranas que migran como vesculas asociadas al citoesqueleto para formar las nuevas estructuras. Las mitocondrias tambin se duplican. Se inicia la duplicacin de los centrolos que culmina en la fase G2, donde se inicia la separacin de estas estructuras. La duracin de esta etapa es variable, y puede abarcar desde algunas horas a meses o aos. Las clulas que no se dividen como las clulas nerviosas o del msculo esqueltico entran en esta etapa a una etapa en la que permanecen debido a su diferenciacin celular que corresponde a G0. Los linfocitos, clulas que cumplen funciones de defensa celular se dividen en respuestas a ciertos estmulos, por lo tanto se dividen relativamente poco en comparacin a otras clulas, estos se encuentran en G. Al final de esta etapa se inicia la sntesis de las protenas necesarias para que ocurra la replicacin del ADN en la fase S. Fase S. En esta etapa se duplica el ADN y protenas asociadas. A medida que avanza el ciclo el ADN celular aumenta en cantidad hasta un mximo que corresponde al ADN nuclear completamente duplicado. En este momento hay dos cromtidas por cromosoma, y corresponden a las cromtidas hermanas. En la fase S hay una replicacin diferencial de la cromatina del ncleo. En primer lugar se duplica la eucromatina y en la fase final lo hace la heterocromatina. La duracin de la fase S se ha establecido en 7 a 8 horas en clulas de mamfero en cultivo. Fase G2. Durante esta fase continua el crecimiento celular y se sintetizan las protenas que participarn en la mitosis. Se terminan de formar los centrolos y al final empieza la separacin de estos, evento que culmina en la metafase donde conforma el eje de anclaje del huso mittico necesario para el movimiento de los cromosomas. Fase M. La mitosis se divide al menos en cuatro etapas que son: Profase, Metafase, Anafase y Telofase. Profase: se inicia con la condensacin (enrollamiento de la cromatina) para conformar los cromosomas. Cada cromosoma consta de dos cromtidas hermanas que se duplicaron en la fase S de la interfase. Las cromtidas

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permanecen unidas a travs del centrmero, que es requerido en lnafase para una adecuada segregacin o separacin de las cromtidas hermanas. Al final de la profase cada centrolo se mueve a los polos de la clula para conformar el huso mittico. El huso mittico es una estructura conformada por dmeros de tubulinas que conforman microtbulos como se vi en un captulo anterior. El huso se ensambla inicialmente por fuera del nucleo. A nivel celular los cambios observados en la clula en mitosis son un aumento de la viscosidad del citoplasma en general, desorganizacin de los organelos de la va secretoria, y al final de la profase vesiculacin de la envoltura nuclear. Estas vesculas permanecen visibles alrededor del huso mittico. El huso mittico empieza a crecer hacia el espacio nuclear. Alrededor del centrmero se organizan complejos protecos especializados denominados cinetocoros a los cuales se anclan las fibras del huso. Denominndose a estas fibras como fibras cromticas o cinetocricas a diferencia de aquellas que unen los polos de la clula como acromticas o polares. Las fibras cinetocricas ejercen traccin sobre los cromosomas. Metafase: Los microtbulos cinetocricos alinean los cromosomas en el plano ecuatorial de la clula. Cada cromosoma es sometido a tensin en la placa metafsica manteniendo a los cromosomas en el centro de la clula, conformando la placa metafsica, y conectado a travs del cinetocoro con el polo mediante las fibras del huso. Anafase: La anafase se inicia con la separacin de los centrmeros de los cromosomas a travs de la traccin que hacen las fibras del huso hacia los polos de la clula, logrndose la separacin de las cromtidas hermanas. Cada cromtida en los polos de la clula constituye un cromosoma que formara parte del nuevo ncleo y a partir del cual se replicar la informacin en la fase S del ciclo celular. La anafase es una de las etapas ms cortas de la mitosis. Telofase: La telofase implica el fin de la mitosis, las cromtidas hermanas separadas llegan a los polos y los cinetocoros desaparecen. Los microtbulos cinetocricos se elongan an ms y se reorganiza la envoltura nuclear alrededor de los cromosomas hijos. La cromatina se expande y reaparecen los nuclelos. La divisin del citoplasma denominada citocinesis o citoquinesis se inicia por un proceso denominado clivaje o formacin del surco de clivaje, inicindose durante la anafase. En las clulas animales la membrana celular de la mitad de la clula se invagina para formar una depresin de clivaje que se profundiza gradualmente

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entre los don ncleos hijos. En el lugar del surco de clivaje, se forma un anillo de actina contrctil perpendicular a las fibras del huso mittico.

Meiosis. La meiosis es una divisin celular especializada que ocurre en las clulas germinales dando origen a los gametos. En la meiosis hay dos divisiones celulares sucesivas sin duplicacin del ADN, esta ocurre slo antes de entrar a la meiosis. La obtencin del nmero haploide ocurre al final de la primera divisin meitica, cuando se separan los cromosomas homlogos apareados durante la Profase I. La importancia gentica de la meiosis en la variabilidad de la especie se puede resumir en lo siguiente: En el Paquinema de Profase I ocurre entrecruzamiento o croosing-over, que es el intercambio de segmentos de ADN entre cromtidas homlogas catalizado por ndulos de recombinacin que conforman el complejo sinaptonmico. En este proceso es cortado un fragmento de ADN de una cromtida homloga por la actividad nucleasa del ndulo y fusionado a su homloga por una ligasa procediendo luego a la correccin de posibles eventos de mal apareamiento de bases mediante polimerasas. El complejo sinaptonmico est conformado por dos elementos protecos laterales al que se sujeta cada cromtida homloga duplicada y uno central que sirve de nexo entre los elementos laterales. En Metafase I ocurre el evento de mxima recombinacin existente, y es la permutacin cromosmica, en este caso se ordenan al azar los cromosomas heredados de ambos padres, respecto a los polos de la clula. Las posibles combinaciones de los genomas haploides paternos y maternos alcanzan a ser en la especie humana de 2 , es decir entre 8 y 9 millones de combinaciones posibles. Tanto en Anafase I como en Anafase II ocurre la segregacin, de los cromosomas homlogos y de las cromtidas hermanas que han recombinado respectivamente.
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Los eventos que suceden en la Profase I se han dividido en 5 etapas: Leptonema: Los cromosomas homlogos en estado no condensado, unidos a la lmina perifrica nuclear a travs de los elementos protecos unidos a los telmeros (extremos del cromosoma) comienzan a migrar hasta encontrarse con su homlogo. Cigonema: Se inicia el apareamiento o sinapsis de homlogos con la aparicin de los elementos laterales unido a cada cromosoma homlogo unidos por el elemento central que hace de cierre del complejo sinaptonmico. Todo esto va a conformar finalmente una ttrada o bivalente. Paquinema: Las 23 ttradas o bivalentes en las clulas germinales humanas conforman las unidades en las cuales se llevar a cabo el entrecruzamiento o crossing-over entre cromtidas homlogas. Diplonema: Desorganizacin de las ttradas o bivalentes. En algunas especies en este perodo ocurre una profusa transcripcin de mensajeros y genes ribosomales, especialmente se ha comprobado en oocitos en formacin de insectos, donde se han descrito los llamados cromosomas plumulados, que transcriben genes ribosomales. Diacinesis: Terminalizacin de los quiasmas. Los quiasmas son los puntos del cromosoma donde ocurri entrecruzamiento, los cromosomas homlogos permanecen unidos por estos puntos durante algn tiempo hasta que estos se desplazan hacia los telmeros lo que permite finalmente su separacin. Luego de esto se inicia la condensacin o enrrollamiento de la cromatina. Control del ciclo celular. El ciclo celular. Puntos de control del ciclo celular. Los puntos de control del ciclo celular constituyen una forma de asegurar que una clula en divisin traspase copias exactas de sus genomas a la prxima generacin. Estas vas de vigilancia tienen como funcin detectar estructuras anormales o daadas del ADN, coordinar la reparacin del ADN y facilitar la progresin del ciclo celular, dando el tiempo suficiente para permitir los procesos de reparacin. As estos procesos retardan o detienen la progresin del ciclo celular momentneamente. Si no ocurre la reparacin la clula sufre apoptosis.

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Mecanismos de los puntos de control del ciclo celular. Estos mecanismos responden a seales que indican un mal

funcionamiento, y el ciclo celular se detiene. Hay tres puntos de vigilancia del ciclo: a) Punto de control de la fase S. En este punto hay control sobre el crecimiento celular. Una seal de no replicacin del ADN impide que se inicie la mitosis y el ciclo celular se arresta o detiene en S. b) Control G2/M. En este punto de control se verifica que el ADN se encuentre duplicado por lo tanto hay control sobre el aparato de replicacin del ADN, que el crecimiento celular sea el apropiado, hay control sobre el crecimiento celular. c) Punto de control de la metafase. Aqu hay control sobre el alineamiento de los cromosomas en el ecuador de la clula. Una seal que indique que el huso mittico no est correctamente ensamblado a los cromosomas, y que por lo tanto los cromosomas no se encuentran bien alineados en el ecuador de la clula, entonces se impide la anafase, y hay arresto en M.

Protenas de los puntos de control. Las vas de puntos de control implican tres grupos principales de protenas que actan en conjunto para traducir la seal de ADN daado en respuesta a la detencin o arresto del ciclo celular y reparacin del dao. Estos grupos incluyen: 1. Protenas sensoras que reconocen el dao del ADN directa o indirectamente y funcionan sealando anormalidades, e inician una cascada bioqumica de activacin. Estas protenas pueden ser clasificadas como: Parecidas o semejantes a RFC1: Rad17. Parecidas a PCNA: Rad9, Rad1, Hus1. Que contienen BRCT: BRCA1, Top BP1. Que reconocen o reparan DSB: Mre11, Rad50, Nbs1. Protenas de replicacin que reclutan polimerasas TopBP1.

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Polimerasas necesarias para la replicacin: Pol2. ADN helicasa: BLM, WRN. Topoisomerasa: Top3. Cargador de horquilla: Rfc2-5. Que se une al ADN hebra simple: Rpa2.

2. Protenas transductoras de las seales, tpicamente proten quinasas, que reciben la seal de dao y la amplifican, fosforilando otras quinasas o protenas blanco. PI3-quinasas (PIKK): ATR, ATM. Par de unin de PIKK: ATRIP. Quinasas efectoras: Chk1, Chk2. Estabilizadores de la horquilla de replicacin: Claspina.

3. Protenas efectoras que incluyen la mayora de los blancos de las protenas transductoras y as son reguladas, usualmente por fosforilacin, evitando la progresin del ciclo. El ciclo celular est regulado por dos vas distintas desde el punto de vista de la regulacin gnica: a) una va controlada por genes que actan normalmente frenando la divisin celular, correspondientes a los genes supresores de tumores y b) por genes que promueven la divisin celular que se denominan protooncogenes, que funcionan normalmente promoviendo la divisin celular.

Genes Supresores de tumores. Las mutaciones que afectan a los genes supresores de tumores y que produce inactividad de sus productos protecos o ausencia de ellos, las clulas proliferan de forma descontrolada.

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Se ha demostrado que variados casos de cncer que afectan a familias estn asociados a prdida de la funcin de tumores supresores causando sndromes. Un sndrome se define como el conjunto de signos o sntomas que se manifiestan en conjunto y que pueden asociarse a un origen o causa comn. Algunos de estos incluyen a los genes que producen los sndromes de susceptibilidad de retinoblastoma (RB), tumores de Wilms, neurofibromatosis tipo I, adenomatosis de plipos de colon, von-Hippel-Lindau, y aquellos identificados por la prdida de heterocigosidad tales como carcinoma colorectal (DCC, delecin del carcinoma de colon) y p53.

p53. La prdida de heterocigosidad en el brazo corto del cromosoma 17 ha sido asociada con tumores de pulmn, colon y mama. Esta regin incluye al gen p53. El gen p53 fue descubierto originalmente porque formaba complejos con algunos antgenos. Se pens en un comienzo que se trataba de un oncogn ya que clones de ADN copia (ADNc) aislados desde lneas tumorales eran capaces de cooperar con el oncogn Ras en ensayos de transformacin. En las lneas celulares normales, p53 es incapaz de cotransformar en presencia de ras. Las `protenas mutantes p53 se demostr que tenan alterada su estabilidad y conformacin as como su capacidad de unin a la chaperona hsp70. Anlisis posterior de varias lneas celulares de leucemia demostraron que el locus p53 se pierde por insercin o delecin de ambos alelos, lo que sugiere que el tipo silvestre es un supresor de tumores y no un protooncogn dominante. Se ha demostrado que la mutacin en el locus p53 es frecuente en varios tipos de neoplasias ms que cualquier otro gen supresor o protooncogn. La protena codificada por p53 es una fosfoprotena nuclear. Tiene un dominio cido en el extremo N-terminal, similar a muchos factores de transcripcin, que la define como un factor de transcripcin. La protena P53 es un tetrmero que se puede unir al ADN para promover la sntesis de otras protenas implicadas en la supresin del crecimiento celular. Una de las principales protenas blanco es la protena del gen p21, que es una protena inhibitoria del ciclo celular (denominada p21CIP) que da por resultado la detencin o arresto en las fases G1 y G2 del ciclo celular. Tambin se ha demostrado una funcin

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adicional de bloquear la unin de la ADN polimerasa del virus SV40, bloqueando la replicacin del ADN viral. Se sugiere que podra regular la iniciacin de la sntesis de ADN debido a su rol implicado tanto en la transcripcin como en la replicacin. Varias mutaciones en este gen dan por resultado clulas mutantes que tienen afectadas de distinta manera su ciclo celular. La fosforilacin regula la actividad de la protena p53. El nivel de p53 es bajo despus de la mitosis pero aumenta durante G1. Durante la fase S la protena es fosforilada por el complejo MPF y tambin por la casen quinasa II (CKII).

Retinoblastoma (RB). El locus del gen RB se ubica en el brazo largo del cromosoma 13 (13q14). Este gen ha sido identificado mediante la clonacin de un transcrito de 4,7 kb. El gen RB comprende 27 exones que promedian 180 kb en el cromosoma. Este gen tiene dos intrones de gran tamao, aproximadamente de 35 y 70 kb. El producto del gen es una protena de 110 kDa conformada por 928 aminocidos. Corresponde a una protena localizada en el ncleo. Existen muchas mutaciones que producen la prdida de la funcin del gen. La mayor parte corresponden a deleciones. Otro tipo de mutaciones corresponden a mutaciones de punto o errores de maduracin del transcrito primario. La principal funcin de pRB es la regulacin de la progresin del ciclo. Su capacidad de regular el ciclo celular est correlacionada con el estado de fosforilacin de pRB. La pRB es fosforilada por el complejo SPF, inactivando la funcin de la protena. La fosforilacin es mxima al inicio de la fase S menor despus de la mitosis y al inicio de la fase G1. La protena pRB fosforilada se encuentra presente en las fases S y G2/M, y no fosforilada en estado G y G1 del ciclo. La estimulacin de clulas quiescentes con sustancias que estimulan la mitosis (mitgenos) induce la fosforilacin de pRB, sin embargo, la diferenciacin celular es inducida por pRB no fosforilada. Por lo tanto la forma no fosforilada de RB suprime la proliferacin celular.

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Por lo tanto, la pRB puede ser parte del punto de control en G 1. En clulas en reposo G o G1 la pRB no est fosforilada y corresponde a la protena activa y detiene el paso a travs del ciclo celular. Slo antes que la clula entre a la fase S, pRB es modificada por fosforilacin correspondiente a la forma inactiva de la protena, permitiendo que la clula pueda hacer mitosis. La protena pRB est presente en todos los tipos de clulas y tejidos examinados hasta ahora y se encuentran en todos tipos de clulas tanto las que se encuentran en proliferacin como aquellas que estn en reposo y en todas las fases del ciclo celular, lo que cambia solamente es su estado de fosforilacin. A nivel molecular, pRB en el ncleo interacta con la protena EF2, un factor de transcripcin. Cuando la clula pasa de G1 a S el complejo SPF fosforila la pRB induciendo un cambio conformacional en la protena que induce la liberacin del factor EF2 de la pRB. As EF2 queda libre para transcribir genes que se necesitan para que el ciclo celular prosiga, participando incluso en su propia transcripcin. Por lo tanto, en clulas donde pRB no funciona a causa de mutacin, o est ausente, el factor EF2 no est regulado y permanece activo. Esto permite una expresin permanente de los genes necesarios para pasar a travs del ciclo celular, ocurriendo proliferacin descontrolada. En conclusin pRB es un gen supresor que es un punto de control importante entre ciclo celular y transcripcin de genes. En las formas de cncer familiar hereditario causado por pRB, los individuos que heredan una forma mutada del gen heredada de uno de sus padres, pueden sufrir una segunda mutacin somtico (en la lnea celular) que inactiva el alelo normal, dando por resultado el desarrollo del retinoblastoma.

Protooncogenes y Oncogenes. Los protooncogenes corresponden a genes que codifican protenas que estimulan la proliferacin celular, los oncogenes corresponden a mutaciones de los protooncogenes que pueden ser ms activos que los genes normales o ser activos en tiempo o de una forma no apropiada.

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Los protooncogenes juegan un rol importante en la regulacin del ciclo celular y la diferenciacin celular. Los protooncogenes se clasifican en varios tipos, estos pueden ser: Factores de crecimiento. Receptores de tirosin quinasa y serin-treonino quinasa. Receptores sin actividad quinasa. Protena G asociada a la membrana activada por receptores de superficie. Reguladores citoplasmticos. Factores de transcripcin nuclear.

Ciclo celular y apoptosis. Apoptosis. Apoptosis versus necrosis (Tabla 1). La apoptosis es una muerte celular controlada que mantiene los contenidos celulares de la clula muerta reciclndolos. Est definida por una serie de cambios celulares: Primero la clula se contrae, pierde contacto con las clulas vecinas o la matriz extracelular y comienza a mostrar protenas intracelulares en su superficie. La cromatina del ncleo se condensa y el ADN se rompe en fragmentos de 180 pares de bases, lo que lleva a la caracterstica escalera de ADN cuando se somete a un gel de electroforesis. La membrana plasmtica comienza a mostrar apariencia de burbujeo y pequeos cuerpos vesiculares se desprenden conteniendo el material intracelular que incluye material nuclear y organelos citoplasmticos, los que estn usualmente inalterados. Los fragmentos reciben el nombre de cuerpos apoptsicos o cuerpos apoptticos y son removidos rpidamente por fagocitos o por clulas vecinas. Si lo anterior no ocurriese rpidamente, la membrana plasmtica y los organelos intracelulares pueden romperse dando origen a la lisis de fragmentos, lo que se conoce como lisis secundaria.

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Necrosis es una muerte celular no controlada caracterizada por: la clula se hincha y se induce el dao mitocondrial que lleva a una rpida disminucin de los niveles de energa. una prdida del control homeosttico celular. lisis de la membrana celular y liberacin de los contenidos intracelulares, que lleva a una respuesta inflamatoria, con edemas y dao de las clulas circundantes. Los diferentes resultados de estas dos formas de muerte celular (apoptosis vs necrosis) sugieren que los dos procesos son necesariamente independientes uno de otro, pero no es as. Hay evidencias que demuestran que son procesos complementarios como los siguientes: En las neuronas cerebrocorticales se ha observado que breves exposiciones o bajas concentraciones de agonistas (agonista es una molcula que se une selectivamente a un receptor especfico y gatilla una respuesta en la clula) del receptor de glutamato causa que la clula entre en la va apopttica. Sin embargo, altas concentraciones del mismo agonista produce necrosis en la neurona. En la muerte celular por necrosis hay una declinacin rpida de los niveles de energa no vistas en la apoptosis y se ha demostrado de forma experimental que el ATP es esencial para que se desencadene la apoptosis. Las clulas pueden sufrir necrosis en respuesta a estmulos apoptticos debido a que los niveles de ATP se encuentran agotados. Por lo tanto, el tipo de muerte celular experimentada por la clula depende de la intensidad del dao, la duracin de la exposicin y la posicin espacial de la clula, como se ver ms adelante. La apoptosis, es un tipo de muerte celular programada, un proceso donde las clulas son eliminadas porque ya no se necesitan, como en el proceso de desarrollo, o porque su permanencia en el organismo es negativa, como en el caso que en la clula se originen mutaciones que afecten la homeostasis del organismo. La eliminacin de la clula se hace en forma ordenada, evitando la respuesta inflamatoria, que est asociada a la muerte necrtica. As, la apoptosis es un proceso celular altamente regulado e implica la activacin de una serie de eventos moleculares, que llevan a la muerte celular que

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se caracterizan por cambios bioqumicos y morfolgicos. El componente central de este proceso es un sistema proteoltico que implica a una familia de proteasas denominadas caspasas. Las caspasas son proteasas especficas cistena aspartato que activan y amplifican la seal en una cascada de caspasas. El efecto clivador de las caspasas culmina en la muerte celular.

Tabla 1. Comparacin entre apoptosis y necrosis. (Informacin obtenida del sitio www.qub.ac.uk/cm/pat/undergraduate/Basiccancer/necrosis_v_apoptosis.htm)
Apoptosis Fisiolgica o patolgica Clulas nicas Dependiente de energa (ATP) Contraccin celular Se mantiene la integridad de la membrana Rol de la mitocondria y del citocromo C No se rompen los lisosomas Cambios nucleares caractersticos Se forman cuerpos apoptticos Clivaje del ADN Activacin especficas Proceso regulado Proceso conservado evolutivamente Clulas muertas digeridas por clulas vecinas No es un proceso regulado No es un proceso conservado Clulas muertas ingeridas por neutrfilos y macrfagos de proteasas (caspasas) Necrosis Siempre patolgica Conjunto de clulas Independiente de energa Hinchamiento de las clulas Se pierde la integridad de la membrana No participa la mitocondria Se rompen los lisosomas y escapan las enzimas lisosmicas Prdida del ncleo No se forman cuerpos apoptticos No se produce clivaje del ADN No hay activacin de proteasas especficas

Caspasas. Las caspasas comparten similitudes en la secuencia de aminocidos, estructura y especificidad de sustrato. Son expresadas como proenzimas o zimgenos (30-50 kDa), que contienen tres dominios, uno N-terminal, seguido por una subunidad de 20 kDa y otra de 10 kDa. La forma inactiva inicial da paso a una forma activa capaz de clivar a otra caspasa para hacerla activa. Pueden ser

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divididas en dos grupos, las caspasas iniciadoras (caspasa-2, caspasa-8, caspasa-9 y caspasa-10) y las caspasas efectoras (caspasa-3, caspasa-6 y caspasa-7). Ambos grupos se distinguen estructuralmente, las iniciadoras contienen un gran motivo estructural de interaccin protena-protena en el extremo amino terminal, mientras que las efectoras tienen un motivo estructural muy pequeo o est ausente. La caspasa iniciadora una vez activada, activa a las caspasas efectoras en un patrn de cascada de seales. Las caspasas efectoras rompen las protenas de la clula dando por resultado las alteraciones bioqumicas y morfolgicas caractersticas de la apoptosis. Las funciones de las caspasas son las siguientes: 1. Arresto del ciclo celular e inactivacin de los sistemas de reparacin del ADN. 2. Inactivacin del inhibidor de la apoptosis (XIAP). 3. Desmantelamiento del citoesqueleto.

Vas de activacin de las caspasas. Hay cuatro vas en la activacin de las caspasas: 1. Va mediada por la mitocondria. 2. Va mediada por receptor apopttico. 3. Va mediada por Granzyma B. 4. Va mediada por el retculo endoplsmico.

Va mediada por la mitocondria. La mitocondria sufre dos cambios durante la apoptosis inducida por agentes neoplsicos, radiacin UV, agotamiento de factores de crecimiento y dao del genoma. Uno de estos cambios es el cambio de permeabilidad de la membrana externa, hacindose sta permeable a protenas, dando por resultado la liberacin de las protenas desde el espacio intermembrana, el citocromo C, el factor inductor de la apoptosis y otros. El otro cambio es la reduccin del potencial de transmembrana de la membrana interna.

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La mitocondria contiene un canal en su membrana interna denominado poro de permeabilidad transicional (PTP) que tiene dos estados de conductancia, bajo y alto. El PTP se abre en estado de baja conductancia cuando en la matriz mitocondrial disminuye el pH. Mediante el proceso de oscilacin del poro se reestablece el control homeosttico del calcio intracelular. Con el aumento de la concentracin del in calcio, la entrada de calcio a la mitocondria ocurre de forma lenta y prolongada. Esto no causa un aumento del pH, porque no es modulado por el sistema tampn en el interior de la matriz mitocondrial. La acumulacin del in calcio en la matriz lleva a la unin del calcio a los sitios orientados del PTP hacia la matriz. Cuando se unen dos iones de calcio, el poro se abre irreversiblemente por un estado de alta conductancia, permitiendo que molculas de tamaos menores a 1500 Da atraviesen el espacio intermembrana. As, la mitocondria tiene un rol fundamental en la muerte celular de la clula.

Poro de permeabilidad transicional (PTP). El poro de permeabilidad transicional se ubica en la membrana interna de la mitocondria, que se abre en estado de alta conductancia por aumento desmesurado de los niveles de calcio en la matriz mitocondrial. Esto da por resultado un equilibrio no selectivo de solutos de alta masa molecular. Debido a que la mayora de las protenas quedan atrapadas en la matriz hay un desbalance onctico (fraccin de la presin osmtica debido a la presencia de grandes molculas de protenas) que conduce a un notable hinchamiento del organelo in vivo. Como resultado las crestas mitocondriales se despliegan causando la ruptura de la membrana externa de la mitocondria. Esto ltimo lleva a la liberacin de solutos contenidos en forma normal en el espacio intermembrana, incluyendo al citocromo C y al factor que induce a la apoptosis (AIF). El citocromo C, es una pequea protena que participa en la cadena de electrones en la respiracin celular. En el citosol, el citocromo C activa a la caspasa 3. Mientras AIF activa directamente a la caspasa 3 y a endonucleasas. La inhibicin de la liberacin del citocromo C y la apertura de PTP es realizada por la protena antiapopttica Bcl2, que est localizada en la membrana externa de la mitocondria.

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Oscilacin del poro de permeabilidad transitoria mitocondrial. La mitocondria tiene un complejo proceso de almacenamiento de Ca ocurren en la mitocondria se puede resumir como sigue: La cadena transportadora de electrones es conducida por la mantencin del gradiente de protones. Esto causa la polarizacin de la membrana tal que la matriz es negativa respecto al citosol. Por lo tanto, el Ca
2+ 2+

liberacin de calcio inducida por calcio (CICR). La secuencia de eventos que

entra a la mitocondria a travs de uniportadores

transmembrana selectivos. La cadena respiratoria da cuenta de esta entrada de carga positiva sacando ms protones, dando por resultado la elevacin del pH que da por resultado la elevacin del pH que gatilla la apertura de otro canal, denominado poro de permeabilidad transitoria (PTP). Este poro permite la entrada de protones en la matriz que lleva al colapso de la diferencia de potencial y a la salida de Ca uniportadores y de PTP. La combinacin de la salida de Ca
2+ 2+

a travs de los

y entrada de protones vuelve a

acidificar la matriz y el cierre de PTP. La entrada de protones es por lo tanto detenida y la cadena respiratoria restablece el potencial de membrana, llevando a la acumulacin de calcio. La apertura y cierre de PTP se denomina oscilacin del poro. La apertura del canal no es directamente dependiente de los niveles de calcio, sino del pH de la matriz. La matriz tiene un sistema tamponado debido a la concentracin de cidos dbiles que sustenta al ciclo de Krebs. Es una accin relativamente lenta y por lo tanto no puede tamponar exitosamente un gran volumen de cationes que entra a la mitocondria. Esta caracterstica permite que el almacenamiento de calcio tenga lugar cuando la liberacin es lenta, y el CICR (del ingls, significa liberacin de calcio inducido por calcio) ocurre cuando la liberacin es rpida. El pH umbral in vivo de la apertura de PTP slo es alcanzada en una neurona en estrecha asociacin con los canales que liberan calcio en el retculo endoplsmico y por lo tanto acta para estimular la sealizacin intracelular en estos sitios y acoplar el aumento de la actividad neuronal con el aumento de la respiracin.

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Otro efecto de la apertura de PTP es la prdida de polaridad, lo que desacopla la fosforilacin oxidativa y la disminucin de los niveles de ATP. Por lo tanto, la gliclisis debe suplir los requerimientos energticos de la clula, que incluye las bombas inicas de la membrana plasmtica. La ATP sintetasa mitocondrial revierte su accin en un intento de restablecer el gradiente de protones y as reponer los niveles de energa celular. Una de las consecuencias extremas de disminucin severa del ATP en la clula, ocurre en la muerte necrtica de neuronas.

Ejemplos de respuesta gradual de los niveles intracelulares de calcio se dan en lo siguiente: Si el in calcio se encuentra levemente elevado en una clula, la gliclisis puede aportar energa para mantener la clula hasta que se recupere la mitocondria y la clula podra llegar a sufrir apoptosis.

Sin embargo, si los niveles de in calcio son demasiado elevados, la deplecin del ATP no es suficiente para sustentar la apoptosis y la clula se necrosa. La liberacin del citocromo C lleva a la formacin de un complejo

heptamrico semejante a una rueda de carreta denominado apoptosoma (Figura 1). Este es un complejo de alto peso molecular compuesto por citocromo C, Apaf1, desoxiadenosina trifosfato y procaspasa-9, que forma una plataforma para un eficiente procesamiento y activacin de la caspasa-9. La caspasa-9 tiene un dominio de reclutamiento asociado a caspasa (CARD) en el N-terminal, que se une a citocromo C y APAF-1. La activacin de la caspasa-9 cliva las caspasas efectoras caspasa-3, caspasa-6 y caspasa-7. La desregulacin de esta va lleva a condiciones patolgicas que incluyen cncer, autoinmunidad y neurodegeneracin.

Va del receptor apopttico. La va del receptor apopttico implica a receptores de membrana miembros de la superfamilia del receptor del factor de la necrosis tumoral (TNFR), de los cuales Fas y TNFR son los mejores caracterizados y comparten un dominio caracterstico denominado dominio apopttico (DD). Luego de la asociacin de los receptores con los ligandos se produce un cambio conformacional en el receptor, luego se recluta una molcula adaptadora, Fas asociado al dominio apopttico

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(FADD) o TNF asociado al dominio apopttico (TNFADD), junto a procaspasa-8 (y probablemente caspasa-10) forman el complejo de sealizacin inductor de la apoptosis (DISC), desencadenando as el proceso apopttico. La caspasa 8, la forma activa, acta como una proteasa que acta sobre la procaspasa 3, que en su forma activa, la caspasa 3, es el principal efector caspasa de la apoptosis. Tanto la va mitocondrial como la va del receptor desembocan en la caspasa-3 activa. La caspasa-3 entonces puede clivar una serie de protenas tales como PARP, una enzima reparadora de ADN, las lminas nucleares, protenas componentes del citoesqueleto (gelsolina y fodrina). Las dos vas apoptticas pueden estar vinculadas a travs de Bid, un miembro de la familia Bcl-2, que se encuentra en el citosol y es clivado por la caspasa 8 para formar una protena truncada, tBid, que se traslocara a la mitocondria. En la mitocondria, tBid activa a Bax, iniciando la liberacin del citocromo C y la disfuncin mitocondrial. Esta alternativa es una conexin entre la va apopttica del receptor y de la mitocondria que puede amplificar la activacin de la caspasas.

La va del retculo endoplsmico. Como ya se vi en el captulo III, el retculo endoplsmico es el sitio de ensamble de los polipptidos destinados a la va secretora. Cuando la clula es expuesta a estrs por agentes tales como la tunicamicina, un inhibidor de la Nglicosilacin en el retculo endoplsmico y la brefeldina A, un inhibidor del transporte retculo endoplsmico- Golgi, las protenas no plegadas o mal plegadas se acumulan en el retculo endoplsmico. En esta va, la caspasa 12, localizada en la cara citoplasmtica del retculo endoplsmico es la caspasa iniciadora que para ser activada debe ser clivada por la protena cistena proteinasa m-calpaina, pasando de la forma procaspasa-12 a caspasa-12 en condiciones de estrs. La caspasa 12 tambin tiene un dominio de reclutamiento, como la caspasa-9 que sirve para formar el complejo apoptosoma. As la caspasa-12 puede ser activada por su asociacin con una protena semejante a Apaf-1. En la va del retculo endoplsmico, JNK es traslocado en la membrana mitocondrial y estimula la fosforilacin de Bim, una protena Bcl-2, que a la vez es crtica para la liberacin del citocromo C dependiente de Bax. Una protena Bcl-2 marcada al retculo endoplsmico, Bcl-2/cb5, inhibe la liberacin del citocromo C mediado por estrs del retculo endoplsmico.

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Va mediada por granzyma. Los linfocitos citotxicos, como las clulas asesinas y los linfocitos T citotxicos juegan un rol esencial en la disminucin de las clulas infectadas por virus y las clulas tumorales. Hay dos mecanismos de citotoxicidad usados por estas clulas que incluye la va apopttica mediada por Fas y la exocitosis granular o vesicular. En este ltimo proceso se requieren dos protenas, la perforina, una protena que forma poros y facilita la liberacin de los componentes granulares en las clulas blanco, y la otra protena es la granzyma B, una serina proteasa con especificidad de sustrato similar a la familia de las caspasas. La granzyma B puede inducir la muerte celular en clulas blanco por medio de dos vas complementarias: una va citoslica que implica la activacin de caspasas proapoptticas y una va nuclear que implica a una protena reguladora del ciclo y/o activacin de la quinasa Cdc2. Una vez que los linfocitos T citotxicos liberan la granzyma B, esta se une a su receptor en la clula blanco y en endocitada, pero permanece arrestada en las vesculas endocticas hasta que es liberada por la perforina. Una vez en el citosol de la clula blanco la granzyma acta sobre la caspasa-3, a travs de la mitocondria, iniciando la cascada de las caspasas hasta la fragmentacin del ADN y la apoptosis. Aqu la granzyma necesita de la ayuda de otras molculas para procesar la procaspasa-3 a caspasa-3, como el citocromo C, Smac/Diablo y Htra2/omi que son liberados de la mitocondria.

Formacin del apoptosoma: Estructura del apoptosoma humano (Yu et al 2005) (Figura 1). El apoptosoma es un conjunto de protenas que participan en la apoptosis formando una estructura supramolecular. El coensamble de Apaf-1 y citocromo C en presencia de dATP conforman el apoptosoma que se ha determinado mediante criomicroscopa electrnica. En el apoptosoma hay un dominio de reclutamiento de siete caspasas que forman un dominio de un anillo central denominado con la sigla CARDs. En un radio mayor se observan siete copias de un dominio de unin de nucletidos y oligomerizacin denominado con la sigla NOD, asociado lateralmente al centro rodeando el anillo CARD, finalmente un dominio helicoidal semejante a brazos une a cada NOD a un par de aspas que unen un citocromo C. La plataforma central crea un ambiente para la activacin de la procaspasa-9.

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Vas apoptticas. Se pueden distinguir dos vas apoptticas, dependiendo de donde emerja la seal de apoptosis, externa a la clula, la va extrnsica o desde el interior de la clula la va intrnsica.

La va extrnsica se inicia en el exterior de la clula, cuando las condiciones del ambiente extracelular determinan que una clula debe morir. Es mediada por receptores que se ubican en la membrana plasmtica. Estos receptores son protenas integrales de membrana de la familia de los receptores apoptticos como el receptor Fas (CD95), el receptor TNF (factor de necrosis tumoral), etc.

Figura 1. Modelo del apoptosoma humano (Yu et al 2005). (Con permiso de la editorial)*

La va intrnsica se desencadena cuando el dao ocurre en el interior de la clula. Un dao en la mitocondria puede producir el inicio de la va intrnsica. El dao puede producir necrosis y con esto llevar consigo una respuesta inflamatoria,

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pero en su lugar la maquinaria apopttica asegura que las clulas sean eliminadas limpiamente, a fin de evitar la inflamacin. El dao mitocondrial puede iniciar la va intrnsica regulando el efecto de la protena Bcl-2. En esta va participa el citocromo C de la mitocondria, que tiene como funcin ser lanzadera de electrones en la cadena respiratoria. El citocromo C liberado de la mitocondria daada une Apaf1, que entonces activa a las capasas iniciadoras en este caso caspasa 9 que luego activa a las caspasas efectoras, caspasa 3. Otras protenas liberadas de la mitocondria daada son Smac/DIABLO y Omi/HtrA2 que contrarrestan el efecto de protenas inhibidoras de la apoptosis (denominadas con la sigla IAPs) que normalmente se unen y evitan la activacin de la caspasa 3. La interaccin entre miembros de la familia Bcl, IAPs, Smac/DIABLO y Omi/HtrA2, es el centro de la va intrnsica de la apoptosis.

Envejecimiento. El proceso de envejecimiento implica un proceso de post- maduracin que conduce a una reducida homeostasis y aumento de la vulnerabilidad del organismo, el trmino ms adecuado es senescencia. El envejecimiento se refiere a cualquier proceso que es dependiente del tiempo. Este proceso implica cambios fisiolgicos a nivel organsmico, e implica a factores intrnsicos que son de naturaleza gentica y del desarrollo y a factores estocsticos de naturaleza extrnsica. El proceso de envejecimiento en mamferos implica al menos 5 caractersticas: a) Aumento de la mortalidad con la edad posterior a la maduracin. b) Cambio en la composicin bioqumica de los tejidos con la edad. A nivel celular aumentan los niveles de lipofucsina (pigmento) y aumento del entramado de colgeno en la matriz extracelular. Aumenta la tasa de transcripcin de genes especficos y la tasa de sntesis proteca y numerosas alteraciones en relacin con la edad como la adicin de glicanos y oxidacin de las protenas como modificacin post-traduccional. c) Progresiva disminucin de la capacidad fisiolgica con la edad. A nivel de rin por ejemplo, disminuye la filtracin del glomrulo. d) Capacidad reducida de responder adaptativamente a los estmulos ambientales

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con la edad. Una caracterstica fundamental de la senescencia es la disminucin de la capacidad de homeostasis. e) Aumento de la susceptibilidad y vulnerabilidad a enfermedades.

Teoras del envejecimiento. Estas teoras se pueden agrupar en dos categoras: Estocsticas y Gentico-desarrollo. Las teoras estocsticas proponen que el envejecimiento es causado por dao producido al azar en las molculas que son importantes para la vida. El dao se acumula a un nivel que da por resultado la declinacin fisiolgica del organismo. Las teoras estocsticas pueden ser resumidas en cuatro categoras: a) Mutaciones somticas y reparacin del ADN. La teora de la mutacin somtica del envejecimiento establece que el dao gentico producido por radiaciones produce mutaciones que se acumulan con el tiempo causan dao funcional al organismo llevndolo a la muerte. La exposicin a radiaciones ionizantes conducen al acortamiento del promedio de vida por aumento del cncer ms que por envejecimiento per se. La teora de reparacin de ADN es un ejemplo ms especfico de la teora de mutacin somtica. Corresponde a la capacidad de reparacin de dao al ADN inducido por radiacin ultravioleta. La capacidad de reparar el ADN no cambia con la edad. b) Error- catstrofe. La teora error catstrofe propone que errores al azar en la sntesis de protenas que participan en la sntesis de ADN pueden ocurrir. El proceso de recambio de protenas elimina estas protenas reemplazndolas por otras sin errores. Sin embargo, errores en las protenas implicadas en la sntesis proteca introduciran errores en las molculas que producen, lo que dara por resultado la amplificacin y posterior acumulacin de molculas defectuosas dando por resultado una catstrofe incompatible con la vida. c) Modificacin de protenas. El envejecimiento es acompaado por disminucin de la actividad especfica de muchas enzimas, estabilidad alterada a la

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temperatura y aumento del contenido de carbonilos en las protenas. Estos cambios pueden ser causados por oxidacin directa de residuos de aminocidos, oxidacin catalizada por metales, modificacin por los productos de la oxidacin de lpidos y glicosilacin. Esta glicosilacin no es mediada por enzimas dando origen a una avanzada glicosilacin de productos finales, denominados AGEs que aumentan con la edad y que estn implicados en la diabetes, desrdenes visuales y acumulacin de amiliodes. El aumento del entramado del colgeno en la matriz extracelular impide la adecuada comunicacin intercelular debido a un entorpecimiento en la difusin de molculas esenciales. e) Radicales libres (estrs oxidativo)/ ADN mitocondrial. Se ha propuesto que la mayor parte de los cambios producidos en el envejecimiento se debe a dao molecular producido por radicales libres. Los radicales libres son molculas que contienen un electrn no apareado, lo que hace que la molcula sea altamente reactiva. El metabolismo aerbico genera radicales superxidos que son metabolizados por superxido dismutasas para transformar el agua oxigenada en agua y oxgeno. El agua oxigenada puede dar origen a un radical extremadamente activo como es el hidroxilo. El peligro de los radicales libres es que originan reacciones en cadena que atacan macromolculas y a la vez generan nuevos radicales libres, amplificando su efecto nocivo. Los radicales libres derivados de oxgeno juegan un rol en la regulacin de la expresin diferencial de genes, replicacin celular, diferenciacin y muerte celular por apoptosis debido a que en parte actan como mensajeros secundarios en las vas de transduccin de seales. La sobreexpresin de superxido dismutasas y catalasas, enzimas detoxificantes de radicales libres en la clula en organismos transgnicos lleva a un aumento del promedio de vida en estos. La hiptesis ADN mitocondrial / estrs oxidativo representa una sntesis de varias teoras: se propone que las especies de oxgeno reactivas contribuyen significativamente la acumulacin somtica de mutaciones en el ADN mitocondrial llevando a la prdida gradual de la capacidad bioenergtica dando origen a la muerte celular y envejecimiento. Se ha observado el aumento exponencial de mutaciones de punto y deleciones en el ADN mitocondrial en las mitocondrias del msculo esqueltico y en las clulas somticas con la edad. Esto aparejado con el hecho que la mitocondria carece de mecanismos de reparacin del ADN.

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En comparacin con el ADN nuclear, el ADN mitocondrial est sujeto a una mayor tasa de mutacin que el nuclear porque su tasa de replicacin es mayor tanto en clulas en divisin como en aquellas que no se dividen y adems porque es en la mitocondria donde se genera la mayor cantidad de radicales libres por efecto de la respiracin celular. Defectos en la respiracin mitocondrial asociada con la edad se ha encontrado en tejidos normales y especialmente en aquellas personas que sufren enfermedades de Parkinson, Alzheimer, corea de Huntington. Las teoras Gentico-Desarrollo consideran que los procesos de envejecimiento son parte de un continuo controlado del desarrollo y la maduracin. Es un programa gentico que forma parte del desarrollo. Pueden ser resumidas en seis puntos:

a) Genes de longevidad. Hay una amplia evidencia que el envejecimiento es hereditario. Las mutaciones genticas pueden modificar la senescencia. Los productos de estos genes que modifican la senescencia actan en diversas formas: modulando la respuesta al estrs. sensando en estatus nutricional. aumentando la capacidad metablica. silenciando genes que promueven el envejecimiento. En Caenorrhabditis elegans se han descrito algunos genes que modifican la respuesta al estrs, intervienen en el desarrollo, en la transduccin de seales y la actividad metablica estos son: age-1 modifica la tasa de envejecimiento. daf-2 y daf-3 retrasa el envejecimiento. spe-26 reduce la fertilidad. clk-1 altera el reloj biolgico.

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Otros genes que afectan el envejecimiento, ejemplo, el gen daf-16, un regulador transcripcional, expresado en hepatocitos. La protena de este gen da resistencia a la luz UV y aumenta la longevidad. Acta sobre el gen daf-2 que codifica un miembro de la familia de los receptores de insulina. La longevidad en mamferos depende del sistema inmune. El gen p66 (shc) mutado incrementa la resistencia a estrs oxidativo y aumenta la longevidad en 30%.

b) Sndromes que aceleran el envejecimiento. Algunos sndromes de envejecimiento acelerado en humanos como el sndrome de Werner, sndrome de Down, sndrome de Hutchinson-Gilford. El sndrome de Werner es de tipo recesivo autosmico, ubicado en el cromosoma 8 que codifica helicasa, una enzima que desestabiliza la doble hlice antes que se inicie la duplicacin del ADN. Algunos de los sntomas observados en estas personas son intolerancia a la glucosa, osteoporosis, prdida del pelo, menopausia precoz, tumores sarcomatosos, cataratas, atrofia de la laringe, aterosclerosis, atrofa de la piel.

c) Neuroendocrina. La teora neuroendocrina propone que los decrementos funcionales en las neuronas y las hormonas asociadas son parte central del envejecimiento. Una importante versin de esta teora sostiene que el eje hipotlamo-pituitaria-adrenal es el regulador maestro del envejecimiento de un organismo. Esto es debido a que el sistema neuroendocrino regula el desarrollo temprano, el crecimiento, la pubertad, el control de los sistemas reproductores, el metabolismo y otros aspectos de la fisiologa normal, los cambios funcionales de este sistema ejercen efectos en todo el organismo.

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d) Inmunolgica. La teora inmunolgica del envejecimiento se basa en dos puntos: La capacidad funcional del sistema inmune declina con la edad, lo que es evidente en la disminucin de la respuesta de los linfocitos T a mitgenos y menor resistencia a enfermedades infecciosas. La autoinmunidad aumenta con la edad con el aumento de autoanticuerpos en el plasma sanguineo. Hay un aumento de la proporcin de las clulas T de memoria.

e) Senescencia celular. Algunas de las caractersticas mostradas por las clulas senescentes son las siguientes: menor respuesta a mitgenos. respuesta distinta en clulas jvenes en cultivo a factores de crecimiento. telmeros ms cortos e inestabilidad cromosmica. Se debe sealar que la funcin de los telmeros en la clula es muy importante. Los telmeros son estructuras de nucleoprotenas localizadas en los extremos de los cromosomas que son necesarios para mantener la estabilidad del cromosoma. En la mayor parte de los organismos el ADN telomrico consta de secuencias repetitivas ricas en G que termina en un corto trecho de secuencias de ADN repetitivas ricas en guanina formando un asa. En los mamferos el asa puede invadir una regin ms proximal de los telmeros para formar una regin D-loop conocido como T-loop. Las protenas funcionalmente importantes asociadas a los telmeros son incorporadas a los telmeros a travs de interacciones ADN-protena y protenaprotena. Tanto el ADN como las protenas componentes del telmero son esenciales para mantener la estabilidad del cromosoma. En cada ronda de divisin celular se produce acortamiento de los cromosomas debido al problema de replicacin de los extremos del cromosoma. El telmero acta como reloj biolgico que detiene la divisin celular y causa el envejecimiento.

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Hasta ahora se han identificado dos mecanismos compensatorios que contrarrestan la perdida del telmero:

1) Adicin de nucletidos a la hebra rica en G de los telmeros por la accin de una transcriptasa inversa denominada telomerasa. La telomerasa es una ribonucleoprotena que consta de una unidad cataltica proteca denominada TERT y un molde de ARN. En algunas clulas cncerosas y las clulas reproductivas tienen telomerasa activa que evita el acortamiento del telmero y es uno de los factores que las clulas cancerosas aumenten en nmero sin control. En las levaduras Saccharomyces cerevisiae, el complejo que conforma la telomerasa est constitudo por dos subunidades Est1p y Est3p, ambas necesarias para la extensin del telmero. Est1p tiene la funcin de reclutamiento del complejo de la telomerasa en los extremos de los telmeros interactuando con la protena Cdc13p, que tiene funcin activante.

2) Por recombinacin. En aquellas clulas con deficiencia de telomerasa, la prdida de la telomerasa es acompaada por acortamiento progresivo del telmero y senescencia (envejecimiento). Las pocas clulas que sobreviven es porque son capaces de activar un mecanismo basado en la recombinacin que les permite alargar el telmero. La protena p53 se une con mayor frecuencia al ADN en clulas envejecidas que en clulas ms jvenes. Las protenas p16 y p21 estn sobreexpresadas en clulas envejecidas, ambas protenas impiden la progresin del ciclo celular, manteniendo la clula en la etapa G1 de la interfase, los ciclos celulares se detienen. La interrupcin del aumento de concentracin de p21, evita el envejecimiento de fibroblastos en cultivo.

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f) Muerte celular. Mutaciones que afectan la estabilidad del genoma: Protena p53 es esencial para el punto de control que detiene el ciclo celular en la etapa G1 de la interfase, en clulas que tienen daado el ADN. Si hubiera replicacin celular se perpetuara la mutacin. La protena p53 es un factor de transcripcin que induce la expresin del gen p21, una protena que es un inhibidor del complejo cdkc- G1 50% de casos de cncer humanos se deben a dao en la protena p53. Esta protena es un tetrmero. Existe otra protena expresada en tumores, la protena MDM2 (en ingls, murino doble diminuto), que inhibe la capacidad de la p53 de controlar la proliferacin de tumores. La protena MDM2 se fija al extremo N-terminal de p53, por lo tanto se impide la transcripcin del gen p21. Existe en pacientes que sufren el sndrome de Li-Fraumeni que son heterocigotos para el gen p53, los fibroblastos en cultivo pierden el alelo normal para el gen p53, resultando homocigotos para el defecto, por lo tanto no expresa el gen p21 y envejecen de igual forma que los pacientes normales, por lo tanto, el envejecimiento no depende de p53. Sin embargo, el producto del oncogen ras induce la senescencia que es acompaada por acumulacin de las protenas de los genes p53 y p16. * Agradecimientos: Agradecemos al autor y a la editorial la facilitacin de la figura 1 para la publicacin en este captulo.

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Referencias. Troen BR. 2003. The biology of aging. The Mount Sinai Journal of Medicine 70 (1): 3- 22. Yu X, D Acahan, JF Menetret, CR Booth, SJ Ludtke, SJ Riedl, Y Shi, X Wang, CW Akey. 2005. A structure of the human apoptosome at 12.8 A resolution provides insights into this cell death platform. Structure 13: 1-10.

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CAPITULO V MATERIAL CROMOSMICO Y FORMAS DE ESTUDIO


Fidelina Gonzlez. Depto Biologa Celular. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad de Concepcin. Concepcin. Chile.

Como se ha visto en un captulo anterior en el ncleo reside la informacin gentica diploide proveniente de los padres (de la madre y el padre) y en la mitocondria la informacin gentica haploide heredada maternalmente. Esta informacin es expresada en diferentes etapas de la vida del organismo y de esta informacin depende que un ser humano sea completamente sano. Hay varios niveles en los cuales se puede detectar alteraciones en la organizacin de la informacin gentica. Estas alteraciones pueden ser a nivel de nmero o forma de los cromosomas metafsicos u ordenacin de los genes en los cromosomas. Tambin podemos tener defectos en la secuencia de nucletidos en un gen lo que da por resultado un producto alterado, que puede ser una protena que ha perdido total o parcialmente su funcin. En la actualidad hay varias formas de detectar estas variaciones en el genoma. A nivel de cromosomas, se puede confeccionar cariotipos. A nivel de genes existen marcadores asociados a los genes de inters.

Confeccin de cariotipos. Cariotipo: ordenamiento de los cromosomas de una placa metafsica fotografiada luego de ser teidos con Giemsa u orcena actica. Ambas tinciones tien uniforme a los cromosomas. Este ordenamiento se hace emparejando los cromosomas homlogos de acuerdo al tamao y posicin del centrmero. Se denomina al brazo por sobre el centrmero, brazo corto y se le asigna la letra p (del francs ptite) y brazo largo por debajo del centrmero, asignndose la letra q. Es un ordenamiento decreciente de acuerdo al tamao. A cada par de cromosomas que ha sido puesto en orden de acuerdo a los criterios sealados se les asigna un nmero con el cual se identifica. Se emparejan los autosomas y luego los cromosomas del par sexual.

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Un ordenamiento ms preciso de los cromosomas implica el uso de tcnicas de bandeo cromosmico, los cromosomas homlogos muestran el mismo patrn de bandeo. Se definen las bandas como regiones del cromosoma que se tien ms intensamente que otras. Estas sirven de referencia para ubicar los genes en los cromosomas, lo que ha sido empleado en el Proyecto Genoma Humano.

Patrones de bandeo cromosmico. Bandas G. Son aquellas bandas que se visualizan al ser tratados con calor o con enzimas proteolticas para digerir parcialmente las protenas cromosmicas y posteriormente teir con el colorante Giemsa. Las bandas G estn conformadas por secuencias ricas en desoxiAdenosina y desoxiTimidina. El cariotipo humano tiene alrededor de 300 bandas G, es decir en los cromosomas metafsicos existe este nmero de bandas G. Cabe sealar que en los cromosomas profsicos se han identificado alrededor de 2000. Ayudan a diferenciar constricciones primarias (centrmero) o secundarias (regiones organizadoras del nuclelo, NOR). Bandas Q. Son regiones que se tien con quinacrina, colorante que se une preferentemente a regiones ricas en AT, son visualizadas con microscopa de fluorescencia. Bandas R. Corresponden a bandas reversas, y dan el bandeo inverso a bandas G o Q. se obtienen a travs del tratamiento de los cromosomas con lcali a 80-90C y posterior tincin con Giemsa o fluorescencia. Bandas C. Permite reconocer la ubicacin de la heterocromatina centromrica, la regin organizadora del nuclelo y la porcin distal del cromosoma Y. La tcnica implica un tratamiento con hidrxido de sodio y posterior tincin con Giemsa. Polimorfismo cromosmico humano. Un cariotipo humano se caracteriza por presentar 23 pares de cromosomas, de los cuales 22 pares corresponden a autosomas y un par sexual. Por ser diploide, la especie humana tiene dos cromosomas en un par de

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homlogos, siendo en nmero haploide de 23 y el diploide de 46 comosomas. El cariotipo de un hombre normal tiene 22 pares de autosomas y un par sexual conformado por un cromosoma X, que hereda de la madre y un cromosoma Y que hereda del padre. Una mujer normal por su parte tiene tambin 22 pares de autosomas y dos cromosomas X en el par sexual, uno heredado del padre y el otro de la madre. En las diferentes lneas celulares somticas de la mujer en el transcurso del desarrollo se inactiva al azar uno de los cromosomas X, dando origen a un cuerpo que es posible ser visualizado al microscopio ptico al ser teido adecuadamente y que corresponde al cromosoma X inactivado que se encuentra profusamente condensado al que se le denomina cuerpo o corpsculo de Barr. Las clulas somticas del varn no presentan este corpsculo. Alteraciones en el nmero de cromosomas en el cariotipo se denominan aberraciones cromosmicas y corresponden a mutaciones. Ejemplo de esto podemos mencionar a alteraciones en autosomas como el sndrome de Down. En este caso se presentan 3 cromosomas 21 en lugar de 2, dando origen a una trisoma 21.
Figura 1. Cromosoma 7 de un cariotipo humano mostrando el bandeo del cromosoma 7 y la ubicacin del gen que codifica para la fibrosis qustica. A la derecha se muestra la delecin que es la mutacin responsable de un tipo de fibrosis qustica. Esta delecin de 3 desoxinucletidos produce una lectura en la protena carente de la fenilalanina en la posicin 508 del canal de cloruros. (Tomado de Welsh J & Smith AE. 1996. Fibrosis qustica. Investigacin y Ciencia, Febrero: 16-24).

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Aberraciones que implican a los cromosomas sexuales como ejemplo mencionaremos a continuacin: sndrome de Turner que afecta a mujeres que tienen un solo cromosoma X, siendo su frmula cromosmica de 22 autosomas + X0 y el sndrome de Klinefelter que afecta a hombres que tienen cromosomas X supernumerarios, su frmula cromosmica puede ser 22 autosomas + XXY; 22 autosomas +XXXY; 22 autosomas + XXXXY. En estos casos las clulas somticas de estos hombres tienen uno o ms corpsculos de Barr, dependiendo del nmero de cromosomas X presentes en las clulas, en el caso del sndrome de Turner, no hay corpsculo de Barr.

Ubicacin de un gen en un cromosoma. La ubicacin de un gen en un cromosoma se denota con la siguiente nomenclatura Ejemplo el gen de la fibrosis qustica se encuentra ubicado en el brazo largo del cromosoma 7, entre las bandas o subregiones 2 y 3 de la regin 31 del cromosoma 7, entonces se denota como 7q31.2-q31.3 De manera experimental se puede localizar una regin especfica de un cromosoma mediante la tcnica de hibridacin ADN-ADN que consiste en realizar una hibridacin in situ sobre una placa metafsica obtenida desde un cultivo de linfocitos con una sonda de ADN marcado ya sea con marca fluorescente. Esta tcnica tiene el acrnimo FISH (hibridacin fluorescente in situ).

Secuenciacin del ADN. El Proyecto Genoma Humano iniciado a mediados de los aos 90 tuvo como objetivo conocer la secuencia de los genes humanos, con el fin de conocer de forma exacta el origen a nivel de informacin gentica los defectos que promueven la aparicin de enfermedades. Con el uso de la reaccin de la ADN polimerasa de origen procarionte en cadena (PCR) y la construccin de secuenciadores automticos se ha dado gran impulso a este conocimiento. La secuenciacin tiene como objetivo conocer el ordenamiento de la secuencia de nucletidos de un gen, y por lo tanto proporciona informacin sobre la organizacin de los genes y los sucesos mutacionales que

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alteran los genes y sus productos gnicos. La secuencia alterada de un gen puede producir una protena defectuosa porque su estructura est alterada, y por lo tanto no puede cumplir con la funcin que normalmente desarrolla en el organismo. Adems, estos estudios han llevado a la dilucidacin de la secuencia de regiones reguladoras no codificantes necesarias para conservar la homeostasis de la clula.

Anlisis de PCR. La reaccin en cadena de la polimerasa ha permitido adems disponer de cantidades mayores de un fragmento especfico de ADN. Esta tcnica tiene tres pasos de un ciclo fundamentales en un tubo de reaccin: 1. Apertura de la doble hebra de ADN molde por accin de calor. 2. Hibridacin con cebadores o partidores, por descenso de la temperatura. Los partidores son secuencias de 15 a 25 desoxinucletidos que complementan con las secuencias expuestas de ADN molde. 3. Extensin de la cadena complementaria del partidor por ADN polimerasa. La tcnica de PCR es ampliamente utilizado en laboratorios de investigacin y tiene muchas aplicaciones en gentica humana, terapia del cncer, diagnstico prenatal, identificacin de agentes infecciosos como bacilo de la tuberculosis, virus del SIDA. La limitacin es que es fcil contaminar las muestras de pacientes con ADN proveniente de personal del laboratorio u hospital por lo que se requiere de adecuados controles. Una tcnica vlida para el estudio de la variabilidad gentica es RFLP que significa polimorfismo en la longitud de fragmentos de restriccin. Esta tcnica consiste en cortar la secuencia de ADN con enzimas de restriccin. Estas enzimas provienen de procariontes y cortan en forma especfica la secuencia de ADN ya que reconocen secuencias de 4 a 6 pares de bases de forma especfica. Esto produce fragmentos de ADN de distinta longitud que pueden ser resueltos en un gel de agarosa o poliacrilamida. La ubicacin de estos marcadores asociados a cromosomas humanos ha ayudado a la localizacin de genes en los cromosomas.

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En la actualidad el anlisis de RFLP hace posible obtener mapas de ligamiento de alta resolucin de cada uno de los cromosomas humanos, y se dispone de mapas de marcadores RFLP de los 23 pares de cromosomas humanos. Cabe sealar que se entiende por genes ligados como aquellos que se encuentran en la misma cromtida. Mapas de ligamiento son aquellos mapas que ubican los genes en los cromosomas sobre la base del resultado de cruzamientos dirigidos en forma experimental. Esto no se puede hacer en la especie humana.

Cartografa de un gen en un cromosoma. La forma de identificar en qu cromosoma especfico se encuentra un gen ha sido posible con el advenimiento de las tcnicas moleculares. Genes como aquellos que producen la fibromatosis tipo I (NF1) se logr cartografiar mediante mapas de exclusin que indicaban en que cromosoma o en que regin cromosmica no estaba ubicado el gen sobre la base de la herencia de NF1 y usando marcadores de RFLP.

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Tabla 1. Caractersticas de los cromosomas humanos. La longitud relativa del cromosoma es de la longitud del cromosoma en relacin al total haploide del genoma. El ndice centromrico es la relacin del brazo corto (p) en relacin a la longitud total del cromosoma. De acuerdo a esas caractersticas es posible agrupar los cromosomas en 7 grupos denominados con las letras A, B, C, D, E, F, G. Nmero del Par cromosmico 1 2 3 4 5 6 7 X 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 Y Longitud relativa 9,08 8,45 7,06 6,55 6,13 5,84 5,28 5,8 4,96 4,83 4,68 4,63 4,46 3,64 3,55 3,36 3,23 3,15 2,76 2,52 2,33 1,83 1,68 1,96 Indice centromrico 48,0 38,1 45,9 27,6 27,4 37,7 37,3 36,9 35,9 33,3 31,2 35,6 30,9 14,8 15,5 14,9 40,6 31,4 26,1 42,9 44,6 25,7 25,0 16,3 Metacntrico Metacntrico Metacntrico Submetacntrico Submetacntrico Submetacntrico Submetacntrico Submetacntrico Submetacntrico Submetacntrico Submetacntrico Submetacntrico Submetacntrico Acrocntrico Acrocntrico Acrocntrico Submetacntrico Submetacntrico Submetacntrico Metacntrico Metacntrico Acrocntrico Acrocntrico Acrocntrico A A A B B C C C C C C C C D D D E E E F F G G G Forma Grupo

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Resumen del Cariotipo Humano.


Grupo A B C D E F G 123 45 X 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 Y Cromosomas acrocntricos. Los cromosomas 13 y 14 tienen satlites en el brazo corto Cromosomas de pequeo tamao metacntricos o submetacntricos Cromosomas pequeos metacntricos Cromosomas acrocntricos de tamao pequeo Par de Cromosomas Cromosomas metacntricos de gran tamao Cromosomas submetacntricos de tamao mediano Caractersticas

6 7 8 9 10 11 12 Cromosomas submetacntricos de tamao mediano

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Referencias. Welsh J & Smith AE. 1996. Fibrosis qustica. Investigacin y Ciencia, Febrero: 1624.

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CAPITULO VI HERENCIA Y GENOMA HUMANO. ENFERMEDADES GENTICAS Y CONSEJO GENTICO. RBOL GENEALGICO O PEDIGR
Fidelina Gonzlez. Depto Biologa Celular. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad de Concepcin. Concepcin. Chile.

Consejo Gentico. El Consejo Gentico es proceso de comunicacin que trata de problemas humanos asociados con la ocurrencia y riesgo de ocurrencia de un desorden gentico en una familia (Mahowald et al. 1998). El consejo gentico es un proceso de consentimiento mutuo. Los consejeros genticos conforman un equipo de profesionales de la salud que tiene la facultad de dar a un individuo o familia la informacin actualizada y el apoyo (consejo o gua) considerando los problemas de crecimiento, desarrollo y salud que podra tener una base gentica. Esto puede ayudar a las familias y a los individuos a entender y adaptarse a la diagnosis de un desorden gentico. Los consejos genticos estn conformados por una o ms personas que conocen el fundamento mdico, tienen el diagnstico, conocen la evolucin de la enfermedad y el posible tratamiento. Conocen como contribuye la herencia a la recurrencia de una anormalidad entre parientes. Pueden discriminar entre alternativas al riesgo de ocurrencia. Al visualizar el riesgo eligen acciones apropiadas desde la perspectiva familiar, religiosa y tica. Realizan un programa de adaptacin del individuo afectado a la vida familiar o como evitar el riesgo de ocurrencia de la anomala. Una diagnosis de un desorden gentico se puede hacer o confirmar en un embarazo, despus del nacimiento, en la infancia o ms tarde en la vida. La diagnosis podra ser realizada sobre la base de las caractersticas clnicas, test bioqumicos o test genticos. Esta diagnosis podra significar que otros miembros de las familias estn en riesgo. Por otro lado, un miembro de una familia podra reasegurar encontrar que ella o el no tiene o probablemente es improbable que desarrolle, el desorden en particular. La susceptibilidad o predisposicin a una enfermedad puede requerir el anlisis de genes mltiples y de factores ambientales.

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La orientacin supone la conformacin del grupo consejero, el uso de folletos para informacin, acceso a medios informativos y el respeto de los principios ticos sobre la base de autonoma, privacidad, confidencialidad y equidad.

Anlisis de un rasgo gentico. El anlisis de un rasgo gentico puede implicar a uno o todos los siguientes pasos. I. Mecanismo de transmisin y expresin de los genes. 1. Transmisin y posicin del gen. Tipo de herencia nuclear o citoplasmtica. Se trata de herencia autosmica o ligado a cromosomas sexuales. Posicin del gen o genes en el cromosoma (ligamiento, factorial, citogentica). 2. Expresin del gen. a) Tipos de interaccin allica. Dominancia. Recesividad. Herencia intermedia. Codominancia. Interaccin factorial. Epstasis. Variacin. fenocopias (modificacin fenotpica no hereditaria).

b) Interaccin no allica del gen.

c) Efectos del ambiente externo e interno sobre el carcter estudiado.

II. Sobre la fisiologa del gen. 1. Accin gentica. 2. Gentica del desarrollo.

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III. Sobre la dinmica del gen. 1. Distribucin poblacional. 2. Mutaciones. 3. Valor adaptativo. 4. Flujo gentico.

Las Leyes o Principios de la Herencia postulados por Mendel redescubiertos en el inicio del siglo XX ha constituido el inicio de los estudios de la herencia en todos los campos de la biologa. El progreso cientfico se divide en cuatro fases: a) Establecer las bases de la herencia: Los genes se ubican en los cromosomas. b) Definicin de la base molecular de la herencia: la doble hlice. c) La base de la informacin gentica de la herencia con el descubrimiento de los mecanismos biolgicos por los cuales las clulas leen la informacin contenida en los genes. d) La invencin de las tecnologas de ADN recombinante de clonacin y secuenciacin de la informacin gentica por lo cual se puede comprobar la funcin de los genes. Algunas caractersticas del Genoma Humano de acuerdo al Consorcio Internacional de Secuenciacin del Genoma Humano (2001) son: a) Alrededor de 30.000 genes que codifican protenas componen el genoma humano. b) Los genes humanos muestran los mismos mecanismos de maduracin en los procesos transcripcionales que los de otros organismos eucariontes. c) El conjunto de protenas (proteoma) codificadas por el genoma humano es ms complejo al compararlo con organismos invertebrados, ya que en los vertebrados hay dominios arquitectnicos de las protenas son ms ricos que en invertebrados. d) Cientos de genes han resultado de transferencia horizontal de genes desde bacterias y docenas de genes parecen haber derivado de elementos transposables. Estos elementos transposables han sido ms numerosos pero han derivado en elementos inactivos. e) Las regiones telomricas y centromricas han derivado de duplicacin reciente.

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f) La tasa de mutacin del genoma nuclear es dos veces ms alta en los hombres que en las mujeres. g) El anlisis citogentico de los clones secuenciado confirma la sugerencia que grandes regiones pobres en CG estn correlacionadas con las bandas G de los cariotipos. h) Las tasas de recombinacin tienden a ser ms altas en las regiones distales de los cromosomas (alrededor de 20 megabases) y en los brazos de los cromosomas ms cortos en general, en un patrn que promueve la ocurrencia de al menos un retrocruzamiento por brazo cromosmico en cada meiosis. El Proyecto Genoma Humano ha contribuido a la identificacin de los genes que contribuyen a las enfermedades. Jimnez-Snchez et al. 2001 propusieron una clasificacin funcional de los genes que producen enfermedades y sus productos que definen algunos principios de la manifestacin de las enfermedades consideradas. Han agrupado genes que causan enfermedades y demostraron correlacin entre la funcin del producto de un gen determinado y algunos de los rasgos de la enfermedad como la edad de aparicin de la enfermedad y la forma de herencia. Los resultados de esta clasificacin funcional de genes comprenden genes que codifican enzimas, es de alrededor del 31 % del total, aquellos que modulan las funciones de protenas son de alrededor de un 13 % que incluyen la estabilizacin, la activacin, el plegamiento de las protenas. Otras doce categoras contabilizan menos del 10% de la muestra.

Las funciones de productos proteicos de genes que producen enfermedades son las siguientes: Enzimas. Moduladores de protenas. Receptores. Factores de transcripcin. Protenas de la matriz intercelular y extracelular. Transportadores transmembrana. Canales. Seales celulares.

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Hormonas. Transportadores transcelulares. Inmunoglobulinas.

La forma de herencia de las enfermedades relacionadas a: codificacin de enzimas. modificadores de la funcin proteica. receptores defectuosos. genes que codifican factores de transcripcin. Corresponden a un casi 80% en el caso de 278 enfermedades relacionadas a genes que codifican enzimas como autosmicas recesivas. De 124 enfermedades de genes que modifican la funcin de la protena son alrededor del 45% autosmicas dominantes o recesivas. De forma parecida es la distribucin de los genes que codifican las 82 enfermedades analizadas y debidas a malfuncionamiento de receptores. Por otro lado, de las 83 enfermedades debidas a genes que codifican factores de transcripcin cerca del 70 % son autosmicas dominantes, y un poco ms del 20% son autosmicas recesivas. Enfermedades ligadas al cromosoma X en la mayor parte de los casos es de alrededor o menos del 10%.

Edad de aparicin de las enfermedades relacionadas a genes. Enfermedades relacionadas a: codificacin de enzimas modificadores de la funcin proteica receptores defectuosos genes que codifican factores de transcripcin

La edad de aparicin de las enfermedades se inicia en la etapa uterina en el caso de las enfermedades debidas a factores de transcripcin, para las enzimas defectuosas es al ao de vida, para los receptores es entre un ao y la pubertad y para los modificadores de protenas es en la adultez. Los desordenes en los receptores es en la infancia debido al rpido crecimiento y durante la pubertad por el intenso flujo de seales en clulas y tejidos del organismo. Los desordenes que

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implican a modificadores de protenas pueden aparecer ms tarde ya que implican que no perturban completamente la homeostasis del sistema en una edad temprana agravndose paulatinamente en el tiempo.

Construccin de pedigrs. A fin de establecer la base gentica de un rasgo familiar, su transmisin de acuerdo a los principios mendelianos debe ser demostrado. Sin embargo, obtener patrones de herencia es muy difcil debido a los prolongados tiempos generacionales a nivel de vida humana, pequeos grupos familiares y la imposibilidad que los cientficos puedan realizar experimentos de cruzamiento. Una metodologa ampliamente utilizada es la confeccin de pedigr de familias, sobre la base de la informacin multigeneracional. Generalmente se obtiene la forma de herencia de un rasgo ligado al sexo versus autonmica, autonmica versus dominante. En el anlisis de la transmisin gentica humana se comienza por la identificacin de un individuo afectado, denominado propsitus, seguido por la construccin histrica gentica o pedigr de los individuos de la familia. En una representacin grfica los hombres se representan con cuadrados en tanto que las mujeres con crculos. Las reas blancas representan a los individuos no afectados en tanto las ennegrecidas a los afectados. Las reas mitad ennegrecidas son los individuos heterocigotos en general y representan los individuos sanos portadores de un gen recesivo que al estado homocigoto es afectado, es decir su fenotipo corresponde a la manifestacin de su genotipo afectado en el estado homocigoto. Tambin los heterocigotos (diferentes alelos en un locus) u homocigotos (el mismo alelo en un locus) de un rasgo dominante que d fenotipos afectado se representan con reas ennegrecidas. Las generaciones de un pedigr son numeradas con nmeros romanos. Los diferentes individuos que componen una generacin se numeran de derecha a izquierda con numeracin arbiga, como se observa en la Figura 1.

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Figura 1. Representacin grfica de un rbol genealgico, indicando la smbologa usada.

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Los miembros de una pareja se unen con una lnea horizontal y las generaciones con lneas verticales. El propsitus o probando que es el individuo con el que se inicia el pedigr, se indica con una flecha. En el anlisis de un rasgo gentico a nivel humano usando la construccin de pedigrs para determinar la transmisin y expresin de genes, se pueden plantear dos problemas: a) Transmisin y posicin del gen: en este caso hay que distinguir entre herencia nuclear y herencia citoplsmica, lo otro es si se encuentra asociado a autosomas o a cromosomas ligados al sexo y finalmente la posicin o lugar que ocupa un gen en un cromosoma, definido como locus (plural loci). b) Expresin del gen: en este caso hay que discriminar entre las interacciones allicas: dominancia, recesividad, co-dominancia, herencia intermedia; las interacciones no allicas como epstasis, interaccin factorial; y finalmente los efectos del ambiente externo e interno sobre el carcter estudiado que afecta la variacin de la expresin del carcter, las fenocopias.

Tipos de herencia que es posible distinguir. Autosmico dominante: un gen autosmico con expresin regular tiene un modelo que es fcil identificar. El carcter se manifiesta en todas las generaciones y los hijos de una pareja formada por un individuo afectado y uno normal (que casi siempre es heterocigoto, si la enfermedad no es muy frecuente) da una proporcin de 1:1 entre hijos normales y afectados. Ambos sexos estn afectados en la misma proporcin. Autosmico recesivo: se establece una herencia de un carcter determinado por un gen recesivo cuando hay consanguinidad de los padres de los individuos afectados. La mayor parte de los individuos afectados tienen padres normales. De padres heterocigotos la proporcin entre hijos normales y afectados es 3:1. Todos los hijos de padres afectados son afectados. Los hijos de un heterocigoto normal con una pareja normal no son afectados. Recesivo ligado al sexo: afecta principalmente a varones que provienen de padres normales. La madre es normal pero es portadora del gen ligado al

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cromosoma X que produce el defecto. En la familia hay hermanos, primos o tos afectados. Ligado al cromosoma Y: presente exclusivamente en varones, todos los hijos varones de un hombre afectado estarn afectados (herencia holndrica). Dominante ligado al sexo: los varones afectados con esposas normales transmiten el defecto slo a las hijas. Herencia mitocondrial: en este caso las mutaciones que producen enfermedades estn relacionadas con el genoma haploide mitocondrial que se hereda maternalmente. Ejemplo de esto se ha visto en pases asiticos donde el uso indiscriminado de antibiticos ha causado mutaciones en el genoma mitocondrial de una abuela cuyos nietos y bisnietos hijos de sus hijas y nietas son sordos. Cabe sealar que el genoma mitocondrial codifica para genes que determinan audicin. Al determinar un tipo de herencia determinado en la especie humana con mayor precisin se debe recurrir a estudios histricos. Las complicaciones que puedan surgir se deben a penetracin incompleta del carcter, fenocopias (fenotipo inducido ambientalmente, en este caso no hereditario que es muy parecido al fenotipo producido por un gen conocido), factores raciales, edad.

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Referencias. International Human Genoma Sequencing Consortium. 2001. Initial sequencing and analysis of the human genome. Nature 409: 860-921. Jimnez-Snchez G, B Childs, D Valle. 2001. Human Disease genes. Nature 409: 853-855.

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ANEXO: CUESTIONARIOS ANEXO 1: CUESTIONARIOS DE CLASES CUESTIONARIO 1 1. Qu es una clula? Qu distingue a las clulas procariticas de las clulas eucariticas? 2. Cmo se hace el estudio de la clula? 3. Haga un paralelo entre clula procaritica y eucaritica desde el punto de vista de la estructura. 4. Cmo relaciona Ud el concepto estructura- funcin a nivel celular? D ejemplos. 5. Mencione las principales macromolculas que componen la clula. 6. Mencione los principales procesos metablicos que cumple la clula. 7. Mencione los principales procesos fisiolgicos que cumple una clula. 8. Mencione los principales roles biolgicos que cumple una clula. 9. Cules son las molculas que dan las caractersticas fsicas a una membrana celular? 10. Ilustre la forma en que una protena transmembrana est ubicada, refirase especficamente a canales inicos y fuerzas hidrofbicas. 11. Qu es la difusin simple, difusin facilitada y transporte activo? D ejemplos. 12. Cules son las funciones de la membrana plasmtica?

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Cuestionario 2 1. Qu rol juega el estado fsico de la bicapa lipdica en las propiedades biolgicas de la membrana? 2. Discuta el efecto de: a) longitud de cadena del cido graso, b) grado de insaturacin de los cidos grasos y c) colesterol, en la bicapa lipdica. 3. A qu se refiere el movimiento de flip-flop (difusin transversal) de los fosfolpidos de membrana y cul es su funcin en las clulas? 4. Comente papel que cumple el colesterol en las membranas de clulas animales. 5. Seale el tipo de protenas presente en las membranas biolgicas. Mencione las diversas funciones que desempean las protenas de membrana. 6. Indique y comente las caractersticas principales del modelo de mosaico fluido de la membrana biolgica. 7. Qu tipo de interacciones mantienen la estructura de las membranas? Se requieren uniones covalentes? 8. Qu se entiende por permeabilidad selectiva de una membrana biolgica? 9. Qu es un canal inico dependiente de voltaje? Qu tipo de transporte realiza? Cmo selecciona los iones que lo atraviesan? D dos ejemplos de este tipo de canal. 10. Qu es un canal inico ligando dependiente? Cmo funciona? Seale un ejemplo de esta clase de canal. 11. Hay enfermedades producto de canales inicos defectuosos de tejidos excitable y epitelial. Al respecto seale qu tipo de canal est afectado en: a) fibrosis cstica o fibrosis qustica, b) parlisis peridica hipercalmica, c) sndrome del QT prolongado. 12. Cmo ocurre el paso de sustancias liposolubles a travs de la membrana plasmtica? Cul es la fuerza impulsora para este tipo de transporte? 13. Mencione las caractersticas del proceso de difusin facilitada. D un ejemplo de este tipo de proceso. 14. Qu tiene de particular el transportador de glucosa denominado GluT 4? Cmo opera? Qu podra suceder eventualmente si el GluT4 es defectuoso o completamente ausente? 15. Indique las caractersticas de un proceso de transporte activo primario. D un ejemplo. 16. Cul es el rol de la fosforilacin en el mecanismo de accin de ATPasa Na K (bomba de sodio)?
+ +

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17. Cmo afecta la ouabana la actividad de la ATPasa Na -K ? Seale qu aplicacin tienen los digitlicos como la ouabana. 18. Qu son las acuaporinas y dnde se encuentran? Qu sucedera si la AQP2 faltara o fuera defectuosa? 19. De dnde proviene la energa para los procesos de transporte activo secundario: cotransporte y de intercambio? 20. Cmo se efecta la absorcin de azcares en el epitelio intestinal? Comente el proceso de absorcin de fructosa. 21. Muchos tipos diferentes de clulas poseen receptores que unen hormonas esteroidales. En qu sitio de la clula piensa Ud. que podran residir esos receptores? Y el receptor de insulina? Por qu?

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Cuestionario 3 1. Qu funciones desempea el retculo endoplsmico? 2. Cules son los organelos que participan de la sntesis de los componentes de las membranas? 3. Cules son las funciones del retculo endoplsmico liso? 4. Cmo ocurre la sntesis de lpidos en el REL? 5. Cmo se realiza la detoxificacin en el REL? 6. Cul es la participacin del REL en la sntesis de hormonas esteroidales? 7. Cmo ocurre el transporte de Calcio en el REL y qu diferencias hay entre el REL de la fibra muscular y otras clulas? 8. Qu tipos de Transportadores funcionan en le REL en relacin con el calcio? 9. Dnde ocurre la formacin de las lipoprotenas? 10. Qu importancia tiene la desfosforilacin de la glucosa en los hepatocitos del hgado y en qu organelo ocurre? 11. Qu son los polirribosomas, donde se pueden encontrar, y cul es su funcin? 12. Cules son las estructuras de una protena? Explique. 13. Hacia qu lugares son direccionadas las protenas que son sintetizadas en el citosol, cul es el mecanismo de direccionamiento de protenas? 14. Mencione los pasos de la sntesis de una protena multipaso? 15. Qu es el PRS y cual es su funcin? 16. Cules son los aminocidos hidrofbicos y qu caractersticas tiene una secuencia proteica que es rica en este tipo de aminocidos? 17. Cules son los pasos que llevan a la sntesis de protena, una vez que est unido el ribosoma al mensajero? 18. Qu es un traslocn y que funcin desempea? 19. Qu funcin tiene la riboforina? 20. Qu significa que el cdigo gentico sea redundante? 21. Qu es un anticodn?

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Cuestionario 4 1. Qu es la glicosilacin de protenas, en qu organelos ocurre y cmo se realiza? 2. Cules son las funciones del Golgi y por qu se le puede relacionar con el servicio postal? 3. Por qu algunas protenas se fosforilan en el Golgi? 4. Cmo explica el procesamiento de la insulina, explique? Por qu se le denomina procesamiento post- traduccional? 5. Mencione las enzimas que participan en las modificaciones a los azcares en el Golgi y en el RE. 6. Cules son los componentes del Golgi? 7. Cmo se originan los lisosomas? 8. Cules son las vas de las protenas que pasan desde RE a Golgi? Explique cuales son las diferencias de cada uno de los destinos. 9. Qu es KDEL, en que proceso participa y para qu sirve? 10. Cul es la diferencia de los destinos de una protena que sigue la va citoslica? 11. Si una protena que va al ncleo es superior a 20 kDa, cmo entra al ncleo? y si una protena tiene un peso menor a 20 kDa? 12. Qu es la clatrina y cul es la diferencia con un coatmero? En qu proceso participa? Cul es su funcin? 13. Cules son las funciones del RE liso? 14. En qu proceso es posible recuperar los receptores en el Golgi? 15. Qu es la transcitosis, endocitosis y exocitosis? 16. Cuntos pptidos seales o secuencias seales tiene una protena integral de la membrana plasmtica que forma parte de un canal multipaso? Cules son y con qu elementos interactan? 17. Dnde ocurre la sulfatacin de protenas en la porcin de los oligosacridos? Para qu sirve la sulfatacin? 18. Qu son las adaptinas y en qu proceso participan?

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Cuestionario 5 1. Qu determina que una protena sintetizada en el RER sea soluble (sea liberada a la cavidad del RER) o sea insertada en la membrana? 2. Qu se entiende por preproinsulina, proinsulina e insulina? a qu proceso celular se atribuye esta secuencia de eventos y dnde ocurre? 3. Dnde ocurre la glicosilacin inicial de las glicoprotenas y en qu consiste este proceso? 4. Qu son las vesculas transportadoras y cul es su funcin? 5. Cmo ocurre la secrecin regulada de protenas, y la secrecin constitutiva? Haga un paralelo. 6. Qu son los endosomas y cul es su funcin? 7. Qu es la traslocacin cotraduccional de protenas y dnde se produce? 8. Cmo las protenas que son sintetizadas en el RER, modificadas y diferenciadas dentro del Golgi son dirigidas a los lisosomas? 9. Cmo ocurre el proceso de fusin de membranas entre una vescula y el organelo de destino? 10. Porqu las enzimas contenidas en los lisosomas no destruyen las membranas de los lisosomas? 11. Indique y comente las 4 vas por las cuales llega material a los lisosomas para su degradacin. 12. Qu son los peroxisomas y qu funciones cumple en la clula? 13. Qu rol cumple la dinamina y la adaptina? 14. Cul es la funcin del pptido seal KDEL y del pptido seal KFERQ en las protenas que los llevan? 15. Qu rol tiene el REL en el proceso de autofagia? 16. Qu es la Transcitosis? D un ejemplo. 17. Cul es la importancia de la glicosilacin en la clula? 18. Dnde ocurre la sntesis de lpidos en la clula? 19. Haga una lista con los aminocidos hidrofbicos. 20. Haga una lista con los aminocidos hidroflicos. Cules son los aminocidos bsicos y cules los cidos. Cuales son los aminocidos que participan en la formacin de puentes o enlaces disulfuro. 21. Qu es la traslocacin cotraduccional? 22. Nombre cules son las protenas transmembrana que participan en la traslocacin cotraduccional que ocurre en el retculo endoplsmico rugoso y que rol cumple cada una de ellas.

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23. Qu rol cumplen los oligosacridos en la glicosilacin primaria que ocurre en el retculo endoplsmico? 24. Cmo ocurre la glicosilacin primaria en el retculo endoplsmico?

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Cuestionario 5 (continuacin) 1. A qu estructuras corresponden las uniones intercelulares? 2. Qu funcin tienen las uniones intercelulares? 3. Cuntos grupos de uniones intercelulares pueden distinguirse y cules son? 4. Cmo est formada una unin oclusiva y qu protenas la componen? 5. Cuntos tipos de uniones anclantes pueden distinguirse y qu funcin cumplen? 6. Cules son las protenas que forman las uniones anclantes? 7. Qu funcin cumplen las uniones comunicantes o nexos? 8. Cuntos tipos de protenas cumplen la funcin de adhesin celular y dnde?

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Cuestionario 6 1. A qu tipo de especializacin de la membrana plasmtica corresponde la unin oclusiva y qu rol desempea en la clula? En qu tejido est presente? 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. En qu estructuras celulares es posible encontrar actina, una protena citoslica que forma parte de diversas estructuras? Dnde se encuentran presentes las cadherinas y las cateninas y qu funcin cumplen? Cmo funcionan los nexos y cmo estn conformados? Qu es la enfermedad de Glanzmann y el pnfigo vulgar? Describa cmo est conformada una unin oclusiva. Qu funcin desempean las protenas conocidas como chaperonas? Qu son las integrinas y qu funcin cumplen? Qu funcin desempean las protenas en la formacin de peroxisomas? Qu caractersticas presentan estas protenas? 10. Cuntas vas tiene una protena codificada en el ncleo y sintetizada en los polirribosomas libres de llegar al espacio intermembrana de la mitocondria? 11. En qu se diferencia la composicin lipdica de la membrana interna de la mitocondria de la membrana externa y de otras membranas presentes en la clula? 12. Dnde estn situadas las porinas, qu son y qu funcin cumplen? 13. Qu funcin se desarrolla en cada uno de los compartimentos de la mitocondria: a) membrana externa, b) membrana interna, c) espacio intermembrana, d) matriz mitocondrial? En cules de estos compartimentos es posible encontrar protenas integrales y en cules protenas solubles? 14. Con qu funcin es posible asociar las protenas TIM y las protenas TOM? Desde el punto de vista de secuencia de la protena ser posible encontrar dominios de la protena que sean fuertemente hidrofbicos? Por qu? 15. A qu se le denomina enfermedades lisosmicas de almacenamiento o acumulacin? Cul es la causa? Qu efectos tiene sobre la clula? 16. Cules son los destinos que tienen las protenas en la va citoslica? Qu mecanismos permiten que las protenas no se equivoquen y lleguen al destino para cumplir sus funciones? 17. Qu funciones desempean las protenas que se quedan en el citosol y no se incorporan a algn organelo? 18. Qu protenas componen la lmina nuclear?

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19. Qu es la estructura de poro? 20. Qu dimensiones deben tener las sustancias que atraviesan la envoltura nuclear y por donde lo hacen y las sustancias que atraviesan la membrana externa de la mitocondria? 21. Qu es el citoesqueleto? Qu funciones celulares desempea? Cules son sus componentes? 22. Qu es el nuclelo y qu funcin desempea? Cmo est conformado? 23. Qu es la cromatina, eucromatina y heterocromatina? 24. Qu son las histonas y cul es su rol en la formacin de la cromatina? 25. Qu se entiende por transporte activo secundario y qu diferencias hay con el transporte activo secundario? 26. Qu son los transportadores GLUT y cuantos tipos existen? 27. Cmo se forman los glicolpidos o glicoesfingolpidos y dnde ocurre el proceso? Cuntos tipos de estas molculas existen, dnde se encuentran y en que se diferencian? 28. Qu funcin cumple el dolicol en la sntesis de glicoprotenas? dnde se encuentra? 29. Qu son los cuerpos residuales? 30. Qu componentes macrololculares es posible encontrar en la matriz de la mitocondria? 31. Qu rol cumple el ADN mitocondrial? 32. Qu funciones anexas se realizan en la mitocondria, adems de la respiracin celular? 33. Mencione al menos seis protenas integrales de membrana que cumplan una funcin preponderante en las mitocondrias, peroxisomas, nucleo, lisosomas, golgi, retculo endoplsmico. 34. Mencione organelos donde es posible encontrar protenas traslocadoras. 35. Qu se entiende por traslocacin del ribosoma? Explique.

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Cuestionario 7 1. Cules son las caractersticas genticas de las enfermedades atribudas a defectos en los genes? 2. Qu importancia tiene la informacin para los sistemas biolgicos? 3. Cmo se define genoma? 4. Qu son las ciclinas y cmo regulan el ciclo celular? 5. Cules son los tipos de proliferacin celular y cul es la importancia de estos? 6. Cmo acta la protena p53 en el ciclo celular? 7. Qu eventos promueve el factor promotor de la sntesis de ADN? 8. Qu eventos regulan los factores promotores de la mitosis? 9. Cul es el producto de un ciclo celular? 10. Cmo se define G1? 11. Qu es un nucleosoma? 12. Qu es la cromatina y qu diferencia hay con un cromosoma metafsico?

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Cuestionario 7 (continuacin) 1. Nombre las etapas de la profase I y describa cmo ocurre cada una de ellas. 2. A qu corresponde el complejo sinaptonmico? Cmo est formado? Qu funcin cumple? 3. Qu importancia biolgica tiene la meiosis desde el punto de vista de la variabilidad gentica? En qu etapas se genera esta variabilidad? 4. Dnde ocurre la reduccin del nmero diploide en la meiosis (2n a n)? 5. Qu estructura del cromosoma une a los cromosomas a la lmina perifrica de la envoltura nuclear en el leptonema? 6. Qu es un cariotipo? 7. Qu es la heterocromatina? Cuntos tipos de heterocromatina existen? 8. Cul es la estructura de un cromosoma metafsico? Cuntos tipos de cromosoma existen de acuerdo a la posicin del centrmero? 9. Qu son los ndulos de recombinacin? Qu funcin cumplen? 10. Qu es el corpsculo de Barr? 11. Cuntos compartimientos nucleares existen? Cmo se define un compartimiento en el ncleo y en la clula? 12. Qu es el nuclelo? Qu funcin cumple? Cul es su estructura? A qu cromosomas se encuentra asociado? 13. Qu son los cuerpos de Cajal? 14. Qu son los territorios cromosmicos y cmo se distribuye la cromatina en los territorios? 15. Qu es el complejo del factor de splicing? 16. Cmo est formado el poro nuclear y cul es su funcin? 17. Qu son las importinas y las exportinas? Qu funcin cumplen? 18. Cmo est conformada la lmina nuclear? Cul es la funcin de la lmina? 19. Cmo define la matriz nuclear y cmo est conformada?

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Cuestionario 8 1. Describa la va apoptsica en un tejido nervioso. 2. Indique en forma precisa cuales son las formas de regulacin de la protena p53 a nivel celular. 3. Qu es un oncogn? 4. Qu es un gen supresor de tumores? 5. En qu consiste la metstasis? 6. Cul es el mecanismo general a nivel molecular que se regula la apoptosis y qu genes participan en Caenorhabditis elegans y en vertebrados? 7. Indique las posibles funciones normales que en una clula puede cumplir un protooncogn. 8. Qu es APC y qu regula y cmo regula? 9. Qu importancia tiene la poliubiquitinacin de una ciclina cuando est formando parte de un complejo regulador del ciclo celular? 10. En la fibrosis qustica las mutaciones que se producen a nivel de ADN corresponden en la mayora de los casos a la falta de un nucletido en la secuencia del ADN, Cmo explica que este pequeo cambio lleve a una catstrofe en el funcionamiento de las clulas donde se expresa el gen?.

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Cuestionario 9 1. Qu aspectos se consideran importantes en la teora del envejecimiento? 2. Cul es el aspecto gentico del envejecimiento?, refirase a genes y su accin. 3. Qu es el sndrome de Werner? 4. Qu es un locus? 5. Qu es un alelo? 6. Qu es una serie allica? 7. Qu es dominancia, codominancia y recesividad? Refirase a sistema AB0 8. Qu es ligamiento y cmo se relaciona con la distancia entre los genes en un cromosoma? 9. Qu es haplotipo? Ejemplifique con el sistema Rh de acuerdo a Fisher y Race. 10. Cmo influye el sistema H en la expresin del sistema AB0?

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Cuestionario 10 1. Cules son los principios mendelianos y en qu casos se aplican a la herencia humana? 2. Qu se entiende por segregacin independiente de los caracteres? 3. Qu diferencia existe entre 2 caracteres codifcados por dos loci que se encuentran en el mismo cromosoma y caracteres codificados en dos loci ubicados en cromosomas distintos? 4. En qu consiste la herencia ligada al sexo? Explique. 5. Cmo se define mutacin y cuntos tipos de mutacin se reconocen de acuerdo a las distintas clasificaciones que existen? 6. Qu son las traslocaciones cromosmicas? 7. Qu son las aneuploidas? 8. Qu son las poliploidas? 9. A qu se debe el sndrome de Down? 10. Qu es un corpsculo de Barr?

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Cuestionario 11 1. Indique el significado del primer y segundo principio mendeliano de la herencia. 2. Cul es la consecuencia principal del ligamiento en trminos de proporcin gamtica en la generacin F1? Haga un paralelo con lo que sucede en un dihibridismo. 3. Cmo explica la herencia de la hemofilia en el que gran parte de los varones de una familia son hemoflicos? 4. Cmo explica que en una mutacin de punto, donde hay ausencia de un par de nucletidos en la secuencia de ADN que codifica el gen se produzca un defecto tan importante como es la falla de un canal de cloruro en la fibrosis qustica? 5. Cmo explica la diversidad de combinaciones que forman los haplotipos del sistema HLA? 6. Cmo explica la incompatibilidad entre hermanos en trminos de transplantes? 7. Cmo explica la diversidad de anticuerpos que es capaz de producir el sistema inmunolgico de un individuo en respuesta al medio externo? 8. Qu se entiende por individualidad gentica? 9. Qu es aglutinacin?

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Cuestionario 12 1. Qu es el Sistema HLA? Qu significa etimolgicamente? Cul es su funcin en el organismo? 2. Cmo se hereda el sistema HLA? En qu cromosoma se encuentra? 3. Cuntos genes participan en la formacin de los anticuerpos? En qu cromosomas se encuentran? 4. Qu son las inmunoglobulinas? 5. Cmo estn formadas las inmunoglobulinas? 6. Cuntos tipos de cadenas polipeptdicas forman las inmunoglobulinas? 7. Explique brevemente cmo se genera el gran nmero de anticuerpos en el organismo. 8. Qu se entiende por recombinacin somtica y qu diferencia tiene con la meitica? 9. Qu es un pedigr? cmo se representan o visualizan las distintas formas de herencia en un pedigr? 10. Qu es consejo gentico? Cmo puede integrarse un enfermero o enfermera a los equipos de trabajo de consejeros genticos? 11. Una familia cuyo padre tiene grupo A, Rh positivo y la madre tiene grupo 0 y Rh negativo tienen tres hijos con grupo 0 y Rh negativo. Explique. Construya el pedigr. Asigne los genotipos correspondientes a cada miembro de la familia. Defina genotipo. A qu tipo de herencia corresponde? 12. Usando un tablero de Punnett resuelva la siguiente situacin de compatibilidad en una familia, usando los loci A y B. Asigne alelos arbitrarios. Recuerde que los alelos son numerosos y prcticamente A qu tipo de herencia corresponde?. 13. Haga los esquemas de aglutinacin para los siguientes genotipos en el sistema Rh. A qu tipo de herencia corresponde. a) CcDDEe b) CC Dd ee c) CcDd EE d) ccddEe no hay situaciones de homocigosidad. Defina adems en este contexto qu entiende por haplotipo.

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14. Dibuje y rotule una molcula de Inmunoglobulina, indicando los posibles pasos que la originaron desde el punto de vista gentico y molecular. 15. Explique cmo funcionan los linfocitos T, linfocitos B y macrfagos en la produccin de anticuerpos. Relacione con lo que ocurre en el SIDA y el resfro comn. Relacione con la produccin celular de anticuerpos y receptores de membrana cmo funciona? Intente una hiptesis. Por qu los linfocitos detienen su ciclo celular y en qu etapa? 16. Relacione la informacin relacionada con las mutaciones, el cncer, factores de crecimiento, transduccin de seales intracelulares, proliferacin celular, apoptosis, cariotipo. D ejemplos. 17. Relacione regulacin del ciclo celular con apoptosis, envejecimiento y cromosomas. Refirase a las teoras de envejecimiento. 18. Relacione consejo gentico, proyecto genoma humano, construccin de pedigrs y hemofilia. 19. Haga un paralelo entre profase meitica de espermatognesis y ovognesis y mittica a nivel molecular y celular. Describa cmo los factores de proliferacin controlan la mitosis y relacionelo con cncer. Refirase tambin al rol que cumplen las clulas foliculares y de Sertoli, comparelas.

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ANEXO 2: CUESTIONARIOS DE LABORATORIOS CUESTIONARIO LABORATORIO 1 1. Qu pasa con el tamao del campo visual a medida que pasamos desde el aumento menor al mayor? 2. Con qu componentes del microscopio se realiza el examen topogrfico? 3. Cules son los dispositivos del microscopio que permiten variar la intensidad de luz que incide en la muestra? 4. Cul es el lmite de resolucin del ojo humano? y del microscopio prico? 5. En qu consiste el sistema parafocal? 6. Enumere los componentes del sistema esttico. 7. Cules son los pasos necesarios a seguir para ubicar una preparacin en el microscopio y enfocar con objetivo mayor? 8. Cules son las propiedades del microscopio ptico compuesto?

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Cuestionario Laboratorio 2 1. Qu es un frotis? en qu casos se utiliza? D ejemplos. 2. Qu tipos de clulas se pueden distinguir en la sangre? Enumere y d las carctersticas de cada uno. 3. Qu es la osmosis? Qu es la presin osmtica? De qu depende? 4. Qu es la plasmlisis? Qu es la crenacin? Explique cmo se realizaron los experimentos en el laboratorio. 5. Por qu el cloruro de sodio no puede atravesar la membrana plasmtica, y de qu manera es posible que entren los iones a la clula? 6. Por qu en el experimento de las levaduras algunas estaban teidas y otras no? Cul es el rol de la membrana plasmtica? 7. Cmo explica que la sntesis de protenas sea vital para que nuestras neuronas permanezcan funcionales a lo largo de nuestra vida? Argumente desde el punto de vista de la estructura celular. 8. Qu tcnica se usa para teir el lobulillo de hgado de cerdo? Qu elementos celulares puede distinguir? 9. Las clulas renales que conforman el epitelio de tbulo renal tienen la funcin de absorber contra gradiente Cmo se apoya esta observacin desde el punto de vista de la estructura celular? 10. Enumere las funciones de las siguientes estructuras y organelos celulares: a) Membrana plasmtica. b) Ncleo. c) Mitocondria. d) Complejo de Golgi. e) Peroxisomas o microcuerpos. f) Lisosomas. g) Retculo endoplsmico liso. h) Retculo endoplsmico rugoso. i) Ribosomas.

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ANEXO 3: CUESTIONARIOS DE LAS PELCULAS CUESTIONARIO PELCULAS 1 1. Qu funcin desempean las protenas en la clula? 2. Cules son los tipos de protenas mencionadas en la pelcula y cul es su funcin? 3. Cules son los pasos generales que llevan a la sntesis de protenas? Cules son las principales enzimas que participan en este proceso? 4. Cules son las diferencias entre ARN y ADN? Cuntos tipos de ARN existen? 5. Cundo una protena adquiere su forma tridimensional? 6. Cmo se puede explicar que un organismo procarionte tenga protenas similares en estructura y funcin a las de un eucarionte? 7. Qu se entiende por porcentaje de similitud en una protena? 8. Qu problema de salud tiene Christopher Nance? Cmo se relaciona con la estructura de la hemoglobina que tiene en sus glbulos rojos? De qu forma se relaciona con la hemoglobina normal? 9. Cmo se relaciona el estudio de las protenas con el estudio del cncer? 10. Qu significa expresin diferencial del desarrollo? 11. Qu rol cumple la protena NM 26? 12. Qu es un opern y en que clase de organismos est presente? 13. Qu diferencia hay entre las protenas de la piel y las protenas de las uas?

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Cuestionario Pelculas 2 1. De acuerdo a la pelcula cul es la definicin de vida? 2. Cmo estn organizados los seres vivos? 3. Qu es el metabolismo? 4. Cules son las caractersticas de la vida? 5. En qu consiste el segundo principio de termodinmica y cmo se relaciona con la vida. 6. Qu tipos de clulas son mencionadas en la pelcula y cules son sus caractersticas? 7. Por qu existen tantos tipos de clulas en un organismo? 8. Cmo se define tejido, rgano y sistema de rganos? 9. Cul es la razn que exista la reproduccin sexual en la naturaleza? 10. Qu es el mtodo cientfico? 11. Cules son los pasos del mtodo cientfico? 12. Qu es una hiptesis? 13. Cmo se define teora? 14. Cmo se comprueba (aprueba o rechaza) una hiptesis?

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Cuestionario Pelculas 3 1. Qu es la materia? Cules son los componentes ms pequeos de la materia? 2. Qu son los istopos? 3. Cmo afecta el ozono a la salud humana? 4. Cmo se forma un enlace inico? 5. Qu tipo de tomos forman las protenas? 6. Por qu la molcula de agua tiene cargas parciales? 7. Cmo se forman los enlaces o puente hidrgeno? 8. Qu es la cristalografa? Para qu sirve? 9. Cules son las molculas de la vida? 10. Qu son las grasas? 11. Qu son las protenas? 12. A qu se debe el plegamiento especfico de las protenas? 13. Qu tipo de fuerzas favorecen el plegamiento de una protena? 14. Qu rol cumplen las cinasas o quinasas en la clula? 15. Qu enfermedades se encuentran asociadas a quinasas o cinasas defectuosas?

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Cuestionario Pelculas 4 1. Cules son las razones de hacer cortes histolgicos? 2. Cmo se toma una muestra? Qu cuidados hay que tener? 3. Cules son las etapas de la tcnica de corte histolgico? 4. En qu consiste la etapa de fijacin y cuales son los principales fijadores? 5. Cul es el objetivo de la etapa de fijacin? 6. En qu consiste la etapa de deshidratacin y sustitucin? Cul es el objetivo de esta etapa? 7. En qu consiste la etapa de inclusin? Cul es el objetivo? En qu material se incluye? 8. En qu consiste la etapa de corte? Cul es el objetivo? En qu instrumento se realiza? 9. En qu consiste la etapa de tincin? Cmo se realiza? Cules son las tinciones usadas? 10. En qu consiste la etapa de montaje? Qu materiales son necesarios para hacer este paso?

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Cuestionario Pelcula 5 1. Cul es la unidad de la vida? 2. Cmo se ilustra la relacin estructura funcin en la audicin? 3. Qu organelos se mencionan en la pelcula y cul es su funcin? 4. Cul es la funcin del retculo endoplsmico rugoso? 5. Cul es la funcin del Golgi? 6. Cul es la composicin del ncleo y cul es su funcin? 7. Cmo la funcin de una clula determina la abundancia de cierto organelos? D ejemplos. 8. Cul es el rol de la membrana plasmtica? Cules son sus caractersticas? 9. Cules son las protenas integrales responsables del intercambio inico? 10. Qu es el transporte pasivo y el transporte activo? 11. Qu es la endocitosis? 12. Qu es la exocitosis? 13. De dnde se originan las vesculas que se fusionan con la membrana plasmtica? 14. Cules son las diferencias entre clula procariticas y eucariticas? 15. Desde el punto de vista qumico Cules son las funciones de los organelos de las clulas eucariticas? 16. Cules son las funciones del citoesqueleto de la clula eucaritica y cmo est conformado?

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Cuestionario Pelculas 6 1. Cuntos reinos existen en ela naturaleza? 2. Qu criterios se usan para ordenar las especies en un determinado sistema de clasificacin? 3. Considerando la existencia de todas las bacterias qu porcentaje relativo es daino al hombre? 4. Cules son los tipos de monera que existen? 5. Para qu sirve la tincin Gram? 6. Qu criterios sirven para diferenciar bacterias? 7. Qu es la fisin binaria? Cmo ocurre? Cunto tiempo dura? 8. Qu son los virus? Cuntos tipos de virus se mencionan en la pelcula? 9. Qu caractersticas tienen los antibiticos para combatir las bacterias? 10. Cmo estn conformados los virus? 11. Qu necesitan los virus para reproducirse? 12. Cmo infecta un virus a una clula? 13. Qu problema causan los virus a la salud humana? 14. Cul es la mejor forma de evitar las enfermedades? 15. Qu es la marea roja? A qu tipos de organismos corresponden? 16. Qu es la teora endosimbitica?

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Cuestionario Pelculas 7 1. Cmo se reproducen los virus? 2. Cmo estn conformados los virus? 3. Qu son los retrovirus? 4. Qu enfermedades son producidas por virus? 5. Por qu es difcil observar y diagnosticar virus? 6. Qu es una pandemia? 7. Cul fue la contribucin de la Primera Guerra Mundial a la pandemia de infuenza? 8. Cmo se reproduce el bacteriofago T4? 9. Qu son las vacunas? 10. Cmo surgieron las vacunas? 11. Cules son las funciones del sistema inmune? 12. Cmo se fabrica una vacuna? 13. A qu razn se atribuye el cambio de cepas de virus que a lo largo del ao producen la gripe? 14. Cmo se transmite la poliomelitis? 15. Qu es el rotavirus y en qu circunstancias y lugar se ha hecho ms frecuente? 16. Cmo se extingui la viruela en el mundo? 17. Por qu se piensa que la viruela contribuy a la conquista de Amrica? 18. Qu es la emergencia viral? En qu circunstancias ocurre? 19. Cmo se rastrea un virus en la selva? 20. Qu rganos ataca el virus hanta en humanos? 21. De acuerdo a la pelcula Cmo se origin y disemin el virus del SIDA? 22. Dnde surgi el virus ebola o virus del mono verde? 23. Cul es la utilidad potencial de los virus para curar enfermedades como la fibrosis qustica? Cmo se procedera?

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Cuestionario Pelcula 8 1. Cul es el objetivo de la pelcula? 2. Qu es un cariotipo? Cmo se confecciona un cariotipo? 3. Qu caractersticas tienen las diferentes especies desde el punto de vista del nmero de cromosomas? 4. Qu funcin cumple la heparina? 5. Qu funcin cumple la colchicina? 6. Qu funcin cumple la fitohemoaglutinina? 7. Por qu los linfocitos son sometidos a shock osmtico luego de ser cultivados? 8. Con qu tincin se tien los crosmosomas? 9. Qu elementos es posible visualizar al microscopio luego de hacer la tcnica del goteo sobre el portaobjeto y teirlos? 10. Qu es el sndrome de Turner, a qu se debe? Cules son las caractersticas que presenta la persona afectada? 11. Qu es el sndrome de Klinefelter, a qu se debe? Cules son las caractersticas que presenta la persona afectada? 12. Qu es el sndrome de Down, a qu se debe? Cules son las caractersticas que presenta la persona afectada? 13. Qu es el sndrome de maullido de gato (cri du chat), a qu se debe? Cules son las caractersticas que presenta la persona afectada? 14. Cul es la causa del tumor gstrico desde el punto de vista cromosmico? 15. Cul es la causa de la leucemia mieloide crnica desde el punto de vista cromosmico? 16. Cul es el efecto de las sustancias mutagnicas sobre la forma de los cromosomas? 17. Qu efectos tienen los virus sobre el genoma? 18. Por qu se decanta la muestra de sangre antes de hacer los cultivos de linfocitos?

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Cuestionario Pelculas 9 1. Cul fue el aporte de Mitchel al estudio del ADN? 2. Cul fue la contribucin de Hershey y Chase al estudio del ADN? 3. Cules son las bases nitrogenadas del ADN? 4. Qu es un nucletido y cmo est conformado? 5. Cmo estn conformados los pasamanos de la escalera de ADN? 6. Qu es lo que identifica a una especie desde el punto de vista del ADN? 7. Cmo se realiza la duplicacin del ADN y en qu etapa del ciclo celular ocurre? 8. Cundo son sintetizadas las cromtidas hermanas? 9. Qu es lo que pasa con el nio Andrew Gobea? Qu enfermedad tiene y por qu? 10. Desde el punto de vista gentico cul es la constitucin gentica del padre, la madre y la hermana de Andrew? 11. Qu es la terapia gnica? Cmo se aplic a Andrew? 12. Dnde se encontraba inserto el gen ADA? Qu se trat de hacer para introducir el gen sano? 13. Qu es un vector? De qu naturaleza es? 14. A qu corresponden las enzimas de restriccin y qu funcin cumple? 15. Qu es una ligasa y que funcin cumple? 16. A qu corresponde el ADN recombinante? 17. Cmo se evalu el tratamiento aplicado a Andrew? 18. Qu es el PCR?

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Cuestionario Pelculas 10 1. Cul es la funcin de la divisin celular? 2. Qu son los cromosomas? Qu es la cromatina? 3. Qu son las cromtidas? 4. Qu son los centrmeros? Qu funcin cumplen? 5. Por qu razn la molcula de ADN siendo tan larga, puede estar contenida en el ncleo de una clula? 6. Qu es el cariotipo y para qu sirve? 7. Cul es el nmero haploide de la especie humana? 8. Qu son los cromosomas homlogos? 9. Desde el punto de vista del nmero de cromosomas cmo se diferencias las distintas especies? 10. Cules son las etapas de la mitosis? 11. Cmo se mantiene el nmero de cromosomas de una clula a travs del ciclo celular, y a travs de las generaciones? 12. Qu caractersticas tiene la interfase? 13. Qu caractersticas tiene la mitosis? 14. Cules son los eventos que ocurren en la profase de una clula? 15. Qu permite que los cromosomas se muevan en la anafase? 16. Qu funcin cumple la mitosis en distintos organismos?

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Cuestionario Pelculas 11 1. Cul es el enfoque de Mendel al iniciar sus estudios sobre herencia en las arvejas? 2. Qu evento vital es intervenido para producir los caracteres deseados en la frutilla? 3. Qu significa dominancia y recesividad en trminos de expresin gentica? 4. A qu corresponden los factores de Mendel? Dnde se encuentran fsicamente? 5. Qu es un alelo? 6. Qu es la homocigosis y la heterocigosis? 7. Qu pasa cuando se cruzan dos homocigotos o cuando los parentales son heterocigotos? 8. Qu es un octoploide, y qu es un diploide? 9. A qu corresponde una cruza monohbrida? 10. Cmo se explica que de padres a hijos se traspase la informacin gentica? 11. Qu es el cuadrado y para qu sirve? 12. Haga un Tablero de Punnet con T= alto y t= enano de un cruzamiento entre padres heterocigotos Qu proporcin de fenotipos altos hay en la generacin F1 o descendencia directa? 13. Qu es un cruce dihbrido? Cul fue el enunciado de la ley o principio mendeliano que surgi de los estudios de Mendel? 14. Cuntos tipos de gametos distintos resultan de un cruzamiento dihbrido entre padres heterocigotos altos y prpura? 15. Cmo se logra que las palomas sean blancas puras? 16. Cmo se denomina este tipo de interaccin entre genes para el color? 17. Cmo se explica que las palomas jaspeadas den colores blanco puro en las palomas? 18. Qu es la codominancia? Qu ejemplos se dan en la pelcula? 19. Qu es la dominancia incompleta? Explique el ejemplo de las flores dragones. 20. Por qu no se ve el color rojo o negro azulado en las palomas? 21. Qu es la interherencia polignica?

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Cuestionario Pelcula 12 Primera Parte. 1. En qu consiste el Proyecto genoma Humano? 2. Cmo se defina Genoma? 3. Cuntos pares de cromosomas hay en el genoma Humano? 4. Qu es un gen? 5. Cul fue la contribucin de Watson y Crick? 6. Por qu los travesaos son ms importantes que los pasamanos de la escalera del ADN, desde el punto de vista gentico? 7. Cmo se hace la lectura contenida en la molcula de ADN? 8. De dnde se obtiene la muestra para el anlisis de ADN de una persona? 9. Cul es la ventaja gentica de la familia Limone proveniente de Miln? 10. Cmo se explica esta ventaja gentica? 11. Por qu esta caracterstica est slo presente en algunas familias y no en otras? 12. Qu nombre recibe el gen responsable de esta caracterstica y en qu cromosoma se ubica? 13. Cmo transcurre la transcripcin de un gen? 14. Qu es el ADN mitocondrial y cules son sus caractersticas? Cules son las consecuencias del proyecto Genoma Humano? Segunda Parte. 1. Qu son los chips de ADN? 2. Cul es el principal objetivo del Proyecto Genoma Humano? 3. Qu es el cncer? Qu es la metastasis? 4. Cul es el problema de salud que afecta a la enfermera y cul es la causa? 5. Qu funcin cumple la protena p53 en la clula? 6. Qu funcin cumple la protena ras? 7. En el caso de la enfermedad que padece la enfermera Cul es la causa gentica especfica? Qu causa esto en el mal funcionamiento de la protena p53? 8. Desde el punto de vista gentico Cmo se puede mejorar una clula cancerosa?

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9. Qu rol cumple el virus del resfro comn en el experimento de terapia gnica? 10. Qu causas o evento celular provoca el envejecimiento? 11. Qu efectos tienen los radicales libres sobre el ADN? 12. Cul es el evento celular desencadenado por la protena p53 cuando esta protena detecta algn evento extrao en la clula? 13. Qu son los telmeros? Cules son sus caractersticas? 14. Por qu razn no funciona la dicisin celular cuando los telmeros son demasiado cortos? 15. Qu funcin cumple la telomerasa? En qu etapa del desarrollo se encuentra activa? 16. En qu cromosoma se ubica la informacin (locus) para la telomerasa?

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ANEXO 4: CUESTIONARIO DE SEMINARIOS 1 CUESTIONARIO- SEMINARIO DE VIRUS 1 CAP 23 VIRUS 1. Cmo es la estructura de un virus? 2. A qu se les denomina bacteriofago? 3. Qu son los virus virulentos o lticos? 4. Cuales son los virus temperados o lisognicos? 5. Cmo se realiza un cultivo de virus? 6. Cul es la secuencia de un ciclo ltico? Explique cada etapa 7. Qu es un profago? 8. A qu se le conoce como conversin lisognica? 9. Qu es la transduccin? 10. Cul es la secuencia de una infeccin lisognica? 11. Qu es un viroide? 12. Cmo ocurre la coexistencia con virus? 13. Qu es la cpside? 14. Qu es la transcriptasa inversa? 15. Qu enfermedades virales hay en animales y por qu se desarrollan? 16. Qu relacin hay entre virus y cncer? 17. Qu son los priones? 18. Qu tratamientos son posibles en las enfermedades producidas por virus? 19. Cul es el origen de los virus? 20. Qu rol tiene un profesional de la salud como un (a) enfermero (a) en la prevencin de este tipo de afecciones causadas por virus?

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Cuestionario- Seminario de virus 2 La gripe y sus virus 1. A qu familia pertenecen los virus de la gripe? Cules son sus caractersticas? 2. Cules son las caractersticas moleculares de estos virus? 3. Qu protenas es posible distinguir? 4. Qu produce la hemaglutinina en los glbulos rojos y por qu? 5. Qu enzimas es posible encontrar en estos virus? 6. Cmo es posible diferenciar los virus de las gripes A, B y C? 7. Cules son las etapas del ciclo biolgico de un virus de la gripe? 8. Qu caractersticas tiene el ARN viral? Cmo puede proliferar un virus si tiene ARN, y no ARN, como es el caso de los retrovirus? 9. Cmo y por qu se producen las epidemias y pandemias de la gripe? 10. Qu problema presenta la vacunacin con virus atenuados? Cmo se soluciona? 11. Qu son los adyuvantes? 12. En qu consisten las vacunas nuevas? Qu son los liposomas? 13. En qu consisten las vacunas recombinantes? 14. Qu es la amantadina y la rimantadina? 15. Cul es la relacin entre virus y lisosoma? 16. Cul es la importancia de este tema para un profesional enfermero o enfermera en formacin?

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Cuestionario- Seminario de virus 3 Desarme de los virus de la gripe

1. Qu es una pandemia? D ejemplos. 2. Qu problemas presentan las vacunas contra la gripe? Cunto se demora desarrollar una vacuna contra una nueva variante de virus? 3. Qu origen tuvo la gripe de Hong Kong? 4. Qu frmacos pueden ser administrados contra la gripe? Cul es su efecto sobre el organismo? Cul es la diferencia con otros frmacos o curaciones tradicionales? 5. Cul es el mecanismo de accin de estos frmacos? 6. Qu problemas presenta el uso de los frmacos amantadina y rimantadina? 7. Qu es la neuraminidasa? Qu relacin hay con los frmacos contra la gripe? 8. Qu clulas son atacadas de preferencia por los virus de la gripe? 9. Cuntos tipos gripales existen? Cules son las caractersticas de cada tipo? 10. Explique detalladamente el ciclo biolgico de un virus gripal. 11. Qu es al cido silico? Cul es su rol? 12. Qu es la deriva antignica y el desplazamiento antignico? Explique y ejemplifique. 13. Cul es la causa posible de la pandemia gripal de 1957 y 1968? 14. Qu es un reservorio viral? 15. Por qu se menciona la frase barrera de especies? 16. Qu estudios se realizaron en neuraminidasa? 17. Qu caractersticas del sitio activo de la neuraminidasa permiten mejorar el anclaje de una molcula de cido silico? 18. Qu problemas present el GS4071? 19. Cmo se administra en zanamivir? 20. Qu es la M2 vrica? En qu tipos de virus es posible encontrarla? 21. Cul es el impacto social de una epidemis gripal? 22. Cuntos tipos de vacunacin se sealan en el texto? Cmo se hace la vacuna de ADN? 23. Qu es la hemaglutinina? 24. Qu pasa cuando un retrovirus queda atrapado en un endosoma de la clula?

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Cuestionario- Seminario de virus 4 El primer retrovirus humano 1. Qu es la retrotranscriptasa o transcriptasa inversa? 2. Qu enfermedades humanas se deben a retrovirus? 3. Qu caractersticas tienen los virus HTLV, y los virus FeLV? Qu enfermedades producen? 4. A qu se refiere con secuencias de ADN endgeno y con virus exgeno? 5. Qu es un provirus? En qu cromosomas se integra? Por qu se dice que las clulas de un tumor son clonales? 6. Explique el ciclo de vida de un retrovirus. 7. De cuntas formas es posible detectar un retrovirus en la clula? Cul es la herramienta ms sensible? 8. En qu consiste el ensayo de la retrotranscriptasa? 9. Qu avances se logr con el descubrimiento de los factores de crcemiento? 10. Qu es la fitohemoaglutinina (PHA)? Cul es su accin sobre el cultivo de clulas T? 11. Cul es el mecanismo propuesto en la aparicin de la leucemia? 12. Qu relacin hay entre leucemia y HTLV? Qu sntomas presentan los pacientes? 13. Cul es la distribucin geogrfica del virus HTLV-I? Qu relacin hay con la leucemia adulta de las clulas T (ATL)? 14. Cules son los mecanismos de induccin de la leucemia? 15. Qu diferencias hay entre el virus HTLV-I y los que producen la leucemia crnica (ALVy MuLV)? 16. A qu se refiere con actuacin en trans?

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Cuestionario- Seminario de virus 5 Los nuevos virus 1. A qu se debe la aparicin de "nuevos virus", es esto un fenmeno casual? 2. Cmo se define una "enfermedad emergente"? D ejemplos. 3. Qu virus son responsables de las fiebres hemorrgicas? A qu familias pertenecen? 4. Cmo se contagia una persona con estos virus? Explique cada caso sealado en el trabajo. 5. Cmo influye la devastacin del medio ambiente para la aparicin de nuevas virus? Explique los casos sealados en el trabajo. 6. Por qu se les denomin Arenaviridae? 7. Qu es el hantavirus? Cmo es transmitido al hombre? 8. Cmo la industria biolgica ha contribudo a la aparicin de nuevos virus? Cmo visualiza este aspecto como futuro profesional de la salud? Qu cuidados debera tener en el manejo de este tipo de vacunas si Ud los tuviera que manipular? 9. Explique claramente cmo se han producido las contaminaciones accidentales por virus y por qu casos fueron conocidos? 10. Qu caractersticas en cuanto a conformacin tienen los Bunyaviridae, Arenaviridae y Filoviridae? 11. Qu caractersticas son observables en los individuos que son infectados por estos virus? 12. Qu problemas hay al momento de manipular estos virus en un laboratorio? 13. Con que herramienta es posible verificar un contagio con estos virus? 14. Qu son los reservorios virales, explique en relacin al virus hanta? 15. Qu medicamentos preventivos existen en la lucha contra estos virus? 16. Qu acciones es posible desarrollar para evitar nuevos problemas virales en nuestro medio?

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Cuestionario- Seminario de virus 6 El virus del SIDA 1. Cul es el nombre del virus que produce el SIDA? 2. Cmo se produce la infeccin? 3. Cul es la clula afectada? 4. Qu es el sarcoma de Kaposi y qu relacin tiene con el SIDA? 5. Por qu concluyeron que asociado al SIDA hay una deficiencia inmunolgica? 6. Cuntos tipos distintos de virus que producen SIDA existen y cmo se transmiten? 7. Cmo est conformado el virin del HTLV-III? 8. A qu se debe la disminucin de clulas T4? 9. Qu funciones desempea la clula T4 en la respuesta inmunitaria? 10. Qu rol tiene la endocitosis en el proceso de infeccin del virus? 11. Cules son genes reguladores de los retrovirus y cuales son caractersticos de HTLV-III, qu funcin tienen estos genes? 12. Qu son los LTR? 13. Qu efectos patognicos tiene el virus HTLV-III? 14. Qu es el AZT y para qu se usa? 15. Cul es la caracterstica principal del virus del SIDA desde el punto de vista de la variabilidad gentica? 16. Qu diferencias hay entre virin, profago, cpside y virus?

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Cuestionario- Seminario de virus 7 Infeccin por HIV: cuadro celular 1. Cmo ocurre un proceso de infeccin vrica en el caso de HIV? Qu es el CD4? 2. Qu efecto tiene el virus sobre las clulas auxiliares T? 3. Qu es el gp120? 4. Qu son los antgenos monoclonales? 5. Qu es la prueba de pseudotipo? 6. Qu pruebas fueron ms slidas para corroborar que el CD4 era receptor vrico? Por qu? 7. Cmo penetra el material gentico de HIV a la clula? 8. Qu rol tiene la acidez en el endosoma cuando penetra el virus? Explique los pros y contras. 9. Cmo participa el mecanismo de endocitosis mediada por receptor en la infeccin vrica? 10. Cmo se forman los sincitios o sincicios? 11. Cul es el mecanismo propuesto por el autor del trabajo? 12. Qu es un provirus? 13. Qu significa que un virus se integre a un genoma? En este caso, qu caminos puede seguir? 14. cmo se visualiza la infeccin por el virus HIV en algn organismo? 15. Qu rol juegan los monocitos en el organismo? 16. Qu evidencias hay que apoye una regin especfica con alto grado de conservacin de la protena gp120 que participa en ms de un tipo de virus? Explique.

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ANEXO 5: CUESTIONARIO SEMINARIO 2 AS COMIENZA LA MITOSIS 1. Cules son las etapas del ciclo celular? 2. Cules son los eventos que ocurren al principio de la mitosis? 3. Para qu usaron la tcnica de microinyeccin? Averigue en qu consiste. 4. Qu es el factor promotor de la mitosis? 5. Cmo ocurre el empaquetamiento del ADN? 6. Qu se ilustra en la Figura 1, compare ambas situaciones en el embrin normal y el mutado de la Drosophila? 7. Qu importancia tienen las mutaciones en la determinacin de los eventos de la mitosis? 8. Cules son los agentes mutgenos mencionados en el trabajo? 9. Qu efectos tiene la mutacin sobre la protena y para qu sirve al experimento? 10. Cules fueron los resultados de los experimentos? Cules son los genes responsables de la regulacin del ciclo y en qu etapa regulan? 11. Cmo se descubrieron los genes wee qu significa etimolgicamente el trmino? A qu se debe que las clulas de levadura sean ms pequeas? 12. Qu pas cuando se hizo cruzamiento de mutantes wee con jmutantes cdc2? 13. Qu es una genoteca? 14. Qu significa homologa funcional de genes? cul es su aplicacin? 15. Cmo se regula la actividad del complejo cdc2/ciclina? 16. Cmo se comprob la veracidad del modelo? 17. Cul es la funcin de cdc25? 18. Qu funcin tiene la lamin B o lmina B y qu ocurre con esta protena en el inicio de la mitosis?

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Cuestionario seminario 2 El telmero humano 1. Qu son los telmeros? 2. Cul es la importancia del telmero? 3. Para qu se ha usado la clonacin del telmero? 4. Qu significa cartografiar el genoma humano? 5. Por qu el acortamiento telomrico es nefasto en las clulas somticas, pero no es un peligro para la sobrevivencia de la especie? 6. Qu porcentaje del genoma presenta secuencias repetitivas, dnde se ubican estas secuencias en el cromosoma y por qu tienen esa ubicacin, obedecer a la funcin de esa regin? 7. Qu significado tiene el trmino tndem y el trmino clster? Explique. 8. Cmo se realiz la construccin de una biblioteca genmica de ADN telomrico? Qu tipo de problema tuvieron que solucionar? Cul fue el organismo de modelo que se sigui para caracterizar el telmero humano? 9. Qu son las enzimas de restriccin? Por qu no se usaron en el caso de la construccin de la biblioteca genmica humana? Qu tcnica reemplaz la accin de las enzimas de restriccin? 10. Cul es la unidad bsica del telmero humano? 11. Para qu se us la construccin de cromosomas artificiales de levadura (CAL) para clonar ADN humano? Describa cmo se hizo la construccin gentica. 12. Qu significa ADN quimrico? 13. Cul fue la conclusin que obtuvieron de los experimentos con CAL? 14. Cmo se propone medir la distancia de los genes en este trabajo? Cmo se haba hecho hasta antes de los resultados de estos experimentos? 15. Qu caractersticas tiene el ADN en la regin vecina al telmero (regiones subtelomricas)? 16. Qu relacin existe entre el acortamiento de los telmeros y el envejecimiento? Por qu ocurre? 17. Qu rol cumple la telomerasa? Cul es el mecanismo molecular conocido para la funcin de esta enzima?

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Cuestionario seminario 3 Telmeros, telomerasas y cncer 1. Qu son los telmeros? 2. Qu funcin tiene la telomerasa? 3. Cul es la composicin de los telmeros? 4. De acuerdo a la lectura cul es la definicin de gen. 5. Cul es la funcin de la telomerasa? 6. Cmo ocurre la replicacin de los extremos? 7. Cmo se comportan en cultivo las clulas provenientes de personas de ms edad comparada con aquellas provenientes de personas ms jvenes, a qu se atribuye esto? 8. Qu relacin existe entre la longitud del telmero y el nmero de divisiones celulares de clulas somticas? 9. Qu relacin hay entre telmeros, envejecimiento y telomerasa y cncer? 10. Qu relacin existe netre telomerasa e inhibidores de la telomerasa como posible terapia anticncer? 11. Cules son las perspectivas en el tratamiento del cncer mediante la terapia gnica? 12. Qu es el Tetrahymena y qu importancia tiene en relacin a los telmeros?

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Cuestionario seminario 4 Bases genticas del cncer 1. Cmo se genera el cncer? Cmo funciona una clula normal? Qu es la metstasis? 2. Cmo pudieron comprobar que haban daos en los cromosomas de las clulas cncerosas? 3. Es el cncer hereditario? Cmo lo han comprobado? 4. Cul es la hiptesis de Knudson? Qu estudios realiz para postular la hiptesis? Qu mecanismo postul en relacin con la hiptesis? 5. Qu son los protooncogenes, qu funcin cumplen y qu son los oncogenes? a qu tipo de herencia pertenecen? 6. Qu son los genes supresores de tumores? qu funcin cumplen? 7. Qu es el retinoblastoma? en qu cromosoma se encuentra ubicado? Cul es la causa que produce la enfermedad? 8. Qu es la evolucin clonal? Ejemplifique con el cncer de colon. Refirase a la planificacin del estudio para demostrar la evolucin clonal. 9. Dnde se sita el gen APC, en qu cromosoma? Cul sera su funcin? A qu tipo de protena codifica? 10. Dnde se encuentra el gen p53, en qu cromosoma? Cul es su funcin? 11. Dnde se encuentra el gen DCC, en qu cromosoma? Cul es su funcin? 12. Qu comportamiento sufre el astrocitoma, cuando lo comparamos con el cncer de colon? 13. Qu alteraciones se evidencian a nivel gentico en la aparicin y desarrollo del astrocitoma? 14. A nivel celular qu pasa con los receptores que son cifrados por protooncogenes? 15. Qu condiciones mnimas alteradas facilitan la formacin de tumores cerebrales y probablemente tumores de colon? 16. Cules son las conclusiones del trabajo?

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Cuestionario seminario 5 Suicidio celular en la salud y en la enfermedad 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Qu es la apoptosis? Qu patologas surgen cuando este proceso est alterado? Qu fenmenos biolgicos estn relacionados con la apoptosis? Qu diferencias hay entre apoptosis y necrosis? Qu son los cuerpos apoptsicos? Cmo est formado el cristalino del ojo y las capas superiores de la epidermis? Cmo se gatilla la apoptosis? Qu son las proteasas de tipo ICE? Cules son las clulas apoptsicas en el adulto? Por qu los timocitos y clulas T sufren apoptosis, y en qu circunstancias?

10. Qu mecanismos permiten la entrada a la apoptosis en las clulas T? 11. Cmo afecta la diferenciacin al gatillamiento de la apoptosis? 12. Cules son las protenas bloqueadoras de la apoptosis? 13. Qu mecanismos han desarrollado los virus para bloquear la apoptosis? 14. Por qu en el trabajo se menciona que el sistema inmunitario tiene algunas estrategias para contrarrestar algunas artimaas vricas? 15. Por qu la induccin apoptsica de las clulas sanas contribuye al hundimiento inmunitario en los enfermos de SIDA? Cul es la razn? 16. Qu rol desempean los radicales libres en la apoptosis de las clulas T? 17. Por qu se produce la autoinmunidad? 18. Cundo se desarrolla el cncer? Qu rol desempea la protena p53? 19. Indique otras enfermedades que seran causadas por apoptosis desregulada.

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Cuestionario Seminario 6 Terapia gnica contra el cncer 1. Qu es la terapia gnica? Cmo ha sido considerada en el tratamiento de cncer? 2. En qu se basa la terapia gnica? 3. Cules han sido los enfoques de la terapia gnica? 4. En qu consiste la leucemia? Cmo se ha tratado hasta la fecha? Cul es el nuevo enfoque? 5. Qu se entiende por marcador inocuo, en qu consiste y por qu se usa? 6. En qu consisten las vacunas gnicas? Qu problema trae consigo el tratamiento por este mtodo de prevencin? 7. Qu es la respuesta inmunitaria? Cmo participan las citoquinas en esta respuesta? 8. Cul es el enfoque ms moderno que ha sido ensayado? En qu consiste? Cul ha sido la respuesta de esta fase preliminar? y por qu no se considera ptima? 9. Se podr aplicar el concepto tradicional de vacuna a algunos tipos de cncer, a cul y por qu? 10. Cmo se ha concebido y aplicado el concepto de vacunas antioncolgicas o vacunas de ADN? 11. En qu consiste el modelo de terapia gnica basada en anticuerpos? 12. A qu se le denomina vacuna reforzada? 13. Cul sera el aporte de la tcnica de ADN recombinante? 14. Qu es un oncogn y qu es un gen supresor? 15. Qu avances se han obtenido con la insercin del gen supresor p53 sano en clulas cancerosas? 16. En qu consiste el fenmeno de solidaridad? 17. Cmo se realiz la experiencia del suicidio gnico? 18. En qu consiste la terapia gnica en el SIDA? 19. Cmo se aplica la terapia de los genes suicida en el sida? 20. Qu otras terapias se han desarrollado contra el sida?

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Cuestionario seminario 7 Radiacin solar y cncer de piel 1. Cul es la estadstica para el cncer de piel en EEUU y en cuntas formas se manifiesta, a qu forma corresponde cada uno, cul es la gravedad de cada tipo? 2. Cmo se produce una mutacin permanente a causa de la luz ultravioleta? 3. Cul es la poblacin de mayor riesgo en Australia? a qu se debe la susceptibilidad a contraer cncer de piel? 4. Cmo es la gnesis de un tumor de piel? Cmo se producen las mutaciones genticas inducidas por los rayos ultravioleta en genes de las clulas epiteliales? 5. Cules son los dos tipos de efectos nocivos de origen solar en las clulas de la piel? 6. Por qu se escogi el gen p53? Qu relacin hay con el ADN del papilomavirus humano? Qu se concluy luego de comparar tumores de diverso origen? 7. Qu son los puntos calientes de un gen? 8. Qu incidencia muestra el gen p53 a la mutacin en tumores no vinculados a la radiacin solar? 9. Por qu no se reparan los puntos de mutacin en algunas clulas donde la secuencia del gen p53 se ha alterado, como ocurre en otros casos? 10. Qu relacin hay entre la protena P53 en altas concentraciones dentro de la clula y la apoptosis? 11. Qu sucede cuando la protena P53 est ausentes en ratones sometidos a radiacin ultravioleta, comparados con ratones normales? 12. Por qu prolifera una clula con el gen p53 mutado en tanto las clulas normales que la rodean sufren apoptosis? 13. Qu es un agente carcinognico? 14. Qu es la enfermedad de Gorlin?

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Cuestionario seminario 8 Lucha contra el Cncer de prstata 1. Cul es la incidencia del cncer de prstata en la poblacin masculina norteamericana? 2. En qu consiste la prueba de cribado no invasiva? Qu otras pruebas existen para la deteccin de este tipo de cncer? 3. Cul es el problema de la deteccin del antgeno PSA? 4. Qu es la velocidad del antgeno especfico? 5. Qu significado tiene el NPI? 6. Qu relacin existe entre cncer de prstata y cncer de mamas? 7. Cules son los estadios del cncer de prstata? Describir y caracterizarlos. Qu es el TNM? 8. Qu es la metstasis? En cual de los estadios hay ya indicios de metstasis? 9. Cules son los tratamientos que deben seguirse en cada estadio del cncer de prstata? 10. Qu es el ndice de Gleason? 11. Qu herramientas moleculares se usan para predecir el comportamiento de un tumor a nivel experimental? 12. Cul es el rol del gen p53 en el comportamiento tumoral? 13. Qu resultados se logran con la radioterapia clsica en el tratamiento de tumores prostticos? 14. En qu consiste la radioterapia conformacional tridimensional (RTC 3-D)? 15. Qu es la braquiterapia? Qu es la criociruga? 16. En qu consiste la terapia hormonal? 17. Qu es la terapia combinada? Qu significa el trmino neoadyuvante? 18. Cul es la relacin entre cncer de prstata y consumo de grasas en la dieta? 19. Cules son los potenciales marcadores de virulencia en el cncer de prstata?

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Cuestionario seminario 9 Envejecimiento 1. Qu es la memoria molecular de las clulas? 2. Qu genes confieren mayor longevidad a las levaduras? y cules en Caenorhabditis? 3. Qu causa produce en Drosophila una mayor longevidad? 4. Cules son las teoras imperantes sobre la naturaleza del envejecimiento? 5. Cules son los procesos moleculares responsables del envejecimiento? qu evidencias existen? 6. Qu relacin hay entre los genes que regulan el ciclo celular y el envejecimiento? 7. Cmo enfrenta la humanidad el envejecimiento? 8. Cules son los eventos celulares del envejecimiento? 9. Cmo se ha probado que el gen tin2 participa en el acortamiento del telmero? 10. Cules son los efectos de las mutaciones mitocondriales? 11. Qu efecto tiene el envejecimiento sobre los sistemas de rgano? 12. Cul es el aporte de los temas de este seminario a su labor de enfermera o enfermero?

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Cuestionario seminario 10 Genes que oponen resistencia al SIDA 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Qu datos apoyan la tesis que existen genes que protegen contra el SIDA? A qu se refiere con la frase estirpes diferentes de virus que producen SIDA? Qu quiere decir que el gen que codifica una protena sea polimrfico? Compare exogamia y endogamia qu significado tiene en la bsqueda de alelos con resistencia al SIDA? qu es un alelo? Qu es la cartografa gentica? qu estrategia pusieron en prctica para lograr el objetivode encontrar los genes que son protectores contra el SIDA? Cul es el mecanismo de interaccin del virus con los macrfagos? Cul es la historia natural del alelo de resistencia al SIDA? Cmo se distribuye en la poblacin humana el alelo de resistencia?

10. Cul es la perspectiva de los frmacos contra el SIDA? 11. Cul es la contribucin de los temas tratados en este trabajo a su formacin de enfermero o enfermera?

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ANEXO 6 EL CDIGO GENTICO Primera posicin U UUU-Phe U UUC-Phe UUA-Leu UUG-Leu CUU-Leu CUC-Leu C CUA-Leu CUG-Leu AUU-Ile AUC-Ile A AUA-Ile AUG-Met GUU-Ala GUC-Ala G GUA-Ala GUG-Ala C UCU-Ser UCC-Ser UCA-Ser UCG-Ser CCU-Pro CCC-Pro CCA-Pro CCG-Pro ACU-Thr ACC-Thr ACA-Thr ACG-Thr GCU-Ala GCC-Ala GCA-Ala GCG-Ala A UAU-Tyr UAC-Tyr UAA-Stop UAG-Stop CAU-His CAC-His CAA-Gln CAG-Gln AAU-Asn AAC-Asn AAA-Lys AAG-Lys GAU-Asp GAC-Asp GAA-Glu GAG-Glu G UGU-Cys UGC-Cys UGA-Stop UGG-Trp CGU-Arg CGC-Arg CGA-Arg CGG-Arg AGU-Ser AGC-Ser AGA-Arg AGG-Arg GGU-Gly GGC-Gly GGA-Gly GGG-Gly U C A G U C A G U C A G U C A G Segunda posicin Tercera posicin

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ANEXO 7 SMBOLO DE LOS AMINOCIDOS

A B C D E F G H I K L

Ala Asx Cys Asp Glu Phe Gly His Ile Lys Leu

Alanina Asparagina cido asprtico Cistena cido asprtico cido Glutmico Fenilalanina Glicina Histidina Isoleucina Lisina Leucina o

M N P Q R S T V W Y Z

Met Asn Pro Gln Arg Ser Thr Val Trp Tyr Glx

Metionina Asparagina Prolina Glutamina Arginina Serina Treonina Valina Triptfano Tirosina Glutamina o cido Glutmico

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