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Anexo: Compendio de preguntas de parciales anteriores (cursos 2000-2009):

Nota: la inclusión de las siguientes preguntas y, particularmente, las respuestas esperadas que sirvieron de guía
para la corrección de los parciales por parte de los docentes, no tienen otro propósito didáctico que el de orientar
a los estudiantes acerca de cómo son los parciales de la materia y de cómo se corrigen. Aquellas preguntas de
parciales que los docentes consideramos que aportaban a la mejor comprensión de algún capítulo de la materia,
fueron incluidas en la guía de problemas y no se repiten aquí. Algunas de las preguntas de parciales integran
más de un capítulo de las clases de problemas. Las preguntas de los parciales de la presente cursada tendrán el
mismo espíritu pero serán diferentes en sus enunciados. El orden de los temas no es el mismo que en la guía.
Regulación e Ingeniería Genética pP3Rv (construcción con Rv) [barras negras]
1) Los operones mce de Mycobacterium tuberculosis a) ¿Qué tipo de efecto tiene la presencia del gen Rv
(bacteria que produce la tuberculo-
sis) codifica para proteínas poten-
cialmente involucradas en la viru-
β-gal
lencia de este patógeno. En el ge- 500 pP3Rv 200 100
noma de M. tuberculosis hay 4 ope- Rv
rones mce similares en secuencia y Promotor mce
organización, que codifican para
proteínas secretadas o de membrana
pP3 β-gal
y una proteína de tipo invasina. Es-
tos genes son exclusivos de las mi-
cobacterias y no se encuentran en
pJEM15 β-gal
otras bacterias mejor caracterizadas
como Escherichia coli. Santángelo
y col (del INTA Castelar) publica-
A
ron en Microbiology (2002,
148:2997–3006) un trabajo en el
que estudian la regulación de este B
operón en base a la información
genómica disponible. Por un lado
C
conocían las secuencias estructura- sobre la regulación del gen quimérico?
les de los genes mce pero no tenían bien caracterizado b) Si la construcción que interesa analizar es pP3Rv
su promotor. Por otro lado, les llamó la atención un ¿para qué se hicieron los experimentos con pP3 y con
gen (llamado Rv) ubicado hacia 5’ de uno de los ope- pJEM15?
rones dado que codificaba para una proteína cuya es- c) ¿Por qué se reemplazó la secuencia codificante de
tructura predicha por los modelos bioinformáticos era mce por la de la β-gal?
similar a la de algunos factores de transcripción. Para Para investigar la localización del sitio de unión de la
estudiar la función de este gen realizaron las siguien- proteína codificada por Rv hicieron gel-shifting en los
tes construcciones quiméricas: que se diferencian electroforéticamente los DNAs
pP3Rv contiene el gen Rv completo (incluyendo el “sueltos” de los que tienen “pegados” una proteína
promotor de Rv), la región intergénica completa hasta porque ésta les re-
el codón de iniciación del primer gen mce (es decir, A B C trasa su migración
donde debería ubicarse el promotor de mce). La se- 1 2 3 1 2 3 1 2 3 - en el gel. Los
cuencia codificante para mce fue reemplazada por el DNAs se detectan
gen lac por hibridación con
pP3 es igual, pero sin Rv una sonda del
pJEM15 es el vector vacío (salvo por el gen lac) segmento
A, B y C representan segmentos de la región inter- génico. Se
génica (1-100, 1-200 y 200-500 pb hacia 5’ del ATG, ron los siguientes
respectivamente) productos de PCR:
Lo primero que hicieron fue estudiar el efecto de in- A) nucleótidos 1-
troducir las construcciones quiméricas en E. coli obte- 100 B) 1-200,
niendo los siguientes resultados: + C) 200-500 con 1)
Efecto del gen Rv sobre el promotor mce: búfer 2) ex tractos de bacterias transformadas de
Micobacterias transformadas con E.coli conteniendo la construcción pP3Rv; 3) extrac-
pJEM15 (vector sin insertos) [barras blancas] tos de bacterias de E. coli conteniendo la construc-
pP3 (construcción sin Rv) [barras grises] ción pP3
d) ¿Dónde se localiza el sitio de unión de la proteína?
 7 kb 3 kb 12 kb 2
e) ¿Por qué se utilizaron extractos de E. coli
(transformadas con las construcciones) y no de
micobacterias? E1 E2 E3 E4
promotor 21 pb 370 pb pb 130 pb
de actina 80
de tomate

vector
vera, c) tomate transgénico; hibridando con una sonda
de cDNA de longitud completa.
2) ¿Por qué habrá elegido tomate y no tabaco, por
ejemplo?
3) Analizando la expresión de los mRNAs de aloeve-
rina en distintos tejidos del tomate transgénico por la
técnica de Northern, usando como sonda al cDNA de
aloeverina de longitud completa, se observó lo si-
guiente:
Respuestas esperadas a) Activador a) ¿Cuáles son los tamaños del mRNA I y mRNA II?
b) La comparación entre la actividad de p3 y b) En el primer esquema ubique (con flechas) la pro-
p3Rv es lo que permite determinar que Rv es un bable ubicación del codón de iniciación y la del de
elemento activador (o represor si lo hubiese sido). terminación.
pJEM15 es un control negativo.
c) Porque es fácil de detectar enzimáticamente y los RNA de RNA de tomate transgénico
resultados no son afectados por la expresión de los Aloe vera: hoja raíz hoja raíz fruto flor
genes mce endógenos (cromosómicos) de las mico- _
bacterias tranformadas. mRNA I
d) 100-200
e) Porque necesito extraer de una célula que exprese
mRNA II
la proteína Rv, porque si no, nunca podría estudiar
su efecto.
2) El Dr. Cureta, en su eterna búsqueda de la pócima
de la juventud eterna, estudió la estructura y expre-
+
sión del gen de la aloeverina que produce una proteína c) ¿Por qué el Dr. Cureta reemplazó en su experimen-
de maravillosas propiedades curativas y rejuvenecedo- to el promotor de la aloeverina por el de la actina de
ras en Aloe vera (planta no comestible). Este gen da tomate? ¿Le parece que eligió el promotor más ade-
origen a dos proteínas diferentes en las hojas y las raí- cuado para sus propósitos? ¿Por qué?
ces de la planta por splicing alternativo. Sin embargo, d) ¿Qué conclusiones saca a partir de los resultados
la única que tiene propiedades especiales es la de la del Northern en cuanto a la especificidad tisular del
hoja que se produce en cantidades muy pequeñas. splicing del RNA del gen de la aloeverina?
Además, su purificación es ineficiente, con el agra- e) ¿Qué sugerencias experimentales le haría al Dr.
vante de que sus propiedades se ven afectadas por las Cureta para mejorar la performance de sus experimen-
fenoloxidasas que se liberan de los lisosomas cuando tos y así obtener los resultados deseados?
estas organelas se rompen en el proceso de homogeni- Respuestas 1) tomate, no da nada. Aloe vera: 3 ban-
zación. Esta es la estructura del gen de la aloeverina: das de 7, 3 y 12 kpb. Tomate transgénico: ídem. 2)
Porque el tabaco tampoco es comestible. El toma-
7 kb 3 kb 12 kb
te, sí. Respuesta alternativa: Si la idea es la de
mejorar la productividad, el tabaco (por su alta
E1 E2 E3 E4 producción de biomasa) podría haber sido una
promotor
210 pb 370 pb 8 0 pb 1 30 pb alternativa interesante. 3) a) 790 y 710, b) ATG:
Una flecha un poco a la derecha del extremo del
Las flechas indican sitios para la enzima HindIII. Los
exón 1 (no en el extremo porque siempre hay un ex-
dos mRNAs difieren porque en uno está presente y en
tremo 5´ de mRNA no codificante) o al principio del
el otro está ausente el exón E3 de 80 pb. El Dr. Cureta
exón 2. Stop: una flecha un poco a la izquierda del
decidió obtener tomates transgénicos transfectando
extremo derecho del exón 4 (siempre hay un segmento
con un plásmido recombinante con el gen clonado de
3´ no codificante a 3´ del codón de terminación), c) El
la aloeverina en el que había reemplazado al promotor
promotor nativo es poco eficiente y lo reemplaza por
nativo de la aloeverina por el de la actina de tomate,
uno constitutivo fuerte, pero podría haber elegido me-
con el fin de analizar la expresión de mRNAs de aloe-
jor el promotor: por ej. uno específico de fruto de to-
verina en los distintos tejidos:
mate, que es el tejido de interés para alimentación. d)
1) Sabiendo que los tomates no tienen ningún gen
Aparentemente, el sistema que permite reconocer al
endógeno homólogo al de la aloeverina, dibuje el
exón 3 como tal, es específico de hoja y de especie y,
patrón de bandas de hibridación que esperaría obtener
tal vez, de gen (pero eso no lo podemos determinar
en un Southern de DNAs genómicos digeridos con
con estos datos). e) Usar una construcción SIN intro-
HindIII provenientes de: a) tomate normal, b) Aloe
nes para evitar el procesamiento incorrecto.

3) Para el operón lactosa de Escherichia coli, indique
el genotipo de al menos uno de los diploides parciales
posibles capaces de producir beta-galactosidasa (codi-
ficada por el gen Z) constitutivamente y permeasa
(codificada por el gen Y) en forma normal (es decir
inducible con análogos de la lactosa) usando la no-
menclatura practicada en las clases de problemas.
Respuesta: lacI+ lacOc lacZ+ lacY- / lacI+ lacO+
lacZ- lacY+ (en alguno de los 2 genotipos lacI puede
ser lacI-)
3) En la película Blade II, el héroe (Blade) es un “se-
mi”vampiro que lucha a favor de la humanidad con
los vampiros “malos” que quieren dominar el mundo.
En una escena trascendental de la película, Blade es
capturado para poder extraer su sangre (y su ADN)
porque los vampiros estaban diseñando nuevas varian-
tes transgénicas clonadas con mejor adaptación. Si
bien ya habían logrado obtener vampiros resistentes a
la plata modificando el gen de la metalotionina, quer-
ían extraer de Blade un gen de resistencia a la luz so-
lar. Ud. ha sido contratado por los vampiros para
hacer este trabajo (le han prometido vida eterna como
forma de pago) y dispone de un laboratorio de inge-
niería genética excelentemente equipado que le permi-
te, entre otras cosas, cultivar in vitro vampiroblastos
(células equivalentes a los fibroblastos humanos). Los
vampiroblastos extraídos de vampiros comunes se
lisan en presencia de luz solar, mientras que las célu-
las extraídas del cuerpo de Blade son luminoresisten-
tes. No se dispone de información alguna sobre la se-
cuencia del gen a clonar, ni anticuerpos, ni secuencias
parciales de aminoácidos de la proteína. Tampoco se
pueden planear cruzamientos genéticos de Blade con
vampiresas para estudiar su progenie porque llevaría
mucho tiempo. Inspirándose en el ejemplo histórico
del clonado molecular de los primeros oncogenes
¿qué estrategia de clonado y caracterización funcional
del gen de resistencia a luz solar propondría?
Respuesta: En caso de seguir los pasos históricos
descriptos en el Recombinant DNA de Watson y col.:
se extrae ADN total de Blade (sólo o con una “etique-
ta” –tag- de secuencia nucleotídica conocida ligada) y
se lo usa para transfectar vampiroplastos por la técnica
de coprecipitación con fosfato de calcio. Después se
exponen los vampiroblastos a la luz y se extrae ADN
total de las células transgénicas resistentes y se fabrica
una genoteca en fago lambda. Se releva (“screenea”)
la genoteca con ADN repetitivo de Blade (el equiva-
lente a secuencias Alu) o con la sonda para el tag para
identificar el ADN procedente de Blade. Se confirma
la identidad del clon de lambda por transfección de
vampiroblastos que se convierten en luminoresisten-
tes.
Con técnicas más modernas se aislaría el ADN de
Blade y se lo clonaría en BACs (se puede aceptar que
sea en otros vectores como cósmidos o en fagos
lambda). Con mezclas (“pooles”) de clones recombi-
nantes se transfectan vampiroblastos para identificar
células luminoresistentes (por electroporación o usan-
do liposomas). A las mezclas que producen clones
positivos se las separa en clones individuales hasta
identificar el clon conteniendo el gen de interés. Una
3
vez identificado el clon se subclona y secuencia el
inserto para ver si hay ORFs candidatos, los cuales
son testados funcionalmente de la misma manera.
4) La Dra. Romántica está intentando encontrar genes
que aceleren la floración. Con este objetivo en mente
procede a transformar plantas de Arabidopsis thaliana
mediante la utilización de Agrobacterium, con la si-
guiente construcción:
LB y RB: bordes izquierdo y derecho del T-DNA,
35S: enhancer fuerte y constitutivo, nptII: gen de re-
sistencia a kanamicina Pnos: promotor constitutivo, t-
nos: terminador
Entre las miles de plantas generadas encuentra una
mutante
(M) que florece en la mitad de tiempo que las plantas
salvajes (wild type = wt). A partir de una hoja de esta
planta extrae DNA, lo digiere con BamHI, lo corre en
un gel de agarosa, transfiere a una membrana y lo re-
vela con una sonda radiactiva correspondiente al T-
DNA completo. Cuando cruzó esta planta con una
planta salvaje, dentro de la descendencia, algunas
plantas presentaron floración temprana y otras no. Al
repetir el Southern blot con 10 plantas de la F1 se ob-
tuvieron los siguientes resultados:
a) ¿Para qué se incluyó el gen quimérico npt II en la
construcción?
b) ¿Cuál fue el objetivo de introducir un enhancer
“suelto” no acompañado de un promotor o de una se-
cuencia estructural?
c) ¿Cree que el hecho de que se observen dos bandas
en el mutante parental se deba a que BamHI corte de-
ntro del T-DNA o a qué se insertaron dos T-DNAs (en
lugar de uno) en más de un lugar en el genoma? Ana-
lice teniendo en cuenta los resultados obtenidos con la
F1.
d) ¿Qué plantas de la F1 seguiría analizando? Justifi-
que. El hecho de conocer la secuencia de la construc-
ción utilizada le permitió a la Dra. Romántica median-
te PCR, secuenciación y finalmente comparación con
la base de datos del genoma de Arabidopsis, identifi-
car el sitio exacto de inserción del T-DNA. Este sitio
de inserción se encuentra 1 kpb río arriba (5’) de un
marco de lectura abierto aún no estudiado (ORF4329).
e) ¿Qué efecto cree que tiene la inserción del T-DNA
sobre el ORF4329? ¿Qué experimento haría para
comprobarlo? Muestre mediante un diagrama los re-
sultados esperados.

f) ¿Cree que el ORF4329 es un gen inductor o repre-
sor de la floración? Diseñe un experimento comple-
mentario al realizado por la Dra. Romántica que, me-
diante ingeniería genética, le permita comprobar su
hipótesis, indicando los resultados esperados. Recuer-
de que en la transformación mediante Agrobacterium
el T-DNA no se integra mediante recombinación
homóloga (en biobalística tampoco).
g) Como Arabidopsis es un yuyo y sus flores son bas-
tante feas, un estudiante de doctorado de la Dra.
Romántica está interesado en ver si los rosales tam-
bién tienen un gen homólogo al ORF4329. ¿Cómo lo
haría experimentalmente sabiendo que el genoma del
rosal no está secuenciado? En caso de que haya un
gen homologo al ORF4329 presente, ¿cómo clonaría
el gen homólogo completo?
Respuestas esperadas
a) Como gen marcador selectivo que permite selec-
cionar las plantas transgénicas de las no transgénicas
durante la regeneración de plantas en un medio conte-
niendo el antibiótico kanamicina
b) Porque el objeto del experimento es que este en-
hancer estimule constitutiva y fuertemente los promo-
tores cercanos al sitio de inserción del segmento T con
la esperanza de que alguno de ellos estimule la flora-
ción temprana.
c) No puede haber ocurrido que haya sólo un sitio de
inserción y que BamHI corte dentro del DNA-T pues
en la F1 las dos bandas segregan independientemente.
Seguramente el DNA-T se insertó en dos sitios distin-
tos.
d) Seguiría analizando alguna de las siguientes plan-
tas: 1, 6 o 9 ya que presentan floración temprana, pero
no heredaron el inserto del T-DNA no relacionado con
la inducción temprana de la floración. El descartar las
plantas 4, 7 y 10 facilita los pasos siguientes de identi-
ficación del sitio de inserción.
e) Dado que el T-DNA no interrumpe un gen ni el
promotor mínimo, pero sí se ubica cercano al promo-
tor, la inserción del DNA-T estaría aumentando la
transcripción del ORF4329 mediante los enhancers
35S. Para comprobar esta hipótesis habría que realizar
un Northern partiendo de mensajeros de plantas nor-
males y mutantes (sería interesante comparar también
tejidos florales y no florales ya que el enhancer 35S es
constitutivo) utilizando una sonda complementaria al
ORF4329.
f) Es un inductor de la floración pues al aumentar su
expresión se adelanta la floración. Para comprobarlo
se podría hacer un antisense del ORF4329 y espero
ver un retraso o ausencia de floración. Si repito el
Northern vería menos mensajero que en el normal.
g) Otra respuesta alternativa que pueden pensar los
alumnos sería realizar un knock out de ese ORF. En
realidad teóricamente no sería correcto pues en plan-
tas no suelen realizarse knock outs, pero ellos proba-
blemente no lo sepan (conceptualmente no importa,
técnicamente, lo knock outs en la actualidad, salvo en
bacterias, se hacen por interferencia transformando
transitoriamente con RNAi o establemente con cons-
trucciones que expresen iRNA). Además está la acla-
ración de que la integración del T-DNA no es por re-
4
combinación homóloga y sí saben que para hacer un
knock out dirigido se requiere recombinación homó-
loga.
h) Haría un Southern usando como sonda al
ORF4329 y condiciones de baja rigurosidad en la
hibridación. Para clonarlo haría una genoteca y locali-
zaría el gen homólogo mediante hibridación con la
sonda de Arabidopsis.
5) Los ritmos circadianos que corresponden a ciclos
de aproximadamente 24 horas permiten a los orga-
nismos regular su actividad con la alternancia día-
noche. Aunque estos ritmos son autónomos, algunos
estímulos externos, tales como la luz, pueden “poner
en hora” este reloj interno. En mamíferos, existe un
marcapasos central, ubicado en el núcleo supra-
quiasmático (NSQ) del hipotálamo anterior. Varios
genes están involucrados en el mecanismo molecular
del reloj interno, existiendo entre ellos lazos de retroa-
limentación positiva y negativa a nivel de la expresión
y de la actividad de las proteínas que codifican. Se
sabe que la fase de este marcapasos central se puede
adelantar con un estímulo lumínico durante la “noche”
relativa que es captado en la retina y llevado al NSQ a
través del tracto retino-hipotalámico (que libera el
neurotransmisor glutamato) y que este cambio de fase
está asociado a un aumento rápido de la expresión del
gen Per1. Río arriba (hacia 5’) de este gen se encuen-
tra una secuencia cre (elemento de respuesta a
cAMP), a la cual se puede unir en ciertas condiciones
el factor de transcripción CREB. Se realiza el siguien-
te experimento: a un cultivo sincronizado de células
del NSQ de ratón se lo estimula durante la noche rela-
tiva con concentraciones adecuadas de glutamato
(provoca el mismo efecto que la luz provoca in vivo) o
db-cAMP (dibutiril cAMP: análogo del cAMP que
puede atravesar la membrana celular) o con solución
salina (control). Después de 30 minutos se extraen
RNA y proteínas.
Northern Blot con sonda para Per1:
Control Glut db-cAMP
Relación entre CREB fosforilado (P) y no fosforilado
Relación Control Glut. db-cAMP
CREB-P/CREB 0,3 4,2 2,2
Esta relación se determinó realizando Western Blot
con anticuerpos anti-CREB y anti-CREB-P.
Para poder confirmar el rol de CREB se construyó el
siguiente sistema indicador (reportero) y se transfectó
en células del NSQ en cultivo.
Prom: promotor del gen Per1.
Prom Sec estr.gen luc
cre
La luciferasa (codificada por la secuencia estructural
del luc) es una enzima que reacciona con el agregado
de luciferina produciendo luminiscencia. Se ensaya la

actividad de estas células en las siguientes condicio-
nes:
+ inhibidor de AC - (baja expresión)
- glutamato - sin inhibidor - (baja expr.)
+ inhibidor de AC + (expr. media)
+ glutamato - sin inhibidor +++ (alta expr.)
AC (adenilato ciclasa): enzima que sintetiza cAMP a
partir de ATP, responsable del aumento de cAMP du-
rante la transducción de señales de diversos estímulos.
Interpretar estos resultados.
Se sospecha que el glutamato ejerce su acción vía
cAMP pero que esta podría no ser la única vía en que
lo hace. ¿Qué opina acerca del rol de CREB en los dos
tipos de estímulo? Justificar.
Respuestas a) Esta respuesta implica un mínimo de
detalle de descripción de para qué se hicieron los 3
experimentos y qué datos aporta cada uno. Conclusio-
nes: tanto glutamato como cAMP inducen la expre-
sión de Per1. La inducción por glutamato es más fuer-
te que por cAMP. Además, el glutamato es capaz de
activar el promotor de CREB aún en presencia de in-
hibidores de la AC.
b) La contestación a esta pregunta puede tener algunas
variantes de respuesta y se evaluará en función de la
coherencia del razonamiento que se emplee. La res-
puesta esperada es que puede deberse a que el gluta-
mato activa la misma vía de señal del cAMP y además
otra (u otras) o a que activan vías totalmente separa-
das que terminan en el mismo efecto (siendo la de glu-
tamato una vía más fuerte). En cuanto a CREB, se ve
que la fosforilación de CREB se corresponde con una
alta expresión, por lo que podría pensarse que CREB
está implicado en la activación de Per1. El menor
efecto de cAMP también se ve en este caso, lo que
lleva a pensar en principio que la menor expresión
vista con cAMP se debería a una menor activación de
CREB y no a que falte activarse otro factor de trans-
cripción además de CREB que sí se active con gluta-
mato.
6) Ciertos individuos de la abeja Apis mellifera pre-
sentan un comportamiento particular en cuanto a la
limpieza de las celdas que contienen a las larvas para-
sitadas por el ácaro Varroa destructor (llamado com-
portamiento higiénico). Este comportamiento se debe
a la capacidad de las abejas de percibir un compuesto
químico volátil producido por el ácaro. Con el fin de
establecer si dicho comportamiento tiene una base
genética, se llevaron a cabo una serie de estudios y
experimentos que permitieron identificar algunos ge-
nes candidatos (es decir, genes responsables del com-
portamiento higiénico).
a. ¿Qué metodología/s puede/n haber sido empleada/s
para la detección de estos genes candidatos?
A continuación, los investigadores se interesaron por
la regulación de uno de los genes de interés, y enten-
der así la relación entre la expresión de los mismos y
la presencia de los volátiles emitidos por el ácaro, se
realizaron las siguientes construcciones:
(en blanco se indica la región del promotor que ha
sido delecionada).
5
b. ¿Cómo se evaluó la relevancia relativa de cada una
de las regiones del promotor? (indique el gen reporte-
ro y la obtención de los individuos utilizados para rea-
lizar esta medición). ¿Qué cree usted que representa
en el esquema la región pintada de negro? ¿Qué in-
formación brindan, con respecto a la estructura del
promotor, los resultados que se presentan en el es-
quema?
c. Finalmente, los investigadores se preguntaban cómo
validar sus resultados, tanto con respecto a la función
del gen (efecto sobre el comportamiento) como a su
regulación. Elija una de estas dos opciones, y detalle
al menos una metodología para poner a prueba su
hipótesis.
Rta a. Marcadores, genoteca dif, o arrays (por cual-
quiera que lo encaren esta bien, mientras que este bien
explicado)
b. Deben mencionar un gen reportero (idealmente lu-
ciferasa, proque ese es el que vieron para insectos) y
deben explicar brevemente como transfectar insec-
tos con estas construcciones. luego los deben exponer
al olor para medir actividad. Parte pintada de negro:
prom. minimo, siemrpe debe estar. regulacion: deben
decir qué regiones de importancia se detactan en cada
parte (2 reg positivas, 1a en la primera, 1a en la terce-
ra)
c. Función del gen: knockout, transposon-tagging,
antisense. Funcion de las regiones regulatorias: apun-
tamos a que se acuerden del ejemplo de footprinting
de la guia.
7) Un grupo de criadores de caballos de Tennessee
están interesados en el fenotipo champagne del pelaje
de sus animales, que es controlado por un gen au-
tosómico dominante CH, pero resulta muy difícil dis-
tinguirlo del efecto producido por dilución de otros
genes relacionados con la síntesis de melanina. Re-
suelto a revelar las bases moleculares de este fenotipo
acude al Departamento de Genética de la Universidad
de Tennessee donde le proveen los siguientes datos de
cruzamientos prueba en los cuales estaba involucrado
uno de los genes candidatos (llamado P de pigmento)
y obtiene la siguiente segregación genotípica:
CHch Pp = 40 % CHch pp = 10 %
chch pp = 40 % chch Pp = 10 %
a) ¿A qué distancia genética se encuentran CH y P?
b) Dada la implicancia del gen P en la pigmentación,
¿qué técnica utilizaría Ud. para verificar la expresión
de dicho gen si conociera al menos un par de primers
que amplifiquen alguno de sus exones? Puntualice de
qué tejido partiría, qué aislaría y qué técnica emplear-
ía ¿Qué control positivo realizaría?
Para dilucidar las bases moleculares implicadas en el
mecanismo de pigmentación y dado que el gen P es un
miembro de la familia de proteínas transportadoras

que cumplen un rol importante en el desarrollo del
color del pelaje en mamíferos, Ud. decide investigar la
regulación de la expresión de esta proteína. Según la
bibliografía esta proteína había sido referida previa-
mente como proton/amino acid transporter en huma-
nos y en ratón. Para comenzar sus estudios clona la
región promotora (p) ubicada a 5´del gen YFP (Yellow
Fluorescent Protein). Luego, realiza los siguientes
experimentos de transfección:
Línea celular Plásmido Fluorescencia
YFP
Melanocitos M3 p/YFP +++
Queratinocitos Q8 p/YFP ----
c) ¿Cómo interpreta estos resultados en términos de
mecanismos de regulación de la expresión génica y
especificidad de tejidos?
Para confirmar lo anterior, decide realizar un ensayo
de EMSA (electrophoretic mobility shift assay). Para
ello, utiliza nuevamente la región promotora de este
gen y la marca en uno de sus extremos 5´ con 32P. In-
cuba la preparación con y sin proteínas nucleares ex-
traídas de tejido cutáneo de los animales y corre un
gel nativo de agarosa. Luego revela por autoradiograf-
ía.
Calle 1: Región promotora del
gen P marcada con 32P e incu-
bada sin extracto nuclear.
Calle 2: Región promotora del
gen P marcada con 32P e incu-
bada con extracto nuclear.
1 2
e) ¿Por qué observa diferencias en la corrida electro-
forética? Explique si estos resultados se relacionan
con los resultados del ítem d) y por qué.
Rtas.
a) 20 % de recombinantes, por lo tanto, se encuentran
a 20 unidades de recombinación.
b) Se parte de tejido cutáneo y se realiza una extrac-
ción de RNA. Posteriormente se realiza una retro-
transcripción a fin de obtener cDNA. Finalmente se
hace una PCR usando el par de primers (en lo posible
cuantitativa qRT-PCR) que amplifiquen alguna región
correspondiente a un exón determinado del gen P y así
verificar la expresión del mismo, tejido-específica.
Como control se podría realizar una PCR para algún
gen constitutivo o conocido de ese tejido, por ejemplo
B-actina.
c) YFP se regula transcripcionalmente, se expresa
bien en melanocitos y no en queratinocitos. Por lo tan-
to, en este tipo celular se encuentran factores de trans-
cripción específicos necesarios que se unen a regiones
regulatorias que posibilitan la expresión del gen repor-
tero y por lo tanto, regularían también la transcripción
del gen P.
e) Las diferencias en la corrida electroforética se de-
ben a que al incubar la región promotora/reguladora
con un extracto nuclear propio del tejido específico, se
6
le unen factores de transcripción y regulatorios y al
correr los complejos en un gel nativo y revelar por
autoradiografía, la marca de 32P aparece retrasada en
la calle con extracto porque pesa más por tener los
factores unidos. Estos resultados apoyan los obtenidos
en el punto anterior donde se verifica la actividad
transcripcional en el caso de existir factores específi-
cos para la región promotora de P.
8) En un laboratorio se obtuvieron protoplastos (célu-
las vegetales sin pared) a partir de células de mesófilo
de tabaco. Los mismos fueron electroporados (trans-
formados en forma transitoria, es decir, sin buscar in-
tegración estable) con tres plásmidos recombinantes
distintos (uno por vez y en distintas células). Los 3
plásmidos portan la secuencia codificante para la beta-
glucouronidasa (GUS) proveniente de un gen bacte-
riano llamado uid A (cuya expresión transitoria puede
detectarse mediante una reacción que da color azul, en
una forma muy similar a la que se puede detectar al
producto del gen lac Z) y un terminador adecuado pa-
ra plantas. Lo que varía en los distintos plásmidos es
el promotor (acompañado del respectivo enhancer en
los casos 1 y 2, en el caso 3 no lo hay) que controla la
expresión de las secuencias estructurales.
1 Promotor secuencia estructu- terminador
Rubisco ral para GUS rubisco
2 Promotor 35S secuencia estructu- terminador
ral para GUS rubisco
3 Promotor lac secuencia estructu- terminador
ral para GUS rubisco
Aclaraciones: Rubisco = ribulosa bifosfato carboxila-
sa (responsable de la fijación de C02 en la fotosíntesis)
similar al de un problema de la guía; 35S = transcripto
del virus del mosaico del coliflor (CaMV) que se ex-
presa en forma constitutiva; lac = operón lactosa de E.
coli.
1) Los investigadores no agregaron controles negati-
vos o positivos ¿Es porque alguna/s de las 3 construc-
ciones podría/n ser, a su vez, control/es positivo y/o
negativo? Explique
2) ¿Con cuáles de las construcciones observará la apa-
rición de color azul en las siguientes situaciones?
a) protoplastos expuestos a la luz
b) protoplastos en oscuridad
c) protoplastos en oscuridad suplementados con lactosa
d) protoplastos en oscuridad suplementados con lac-
tosa y glucosa
3) El laboratorio no probó variantes de terminadores
¿Se podría haber agregado el terminador de otro gen?
Explique si esto podría haber afectado los resultados.
RTA:1) Rubisco: promotor INDUCIBLE por luz, sólo
inducirá expresión cuando hay luz (en (a)). El 35S por
ser constitutivo, se expresará en todas las condiciones.
El lac es un promotor procariótico, por lo que NO es
funcional en plantas. Nunca podrá inducir expresión.
Además, aunque funcionara, carece del gen codifican-

te para el represor y del gen para CAP (o CRP) como
para poder activarse o reprimirse.
La construcción 1 sirve como control positivo y la 3
de negativo, por todo lo anterior.
2) a) 1 y 2
b) 2
c) 2
d) 2
3) Salvo excepción, el terminador no influye en la ex-
presión de un gen. Podría hacerlo en la vida media del
mRNA (esto no se dio en teóricas) o en la unión (ad-
hesión) a algún componente subcelular (esto lo verán,
más adelante, en genética del desarrollo.
9) Las variantes heredables de la enfermedad de Alz-
heimer, se dividen en varios tipos dependiendo de la
causa genética que la produce. Una de ellas se cree
que se debe una mutación en el promotor/enhancer del
gen codificante para la APP (precursor de la proteína
beta A4 amiloide, que es la proteína que se acumula
excesiva y descontroladamente en esta enfermedad).
Otra se debe a una falla en el procesamiento (splicing)
alternativo del exón 19.
En un estudio se produjeron ratones transgénicos que
expresan APP murina bajo el control del promo-
tor/enhancer aislado de DNA de humanos enfermos.
Los ratones transgénicos enfermaron de Alzheimer a
edad adulta.
Al analizar por Southern blot a los ratones obtenidos,
mediante hibridación con cDNA de APP (primera co-
lumna) o con oligonucleótidos complementarios a las
secuencias del promotor diferenciales (2° y 3° colum-
nas), se observó el siguiente patrón:
Sonda: cDNA Sonda: promotor Sonda: promotor
APP murino APP murino APP humana
Ratón Ratón Ratón Ratón Ratón Ratón
normal transg. normal transg. normal transg.
a) ¿Por qué la banda del segundo carril electroforéti-
co (columna 1) tiene un color más intenso?
b) Explique las diferencias observadas al utilizar
sondas de promotores de origen humano y muri-
no.
Posteriormente, realizaron Northern blots con RNA de
cerebro de ratón, usando como sonda cDNA de APP
en ratones transgénicos jóvenes (sanos) y adultos (en-
fermos).
Ratones jóvenes Ratones adultos
Normal Transg Nor- Transg
. mal .
c) ¿Qué conclusión extrae en cuanto al rol de la trans-
cripción?
d) ¿Qué fenotipos se obtendrían si (utilizando el mis-
mo promotor), en lugar de la secuencia codificante
para APP se hubiera utilizado:
i) un gen indicador (reportero) como GFP,
7
ii) la secuencia codificante de APP mutagenizada
para contener un codón de terminación de lectura muy
cercano al codón de iniciación
iii) una secuencia antisentido o interferente?
Los ratones transgénicos correspondientes: ¿desarro-
llarían Alzheimer o qué? Estos experimentos ¿servir-
ían para reforzar su conclusión en c)?
Posteriormente, decidieron cruzar ratones transgéni-
cos y sanos, comprobando que el carácter fue domi-
nante (como ocurre en humanos). Por otro lado, con-
siguieron una muy rara mutante que, sometida a de-
terminadas condiciones de alimentación y estrés mos-
traba la aparición de Alzheimer por problemas de
splicing del RNA de APP tal como ocurre en huma-
nos.
Decidieron, entonces hacer un cruzamiento entre
transgénicos (homocigotas para el transgén) y mutan-
tes (también homocigotas). Para determinar el fenoti-
po, se los dejó llegar a edad adulta. En caso de no des-
arrollar Alzheimer, se los sometió a condiciones de
alimentación especial y estrés y, posteriormente, se
los volvió a evaluar.
- Toda la F1desarrolló Alzheimer sin necesidad de
someterlos a alimentación especial y estrés.
- En la F2 se obtuvieron 236 ratones Alzheimer sin
necesidad de someterlos a alimentación especial y
estrés, 64 que desarrollaron Alzheimer únicamente
después de tratamiento especial y 23 que nunca desa-
rrollaron Alzheimer.
e) ¿Se ajusta este resultado a las proporciones espera-
das a partir de las leyes de Mendel? En caso de no ser
así, explicar estos resultados y comprobar la hipótesis.
Rta a) Porque detecta las copias endógenas del gen
normal ya presentes en el ratón y, además, la copia
(adicional) del transgén APP.
b) La sonda murina detecta el gen endógeno pero no
el transgén, la humana: viceversa
c) En ratones jóvenes, la expresión es similar. En los
adultos, disminuye notablemente en los normales y
aumenta en los transgénicos. Existiría asociación entre
la expresión de APP y aparición de Alzheimer.
d) i) Fluorescencia leve en cortes de cerebro de ratón
joven y fluorescencia fuerte en adultos
ii) Ninguna diferencia
iii) Ninguna diferencia o, dependiendo del grado de
interferencia, puede haber letalidad debida a la no
expresión de APP en ratones jóvenes (ambas respues-
tas se considerarán correctas)
En ninguno de los 3 casos se desarrollará Alzheimer.
Refuerzan la conclusión de c) porque sirven de con-
troles (testigos) negativos, indicando que no es la mu-
tación en el promotor la causante directa de este
comportamiento, sino la resultante sobre-expresión
descontrolada del gen de APP.
e) Epístasis dominante 12:3:1
10) Hace poco más de una década se desarrolló, me-
diante ingeniería genética, una tecnología para estu-
diar los genes expresados por un determinado patóge-
no cuando éste infecta a un huésped. Esta tecnología
se denominó in vivo expression technology (IVET).
Esta estrategia se utilizó para hallar genes que se ex-
presan diferencialmente en Salmonella cuando ésta

infecta ratones. Para ello se generó una genoteca
genómica empleando ADN genómico de Salmonella
digerido con una enzima de restricción de corte fre-
cuente, en cantidades limitantes, y luego clonado en el
MCS del siguiente plásmido:
OriR6K
AmpR mob
LacZ
CAT
MCS
AmpR: gen de resistencia a ampicilina
mob: origen de transferencia conjugativa dependiente
de genes tra (no codificados en el plásmido)
CAT: gen de resistencia a cloranfenicol sin su promo-
tor
oriR6K: origen de replicación dependiente de la pro-
teína pi (codificada por el gen pir+)
Lac Z -galactosidasa sin su promotor
MCS: sitio de clonado múltiple
Luego de ligar, se transformaron E. coli competentes
con el objetivo de transferir mediante conjugación el
plásmido a las salmonelas dado que estas últimas no
eran susceptibles de ser transformadas. El propósito
de esta etapa del experimento es generar una genoteca
de salmonelas donde el plásmido de la figura 1 se
haya integrado al genoma bacteriano por recombina-
ción homóloga (el segmento clonado presenta la se-
cuencia homóloga en el genoma).
a) ¿Cómo debe ser el genotipo de las E. coli en cuanto
a los genes pir, tra, y recA (participa en la recombina-
ción homóloga)? ¿Cómo se seleccionaron las E. coli
transformadas? Justificar
b) ¿Cómo debe ser el genotipo de las salmonelas en
cuanto a los genes pir y recA? ¿Cómo se seleccionan a
las salmonelas que integraron el plásmido? Justificar.
c) Esquematice la región homóloga en el genoma de
Salmonella luego de ocurrir la recombinación homó-
loga donde se integra el plásmido.
Una de las particularidades de esta construcción es
que los genes CAT y LacZ están desprovistos de pro-
motor por lo que solo se podrán expresar (como men-
sajero policistrónico) si en el MCS se clonó un frag-
mento de ADN que contiene un promotor en la orien-
tación adecuada.
d) Esquematice el plásmido recombinante incluyendo:
el inserto, secuencias de Shine-Dalgarno, ATG inicia-
dores, codones STOP y terminadores de la transcrip-
ción.
e) ¿Por qué se realizó una biblioteca genómica y no
una de cDNA?
Con estas salmonelas recombinantes (que eran sensi-
bles a cloranfenicol y LacZ-) se infectaron ratones a
los cuales se les suministró cloranfenicol. Luego de 3
días se sacrificaron los ratones y se recuperaron las
bacterias que sobrevivieron las cuales fueron plaquea-
das en LB + X-gal (da colonias azu - infección in vivo utilizando los genes CAT y LacZ
galactosidasa).
f) ¿Qué característica tendrán las bacterias aisladas de
los ratones (in vivo) en cuanto a la orientación y ex-
8
presión del inserto? ¿Por qué no fue necesario agre-
gar IPTG?
g) En dichas placas, ¿a qué tipo de insertos corres-
ponden las colonias blancas y a cuales las azules?
¿Esperaría que haya más colonias azules o más blan-
cas? (No pierda de vista el objetivo de esta estrategia
generada).
h) A partir de la obtención de colonias de interés,
¿cómo haría para identificar los genes de Salmonella
que se expresan específicamente durante una infec-
ción? Explique brevemente los pasos a seguir.
i) ¿Cómo evaluaría funcionalmente los genes identifi-
cados?
Respuestas:
a) Las E. coli deben ser :
- pir+ : para que el plásmido pueda replicar y para po-
der transferirlo completo a las salmonelas.
- tra+ : para tener los factores necesarios para poder
transferir el plásmido por conjugación a las salmone-
las.
- recA- : para evitar que el plásmido se integre al ge-
noma en caso de existir alguna zona homóloga.
Para seleccionar, luego de transformar, se crecen las
bacterias en medio con ampicilina (no se puede usar
cloranfenicol porque sino se estaría sesgando la selec-
ción a aquellas construcciones que incorporaron un
promotor que pueda expresarse en E. coli).
b) Las salmonelas deben ser:
- pir- : para que el plásmido no pueda replicar y cuan-
do se realice la selección solo sobrevivan y repliquen
las bacterias que integraron el plásmido al genoma.
- recA+: para que puedan integrar el plásmido por re-
combinación homóloga.
- AmpR
La selección de las bacterias debe realizarse creciendo
las bacterias en medio con ampicilina (no puede ser
cloranfenicol por motivos similares a los mencionados
en la pregunta anterior).
c)
ATG STOP ATG STOP
S-D S-D
Terminador
X´ CAT LacZ
X: inserto
X´: región homóloga en el cromosoma
d)
X´ CAT LacZ mob AmpR X
OriR6K
Cada gen tiene que tener su propia secuencia de Shi-
ne-Dalgarno (río arriba del ATG) y su propio STOP.
Ambos genes tienen que tener la misma orientación
para que puedan ser traducidos a partir del mismo
mensajero policistrónico. Por otra parte debe haber un
solo terminador de la transcripción rio abajo del lacZ
para que se genere el mensajero policistrónico.
e) Se realizó una biblioteca genómica porque el obje-
tivo es ver que promotores se encienden durante una
como reporteros. En una biblioteca de cDNA no se
encuentran los promotores y sí en una genómica.

f) Porque la expresión de la -gal está regulada por el
inserto (en caso de que contenga un promotor) y no
por el promotor y operador del operón Lac.
g) Las bacterias que sobrevivieron luego de la infec-
ción en ratón y selección con cloranfenicol son aque-
llas que expresaron el gen de resistencia a este antibi-
ótico. Esto sólo sucede si el inserto contiene un pro-
motor, en la orientación adecuada, que se expresa en
las bacterias durante la infección y por ende permite la
expresión del mensajero policistrónico que codifica
para el gen CAT.
Cuando se plaquea en medio LB + X-gal las colonias
azules son las que expresan -gal. Dado que esto solo
ocurre si el inserto tiene un promotor que es activo en
el medio LB, las colonias azules corresponden a bac-
terias que poseen un inserto que tiene un promotor
que se expresa tanto in vivo como in vitro, lo cual in-
cluye genes de expresión constitutivas.
En cambio, las colonias blancas corresponden a bacte-
rias con insertos donde el promotor que fue activo in
vivo (y por ende sobrevivieron a la selección con clo-
ranfenicol) fue inactivo in vitro. Es decir corresponde
a genes que solo fueron activos durante la infección.
Por lo tanto esperaría que haya más colonias azules.
h) Partiendo de las colonias blancas se amplifica por
PCR el inserto, utilizando primers complementarios a
las regiones del plásmido flanquantes al MCS y luego
se puede secuenciar dicho inserto. Utilizando dicha
secuencia se puede realizar una búsqueda bioinformá-
tica para ver a que gen corresponde, si el genoma está
secuenciado. Si no está secuenciado se puede utilizar
el inserto como sonda para buscar el gen completo en
una biblioteca genómica.
i) Por ejemplo se puede knockear el gen/genes en
cuestión y evaluar el proceso de infección en ratones,
comparando con la cepa salvaje.
11) El grupo de Ling y col. (2006) desarrolló una va-
cuna recombinante para el virus Newcasttle y el virus
de la laringotraqueítis infecciosa (ILTV), que son en-
fermedades cuarentenarias de los pollos, utilizando
para ello los genes de 2 antígenos de Newcasttle: el F
y el HN y uno de ILTV: el gB. Para ello, subclonaron
estos genes primero en un plásmido de E. coli con el
objetivo de incorporarlos (en un segundo paso) en el
genoma del virus Fowlpox (FPV, viruela de ave de
corral, un pariente del virus vaccinia) bajo el control
del promotor viral LP2EP2 (promotor temprano-
tardío). Además, agregaron una construcción conte-
niendo LacZ bajo el control de otro promotor viral
tardío (el P11). Finalmente se colocaron secuencias
homólogas (llamadas “brazos”) de FPV (Am1 y Am2
significando “arm” –brazo- 1 y 2). Todo esto, en un
vector de E. coli
como se muestra
en la figura y
que es un
plásmido suicida
(no tiene capaci-
dad de replica-
ción propia en
células de aves):
9
Posteriormente, transfectan este plásmido en células
de ave previamente infectadas con FPV.
a)¿Para qué hacen esta transfección en células infecta-
das y no en células sin virus?
Como resultado de lo anterior obtienen, sobre medio
sólido conteniendo X-gal, una monocapa de células
con muchas placas transparentes y otras pocas azules.
b)¿Con cuáles se quedaron y por qué?
De las placas seleccionadas aislaron inóculo con el
cual infectaron nuevas células que fueron analizadas
por PCR, Western e inmunofluorescencia, como se
muestra en la siguiente figura:
Fig: Células aviares
infectadas con FPV
solamente (C) o se-
leccionadas en el paso
anterior (D) después
de tratar con un anti-
cuerpo marcado con
fluoresceína.
c)¿Con qué anticuer-
pos habrán hecho este
estudio y el de wes-
tern? Es decir, ¿Qué
antígenos reconocen
estos reactivos?
d)¿Cuál sería el si-
guiente paso para
comprobar la efecti-
vidad de esta poten-
cial vacuna de nueva
generación?
e) Enumere 2 ventajas
que tendría usar esta vacuna respecto a las vacunas
convencionales que se usan hoy en día.
3) a) Para que se produzca el reemplazo alélico (re-
combinación homóloga entre plásmido y genoma de
FPV) y se construya así el virus recombinante
b) Con las azules porque la expresión de beta gal es
indicativa de la presencia de la inserción en los virus
recombinantes
c) Anticuerpos que reconocen F, HN, gB y ¿por qué
no? beta galactosidasa. De todos modos, sólo son im-
portantes lo 3 primeros porque el objetivo de todo esto
es inmunizar contra estos antígenos y la expresión de
beta galactosidasa ya se evaluó enzimáticamente.
d) Ensayos de protección vacunando y desafiando
posteriormente con los virus patogénicos.
e) Se puede hacer una única vacuna para 2 enferme-
dades distintas y no es necesario utilizar virus infec-
ciosos para elaborar la vacuna.
Mendel y extensiones
1) En los cobayos, el color de pelo (negro vs blanco)
es determinado por el gen B. Los símbolos negros re-
presentan a los cobayos negros y los blancos a los co-
bayos de fenotipo blanco. Se dispone del siguiente
árbol genealógico, en el cual los individuos II1 y II4
pertenecen a líneas altamente endocriadas (asumir que
pertenecen a líneas puras).

I 1 2 II) ¿Sobre qué fundamento(s) incluido(s) en la/s
II 1 2 3 4
1 2
III ? I) a) abuelos SS (enfermo) x NN (sano)  padres SN
a) Represente el genotipo probable de cada individuo
(en los casos de que pueda ser más de uno, represente
con un guión bajo, i.e. B_)
b) Calcule la probabilidad de que un descendiente del
cruzamiento entre III1 y III2 sea blanco. Para contes-
tar es suficiente que escriba los genotipos al lado de
los símbolos en el esquema y las probabilidades (sólo
de las que se usarán para hacer los cálculos) sobre el
esquema (puede dibujarlo o escribir sobre este enun-
ciado). De lo contrario, explique su razonamiento
Respuestas esperadas:
I Bb 1 Bb
2
BB 2/3 BB
II 1 2 bb ---Bb
3 4
1/3
½b ½ bBB ½ BB
III Bb 1 ? 2 ½ Bb
En caso de respuesta con explicación:
I1 y I2 tienen que ser heterocigotas (Bb) porque si no,
no podrían tener un hijo blanco
II1 y II4 son BB por definición de líneas puras, II2 bb
porque su fenotipo refleja su genotipo
II3 es B_ porque no podemos saber qué segundo alelo
recibió. Tiene 1/3 de posibilidades de ser BB y 2/3 de
ser Bb (son tercios y no cuartos porque se descarta
que pueda ser bb dado que su pelaje es negro).
III1 es Bb porque deriva de un BB y un bb
III2 es B_ dado que, como se explica arriba, existe
una probabilidad de 2/3 que su padre II3 sea Bb
Si II3 era BB, III2 es BB. Si II3 era Bb, existe ½ de
probabilidad de que III2 sea BB o Bb.
Sólo si III2 resulta Bb, podrá tener ¼ de posibilidad
de tener un hijo blanco con III1
Por lo tanto, la probabilidad de que se produzca un
cobayo blanco es (2/3)(1/2)(1/4) = 2/24 = 1/12
2) La anemia de células falciformes (ACF) es un pro-
ceso hereditario humano causado por un alelo au-
tosómico recesivo de muy baja incidencia en las po-
blaciones occidentales. Un matrimonio quiere conocer
la probabilidad de tener un hijo afectado. Con sus co-
nocimientos sobre herencia mendeliana ¿qué podría
decirles si:
a) ambos miembros de la pareja son normales, pero
cada uno de ellos tiene un padre afectado y el otro
progenitor no tiene historia familiar de ACF?
b) el marido está afectado por la enfermedad pero la
mujer no tiene antecedentes familiares de ACF?
I) Para cada caso construya las genealogías posibles
para esta familia indicando los genotipos y fenotipos
de todos los individuos involucrados.
10
ley(es) de Mendel) se apoyan sus predicciones en los
casos anteriores?
Nomenclatura: S alelo determinante de hemoglobina
falsiforme, N de Hb normal, _ puede ser cualquiera de
los 2 alelos (N o S)
Respuesta: a) ¼ b) 0
(sanos en ambos casos)  hijos posibles NN, SN o SS
b) abuelos en un caso: S_ x S_ (ambos sanos o en-
fermos)  padre SS (enfermo), abuelos en otro caso
NN x NN  padre NN (sanos todos)
II) En el concepto de segregación de los alelos al for-
mar las gametas que darán origen a la progenie expli-
citada en la primera ley de Mendel.
3) La corea de Huntington es una enfermedad rara,
mortal, que aparece normalmente a mediana edad. Se
debe a un alelo dominante. Un hombre fenotípicamen-
te normal, de poco más de 20 años, advierte que su
padre ha desarrollado la corea de Huntington.
a) ¿Cuál es la probabilidad de que más tarde él mismo
desarrolle la enfermedad?
b) ¿Cuál es la probabilidad de que la desarrolle su hijo
al cabo del tiempo? (Nota: Para sus cálculos asuma
que la frecuencia del alelo que produce la enfermedad
en la población humana es insignificante).
Respuesta Suponiendo que el padre que desarrolla la
enfermedad fuese heterozigota para el alelo mutante
(dado que la probabilidad de que también lo tenga la
madre es insignificante): a) ½ b) ¼.
Si suponen que el padre también podía ser homocigota
(además de heterocigota) y se hacen los cálculos co-
rrectos [a) 1 b) ½ ] para esta segunda posibilidad el
problema se considerará bien contestado. Si ponen
homocigota como única posibilidad aún cuando se
hagan los cálculos correctos, el problema está mal
contestado.
4) Dos plantas enanas de maíz (E1 y E2) tenían origen
distinto, pero eran fenotípicamente idénticas. Se cru-
zaron cada una de estas plantas enanas con una línea
altamente endocriada de plantas altas que, se sabía,
son homozigóticas para todos los genes que determi-
nan el tamaño. Ambos cruces dieron lugar a una F1
constituida únicamente por plantas altas. Al autofe-
cundar cualquier planta de la F1, la proporción de la
F2 fue de 3 altas: 1 enana. Los cruzamientos entre las
dos líneas enanas paternas E1 x E2, solo dieron lugar
a plantas altas en la F1. A pesar de este resultado, en
la F2 reaparecieron las variantes enanas. La propor-
ción de plantas enanas en la F2 fue de 7/16.
a) Explicar los resultados obtenidos, indicando todos
los genotipos implicados.
b) ¿Qué proporciones genotípicas y fenotípicas espe-
raría si se realizase el cruzamiento prueba de la F1 del
cruzamiento E1 x E2 con el progenitor E1?
Respuesta a) Dos genes afectan al tamaño
A (normal)> a (enanismo 1)
B (normal)> b (enanismo 2)
[Es un caso de epístasis complementaria]
P E1=AAbb x E2=aaBB
F1 AaBb (altas)
F2 9 A_B_ (altas) vs 7 aa__ o __bb (enanas)

b) AaBb x AAbb  AABb ¼, AaBb ¼, AAbb ¼, A-
abb ¼.
Proporciones fenotípicas: A- B- 1/2 altas; A- bb 1/2
enanas
5) Un criador de canarios desea en generar aves de
color naranja. Con este objetivo cruza animales de una
raza (es decir, altamente endocriada) amarilla con
animales de una raza roja. A pesar de sus expectativas
todos los animales de la descendencia resultaron de
color rojo. Sin darse por vencido, decidió cruzar esta
F1 con animales de la raza parental amarilla. Para su
sorpresa no solo los animales no resultaron naranjas,
sino que tuvieron variados colores: 25 rojos, 27 verdes
y 48 amarillos. Completamente desconcertado decide
llamarlo a usted como genetista para responder a los
siguientes interrogantes:
a) ¿Es posible que el color de estas aves esté determi-
nado por un solo locus?
b) ¿Y por dos loci?
Justifique por que sí o por qué no, indicando los alelos
probables de los parentales y de la descendencia, y
alguna explicación bioquímica.
c) ¿Cómo haría para validar estadísticamente su hipó-
tesis? Explique brevemente sin realizar los cálculos.
Respuesta:
a) En primer lugar asumimos parentales homocigotas
porque se trata de razas en las cuales hay mucha en-
docría. Si fuera determinado por un solo locus tene-
mos
AA (rojo) x aa (amarillo)
Aa (rojo) x aa
½ Aa (rojo); ½ aa (amarillo)
Deberíamos tener sólo fenotipos rojos y amarillos y en
igual cantidad
b) Si son dos loci tenemos
A1A1B1B1 (rojo) x A2A2B2B2 (amarillo)
A1A2B1B2 (rojos) x A2A2B2B2
A1A2B1B2 (rojos); A1A2B2B2; A2A2B1B2;
A2A2B2B2 (amarillos)
De lo genotipos restantes uno debería dar fenotipo
amarillo y el otro verde (no importa cual por simetría).
Entonces supongamos que A1A2B2B2 es verde y
A2A2B1B2 es amarillo.
En este caso la relación rojo:verde:amarillo debería
ser 1:1:2 que es lo que se observa.
Una posible explicación sería la siguiente vía de pro-
ducción de pigmentos:
A1 B1
Amarillo verde rojo
Nota: A y B no están ligados porque si lo estuvieran
en la F1 habría una frecuencia de gametas A1B1 ma-
yor a ¼ con lo cual más de ¼ de la descendencia de-
bería ser roja.
c) Prueba de bondad de ajuste (chi-cuadrado) a una
relación 1:1:2
11
6) Se presentó ante los tribunales de justicia el si-
guiente caso: la familia Pérez reclama que cierto bebé
(Juan), que les dieron en la maternidad, no les perte-
nece y que, en cambio, el bebé Felipe, que tiene la
familia García, es el suyo y se lo cambiaron. La fami-
lia García niega este hecho, y el tribunal ordena el
examen de los grupos sanguíneos de los bebes y de los
padres, con los siguientes resultados:
Ma- Pa- Bebé
dre dre
Familia Pérez AB O A (Juan)
Flia. García A O O (Felipe)
¿Qué familia tiene razón y por qué?
Respuesta: la García. Si escribimos los genotipos
completos de los padres resulta claro que el primer
podría ser resultado de cualquiera de las 2 parejas,
pero el segundo bebé sólo de la segunda
Ma- Pa- Bebé
dre dre
Familia Pérez AB OO AO
Flia García AO OO OO
Mapeo
1) En una determinada especie animal los loci A,a; B,
b y C,c se localizan en el mismo autosoma. El locus
B,b es el central. La distancia entre A,a y B,b es de 20
unidades de mapa, la distancia entre B, b y C, c es de
10 unidades de mapa y el coeficiente de coincidencia
es 0,6. Indicar la proporción esperada de individuos
obtenidos con el fenotipo Abc.
Respuesta: Cc = Frecuencia de dobles observadas
(FO) / Frecuencia de dobles esperados (FE) = 0.6
 FO= 0.6 x FE= 0.6 x 0.2 x 0.1=0.012
Nº de dobles observados = 0.012 x 100 = 1,2% indi-
viduos dobles recombinantes: AbC y aBc
distancia. A-B = Nº de Individuos recombinantes en-
tre estos marcadores + Nº de dobles recombinates x
100 / nº total de individuos = 20 nº ind. rec. entre
estos marcadores + 1,2 = 18,8
Es decir, 18,8 % son recom. Abc y aBC por lo tanto
aproximadamente tendremos la mitad de individuos
de cada tipo: 9,4 %
2) Se está estudiando una nueva especie de plantas
descubierta recientemente. Se sabe que el alelo Q co-
difica para hojas verdes, y el q para hojas moteadas (Q
domina sobre q); por su parte el alelo R codifica para
hojas redondas, y el r para puntiagudas (R domina
sobre r). Todavía no se sabe la función del gen E/e. A
estos investigadores les resultó raro que, a pesar de
haber muestreado una gran región en la que este tipo
de planta habita, no se encontró ninguna planta con
hojas verdes y puntiagudas simultáneamente. Para
dilucidar esta cuestión, se realizó un cruzamiento
prueba, y los resultados fueron los siguientes:
a) ¿Qué genes están ligados? clases Nro
b) ¿Hay interferencia? Contestar si o no,
EqR 280
no hace falta calcularla numéricamente
(lo mismo en a) eqr 203
c) ¿Por qué piensa que no se observan EQR 199
individuos de uno de los genotipos posi- eqR 7
bles? Eqr 67
d) Analizando los resultados, discuta qué eQr 279
eQR 73
 12
supuestos de los que se utilizan para este tipo de entre dos líneas puras: una de plantas altas y vainas
dio para calcular las distancias génicas en base a las hinchadas y otra de plantas enanas y vainas arrugadas.
frecuencias observadas pueden no estar cumpliéndose. ¿Cuáles son las frecuencias que hubiera esperado
Rta: a) Q/q y E/e están ligados, E/e y R/r están liga- Mendel?
dos, q/Q y R/r no parecerían estar ligados porque el c) ¿Qué cantidad de individuos de cada fenotipo
porcentaje de recombinación es del 50%. Sin embar- esperaría encontrar, si la F2 estuviera compuesta por
go, se encuentran en el mismo cromosoma (están “li- 160 plantas? ¿Cuántos hubiera esperado Mendel (no
gados” a 50 um o más) es necesario realizar la verificación estadística)?
Para hacer los cálculos (no pedidos para responder la Solución
pregunta), primero tienen que sacar el locus central a) La distancia entre estos genes en unidades mapa
que es el E/e. Después: es de 199 - 78 = 121 (fa-le) y de 211 - 199 = 12 (le-
dist Q/q – E/e = 36,9 um v). Debido a la enorme distancia que separa al gen fa
dist E/e – R/r = 13,27 um de los otros dos, en un experimento de cruce se
dist q/q – R/r = 50,07 um (“no” están ligados) hubieran comportado como independientes. Sin em-
Lo correcto para calcular la distancia entre los genes bargo, el cruce le x v hubiera dado resultados muy
de los extremos es sumar las distancias internas (da alejados de la independencia. Por lo tanto, este par de
50,07 um), en vez de realizar una prueba de dos pun- caracteres no le hubiera permitido elaborar sus leyes.
tos (da 48,92 um), pues de lo contrario no se estarían Aclaración: en el enunciado dice “te”.
considerando los dobles recombinantes. b) Resultados que hubiera obtenido Mendel de haber
b) Si. Para hacer los cálculos (no pedidos para respon- cruzado le y v:
der la pregunta) Le V/Le V x le v/le v = Le V/ le v
Cc = 7 / 54,25 = 0,12 De acuerdo con la distancia a la que se encuentran
Por lo tanto I = 1- 0,12 = 0,88 estos dos genes y suponiendo igual frecuencia de re-
Siendo 7 el nro de dobles rec observados combinación en la formación de los gametos en los dos
Siendo 54,25 el nro de dobles rec esperados (0,369 * sexos, tendríamos: Acá deben saber en función de la
0,1327 * 1108) distancia, las frecuencias de los que son recombi-
Siendo 1108 el total de individuos nantes y de los que no lo son es un conepto teórico
c) Una posibilidad es que, como sugería el enunciado, importante.
la combinación de alelos Q/q r/r sea letal, siempre y 0,44 Le V 0,44 le v 0,06 Le v 0,06 le V
cuando a su vez el genotipo sea E/e. En el campo
abierto podría presentarse el mismo fenotipo genera- 0,44 Le V 0,1936 0,1936 0,0264 0,0264
do por el genotipo anterior por ejemplo por la combi-
nación de QQ Ee rr, Qq EE rr ò Qq eE rr (pues se 0,44 le v 0,1936 0,1936 0,0264 0,0264
pueden dar todas las combinaciones posibles, al no
0,06 Le 0,0264 0,0264 0,0036 0,0036
tratarse de cruzamientos prueba). Dado que en el
v
enunciado se menciona que a campo abierto no se ob- 0,06 le V 0,0264 0,0264 0,0036 0,0036
serva ese fenotipo (hojas verdes y puntiagudas) se
puede pensar que tanto Q/Q r/r como Q/q r/r son com- (En blanco, fenotipo LeV, en amarillo, lev. En rosa:
binaciones letales en presencia de por lo menos un Le v, en celeste, le V.
alelo E. (y no en presencia de ee, ya que se observan es decir, (Aca deben saber en forma teórica cuales
parentales del cruzamiento prueba que son Qq ee rr) serían las frecuencias esperadas de recombinantes
d) Hay que recordar que para calcular distancias en y no recombinantes)
base a frecuencias fenotípicas, se supone que todas las Le V le v Le v le V
gametas son igualmente viables. En este caso vemos
que no es así. Observado 0,6936 0,1936 0, 0564 0,0564
3) Los experimentos que realizó Mendel, con una se-
rie de marcadores genéticos de arveja, le permitieron Esperado 9/16= 1/16 3/16 3/16
llegar a la conclusión de que los caracteres se transmit- 0,5625 0,0625 0,1875 0,1875
ían independientemente unos de otros. Sin embargo, se c) Mendel, en su trabajo sobre hibridación en plantas,
sabe ahora que tres de ellos se encuentran en el cromo- indica que se hicieron varios experimentos uniendo
soma 4, en las posiciones (en unidades Morgan respec- caracteres de dos en dos o de tres en tres. Si hubiera
to del inicio del cromosoma), 78 (fa, vainas axia- realizado el cruce anterior unas 160 plantas (número
les/terminales), 199 (te, altura de planta alta/enana) y de plantas que contó en uno de sus experimentos de
211 (v, vainas hinchadas/arrugadas), siendo dominan- dihibridismo obtenido el siguiente resultado,
tes los alelos que se mencionan primero. Lo que Mendel Lo que Mendel
a) Dibuje un mapa genético de los marcadores indi- hubiera esperado hubiera encontrado
cando las distancias entre ellos. ¿Qué conclusiones Le V 90 111 (110,976)
puede deducir respecto a la utilidad que hubieran pre- Le v 30 9 (9,024)
sentado estos loci para los estudios de Mendel?
b) Según los datos aportados, indique las frecuencias le V 30 9 (9,024)
fenotípicas y genotípicas que esperaría en la F1 - y su
correspondiente F2- proveniente de un cruzamiento
 13
le v 10 31 (30,976) 3) ¿A qué distancia del ori de transferencia mapea
el gen que codifica para trp? Y los que codifican
(Por supuesto, las diferencias son enormes) para leu y mal?
Otra forma de resolver el problema 4) ¿Qué experimento haría para determinar el orden
obs L l Total entre leu y mal?
V 111 9 120 5) Dibuje, indicando Origen de transferencia y termi-
v 9 31 40 nación, el modo en que el plásmido F se integró al
Total 120 40 160 cromosoma bacteriano y dio origen a esta HFR.
Sin suponer ligamiento 6) ¿Qué tipo de recombinación ocurre para que las
esperados L l Total bacterias leu- pasen a ser leu+? ¿Qué tipo de recom-
V 90 30 120 binación ocurre cuando el plásmido F se integra en el
v 30 10 40 cromosoma bacteriano?
Total 120 40 160 Rta: 1) Porque al estar más cerca del origen de trans-
ferencia pasan antes y le dan menos tiempo a las bac-
terias conjugantes a que se separen espontáneamente e
Genética Bacteriana interrumpan la transferencia.
1) ¿Cómo esperaría que fuera la transferencia hereda- 2) MM + ampicilina + los 2 aac que no se analizan en
ble del gen lac+ en cruzamientos entre cepas donoras cada caso F- AmpR aac+ donde aac+ es leu+, mal+ (que
de E. coli lac+ a) Hfr, b) F+ y c) F'lac con cepas re- en realidad no es un aminoácido) o trp+, respectiva-
ceptoras F- lac- incapaces de recombinar (rec-)? Justi- mente. Para los otros 2 genes cuyos aa están presentes
fique su respuesta en el medio, los genotipos pueden ser + o -. Por ej, en
Respuesta: El único cruzamiento capaz de transferir el primer caso el genotipo es F-AmpRleu+mal+/-trp+/-
el gen lac+ en forma heredable es aquel en el que in- 3) 10’, 5’
terviene la donora c) F'lac debido a que el gen lac+ 4) una prueba de recombinación equivalente a una
forma parte del plásmido transferido que no requiere prueba de 3 puntos con los 3 marcadores de este expe-
de recombinación (entrecruzamiento) para mantenerse rimento. 5) Dibujito
establemente en la célula receptora.. 3) Un tema de interés para la medicina humana y vete-
La cepa b) es capaz de transferir lac+ pero la cepa re- rinaria es el desarrollo de vacunas más confiables. En
ceptora requiere de las funciones de recombinación el caso de la brucelosis (que es una zoonosis, es decir,
homóloga para que se produzca el reemplazo alélico enferma a animales y a humanos) se desarrollaron va-
(entrecruzamiento) para integrar establemente el gen cunas para el ganado vacuno que consisten en bacte-
recibido. Como el segmento transferido es inestable rias vivas atenuadas por diferentes procedimientos de
(es lineal, no puede replicarse correctamente y es sus- cultivo. En este contexto, en la Argentina se utiliza la
ceptible a degradación por nucleasasas) termina per- cepa S19 que tiene algunos problemas porque no está
diéndose. suficientemente atenuada. Con el advenimiento de la
La cepa a) F+ sólo puede transferir lac+ con muy baja ingeniería genética se pudieron caracterizar genes co-
frecuencia si en alguna de sus células el factor F se mo el bp26 y el bmp18 que, al ser mutados, práctica-
integra previamente al cromosoma principal (esas po- mente eliminan la virulencia, tal como lo publican
cas células se convertirían en “Hfr”). Sin embargo, Campos y col (Veterinary Microbiology, 2002). En un
tendrá el mismo problema que la cepa b). trabajo previo, lo demostraron mediante el desarrollo
2) Se realizaron experimentos de conjugación inte- de mutantes knock-out para ambos genes.
rrumpida entre cepas Hfr AmpS leu+mal+trp+ y F- a) Indique una estrategia de cómo hubiese obtenido
AmpR leu-mal-trp-. Los resultados se exponen en la Ud. esta mutante knock-out. Utilice exclusivamente
siguiente figura: (mal: capacidad de metabolizar la esquemas para su respuesta
maltosa) Debido a que no resulta deseable la liberación de or-
ganismos modificados genéticamente conteniendo
genes de resistencia a antibióticos (y menos si éstos
son patogénicos), para la construcción de la cepa mu-
tante vacunal Δbp26::luc Δbmp18 (Δ simboliza dele-
ción y :: simboliza inserción y que bautizaron IN-
TA2) usaron una técnica de contraselección (ver Figu-
ra).
Aclaraciones: El gen sacB (de Bacillus subtilis) codi-
fica para una levansacarasa que metaboliza la sacarosa
en un levano que es tóxico para Brucella. Es decir que
las bacterias que contienen este gen se mueren cuando
se agrega sacarosa al medio de cultivo. a y b señalan
1) ¿Por qué los recombinantes para leu y mal aparecen secuencias homólogas (probables sitios de entrecru-
con mayor número de recombinantes? zamiento). El gen luc codifica para la luciferasa de
2) Explique en qué medios se hicieron crecer las luciérnaga, los genes ApR y KnR para resistencia a
bacterias para analizar su genotipo, y qué tipo de ampicilina y kanamicina, respectivamente. En varios
bacterias (qué genotipo) crece en cada uno. de los genes se especifican, con flechas, oligonucleó-
 14
tidos diseñados para PCR y el tamaño del fragmento ausencia de sacarosa). En un segundo paso, se pa-
de amplificación esperado. sarían las bacterias a un medio conteniendo sacarosa,
B B B1 N
en ausencia de kanamicina. [De hecho, esto fue lo
que hicieron los autores del trabajo]. Lo mismo
S19 bp26 / bmp18 1 con ApR para el gen bmp18.
696 bp 990 bp
p26f p26r / p18f p18r Otra respuesta correcta: Suponiendo que se qui-
B + B siera seleccionar directamente la construcción 3,
luc sin pasar por la construcción 2 (doble recombinan-
Primer evento
pKS26L KnR te directo), KnR no tiene función alguna en el ex-
de entrecruza- perimento del problema. Al utilizarse el sistema de
sac
B
miento contraselección basado en SacB podría no estar
Integración del plásmido suicida
KnR
2 presente, sin afectar con su ausencia el resultado.
luc bp26
bp26 / bmp18 En este caso, su única función es ser un marcador
sacB
a selectivo en E. coli (otorga al plásmido una ventaja
b /
Segundo evento selectiva que ayuda a mantenerlo, evitando su
Selección con sacarosa de entrecruza- pérdida, durante su multiplicación en E. coli). En
B miento N el caso del segundo plásmido conteniendo ApR,
1 esta aproximación es mucho más difícil (aunque
luc / bmp18 3 no imposible) porque no tengo un gen indicador y
1837 bp 990 bp
p26f p26r / p18f p18r sólo puedo distinguir dobles recombinantes (cons-
+
bmp18 trucción 5) de salvajes (construcción 3) mediante
Primer evento pSD18 Ap R PCR de las colonias, por ej.
de entrecruza- ii) Este gen sirve para distinguir las mutantes
miento sacB “knock out” para el gen bp2 que quiero seleccio-
Integración del plásmido suicida nar (construcción 3) de las revertantes salvajes
(construcción 1), dado que ambas sobreviven en el
sacB ApR
4 medio conteniendo sacarosa.
 bmp18
luc / bmp18
iii) Como dice el enunciado, este gen sirve para
a
/ b contraseleccionar (seleccionar en forma negativa)
Segundo evento las construcciones 2 y 4 en presencia de sacarosa.
de entrecruza- Selección con sacarosa
c) Básicamente, el que el plásmido sea suicida me
miento permite seleccionar más eficientemente al recom-
INTA2 luc / bmp18 5 binante. Suponiendo que la selección de las cons-
1837 bp 694 bp trucciones se hizo paso a paso [como se explica en
p26f p26r / p18f p18r
“b) i)”], si el plásmido replicara en Brucella, la
b) ¿Qué función específica cumplen los siguientes selección en presencia de kanamicina solo me daría
genes marcadores en el esquema de obtención de la muchísimas bacterias con el plásmido sin integrar y
cepa vacunal? me sería extremadamente dificultoso aislar el recom-
i) ApR y KnR (2 ptos); ii) luc (2 ptos); iii) sacB binante (construc. 2) por su baja probabilidad de ocu-
c) ¿Porqué se usaron plásmidos suicidas? rrencia.
d) Diseñe un sistema molecular de detección para dis- Ahora, suponiendo la alternativa de selección directa
tinguir los 5 genotipos posibles entre sí. Explíquelo. del doble recombinante [como se explica en “otra res-
e) Un punto importante en cualquier campaña de erra- puesta correcta” en “b) i)”], el primer plásmido podría
dicación de enfermedades como la brucelosis es poder no ser suicida, porque sería seleccionado en forma
distinguir animales vacunados de infectados en forma negativa en presencia de sacarosa.
sencilla, barata y masiva. Tradicionalmente, el dia- d) Por PCR usando los primers flanqueantes de los
gnóstico se realiza mediante la detección de anticuer- genes. Las construcciones 1, 3 y 5 darían una sola
pos anti-Brucella en sangre porque la bacteria es muy banda por primer (total 2 bandas), a saber 696 + 990
difícil de detectar y no resulta sencillo diferenciar en- en 1, 1837 + 990 en 3 y 1837 + 694 en 5. Los cointe-
tre los animales que tienen estos anticuerpos debido a grados darían 2 bandas, para el par de primers p26 en
que estuvieron infectados o porque fueron vacunados. 2 o para el par de primers p18 en 4. En total 3 bandas.
¿Qué solución le parece que proponen los diseñadores También se considerarán correctas respuestas con
de esta vacuna? otras variantes (detección de fluorescencia en lugar de
Respuestas: a) Se podría usar el mismo esquema del la banda de 1837 combinada con PCR de los otros
enunciado (parte izquierda) reemplazando el gen luc genes; RFLPs usando bp26 y bmp18 como sondas,
por un gen de resistencia a antibiótico (por ej. a Tetra- detección de las proteínas codificadas mediante Wes-
ciclina) y manteniendo el gen de resistencia a kanami- tern, etc.), siempre y cuando la respuesta permita dife-
cina (o SacB) para seleccionar el doble recombinante. renciar claramente los 5 genotipos.
b) i) Suponiendo que se quiera ir paso a paso (como e) La presencia de anticuerpos anti-luciferasa diferen-
sugiere el flujo de esquemas) y seleccionar primero el cian animales vacunados con esta cepa respecto de los
cointegrado (construcción 2) y recién después el doble que se infectaron con una cepa salvaje no recombinan-
recombinante (construcción 3): KnR serviría para se-
leccionar en un medio conteniendo kanamicina (en

te. La ausencia (versus presencia) de anticuerpos con-
tra bp26 y bmp18, es otra variante de la respuesta.
También se considerará correcta (con la mitad de la
nota = 2,5 ptos) la respuesta que proponga el aisla-
miento de bacterias del animal, las cuales deberían no
ser fluorescentes en presencia de luciferina en el caso
de la cepa de campo y ser fluorescentes en el caso de
la cepa vacunal. Idem si la técnica seleccionada es una
PCR. En la realidad, esta última variante no es practi-
cable, porque la cepa vacunal sobrevive muy poco a
las defensas del animal y resulta lento, peligroso y
poco práctico el aislamiento de bacterias patogénicas.
4) Bacterias de una cepa de E. coli Hfr rec+ bio+ his+
StrS son mezcladas junto a bacterias de otra cepa de E.
coli F- rec+ bio- his- StrR. A diferentes tiempos, se
inter-rumpieron las conjugaciones, se plaqueó en los
siguientes medios selectivos (todos conteniendo Str)
y al día siguiente se contó el N° de colonias. (MM =
medio mínimo)
Tiempo Nº de colonias en
(min) MM MM+bio MM+his MM+bio+his
5 0 0 0 503
10 0 0 34 487
15 0 0 44 499
15
(igual que en este experimento). c) No, están dema-
siado lejos para ser cotransducidos. d) No, porque es
una doble auxótrofa y por lo tanto requiero de la mu-
tación (reversión) simultánea de al menos 2 bases dis-
tintas y cuya reversión no necesariamente requieren
del mismo mecanismo de mutación Respuesta alter-
nativa que, en caso de aparecer, debe ser considerada
correcta: Sí, si utilizo MM+ bio (o MM+ arg).
4) Un investigador está interesado en mapear y estu-
diar 3 genes a, b y c involucrados en la biosíntesis de
aminoácidos. Se sabe que los productos de los genes
a, b y c catalizan las siguientes reacciones:
Leu Ile
A C
X
B
Val
donde X es un compuesto que puede ser sintetizado
por ambas cepas de bacteria creciendo en un medio
mínimo (MM). Para realizar el estudio dispone de 2
cepas de bacterias: Hfr a+b+c+ StrS y otra F- a- b- c- StrR
con las cuales realizó un experimento de conjugación
interrumpida obteniendo los siguientes resultados:
Nº recombinantes

20 0 0 50 503
25 0 0 59 498 c+ StrR
30 20 30 80 501
a) El experimento anterior se aprovechó para mapear
los genes involucrados en la síntesis de biotina.
Ubique en el mapa genético el gen bio. a+ StrR
Se aclara la posición donde está
integrada la secuencia del b+ StrR
plásmido F en esta cepa F
Hfr, y además la del gen
his, previamente mapeado. 4 8 12 16 20 24 t (min)
b) Un amigo suyo, his a) ¿En qué medios se seleccionaron cada uno de los
estudiante de Biología, le genotipos de bacterias del gráfico anterior?
cuenta que hizo un b) ¿A qué distancia del origen de transferencia de la
experimento de conjugación - cepa Hfr utilizada mapean los genes a, b y c?
mientras miraba videoclips de c) Grafique y explique los resultados que hubiera te-
Britney Spears- con una cepa Hfr diferente a la nido en el experimento de conjugación interrumpida si
anterior, la cual, al conjugar con la misma F- que en el el genotipo de la cepa dadora hubiese sido:
experimento anterior, le transfiere el gen his a los 20 i) Hfr a+b+c+ StrR
min y el gen bio a los 40 min. ¿Le creería a su amigo ii) F+ a+b+c+ StrS
o pensaría que se distrajo mientras hacía los iii) Si el origen de transferencia de la cepa Hfr
experimentos? se encontrara entre el gen b y el c.
c) Un fago que hace transducción generalizada puede El hecho de que a y b mapearan juntos y formaran
encapsidar fragmentos de DNA genómico de una parte de una misma vía metabólica le sugirieron al
cepa bacteriana infectada y lisada que tengan un investigador que a y b pertenecen a un mismo operón.
tamaño de hasta 30.000 pb. Si ese fago es usado para Con el objeto de estudiar esta posibilidad realizó el
infectar una cepa de E. coli salvaje, y el lisado siguiente experimento:
resultante es usado, a baja multiplicidad de infección, A) Se digirió ADN genómico de una cepa salvaje con
para infectar a la F- mencionada antes. ¿Esperaría la ER Alu I (de corte frecuente) en cantidades limitan-
observar colonias en MM? Justifique (1 min equivale tes. Luego los fragmentos se ligaron en uno de los
a 20 kpb aprox) vectores que se muestran.
e) ¿Usaría Ud. la cepa F- en MM para testear la muta- B) Luego se transformaron bacterias a- b- c+ AmpS con
genicidad de una sustancia en un test de Ames? uno de los vectores y se plaquearon las bacterias
R a) El gen bio entra a los 10’ y el his a los 30’, por lo transformantes en ágar + MM + ampicilina + un ami-
tanto el gen bio se encuentra a 1/3 de la distancia entre noácido. Cada una de las colonias que crecieron en
F e his. b) Le creo, seguramente tiene un Hfr distinto estas placas fueron luego cultivadas en ágar + MM +
con el F integrado apuntando al revés y en otra posi- ampicilina obteniéndose los siguientes resultados:
ción. Nótese que la distancia entre his y bio es de 20’
 16
Vector 1: Todas las bacterias que crecieron en e) De las bacterias transformadas con el vector 1
MM+Amp+Leu crecieron también en MM+Amp. todas las bacterias b+ también eran a+, pero sólo el
-De las bacterias que crecieron en MM+Amp+Val el 60% de las a+ eran b+.
60% crecieron en MM+Amp. En cuanto a las bacterias transformadas con el vector
Vector 2: De las bacterias que crecieron en 2 el 55% de las bacterias b+ también eran a+, y el
MM+Amp+Leu+Lac, el 55% crecieron en MM+Amp 50% de las a+ eran también b+.
+Lac. La diferencia en los resultados obtenidos con ambos
vectores radica en que el vector 1 no contiene un pro-
Alu I Alu I motor por lo que la expresión de los transgenes se
P dará solo si vienen acompañados de su promotor. El
hecho de que todas las bacterias b+ sean también a+
nos indica que b se transcribe utilizando el promotor
de a sugiriendo que a y b forman parte de un operón.
En el caso del vector 2 dado que aporta un promotor
(y éste está encendido debido a la lactosa) sí se obtie-
nen bacterias a-b+.
AmpR AmpR f) Dado que, cuando se transformó con el vector 1, no
se obtienen bacterias a-b+ pero sí a+b- esto nos sugie-
P = promotor del operón re que no se necesita que se transcriba b para que se
Vector 1 lac Vector 2 transcriba a (pero sí al revés). Esto indicaría que a se
-De las bacterias que crecieron en MM+Amp+Val+ encuentra más próximo al promotor que b.
Lac, el 50% crecieron en MM+Amp+Lac. g) RT-PCR usando primers de la región 5´ del gen a y
d) ¿Cuáles son los genotipos de las bacterias que cre- de la región 3´ del gen b. Si amplifico es porque hay
cen en cada uno de los 3 medios? transcriptos que contienen al gen a y al b. Hay otras
e) ¿Cómo interpreta los resultados de este experimen- posibilidades que se evaluarán caso por caso…
to? Demuestre que estos resultados son compatibles 5) Se realiza un experimento
con la hipótesis de que a y b están en el mismo de transformación con una Antibióticos Nº colonias
operón. cepa bacteriana donante re- A 1.156
f) ¿Cuál de los genes está más cerca del promotor: a o sistente a cuatro antibióti- B 1.148
b? Justifique. cos: A, B, C y D. La cepa C 1.161
g) ¿Cómo haría, utilizando la técnica de PCR, para receptora es sensible a las D 1.139
demostrar que a y b pertenecen al mismo operón? In- cuatro drogas. La población AB 46
dique los resultados esperados tanto si a y b forman de células receptoras tratada AC 640
parte de un operón como si se transcriben indepen- se divide y se siembra en AD 942
dientemente. placas de medios suplemen- BC 51
Respuesta a) a+ StrR = MM + Str + Val + Ile tados con varias combina- BD 40
b+ StrR = MM + Str + Leu + Ile ciones de las drogas. Los CD 786
c+ StrR = MM + Str + Leu + Val resultados fueron: ABC 30
b) a y b mapean a 12 min del OriT y C mapea a 6 min. a) Uno de los genes está cla- ABD 42
c) i) Se hubieran seleccionado a las bacterias dadoras ramente alejado de los otros
ACD 630
por lo que no hubiera habido diferencias entre los dis- tres, los cuales parecen estar
BCD 36
tintos medios ni tampoco entre los distintos tiempos. estrechamente ligados.
ii) Se hubieran obtenido muy pocas recombinantes ABCD 30
¿Cuál es el gen distante?
(aquellas en las que el plásmido F+ se hubiera incor- b) ¿Cuál es el orden de los Total 7.877
porado en la cepa dadora y luego los marcadores a, b tres marcadores que están ligados?
o c se hubieran transferido a la cepa aceptora). Rta: a) B es el gen distante; b) A D C.
iii) Dependiendo de la orientación del OriT hay dos 1) El Dr. Watson está estudiando un fago temperado
posibilidades: -que a y b salgan primero y bastante descubierto en su laboratorio (P26) con el objeto de
tiempo después salga c -que c salga primero y bastan- determinar si durante el ciclo lisogénico éste se inserta
te tiempo después salgan a y b. en el cromosoma bacteriano, y si lo hace en qué sitio.
En el gráfico tienen que quedar claro esto, y además Para ello infecta una cepa Hfr salvaje AmpS StrS con
que la frecuencia de recombinantes para los genes que un fago deficiente en el cual se ha reemplazado al gen
salen primero debe ser bastante mayor que la de los X (esencial para que el fago entre en ciclo lítico, pero
genes que salen al final. no para que entre en ciclo lisogénico) por un gen de
d) MM+Amp+Leu = a- b+ AmpR y a+ b+ AmpR. Es resistencia a ampicilina bajo el control del promotor
decir, b+ AmpR Lac (con su región operadora).
MM+Amp+Val = a+ b- AmpR y a+ b+ AmpR. Es a) ¿En qué medio de cultivo selecciona a las bacte-
decir, a+ AmpR rias Hfr que presentan el fago?
MM+Amp = a+ b+ AmpR Luego de seleccionar en medio sólido 15 clones Hfr
La lactosa no importa, sólo se usa para inducir la ex- lisogénicos y con el objetivo de determinar si el fago
presión mediada por el promotor lac. defectivo está integrado en el cromosoma y en qué
sito lo hace, conjuga, por separado, a cada Hfr lisogé-

nica con una cepa F- gal- leu- arg- AmpS StrR obte-
niendo, en todos los casos, el mismo resultado:
Gal+
Nº de recomb
arg+
AmpR
Leu+
10 20 30 40 50 60 t(min)
b) ¿En qué medios seleccionó a cada uno de los ge-
notipos?
c) En base a los resultados obtenidos, ¿cuál de las
siguientes opciones es la correcta?
- el fago no se integra en el cromosoma bacte-
riano (queda como episoma)
- el fago se integra al cromosoma en un único
sitio
- el fago puede integrarse en varios sitios del
cromosoma bacteriano
Justifique su elección y por qué descarta las de-
más.
Otro investigador, intentó reproducir estos experimen-
tos con una cepa Hfr de su laboratorio y el mismo fa-
go defectivo que solicitó al Dr. Watson. Sin embargo,
en este caso el marcador AmpR mapeó a 10 min del
origen de transferencia.
d) ¿Le parece que esto contradice necesariamente
los resultados del Dr. Watson y su respuesta de la
pregunta c?
Nota: Las bacterias gal- no pueden utilizar galactosa
como fuente de carbono y energía, las bacterias leu- y
las arg- no pueden sintetizar los aminoácidos leucina y
arginina respectivamente.
R: a) Debe seleccionarlas en medio mínimo, sin glu-
cosa (para que no haya represión catabólica) y con
IPTG o lactosa para inducir al operón lac y que se ex-
prese el gen de resistencia a ampicilina. El medio debe
tener además ampicilina para matar a todas las bacte-
rias que no posean el fago.
b) Gal +: MM + gal + arg + leu + Streptomicina
Leu +: MM + glu + arg + Streptomicina
Arg+: MM + glu + leu + Streptomicina
AmpR: MM + lac + leu + arg + Ampicilina + Strep-
tomicina (ojo que la fuente de carbono debe ser lacto-
sa y no glucosa, por un lado para inducir al operón y
por el otro para que no haya represión catabólica)
c) Si el fago P26 no se integrara al cromosoma de la
Hfr y quedara como episoma no sería transferido a la
cepa F- en el experimento de conjugación interrupida
y por ende no se detectaría bacterias AmpR (recordar
que el gen de resistencia a ampicilina está dentro del
genoma del fago). Además podemos decir que el fago
se integra en un único lugar del genoma porque en los
15 clones de Hfr lisogénicas generadas el marcador
AmpR entró en el mismo tiempo.
d) No contradice los resultados del Dr. Watson ni las
conclusiones sacadas ya que, al ser una cepa Hfr dis-
tinta el origen de transferencia puede estar ubicado
17
más cerca (o más lejos) del sitio de integración del
fago. Lo que sí debería ocurrir, es que en todos los
clones el gen de resistencia a ampicilina mapee cerca
del gen leu.
Mutagénesis y Transposición
1) En levaduras, el tratamiento con mutágenos permi-
tió seleccionar, en forma independiente, varios tipos
de mutantes auxótrofas incapaces de utilizar galactosa
como nutriente. El mapeo de las mutaciones respon-
sables de esta característica permitió clasificarlas en 2
grupos de ligamiento distintos (mendelianamente in-
dependientes).
a) ¿Significa este resultado que los genes involucrados
se encuentran en 2 cromosomas distintos? ¿Por qué?
b) ¿Cuál será el fenotipo resultante del diploide resul-
tado del cruzamiento entre mutantes (haploides) per-
tenecientes a distintos grupos de ligamiento? ¿Por
qué?
c) ¿Cómo serán las proporciones fenotípicas de las
levaduras (haploides) derivadas de las ascosporas una
vez producida la meiosis?
d) ¿Qué clase de mutagénesis es la más apropiada pa-
ra este tipo de experimentos? ¿la producida por radia-
ción  (gamma) o por algún compuesto químico como
el EMS o la nitrosoguanidina? Justifique muy breve-
mente.
Respuesta: a) En principio sí, los grupos de ligamien-
to pueden comprender y extenderse más allá de 50 u
de recombinación y pertenecer al mismo cromosoma
[es decir, si bien 2 genes o marcadores pueden com-
portarse mendelianamente como independientes por
estar a más de 50 unidades de mapa, a través de otros
marcadores o genes intermedios puedo incluirlos a
ambos en el mismo grupo de ligamiento = cromoso-
ma. Sin embargo pueden existir 2 grupos de ligamien-
to pertenecientes al mismo cromosoma si no tengo la
suerte de encontrar marcadores o genes intermedios].
b) Protótrofa. Por complementación. [Si a es el alelo
mutante de A y b de B: Ab x aB  AaBb fenotipo
salvaje]
c) 3 a 1, auxótrofas a protótrofas [¼ ab, ¼ Ab, ¼ aB
vs ¼ AB]
d) Usualmente se utiliza algún mutágeno químico
(como EMS o nitrosoguanidina) que producen muta-
ciones puntuales y se pueden dosificar más fácilmen-
te. La radiación  produce rupturas, deleciones y re-
arreglos cromosómicos groseros, por lo que sería me-
nos conveniente.
2) Se estudia el efecto de 2 conocidos mutágenos en
levaduras: el etil metanosulfonato (EMS) y el bromu-
ro de etidio (EtBr) observando la frecuencia de apari-
ción de petites (levaduras que forman colonias de cre-
cimiento mucho más lento que las normales o gran-
des, debido a un malfuncionamiento del sistema de
fosforilación oxidativa). A primera vista, los resulta-
dos parecen similares ya que ambos mutágenos indu-
cen una abundante aparición de mutantes. Sin embar-
go, más del 99% de las mutantes obtenidas con EMS,
segregaban en una proporción mendeliana de 50%
grandes a 50% petites, al ser cruzadas con levaduras
salvajes (grandes). Nota: recordar que las levaduras
 18
son usualmente haploides y que los fenotipos descrip- cepa
tos se refieren a lo observado con ese nivel de ploidía.
En cambio, más del 90% de las mutantes obtenidas
con EtBr “segregaban” 100% de petites o 100% de
grandes. Es decir, a pesar de tener un parental petite y
un parental grande, la progenie era toda petite o toda
grande. ¿Cómo se explican estos resultados?
Solución: el EMS afecta, fundamentalmente a genes
nucleares (que pueden afectar a las funciones mito-
condriales para resultar en un fenotipo petite -no reali-
zan fosforilación oxidativa- porque éstas importan
ciertas proteínas codificadas en el núcleo) y el EtBr
tiene mayor especificidad por los genes mitocondria-
les que se heredan uniparentalmente.
3) En un estudio sobre mutaciones inestables de maíz,
un investigador propuso los siguientes genotipos para
dos plantas distintas de esta especie: ¿Qué conclusiones puede sacar acerca de:
I) C/cd ; Ac+/Ac- a) la(s) region(es) requerida(s) para la transposición y
II) C/ca ; Ac- /Ac-
region(es) no requeridas?
C: alelo silvestre que permite la expresión del color
b) ¿Por qué estos resultados son inesperados y se con-
del grano; cd: es un alelo inestable producto de la in-
serción de un elemento móvil no autónomo Ds que tradicen con lo que Ud. aprendió en la materia?
inactiva la expresión del gen. ca: es un alelo inestable c) la(s) regio(es) requeridas para NeoR?
producto de la inserción de un elemento móvil Ac Solución: a) Para la transposición: completo,
autónomo que inactiva la expresión del gen. Ac+ pre-
sencia/ Ac- ausencia del elemento móvil (atención que sólo el extremo izquierdo (aquella parte
esta nomenclatura es distinta a la empleada en algunos afectada en la mutante 135). b) Porque hubiera espe-
libros de texto). rado que TODO el hubiera sido imprescindi-
Se realizaron los siguientes cruzamientos: ble para la transposición. c) El gen NeoR (completo o
a) plantas con genotipos I y II se cruzaron con plantas
su extremo 5’) está ubicado en algún lugar entre el
c/c; Ac- /Ac-, en donde el alelo c representa una forma
mutante incolora, producto de una sustitución de ba- extremo derecho de y su región derecha ad-
ses. yacente (es decir, parte o todo el fragmento afectado
b) planta con genotipo I) se cruzó con planta con ge- por la deleción en la mutante 138). [Con los datos su-
notipo II). ministrados no puedo afirmar que TODO el gen NeoR
¿Qué fenotipos y en qué proporciones aparecerán en esté en ese segmento. Tampoco puede concluirse, con
la descendencia de los cruzamientos a) y b)? NOTA: estos datos, que haya una superposición entre parte
Asumir que Ac y C no están ligados, y que la frecuen- del gen y el IR izquierdo, pero resulta altamente sos-
cia de rupturas cromosómicas es despreciable. pechoso. Para confirmarlo, deberían hacerse mutacio-
Respuesta: a) I) ½ púrpuras, ¼ blancas, ¼ mosaico
nes dirigidas usando deleciones más pequeñas o susti-
II) ½ púrpuras, ½ mosaico; b) ¾ púrpuras, ¼ mosai-
tuciones nucleotídicas puntuales].
cos [Todos los genotipos C_, homo- o heterocigotas,
son púrpuras; la probabilidad de que un transposón 5) En un trabajo reciente (Mol Gen Genomics, 2006,
(por ej. del locus Ac) justo vaya a insertarse en un lo- 275: 231-241) un grupo japonés estudia la coloración
cus específico del genoma es extremadamente baja. de las flores en Gentiana scabra, una planta ornamen-
Todos los genotipos “dobles” recesivos (conteniendo tal muy difundida en Japón. Para ello analizan tres
c, cd o ca) son mosaicos si está ca_ o cd_, Ac+_] cultivares de G. scabra: cv. Momokorin (flores rosa-
4) Se confeccionaron varios mutantes del Tn5 me- das), la línea mejorada 13-98 (flores rosadas) y el cv.
diante ingeniería genética. El mapa y el fenotipo se Alta (flores azules); y G. triflora cv. Macyri (flores
muestra más abajo: grafica una deleción del azules). Primero, miden la acumulación de antociani-
DNA entre los extremos de la llave. grafica nas mediante HPLC de extractos obtenidos de los
un fragmento de 800 pb de DNA foráneo que se in- pétalos de las flores. Los perfiles de HPLC obtenidos
fueron los siguientes:
sertó en la posición O. Las capacidades del mutante de
transponerse y de resistir a neomicina (NeoR) se indi- a y d) cv. Alta: dos picos, uno mayor correspondiente
can a la derecha de cada mutante. WT significa wild a delfinidina y otro menor a cianidina.
b,c y e,f) Línea 13-98 y cv. Momokorin: un único pico
type (normal o salvaje). y indican correspondiente a cianidina
las regiones repetidas invertidas (IR) del Tn5. NOTA:
Para su respuesta suponga que entre los valores de la
tabla 90 y 100 o entre 0 y 0,5 no existen diferencias
estadísticamente significativas.
 19
i) ¿Qué le indican estos resultados en cuanto a la de- ii) ¿Cuál fue el objetivo de los experimentos mos-
terminación bioquímica del color de las flores? trados en a y b?
iii) ¿Para qué se realizó la hibridación con F3’H?
iv) ¿Qué explicación molecular podría dar a los cam-
bios en el perfil de los transcriptos?
A continuación, a partir de ADN genómico de las
plantas amplifican fragmentos conteniendo el ORF
F3’5’H (ver parte c de la figura anterior):
v) ¿Cuál fue el objetivo de este experimento?
vi) ¿Qué evidencian estos resultados?
Los fragmentos de 4 kb y 3,3 kb fueron clonados y
secuenciados.
El fragmento de 4 kb de la línea 13-98 presentaba en
el exón 1 una inserción (a la que llamaron dTgs1) cu-
ya secuencia contenía un sitio blanco de duplicación
(TSD) de 8 pb y repeticiones terminales invertidas
(TIR) de 14 pb. La secuencia TIR presentaba una re-
gión palíndromica imperfecta y exhibía similitud par-
cial con un elemento dTph de petunia (el cual se sabe
que es reconocido por la transposasa Ac).
El fragmento de 3,3 kb del cv. Momokorin contenía
una inserción en el exón 1, a la que denominaron
La enzima clave en la biosíntesis de delfinidina es la GsTRIM. Esta secuencia presentaba repeticiones di-
flavonoidil 3’5’- rectas terminales (TDR). Esta inserción no contenía
hidroxilasa secuencias que codificaran para alguna proteína. Asi-
(F3’5’H) que mismo, presentaba similitud con secuencias de Lotus
cataliza la japonicus, designadas LjTRIM.
hidroxilación en vii) ¿Qué le permiten confirmar estos datos de se-
5’ del anillo B cuencia? ¿Cuál es entonces la explicación para los
del esqueleto de diferentes fenotipos observados?
la antocianina. Como los elementos TRIM fueron identificados a par-
La expresión tir de análisis de bases de datos de secuencias nucle-
génica de esta otídicas y mostraron la peculiaridad de estar conser-
enzima se mues- vados en distintas especies de plantas, realizaron un
tra en la siguien- análisis filogenético empleando las secuencias TDR y
te figura: usando los programas CLUSTAL W y TREEVIEW.
a) Análisis de El árbol obtenido se muestra a continuación:
Northern blot
usando RNA
total de pétalos
de los tres culti-
vares de G. sca-
bra. La mem-
brana fue hibri-
dada con cada
una de las son-
das correspon-
dientes a los genes F3’5’H y F3’H (codifica para una
enzima que cataliza la hidroxilación en 3’ del anillo B
de flavonoides). rRNA: control de cantidad de RNA
ribosomal teñido con bromuro de etidio. vii) ¿Qué puede concluir del agrupamiento mostrado
b) Análisis de RT-PCR para amplificar el ORF de en el árbol?
F3’5’H usando RNA total extraído de pétalos. Los viii) Sugiera un experimento simple para analizar la
números a la derecha indican los tamaños de los existencia de los elementos dTgs1 y GsTRIM en el
fragmentos amplificados. genoma de otras especies de Gentiana.
Nota: por 3’RACE amplifican transcriptos menores a Rta: Aclaración: Las gentianas rosadas vienen siendo
1,4 kb en la línea 13-98 obtenidas por mejoramiento a partir de mutaciones
c) Análisis de PCR para amplificar la secuencia espontáneas a partir de gentianas azules, pero el/los
genómica de F3’5’H con los iniciadores empleados mecanismo/s involucrado/s eran desconocido/s hasta
para la RT-PCR. Los números a la derecha indican lo el momento.
mismo que en b. i) Estos resultados indican que hay diferencias en la
acumulación de las distintas antocianinas en ambas

plantas (azules y rosadas), en particular, las plantas
rosadas carecen de delfinidinas. Pero la acumulación
de cianidinas es similar para ambas.
ii) Como los autores saben que la F3’5’H es la enzima
clave en la síntesis de delfinidina y viendo los resulta-
dos anteriores, analizan si hay diferencias en cuanto a
la expresión del gen para esta enzima entre los dos
tipos de plantas y analizan si esto podría explicar los
fenotipos observados.
iii) La hibridación con F3’H es usada como control.
Tanto en plantas azules como rosas se obtiene el mis-
mo patrón de expresión. Es otra enzima involucrada
en la síntesis de pigmentos pero que produce otro
compuesto (que no tiene nada que ver con las delfini-
dinas, si bien pertenece a la misma ruta biosintética).
También prueban con otros genes relacionados con la
síntesis de flavonoides y ven que exhiben los mismos
patrones que la F3’H pero esto tampoco lo muestran
en el trabajo original.
iv) Los resultados evidencian que:
No se observa transcripto de F3’5´H para la planta
rosada, línea 13-98 tanto por Northern blot como por
RT-PCR (Aclaración: los primers para esta RT levan-
tan el ORF por completo, full length). Además se
aclara que por 3´RACE obtienen fragmentos menores
a 1,4 kb.
Para la planta rosada cv. Momokorin, el transcripto de
F3’5´H es de tamaño mayor que el observado para la
planta azul cv. Alta (Northern). Por RT-PCR este cul-
tivar muestra dos fragmentos de 1,3 y 2,1kb que difie-
ren del de 1,6kb observado para la planta azul.
En conclusión: ninguna de las plantas rosadas acumu-
lan el transcripto de tamaño normal esperado (1,6kb)
v) El objetivo de este experimento fue examinar la
estructura del gen para F3’5´H en estas plantas a partir
de amplificación sobre el ADN genómico de las mis-
mas, para ver si existen diferencias que puedan expli-
car los resultados a nivel de transcriptos.
vi) Se obtienen fragmentos de amplificación de distin-
to tamaño para las distintas plantas. Estos resultados
muestran que el cv. Alta (azul) muestra un fragmento
de 2,8kb mientras que para la línea 13-98 y el cv.
Momokorin (rosadas) las bandas son 1,2 y 0,5kb mas
grandes, respectivamente (sus tamaños eran 4 y 3,3
kb, respectivamente). Es probable que en el gen de las
plantas rosadas haya alguna inserción.
vii) Estos resultados, dadas las similitudes de las se-
cuencias con elementos transponibles, evidencian que
las inserciones observadas corresponderían a transpo-
sones (dTgs1 y GsTRIM1). La explicación para los
diferentes fenotipos observados es que estos transpo-
sones interrumpen la secuencia del gen, resultando en
transcriptos anormales (o ausencia de transcripto) que
no permiten la síntesis de la enzima F3’5´H y por lo
tanto no se sintetizan el pigmento que produce la colo-
ración azul (delfinidina).
vii) Los resultados claramente muestran que GsTRIM1
y LjTRIM se agrupan juntos y apartados del resto de
los TRIMs reportados previamente, indicando que
estos dos transposones son evolutivamente diferentes
de los otros elementos TRIM de plantas.
20
vii) Al inicio del problema, en el enunciado, se in-
dica que también disponen de G. triflora cv. Macyri.
Por lo tanto, el experimento sería hacer Southern blot
de ésta conjuntamente con las 3 plantas analizadas de
G. scabra e hibridar con dTgs1 y GsTRIM1 (Sout-
herns separados, obviamente) y observar la aparición
de muchas bandas (esto mostraría que, como la ma-
yoría de este tipo de transposones, son miembros de
una familia de alto número de copias, y que están dis-
tribuidos por todo el genoma de Gentiana).
6) Un investigador está estudiando el mecanismo de
transposición del transposón X de ratón. Para ello,
partiendo de la secuencia salvaje del transposón, in-
serta una construcción entre el gen pol y el LTR de la
derecha, que contiene:
EcoRI EcoRI
 
Intron
LTR pol gag C LTR
Promotor
- al gen C, cuya expresión le confiere color marrón a
los ratones.
- el promotor del gen C interrumpido por un intrón
haciéndolo no funcional
Partiendo de ratones albinos, genera ratones trans-
génicos heterocigotas para dicha construcción (es de-
cir, los ratones tienen una sola copia del transposón
recombinante).
a) Detalle el fenotipo de dichos ratones en cuanto al
color de piel y presencia o ausencia de manchas:
i) si se trata de un retrotransposón, ii) si se trata de un
transposón
Justifique su respuesta. A M
Los ratones resultaron albinos con algu-
nas manchas marrones. A partir de biop-
sias de piel, se extrajo ADN, se digirió
con EcoRI y se realizó un Southern blot
utilizando como sonda el cDNA de
“pol”.
b) Esquematice los resultados esperados del Southern
si las biopsias se tomaron a partir de porciones albinas
de la piel, y si se tomaron a partir de zonas marrones.
Justifique.
c) ¿Cómo explica el hecho de que algunas manchas
marrones resultaron grandes y otras pequeñas?
R) a) i) En aquellas células donde no ocurra transpo-
sición el color de la piel será albino ya que al estar
interrumpido el promotor de C y no ser funcional el
gen C no se expresará.
En caso de que se trate de un retrotransposón, este
transposón pasará por un intermediario de RNA. En
dicho intermediario podrá ocurrir el splicing del intrón
de la construcción y al retrotranscribirse a DNA e in-
tegrarse en algún lugar del genoma del ratón se rege-
nerará el promotor de C. En aquellas células de la piel,
derivadas de aquellas donde ocurrió la retrotransposi-
ción, se expresará el gen C dado parches de color
marrón.
ii) En este caso el intrón no se eliminará nunca (ya
que la maquinaria que elimina intrones los elimina del

RNA y no del DNA) por lo que el promotor nunca
será funcional, aún cuando haya transposición. Por lo
tanto los ratones deberían ser íntegramente albinos.
b) En las zonas blancas de la piel no ocurrió transpo-
sición por lo que debería ver una sóla banda corres-
pondiente al tamaño del fragmento incluyendo el
intrón.
En las zonas marrones de la piel si ocurrió retrotrans-
posición y se eliminó el intrón. Por este motivo deber-
ía ver dos bandas una incluyendo el intrón (el retro-
transposón original no se elimina) y otra sin el intrón.
c) Las manchas grandes se deben a eventos de trans-
posición que ocurrieron temprano en el desarrollo (y
por ende dieron lugar a una porción grande de la piel)
mientras que las manchas pequeñas se deben a even-
tos de transposición que ocurrieron de forma más tard-
ía.
7) NNK y NNN son nitrosaminas presentes en el ta-
baco y en el humo de cigarrillo, conjuntamente con
otros potentes carcinógenos y se sospecha que tienen
un rol primario en el cáncer de pulmón, boca y otros
sitios. Por otro lado, se cree que el té verde podría
funcionar como quimioprotector, debido a la presen-
cia de antioxidantes fenólicos que actuarían en los
pasos dependientes de replicación que ayudan a fijar
las mutaciones como parte del desarrollo oncogénico.
Pressentin y col (2001) estudiaron genotoxicidad de
NNK y NNN utilizando ratones transgénicos para
lacZ (sistema Mutamouse) a los cuales suministraron
NNN, NNK y/o té verde en el agua de bebida durante
tiempos y condiciones controladas. Después de los
tratamientos, extrajeron DNA de los órganos de in-
terés, se lo empaquetó con un extracto con cápsides de
fago λ y se infectaron bacterias, las cuales se plaquea-
ron. Se investigaron, además de los órganos que des-
arrollan cáncer con mayor frecuencia en fumadores, al
hígado y al riñón porque se reportó que estos com-
puestos son metabolizados y excretados por vía urina-
ria en los fumadores (se sabe hace mucho que la orina
de fumadores es mutagénica). En la figura 1 se cuanti-
fican la cantidad de placas (playas de lisis) transparen-
tes sobre el total (azules + transparentes).
21
Fig 1: Promedio de unidades formadoras de placa
(pfu) para NNK, NNN y un control no tratado. Se gra-
fican los desvíos estándar. Un asterisco simple impli-
ca P < 0.05 usando el Mann–Whitney U-test versus el
control correspondiente. El doble asterisco (**) de-
nota P < 0.01. liver, hígado; lung, pulmón; O.T., te-
jido oral; esoph., esófago; tongue, lengua; kidney,
riñón; cont., control .
a) ¿Qué ventajas (en términos temporales) tiene este
método comparado, por ejemplo, con cuantificar el
desarrollo de tumores en los ratones, si es esto último
es lo que interesa en última instancia?
b) En base a los resultados ¿diría que las nitrosaminas
de tabaco son mutagénicas? ¿Por qué?
c) Dado que la ingestión de agua sin nitrosaminas
(control) resulta en valores significativamente distin-
tos de cero ¿sospecharía que en el experimento hay
algún otro mutágeno que no se está controlando o que
es mutagénica el agua y que pueda afectar la validez
del experimento?
d) A partir de los resultados ¿Considera que existe
especificidad de tejido o no? ¿Se condicen estos resul-
tados con las evidencias epidemiológicas previas que
indican que pulmón, esófago y boca son los que mues-
tran mayor incidencia de carcinogénesis por efecto del
cigarrillo?
e) Una de las ventajas de este sistema de detección es
que se puede aislar fácilmente DNA de las placas
transparentes y secuenciarlo. ¿Qué información apor-
taría esto último?
Posteriormente, se realizaron experimentos suminis-
trando una infusión de té verde, con los resultados que
se muestran en la Fig 2:
Fig. 2. Igual que en la Fig. 1. Las diferencias denota-
das por asteriscos son entre NNK y NNK+T. NNK+T:
NNK + té verde.
f) Indique y justifique si le recomendaría tomar té
verde a un fumador (aunque no le guste) en vez de
aconsejarle que deje de fumar.
Respuestas:
a) Porque esperar a que desarrollen tumores lleva, por
lo menos, varias semanas. Este método es más rápido.

b) Sí, en todos los casos, salvo la NNK en lengua,
porque los valores de PFU son significativamente di-
ferentes a los controles.
c) No necesariamente, porque estos valores pueden
estar reflejando las frecuencias de mutación espontá-
nea o basal. Aún en el caso de que hubiera otro mutá-
geno adventicio, las diferencias son estadísticamente
significativas, validando así el experimento.
d) Sí, porque el órgano más afectado fue el hígado y
los demás lo hicieron en menor grado. No, por lo an-
tedicho. Podría especularse que existe un efecto dife-
rencial por la vía de entrada. La vía de ingreso de las
nitrosaminas (oral en vez de pulmonar) podría ser un
causal de esta diferencia. Para demostrarlo, habría que
suministrar las nitrosaminas por aspiración en una
atmósfera de humo y comparar los resultados.
e) Aportaría información sobre el mecanismo mole-
cular de mutación (transiciones, transversiones, indels,
etc)
f) Las diferencias significativas indican que el té ver-
de sería un quimioprotector en todos los tejidos eva-
luados salvo en esófago y lengua. Sin embargo, no
evita por completo la genotoxicidad en las condicio-
nes ensayadas. Por lo tanto, no reemplaza el efecto
benéfico de dejar de fumar.
8) Recientemente, un grupo de investigadores
estudiaron los mecanismos de regulación del elemento
transponible mariner, que está presente en genomas
de invertebrados, hongos y humanos. Ellos obtuvieron
un macho transgénico que tenía reemplazado un
fragmento del gen white, localizado en el cromosoma
X, por otro homólogo, pero interrumpido por un
mariner cuya transposasa no era funcional. Esta
variante de transposón con transposasa no funcional
se denominó peach. El gen white codifica para un
pigmento rojo del ojo y cuando está mutado por
inserción, no se expresa y los ojos resultan blancos.
Por sucesivas cruzas, se obtuvo una población de
machos y hembras con todos sus cromosomas X
conteniendo el gen white interrumpido por peach.
Por otro lado, se logró una construcción denominada
hsp, en la que el elemento mariner salvaje se puso
bajo la regulación del promotor del gen de la proteína
hsp70 (heat shock protein), que es inducible por calor.
Esta segunda construcción se introdujo en uno de los
cromosomas del par 2 de moscas transgénicas que ya
eran peach, obteniéndose moscas hsp/+.
Se realizaron cruzas entre moscas transgénicas peach,
en las que uno de los parentales tenía 1 dosis de hsp
(hsp/+) y el otro parental, ninguna (+/+) . Se contó el
porcentaje de la progenie, criada a 25ºC (actividad
basal de hsp) o a 37ºC (actividad inducida de hsp),
que exhibía ojos rojos.
Genotipo del Temp. % de progenie
cromosoma 2 con ojos rojos
de los padres
hsp/+ ; +/+ 25 8 somas (la mitad de 64) y las de los burros 31  32
37 17
hsp/+ ; hsp/+ 25 18
37 48
+/+ ; +/+ 25 1 número impar
37 2
22
Preguntas :
a) Interprete los resultados numéricos
b) ¿En qué etapa del desarrollo ocurren los eventos
que dan a origen a la progenie con ojos rojos ?
c) En este tipo de cruza también aparecen individuos
con ojos blancos con manchas rojas (fenotipo
mosaico). ¿Cómo justifica estos resultados? ¿En qué
etapa del desarrollo ocurrieron los procesos que
originaron los ojos mosaico?
d)Las hembras mosaico presentan un mayor número
de manchas rojas que los machos mosaico. ¿Cual es la
causa ?
Solución:
Super familia mariner Tc1
IR IR
50-28 pb 1000 50-28 pb
trasposasa
D. mauritiana: especie endémica hospedador de mari-
ner: IR tr + IR
mariner (wt)
IR tr - IR
peach
IR tr + IR
hsp
a) hsp/+ ; +/+
25 ºC, 8%: actividad basal que induce la síntesis de tr,
que actúa en trans sobre white interrumpido por pe-
ach
37 ºC, 17%: idem, pero con promotor inducido
25 ºC: hsp/+; hsp/+
37 ºC: 18% y 48%: análogo a la progenie de los otros
parentales pero con doble dosis de tr y trasposasa.
+/+ ; +/+ : valores basales en ausencia de tr. 1% puede
ser casual, retromutación debería ser 0%.
b) Durante el desarrollo del embrión, etapas tempra-
nas
c) Desarrollo embrionario, estado multicelular del de-
sarrollo del ojo. La transposición que elimina a peach
de white ocurrió varias veces.
a) La doble dosis del X en las hembras duplica la
probabilidad de la transposición respecto a los ma-
chos, que tienen una sola dosis del X.
Alteraciones cromosómicas y cromosomas
1) El caballo (Equus caballus) tiene un complemento
diploide de 64 cromosomas, de los cuales 36 que son
acrocéntricos. El burro o asno (Equus asinus) tiene 62,
de los cuales 22 son acrocéntricos.
a) Indique el número (diploide) de cromosomas que
tendrá el híbrido interespecífico (la mula)
b) ¿A qué atribuye la usual esterilidad (incapacidad
de producir gametas viables) de la mula?
R: a) Las gametas de los caballos tendrán 32 cromo-
+31 = 63 (¡el “2n” de la mula es impar!).
b) A los problemas de apareamiento y segregación
meiótica derivados de cromosomas tan disímiles y de

2) Describa un ejemplo de alteración cromosómica
estructural que afecte la fertilidad en individuos hete-
rocigotas para la alteración. Justifique brevemente su
respuesta.
Respuesta: Cualquiera de los ejemplos de alteracio-
nes estructurales que dio Liliana o figuran en los li-
bros (translocaciones recíprocas, por ejemplo) que
impliquen la formación de configuraciones meióticas
como trivalentes, tetravalentes, etc. y que afecten la
correcta migración de los cromosomas en la anafase
meiótica. La inclusión de algún esquema reemplaza
buena parte de la explicación.
3) Se desea localizar en qué cromosoma se localiza el
locus para un marcador molecular de tipo codominan-
te (microsatélite) ligado a un carácter de interés
agronómico (QTL). La especie vegetal tiene un núme-
ro diploide de 2n=10 cromosomas y se dispone de la
serie monosómica completa. Se cruza una planta
disómica homocigótica (muestra una banda de 200
pb) por cada uno de los diferentes monosómicos todos
los cuales muestran una banda de 180 pb. Algunos de
los descendientes muestran ambas bandas (200/180
pb) y otros sólo una (la de 200 pb). Las descendencias
obtenidas se desglosan en la tabla clasificadas de
acuerdo a su constitución cromosómica, es decir si
poseen 9 cromosomas (es decir, monosómicas) o 10
cromosomas (disómicas, ver columna 1) y a su patrón
de bandas (columnas 2 a 5):
Descendencia de los 5 cru-
Cromosoma en zamientos analizados
condición mo-
Disómicos Monosómicos
nosómica
200/180 200 200/180 200
1 140 0 139 0 b) si se interpreta que todos los bivalentes posibles se
2 97 0 93 0 pueden formar (al azar) la frecuencia de individuos
3 193 0 0 196
4 58 0 57 0 6) En un reciente trabajo de Learmonth y colaborado-
5 158 0 145 0
Explique los resultados obtenidos e indique en qué
cromosoma se localiza el marcador molecular.
Solución: Si el locus no está en un cromosoma cual-
quiera de los que se encuentran en 2 copias (es decir
no está en el monosómico) tendrá una segregación 1:1
mendeliana normal y todos sus descendientes serán
heterocigotas 200/180. Si el locus está en el cromo-
soma crítico lo que realmente estamos cruzando es
200/200 x 180, y de esta descendencia, los individuos
con 9 cromosomas serán 200 y los de 10 cromosomas
serán 200/180. Si observamos la tabla vemos que este
razonamiento se compatibiliza con los resultados del
cromosoma 3.
Por ej. para el cromosoma 1: 200/200 x 180/180 
todos 200/180 (sean mono- o disómicos)
Para el cromosoma 3: 200/200 x ---/180  50%
200/180 (disómicos) y 50% ---/200 (monosómicos)
4) En una enferme-
dad genética huma-
na se observa la si-
guiente conforma-
ción cariotípica de
los pares de cromo-
somas 7 y 21 (notar
las similitudes de
23
bandeo mostradas por las llaves).
a) ¿Cual fue el origen de esta anomalía y qué nombre
recibe?
b) En caso de examinar la gametogénesis de este indi-
viduo ¿esperaría observar alguna peculiaridad durante
la meiosis? ¿Cuál?
c) ¿Podría implicar una reducción en la fertilidad de
las gametas? ¿Por qué?
Respuesta: a) Translocación no recíproca) 7:21
b) Sí. Polivalentes formados entre el 7, el 21 y el 21
translocado
c) Sí, como consecuencia de lo descripto en b) se
afectaría la migración a los polos provocando aneu-
ploidías capaces de inviabilizar las gametas
5) Un investigador trató con colchicina las famosas
arvejas de Mendel y obtuvo los tetraploides corres-
pondientes. Por otro lado, también introdujo un
transgén proveniente del trigo que estabiliza una for-
ma de herencia diploide evitando la formación de po-
livalentes (por ej. tetravalentes) que puedan distorsio-
nar la meiosis. Luego repitió los cruzamientos arvejas
de flores blancas por arvejas de flores rojas. ¿Qué
proporciones de plantas con flores blancas y rojas ob-
tuvo en la F2? Describa los genotipos simplificados de
dicha F2, de la F1 que le dio origen y de los parentales
poliploides (usar guiones bajos para ejemplificar casos
en que ambas variantes genotípicas resultan en fenoti-
pos equivalentes)
Respuesta más correcta:
a) 15 a 1; P: AAAA x aaaa  F1: AaAa  F2. 15
A___ 1 aaaa o
Respuesta menos correcta:
aaaa en la F2 es 1/ 36 (1:35)
res se estudiaron los efectos a largo plazo de las artro-
plastías (injerto o reemplazo de partes óseas por próte-
sis metálicas) que generan debris (restos) en linfocitos
de sangre periférica. Estos restos metálicos se suelen
alojar en las adyacencias de la prótesis, ganglios linfá-
ticos, hígado y páncreas. Para ello realizaron hibrida-
ción in situ (FISH: preparados cromosómicos a los
cuales hibridaron) con sondas específicas del cromo-
soma 1 marcadas con un fluoróforo (rodamina) que lo
tiñe específicamente de rojo, contrastando con el color
azul del resto de los cromosomas (teñidos con DAPI).
Observaron que cuando se utilizan prótesis con cro-
mo-cobalto se observa un aumento de 3,5 veces de
conformaciones cromosómicas del tipo de la figura 1
y 2,5 veces de las de la fig. 2 respecto a la utilización
de prótesis de acero inoxidable.
a) Defina el tipo de mutaciones cromosómicas estruc-
turales y numéricas detectadas en las figs. 1 y 2.
b) En el trabajo se hizo un especial esfuerzo para que
el muestreo realizado se independizara de factores
como el hábito de fumar, el número de radiografías,
etc. ¿Por qué?
 24
a) Indique a qué conclusiones llegó el investigador.
Detalle los genotipos en los cruzamientos realizados,
Fig. 2 la dominancia de los alelos y los resultados del ma-
peo.
Por otro lado, al cruzar los helechos de la tribu 1 con
los de la tribu 3, suponiendo que iba a lograr los mis-
Fig. 1 mos resultados, se sorprendió al obtener otro resulta-
do. La F1, fenotípicamente igual al parental de la tribu
1, presentó 300 gametas de los siguientes tipos:
v1b1t1 141 v3b3t3 v1b3t3 v3b1t1 11
134 14
Al estudiar más detalladamente encontró que la F1 era
menos fértil que sus padres (los helechos nativos de
c) De acuerdo a lo que muestra este trabajo. En prin- cada tribu presentaban una fertilidad similar)
cipio, las prótesis de cromo-cobalto inducen mutacio- b) Explique todos los resultados obtenidos, realizando
nes ¿somáticas o germinales? Es decir, ¿podrían au- un esquema que muestre claramente qué se observaría
mentar la probabilidad de que se produzcan malfor- en paquitene de la F1 y la ubicación relativa de los
maciones genéticas en la descendencia de estos pa- loci, con sus distancias.
cientes? RESPUESTA
d) En este trabajo solo se examinaron mutaciones de a) Los helechos cultivados en tribus distintas son
tipo estructural y no aquellas de tipo puntual? ¿Se le homocigotas. Por lo tanto el cruzamiento es
ocurre algún modelo experimental (no humano) para V1b1t1/v1b1t1 (tribu1) X v2b2t2/v2b2t2 (tribu 2).
estudiar este aspecto. ¿Le serviría este modelo para La F1 es heterocigota y vemos que los rasgos de la
contestar con más certeza la pregunta c)? tribu 1 son todos dominantes. Al analizar las distan-
Rta a) traslocación y aneuploidía (triploidía) del cro- cias llegamos a
mosoma 1
b) Porque son otros factores mutagénicos comproba- VBT V-B V-T B-T CANTIDAD
dos que también aumentan la tasa de mutaciones y 111 P P P 87
podrían interactuar sinérgicamente (o no) con el factor 222 P P P 79
que estoy estudiando. 121 R P R 19
c) Somáticas. En principio, no. (los debris no se acu- 212 R P R 21
mulan en tejidos reproductivos) 112 P R R 77
d) Los sistemas basados en ratones transgénicos vistos 221 P R R 80
en clase de problemas injertados con prótesis o inyec- 122 R R P 15
tados con debris metálicos en sangre, analizando dis-
tintos tejidos incluyendo el reproductivo. Pueden con- 211 R R P 22
testar otros sistemas como pueden ser los de inter- VB: P= 323, R= 77 =>19,25 cM (20 es aceptable)
cambio de cromátides hermanas (por ej) pero este sis- VT: P=206, R= 194=> 48,5 No ligado
tema no detecta tan bien mutaciones puntuales sino las BT: P=203, R= 197 =>49,25 No ligado
cromosómicas o el test de Ames pero no podrían VB están a 20 u.m., T está en otro cromosoma o en el
examinar tejido reproductivo. mismo, pero muy alejado.
7) Un investigador está estudiando la genética de una b) Acá desaparecen fenotipos. Hay transtornos de fer-
especie de helecho denominado “Verdecitus bonitus, tilidad. Al analizar los resultados tenemos:
cultivada hace siglos por los indígenas del Amazonas. VBT V-B V-T B-T CANTIDAD
Le llama la atención que en una tribu (que llamaremos 111 P P P 141
1) todos los helechos son de hoja verde brillante (v1), 333 P P P 134
de borde liso (b1) y textura aterciopelada (t1), mien- 133 R R P 14
tras que en dos tribus del otro lado del río (que lla- 311 R R P 11
maremos 2 y 3) los helechos son opacos (v2), de bor-
VB= P= 275 R=25 => 25/300  0,0833 (aprox 8,3
de festoneado (b2) y textura ríspida (t2). Decide estu-
cM)
diar si los helechos de las distintas tribus pertenecen
VT todos parentales.
realmente a la misma especie y cuál es la dominancia
BT mismo resultado
entre los rasgos. Al cruzar los helechos de la tribu 1
Lo más probable es que haya ocurrido una transloca-
con los de las 2 obtiene una F1 integrada por helechos
ción. Entonces, lo que estamos midiendo (8,33cM) es
v1, b1 y t1 y sin problemas de fertilidad. Decide en-
la distancia entre V y el punto de la translocación. (F1
tonces que es válido considerarlas de la misma especie
es heterocigota estructural)
y decide mapear los loci estudiados. Analiza para ello
Es importante que expliquen que los trastornos de fer-
400 gametas producidas por la F1 y encuentra los si-
tilidad se deben a que las gametas cuya segregación
guientes resultados:
no es alterna no prosperan.
v1b1t1 87 v2b1t2 21 v1b2t2 15 Tienen que realizar el siguiente esquema y marcar que
v2b2t2 79 v1b1t2 77 v2b1t1 22 probablemente la distancia entre V y B siga siendo 20,
v1b2t1 19 v2b2t1 80

pero la distancia entre V y el punto de translocación es
8,33
(V y B pueden ser intercambiables.)
Si la translocación no ocurre “cortando” el espacio
entre V y B no cambian las distancias entre ellos, que
es lo que pasa en el problema. Por lo tanto, esas op-
ciones se descaetan- Igualmente, las gametas resul-
tantes de quiasmas entre B y la translocación o entre t
y la translocación son desbalanceadas. Sólo las re-
combinantes entre V y la translocación son completas.
Esas corresponden al 8,33-
Este esquema es uno de los posibles, ya que no hace
falta que los marcadores v y t estén en el mismo cro-
mosoma, sólo es necesario que la translocación se dé
entre esos dos cromosomas. Esta es otra opción:
Si plantearon que T está en un cromosoma distinto, la
única opción es la translocación. La inversión entre V
y B no modificaría a T, por lo tanto VT y BT seguir-
ían dando no ligados.
La fusión (los 3 cromosomas en el mismo cromoso-
ma) no es una opción porque, si bien podría modificar
25
la distancia de T a los emás no modificaría la dis-
tancia entre V y B.
Por otro lado, tampoco es válida una deleción. Prime-
ro, porque si no es muy grande no debería ocasionar
transtornos en la fertilidad. Segundo porque aún si
cambia la frec de recombinantes ebtre V y B no cam-
biaría T, que seguiría estando no ligado.
En el caso en que los tres loci estén en el mismo cro-
mosoma (T bien lejano) sí es válido considerar que
una de las tribus tiene invertido V-B respecto a la otra.
En ese caso las gametas parentales y las recombinan-
tes entre V y el punto de inversión son las únicas via-
bles.
8) Usted trabaja en un hospital, en la división de Cito-
genética. Dos familias con padres de fenotipos com-
pletamente normales recurren a usted pues entre sus
descendientes tienen una hija que presenta Síndrome
de Down. Este síndrome se produce por tener 3 copias
del cromosoma 21.
Flia Madre Padre Hija enferma
1 46, XX 46, XY Down
2 45, XX, +T (14q. 21q) 46, XY Down
a) ¿Cuál es el cariotipo de las hijas de cada familia?
b) ¿Cómo es posible que la madre de la familia 2 ten-
ga fenotipo normal?
En la meiosis de la madre de la familia 2 se producen
trivalentes y en la posterior segregación dos cromo-
somas del trivalente, al azar, migran a un polo y el
restante al otro.
c) Para cada uno de los 3 casos descriptos indique en
la meiosis de qué parental se produjo la falla y en qué
fase de la misma. Mencione todas las posibilidades.
d) Para cada familia indique si la probabilidad de te-
ner otro hijo con Down es alta o baja. Justifique.
Respuesta:
a) Hija 1: 47, XX, +21
Hija 2: 46, XX, -14, +T (14q . 21q)
b) El cromosoma 14 y el 21 son acrocéntricos por lo
que en la fusión, con pérdida de los brazos cortos, po-
siblemente se perdieron pocos genes. La madre de la
familia 2 tiene 45 cromosomas: dos de cada par, un
cromosoma 14, un cromosoma 21 y uno translocado.
Salvo para los genes de los brazos cortos del 14 y el
21 hay 2 copias de cada gen. Los genes de los brazos
cortos del 14 y 21 quedan en hemicigosis (están en las
copias normales) pero si son pocos puede que el feno-
tipo de la madre sea normal.
c) Familia 1: Los padres tienen genotipo normal por lo
que lo más probable es que no haya ocurrido disyun-
ción para el cromosoma 21 en la anafase I o la anafase
II durante la formación de gametas en el padre o en la
madre.
Familia 2: La madre presenta una fusión entre el cro-
mosoma 14 y el 21. Como resultado de esto en meta-
fase I se forma un trivalente por lo que en anafase I
puede haber una segregación desbalanceada de cro-
mosomas.
d) Familia 1: La no disyunción es una falla que ocurre
al azar por lo que, teniendo en cuenta factores de ries-
go como edad de los padres, etc., la probabilidad de
que tengan más hijos con el Síndrome de Down son

bajas, o por lo menos similares a las de cualquier otra
pareja.
Flia 2: 1/6 de las gametas darán lugar a descendientes
con Sín-drome de Down. Es decir tiene una alta pro-
babilidad de tener otro descendiente Down (que en
realidad dentro de los hijos nacidos vivos es más de
1/6 ya que los casos resaltados en rojo no son viables,
y el último caso generalmente tampoco).
10) Cuando se cruzaron dos plantas pertenecientes al
mismo género, pero de diferentes especies, los híbri-
dos F1 presentaron mayor viabilidad y tuvieron más
flores. Desgraciadamente, estos híbridos fueron estéri-
les y sólo se pudieron propagar mediante injertos ve-
getativos. Explique la esterilidad de los híbridos.
Cómo podría el horticultor intentar anular la esterili-
dad. Explique los resultados que obtendría.
Rta.
La esterilidad se debe a que, como son especies dife-
rentes, los cromosomas no son homólogos, sino
homeólogos. Por lo tanto no se forman bivalentes, o
sólo se forman pocos bivalentes y muchos univalen-
tes, la meiosis es irregular, y no se producen gametas
viables (balanceadas).
Para anular la esterilidad se puede tratar con colchici-
na, lo que produce una duplicación del número de
cromosomas. Esto da por resultado un alotetraploide
(o anfidiploide), en el cual se forman todos bivalentes,
la meiosis es regular y las gametas son balanceadas.
9) Se realiza el siguiente cruzamiento entre moscas
(Drosophila melanogaster). Una hembra heterocigota
para los siguientes caracteres: vestigial (vg) mutación
recesiva ubicada en el cromosoma II, white (w) muta-
ción recesiva ubicada en el cromosoma I (que es el X)
y ebony (e) mutación recesiva ubicada en el cromo-
soma III es cruzada con un macho recesivo para los
tres caracteres. Se obtuvieron los siguientes resulta-
dos, siendo que toda la descendencia (sean machos o
hembras) presentaron los siguientes fenotipos:
vg+ e+ w+ : vg e+ w : vg e w : vg+ e w+
JUSTIFIQUE si las siguientes afirmaciones son co-
rrectas (o no):
a) No se observan recombinantes entre vg y w, lo que
puede deberse a la existencia de una inversión que
involucre a ambos genes.
b) No se observan recombinantes entre vg y w lo que
puede deberse a la existencia de una o más transloca-
ciones recíprocas.
c) Entre los machos de la descendencia, la propor-
ción de machos con ojos blancos (white) es de 1/4
dado que este carácter está ligado al sexo.
d) Si hubiese habido una translocación recíproca entre
e+ y w+, la proporción de machos descendientes w+
hubiese sido distinta a la proporción esperada (pro-
porción esperada es la que se obtendría si no hubiese
una alteración cromosómica).
R) a) Incorrecta. Sólo puede considerarse la transloca-
ción recíproca ya que los genes están en cromosomas
independientes. Esta alteración permite explicar que
los genes segreguen como si estuviesen ligados.
b) Correcta. Podría ser que vg+ haya translocado al
cromosoma donde está w+ o que vg haya translocado
al cromosoma donde está w. Sería menos probable
26
que se produzcan dos eventos de translocación recí-
proca.
c) Incorrecta. White sí está ligado al sexo pero la pro-
porción es de ½.
d) Incorrecta. La proporción esperada de machos con
ojos wild type entre los machos de la descendencia es
de ½. Ejemplifico el caso en que hubiese habido una
translocación recíproca entre w+ y e+.
Gametas que produce la hembra translocada:
Gametas
½ Machos
w+ y hete-
rocigota
para e
½ Machos w
y homocigo-
ta para e
Gametas que produ-
ce el macho:
Genética cuantitativa
1) La longitud media internodal en espigas de cebada
de la variedad gran cervecera es de 4,24 mm (con
baja variancia). En la variedad imperial la media in-
ternodal es de 6,34 mm (con baja variancia). La media
de la F1 de un cruce entre las dos variedades tiene,
aproximadamente, 5,4 mm (con baja variancia). La F2
da también 5,4 mm pero con un rango de variación
continuo desde un extremo parental al otro (alta va-
riancia). El análisis de la progenie de la autofecunda-
ción de cada uno de los individuos de la F2 mostró 3
distribuciones entre sus descendientes: i) tipo gran
cervecera con media de 4,24 mm y baja variancia, ii)
tipo imperial de 6,34 mm y baja variancia y iii) igual a
la F2. La longitud internodal en espigas de cebada, ¿es
un carácter discontinuo o cuantitativo?¿Cuántos loci
están involucrados en la segregación del carácter?¿Por
qué?
Respuesta: La respuesta puede ser de distintas mane-
ras (ver más abajo) pero se debe concluir que la
herencia involucra un único locus y es típicamente
mendeliana (en este caso semidominante ) y no de
tipo “cuantitativa”. Si gran cervecera es AA e impe-
rial aa, la F1 es Aa (semidominante) y los individuos
de la F2 son AA, aa o Aa, como lo demuestra el com-
portamiento de las respectivas pruebas de progenie. Se
puede contestar que es un carácter discontinuo (medi-

do cuantitativamente) o que es cuantitativo (por su
forma de medición) pero formado por un único locus
(QTL).
2) Una población vegetal silvestre es sometida durante
muchas generaciones sucesivas a un proceso de selec-
ción artificial basado en sembrar cada año únicamente
las semillas procedentes de plantas incluidas en el
20% de mayor producción. Como consecuencia de la
selección practicada, la producción media aumenta
gradualmente. Los valores de heredabilidad del carác-
ter producción en dicha población a lo largo del pro-
ceso selectivo serán a) creciente, b) decreciente, c)
primero creciente y luego decreciente d) constante.
Justifique su respuesta.
Respuesta: Decreciente. La heredabilidad está en
función directa con la variabilidad genética (varianza
genotípica), la cual disminuye con el proceso de se-
lección.[Respuesta alternativa: debería ser decreciente
y después constante, una vez agotada la variabilidad
genotípica].
3) Dados los excepcionales conocimientos de Genéti-
ca que adquirió en tiempo récord en este curso de ve-
rano y gracias a la devaluación y sus bajas pretensio-
nes salariales, una exitosa empresa textil exportadora
de productos regionales decide contratarlo para mejo-
rar la productividad y la calidad de la lana de sus re-
baños de llamas. El establecimiento del NOA dispone
de una población de animales cuya producción de lana
y calidad de la fibra siguen una distribución de tipo
normal y que se muestran en A y B, respectivamente.
Tal como aprendió en Genética I, lo primero que hace
es estudiar la heredabilidad del carácter y para ello
dividió la población en 3 subgrupos cada una (deno-
minados 1, 2 y 3 en la figura) de acuerdo a los valores
promedio de producción o calidad X1, X2 y X3, res-
pectivamente). Seguidamente dejó que los individuos
de cada una de las subpoblaciones creadas se aparea-
ran entre sí y analizó la distribución de valores de la
siguiente generación. Como se ve en la figura, los va-
lores promedio de la nueva generación coincidieron
con los valores promedio de cada una de las subpo-
blaciones paternas en A (productividad). En cambio
en B (calidad) coincidieron con el promedio de la po-
blación original sin seleccionar.
a) ¿Cómo fue la heredabilidad de los 2 caracteres?
Debido a que es un profesional muy serio, antes de
hacer un diagnóstico prefirió esperar un par de años
más y ver que ocurre en una segunda generación antes
de emitir un diagnóstico y una estrategia de mejora-
miento. Para ello, sin aplicar nueva selección, dejó
cruzar entre sí a los nuevos individuos pertenecientes
a las subpoblaciones.
27
b) ¿Cómo serían las distribuciones en esta segunda
generación?
c) ¿Cuál fue su diagnóstico y qué plan de mejoramien-
to presentó a la empresa?
Aprovechando su estancia en el NOA decidió hacerse
un viajecito a Bolivia y, en el lago Titicaca observó
unas llamas con una fibra de excepcional calidad
(muy superior a cualquiera de las del establecimiento
argentino) aunque de productividad de lana muy infe-
rior. Indeciso, compra esas llamas y vuelve al estable-
cimiento a realizar nuevos cruzamientos entre ellas y
las argentinas. Para su sorpresa, entre los descendien-
tes no sólo obtiene individuos con un aumento de la
calidad de la fibra, sino que algunos (muy pocos)
animales tienen una productividad superior a la obser-
vada en la subpoblación seleccionada de “A”. Descon-
fiado, supone que los valores de estos pocos indivi-
duos podrían estar influidos por el ambiente, por lo
que los pone aparte, deja que se crucen entre sí y ana-
liza sus hijos. Resultado: la alta productividad se man-
tiene y obtuvo las mejores llamas de la historia.
d) ¿Cómo explica su buena suerte? Es decir, ¿a qué
fenómeno genético atribuye este resultado?
A todo esto, ya pasaron varios años y decide ir con sus
resultados a pedir un considerable aumento de sueldo.
Sin embargo, a esta altura del partido, vuelve Cavallo
al ministerio de Economía, reimplanta la convertibili-
dad y la empresa entra en crisis, entre otras cosas por-
que, durante los años en Ud. hacía estudios genéticos,
la productividad no aumentó y decidieron prescindir
de sus servicios por “ineficiente” (no vale la pena
hacer investigación y desarrollo en la Argentina, le
argumentaron) y le vendieron las llamas a Telecom
para su famosa propaganda (porque observaron que
llamaban por teléfono muy seguido a sus familiares
bolivianos).
Mientras tanto, su hermanito más chico decide seguir
sus pasos y en la facultad aprende que un grupo en
Australia, publicó un trabajo en el que encuentra una
asociación entre un RFLP correspondiente a un gen
que interviene en la síntesis de la queratina en la lana
en ovejas y que explica el 90% de la variabilidad (va-
rianza genética) del carácter calidad de la fibra.
e) En base a toda esta experiencia y en no más de 10
renglones ¿qué hubiera hecho distinto (además de vo-
tar con conciencia) para evitar este final? Nota: se cas-
tigará con -1 punto si la respuesta excede los 10 ren-
glones.
Respuesta: a) 1 (100%) y 0, respectivamente, b)
igual, c) Que, dada la alta heredabilidad de A, puedo
tratar de seguir seleccionando individuos en base a
producción y que, dada la nula heredabilidad de B, no
hay variabilidad genética y no tiene sentido seleccio-
nar para este carácter. Deberían buscarse otras fuentes
de variabilidad. d) Segregación transgresiva. e) Hubie-
ra tratado de hacer mis primeras evaluaciones utili-
zando la mayor diversidad genética disponible (y no
limitarme a los animales del establecimiento) y, en
paralelo, hubiera buscado la literatura científica rela-
cionada para evaluar la factibilidad de encontrar mar-
cadores moleculares para el carácter estudiado que me
sirvan para seleccionar con más eficiencia. Por ejem-

plo, intentaría usar el gen de oveja como sonda que, si
hibrida con el gen homólogo de la llama, podría servir
para observar si encuentro un polimorfismo útil en
llama para RFLP (u otra técnica como STS, SSCP,
etc.), es decir, ver si hay cosegregación de un marca-
dor con mi característica de interés para así usarla en
selección asistida por marcadores. Respuesta alterna-
tiva: llamas transgénicas con el gen de la oveja.
4) En el mejoramiento bovino se busca un aumento
más rápido del peso de los animales en determinados
ecosistemas de pasturas semitropicales. Se trata de un
carácter cuantitativo y aditivo. Para ello se cruzaron
vacas con cebúes (de aumento más rápido, pero cuya
calidad de carne es menor) obteniéndose una F1 con
valores intermedios (la media se ubicó equidistante
entre la media de las vacas y la media de los cebúes).
La varianza fue muy similar tanto a la de vacas como
de cebúes (que a su vez se parecían entre sí). Los inte-
grantes de la F1 se cruzaron entre sí para obtener una
población segregante.
a) ¿Cómo supone que fue la media de esta población
segregante? ¿mayor, menor o similar a la de la F1?
b) La varianza fue ¿mayor, menor o igual a la de la
F1?
Entre los individuos de esta población se encontraron
algunos que superaron en aumento de peso a los mejo-
res cebúes.
c) ¿Conoce alguna explicación genética a este fenó-
meno?
Respuestas esperadas: a) Similar, b) mayor, c) se-
gregación transgresiva
5) Un conocido protagonista de Los Simpsons que
habitualmente se disfraza de Vaquita de San Antonio
se dedicó a la lucrativa venta de dichos coleópteros
pero, para hacerlos más atractivos, necesitaba aumen-
tar su tamaño dado que naturalmente tienen una media
de tan solo 5 mm. Seleccionó los machos y hembras
más grandes que encontró (promedio de 8 mm) pero
como eran muy pocos decidió reproducirlos para así
disponer de volumen para la venta. Para su sorpresa,
la descendencia no mantuvo la esperada longitud me-
dia de 8 mm sino que bajó a 6,5 mm. Muy enojado
por la baja performance de los bichos, los tiró y se fue
a recoger coleópteros nuevos y repitió el procedimien-
to de selección (con idénticos resultados).
a) ¿Por qué bajó la longitud promedio de la descen-
dencia?
b) ¿Puede calcular la heredabilidad de este carácter?
Después de admirar el tamaño de las cucarachas del
bar de Moe, abandonó la idea de seleccionar y se le
ocurrió criarlas con una dieta que le recomendó
Homero. De esta manera logró aumentar el promedio
de longitud de 5 a 6,5 mm (¡lo mismo que arriba!)
c) ¿Es casualidad que ambas medias hayan coincidi-
do?
Finalmente decidió contratarlo como consultor
d) ¿Qué hubiera hecho Ud en caso de querer conver-
tirse en vendedor de vaquitas de San Antonio super
size, disponiendo únicamente de una regla milimetra-
da y sabiendo que en Springfield NO existen laborato-
rios de marcadores moleculares o ingeniería genética?
Respuestas esperadas
28
1) a) Porque el tamaño observado es la combina-
ción de una estructura genética poblacional particular
(variancia genética) que puede segregar y de la in-
fluencia ambiental (no heredable) o variancia ambien-
tal.
b) La selección diferencial fue de 8 – 5 = 3 mm y la
respuesta selectiva 6,5 – 5 = 1,5 mm. Por lo tanto, la
heredabilidad fue de h2 = 1,5/3 = 0,5 (50%)
c) Sí (o no, en el sentido de que se reduce a un míni-
mo la variancia ambiental permitiendo expresar el
máximo potencial genético; de todos modos sigue
siendo casualidad que coincida una media general
únicamente debida a factores genéticos de una pobla-
ción sin seleccionar con los de una población selec-
cionada en la que no se afectó la influencia ambiental)
d) Volver a seleccionar en la descendencia y en las
siguientes generaciones hasta que la heredabilidad se
acerque a 0 (además de darles la dieta de Homero).
6) La resistencia al patógeno Sclerotinia sclerotiorum
en girasol es un carácter complejo que involucra dis-
tintos loci y se evalúa cuantativamente mediante un
índice de daño en el capítulo floral. Para evaluar la
heredabilidad del carácter se sembraron 100 plantas
de una línea moderadamente resistente (no existen
variedades totalmente resistentes al patógeno) en Bal-
carce, obteniéndose una media de índice de daño de
0,20. De esta población, se seleccionó un grupo de
individuos de mayor resistencia, con una media para
el índice de daño de 0,10, como padres para la si-
guiente generación, siendo la media de esta última
generación de 0,13 para la variable evaluada
a) ¿Cuál es la heredabilidad del carácter resistencia?
Cuando el mismo experimento, utilizando el mismo
material y presión de selección se realiza en otra loca-
lidad, la heredabilidad obtenida fue de 0,50
b) ¿A qué se debe la diferencia en la heredabilidad
obtenida en ambos casos?
Sobre una población segregante F2 proveniente del
cruzamiento de la línea resistente estudiada arriba y
una línea susceptible al patógeno, se realizó un es-
tudio con marcadores moleculares codominantes, de-
tectándose 2 marcadores estrechamente ligados a 2
QTLs, uno en el grupo de ligamiento 8 (GL8) y el
segundo en el grupo de ligamiento 6, que explican el
50 y 35 % de la varianza genética del carácter resis-
tencia respectivamente. En base a estas conclusiones,
c) ¿Descartaría la presencia de otros QTLs para este
carácter en la población en estudio?
El siguiente esquema representa el patrón para el mar-
cador asociado al QTL del GL8 en el padre modera-
damente resistente (MR), en el sensible (S) y en 10
individuos F2, evaluados como moderadamente resis-
tentes o sensibles (ver fila superior)
Padres Resistentes Susceptibles
MR S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
---- ---- ---- ----
---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ----
¿Cómo explica el patrón encontrado para el marcador
en estudio en los individuos 3 y 5 cuya evaluación
fenotípica es moderadamente resistente?
Rta:
a) h2 = Xf –Xo = 0,7
 29
Xs - Xo ta en “a” en el siguiente gráfico, si aplicara un
b) a la varianza ambiental e interacción genotipo- método bioinformático tal como hicimos en el trabajo
ambiente (carácter cuantitativo, con alta componente práctico sobre QTL. Considere que la línea horizontal
ambiental). es el umbral de significación (LOD = 3).
c) Dado que entre los dos QTLs explican el 85 % de d) Se analizaron micromatrices mediante “chips” de
la varianza genética, es muy probable que haya otro/s genes que abarcan todo el cromosoma 3. Se identifica-
QTLs de efecto menor en otros grupos de ligamento ron 10 genes que aumentan significativamente sus
no detectados niveles de expresión en las moscas viejas (en edades
d) Se esta evaluando con un marcador ligado a un avanzadas se expresan al menos 4 veces más que en la
solo QTL y la resistencia moderada observada puede edad de control). Estos genes y su posición en el ma-
deberse a la presencia de otro/s QTL/s en esos indivi- pa (cM) fueron:
duos. También pueden decir que hubo recombinación Gen A B C D E F G H I J K
entre el marcador y el QTL, pero dado que se dijo que Posición 4 5 9 10 22 25 30 42 60 90 93
estaban estrechamente ligado se espera que deduzcan Sobre la base de su respuesta en “a”, ¿cuáles de estos
la primera respuesta genes NO estarían incluidos entre los responsables de
7) En Drosophila melanogaster se obtuvieron dos las diferencias en la longevidad entre las líneas C y L?
líneas homocigotas que difieren ampliamente en la Respuesta: a) el QTL esta entre aproximadamente 80
longevidad media a 25ºC. La línea L tiene una longe- y 100 cM – Es de esperar que existan mas QTL en
vidad media de 120 días mientras que la línea C tiene otros cromosomas porque el identificado en el cromo-
una longevidad media de solo 40 días (ver figura). A soma 3 explica menos (40 – 90 = 50 dias) que la dife-
partir de una retro-cruza entre las líneas C y L se rencia entre ambas lineas parentales (120 – 40 = 80
construyeron líneas RIL. A cada RIL se le midió la dias)
longevidad. El siguiente esquema muestra el cromo- b) las distancias genéticas no son proporcionales a las
soma 3 de las líneas C y L, y más abajo resume las físicas porque dependen de las frecuencias de recom-
RIL más informativas para localizar QTL de la longe- binación y las frecuencias de recombinación no son
vidad sobre este cromosoma, considerando que no ctes a los largo del cromosoma (son mayores en las
existe epistasis. regiones telomèricas y menores en las regiones cen-
a) ¿Indique dónde están el o los QTL a lo largo del tromericas)
cromosoma 3 (en cM) y justifique en menos de 5 ren- c) hacen una curva que supere el LOD de 3 solo entre
glones si es de esperar que existan más QTL en otros 80 y 100 cM
cromosomas? d) los genes que seguro NO serian responsables de
b) ¿Por qué las distancias genéticas no son proporcio- ninguna diferencia de longevidad entre las lineas pa-
nales a lo largo del mapa físico? (por ejemplo, la dis- rentales L y C son A, B, C, D, E, F, G, H e I, porque si
Cromosoma 3 Longevidad (días) bien cambian de niveles de expresión durante el enve-
Línea L 120 jecimiento NO están incluidos en el QTL (a diferencia
de los genes J y K).
Línea C 40
8) Un marcador molecular RFLP está ligado en Dro-
RIL1 40 sophila a un locus QTL está involucrado en la deter-
RIL2 90 minación del número de setas abdominales. Una son-
RIL3 da que cubre toda la región del polimorfismo, se
Líneas RIL 40
hibrida con un fragmento de restricción de 6,5 kpb,
con un fragmento de 4,0 kpb o con los dos (en los in-
dividuos heterocigotos). Los genotipos para el QTL
RIL70 40
son QQ, Qq y qq y los números de setas abdominales
0 20 40 60 80 100 medias que corresponde a cada genotipo son respecti-
Posición en cM
vamente 20, 18 y 16. Se efectúa el siguiente cruza-
tancia entre 0 y 20 cM es menor que la distancia entre miento:
40 y 60 cM en el mapa físico, ver figura)
Hembras 4 , 0 q  4 , 0 q machos
6 ,5Q 6 , 5Q
14
13
12 Se determinan, después, los fenotipos de cada descen-
11
10 diente y se les extrae el ADN que se somete a una co-
9
8
rrida electroforética e hibridación con la sonda de ma-
LOD
7 nera de determinar su perfil de RFLP. En los casille-
6
5 ros ubicados en las calles del gel dibujado más abajo,
4
3
escriba el número medio de las setas abdominales para
2 cada uno de los tres fenotipos RFLP, suponiendo que
1
0 la frecuencia de recombinación entre el QTL y el
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 marcador es del 10%. Recordar que no existe recom-
Posición en cM binación en los machos de Drosophila. Detalle el cru-
c) Esquematice una posible curva de LOD en función zamiento y todos los cálculos que realizó para obtener
de cM que esperaría obtener, de acuerdo a su respues- sus respuestas.

9) El Dr. Kormy Yot (un importante nutricionista) se
embarcó en un proyecto nutrigenómico (“una dieta
para cada individuo, según su genotipo”) utilizando
una población de ratones de laboratorio para determi-
nar con precisión la influencia relativa de los compo-
nentes genéticos versus los componentes ambientales
(particularmente la dieta) en el peso corporal. Utilizó
una población genéticamente uniforme para la longi-
tud del cuerpo (desde la cola a la nariz) cuyo peso
promedio es de 30 g. Para ver si la variación en el pe-
so es heredable seleccionó a los ratones que pesaban
33 g o más (35 g en promedio) como progenitores de
la siguiente generación. En la siguiente generación el
peso promedio aumentó significativamente 2 g (el
peso medio fue de 32 g).
a) ¿Cuál es la heredabilidad (h2) del carácter en la po-
blación inicial de 30 g?
30
b) Mediante selección y posterior endocría logró
obtener dos líneas homocigotas para todo el genoma,
una de bajo peso (25 g) y la otra de alto peso corporal
(39 g). Si la varianza ambiental es de 3, ¿cuál es la
heredabilidad (h2) y la varianza fenotípica en cada una
de estas dos líneas homocigotas?
c) A partir de las dos líneas mencionadas en “b” se
construyeron 40 líneas RILs para el cromosoma 7,
pues era el único autosoma del que se disponía de
marcadores moleculares informativos. Teniendo en
cuenta el siguiente esquema que resume las líneas RIL
que resultaron informativas:
- indique si existe uno o más QTL sobre el cromoso-
ma 7, y la respectiva localización (segmento cro-
mosómico).
- ¿Cree Ud que pueden existir más QTLs para el mis-
mo carácter (peso) en el resto del genoma? Justifique
brevemente.
R) a) R = h2 S => h2 = R / S => h2 = (X1 – X0) / (Xs –
X0) = (32 – 30) / (35 – 30) = 0,4.
b) h2 = 0 en cada una de las líneas porque las líneas
son homocigotas para todo el genoma (incluyendo los
posibles genes que afectan al peso), es decir que la
varianza genética es nula. La VP será igual a VE por-
que toda la variación observada es ambiental, VP = 3.
c) El primer segmento negro del cromosoma 7 de la
RIL2 (contando de izq a derecha) es el único QTL
observado en este autosoma porque es el único que
diferencia a las RIL con respecto al peso corporal.
Seguramente existirán más QTLs en otros cromoso-
mas porque este cromosoma 7 no explica toda la dife-
rencia entre las líneas de alto y bajo peso. La máxima
diferencia entre las líneas “parentales” usadas para
construir las RILs es de 39 gr – 25 gr = 14 g mientras
que la máxima diferencia entre las RILs explicada por
el cromosoma 7 es de 34 – 25 = 9 g.
10) Mediante un estudio de la capacidad musical en
humanos se concluyó que ésta representa una función
compleja integrada por la apreciación del tono, memo-
ria tonal, sentido del ritmo, gusto melódico y conjunto
armónico. En un estudio llevado cabo por Musi-Quita
se colectaron muestras de DNA humano de una po-
blación altamente endogámica (es decir, con carac-
terísticas similares a las de un alto grado de endocría
o autofecundación) con pedigrí cerrado (y conocido)
en Islandia, muy analizada por los laboratorios medi-
cinales para realizar estudios de enfermedades heredi-
tarias porque es lo más parecido (en humanos) a estu-
diar los recombinantes descendientes de un cruza-

miento controlado y se trató de mapear algún QTL
asociado a la capacidad musical. Para la realización de
este estudio se muestrearon personas con buena afina-
ción (incluyendo a la famosa cantante Bjork) y perso-
nas que han demostrado ser “molestamente” desafina-
das seleccionadas en “cantando por un sueño” en ver-
sión vikinga. De esta manera, se establecieron 2 gru-
pos, de acuerdo a un índice de afinación (Ia) que pue-
de cuantificarse (variando de 0 a 1): Afinados (A) cu-
yo Ia es mayor a 0.75 y Desafinados (D) cuyo Ia es
menor a 0.25.
a) ¿Cuál es la ventaja, para el análisis genético, de
utilizar grandes poblaciones descendientes de muy
pocos individuos parentales?
b) ¿Qué piensa sobre cómo debió ser el muestreo de la
población de individuos estudiada en cuanto a: su es-
tatus social, país de origen, formación musical obteni-
da, etc.? ¿lo más homogéneo posible, tal como se
buscó en el caso de su origen genético o todo lo con-
trario?¿Por qué?
Se estudió la distribución de los patrones de marcado-
res moleculares (microsatélites). En la tabla sólo se
muestran algunos de los loci analizados y el resultado
de sólo 10 individuos de cada grupo (considere que la
muestra evaluada resulta representativa).
Grupo: Afinados
Ia 0.9 1 0.75 0.84 0.86 0.88 0.85 0.95
Locus A (A1A2) A1 A1 A2 H H H A1 A1
Locus B (B1B2) H H B1 B2 B2 H B1 B1
Locus C (C1C2) C2 C2 H H H H C2 C2
Desafinados
Ia 0.02 0.23 0.05 0.2 0.15 0.04 0.07 0.08
Locus A (A1A2) A2 H A2 H H A2 A2 A2
Locus B (B1B2) B2 B2 B1 H B1 H H B1
Locus C (C1C2) C1 C2 C1 H H C1 C1 C1
TABLA: En cada caso se muestran los homocigotas para 1
ó 2 de cada locus y el heterocigota expresado como H.
c) ¿Cuáles de estos loci podrían servir para mapear
algún QTL asociado a la capacidad de afinación? Jus-
tifique su respuesta.
d) ¿Qué podría decir acerca del número de QTLs aso-
ciados al carácter? Para responder básese en los datos
de la tabla, en sus respuestas de los puntos anteriores
y demás características sobre el carácter que se men-
cionan en el enunciado.
En el norte de nuestro país, se identificó una pobla-
ción de origen indígena con características similares a
las de Islandia, lo mismo ocurrió con una tribu de
bosquimanos en África y con la población del pro-
blema 1.
e) Discuta la probabilidad de encontrar los mismos
QTLs en estas otras poblaciones.
Respuestas:
a) Como se dice en el enunciado, al tratarse de un
carácter complejo, es probable que haya muchos ge-
nes involucrados. Utilizar poblaciones endogámicas
de pedigrí cerrado permite reducir esta complejidad
(el número de genes con variación, así como de sus
variantes alélicas), porque muchos de ellos deberían
estar en homocigosis y permanecer constantes.
b) Asumiendo que la varianza ambiental influye en el
fenotipo del carácter estudiado, se sugiere que debe
31
ser una muestra que reúna en cada grupo diversidad
en cuanto a esos y otros factores para que la varianza
ambiental no sea la mayor contribuyente a la variación
fenotípica observada.
c) Para los loci A y C ya que existe una correlación
entre la expresión del carácter cuantitativo Ia y la
condición 1, 2 o H de estos carácteres cualitativos.
d) Según los datos de la tabla al menos existe 1 QTL.
Si se observan los datos se ve que, con alta frecuencia,
A1 se hereda junto con C2, por lo tanto estos marca-
dores podrían estar ligados y mapear junto al mismo
QTL. Sin embargo, dada la introducción del enuncia-
do y teniendo en cuenta la complejidad del acto resul-
ta intuitivo adjudicar el fenotipo a más de 1 QTL. In-
cluso el hecho de obtener heterocigotas para A o C
con valores tan altos y tan bajos de Ia hace pensar que
hay otros genes que colaboran en la expresión de este
carácter y también que el ambiente sería de gran in-
fluencia.
No necesariamente. Lo más probable es que NO, de-
bido a que hay varios genes distintos involucrados
(incluso distintos alelos de un mismo gen) que se fija-
ron en forma diferencial en las distintas poblaciones.
11) En una población experimental de Drosophila
melanogaster, el peso medio seco de las moscas es de
2000 ug. La varianza fenotípica es 40000 ug2 y
2
0.77 0.82 la varianza genética aditiva es de 10000 ug . Si
H H como progenitores de la siguiente generación
H B2 se seleccionan individuos grandes, que en
H H promedio pesan 2400 ug,
a) ¿cuál es el peso corporal promedio espera-
0.1 0.25
do en la progenie?
b) ¿cuáles son la varianza ambiental y la here-
A2 A1
dabilidad en sentido amplio (H2) de este carác-
B2 B2
ter suponiendo que el único componente gené-
H C2
tico de la varianza fenotípica del carácter es el
aditivo?
Suponga ahora que para un estudio de QTL sobre el
peso seco de las moscas se ha seleccionado la pobla-
ción indicada arriba durante muchas generaciones ob-
teniéndose dos líneas muy diferenciadas para este
carácter: la línea de alto peso (W) y la línea de bajo
peso corporal (L). A partir de la F3 recombinante en-
tre las dos líneas W y L se construyeron líneas RIL
para localizar los QTL.
X
Cromosoma 3
Línea de bajo
- peso 1000
Línea de alto peso 4000
RIL 1 1010
RIL 2 2900
RIL 3
40 RIL 1005
RIL 40 1020
0 20 40 60 80 100
Posición genética en cM
 32
c) A cada RIL se les midió el peso corporal, El si- distribución poblacional de los distintos genotipos:
guiente esquema muestra el cromosoma 3 de las líneas ¿Cuál es la frecuencia del alelo apoE2?
W y L) y más abajo resume las RIL más informativas Genotipo E2E2 E2E3 E2E4 E3E3 E3E4 E4E4 Total
para localizar QTL. ¿Dónde están los QTL a lo largo N° indiv 2 64 7 684 169 11 937
del cromosoma (en cM) y cuál es el número mínimo a) 0,002 b) 0,040 c) 0,076 d) 0,175
de genes del cromosoma 3 que afectan al peso corpo-
Respuesta:b) [f(E2)= (2x2)+(64)+(7)/(937x2)=0,040]
ral? Pueden haber más QTLs en otros cromosomas –
Justifique brevemente. 2) Hagamos un poco de ciencia-ficción. Supongamos
que la ciencia médica avanzase hasta el punto de que,
14 con un tratamiento aplicado a lo largo de toda la vida,
13
12 la especie humana dejase de sufrir nuevas mutaciones.
11
10
Admitamos también que tal tratamiento se aplica a
9 toda la humanidad en el intervalo de una sola genera-
LOD 8
7 ción, y se mantiene así en lo sucesivo. ¿Qué ocurriría
6
5
con la variabilidad genética en las sucesivas genera-
4 ciones? ¿Aumentaría? ¿Desaparecería? ¿Se mantendr-
3
2 ía? Explíquese tanto como pueda.
1
0
Respuesta: Suponiendo panmixia, ausencia de selec-
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
ción y el alto número poblacional de la especie, la va-
Posición en cM
riabilidad debería mantenerse constante (en equilibrio
de HW). Por lo tanto, se mantendría. Lo que se impe-
d) Dibuje una posible curva LOD en función de cM
que esperaría obtener, de acuerdo a su respuesta en diría es el surgimiento de potenciales nuevos alelos
“c”, en el siguiente gráfico si aplicara un método bio- inexistentes en la población actual.
informático tal como hicimos en el trabajo práctico 4) Según algunos las rubias (no teñidas) están conde-
sobre QTL. Considere que la línea horizontal es el nadas a la extinción cuando la población humana
umbral de significación (LOD = 3). mundial llegue a total panmixis. El alelo determinante
R) a) S = 2400 ug – 2000 ug = 400 ug del color rubio del principal gen involucrado en el
h2 = 10000 / 40000 = 25% color del cabello es de expresión recesiva.
R = h2 * S = 0.25 * 400 = 100 ug Si mediante un cálculo arbitrario estimamos que la
media esperada X1 = 2000 ug + 100 ug = 2100 ug cantidad de rubias/os es de 22 millones sobre una po-
b) VA = VP – VA = 40000 – 10000 = 30000 ug blación mundial de 6.600 millones y hay 50 millones
Como VG = VA, entonces H2 = h2 = 0.25 de heterocigotas.
c) Hay un solo QTL aproximadamente a 40 cM. Por a) ¿Cuál será la proporción de rubios cuando la pobla-
lo tanto el número mínimo de genes que afectan al ción llegue a equilibrio de Hardy-Weimberg?
carácter es 1. Deben haber más QTLs e otros cromo- b) ¿Qué proporción de rubios de la población tendrán
somas ya que este QTL no explica toda la diferencia los dos padres no rubios?
entre las líneas parentales W y L (4000 – 1000 ug). Rta: p=R+1/2H= 22/6600 +50/6600*1/2= 0,0071
d) Una posible curva esperada seria la siguiente. Lo q=1-p=0,9929
unico importante es que el LOD seria significativo En equilibrio H-W la población de rubios será
solo en el “intervalo” aproximado que consideraron p2=5*10-5
que era un QTL en la respuesta“c”. b) NO era necesario contestar. La respuesta era q2
14
2pq=0,014. La proporción de matrimonios (0,014)2=
13 2*10-4
12
11
Hijos ¼ * 2*10-4 = 5.10-5
10 1) Un investigador está estudiando una población de
9 peces que habita en una laguna ubicada en un oasis en
LOD 8
7 el desierto del Sahara. Se propone estudiar dos loci
6 correspondientes a dos enzimas en 1000 individuos:
5
4 Locus 1: A1A1: 640, A1A2: 320, A2A2: 40
3 Locus 2: B1B1: 400, B1B2: 580, B2B2: 20
2
1 a) Determine si los loci antes mencionados se encuen-
0 tran en equilibrio de Hardy-Weinberg. Evalúe estadís-
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 ticamente su hipótesis.
Posición en cM b) En caso de que alguno/algunos de los loci no se
Genética de poblaciones encuentre en equilibrio, ¿cuál/cuáles pueden ser las
1) La apolipoproteína E (apoE) fue implicada como causas: falta de panmixia, selección o mutación? Justi-
un factor de riesgo en las enfermedades cardiovascu- fique tanto su elección como aquellas causas que des-
lares y en el Alzheimer. Se describieron 3 alelos co- carta.
munes: apoE2, apoE3 y apoE4. La tabla muestra la Respuesta:
a) Locus 1:
 33
Frecuencias alélicas: A1=0,8, A2=0,2 razonable de por qué no existe el equilibrio en esta
Frecuencias genotípicas esperadas: población.
A1A1 = (0,8)2 x1000 = 640
A1A2 = 2x0,8x0,2 x 1000 = 320
A2A2 = (0,2)2 x 1000 = 40
X2 = 6402 / 640 + 3202 / 320 + 402 / 40 = 0  No re-
chazo Ho, por lo que este locus está en equilibrio de
H-W
Locus 2:
VC (valor crítico)=3,84 para 1 GL; VC=5,99 para 2
Frecuencias alélicas: B1=0,69 y B2=0,31
GL; VC=7,82 para 3 GL.
Frecuencias genotípicas esperadas:
b)¿Qué supuestos me permitirían a mí calcular, a par-
Frecuencias genotípicas esperadas:
tir de esta población, cuáles serían las frecuencias
B1B1 = (0,69)2 x1000 = 476
génicas dos generaciones después? ¿Y las genotípi-
B1B2 = 2x0,69x0,31 x 1000 = 428
cas? Explique su razonamiento. Aclaración: No se
B2B2 = (0,31)2 x 1000 = 96
pretende que esas sean realmente las frecuencias que
X2 = (476 - 400)2 / 476 + (428 – 580)2 / 428 + (96 –
va a tener la población en esa generación, sólo que
20)2 / 96 = 126,3
indique qué necesitaría un investigador para poder
Como este valor es mayor al valor crítico rechazo Ho
afirmar cuáles serían.
 este locus no se encuentra en equilibrio de H-W.
1) a) observado
b) Falta de panmixia: es poco probable que esta sea la
a1a1 a1a2 a2a2
causa ya que el locus 1 está en equilibrio y si no
100 120 80
hubiera panmixia también afectaría las frecuencias
p= 0,53333333
genotípicas de este locus.
q= 0,46666667
Selección: Es posible. Por ejemplo, el genotipo B2B2
Esperado bajo H-W
podría estar desfavorecido frente a los otros dos geno-
a1a1 a1a2 a2a2
tipos ya que su frecuencia es mucho menor de la espe-
85,33 149,33 65,33
rada. 2
X = 11,5752551
Migración: no puede ser ya que se trata de un oasis
No está en equilibrio (VC=3,84)
aislado en el desierto.
Posible explicación: lo más probable es que no exista
Mutación: Poco probable ya que para que las frecuen-
panmixia y que haya algo de endogamia (por ejemplo,
cias genotípicas observadas se deban a mutación
porque las plantas poseen algún grado de autofecun-
aproximadamente 80 de los 620 alelos B2 estudiados
dación facultativa, o porque sus semillas no se disper-
deberían haber mutado a B1, es decir que se requerir-
san tanto). Esto se justifica porque hay exceso de
ían tasas de mutación muy altas (más del 10%). Sin
homocigotas. Otras explicaciones menos probables:
embargo, no podemos descartar una mínima contribu-
diferencia entre sexos. (en este caso, si hubiera pan-
ción de las mutaciones a las frecuencias observadas.
mixia, sólo se tardaría dos generaciones en alcanzar el
5) Un estudioso de las plantas Florecitus lindus, des-
equilibrio, sería raro que el investigador justo hubiera
cubre una población silvestre en una apartada región y
encontrado la población en ese punto)
decide investigar sus características.
b) En ausencia de mutación, migración, selección y
Primero decide realizar un muestreo al azar de la po-
deriva, las frecuencias génicas serían las mismas que
blación, para lo que extrae ADN de 300 plantas. En-
ahora. Si además, hubiera panmixia, las frecuencias
tonces, entre otros estudios, analiza un carácter de im-
genotípicas serían las del equilibrio.
portancia ornamental, la presencia de un patrón de-
6) En 1960 el cacique de una tribu localizada en una
terminado de coloración en la flor. Por estudios pre- lejana isla del pacífico, preocupado por la gran canti-
vios en el género, sabe que ese carácter está determi- dad de enfermedades de origen genético presentes en
nado por un único gen autosómico y bialélico (siendo la población de la isla recurrió al Dr. Boyd. Éste estu-
la presencia del patrón de coloración dominante sobre dió la distribución de alelos de grupos sanguíneos MN
su ausencia). Como la planta florece cada tres años, y (los individuos son MM, MN o NN), obteniendo los
aún no está en floración, decide utilizar un marcador siguientes resultados: MM: 520, MN: 160, NN: 320
molecular RFLP localizado en el gen. Obtiene tres a) ¿Se encuentra la población en equilibrio de Hardy-
tipos de patrón de bandas. El primero, que por sus es- Weinberg con respecto a los grupos sanguíneos MN?
tudios está asociado con el patrón de color, aparece en Verifique estadísticamente.
100 individuos. El segundo patrón lo tienen 120 indi- b) ¿Hay mayor, menor o igual homocigosis que la es-
viduos y el tercero, sólo 80. perada por Hardy-Weinberg?
a) ¿Esta población se encuentra en equilibrio de Har- Sorprendido por estos resultados el Dr. Boyd decidió
dy-Weinberg para este carácter? Si la respuesta es averiguar un poco más sobre esta tribu, y encontró que
afirmativa, explique por qué cree usted que se mantie- la misma está dividida en 5 castas. Los matrimonios
ne en ese equilibrio. Si no lo es, dé una explicación entre personas de distinta casta estaban terminante-
mente prohibidos. Reanalizando sus datos, ahora te-
 34
niendo en cuenta las castas a las que pertenecían las
personas, notó que dentro de cada casta se cumplían
las frecuencias de H-W.
c) ¿Cómo explica este último resultado en relación a
su respuesta de la pregunta “a”? ¿Qué supuestos no se
cumplen en la población total?
d) ¿Por qué le parece que hay tantas enfermedades
genéticas en la población?
Debido a estos hallazgos el Dr. Boyd recomendó al
cacique que quitara toda restricción en cuanto a los
matrimonios, lo cual el cacique acató inmediatamente. ¿Cuál es el tipo de herencia más probable para la
En 1980 el Dr. Boyd regresó a la tribu y notó que a
NOHL en la especie humana? Explique su razona-
pesar de que la población general no se encontraba en
equilibrio de Hardy-Weinberg, si sólo analizaba las miento.
muestras de sangre de los menores de 20 años ajusta- Según su hipótesis complete la 2° genealogía indican-
ban perfectamente a dicho equilibrio. do los individuos afectados.
e) ¿Cómo puede explicar este último resultado?
R) a) M = (520 + 160 /2) / 1000 = 0,6
N = (320 + 160/2) / 1000 = 0,4
Si la población se encontrara en equilibrio de H-W las
frecuencias genotípicas deberían ser:
MM = 0,62 * 1000 = 360
MN = 2 * 0,6 * 0,4 * 1000 = 480
NN = 0,42 * 1000 = 160
X2 = (520-360)2 /360 + (160-480)2 / 480 + (320-160)2
/ 160 = 444,4
Como es mayor que X21,0,05 entonces rechazamos la
hipótesis. Es decir la población no se encuentra en Respuesta: Observamos que todos los descendientes
equilibrio de H-W. independientemente de su sexo, muestran el fenotipo
b) Dado que los homocigotas esperados son 520 mien- de la madre. [Esto no podemos explicarlo si el carác-
tras que los observados son 840 podemos decir que ter estuviera en los cromosomas sexuales, ya que el
hay mayor homocigosis que la esperada por H-W. fenotipo de la descendencia no depende de si el carác-
c) Dado que están prohibidos los matrimonios entre ter es dominante o recesivo, o de la dirección del cru-
castas no hay panmixia. Por lo tanto aunque cada cas- zamiento, sino sólo del fenotipo de la madre]. Por lo
ta se encuentre en equilibrio de H-W la población to- tanto podríamos asegurar que este carácter es un caso
tal no lo está. Esto también explica la mayor homoci- de herencia materna.
gosidad respecto de lo esperado por H-W ya que están En B se sombrean: II 2, 3, 5; III 1, 3, 4, 8,10,11; IV
favorecidos los matrimonios co-sanguíneos. todos
d) La alta homocigosidad debida a la endogamia hace 2) El siguiente árbol muestra una familia que hereda
que sea más probable que una persona sea homocigota una forma severa de hidrocefalia causada por una mu-
para alelos recesivos responsables de una enfermedad tación en el gen L1CAM (localizado en el cromosoma
hereditaria. X) y que presenta una herencia recesiva. Utilizando
e) Al quitar la restricción en la elección de pareja, y un marcador intragénico que tiene tres alelos (12, 8 y
suponiendo que a partir de dicho momento hubo pan- 7) se hace el diagnóstico del propósito (nombre que
mixia, las frecuencias genotipicas de aquellos que na-
reciben los “pacientes” por parte de los genetistas
cieron bajo el nuevo régimen (los menores de 20
años) se ajustarán a H-W. Sin embargo, en la pobla- médicos y que se indica con una flecha).
ción general no sucede los mismo debido a que el
grupo de personas que nacieron antes (y que todavía
están vivos al realizar el análisis poblacional) presenta
las proporciones genotípicas que no ajustaban a H-W.
Genéticas no Mendelianas
1) La neuropatía óptica hereditaria de Leber (NOHL)
es una enfermedad rara en la especie humana que pro-
duce una rápida atrofia del nervio óptico y que genera
ceguera en adultos jóvenes. Esta enfermedad está ca-
racterizada por una pérdida bilateral de la visión cen-
tral mientras que se mantiene la visión periférica. La
1° genealogía muestra la herencia de esta enfermedad
en una familia bastante amplia: ¿Cuál fue el resultado del diagnóstico?
a) La propósito es portadora del alelo mutante
b) La propósito es heterocigota no portadora

c) La propósito es homocigota para el alelo normal
d) El resultado no permite dar un diagnóstico preciso
sobre el genotipo.
Respuesta: b)
3) En el antiguo testamento, Dios dispuso que los
hijos de Isaac y su mujer constituirían la nación judía.
Sin embargo, la esposa de Isaac era bastante mayor y
supuestamente infecunda. Según las costumbres loca-
les de la época, ella eligió una mujer alternativa con la
que Isaac tuvo un hijo: Esaú. Un día, la anciana mujer
le comentó a Isaac que estaba encinta y tuvo un hijo:
Jacobo. Posteriormente, Jacobo se casó con 5 herma-
nas (de otra familia) y tuvo 13 hijos y varias hijas.
Suponiendo que pudiera acceder a muestras de tejido
de Isaac, Esaú, Jacobo y de los hijos de Jacobo y,
además, pudiese extraer DNA y analizarlo:
a) ¿Cuántos haplotipos o secuencias nucleotídicas di-
ferentes en la región del cromosoma Y en la región
del gen Sry obtendría? Justifique.
b) ¿Cuántos tipos de secuencias nucleotídicas diferen-
tes del D-loop de DNA mitocondrial obtendría? Justi-
fique.
Solución: a) Uno sólo: el que proviene de Isaac
(herencia ligada al sexo, etc….)
b) 4: el de Isaac (donado por su madre), el que provie-
ne de la madre de Esaú, el que proviene de la madre
de Jacobo y el que proviene de la madre de las 5 her-
manas (herencia materna...)
4) Aproximadamente el 0,3% de la humanidad tiene
una enfermedad genética leve llamada LHON produ-
cida por una mutación que substituye una Asn por una
Asp en el complejo NADH mitocondrial.
a) ¿Cuáles son las frecuencias genotípicas para este
carácter? ¿Serían distintas a las frecuencias alélicas?
¿por qué?
b) Si apareciese una corriente eugenésica que preconi-
ce “mejorar” la raza humana que proponga eliminar
las enfermedades genéticas por métodos drásticos
¿deberían prohibir tener hijos a todos los individuos
con síntomas de LHON?¿por qué? Atención: ignore
los datos que se enumeran a continuación para contes-
tar esta pregunta.
Gracias a los conocimientos adquiridos en genética I y
para buscar argumentos científicos para enfrentar al
movimiento eugenésico a Ud se le ocurre hacer 2
estudios: i) diagnóstico molecular confirmatorio y ii)
cuantificación de la frecuencia de aparición espontá-
nea de esta mutación. En el primer caso encontró que,
además de los enfermos, existen individuos con la
mutación pero asintomáticos (debidos a heteroplas-
mia: presencia de mitocondrias con genotipo normal y
mutante en una única célula) y en el segundo que la
misma es significativa.
c) Argumente por qué estos estudios demostrarían la
inutilidad práctica de encarar la selección negativa
propuesta por los eugenésicos.
Respuestas: a) Este es un carácter mitocondrial por lo
que, salvo algún caso raro de heteroplasmia, el alelo
está presente o ausente (como si fuera una especie
35
monoploide)]. Por lo tanto, las frecuencias alélicas
son iguales a las genotípicas f(LHON) = 0,3%
F(normal) = 0,97%
b) A las mujeres (y no a los varones) porque se trata
de una herencia materna, no hay necesidad de evitar la
reproducción de los varones dado que no transmiten la
enfermedad
c) Después de la selección negativa la segregación
somática de los heteroplásticos y la aparición constan-
te de nuevas mutaciones similares llevarían la enfer-
medad genética a las mismas cifras actuales (después
de algunas pocas generaciones)
5) El señor señalado con un círculo rojo tiene una rara
enfermedad genética y le pregunta: -Vos que hiciste
un curso rápido de genética ¿me podrás averiguar qué
probabilidad tengo de transmitirle esta enfermedad a
mis futuros hijos?
Mi señora no posee esta enfermedad pero ¡con la
genética nunca se sabe!. ¿Me tendré que hacer un aná-
lisis yo o mi señora?
¿Le podrá contestar sin necesidad de pedirle un análi-
sis genético detallado (pedigrí) a la señora? Justifique
brevemente.
Rta: La probabilidad es nula porque se trata de un
claro ejemplo de herencia materna. No requiere de
más análisis.
Respuestas alternativas válidas a esta pregunta (no
pedidas):
a) Imprinting materno
b) podría ser un gen autonómico recesivo
En el caso b), SÍ debería hacer análisis genéticos.
6) En la siguiente genealogía los símbolos en negro
denotan la condición patológica de una enfermedad
con baja incidencia en la población, que afecta ma-
yormente a hombres. Justifique todas sus respuestas.
a) ¿Cuáles de los siguientes tipos de herencia puede
descartar: herencia mendeliana, ligada al sexo, li-
gada al cromosoma Y, limitada por el sexo, in-
fluenciada por el sexo, herencia materna, influen-
cia materna?
b) De las posibilidades que no descartó, ¿cuál le pare-
ce más probable?
c) asumiendo como cierta la hipótesis que esco-
gió en el punto b), ¿cuál sería el genotipo de los
distintos individuos de la genealogía? Tenga en
 36
cuenta que en algunos casos puede haber más de dos diferentes, apareciendo animales con un fenoti-
una opción posible. po en mosaico llamado “carey”, formado por pelos
d) Si los individuos que poseen el asterisco se negros y naranjas distribuidos en forma aleatoria en
casan, cuál es la probabilidad que tengan un todo el cuerpo
hijo que porte el alelo enfermo? Hembras F1 Machos F1
I Cruza- Hem- Ma- negro naranja carey negro naranja
miento bras chos
II 1 negro negro 48 46
2 naranja negro 16 20
III 3 carey naranja 47 43 38 54
4 carey negro 12 21 29 35
IV * a) ¿De qué tipo de herencia se trata?
b) ¿Por qué sólo aparecen hembras carey y no así ma-
V * chos?
Respuesta: c) ¿Cuál es la relación de dominancia entre los genes
a) Herencia mendeliana: no la puedo descartar, podría que condicionan estos colores?
tratarse de una enfermedad recesiva. 2) a) Que los dos cruces recíprocos den resultados
Ligada al sexo: puede ser diferentes indica, en principio, herencia en relación
Ligada al Y: No puede ser porque sino el hijo varon II con el sexo. Fijándonos en los machos de la F1; su
debería ser enfermo y el V no debería serlo. fenotipo es igual al de su madre, típico deherencia
Limitada por el sexo: no puede ser porque según el cruzada. Los hijos reciben el cromosoma X de la
enunciado en la población también hay mujeres en- madre con el alelo para negro o para
fermas. naranja, sin embargo, las hijas presentan el mismo
Influenciado por el sexo: puede ser fenotipo «carey» en ambos cruces. De acuerdo con la
Herencia e influencia materna: no porque las madres hipótesis de herencia ligada al sexo, las hijas del pri-
de los enfermos no están enfermas y el que introdujo mer cruce tienen que ser heterozigotas, con un cro-
el alelo que da la enfermedad fue el padre de las gene- mosoma X materno portador del alelo para negro y
ración I un cromosoma X paterno con un
b) Es un gen ligado al cromosoma X. Podría ser un alelo para naranja. En las hembras heterozigotas se
gen autonómico recesivo, pero eso sería posible si expresarían los dos alelos, produciendo dicho fenoti-
todos los matrimonios se dieron con personas hetero- po en mosaico. Esto se debe al fenómeno de inactiva-
cigotos para la enfermedad y si ésta es rara como dice ción aleatoria de uno de los dos cromosomas X de la
el enunciado esta alternativa es muy poco probable. hembra, que se produce en fases tempranas del desa-
También podría ser influenciado por el sexo. rrollo (Lionización).
c) b) El resultado de los cruces 3 y 4 nos ayudará a con-
firmar la hipótesis. Una hembra «carey», será hetero-
I A a a zigota para negro y naranja (X neXna), y tendrá hijos
X X XY
tanto negros (XneY) como naranjas (XnaY), que es lo
que ocurre en los dos cruces. Una hembra «carey» cru-
II
XAXa XAY XAXa XAY XAXa zada con un macho naranja tendrá hijas tanto «carey»
como naranja:
ne na
III a a aX X x XnaY = XneXna + XnaXna + XnaY + XneY
X Y XAXa XAY XAX-- A X Y
XAY X Y X X
A a
XAXa X Y carey naranja = carey + naranja+ naranja
IV +negro
XAY XAXa XAXa XAYXAX-- XAY XaY XAXX *
-- A XaY
Y Xa
Y En el cruce hembra «carey» con macho negro la dife-
? rencia es que en lugar de hijas naranjas aparecen, lógi-
V * camente, hijas negras, siendo todo lo demás igual.
XaY XAX-- XAX-- Los machos, al ser hemizigotos, serán siempre X naY
?
ne
d)La probabilidad de que la mujer sea heterocigota es (naranjas) o X Y (negros), pero nunca podrán ser
½ (dado que recibió XA del padre y existe ½ de proba- «carey».
bilidad que haya recibido Xª de la madre) y la proba- c) Aunque negro y naranja son alelos del mismo gen,
bilidad de que siendo heterocigota transmita el alelo no se puede hablar estrictamente o deducir relaciones
enfermo es ½. Por lo tanto la probabilidad de que un de dominancia/recesividad, de herencia intermedia o
hijo varón porte un alelo enfermo es ¼. de codominancia, ya que en cada célula que produce
9) El Dr. Visen publicó hace años los resultados de la pelo se manifiesta uno u otro alelo, en los machos de-
herencia del color del pelaje de los gatos. Su primera bido a la hemizigosis y en las hembras heterozigotas
observación fue que el pelaje puede ser de color negro debido a la inactivación de uno de ellos.
o naranja, entre otros. Posteriormente al cruzar gatos 10) En plantas de maíz con citoplasma de tipo T se ha
con estos colores los cruces recíprocos dieron resulta- identificado un gen (urf13) cuya expresión induce la

androesterilidad. Asímismo para este tipo de plantas
se han identificado dos genes restauradores nucleares
dominantes (Rf1 y Rf2) cuya expresión concertada
restaura la fertilidad, no habiendo restauración si sólo
se expresa uno de estos genes. El gen Rf1 fue el pri-
mer gen restaurador aislado y caracterizado molecu-
larmente. Si se dispone de una planta con citoplasma
T, homocigota para el gen Rf1 dominante, descono-
ciéndose su constitución genética para el locus Rf2,
a) Indique cual/es de las siguientes líneas de maíz
utilizaría en sus experimentos para determinar la
composición alélica del locus Rf2 en la planta incóg-
nita. Justifique su respuesta, indicando qué planta
usaría como padre y como madre en sus experimentos
de cruzamiento, cómo espera que sea la descendencia
en caso de que la planta a la que se le quiere determi-
nar el genotipo sea rf2rf2, Rf2rf2 o Rf2Rf2 y por qué
descarta las plantasno elegidas.
i. T rf1 rf1 Rf2 Rf2 iv. N Rf1 Rf1 rf2 rf2
ii. N rf1 rf1 Rf2 Rf2 v. T Rf1 Rf1
Rf2Rf2
iii. T Rf1 Rf1 rf2 rf2 vi. N Rf1 Rf1 Rf2
Rf2
Nota: N corresponde a citoplasma normal, T corres-
ponde a citoplasma androestéril.
b) Un mejorador recibe una planta con una nueva
fuente de androesterilidad citoplasmática y al cruzarla
con una línea restauradora para los genes Rf1 Rf2 ob-
tiene toda la descendencia estéril ¿Cómo explica este
resultado?
R) a) Utilizaría la planta iv como padre que es fértil
(citoplasma normal) y aparte es homocigota dominan-
te para RF1 (este locus no está en estudio pero es ne-
cesario para restaurar fertilidad) y rf2 doble recesivo
para evaluar la composición de la descendencia al
cruzarlo por la planta incógnita (T Rf1Rf1 -- --)
Si la descendencia es 100% estéril, la planta era T
Rf1 Rf1 rf2 rf2 (Rf1 solo no restaura la fertilidad)
Si la descendencia es 100% fértil la planta era T
Rf1Rf1 Rf2Rf2
Si la descendencia es 50% esteril, 50% fértil, la planta
era T Rf1Rf1 Rf2rf2
Las otras líneas no darían resultados conclusivos
i), iii): no dan polen viable
ii) , v), vi): toda la descendencia es fértil pero no se
puede establecer que alelos Rf2/rf2 componen el lo-
cus incógnita
b) Es portadora de un gen de androesterilidad distinto
al urf13 para el cual la línea retauradora no posee el
gen restaurador necesario
Genómica
1) Mediante el uso de marcadores moleculares se
construyó un mapa de ligamiento del ratón, usando
como genotipos parentales de la población de mapeo a
dos líneas endocriadas que presentan una marcada
diferencia respecto a su predisposición a contraer
Alzheimer experimental (enfermedad caracterizada
por una acelerada desmielinización a nivel cerebral).
Se localizó en dicho mapa de ligamiento, además, un
locus (gen de expresión recesiva) involucrado en di-
cha predisposición. El mencionado gen (al que se de-
37
nominó alz) mapea en el cromosoma 3, flanqueado
a 10 cM y 13 cM por dos marcadores RFLP humanos
denominados hs3 y hs1, respectivamente (Fig. 1) (No-
ta: fue posible usar sondas humanas ya que muchas
sondas de esta especie hibridan con DNA de ratón
debido a su alto grado de parentesco). Recientemente,
un grupo de investigación, clonó molecularmente en
humanos, un gen (gdm) involucrado en la regulación
de la producción de mielina a nivel cerebral y lo ma-
peó en el cromosoma 8, flanqueado a 12cM y 15cM,
por los mismos marcadores hs3 y hs1. En la publica-
ción de dicho trabajo, los autores reportaron la locali-
zación cromosómica del gen y su secuencia completa.
Al leer este trabajo, se sospechó (y con fundamento)
que el gen de ratón podría ser un homólogo del gen
humano. Lamentablemente ambos grupos nunca cola-
boraron para que esto se pudiera demostrar.
a) ¿Cuáles fueron los fundamentos de la sospecha?
b) ¿Qué estrategia utilizaría usted para clonar, al me-
nos parcialmente, al gen supuestamente homólogo de
ratón (recuerde que el gen de ratón está mapeado pero
no está secuenciado y no se sabe si la similitud de se-
cuencia es alta, ni tampoco si hibridan entre sí)?
c) ¿Cómo verificaría, funcionalmente, si el gen de
humanos cumple la misma función que su homólogo
en ratones? Diseñe un experimento recordando que
los genes y las proteínas humanas son funcionales en
ratones y viceversa.
Fig. 1
cM
cM
hs3
hs3 12
10
gdm alz
13 15
hs1 hs1
Humano Ratón
Respuesta: a) La sintenia evolutiva (conservación
filogenética de mapas genéticos entre especies empa-
rentadas) y, tal vez, las características de los genes en
cuanto a su rol fisiológico.
b) Clonado posicional (cualquiera de sus variantes es
correcta). Otras alternativas de clonado ingeniosas
pueden llegar a aceptarse.
c) Hacer estudios de complementación en ratones
transgénicos (alz/alz, es decir homocigotas recesivos)
usando el gen humano como transgén. Espero que a
ninguno se le ocurra hacer humanos transgénicos para
Alzheimer…..
2) El clonado molecular de genes de resistencia (R) a
enfermedades en plantas es un viejo objetivo de los
fitopatólogos que trabajan en interacción huésped-

patógeno. A fines de los ’90 se clonaron los primeros
genes R por estrategias de clonado posicional (ver
figura) y en la actualidad ya hay decenas de estos ge-
nes en el GeneBank y otras bases de datos. Ud se in-
volucra en un proyecto de este tipo para su tesis y tie-
ne que resolver un número de cuestiones:
En el paso  se identificaron marcadores moleculares
ligados al locus a distancias genéticas del orden de los
10 cM. En el paso  se obtuvieron marcadores más
cercanos de forma tal de disminuir las distancias físi-
cas para que en el paso  poder trabajar con un
número no muy grande de clones.
a) ¿Con qué tipo de colecciones (libraries) de clones
se trabaja para hacer esto?
i) genómicos
ii) o de cDNA
y ¿por qué?
b) ¿Qué tipo de vectores se utilizan (plásmidos, fagos,
cósmidos, BAC o YAC) y porqué?
c) Suponiendo que los marcadores moleculares em-
pleados (M1, M2, M3 y M4) son RFLPs ¿Cómo se
hace (metodológicamente) para identificar los clones
1, 2, 3 y 4 de la figura y su ordenamiento posicional
(mapa fisico)?
d) ¿Cuál es el tamaño físico aproximado (en kilo-
pares de bases) de 1 unidad de mapa genético (1 cM)
en el ejemplo de la figura?
¿Por qué esta diferencia de unidades? ¿Cómo se mide
cada una de ellas?
Una vez identificados los clones correspondientes a
esta región cromosómica, sus insertos se subdividen
en tamaños más chicos (paso ) para su subclonado y
transferencia a plantas (paso ) para evaluar a estas
últimas fenotípicamente como R (resistentes) o S
(sensibles) a la enfermedad.
e) Para introducir los segmentos de ADN en plantas
¿se requiere de algún paso de subclonado en vectores
38
especiales? ¿Se requiere, dentro de lo anterior, mo-
dificar el promotor y el terminador? ¿Por qué? ¿Se
debe tener alguna consideración acerca del genotipo
que se va a transformar? Es decir ¿se puede usar un
clon de la misma planta que se usó para clonar el gen
de resistencia?
En el último paso (el ) se secuencian los insertos, se
identifican las ORF (secuencias abiertas de lectura)
presentes, las que se constituyen en candidatos a ge-
nes R.
f) ¿Cómo se identifica una secuencia ORF en un in-
serto?
g) ¿y si hay más de una, cómo me doy cuenta de la
correcta?
h) Bioinformáticamente ¿de qué manera puedo asig-
narle una posible función al gen?
Rta: a) Genómicos porque tengo representada una
copia exacta del segmento cromosómico que estoy
identificando, incluyendo regiones no codificantes
que me van a servir para empalmar (identificar sola-
pamientos entre clones) las secuencias con las que se
arma el mapa físico de la región. Si usara clones de
cDNA, no podría empalmar un clon con otro porque
no habría secuencias comunes entre ellos.
b) BACs o YACs porque son los que me permiten
contener insertos más grandes y así poder tener re-
prensada la región cromosómica en el menor número
de clones posible.
c) Las sondas utilizadas para RFLP pueden utilizarse
como sondas para inspeccionar (“screenear”) la geno-
teca y así identificar los clones que se corresponden al
segmento cromosómico en estudio. El ordenamiento
de los insertos lo puedo deducir de estas hibridacio-
nes. Sé que el orden deducido del mapa genético es
M1-M3-M4-M2. El mapa físico, en cambio, sólo me
permite ubicar M3 y M4 porque no tengo clones que
abarquen a M1 y M2 (+ el gen que quiero clonar) y
sean contiguos a M3 y M4. Por lo tanto, el inserto del
clon 1 (que sólo hibrida con M3) tiene que estar ubi-
cado en un extremo y así sucesivamente. La ocurren-
cia de insertos que hibridan un marcador y al gen
(clones 3 y 4) facilitan este ordenamiento.
d) 600-700 kpb / 0,2 cM = 2000 – 3500 kpb
Porque uma proviene del mapeo genético que se reali-
za mediante cruzamiento y recuento de recombinantes
(unidades de recombinación o cM) y la otra por ma-
peo de restricción donde se comparan los tamaños de
los insertos com estándares de tamaño molecular en
kilo pare de bases.
e) Si se decide utilizar transformación mediada por
Agrobacterium tumefaciens, se requiere subclonarlo
en un vector Ti. En el caso de usar biolística (cañón
génico), no haría falta subclonar en ningún vector es-
pecial. No se requiere cambiar secuencias regulatorias
porque estamos trabajando con genes y secuencias
nativas y el experimento no requiere cambiar la regu-
lación de su expresión. No se puede elegir un clon de
la planta de la cual se clonó el gen porque sería resis-
tente independientemente del inserto que se le intro-

duzca. Debería elegirse un genotipo susceptible a la
enfermedad.
f, g y h) Identificando codones de iniciación (ATG) y
terminación (alguno de los 3 codones STOP) con pro-
gramas informáticos. Esto se podría complementar
mediante la identificación de secuencias consenso de
promotores, terminadores, splicing, etc.Mediante el
uso de BLAST y comparación con otras secuencias ya
publicadas.
3) Dos variedades puras de maíz (A y B) pueden ser
distinguidas por una serie de RFLPs, los cuales dan
los siguientes patrones:
Un consorcio internacional de secuenciación del ge-
noma del maíz de otra variedad, le pide que usted le
envíe sondas para poder “anclar” una colección de
BACs al mapa genético. Usted conoce la localización
en el mapa genético de los 7 RFLPs de la figura y sa-
be, además, que las enzimas utilizadas no cortan de-
ntro de los fragmentos utilizados como sonda. ¿Cuáles
sondas enviaría y por qué?
Rta: Enviaría las sondas correspondientes a los
RFLPs 213, 48 y la 1112 dado que parecen ser de co-
pia única. Evitaría las demás porque parecen hibridi-
zar con más de una región del genoma y por lo tanto
podrían inducir al error al hibridizar con BACs que
no son contiguos.
4) El Dr. Lirón estudió la duración de la fase alfa en el
sueño de ratones y encontró un mutante, al que llamó
sleepy, cuya fase alfa duraba 2 horas, mientras que en
los ratones salvajes la misma es de 4 horas. Al cruzar
un sleepy con otro ratón salvaje, la mitad de los des-
cendientes resultó mutante y la mitad salvaje.
a) El ratón analizado ¿era homocigota o heterocigota
para el gen sleepy? ¿Se trata de un alelo dominante,
recesivo, codominante o semidominante? Justifique su
respuesta.
Al concurrir a un congreso internacional de sonambu-
lismo, Lirón se encuentra con un colega que encontró
otro mutante similar. El investigador decide verificar
si el gen involucrado es el mismo que él encontró.
Para ello, utiliza una línea homocigota para el gen
sleepy y la cruza con los ratones, también homocigota
para el gen en cuestión, del colega. Todos los ratones
de la F1 tuvieron sueño alfa reducido. Luego cruzó la
F1 con ratones salvajes. De los 200 descendientes que
obtuvo, 180 presentaron sueño alfa reducido mientras
que 20 presentaban sueño normal.
b) Los alelos mutantes encontrados ¿pertenecían am-
bos al mismo gen? Justifique su respuesta. En caso
que los genes fueran distintos ¿estarían ligados? ¿a
qué distancia?
El siguiente objetivo del Dr. Lirón decidió mapear el
gen mutado. Para ello, utilizando 200 marcadores mo-
leculares, logró ubicarla entre dos marcadores M1 y
39
M2 separados entre sí por 0,3 cM (aproximada-
mente 600.000 pb). Después, el Dr. Lirón construyó
una genoteca de BAC y encontró 4 BACs solapantes
(A-D) que abarcaban toda la región entre los marcado-
res M1 y M2:
100 kpb
M1 M2
A
B
C
D
Con estos BACs (que habían sido obtenidos utilizando
DNA genómico de un ratón sleepy homocigota) el Dr.
Lirón generó 4 líneas transgénicas (una para cada
BAC: LA, LB, LC y LD respectivamente) transfec-
tando células de un ratón salvaje. Los ratones de las
líneas LB y LC tuvieron un sueño reducido de 2
horas, igual a la de sleepy mientras que los ratones de
las líneas LA y LD presentaban duraciones de sueño
similares a los normales.
c) ¿Qué características deberían tener los marcadores
moleculares utilizados por el Dr Lirón para realizar
este mapeo? ¿De qué tipo de marcadores se trataría,
probablemente? ¿Cómo explica los resultados obteni-
dos? ¿En qué región del mapa que se presenta se en-
cuentra el gen mutado?
d) ¿Hubiera obtenido los mismos resultados transfec-
tando ratones sleepy con BACs procedentes de ratones
salvajes? ¿Por qué?
Durante el tiempo que le tomó realizar todos estos
experimentos, salió publicado el borrador del genoma
de ratón (salvaje) por lo que, basado en la secuencia
de la región en la que determinó que estaba su gen
mutante, encontró 3 posibles genes.
MM_213: secuencia homóloga a un gen de Danio re-
rio (pez cebra) pero careciendo promotor.
MM_437: gen constitutivo involucrado en la glucóli-
sis.
MM_854: gen de función desconocida que presenta
enhancers propios de genes que se expresan en el sis-
tema nervioso central.
e) ¿Cómo se hizo, bioinformáticamente hablando, pa-
ra adjudicar estas funciones hipotéticas a estos 3 ge-
nes? Explique, si resulta pertinente, si debe emplear
técnicas moleculares adicionales y programas in-
formáticos.
f) ¿Cuál o cuáles elegiría como genes candidatos a
estar relacionados con el sueño?
Respuestas esperadas:
a) Heterocigota. Si estas mutaciones se pueden detec-
tar fenotípicamente es porque son dominantes.
b) Si se tratara del mismo gen la F1 tendría ambos
alelos del mismo gen mutantes (homocigota). Al rea-
lizar la cruza de la F1 con una cepa salvaje, todos los
ratones (salvo que haya recombinación intragénica
que es muy poco probable) resultarán heterocigotos:
-la mitad para la mutación de la línea sleepy

-la otra mitad para la mutación de la línea del colega
Dado que ambas mutaciones son dominantes, todos
los ratones de la descendencia deberían tener sueño
reducido. Dado que éste no es el caso (hay un 10% de
ratones salvajes) podemos descartar que se trate del
mismo gen.
Si el gen mutado es el C/c y el mutado en la otra línea
es el R/r entonces la F1 de la cruza será CcRr. Al cru-
zar con ratones salvajes (ccrr), si los genes no están
ligados tendremos ¼ CcRr, ¼ Ccrr, ¼ ccRr y ¼ ccrr
donde todos los genotipos salvo el ccrr (que tiene
memoria normal) tienen memoria reducida (algunos
genotipos más que otros). Es decir que si los genes no
están ligados esperaríamos tener ¼ de ratones con
memoria normal, lo cual no es el caso. Por lo tanto,
los genes están ligados.
CCrr x ccRR
C r x c r
c R c r
Las gametas parentales del cruzamiento prueba son Cr
y cR mientras que las recombinantes son CR y cr. Da-
do que en la descendencia del cruzamiento prueba 20
individuos son ccrr, entonces un 10% de las gametas
producidas por la F1 son cr. Un porcentaje equivalen-
te debe ser CR que es el producto complementario de
recombinación. Es decir que el 20% de las gametas
son recombinantes con lo que la distancia entre los
genes es de 20 u.m.
c) Debió utilizar marcadores STS, es decir marcadores
de localización única.
Si un BAC porta el alelo mutante al generar la línea
transgénica, ésta tendrá insertado en algún lugar del
genoma. Como el alelo mutante es dominante se va a
poder expresar aún en presencia de uno (suponiendo
reemplazo alélico) o dos (suponiendo integración
ectópica) copias del alelo salvaje.
Dado que los BACs B y C presentan el fenotipo mu-
tante ambos BACs contienen al gen completo. Por
este motivo podemos localizar al gen en la zona de
solapamiento de los BACs B y C (de aproximadamen-
te 100 kpb).
d) No, si hubiese usado BACs procedentes de ratones
salvajes para transfectar ratones sleepy, los ratones
transfectados hubiesen sido todos con fenotipo sleepy
ya que este alelo es dominante sobre el alelo normal.
e) Se secuenció la región de solapamiento de los clo-
nes BAC B y C, subclonados en vectores plasmídico,
se realizó un ensamblado de los mismos y los contigs
obtenidos fueron analizados para la detección de mar-
cos de lectura abiertos y se compararon los mismos
con secuencias en bases de datos, utilizando progra-
mas de comparación local como BLASTX y
BLASTN pudiendo predecir en base a la similitud de
las secuencias contenidas en esa región con secuen-
cias de función conocida disponibles en bases de datos
f) El MM_213 no es un buen candidato porque como
le faltan secuencias presentes en los promotores, posi-
blemente no se transcriba (y sea un pseudogen).
El MM_437 tampoco es un buen candidato porque es
un gen constitutivo y fundamental para la glucólisis.
Su mutación debería afectar más cosas que el sueño y
40
de hecho posiblemente dicha mutación sea letal en
homocigosis.
El MM_854 es un buen candidato porque es un gen
que posiblemente se exprese diferencialmente en sis-
tema nervioso central.
5) Carol Martinson recibió unas muestras de aránda-
nos de un productor que aducía que las plantas que
había comprado en la empresa Truchex (SRL, Socie-
dad de responsabilidad MUY limitada) no rendían ni
tenían la calidad prometida. Para genotipificar, Carol
comparó los patrones de marcadores moleculares con
la muestra problema (número 2, supuestamente perte-
neciente a la variedad O’Neil) con muestras de mate-
rial de multiplicación del INTA Concordia de O´Neal
y de otra variedad muy usada (Misty), tanto de mate-
rial in vitro como de las plantas derivadas de micro-
propagación puestas a campo, obteniendo el siguiente
electroforetograma:
Fig Patrones de amplificación de RAPDs. Las diferen-
tes calles representan los productos de amplificación
obtenidos para las distintas muestras: 1 (O’Neal, certi-
ficado, in vitro), 2 (supuesto O’Neal), 3 (O’Neal de
campo), 4 (Misty de campo) y 5 (Misty, certificado, in
vitro).
a) ¿Qué significan las bandas marcadas con flechas
negras que Carol dibujó sobre la foto? ¿En qué se di-
ferencian de las bandas marcadas con flechas blancas?
¿Cuáles de los 2 tipos de bandas fueron útiles para
este análisis?
b) ¿Pertenecía la muestra 2 a la variedad O´Neal o no?
Computando las bandas y armando una base de datos,
Carol calculó la similitud entre las muestras y obtuvo
el siguiente dendrograma:
c) Ubique las muestras 2, 3 y 4 en los casilleros en
blanco del dendrograma.
d) En las comparaciones, Carol incluyó material mi-
cropropagado in vitro y de campo ¿Existe alguna
razón por la cual podrían ser diferentes y explicar lo
que pasó?
 41
a) Describa brevemente las diferencias observadas
entre transgénicas y normales.
b) ¿Cómo interpreta que, en la transgénica, la sonda
detecta mRNA de nos en la parte anterior (izquierda)
del embrión (además de en la parte posterior)?
c)¿Por qué el transgénico con la construcción 1 pre-
senta el fenotipo mutante bicoid?
d) Brevemente ¿qué resultados esperaría con la cons-
trucción 3?
e) ¿Eesperaría resultados diferentes si, en la construc-
ción 1, se reemplaza el promotor nos por el promotor
bcd? ¿Por qué?
Rta: a) Las flechas negras indican las bandas polimór- 3) a) fenotipos: normal y bicoid. Hibridación in situ
ficas (variables) y las blancas indican bandas mono- con sonda nos: hibrida en la parte posterior en el nor-
mórficas. Las negras fueron las útiles porque permiten mal, anterior y posterior en el transgénico. Con la
establecer DIFERENCIAS además de similitudes. sonda bcd, no se detectan diferencias.
b) No c) 3, 4 y 2 b) Porque la secuencia 3’UTR es la responsable de la
d) Para los brillantes: podría haber variación somaclo- unión a proteínas del citoesqueleto. La secuencia
nal (mutación causada por el hecho de cultivar in vi- 3’UTR bcd es diferente a la nos y “pega” el mRNA
tro) del transgén nos a la parte anterior. Debe recordarse
Desarrollo, epigenética, etc. que el transgén se adiciona y no reemplaza a los genes
1) Las etapas más tempranas del desarrollo en moscas normales presentes en la mosca. Por eso se detecta,
se explican, en parte, por la distribución subcelular de como era de esperar, mRNA de nos en la parte poste-
los transcriptos de genes maternos como el bicoid rior igual que en el normal.
(bcd) y el nanos (nos), dado que los mismos están ad- c) Es consecuencia de la expresión, en la parte ante-
heridos al citoesqueleto. Con el objeto de estudiar por rior, del relocalizado producto del transgén nos, que
donde se une un ARN mensajero al citoesqueleto, se interfiere con la del bcd y el resultado es un embrión
realizaron una serie de construcciones quiméricas: con 2 colas (bicoid)
1 Promotor 5’UTR nos Codif. 3’UTR d) Todo daría igual que en el normal porque la región
nos nos bcd 5´ no codificante, no tiene función en la localización
2 Promotor 5’UTR nos Codif. 3’UTR subcelular.
nos bcd nos e) No, porque ambos genes son del mismo tipo (ma-
3 Promotor 5’UTR bcd Codif. 3’UTR terno) y se expresan en forma relativamente sincroni-
nos nos nos zada y similar.
UTR (untranslated región) simboliza el DNA que es- 2) Muchos tipos de cáncer humano tienen su causa en
pecifica los extremos 5’ y 3’ no codificantes del la hipometilación del ADN. Para estudiar este fenó-
mRNA. meno se generaron ratones transgénicos conteniendo
Como puede observarse, se reemplazaron 3 segmentos alguna de estas construcciones:
de nos (de a uno por vez) por los respectivos segmen- i) Vector conteniendo un promotor de SV40 (constitu-
tos de bcd. tivo, proveniente de un adenovirus) controlando la
Con los mismos, se transformaron genéticamente expresión de la secuencia estructural de la metiltrans-
moscas silvestres y se analizaron los embriones tem- ferasa 1 (Dnmt1) en orientación antisentido
pranos por hibridación in situ de mRNAs en el em- ii) Vector conteniendo un promotor de SV40 (consti-
brión utilizando como sonda un cDNA de nos (segun- tutivo, proveniente e un adenovirus) controlando la
da fila) o bcd (tercera fila). En la primera fila, se ob- expresión de la secuencia de la metiltransferasa 1
serva el aspecto del embrión en una etapa más avan- (Dnmt1) en orientación sentido
zada. La figura siguiente muestra el resultado que se iii) Vector conteniendo el promotor constitutivo pro-
obtuvo con la construcción 1 en moscas silvestres veniente del fago  controlando la expresión de la se-
(primera columna) y moscas transgénicas (segunda cuencia estructural de la metiltransferasa 1 (Dnmt1) en
columna). orientación sentido.
iv) Vector conteniendo el promotor constitutivo pro-
veniente del fago  controlando la expresión de la se-
cuencia estructural de la metiltransferasa 1 (Dnmt1) en
orientación antisentido
Se sabe que la enzima Dnmt1 controla la metilación
del ADN en ratones y que su sobre-expresión permite
metilar exhaustivamente todo potencial ADN metila-
ble y que su disminución causa una sustancial hipo-
metilación del ADN en todos los tejidos.
a) ¿Cuál de los 4 vectores usaría? ¿Por qué?

b) En base al vector elegido, ¿cómo espera que sea el
grado de metilación general del ratón transgénico?
Explique el mecanismo
c) ¿Con cuál de las siguientes técnicas corroboraría
que el ADN está hipometilado? Justifique:
i) digestión con sendas ER que reconocen sitios meti-
lados y no metilados, respectivamente, seguido de
Southern Blot con la sonda Dnmt1
ii) ensayo de protección a la digestión por ADNasaI
iii) preparación de ARN de ratón salvaje y ratón
transgénico, seguida de Northern Blot con la sonda
Dnmt1
iv) digestión con ER que reconocen sitios metilados,
seguido de Southern Blot con la sonda de igf2 (insu-
lin-like growth factor-2, conocido gen que sufre im-
pronta génica)
v) secuenciación bisulfítica genómica directa de
Dnmt1y/o igf2
vi) secuenciación bisulfítica del cDNA de Dnmt1y/o
igf2
Para la/s técnica/s elegida/s indique los controles que
haría.
El ratón transgénico desarrolló tumores en varios teji-
dos. Se determinó que el gen Tm, candidato a causar
tumores en hígado, se encontraba hipometilado en
estos ratones. Ud. sabe que Tm presenta dos alelos,
Tm1: sin sitio para EcoRI y Tm2 con sitio para EcoRI.
d) ¿Cómo haría para probar que Tm sufre impronta
(imprinting) en ratones salvajes? Ud cuenta tanto con
ratones homocigotas como con heterocigotas.
e) Suponiendo que realmente existe impronta de Tm
en el macho ¿cómo sería la proporción de Tm1 y Tm2
metilados y no metilados en la F2, es decir los nietos
de un cruzamiento entre ratones ♂ homocigotas para
Tm1 y ♀ Tm2?
Respuesta a) El i) porque es el único que tiene un
promotor que se expresa en células eucarióticas y tie-
ne potencialidad de reducir la actividad de mutilación
bloqueando la traducción del gen que codifica la en-
zima Dmnt 1. Contestación no necesaria: Podría venir
bien usar al vector ii) pero sólo como CONTROL
contrastante del experimento. Las construcciones de
los vectores iii) y iv) no se expresarían en células eu-
carióticas porque  sólo funciona en bacterias.
b) Altamente reducida. El RNA antisentido (comple-
mentario) de Dmnt 1 formará una doble cadena de
RNA con el mensajero nativo dificultando su traduci-
bilidad. Al reducirse la cantidad de enzima, se reduce
también el efecto de la misma.
c) La v) dado que este tipo de secuenciación permite
detectar nucleótidos metilados. Se debe secuenciar un
gen ya caracterizado como metilado. No sabemos si
éste es el caso del gen Dmnt1 y lo más probable es
que no lo sea. En todo caso, Dmnt1 puede servir como
control (no metilado). En realidad, el control más im-
portante es comparar con la secuenciación común
(que es insensible a la metilación) y (como se indica
después) ratones transgénicos vs no transgénicos. La
iv) sirve si se compara el patrón de restricción de
ratón transgénico vs no transgénico. También podría
ser aceptada como válida si se explica que se usa ER
que NO reconocen sitios metilados, además de los
42
metilados para así comparar ambos patrones, dado
que usar sólo una enzima que sí reconoce sitios meti-
lados, no es capaz de diferenciarlos de los no metila-
dos. Una complicación (que no es necesario explicitar
en la respuesta correcta) es que los genes metilados
por imprinting tienen una copia (epialelo) metilado y
otro no metilado.
d) Cruzaría 2 homocigotas: por ej. ♂ homocigotas
para Tm1 y ♀ Tm2. Después, analizaría en la F1 la
correspondencia entre metilación (por ej. por secuen-
ciación bisulfítica que, además, me revelará la presen-
cia/ausencia del sitio EcoRI en el epialelo metilado).
(La otra alternativa es una doble digestión con ER
sensible/insensibles a metilación + EcoRI seguido de
Southern). En base a cual alelo aparezca metilado de-
terminaré si el imprinting es paterno o materno. La
confirmación del imprinting se puede hacer realizando
un cruzamiento “prueba” con el parental que no metila
sus gametas. Debería ver un 50% de la progenie con
metilación para cada alelo.
e) 25% de individuos Tm1 homocigotas con una copia
de las 2 metiladas (Tm1m/Tm1), 25% Tm2 homocigo-
tas ídem (Tm2m/Tm2), 25% de heterocigotas con meti-
lación en Tm1 (Tm1m/Tm2) y 25% de heterocigotas
con metilación en Tm2 (Tm2m/Tm1).
3) Los genes fushi-tarazu (ftz) y engrailed (en) codifi-
can factores de transcripción con homeodominio y
pueden producir la expresión de otros genes. Ambos
genes actúan aproximadamente en el mismo momento
durante el desarrollo y en la misma región para espe-
cificar destinos celulares en los segmentos corporales.
Estudios experimentales de mutantes evidenciaron
que en embriones ftz (-), no hay proteína engrailed
mientras que en embriones en (-) la expresión de ftz es
normal.
i) ¿Regula engrailed la expresión de fushi-tarazu o
sucede lo contrario?
ii) Indique cuando se expresan estos genes y cual es la
función principal de cada uno de ellos.
iii) ¿Se expresan estos genes durante toda la vida del
organismo? En caso afirmativo justifique.
Rta:
4) Durante el desarrollo de la mosca Drosophila me-
lanogaster participan varias moléculas conocidas co-
mo morfógenos, siendo en las primeras etapas, de
origen materno (los mRNAs que codifican para dichos
morfógenos se traducen en el huevo, pero provienen
de las células nutricias maternas). Ejemplo de esto y
responsables del establecimiento del eje antero-
posterior son:
-en la parte anterior del embrión, BICOID (bcd) y
más tardíamente HUNCHBACK (hb), productos de
los respectivos mRNA maternos.
-en la parte posterior del embrión, NANOS (nos) y
más tardíamente CAUDAL (cd), productos de los res-
pectivosmRNA maternos. Se demostró también que:
-la proteína bcd reconoce el 3’UTR del mRNA de
cd y enla región promotora del gen hb
-la proteína nos reconoce el 3’UTR del mRNA de
hb. I) ¿Qué tipo de acción presentan bcd y nos según
lo comentado anteriormente? Para contestar complete
el siguiente esquema con flechas de unión: (conven-

ciones:  activación, ---| inhibición).
II) Con toda la información que tiene acerca de bcd,
complete los fenotipos que espera observar en los ex-
43
perimentos de la Fig asignando en cada caso, alguna
de las 4 opciones que se muestran debajo de la figura,
en donde se ha ensayado el agregado de mRNA bcd
en embriones con diferentes fondos genéticos En la
Figura siguiente, complete (con flechas) el esquema
de los resultados de inyección de mRNA de bcd.

Rta I)
bcd nos

gen mRNA hb cd mRNA cd

HB hb
Explicación: bcd y nos son los morfógenos de la parte anterior y posterior: bcd actua como factor de trans-
cripción para hb regulando positivamente su transcripción, pero también es un inhibidor de la traducción del
morfógeno cd, que es más tardío. Análogamente, nos es un inhibidor del morfógeno más tardio de la parte ante-
rior, hb.
II) Explicación: bcd es el morfógeno principal anterior, ya que donde se coloca, se generan zonas que darán
lugar a estructuras anteriores (cabeza y torax). El esquema del primer experimento sería análogo a una comple-
mentación (mutante bcd-, con fenotipo WT por el agregado del morfógeno anterior en la zona correspondien-
te).
Desarrollo normal Desarrollo en mutante bcd- inyectado adelante inyectado al medio iny. atrás en salvaje

? ? ?

Las 4 opciones para los 3

casos incógnita 