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Universidad Autnoma del Estado de Mxico

Facultad de Qumica
MANUAL DE LABORATORIO
LABORATORIO E A!"LI#I# I!#TRUME!TAL $ARA
LO# ALIME!TO#
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
Contenido
pgina
i Introduccin 3
ii Estrategia didctica 4
iii Estrategias en qumica analtica, anlisis y clasificacin de los mtodos
analticos instrumentales
4
iv Evaluacin y Acreditacin del curso 5
v i!liografa recomendada "
#rctica
$ Introduccin terica% &
' (eterminacin de vitamina ) en *ugo de frutas +$
+ ,so y aplicaciones de la espectrofotometra de ultravioleta -isi!le en los
colorantes rgano sintticos
+3
3 )uantificacin de fsforo en una !e!ida comercial por ,-.-I/% +5
4 (eterminacin de calcio por a!sorcin atmica 28
5 (eterminacin de 0a y 1 por flamometra 31
6 (eterminacin de de2trosa por polarimetra 34
7 ,so del ndice de refraccin para la determinacin de alco3ol 36
8 (eterminacin del tama4o de partcula de una muestra de yog3urt 38
& 5ane6o de muestras para ser ledas en espectrofotometra de radiacin
infrarro6a
41
'$ Identificacin de materiales de empaques de alimentos por 78I9 47
'' (eterminacin de metanol y etanol en !e!idas alco3licas por cromatografa
de gases%
4&
'+ (eterminacin de Acido acetil saliclico por :#;) 53
'3 (eterminacin de a<=cares por )alorimetra (iferencial de arrido 5"
+
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
I%& I!TROU''I(!%
;a >umica Analtica es una parte imprescindi!le del anlisis de los alimentos% Es
una disciplina e2tremadamente amplia esencial para muc3as industrias, particularmente
aquellas como el procesamiento y manufactura del petrleo, qumicos, semiconductores,
metales, plsticos, farmacuticos, cermicos, papel, te2tiles, alimentos y productos del
vidrio, es fundamental tam!in en el rea de am!iental so!re todo en el monitoreo,
calificacin y cuantificacin de contaminantes a gran concentracin y en el anlisis de
tra<as% El qumico analtico profesional tiene la responsa!ilidad de determinar que
procedimientos de!en ser usados para un pro!lema dado, o si se requiere, desarrollar uno
nuevo%
El nivel al cual los profesionistas entrenados se involucran en el anlisis qumico,
depende de diversos factores que incluyen la naturale<a del pro!lema, los recursos
econmicos, de infraestructura, sensi!ilidad, el tiempo de respuesta y o!6etivos personales%
A menudo se formulan en los diferentes campos preguntas como ?necesito sa!er
cuanto nquel, cromo y 3ierro 3ay en esta muestra@, A)undo podras darme los
resultadosB% Este tipo de situaciones pueden verse de dos formasC
'D como un caso de rutina general o
+Dcomo un pro!lema especfico en el cual e2iste un desconocimiento de las caractersticas
del comportamiento del material al ser sometido a diferentes tcnicas%
En el primer caso, la responsa!ilidad del >umico Analista es la de mane6ar las
tcnicas prevalecientes e instrumentos con los que se cuenta, as como una apreciacin de
su sensi!ilidad, requerimientos de muestra y otras cosas%
En el segundo caso, la resolucin de este tipo de pro!lemas es a menudo el
resultado de la interaccin entre el >umico Analista y los Investigadores o Ingenieros que
poseen el conocimiento so!re las muestras a tratar y que a menudo se enfrentan con una in
estructuracin de la tcnica a seguir para resolver ste% El rol del qumico analista en este
conte2to es entonces el de postular un mecanismo para e2plicar los cam!ios producidos en
una muestra en particular cuando sta es anali<ada y entonces e2aminar la valide< del
anlisis%
El presente manual de la!oratorio esta ela!orado como apoyo para la licenciatura
de qumico en alimentos y !usca dar una revisin a varias tcnicas analticas las cuales
son empleadas tanto como rutina general como en investigacin, y que difieren en el
equipo instrumental empleado seg=n su aplicacin%
3
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
La)oratorio de An*lisis Instrumental +ara los alimentos
Estrate,ia did*ctica
E#TRATE-IA# E! QUIMI'A A!ALITI'A%
Antes de reali<ar un anlisis de!en esta!lecerse ciertos puntos
'D (efinir la informacin que se requiere
+D Escoger el mtodo analtico
3D 9ecoger una muestra representativa
4D (eterminar la cantidad de muestra por pesoEmasaD, volumen o superficie
5D #reparar la muestra para que este en forma correcta para el anlisis
4
Nociones bsicas del uso del equipo
Preparacin de muestras
Calibracin del equipo y de estndares
Mtodos de
Cuantificacin
Otros Mtodos
Instrumentales
Anlisis
Trmicos
Mtodos
Espectroscpicos
Mtodos
Electroqumicos
Mtodos
Cromato!rficos
Introduccin a los Mtodos Instrumentales

Introduccin a los Mtodos Instrumentales

Anlisis de
resultados
Toma de decisiones sobre la base de
los resultados obtenidos
Aplicacin especifica de tcnicas
Anlisis de artculos cientficos
"esolucin de problemas
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
"D Eliminar las posi!les interferencias
FD 9eali<ar la medida de patrones de cali!racin de la muestra
GD 9educir los datos a una respuesta numrica
&D 9eali<ar un anlisis estadstico adecuado
'$D Interpretar el resultado para o!tener la solucin al pro!lema
#ara descri!ir procedimientos especficos con el fin de resolver un pro!lema analtico, es
importante considerar primero las siguientes preguntas dirigidas a determinar tanto los
requerimientos de muestra como el mtodo de anlisis apropiadoC
A)mo de!en ser e2aminadas las muestras para estar seguros que el anlisis es
verdaderamente representativoB
A)ul es el estado fsico de la sustanciaB
AEl material consiste de ms de un componenteB
A(e!e 3a!er una separacin antes de que el material sea anali<adoB
A>u tama4o de muestra de!e ser empleada para los mtodos en consideracinB
A>u nivel de e2actitud es necesaria y qu nivel es posi!le en los anlisisB
AEs la materia orgnica o inorgnicaB
AEs cristalina o amorfaB
A/e requiere un anlisis elemental o molecularB
A>u tipo de medicin se requiereC (estructiva o no destructiva al materialB
Algunas de estas preguntas pueden ser rpidamente resueltas o!servando el material,
sin em!argo, e2isten otras en donde se requiere de informacin ms detallada% En todos los
casos el resultado de!er ser satisfactorio%
A!ALI#I#
;a pala!ra Anlisis desde el punto de vista Etimolgico significa ?desatar@ o
?descomponer@%
;a >umica Analtica puede definirse como la ciencia y el arte de determinar la
composicin de materiales con !ase en los elementos o compuestos que los integran%
(ependiendo de las 3erramientas utili<adas, la clasificacin del anlisis se puede
considerar de la siguiente formaC

5
/lido
;iquido
Has
:omogeni<acin
(isolucin
-apori<acin
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
Anlisis

'

al instrument >uimico
3umeda por via >uimico
El Anlisis por -a :=meda, es el antecedente del Anlisis Instrumental, por
ra<ones 3istricas, y de 3ec3o, de!e considerarse como fundamento del Anlisis, ya que
cuando alg=n 5todo Instrumental no da resultados positivos, tenemos que recurrir a un
mtodo por va 3=meda, que por lo general ya esta estudiado y que no presenta pro!lemas%
El Anlisis >umico por va 3=meda, tiene cuando menos +$$ a4os de desarrollo, mientras
que el Anlisis Instrumental, tiene solamente 5$ a4os%
Es casi imposi!le desligar los dos tipos de anlisis, y es difcil creer, que el Anlisis
por -a :=meda sea totalmente despla<ado por el Anlisis Instrumental% ,n analista de!e
dominar los dos tipos de anlisis, para resolver cualquier pro!lema qumico% #or otra
parte, am!os tipos de anlisis estn ligados, ya que la preparacin o separacin de la
muestra, casi siempre se 3ace por alguna tcnica de va 3=meda, antes del anlisis por va
instrumental%
-enta6as del anlisis
-a 3=meda Instrumental
I E2istencia de gran cantidad de mtodos
I a6o costo%
I7acti!ilidad con equipo sencillo y casi
en cualquier la!oratorio%
I 9equiere poca interpretacin%
I 9apide<, en la mayora de los casos%
I /electividad%
I a6o consumo de materiales y reactivos%
I #osi!ilidad de automati<acin%
I 9equiere peque4as cantidades de
muestra%
'LA#IFI'A'I(! E METOO# I!#TRUME!TALE#
Mtodos Es+ectrosc+icos
'%. Espectroscopia de ,ltravioleta
+%. Espectroscopia de -isi!le
3%. Espectroscopia de Infrarro6o
4%. Espectroscopia de 9man
5%. Espectroscopia de 9ayos J
"%. Espectroscopia de 5icroondas
F%. Espectroscopia de 950
G%. Espectroscopia de masas
&%. Espectroscopia de a!sorcin
atmica
'$%.Espectroscopia de
7luorescencia
''%.Espectroscopia de Emisin por
#lasma EI)#D
'+%.Espectroscopia I9 por
transformada de 7ourier E78I9D
Mtodos de se+aracin
'% )romatografa de gases
+% )romatografa de lquidos
Mtodos electro.umicos
3% #otenciometra
4% )olum!imetra
5% #olarografa
"
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
"% Electrogravimetra
Trmicos
F% )alorimetra de com!ustin
G% )alorimetra diferencial de
!arrido
&% )alorimetra termogravimtrica
Otros%
Kpticos
E/ALUA'I(! 0 A'REITA'I(!
En el desarrollo de la ,nidad de aprendi<a6e se evaluarn los conocimientos,
las 3a!ilidades adquiridas, las actitudes y valores desarrollados, medianteC
#armetro de evaluacin
8ra!a6o de ;a!oratorio
/eguimiento de medidas de seguridad Ecomportamiento,
puntualidad, presentacinD
#articipacin en clase
#re.reporte de la!oratorio
0om!re de la practica
L!6etivo
:iptesis
Antecedentes
5etodologa
9eferencias
9eporte
9esultados
)lculos
8a!las y Hrficas
(iscusin de resultados Eemplear referencias para discutirD
)onclusiones
9eferencias
El total de cada prctica es de '$ puntos%
)arpeta de tareas
Ensayo
)oleccin de artculos
9esumen
E2posicin en equipo
#ro!lemario
;a suma de estas calificaciones integra la escala que es equivalente
al 3$M de la calificacin final
F
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
Acreditacin1
'% )umplir con el G$M de asistencia
BIBLIO-RAF2A RE'OME!AA
Analysis of 7ood and everages E5odernD
)3aralam!ous Heorge E'&&4D Academic #ress%
7ood Analysis
0ielsen /% /u<anne +a% Ed% E'&&GD Aspen #u!lication
Anlisis Instrumental
(uglas A% /Noog, *ames *% ;eavy 4a% Edicin Ed% 5ac HraO. :ill E'&G&D
Anlisis Instrumental
1, 9u!inson, *, 9u!inson% Ed% en espa4ol% E+$$$D Editorial #rentice :all%
5todos Instrumentales de Anlisis
Pillard, 5erritt *r%, (ean, /ettle *r%, Fa% Ed% E'&&'D Hrupo editorial
I!eroamericana%
Analytical Instrumentation :and!ooN
H% EOing% +a% Ed% E'&&$D Editor 5arcel (ecNer
Approved 5et3ods of Analysis &a% Ed% E'&&5D American Association of
)ereal )3emists
Lfficial 5et3ods and recommended practices 4a% Ed% E'&&"D% American Lil
)3emistry /ociety
Lfficial 5et3ods of Analysis '"a% Ed% E'&&5D ALA) International%
#3oo, and Lear4 Anlisis Instrumental 4Q% Edicin% Ed% 5c% HraO :ill%
5adrid%'&&4%
Martnez, Andrs, Chiralt, Fito% 8ermodinmica y )intica de /istemas
Alimento Entorno% 'Q ed% en 52ico Ed% I#0 52ico% '&&&%
G
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
Brown% Introduction to 83ermal Analysis Ed% )3apman
#tandard Test Met5od 6or Mol $ercent Im+urit4 )4 i66erential
#cannin, 'alorimetr4% A/85% (esignation CE &+G.G5 Ereaproved '&G&D%
Epags% "4G."5'D
&
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
RACTICA !
INTRODUCCI"N TE"RICA%
IN#TRUMENTO$
En el sentido ms amplio, un instrumento de anlisis qumico es un
dispositivo que convierte una se4al, que no es detecta!le ni comprensi!le
directamente por los seres 3umanos, en otra se4al que si lo es%
)omponentes fundamentalesC
%enerador de se&al
Transd'(tor de entrada o dete(tor
ro(esador de la se&al
Transd'(tor de salida o de le(t'ra
Des(ri)(i*n
%eneradores de se&al+
Estos producen se4ales analticas a partir de los componentes de la muestra%
#uede ser solo la muestra o adems una fuente de radiacin, un
monocromador, un porta muestras etc%%
Transd'(tores de entrada o dete(tores+
,n tranductor es un dispositivo que puede convertir una se4al de determinado
tipo en otro diferente% ;a mayora de los transductores convierten la se4al
analtica en un volta6e, una corriente o una resistencia elctrica%
ro(esadores de se&al+
5odifican la se4al transducida para 3acerla ms adecuada en el
funcionamiento de los dispositivos de lectura% ;a modificacin ms com=n es
'$
Generador de
seal
/e4al
analtica
Detector
$rocesador de la
se7al
#e7al de entrada
mec*nica o
elctrica
#$%&'#
Medidor o escala
Transductor de salida o
de lectura
/e4al de salida
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
la amplificacin o sea la multiplicacin de la se4al por una constante mayor
que la unidad% Aunque para las se4ales elctricas lo ms com=n es que se
aten=en%
Dis)ositi,os de le(t'ra+
Emplean un transductor de salida que convierte la se4al amplificada
proveniente del procesador en una se4al que puede ser leda por el 3om!re%
#uede ser una medidor de agu6a so!re un cuadrante, registradores so!re papel,
osciloscopios y dispositivos digitales%
8a!la '% E6emplos de componentes de Instrumentos
T8RMI!O# 'OMU!E#
E-a(tit'd
Es la relacin entre los valores o!tenidos y el valor real de un analito%
re(isi*n
Es la relacin entre la cercana de los valores o!tenidos de un anlisis%
''
9espuesta
visula al
color
)ere!ro
3umano
/e4al
transmitida por
el nervio
ptico
El o6o color ;u< natural%
muestra
'om+arador
de color
Imgenes
negras so!le
la pelcula
9evelador
qumico
Imagen
latente
#elcula
fotogrfica
9adiacin
difractada
8u!o de
rayos J%
5uestra
i6ractmet
ro de ra4os
9
,nidad
digital
Amplificador
digitali<ador
#otencial
electrico
Electrodos de
vidrio y
calomel
Actividad del
in 3idrgeno
5uestra Medidor de
+:
9egistrador
so!re papel
Amplificador )orriente
electrica
Electrodos )orriente de
la celda
7uente de
corriente
continua
'oulom)im
etro
9egistrador
so!re papel
Amplificador
desmodulador
#otencial
elctrico
8u!o
fotomultiplic
ador
9adiacin
,- o visi!le
;lama,
monocromad
or, rendi6a
muestra
Es+ectrmet
ro de
emisin
atmica
5edidor de
corriente
0inguno )orriente
elctrica
7otocelda :a< de lu<
atenuado
;mpara de
P, filtro de
vidrio,
muestra
Fotmetro
Le(t'ra ro(esador
de se&al
#e&al
transd'(ida
Transd'(tor
de entrada
#e&al
analiti(a
%enerador
de se&al
Instr'.ento
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
#ensi/ilidad
Es la capacidad de medir de un mtodo analtico, se relaciona directamente
con el lmite de deteccin y el lmite de cuantificacin de una metodologa
analtica%
Aten'a(i*n
,n procesador de se4al reci!e esta con cierta magnitud, si se aten=a, dic3a
se4al se 3ace ms peque4a, si se amplifica se 3ace ms grande%
R'ido$
)uando se encuentran se4ales e2tra4as o indesea!les que se so!reponen a la
se4al del analito a medir%
7uentes de ruidoC puede provenir de cada uno de los componentes del
instrumento
'once+to de Ruido
Blanco 'oncentracin ;
/e4al del analito /e4al ms ruido
$ $
'oncentracin A
/e4al del analito /e4al ms ruido
$ $
R'ido+
9uido de *onson o de !lanco%
'+
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
9uido de (isparo
9uido de parpadeo
9uido am!iental
Mtodos de C'anti0i(a(i*n
'% mtodos gravimtricos
a% precipitacin
!% electrodepositacin
c% volatili<acin
+% mtodos volumtricos
a% mtodos titrimtricos
!% mtodos gasomtricos
i% desprendimiento
ii% a!sorcin
c% volumen medido de un slido o liquido formado de una
muestra
3% mtodos fisicoqumicos
a% mtodos pticos
!% mtodos elctricos
Mtodos Fisi(o1'.i(os
/e mide alguna propiedad del sistema en o!servacin que este
cuantitativamente relacionada con la cantidad del constituyente que se
determina en la muestra de que se deriva el sistema% ,sualmente se requiere
de una cali!racin, esta se ela!ora a partir de patrones%
AD 5todos pticos% /e fundamentan en las propiedades de la energa
radiante, y en el comportamiento en su interaccin con el sistema a
medir%
D 5todos elctricos% ;os mtodos elctricos se emplean usualmente
para poner de manifiesto los cam!ios !ruscos que tienen lugar en el
sistema !a6o o!servacin, como resultado de una reaccin qumica, o
un cam!io de estado%
C2l('los a)li(ando dire(ta.ente la le3 de Beer%
'3
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
)omo el coeficiente de a!sortividad molar de gran n=mero de
compuestos se encuentra en ta!las, es posi!le calcular la concentracin del
compuesto aplicando la ley de eerC
;a ley de eer dice que AR !c
dondeC
A es la absorbancia
es el coeficiente de absortividad molar
C corresponde a la concertacin de la muestra
(espe6ando la concentracin nos queda la siguiente ecuacin, la cual
puede emplearse para conocer la concentracin de un analito en una muestra %
)RAS

!
/in em!argo, es preferi!le emplear un estndar de referencia, ya que la
concentracin determinada en esta forma est su6eta a muc3as fuentes de
error, como la reproductividad de las condiciones, errores instrumentales, etc%
Mtodos de com+aracin con est*ndar
.Este mtodo es muy empleado cuando se cuenta con un sistema esta!lecido
de antemano y estndares certificados o validados%
./e trata de comparar la se4al que emite un patrn en un sistema con la
cantidad de analito que contiene%
.Este mtodo se emplea tam!in para el anlisis cualitativo%
#atrn de concentracin conocida muestra de concentracin
desconocida
se leen el patrn y la muestra con las mismas condiciones
/e compara la lectura de uno y otro y la respuesta as puede conocerse la
cantidad apro2imada de analito que contiene la muestra pro!lema%
)uando se prepara un estndar con una concentracin seme6ante y en
las mismas condiciones que la muestra, la concentracin del compuesto en
estudio se puede determinar aplicando la ley de eerC
A
5
R

5
!
5
c
5
'4
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
A
E
R

E
!
E
c
E
;a relacin de a!sor!ancia entre la muestra y el estndar est
dada porC
/i se emplea la misma celda en am!as determinacionesC !
5
R!
E
, y
como el coeficiente de a!sortividad molar es el mismo para la muestra y el
estndar,


E
T por lo tantoC
A
5
SA
E
R )
5
Sc
E
(e dondeC
c
5
R A
5
c
E
SA
E
Este mtodo es rpido y sus resultados son confia!les%
Adi(i*n de 'n est2ndar
Heneralmente se emplea para concentraciones peque4as de muestra%
#ara este mtodo se emplean dos solucionesC
'% /olucin A, que slo contiene la muestra en estudio%
+% /olucin , que contiene un volumen e2actamente medido de la solucin
A y un volumen medido de la solucin estndar%
/e leen las + soluciones y se cuantifican como si se comparara con un
estndar, se reporta restando el valor del estndar a la solucin !%
re)ara(i*n de ('r,as de (ali/ra(i*n$
Este mtodo es necesario preparar una serie de diluciones del estndar%
/e miden las a!sor!ancias y s grafican contra las concentraciones
respectivasT se o!tiene una grfica de a!sor!ancia contra concentracin% (e la
a!sor!ancia de la muestra en estudio se calcula, por medio de la grfica, la
concentracin%
;as curvas de cali!racin proporcionan resultados ms e2actos que los
mtodos aplicando la ley de eer%
4 de Nor.aliza(i*n
'5

M
c
c
b
b
A
A

Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
/e emplea para muestras mi2tas o multicomponentes en las que una
se4al especfica esta dada por cada uno de los analitos como en la
cromatografa o el termoanlisis%
/e trata de 3omologar las respuestas que proporcionan todos los
analitos que contiene una muestra, para esto se prepara una me<cla estndar
que de!e de contener una misma concentracin para A, y ), se emplea un
patrn para esto%
#osteriormente se o!serva la se4al que corresponde a cada analito y
casi siempre es diferente, por lo que se eval=a su respuesta y se le asigna un
factor de respuesta, este va de ' a $% Este valor se multiplica o divide por el
valor de la respuesta con lo que se 3omologa la respuesta de todos los datos
de los analitos A, y )%
/e lee entonces, la muestra que o!viamente no contiene las mismas
concentracin y se multiplica cada respuesta de cada analito por su
correspondiente factor de respuesta y con estos datos se procede a evaluar el
porcenta6e de cada analito en el total de la muestra%
l reporte se da en ! de A" ! de #" !C etc$ % el total de todo es del 1&&!$
4 en )eso
;a suma de todas las reas o!tenidas es del '$$M y cada pico tiene un
M de reas del total graficado% El reporte se da en M de A, M de , M) etc% y
el total de todo es del '$$M%
'e emplea muc(o en cromato)raf*a$
Mtodo del est2ndar e-terno * C'r,a de (ali/ra(i*n
#ara este mtodo es necesario preparar una serie de diluciones del
estndar% /e miden las respuestas y s grafican contra las concentraciones
respectivasT se o!tiene una grfica de respuesta contra concentracin% (e la
respuesta de la muestra en estudio se calcula, por medio de la grfica, la
concentracin al interpolar el dato conocido de la respuesta del analito a cierto
detector o !ien por medio de la ecuacin de la curva ela!orada con los datos
de la regresin lineal ela!orada donde UR respuesta al detector y JR
concentracin del analito%
'"
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
Mtodo del est2ndar interno 5EI6
/e requiere de un compuesto de caractersticas similares a las del
analito a cuantificar, adems de!e tener una concentracin conocida y cierta
pure<a E&$MD% /e fa!ricar una curva de cali!racin, solo que antes de aforar
se adiciona una cantidad de EI similar a la mitad de la curva de cali!racin a
todos los matraces y despus se aforan, se leen cada uno y o!viamente se
o!servarn las dos respuestas, la del analito y la del EI% /e calcula la respuesta
para cada analito a detector empleado y con estos datos se o!tiene un factor
de respuesta relativo al estndar interno cuyo factor de respuesta es '%
E7e.)los
Mtodo del 4 de Nor.aliza(i*n$
- 8odos los componentes de!en ser registrados%
- El factor respuesta para todos es el mismo%

<$I'O !o% T%R% =min> AREA ? E AREA
' +%F' G5,$$$ 3F%"&3'
+ 3%4G F+,$$$ 3'%&+G3
3 4%+3 43,+$$ '&%'5F$
4 5%FG +5,3$5 ''%++'5
+,+A- 225"5&5 1&&
I(atos de la muestra
(atos de la muestra estndar
<$I'O !o% T%R% =min> AREA 'O!' =m,>
' +%F' 5$%$$$ '5
+ 3%4G F$%$$$ '5
3 4%+3 G$%$$$ '5
'F
VconcentracinW
r
e
s
p
u
e
s
t
a
U R a X !VJW
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
4 5%FG "5%$$$ '5
)alculo del 7actor de 9espuesta E79D
FRi @ [ 'i ] x [ A st ]
Ai ' st
(ondeC
st R estndar de referencia%
i R Analito
) R )oncentracin
A R Area
)lculos del factor de respuesta
79 'R YY'5 2 F$%$$$ R '%4 FR89 8$:
5$%$$$ '5
79 +R YY'5 2 F$%$$$ R '%$ FR;9 8$!
F$%$$$ '5
79 3R YY'5 2 F$%$$$ R$%GF5 FR<9 !$=>?
G$%$$$ '5
79 4R YY'5 2 F$%$$$ R '%$F" FR:9 8$!>@
"5%$$$ '5
or(iento de nor.aliza(i*n 4N
)omo calcular el porcenta6e normali<ado
? ! @ Ai x Fr i x A;;

n
i@A
Ai x Fr i
(ondeC
7rR factor de respuesta
i R Analito
A R Area
)lculos del porcenta6e normali<ado
M 0
'
R YYYYYYYYYYYYYYYEG5%$$$D E'%4DYYYYYYYYYYYYY
EG5%$$$D E'%4D X EF+%$$$D E'D X E43%+$$D E$%GF5D X E+3%3$5D
E'%$F"D
'G
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
M 0
'
R YYYYYYYYY''&%$$$YYYYYYY
''&,$$$XF+,$$$X3F,G$$X +5,$F"%'G
? !
A
@ BC%DEFG

M 0
+
R EF+%$$$D E'D 2 '$$
+53,GF"%'G ?!
G
@
GD%FC;G

M0
3
R E43,+$$D E$%GF5D 2 '$$ ? !
F
@ AB%DDHA
+53,GF"%'G

M0
4
R E+3,3$5D E'%$F"D 2 '$$ ?!
B
@
H%DEEF
+53,GF"%'G

4N
Total
9 AA$AAA=
Mtodo del Est2ndar E-terno$
/e de!e inyectar primero la me<cla en el cromatgrafo con cantidades
conocidas de cada uno de sus componentes de inters y determinar el factor de
respuesta de cada componente% ;a relacin de la cantidad de estndar con la
respuesta Eusualmente el rea del picoD es conocida como factor de cali!racin
para ese componente particular%
)uando se anali<a una me<cla de concentracin desconocida, la cantidad de
cada componente es o!tenida multiplicando%
- El factor de respuesta para todos es calculado%
- /e inyecta siempre la misma cantidad%
:acer cromatograma pro!lema y las reas 3alladas dividirlas por el factor
de respuesta%
Cali/ra(i*n 3 atrones
El mtodo ms sencillo para el anlisis cromatogrfico cuantitativo
implica la preparacin de una serie de disoluciones de patrn de composicin
a la de la muestra% A continuacin se o!tienen los cromatogramas de los
patrones y se representan las alturas o reas de pico en funcin de la
concentracin% ;a representacin de los datos de!era originar una lnea recta
que pasara por el origen de coordenadasT los anlisis se !asan en esta grfica%
#ara una mayor e2actitud es necesario una estandari<acin frecuente%
'&
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
Al utili<ar este mtodo, la fuente ms importante de error en los
anlisis es normalmente la incertidum!re en el volumen de la muestraT
ocasionalmente la velocidad de inyeccin de la muestra es tam!in un factor a
considerar% A menudo, las muestras son peque4as Eapro2imadamente '
microlitroD y la incertidum!re asociada con la inyeccin de un volumen
reproduci!le de ese tama4o con una micro6eringa puede significar un cierto
porcenta6e relativo, tal ve< de varias unidades% ;a situacin se pone ms de
manifiesto en la cromatografa gas.lquido, donde la muestra se 3a de inyectar
en un !loque de inyeccin calienteT aqu, la evaporacin en el e2tremo de la
agu6a puede conducir a una gran variacin del volumen inyectado%
iR' (atos de la muestra%
<$I'O !o% T%R% =min> AREA ? E AREA
' +%F' G5,$$$ 3F%"&3'
+ 3%4G F+,$$$ 3'%&+G3
3 4%+3 43,+$$ '&%'5F$
4 5%FG +5,3$5 ''%++'5
+,+A- 225"5&5 1&&
I(atos de la muestra
(atos de la muestra estndarC
<$I'O !o% T%R% =min> AREA 'O!' =m,>
' +%F' 5$%$$$ '5
+ 3%4G F$%$$$ '5
3 4%+3 G$%$$$ '5
4 5%FG "5%$$$ '5
Fa(tor de Cali/ra(i*n 5FC6
F'i@ ' ci
A ci
7)
'
R '5 mg R 3%$$$2 '$
.4
F'
A

@ F%;;;x A;
&B
5$,$$$
7)
+
R '5 mg R +%'4+ 2'$
.4
F'
G
@ G%ABG xA;
&B
F$,$$$
7)
3
R '5mg R '%GF5 2 '$
.4
F'
F
@ A%DEI x A;
&B
G$,$$$
7)
4
R '5 mg R +%3$F 2 '$
.4
F'
B
@ G%F;E x A;
&B
+$
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos

"5,$$$
Cantidad del (o.)onente 5(-6
'xi @ =A'i> =F'i>
)
'
R EG5,$$$D E3%$$$2 '$
.4
D R +5%5 mg '
A
@ GI%I m,
)
+
R EF+,$$$D E+%'4+ 2'$
.4
D R '5%4 mg '
G
@ AI%B m,
)
3
R E43,+$$D E'%GF5 2 '$
.4
D R G%' mg '
F
@ D%A m,
)
4
R E +5,3$5D E+%3$F 2 '$
.4
DR 5%G mg '
B
@ I%D m,
.AC+/+01 1- 2,-0M3 /34C+A1, 5627
F/@ /
im
/
is
-
im
R -olumen inyectado de muestra
-
is
R -olumen inyectado de estndar%
EntoncesC
'xi @ =A ' i> = F ' 4>
7 - i
+'
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
RACTICA 8
DETERMINACI"N DE ACIDEB DE CU%O DE FRUTA$
O)Jetivo%
'% #or medio de una titulacin potenciomtrica, el alumno determinar la
acide< de una muestra de 6ugo comercial%
I!TROU''I(!
;a acide< es la capacidad cualitativa para reaccionar con una !ase 3asta un p:
determinado y puede interpretarse en trminos de sustancias especficas
A$LI'A'I(!
Aplica!le a soluciones que tengan carcter cido !ase%
:I-IE!E 0 #E-URIA
'D ;as soluciones preparadas de!ern ser desec3adas en la tar6a despus de
ser neutrali<adas%
+D /e de!er usar !ata, la cual de!er estar de!idamente a!roc3ada%
3D ,sar lentes de seguridad%
MATERIALE# 0 METOO#
alan<a analtica
#otencimetro con electrodo para
medir p:
5atra< volumtrico de '$$ ml E+D
-aso de precipitado de '$$ ml
-aso de precipitado de 5$$ ml
#ipeta volumtrica de +$ ml
Agua destilada
0aL: $%'0
iftalato de potasio seco Eestndar
primarioD
/oluciones !uffer estndar de p:
4 a ''%
$RO'EIMIE!TO
8reparacin del potencimetro9
)ali!rar el potencimetro empleando las soluciones !uffer
5ontar el dispositivo para la valoracin potenciomtrica
8reparacin de la solucin valorante
#reparar '$$ m; de solucin de 0aL: $%'0 en agua y valorarla
-alorarla empleando el potencimetro Ee2ceder el p: de '' para asegurar una
curva sigmoidalD
8reparacin de la muestra9
5edir +$ m; de muestra cuantitativamente
Adicionar 4$ m; de agua destilada%
++
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
Anlisis potenciom:trico 9
8itular con 0aL: adicionando mililitro por mililitro y anotando en cada
punto el volumen gastado, e2ceder las '' unidades de p: para asegurar una
curva sigmoidal%
Empleando los valores de la ta!la -olumen adicionado Z p:, reali<ar
una curva sigmoidal parecida a la siguiente%
#or medio de la tcnica de la primera derivada determine el punto de
equivalencia y con el volumen o!tenido a este punto, realice los
clculos correspondientes%
)ompare sus resultados con los reportados en la !i!liografa%
C2l('los
#ara o!tener la acide< de la muestra puede emplear la siguiente ecuacin%
M
236
- ) Acide; D S E
(onde
- mililitros de solucin de 0aL: $%'0
0 normalidad de 0aL:
5 volumen de muestra empleada en la determinacin
7 7actor de acide< del 6ugo o nctar Ever ta!laD
8a!la de factores
Acido 7actor
5lico $%$"F
L2lico $%$45
)trico an3idro $%$"4
8artrico $%$F5
Actico $%$"$
+3
-olumen
adicionado
p:
$
'
+
3
4
5
"
F
G
&
'$[
-olumen adicionado
p:
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
)oncluya so!re los resultados o!tenidos
+4
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
RACTICA ;
U#O D ALICACIONE# DE LA E#ECTROFOTOMETRIA DE
ULTRAEIOLETA EI#IBLE EN LO# COLORANTE#
OR%ANO#INTFTICO#
O)Jetivo%
'% El alumno aprender a utili<ar el equipo de ultravioleta.visi!le para
anali<ar la pure<a de los colorantes organo.sintticos por medio del modo de
!arrido%
+% Aprender a dar lectura a un espectro de ultravioleta, a identificar los
parmetros de medicin en el espectro y a sacar conclusiones a travs de la
lectura de esos parmetros%
+5
Manual de laboratorio
Anlisis de Alimentos
I!TROU''I(!
;a industria alimentaria de!e estar su6eta a altos estndares de calidad
en los productos que fa!rica, por lo que a menudo es necesario anali<ar la
cantidad de sustancia que le confiere cierta propiedad al alimento, o lo altera
de manera no apta para el ser 3umano%
;os colorantes utili<ados por la industria alimentaria como son el ro6o
4$, amarillo 5, etc% son facti!les de ser anali<ados por espectrometra de
a!sorcin, de una manera rpida y con alta e2actitud%
A$LI'A'I(!
Aplica!le a colorantes artificiales alimenticios%
:I-IE!E 0 #E-URIA
;as soluciones preparadas no de!ern ser desec3adas en la tar6a%
/e de!er usar !ata, la cual de!er estar de!idamente a!roc3ada%
,sar lentes de seguridad%
0o secar con papel 3iginico las celdas de cuar<o pues se rayan%
0o derramar muestra dentro del equipo%
MATERIALE# 0 METOO#
alan<a analtica
Espectrofotmetro
5atra< volumtrico de '$$$ ml E+D
-aso de precipitado de '$$ ml
-aso de precipitado de 5$$ ml
#ipeta de +5 ml
5atra< volumtrico de 5$$ ml
Agua destilada
Estndares de colorantes
3idrosolu!lesC Amarillo 5,
Amarillo ", A<ul ', 9o6o 4$%
+"
$RO'EIMIE!TO
AD ,so del equipo, lectura del espectro, modos de operacin%
#esar el estndar con el fin de o!tener una concentracin de $%$$' gSl y aforar en
matra< volumtrico% )olocar la muestra dentro de una celda de cuar<o y efectuar un
!arrido espectofotomtrico de 3G$ a F5$ nm% (eterminar la a!sor!ancia a la m2ima
longitud de onda% 9epetir la operacin para otras concentraciones con el fin de que se
o!tenga una a!sor!ancia que caiga dentro de la linearidad que marca la ley de eer%
A@ )c
(ondeC
A a!sor!ancia
epsilon% )oeficiente de a!sortividad molar
! longitud de la celda
c concentracin molar de la muestra
)ien
A@ a)c
(ondeC
A a!sor!ancia
a coeficiente de a!sortividad
! longitud de la celda
c concentracin de la muestra
Re+ortar1
#rocedimiento de anlisis de la muestra
;ongitud de onda de l pico o picos m2imos
E2plicar los modos de operacin del equipo%
+abla1
'olorante de Onda =nm> 'on% =, K l> a)sortividad =l K , cm>
Amarillo 5 4+G $% $$' 53
Amarillo " 4G4 $% $$' 55
ro6o 4$ 5$+ $% $$' 55%"
A<ul ' "3$."+5
$RA'TI'A F
ETERMI!A'I(! E F(#FORO $OR E#$E'TROFOTOMETR2A /I# E!
A-UA 'OMERI'IAL%
O)Jetivo%
'% (eterminar la cantidad de fsforo por un mtodo espectrofotomtrico Een forma de
ortofosfatosD presente en los !e!idas, aplica!le cuando la concentracin de ortofosfatos
es de ' a +$ mgSdm
3
%
Fundamento
;os mtodos se !asan en transformar los compuestos fosforados a ortofosfatos, los
cuales se 3acen reaccionar con moli!dato de amonio para formar el cido moli!do.
fosfrico% En el mtodo del a<ul de moli!deno o del cloruro estanoso, el cido moli!do.
fofrico se reduce para producir el comple6o colorido conocido como a<ul de
moli!deno% ;a intensidad de la coloracin se determina por espectrofotometra%
F:
3
#L
4
X '+E0:
4
D"5o
F
L
+4
% 4:
+
L \ F E0:
4
D
3
E#L
4
E5oL
3
D
'+
D X 5' L:
.
X33:
+
L

El comple6o de fosfo.moli!dato tiene una me<cla de 5o
X5
y 5o
X"
, su composicin es
indefinida% Este comple6o es reducido a un compuesto a<ul solu!le%
'aractersticas de la muestra1
/e requiere de un !e!ida que en teora contenga fsforo, si se elige un refresco colorido
se recomienda digerir, para eliminar interferencias%
5uestraYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
Materiales 4 e.ui+o1
itcora
Espectrofotmetro con un rango de tra!a6o de +$$ a &$$ nm
5aterial com=n de la!oratorio% Eesptula, matraces volumtricos de '$$ y '$ ml, vasos
de pp de '$ ml, pisetaD
alan<a analtica
Reactivos1
;as sustancias que a continuacin se mencionan de!en ser grado analtico, a menos que
se especifique otra cosa% )uando se mencione el uso de agua, de!e entenderse
deioni<ada%
Acido /ulf=rico concentrado E:
+
/L
4
D%
5oli!dato de amonio tetra3idratado E0:
4
D " 5o
F
L
+4
]4:
+
LD%
ac% Ascr!ico
:idr2ido de sodio E0aL:D%
7osfato de potasio mono!sico an3idro E1:
+
#L
4
D
/al disdica de fenolftalena E)
+$
:
'4
L
4
D
Alco3ol etlico E)
+
:
"
LD
5etanol E):
4
LD

$re+aracin de soluciones1
A% #olucin stoc3 de $
G
O
I
#esar $%'&'5gr de 1:
+
#L
4
seco y disolver en '$$$m; de agua
Ela!orar con esta solucin una que contenga 4 ppm de #
+
L
5
Erequiere al menos +5mlD
G% #olucin reductora
+%' $%FG g de moli!dato de amonio en 3& m; de agua
+%+ '%$5" g de ac% Ascr!ico en "$ ml de agua
+%3 ''ml de :
+
/L
4
conc en '+5 ml de agua
5e<clar +%', +%+ y +%3 aforar a +5$ml y etiquetar
F% $re+arar la curva de cali)racin
Estndar )onc EppmD ml de solucin
de tra!a6o
ml de soln
reductora
-olumen de
aforo EmlD
' $%4 ' 4 '$
+ $%G + 4 '$
3 '%+ 3 4 '$
4 '%" 4 4 '$
5 +%$ 5 4 '$
!lanco $ $ 4 '$
;a curva ser incu!ada durante 45 minutos a 5$ ^)
#osteriormente se enfrio a temperatur am!iente y se leyo a YYYYY nm
B% $re+arar la muestra
(es.gasificacin del refresco mediante agitacin
/e toma ' ml del refresco y se diluyo a 5$ml
(e esta dilucin se tomo ' ml y se le adicionaron 4 ml de solucin reductora y se aforo
a '$ ml con agua deioni<ada%
#ara mayor seguridad reali<ar las determinaciones por triplicado%
)alcular el coeficiente de variacin para evaluar la reproduci!ilidad del mtodo%
5% Leer en el espectrofotmetro seleccionando la longitud de onda m2ima del
espectro del comple6o a<ul%
9eportar la concentracin de fsforo encontrada en las muestras y compararlas con lo
que reportan las etiquetas y la !i!liografa%
I!TROU''I(!
;a ecuacin E'D se conoce como la ley de eer o ley de ;am!er y eerT el valor
de la a!sortividad es caracterstico de cada sustancia y se emplea cuando la
concentracin de la solucin es estudio est dada en partes por milln o por miligramosT
pero si la concentracin es molar, la a se constituye por

y la constante se denomina
a!sortividad molar%
A @

)c E'D
En los aparatos ms sencillos la escala est dada en porcenta6e de transmitanciaC
M8 R E8D E'$$D E+D
#ero si se emplea la a!sor!ancia en lugar de transmitancia y s grafica contra
concentraciones, se o!tiene una lnea recta como la que aparece en la figura siguiente
EaD%
aD !D



A


)
<rfica de absorbancia contra concentraciones$
En cam!io si s grafica por ciento de transmitancia contra concentraciones, se o!tiene
una curva como la de la figura anterior E!D%
#ara pasar de porciento de transmitancia a a!sor!ancia se emplea la relacinC
A R +.log M8
A$LI'A'IO!
Este procedimiento esta!lece un mtodo espectrofotomtrico para la determinacin de
fsforo Een forma de ortofosfatosD presente en los refrescos, aplica!le cuando la
concentracin de ortofosfatos es de ' a +$ mgSdm
3
%
FU!AME!TO TEORI'O
;os mtodos se !asan en transformar los compuestos fosforados a ortofosfatos,
los cuales se 3acen reaccionar con moli!dato de amonio para formar el cido moli!do.
fosfrico%
En el mtodo del a<ul de moli!deno o del cloruro estanoso, el cido moli!do.fofrico se
reduce para producir el comple6o colorido conocido como a<ul de moli!deno% ;a
intensidad de la coloracin se determina por espectrofotometra%
:I-IE!E 0 #E-URIA
;as soluciones preparadas no de!ern ser desec3adas en la tar6a%
/e de!er usar !ata, la cual de!er estar de!idamente a!roc3ada%
,sar lentes de seguridad%
0o secar con papel 3iginico las celdas de cuar<o pues se rayan%
0o derramar muestra dentro del equipo%
Al mane6ar las solucione cidas aseg=rese de reali<arlo dentro de la campana%




8



)
<rfica de transmitancia contra concentraciones$
EFI!I'IO!E#1
7sforo 8otal%. Es la suma total del fsforo en todas sus diferentes formas%
Aseg=rese de usar guantes si lava material con me<cla crmica% ,sar !ata%
MATERIALE# 0 METOO#
'%.Espectrofotmetro o colormetro
+%.5aterial com=n de la!oratorio%
3%. 8odo el material de vidrio empleado en esta determinacin de!e ser lavado con
me<cla crmica, en6uagado dos veces con agua acidulada :)l E'C'D caliente y
en6uagando dos o tres veces ms con agua de ioni<ada% 0unca use detergentes%
Reactivos1
;as sustancias que a continuacin se mencionan de!en ser grado analtico, a menos que
se especifique otra cosa% )uando se mencione el uso de agua, de!e entenderse
deioni<ada%
Acido /ulf=rico concentrado E:
+
/L
4
D%
Acido 0trico concentrado E:0L
3
D%
5oli!dato de amonio tetra3idratado E0:
4
D " 5o
F
L
+4
]4:
+
LD%
Hlicerol E)
3
:
G
L
3
D%
)loruro estanoso di3idratado E/n)l
+
]+:
+
LD%
:idr2ido de sodio E0aL:D%
7osfato de potasio mono!sico an3idro E1:
+
#L
4
D
&%. /al disdica de fenolftalena E)
+$
:
'4
L
4
D
$re+aracion de #oluciones1
'%. /olucin de moli!dato I
'%'%. (isolver +5%$g de moli)dato de amonio tetra5idratado en 'F5 ml de agua%
'%+%. Agregar con muc3o cuidado +G$ ml de *cido sul6Lrico concentrado a 4$$ ml de
agua y de6ar enfriar% A4adir la solucin de moli)dato de amonioI%
+%. #olucin de moli)dato de amonio II%. (isolver 4$%' g de moli!dato de amonio en
apro2imadamente 5$$ ml de agua% ;entamente a4adir 3&" ml de la solucin de
moli!dato de amonio I, enfriar y diluir a ' l%
3%. #olucin de cloruro estanoso I %. (isolver +%5g de cloruro estannoso di3idratado en
'$$$ ml de glicerol% Asegurndose que el reactivo no 3aya sufrido alteracin o
descomposicin alguna, usando de preferencia uno nuevo o recientemente a!ierto%
4%. #olucin de cloruro estanoso II%. 5e<clar G ml de la solucin de cloruro estannoso
I con 5$ ml de glicerol% Este reactivo es esta!le durante seis meses%
5%. /olucin +atrn de 6os6atos%
5%'%.#esar +'&%5 mg de 6os6ato de +otasio mono)*sico an5idro previamente secado en
estufa a 3FG 1 E'$5
^
)D durante dos 3oras%
5%+%. isolver en a,ua, transferir la solucin a un matra< volumtrico y aforar a ' l con
agua%
5%3%. (e la solucin anterior tomar '$$ ml, trans6erir un matra< aforado de '$$$ ml y
aforar con agua% Esta solucin contiene 5%$ _g de #Scm
3
%
$RO'EIMIE!TO
'%. es,asi6icar la !e!ida, sonicando durante '5 min% En caso de que este tenga color,
filtrar en un disco con numero de poro del 5 y una cama de car!n activado, en caso de
no desaparecer el color digerir el filtrado, tomando '$$ ml de muestra, agregando ' ml
de cido sulf=rico concentrado y 5 ml de cido ntrico, evaporando 3asta casi sequedad%
,na ve< terminada la digestin de6ar enfriar y agregar +$ ml de agua, neutrali<ando con
fenolftaleina e 3idr2ido de sodio "0 3asta un ligero color rosado% Aforar a '$$ ml con
agua filtrar si es necesario y continuar%
+%. Tomar una alcuota de '$$ ml y pasarlos a un vaso de precipitado o matra<
erlenmeyer con capacidad de +$$ ml, filtrar si es necesario%
3%. Adicionar B%; ml de la solucin de moli!dato de amonio I y agitar para
3omogenei<ar%
4%. A7adir A; ,otas de cloruro estanoso I, 3omogenei<ar y de6ar reposar%
5%. Medir la a)sor)ancia de la muestra despus de '$ minutos y antes de '+, usando el
testigo para a6ustar el espectrofotmetro a cero de a!sor!ancia E'$$M de transmitanciaD,
empleando una lon,itud de onda de CH; nm%
"%. $re+arar la curva de cali)racin%
"%'%.8omar de la solucin patrn de 5%$ _g de #Scm
3
, alcuotas de acuerdo con la
siguiente ta!la y llevar a un volumen de '$$ ml%
cm
3
e solucin
+atrn
_g #
5
'$
'5
+$
+5
3$
35
4$
+5
5$
F5
'$$
'+5
'5$
'F5
+$$
"%+%. )ontinuar con el mismo procedimiento de la misma forma que el paso + del
procedimiento%
"%3%. Ela)orar la curva de cali)racin correspondiente graficando las lecturas de
a!sor!ancia en el e6e de las a!scisas contra las concentraciones de # en _g, en el e6e de
las ordenadas%
"%4%. $re+arar un )lanco con agua deioni<ada agregando las mismas proporciones de
reactivos que a la muestra y a la curva%
'*lculos%
El contenido de fsforo presente en la muestra se calcula mediante la siguiente formulaC
mg #Sdm
3
R
2
C
En dondeC
) R _g de fsforo leda en la grfica
- R volumen de la alcuota tomada para la determinacin, en cm
3
;a diferencia entre los resultados o!tenidos en prue!as efectuadas por duplicado no
de!e e2ceder de
.
X
'%$ mgSdm
3
en caso contrario, se recomienda repetir la
determinacin%
9eportar l M de fsforo total encontrado%
RACTICA :
DETERMINACI"N DE CALCIO OR AB#ORCI"N AT"MICA
O)Jetivo%
Huiar al alumno paso por paso para determinar las concentraciones de calcio en un tipo
de lec3e, mientras adquiere las 3a!ilidades de preparacin de soluciones, mane6o de
muestras de matri< comple6a como la lec3e y aprende la importancia del tra!a6o en
equipo
I!TROU''I(!
)uando se suministra una determinada cantidad de energa a un tomo cualquiera, que
se encuentre en su estado fundamental, en un estado energtico, que llamaremos E
$
esta
energa es a!sor!ida por el tomo, de tal forma que se incrementar el radio de giro de
sus electrones de la capa e2terna llevando al tomo a un nuevo estado energtico E
'%

`tomo en estado e2citado `tomo en estado
fundamental


M

Energa luminosa `tomo en `tomo en
estado !asal estado e2citado
;a cantidad de energa necesaria para llevar un tomo de su estado fundamental al
e2citado la llamaremos energa de e2citacin E
'
que ser E E
'
. E
$
la energa de
e2citacin puede suministrarse de diferentes manerasC 8rmicamente, elctricamente,
rayo lser, induccin electromagntica etc% )uando un tomo en estado e2citado vuelve
nuevamente a su estado fundamental, este cede una determinada cantidad de energa de
e2citacin, pero siempre de una misma forma, emitiendo radiaciones a longitudes de
onda determinadas%
8odo este fenmeno lo represent #lancN en una ecuacin que diceC ,n tomo en estado
e2citado se encuentra en equili!rio con tomos en estado fundamental emitiendo una
serie de radiaciones, a diferentes longitudes de onda, caractersticas para cada uno de los
diferentes elementosC 5
e
5
$
X 3v
'
X 3v
+
X 3v
3
X%%%
;a representacin grfica de la intensidad de emisin de esas radiaciones, en funcin de
la longitud de onda, se llama espectro de emisin% )uando los tomos en estado
fundamental se encuentran con las mismas radiaciones que ellos mismos son capaces de
emitir, se producir una a!sorcin de las radiaciones por los tomos en estado
fundamental, despla<ndose el equili!rio 3acia la i<quierda y pasando los tomos del
estado fundamental al e2citado% Este fenmeno consiste en la a!sorcin de radiaciones a
determinadas longitudes de onda por cualquier medio a!sor!ente, se llama
espectroscopia de a!sorcin% En el caso particular en que el medio a!sor!ente, son
tomos en estado fundamental, se llama A!sorcin Atmica%
A#$E'TO# E :I-IE!E 0 #E-URIA
8odo el material que se emplee de!er estar limpio y seco, ten cuidado que no e2istan
fugas de gas y que al momento de encender la flama el quemador no est tapado, y que
e2ista !uena ventilacin en el lugar de tra!a6o%
MATERIALE# 0 METOO#
Espectrofotmetro de a!sorcin atmica%
;mpara de ctodo 3ueco de calcio
8anque de acetileno de alta pure<a
8anque de aire o compresor de aire
#arrilla elctrica
alan<a analtica
5atra< volumtrico de '$$ ml
#ipetas de '%5 y '$ ml
Em!udo de vidrio
-aso de precipitado de '5$ ml
#apel Oa3tman 0o% 4$
-idrio de relo6
REA'TI/O#
`cido )lor3drico ' 0%
/olucin patrn de )alcio de 5$$ ppm
Agua destilada
L2ido de ;antano
`cido )lor3drico concentrado
;ec3e comercial
$RO'EIMIE!TO
a>$re+aracin de la solucin +atrn1
)olocar en tres matraces volumtricos de '$$ ml, '$ ml de o2ido de lantano al
5M% A4adir ', 3 y " ml de la solucin stocN de calcio y '$ ml de cido clor3drico ' 0%
Aforar con agua destilada% ;as soluciones son de 5, '5 y 3$ mg S l de calcio%
)>$re+aracin de la muestra de lec5e +ara leer 'alcio +or A%A%1
A A;; ml de muestra A4adir '5 ml de :)l ' 0 y calentar 3asta e!ullicin%
Enfriar y filtrar a travs de papel O3atman 0o 4'% 9ecoger el filtrado en un matra<
volumtrico de '$$ ml que contenga '$ ml de o2ido de lantano al 5M% Aforar con agua
destilada% #reparar un !lanco%
c>$re+aracin del )lanco1
)olocar en un matra< volumtrico de '$$ ml, 5 ml de :)l '0 y agregarle '$ ml
de 2ido de lantano al 5M y aforar con agua destilada%
d>$re+aracin del e.ui+o1
)olocar la lmpara de calcio y proceder a la cali!racin del equipo o!teniendo la
m2ima ganancia de la lmpara a6ustar ptimamente el quemador, colocar las presiones
de salida del acetileno y optimi<ar la flama%
e>An*lisis1
Aspirar las soluciones estndar de 5, '5 y 3$ g Sml de calcio, aspirar las
muestras y medir la a!sor!ancia%
'AL'ULO
)a ppm R g S ml ledos en la muestra 2 -ol% de solucin de la muestra
peso de la muestra en g
)uando los metales se determinan en trminos de mgS; EppmDen la curva de
cali!racin, calcular la concentracin de la muestra mediante la siguiente e2presinC
mgS; de metal
En la muestra R mgS; de metal ledos en la curva 2
'$$$
1
( E7actor de dilucinD R -olumen final total en cm
3

cm
3
de muestra
RACTICA NO$ ?
DETERMINACI"N DEL CONTENIDO DE NA D G EMLEANDO LA TFCNICA
DE FLAMOMETRHA$
O)Jetivo1
(eterminar la concentracin de 0a y de 1 en una !e!ida 3idratante, empleando la
tcnica de flamometra%
I!TROU''I(!
;a espectroscopia de emisin se !asa en la generacin de espectros de lneas de
emisin por lneas producidas por tomos e2citados%
El flamometro cuenta !sicamente con una fuente de elega que lleva a los tomos que
son atomi<ados 3acia un estado de e2citacin y a travs de filtros y de un
monocromador se seleccionan las lneas de emisin que los tomos emiten, a travs de
esta propiedad es posi!le calcular la cantidad de tomos presentes en una solucin%%
A$LI'A'IO!
/e pueden determinar grandes concentraciones de 0a, 1, ;i, )a en un flamometro
equipado con los filtros adecuados en muestras que van desde agua, alimentos frmacos
y compuestos comple6os con el de!ido tratamiento previo de las matrices%
A#$E'TO# E :I-IE!E 0 #E-URIA
8odo el material que se emplee de!er estar limpio y seco, ten cuidado que no e2istan
fugas de gas y que al momento de encender la flama el quemador no est tapado, y que
e2ista !uena ventilacin en el lugar de tra!a6o%
,sar !ata, lentes de seguridad%
MATERIALE# 0 METOO#
7lammetro
)ompresora
-asos de pp%
5atraces volumtricos de '$$ y 5$ ml
#ipetas volumtricas de ', +, 3,5 y '$ml
Estndar de 1
Estndar de 0a
Agua deioni<ada
$RO'EIMIE!TO
A% $re+aracin de la curva est*ndar
'%' Ela!orar a partir del estndar de sodio y del estndar de potasio diluciones de forma
que se tengan concentraciones de +$, 4$, "$, G$ y '$$ mgS; de cada uno de los
elementos por separado% 8omar en cuenta el porcenta6e de sodio o de potasio en la
molcula de 0a)l o 1); empleados%
G% $re+aracin del +ro)lema
+%' #esar un equivalente a +$ mg de 1
+%+ transferir a un matr< de '$$ ml y aforar con agua deioni<ada%
+%3 8omar una alcuota de '%5 ml y colocarla en un matr< de 5$ ml y aforar%
3% ;eer en el flammetro%
#ara leer potasio emplear una longitud de F"$ nm
#ara leer /odio emplear una longitud de 5&" nm
5edir en el flammetro la emisin de cada curva y leer la muestra pro!lema al final
0otaC )3ecar que el tu!o de desagae est lleno, durante toda la operacin%
'*lculos
Ela!orar la curva de cali!racin con los datos de concentracin contra los datos de
emisin o!tenidos%
Interpolar en la curva estndar y reportar en mgS; de 0a y mgS; de 1%
)oncluir so!re la !ase de los resultados o!tenidos%
RICTICA @
ETERMI!A'I(! E E9TRO#A $OR $OLARIMETR2A%
O/7eti,o
El alumno efectuar la determinacin de glucosa an3idra en una solucin inyecta!le
mediante el uso del polarmetro%
INTRODUCCION
Aquellas sustancias que contienen car!onos =uirales, tienen la capacidad de rotar la lu<
polari<ada, a esta propiedad se le conoce como actividad ptica, e2isten sustancias
1e>tro rotatorias y sustancias -evorrotarorias que desvan la lu< 3acia la derec3a EXD o
3acia la i<quierda E.D respectivamente%
;a polarimetra es la tcnica de la medicin del cam!io de direccin de la vi!racin de
la lu< polari<ada cuando esta interact=a con materiales pticamente activos% ;a lu< no
refle6ada se comporta como si consistiera de un gran numero de ondas
electromagnticas vi!rando en todas direcciones alrededor de la direccin de
propagacin% /i se logra separar de la conglomeracin natural solo aquellos rangos
vi!rando en un plano particular se o!tiene entonces la lu< polari<ada%
;a intensidad de la rotacin ptica se e2presa mediante la rotacin especfica , dad por
VW
R
E'$$ SlcD
donde
es la rotacin o!servada en grados
c es la concentracin del soluto en gS '$$ml
l es la longitud del paso de lu< en dm
/i se mide la rotacin de un lquido puro, se calcula la rotacin especfica mediante la
frmula VWR ?ld donde d es la densidad%

A$LI'A'I(!
Esta metodologa es aplica!le a la determinacin de la rotacion especifica de muestras
que contengan centros quirales%
/e requiere de una solucin de glucosa para uso mdico%
A#$E'TO# E :I-IE!E 0 #E-URIA
8odo el material que se emplee de!er estar limpio y seco%
,sar !ata y lentes de seguridad%
MATERIALE# 0 METOO#
#olarmetro
#ipeta graduada de 'ml
#ipetas volumtricas
5atraces volumtricos de 5$ ml
8ermmetro
Esptula
Agitador
/olucin de de2trosa al 5M comercial
(e2trosa estndar
:idr2ido de amonio "0
Agua destilada
ROCEDIMIENTO
8reparacin del stndar
esar e-a(ta.ente .'estras de !$?, 8, ;,? 3 < J$ De Jl'(osa anhidra 3 disol,er (on
aJ'a destilada, trans0erir a .atra(es de ?! .l, adi(ionar !$; .l de 'na
sol'(i*n de a.onia(o al 84, a0ore (on aJ'a destilada 3 .ez(le$
(e6e reposar los matraces preparados a temperatura am!iente durante 3$ minutos%
5ida la rotacin ptica de cada dilucin en un tu!o de + dm%
$re+aracin de la muestra
8ransferir a un matr< volumtrico de '$$ml una muestra que contenga de 5 g de
de2trosa, agregar $%+ ml de 3idr2ido de amoniaco y diluir 3asta la marca con agua
destilada, 3omogeni<ar%
(e6ar reposar por 3$ minutos y determinar la rotacin especfica a +5b) en un tu!o de +
dm%
'*lculos
)onstruya una ta!la con los datos o!tenidos
g de glucosa )oncentracin
gSml

$%5
'%$
'%5
+%5
3%$
pro!lema
Ela!ore una grafica de gSml Z con los resultados que o!tuvo e interpole el valor del
pro!lema para o!tener la concentracin de glucosa en la muestra pro!lema%
'oncluir so)re la )ase de los resultados o)tenidos%
$R"'TI'A E
U#O EL 2!I'E E REFRA''I(! $ARA LA ETERMI!A'I(! E
AL'O:OL%
O)Jetivo
>ue el alumno aprenda el uso del refractmetro a travs de la cuantificacin de etanol
en una !e!ida alco3lica%
I!TROU'IO!
)uando un rayo de lu< pasa o!licuamente de un medio 3acia otro de densidad diferente,
su direccin cam!ia al atravesar la superficie que los separa A esto se llama refraccin%
El ngulo entre el primer medio y la perpendicular de la superficie divisora se llama
ngulo incidencial, mientras que el ngulo correspondiente al segundo medio se
denomina ngulo de refraccin% El ndice de refraccin varia con la temperatura y con la
longitud de lu< as como con la presin cuando se trata de gases% El ndice de refraccin
de una sustancia est !asado en la relacin que e2iste entre la velocidad de la lu< en el
aire y su velocidad en la sustancia que se anali<a%
A$LI'A'I(!
,na aplicacin o!via del ndice de refraccin es identificar lquidos% El ndice de
refraccin es una cantidad importante al esta!lecer la identidad de compuestos
orgnicos puros% ;a me6or manera de reali<ar una comparacin es medir el ndice de
refraccin de un estndar u la muestra pro!lema con el mismo equipo y al mismo
tiempo con lo que se eliminan algunas variaciones% 8am!in se pueden reali<ar anlisis
cuantitativos de soluciones por 9efractometra si se tra!a6a en primer lugar una curva
de cali!racin de n en funcin de la concentracin, posteriormente se mide el ndice de
refraccin de una muestra y se !usca su concentracin a partir de la curvaT este mtodo
es particularmente estima!le para el anlisis de dos lquidos misci!les%
A#$E'TO# E :I-IE!E 0 #E-URIA
8odo el material que se emplee de!er estar limpio y seco%
,sar !ata y lentes de seguridad%
MATERIALE# 0 METOO#
9efractmetro
Equipo de destilacin
5atraces volumtricos de '$$ y '$ ml
#ipetas volumtricas de ', +, 5 y '$ ml
Etanol grado reactivo
Agua destilada
5uestra pro!lema
$RO'EIMIE!TO
#reparacin de curva de concentracin '$, +$, 3$, 4$, 5$ M de etanol en agua
Alcuota de
etanol
M de etanol -olumen final
' '$ '$ ml
+ +$ '$ ml
3 3$ '$ ml
4 4$ '$ ml
5 5$ '$ ml
+ratamiento de la muestra problema$
5edir con e2actitud '$$ ml de la muestra y destilar el alco3ol que contiene reci!iendo
el lquido en una pro!eta descartando las primeras y las =ltimas gotas, medir el destilado
y posteriormente aforar a '$$ml con un matr< volumtrico%
;eer con el refractmetro%
%
'*lculos
Ela!orar la curva de cali!racin con los datos o!tenidos graficando concentracin Z
ndice de refraccin%
Interpolar en la curva el valor del ndice de refraccin de la muestra pro!lema%
9eportar
M de etanol en la muestra%
'oncluir so)re la )ase de los resultados o)tenidos%
$RA'TI'A D
ETERMI!A'I(! EL TAMANO E $ART2'ULA E U!A MUE#TRA E
0O-:URT%
O)Jetivo
>ue el alumno aprenda el funcionamiento del dispersor de ;u< para reali<ar un anlisis
de tama4o de partcula%
INTRODUCCI"N
,n instrumento de dispersin de lu< mide el tama4o de partcula en muestras slidas o
lquidas% El equipo consta de mdulos los cules son acoplados de acuerdo al tipo de
anlisis a reali<ar, en este caso el mdulo con que se cuenta es de micro volumen el cul
permite medir tama4o de partcula en lquidos, en suspensiones, o polvo seco%
;a lu< es una radiacin electromagntica con un rango de frecuencia de
apro2imadamente '$
'+
:< E infrarro6oD a '$
'F
:< EultravioletaD% )uando la lu< se propaga
esta se convierte en una onda transversal Euna onda de lu<D que incide en una partcula
EfotnD% /e espera que esta onda tenga propiedades como frecuencia, longitud,
interferencia etc% U que la partcula tenga propiedades como momento, velocidad,
posicin, etc%
/i una radiacin electromagntica c3oca con una partcula peque4a con respecto a la
longitud de onda de la radiacin, esta sufre una pertur!acin de!ida a que la partcula
esta su6eta al campo elctrico oscilante% /i la partcula se puede polari<ar I, el campo
elctrico de la radiacin induce un dipolo en la partcula% (urante el paso de la onda, el
polo inducido oscila a la misma frecuencia que la radiacin y forma un campo propio
que act=a como una fuente de radiacin% Esta radiacin es de la misma frecuencia que la
original, pero se propaga en todas direcciones produciendo una dispersin% 8odos los
tomos y molculas pueden causar esta dispersin, conocida como ?dispersin
9ayleig3@%
)uando las partculas son grandes, comparadas con la longitud de onda del rayo
incidente, la dispersin se denomina ?dispersin 5ier@, con las mismas frecuencias que
el rayo incidente, pero la distri!ucin angular de la lu< dispersa no es uniforme como en
la dispersin 9ayleig3% Esta propiedad se aplica para la determinacin del tama4o de
partcula% ;a dispersin 5ier es importante en nefelometra y tur!idimetra, ya que estn
!asadas en la medida de la dispersin de la radiacin en partculas suspendidas%
)uando la lu< ilumina un material como la partcula, tiene una constante dielctrica
diferente a la unidad, dependiendo de la longitud de onda de la lu< y las propiedades
pticas de la partcula, esta puede ser a!sor!ida o dispersada o am!os%
En el caso de que la dimensin del 3a< de lu< sea tan largo como la del material, e2iste
una descripcin de ptica geomtrica simple seme6ante a la refle2in y refraccin, las
cuales nos son lo suficientemente largas para descri!ir la conducta de la lu<%
;a energa de la lu< que se a!sor!e, puede ser dispersada a travs de la degradacin
trmica, por e6emploC de la energa radiactiva decadente se puede producir la
fluorescencia o fosforescencia, lo cul depende de la estructura electrnica de la
partcula%
)uando la lu< interact=a con los electrones e2citados del material que se esta irradiando,
la lu< se o!serva es la dispersin%
)uando algunos materiales tienen una fuerte a!sorcin en las regiones de infrarro6o y
ultravioleta los medidores de dispersin de lu< de!en ser acondicionados para funcionar
en el rango de lu< visi!le a longitudes de onda de 35$ a &$$ nm%
;a intensidad de la dispersin de una unidad de volumen que es iluminada por una
unidad de lu<, indica el porcenta6e entre el material del medio circundante esto lo dice la
ley de 9ayleig3, ,na de las propiedades mas importantes de la lu< dispersa es que la
intensidad de la radiacin 9ayleig3 aumenta en proporcin a la cuarta potencia de la
frecuencia del rayo incidente%
(e 3ec3o la longitud de onda depende del poder de dispersin% El primer fenmeno de
dispersin de lu< natural consiste en que el cielo sea a<ul al amanecer y ro6o al al!a o a
la puesta del sol y esto es porque se ve dispersada la lu< del sol durante el da y se ve
transmitida durante el atardecer y el anoc3ecer%
El esplndido color a<ul del mar tam!in se puede atri!uir a la fuerte dispersin de la
longitud de onda de una porcin de la lu< del sol%
'%. 7iltro
+%. #I(/ ensam!lado
3%. ;ente proyector ensam!lado
4%. )elda para medicin de #I(/
5%. )elda de difraccin
"%. ;entes 7ourier
S%. (etectores de ngulos altos
G%.(etectores de ngulos !a6os
&%. (etectores de ngulos medios
'$%. (escarga del 3a< de lu<
''%. 9ayo lser
'+%. Alineacin del lser
'3%.(iodo del lser
'4%. )a!le de fi!ra ptica
A$LI'A'IO!
5edicin del tama4o de partculas de dispersiones acuosas%
A#$E'TO# E :I-IE!E 0 #E-URIA
8odo el material que se emplee de!er estar limpio y seco%
,sar !ata y lentes de seguridad%
MATERIALE# D METODO#
(ispersor de ;u<%
Agua destilada
5uestra pro!lema
#ipeta pasteur
$RO'EIMIE!TO
#reparacin de la muestraC )olocar unas gotas de muestra en + m; de agua destilada y
3omogeni<arla perfectamente%
;eer la muestra mediante las indicaciones del profesor y el procedimiento 7>.#L/H.
I0L#c4'3% $


Empleando los resultados o!tenidos, fa!ricar con ayuda del softOare una grafica de
tama4o de partcula Z volumen%
(iscutir los resultados o!tenidos y concluir%
$RA'TI'A H
MA!EOO E MUE#TRA# $ARA #ER LE2A# E! E#$E'TROFOTOMETR2A
E LUP I!FRARROOA%
O)Jetivos
>ue el estudiante cono<ca las diferentes partes de un Espectrofotmetro de ;u<
Infrarro6a%
>ue el estudiante aprenda a mane6ar una muestra para ser tratada en I9
>u el estudiante compare los resultados o!tenidos entre los mtodos de mane6o de
muestra para I9%
I!TROU''I(!
;a espectroscopia de lu< infrarro6a tiene una gran aplicacin en el anlisis
cualitativo y cuantitativo% /u principal utili<acin 3a sido la identificacin de
compuestos orgnicos, que por lo general presentan espectros comple6os en el infrarro6o
medio con gran n=mero de m2imos y mnimos que resultan =tiles al efectuar
comparaciones% En muc3os casos el espectro de infrarro6o medio proporciona una
3uella =nica con unas caractersticas que se distinguen fcilmente de los modelos de
a!sorcin del resto de compuestosT solo los ismeros pticos a!sor!en e2actamente de
la misma forma%
;a ordenada de la grfica corresponde a una escala lineal de transmitancia y la
a)scisa mide linealmente los nLmeros de onda en unidades de cm
c'
% ;a regin
infrarro6a del espectro electromagntico incluye la radiacin con n=meros de onda entre
los '+ G$$ y los '$ cm
.'
, lo que corresponde a longitudes de onda de $%FG a '$$$ m
'
%
;a ta!la ' identifica las regiones del Espectro de infrarro6o desde el punto de vista de las
aplicaciones y del instrumento a utili<ar la regin del espectro%
+abla 1$ @e)iones del espectro infrarroAo$
9egin Intervalo de longitudes
de ondaED, m
Intervalo de n=meros
de ondaED, cm
.'
Intervalo de
frecuenciasED, :<
)ercano $,FG a +,5 '+ G$$ a 4$$$ 3,G 2 '$
'4
a ',+ 2 '$
'4
5edio +,5 a 5$ 4$$$ a +$$ ',+ 2 '$
'4
a ",$ 2 '$
'+
;e6ano 5$ a '$$$ +$$ a '$ ",$ 2 '$
'+
a 3,$ 2 '$
'3
La m*s
utiliQad
a
GRI a CE; B;;; a CE; ARG x A;
AB
a GR; x A;
AF
;a gran mayora de las aplicaciones analticas del espectro infrarro6o se 3an
restringido al uso de una parte de la regin comprendida entre los B;;; 4 los B;; cm
&A
E de +,5 a +5 mD% /in em!argo en la analtica actual se van encontrando un n=mero
creciente de aplicaciones de la espectroscopia infrarro6a cercana y le6ana%
Adems de su aplicacin como 3erramienta en anlisis cualitativo, las medidas
en el infrarro6o tam!in estn encontrando un uso cada ve< mayor en el anlisis
cuantitativo% En este caso, su elevada selectividad a menudo 3ace posi!le la
cuantificacin de una sustancia en una me<cla comple6a, no siendo necesaria una
separacin previa% El principal campo de aplicacin de este tipo de anlisis se 3alla en la
cuantificacin de contaminantes atmosfricos que provienen de procesos industriales%
'am)ios di+olares durante las vi)raciones 4 las rotaciones% #or lo general, la
radiacin infrarro6a no es suficientemente energtica como para producir las
transiciones electrnicas que se dan cuando se trata de las radiaciones ultravioleta y
visi!le% ;a a!sorcin de radiacin infrarro6a se limita as en gran parte a especies
moleculares para las cuales e2isten peque4as diferencias de energa entre los distintos
estados vi!racionales y rotacionales% #ara a!sor!er radiacin infrarro6a, una molcula
de!e e2perimentar un cam!io neto en el momento dipolar como consecuencia de un
movimiento de vi!racin o de rotacin% /lo en estas circunstancias, el campo elctrico
alternante de la radiacin puede interaccionar con la molcula, y causar as cam!ios en
la amplitud de algunos de sus movimientos% #or e6emplo, la distri!ucin de carga
alrededor de una molcula tal como el cloruro de 3idrgeno no es simtrica, ya que el
cloro posee una mayor densidad electrnica que el 3idrgeno% #or tanto, el cloruro de
3idrgeno posee un momento dipolar significativo, y por ello se dice que es una
molcula polar% El momento dipolar est determinado por la magnitud de la diferencia
de carga y por la distancia entre am!os centros de carga%
(ado que la molcula de cloruro de 3idrgeno vi!ra, se produce una fluctuacin regular
del momento dipolar lo que origina un campo que puede interaccionar con el campo
elctrico asociado a la radiacin% /i la frecuencia de la radiacin iguala e2actamente a la
frecuencia de vi!racin natural de la molcula, ocurre una transferencia neta de energa
que da lugar a un cam!io en la amplitud de la vi!racin molecularT como consecuencia
se a!sor!e la radiacin% (e manera anloga, la rotacin de molculas asimtricas
alrededor de sus centros de masa produce una fluctuacin dipolar peridica que puede
interaccionar con la radiacin% )uando se trata de especies 3omonucleares como el L
+,
0
+
o )l
+
, el momento dipolar no se altera durante la vi!racin o la rotacin y, este tipo
de compuestos no a!sor!en en el infrarro6o%
Tcnicas +ara la mani+ulacin de las muestras%
A&% Muestra de ,ases%
El espectro de un lquido de !a6o punto de e!ullicin o de un gas se puede o!tener
permitiendo a la muestra que se e2panda en una cu!eta a la que se le 3a 3ec3o el vaco%
E2iste una variedad de cu!etas para este o!6eto, con longitudes de camino ptico que
varan desde unos pocos centmetros a varios metros% ;as mayores longitudes de camino
ptico se o!tienen en cu!etas compactas que poseen superficies reflectantes interna, de
modo que el 3a< pasa numerosas veces por la muestra antes de salir de la cu!eta%
G&% isolventes%
0o e2iste un solo disolvente que sea transparente en toda la regin del infrarro6o medio%
El agua y los alco3oles se utili<an rara ve<, no slo porque a!sor!en intensamente, sino
porque tam!in atacan a los 3aluros de metal alcalino, que son los materiales ms
comunes que se utili<an en las ventanas de las cu!etas% #or estas ra<ones, es necesario
secar los disolventes indicados en la figura anterior antes de ser utili<ados%
(e!ido a la tendencia de los disolventes a a!sor!er, las cu!etas para el infrarro6o suelen
ser muc3o ms estrec3as E$,' a ' mmD que las empleadas en las regiones ultravioletas y
visi!le% ;os caminos pticos en el infrarro6o requieren por lo com=n, concentraciones de
muestra de $,' a un '$ M% )on frecuencia, las celdas son desmonta!les, con
espaciadores de 8efln que permiten variar la longitud del camino ptico% ;as celdas de
camino ptico fi6o se pueden llenar o vaciar con una 6eringa 3ipodrmica%
;as ventanas de cloruro de sodio son las ms utili<adas y aun teniendo cuidado, stas
finalmente se velan de!ido a la a!sorcin de 3umedad% /i se pulen con un polvo
amortiguador vuelven a su condicin original%
F&% L.uidos +uros%
)uando la cantidad de muestra es peque4a o cuando no se dispone del disolvente
apropiado, es 3a!itual o!tener los espectros del lquido puro% En este caso, slo una
pelcula muy delgada tiene un camino ptico suficientemente corto como para producir
espectros satisfactorios% #or lo com=n, una gota del lquido puro se comprime entre dos
placas de sal de roca para o!tener una placa con un grosor de $%$' mm o menos% ;as dos
placas se mantienen unidas por capilaridad y se colocan entonces en la trayectoria del
3a<% /in duda, con esta tcnica no se o!tienen datos de transmitancia muy reproduci!les,
pero resulta satisfactoria para muc3as investigaciones cualitativas%
B&% #lidos%
;os espectros de slidos que no pueden disolverse en un disolvente transparente al
infrarro6o, se o!tienen con frecuencia dispersando el analito en una matri< lquida o
slida, y anali<ando la me<cla resultante% Estas tcnicas requieren que el tama4o de la
partcula del slido suspendido sea menor que la longitud de onda del 3a< infrarro6oT si
no se cumple esta condicin, se pierde una parte de la radiacin por dispersin%
,no de los mtodos utili<ados para preparar la me<cla a anali<ar consiste en triturar de
+ a 5 mg de una muestra finamente pulveri<ada Etama4o de partcula < + mD en
presencia de una o dos gotas de un aceite pesado de un 3idrocar!uro E0u6olD% /i es
pro!a!le que interfieran las !andas del 3idrocar!uro, se puede utili<ar 7luorolu!e, un
polmero 3alogenado% En cualquier caso, la me<cla resultante se e2amina luego como
una delgada pelcula entre planas de sal%
En una segunda tcnica, se parte de un miligramo o menos de una muestra finamente
triturada que se me<cla ntimamente con unos '$$ mg de polvo de !romuro de potasio
desecado% ;a me<cla se puede efectuar con un mortero, y me6or a=n en un peque4o
molino de !olas% ;a me<cla se comprime luego en un troquel especial a una presin de
F$$ a '$$$ NgScm
+
, para o!tener un disco transparente% /e o!tienen me6ores resultados
si se forma el disco en el vaco para eliminar l aire ocluido% A continuacin, el disco se
coloca en el 3a< del instrumento para su anlisis espectroscpico% ;os espectros
resultantes a menudo presentan !andas a 345 y '"4$ cm
.'
E+,& y ",' mD de!idas a la
3umedad a!sor!ida%
I&% Re6lectancia di6usa%
;a espectroscopia de reflectancia difusa en el infrarro6o se 3a convertido en una tcnica
importante para la determinacin rutinaria de los constituyentes en slidos finamente
divididos% (e 3ec3o es ampliamente utili<ada en la determinacin de protenas,
3umedad, almidn, aceites, lpidos y celulosa en productos agrcolas tales como granos
y aceites de semillas, etc%
En la espectroscopa de reflectancia en el infrarro6o cercano, la muestra finamente
pulveri<ada se irradia con una o ms !andas de radiacin de longitud de onda
comprendida entre ' y +,5 m, o '$ $$$ y 4$$$cm
.'
% /e produce una reflectancia
difusa, en la que la radiacin penetra a travs de la superficie de la capa de partculas,
e2cita los modos de vi!racin de las molculas del analito, y luego se dispersa en todas
direcciones% (e este modo, se produce un espectro de reflectancia que depende de la
composicin de la muestra% En el grfico se escri!e en el e6e de la ordenada el logaritmo
de la inversa de la reflectancia 9, donde 9 es el cociente entre la intensidad de radiacin
refle6ada por la muestra y la reflectancia de un patrn, como puede ser el sulfato de
!ario u 2ido de magnesio finamente pulveri<ados% #ara las mediciones de la
reflectancia, las muestras se pulveri<an 3asta un tama4o de partcula controlado y
3omogneo y se mide su reflectancia a dos o ms longitudes de onda% #ara esta!lecer
las longitudes de onda ptimas se 3a de emplear un tiempo y un esfuer<o considera!les%
;a gran venta6a de los mtodos de reflectancia en el infrarro6o cercano es su rapide< y
su simplicidad en la preparacin de la muestra%
A+licaciones cualitativas de la a)sorcin en el in6rarroJo medio%
;a identificacin de un compuesto orgnico a partir de los espectros de infrarro6o es un
proceso en dos etapas% ;a primera etapa implica la determinacin de los grupos
funcionales que parece ms pro!a!le que estn presentes, e2aminando la regin de
frecuencias de grupo, que a!arca la radiacin comprendida desde los 3"$$ cm
.'
a los
'+$$ cm
.'
apro2imadamente% ;a segunda etapa consiste en una comparacin detallada
del espectro desconocido con los espectros de compuestos puros que contienen los
grupos funcionales encontrados en la primera etapa% En este caso, la regin de la ?3uella
digital@, de '+$$ cm
.'
a "$$cm
.'
, es muy =til, de!ido a que peque4as diferencias en la
estructura y la constitucin de una molcula provocan cam!ios significativos en el
aspecto y la distri!ucin de los picos en esta regin% En consecuencia, una gran
coincidencia de la regin de d3uella digitald Eas como en otrasD entre los espectros de
dos compuestos constituye casi una evidencia de su identidad%
;a frecuencia apro2imada E o n=mero de ondaD en la que un grupo funcional, como
)RL, )R), ):, )), o L:, a!sor!e radiacin infrarro6a, se puede encontrar en
ta!las especiali<adas%
(e!ido a las interacciones con otras vi!raciones asociadas con uno o am!os tomos que
forman el grupo, estas frecuencias denominadas 6recuencias de ,ru+o rara ve<
permanecen invaria!les% #or otra parte, los efectos de las interacciones suelen ser
peque4osT como consecuencia de ello, se puede asignar un intervalo de frecuencias
dentro del cual es muy pro!a!le encontrar el pico de a!sorcin para un grupo funcional
determinado%
-a tabla 2 muestra de forma abreviada las frecuencias de )rupo para al)unos de los
)rupos or)nicos funcionales ms comunes$
Enlace 8ipo de compuesto Intervalo de
frecuencias, cm
.'
Intensidad
): Alcanos +G5$ c +&F$
'34$ c '4F$
7uerte
7uerte
): Alqueno 3$'$ c 3$&5
"F5 c &&5
5edia
7uerte
): Alquinos E)):D 33$$ 7uerte
): Anillos aromticos 3$'$ c 3'$$
"&$ c &$$
5edia
7uerte
L: Alco3oles, fenoles
Alco3oles con puente
de 3idrgeno, fenoles%
`cidos car!o2licos
`cidos )ar!o2licos
con puente de
3idrgeno
35&$ c 3"5$
3+$$ c 3"$$
35$$ c 3"5$
+5$$ c +F$$
-aria!le
-aria!le, a veces
anc3a
5edia
Anc3a
0: Aminas, amidas 33$$ c 35$$ 5edia
)) Alquenos '"'$ c '"G$ -aria!le
)) Anillos aromticos '5$$ c '"$$ -aria!le
)) Alquinos +'$$ c ++"$ -aria!le
)0 Aminas, amidas ''G$ c '3"$ 7uerte
)0 0itrilos ++'$ c ++G$ 7uerte
)L Alco3oles, teres,
cidos car!o2licos,
steres
'$5$ c '3$$ 7uerte
)L Alde3dos, cetonas,
cidos car!o2licos,
steres
'"&$ c 'F"$ 7uerte
0L
+
0itrocompuestos '5$$ c '5F$
'3$$ c '3F$
7uerte
7uerte
(e!e o!servarse que aunque la mayora de las frecuencias de grupo estn en
intervalo de 3"$$ cm
.'
a '+5$ cm
.'
, unas pocas veces se encuentran en la regin de la
?3uella digital@% Estas incluyen la vi!racin de tensin ).L.) a unos '+$$ cm
.'
y la
vi!racin de tensin ).)l en F$$ a G$$ cm
.'
%
En la regin de la ?3uella digital@ entre '+$$ y F$$ cm
.'
peque4as diferencias en
la estructura y la constitucin de las molculas originan cam!ios importantes en la
distri!ucin de los picos de a!sorcin% )omo consecuencia, la estrec3a correspondencia
entre dos espectros en esta regin E y en otras D constituye una evidencia de la identidad
de los compuestos que producen los espectros% ;a mayora de los enlaces simples
originan !andas de a!sorcin a estas frecuencias y como sus energas son
apro2imadamente iguales, se produce una fuerte interaccin entre los enlaces vecinos%
;as !andas de a!sorcin son pues el resultado com!inado de estas distintas
interacciones y dependen de la estructura !sica general de la molcula%
) )
:
(e!ido a su comple6idad, raramente es posi!le la interpretacin e2acta de los
espectros en esta reginT por otra parte, esta comple6idad es la que conduce a la
singularidad y por consiguiente a la utilidad de la regin para fines de identificacin%
A#$E'TO# E :I-IE!E 0 #E-URIA
8odo el material de!e estar perfectamente seco y limpio al igual que las manos de quien
manipule las muestras%
MATERIALE# 0 METOO#
'%.Espectrofotmetro de ;u< Infrarro6a
0icolet
+%.Esptula
3%. 5ortero de gata con pistilo de gata
4%. -entanas par I9 de 0a)l
5%. #rensa
"%. (ado para pastillas de I9
F%. /oporte para pastillas
9EA)8I-L/C
;as sustancias que a continuacin se
mencionan de!en ser grado espectro, a
menos que se indique lo contrario%
1r
)loroformo
#rogesterona
Argn :,#
$RO'EIMIE!TO
a6 astilla
'% )oloque una peque4a cantidad de 1r E+$mg apro2%D en el mortero de gata y
mulalo un poco%
+% Arme el dado para 3acer pastillas como le indique el profesor EaD y coloque el 1r
dentro del dado%
3% Ela!ore una pastilla con ayuda de la prensa y retrela con las pin<as, no la toque con
las manos%
4% )oloque la pastilla en el soporte para pastillas%
5% ;ala como !acNground en el equipo de 78.I9%
"% 9etire el soporte y la pastilla del equipo, retire la pastilla del soporte y regrsela al
mortero completa, adicione la punta de la esptula de progesterona y muela todo
6unto un poco%
F% Ela!ore nuevamente una pastilla con esta me<cla%
G% )olquela en el soporte para pastillas y lala como sample en el equipo 78.I9%
&% Imprima el espectro resultante%
/6 L1'ida
'$% )oloque en un vial una peque4a cantidad de progesterona y adicione lo menos
posi!le de cloroformo para disolverla%
''% )oloque dentro de la celda para lquidos de 0a)l, cloroformo% 8ape perfectamente y
lea como !acNground en el equipo de 78.I9
'+% ;impie la celda con flu6o de argn%
'3% Adicione la progesterona disuelta en cloroformo a la celda de lquidos%
'4% )olquela en el porta celdas y lala como sample en el equipo de 78.I9%
'5% Imprima el espectro resultante
(6 Fil. o )el('la
'"% )oloque una gota de cloroformo entre dos ventanas de 0a)l%
'F% )oloque las ventanas en el porta ventanas y lea como !acNground%
'G% 9etire las ventanas y coloque un poco de progesterona disuelta en cloroformo entre
dos celdas de 0a)l%
'&% ;ea como sample en el equipo de 78.I9%
+$% Imprima el espectro resultante%
@8,@+
'% Interprete cada uno de los espectros !asndose en las ta!las de la introduccin%
+% )ompare los espectros resultantes
3% 9eporte lo que o!serva en cada uno de los espectros que imprimi%
$RA'TI'A A;
IE!TIFI'A'I(! E MATERIALE# E EM$AQUE# E ALIME!TO# $OR
IR
O)Jetivo%
>ue el estudiante aprenda a 3acer un anlisis cualitativo de pelculas plsticas
empleadas como empaques de alimentos%
I!TROU''I(!
#ara aprovec3ar al m2imo los interferogramas, sea cual sea el campo en el cual se
tra!a6a, se recomienda anali<arlos, de cualquiera de las siguientes formasC
'^ A #A98I9 (E ;A/ -I9A)IL0E/ 7,0(A5E08A;E/, para reali<ar este tipo
de interpretacin se necesita la suficiente e2periencia, ya que la asignacin y
clasificacin de las !andas o picos, puede resultar complicada por la presencia de so!re
tonos y !andas de com!inacin%
+^ ;A I08E9#9E8A)IL0 #L9 )L5#A9A)IL0 es una de las ms usuales en sta
tcnica lo que se 3ace es cote6ar el interferograma de muestra con el interferograma de
un estndar, de otras muestras que se tengan como referencia%
Es importante mencionar algunos de los campos de aplicacin de esta tcnica y
la utilidad de los mismos%
A(:E/I-L/% /e utili<a para la identificacin de los componentes individuales
de la formulacin de stosT como puede ser un polmero del tipo de 0eopreno, resinas
fenlicas, antio2idantes E0.7E0I; .. 0A78I; A5I0AD, plastificantes,
esta!ili<adores, etc%
IL>,I5I)A% Anlisis deC
#iedras renales, piedras !iliares, piedras de la glndula prstata, identificacin de
esteroides%
)L/5E8I)L/% Anlisis deC
;pi< la!ial, aceites esenciales, talcos, fragancias, antitranspirantes%
(9LHA/% Identificacin de narcticos y drogas peligrosas, deteccin de
compuestos t2icos en plantas y animales%
)L08A5I0A)IL0% (eterminacin de aceite en compuestos orgnicos y en agua,
identificacin de gases en el aire Ecali!racin cuantitativa de !a6os niveles en ppm de
gases en aireD, anlisis de muestras de aire de polvo de cuar<o y as!estos, identificacin
de pesticidas en suelos y aguas de riego%
A)EI8E/ E/E0)IA;E/ U #9L(,)8L/ A;I5E08I)IL/% Identificacin de
aceites esenciales, monitoreo de la calidad de productos alimenticios, deteccin de
insecticidas en plantas alimenticias%
HEL>,I5I)A% )aracteri<acin de minerales Eespecialmente car!onatosD composicin
qumica, medida del espesor de pelculas%
#E89L;EL U ;,9I)A08E/% Anlisis deC
Aceite, gasolina, lu!ricantes, grasas, determinacin de aditivos, calidad de
nuevos aceites%
#L;I5E9L/% Identificacin de polmeros, aditivos y plastificantes relacin de
5eS#:
n
resinas, siliconas, determinacin de isocianatos en poliuretanos, dioctilftalatos
en resinas de #,H, orgnicos comple6os como el :ule, 9esinas, Estreo ismeros, en
#olmeros etc%
7A95A)E,8I)L/% (eterminacin de compuestos farmacuticos comunes,
determinacin de estructuras y componentes sintticos, anlisis de ungaentos y cremas%
8EJ8I;E/% Identificacin de fi!ras, aditivos te2tiles, fi!ras microscpicas,
lu!ricantes en fi!ra, composicin del porcenta6e de polister y lana, identificacin de
retardadores de flama%
A#$E'TO# E :I-IE!E 0 #E-URIA
8odo el material de!e estar perfectamente seco y limpio al igual que las manos de quien
manipule las muestras%
MATERIALE# 0 METOO#
Espectrofotmetro de ;u< Infrarro6a 0icolet
/oporte para pastillas
#elculas de polmero empleadas como empaques de alimentos%
$RO'EIMIE!TO
'% )orra un !acNground con solo aire en el equipo%
+% 9ecorte un tro<o de + cm
+
de pelcula plstica y colquela en un soporte%
3% Instale el soporte en el equipo y lalo como sample%
4% Imprima el espectro o!tenido%
5% -aya a la pantalla de !=squeda !i!liogrfica del equipo Esearc3D y !usque en la
!i!lioteca de polmeros por comparacin, a que material se parece el empaque que
se ley%
"% 9epita la misma operacin con cada uno de los empaques que o!tenga como
pro!lema%
@8,@+
'% Analice los espectros de infrarro6o que o!tuvo por medio de las ta!las que se 3an
proporcionado%
+% )ompare su anlisis con las !=squedas reali<adas por el equipo%
3% )oncluya con los resultados que o!tuvo%
RACTICA 88
DETERMINACION DE ETANOL EN BEBIDA# ALCOKOLICA#
OR CROMATO%RAFIA DE %A#E#
O)Jetivo1
>ue el estudiante aprenda a 3acer un anlisis cualitativo y cuantitativo de me<clas de
sustancias orgnicas%
'% >ue el estudiante cono<ca las diferentes partes de un )romatgrafo de Hases%
+% >ue el estudiante aprenda a 3acer un anlisis cualitativo de una me<cla de
sustancias orgnicas%
I!TROU''I(!
;a cromatografa es una tcnica en donde se lleva a ca!o la separacin de
compuestos con el propsito de identificar, cuantificar o purificar cada uno de los
componentes de una me<cla de solutos, !asndose en las velocidades con las que se
mueve cada soluto a travs de un medio poroso arrastrado por un solvente, una me<cla
de solventes o por gas%
E2isten diferentes divisiones en la prctica para la cromatografa como la de
adsorcin, reparto, intercam!io inico, e2clusin molecular, y por afinidad% En esta
cromatografa un soluto gaseoso Evapor de un lquido voltilD es transportado por una
fase mvil gaseosa%
(e acuerdo al tipo de fases estacionaria se clasifica en dosC
;a fase estacionara suele ser un l*=uido no voltil que recu!re el interior de la
columna o un soporte slido de )rano fino% Esta forma ms com=n de cromatografa de
gases se llama (ro.atoJra0a de re)arto o de )arti(i*n Jas L l1'ido%
En ocasiones se utili<an como fase estacionaria partculas slidas so!re las que
el soluto puede adsor!erse%
En este caso la tcnica se denomina (ro.atoJra0a de adsor(i*n Jas L s*lido%
FUNDAMENTO TE"RICO
;a cromatografa de gases se utili<a para separar, identificar y cuantificar
cualquier material que contenga una presin de vapor aprecia!le E' a '$$$ mm :gD a
una temperatura de operacin de la columna Emedio de separacinD desde cF$b ) a
4$$b )%
An*lisis cualitativo
/e !asa en la diferencia de velocidades de migracin de los componentes de una
me<cla entre dos fasesT una estacionaria y una mvil EgasD, de tal manera que cada
componente es selectivamente retenido por la fase estacionaria y eluye a un cierto
tiempo Etiempo de retencinD, dependiendo del programa empleado para su anlisis%
An*lisis cuantitativo
El auge creciente de la cromatografa durante las =ltimas cuatro dcadas se
de!e en parte a su rapide<, simplicidad, relativamente !a6o costo, y a su gran
aplica!ilidad como 3erramienta de separacin% /u uso se 3a e2tendido tanto porque
puede tam!in proporcionar informacin cuantitativa acerca de las especies
separadas% #or lo tanto de!emos tener en cuenta los aspectos cuantitativos aplicados
a todos los tipos de cromatografa%
;a cromatografa en columna cuantitativa se !asa en la comparacin de la altura,
o del rea, del pico del analito con la de uno o ms estndares% En cromatografa plana,
el rea cu!ierta por las especies separadas sirve como parmetro analtico% /i se
controlan las condiciones adecuadamente, esos parmetros varan linealmente con la
concentracin%
A#$E'TO# E :I-IE!E 0 #E-URIA
' 8odo el material de vidrio de!e estar limpio
+ ,sar /iempre el material adecuado para cada fin por e6emplo, pipetear con una
propipeta, no con la !oca%
3 ;os residuos que se generen de la prctica de!ern deponerse en el envase
destinado para ello%
MATERIALE# 0 M8TOO#%
Agua (estilada
#ro!lema E!e!ida alco3licaD
Acetona 9%A%
5atraces volumtricos de '$ml
#ipetas volumtricas de 5 y ' ml
)romatgrafo de Hases -arian 33$$
)olumna mega!oro de polaridad media%
Integrador -arian 4+&$
#apel para integrador
$RO'EIMIE!TO%
#reparar una curva de cali!racin de Etanol con las concentraciones al '$, +$, 3$, 4$M
de Etanol en agua agregando a cada matra< una cantidad de acetona que ser el std
interno Epreparar '$ml de cada stdT agregar ' ml de acetona para cada stdD%
8omar 5ml de muestra y colocarla en un matr< volumtrico de '$ml en agregar ' ml
de acetona y aforar con agua destilada%
;eer las muestras en el )romatgrafo de Hases, a6ustando la sensi!ilidad y rango%
)olumnaC
#rograma de columnaC 4$b) S5 min% a '5$b)Smin, '$bSmin%
8emperatura del inyectorC +$$b)
8emperatura del detectorC +5$b)
7lu6o de gas acarreadorC 5mlSmin%
;os datos o!tenidos para la curva de cali!racin graficarlos concentracin en M contra
el rea%
;eer la muestra pro!lema y el rea o!tenida interpolarla en la grfica ela!orada para
conocer su concentracin%
9eali<ar las operaciones matemticas correspondientes al estndar interno%
9eportar la cantidad de Etanol presente en la muestra%
0otaC /i la !e!ida escogida es edulcorada 3acerla pasar previamente por una cama de
car!n para retener los a<ucares y colorantes que pudiese contener%
RICTICA =
DETERMINACI"N DE ACIDO ACETIL #ALICHLICO OR KLC
O)Jetivo%
(emostrar cuantitativamente el contenido de cafena y cido acetilsaliclico en un
analgsico mediante cromatografa lquida de alta eficiencia% (emostrar las venta6as de
la tcnica para control de calidad%
INTRODUCCI"N
;a cromatografa de lquidos de alta resolucin E:#;)D, fue introducida como tcnica
analtica en los a4os "$% ;a cromatografa es un mtodo de anlisis inmediato que
permite la separacin de uno o varios componentes de una me<cla para lograr su
identificacin o cuantificacin utili<ando las diferencias entre sus constantes de
equili!rio, con la participacin de la 6ase mvil en la que los componentes de la me<cla
son solu!les y la 6ase estacionaria o fi6a que va a e6ercer so!re ellos un efecto
retardador% A este sistema que permite efectuar la separacin se denomina sistema de
fases%
(espus de la inyeccin, la me<cla disuelta en la fase mvil es transportada a travs de
la columna y las molculas entran en contacto con la fase estacionaria provocando los
fenmenos de intercam!io que darn origen a la separacin%
El )ro(eso de se)ara(i*n
;a separacin de sustancias presentes en una me<cla depende del 3ec3o de que un
compuesto sea retenido mas tiempo en la fase estacionaria que otro% En la superficie de
la fase estacionaria, se e6ercen fuer<as de atraccin que retienen o adsor!en durante un
corto instante los compuestos a separar%
(espus de un cierto tiempo, dic3os compuestos regresan a la fase mvil EeluyenteD y
son transportados a otro sitio de la columna, volviendo a iniciarse el proceso de
separacin un repetido n=mero de veces%
;a retencin de un compuesto depende muc3o del eluyente% As una sustancia puede ser
ms o menos retenida seg=n la fase mvil utili<ada%
El tiempo que tarda una sustancia desde que es inyectada en l aparato 3asta que sale de
la columna se denomina tiem+o de retencin EtrD%
;a retencin de una sustancia depende tanto de la naturale<a de la fase estacionaria
como de la fase mvil con que se tra!a6e%
;a separacin de una me<cla en sus diferentes componentes se de!e principalmente a la
estructura porosa del soporte en la fase estacionaria% ;a venta6a de este tipo de
estructuras reside en la enorme rea superficial que se genera%
;a fase mvil fluye a travs de las partculas del soporte quedando retenidas en los
poros% (e esta manera, la muestra en estudio pasa a travs de toda la superficie de la
fase estacionaria y sus componentes son separados seg=n su tiempo de retencin%
A#ECTO# DE KI%IENE D #E%URIDAD
'% 8odo el material de vidrio de!e estar limpio
+% ,sar /iempre el material adecuado para cada fin por e6emplo, pipetear con una
propipeta, no con la !oca%
3% ;os residuos que se generen de la prctica de!ern deponerse en el envase
destinado para ello%
MATERIALE# 0 METOO#
- )olumna L(/ ELctadecilsilanoD de '5$ mm de largo por 4%5 mm de dimetro
interno, partculas de 5_m%
- )romatgrafo de lquidos de alta eficiencia con detector ,- E+54 nmD
- 5icro6eringa de '$ _l
- )entrfuga
- 8u!os para centrfuga
- 5ortero con pistilo%
- 7ase mvilC metanol c agua Econtenido 'M de cido acticoD 45C55 vSv
- /olucin de cafena '%$ mgSml Eusando la fase mvil como disolventeD
- /olucin de cido acetilsaliclico '$%$ mgSml Efase mvil como disolventeD
- )afiaspirina o producto similar%
- 5etanol%
$RO'EIMIE!TO
/e fi6a el flu6o de la columna en ' mlSmin
1$B 1eterminacin del orden de elusin9
Inyecte '$ _l de cada uno de los estndares por separado%
2$B Calibracin de la deteccin
#repare varias me<clas de cafena y de aspirina a partir de las soluciones
anteriores e inyecte '$ _l de cada me<cla por triplicado% )alcular el rea de los picos
o!tenidos y tra<ar la curva de cali!racin de cada componente%
3$B Cuantificacin del problema
aD #reparacin de la muestraC
5uela una ta!leta de )afiaspirina y me<cle el polvo con +5 ml de metanol,
centrifugue y afore a 5$ ml
!D Anlisis
Inyecte por triplicado '$ _l de la solucin anterior%
cD Efecto de la longitud de ondaC
9epita la inyeccin de '$ _l a otras dos longitudes de onda diferentes E por e6emplo
+45 y +"5D% Esta!le<ca sus conclusiones%
'"L'ULO
El clculo se reali<ar por medio del /oftOare, tomando en cuenta las
concentraciones de las soluciones de referencia y muestra, as como los tiempos de
retencin%
A partir del )romatograma que presente los me6ores resultados, calcular el n=mero de
platos tericos con la siguiente ecuacinC
3 C 16
,
_

D
tr

+
R 5%54
,
_

tr
+
tr R tiempo de retencin del pico%
P R longitud del pico en la !ase definido como la distancia entre los puntos de
interseccin de las tangentes de infle2in con la lnea !ase%
R ;ongitud o anc3o del pico a media altura
El alumno reportar la concentracin final de las soluciones inyectadas, contrastadas a
la curva de cali!racin%
El alumno entregar ane2ado a su reporte una copia de la informacin proporcionada
por el equipo con respecto a las soluciones que inyect%
$RA'TI'A AF
'OM$ARA'IO! E APU'AR 0 A#$ARTAME $OR
'ALORIMETRIA IFERE!'IAL E BARRIO =#'>
O)Jetivo%
>ue el estudiante aprenda a 3acer un anlisis trmico de compuestos de inters, cono<ca
las diferentes partes de un )alormetro (iferencial de arrido, aprenda interpretar un
termograma y compare los resultados o!tenidos entre los + termogramas y los discuta%
I!TROU''I(!
El procesado de los a<=cares amorfos no cristalinos es la !ase de la tecnologa
utili<ada en la produccin de muc3os alimentos, por e6emplo el empleo de la lactosa
amorfa en los productos lcteos en polvo% E2isten procesos industriales de fa!ricacin
de productos con a<ucares en su composicin en los que se persigue la formacin de
estructuras amorfas, por e6emplo la concentracin de disoluciones a altas temperaturas y
el posterior enfriamiento rpido, la liofili<acin, el enfriamiento rpido de diluciones o
la fusin de cristales y su enfriamiento rpido% El criterio seguido para la esta!ilidad de
los productos amorfos es almacenarlos a temperaturas por de!a6o de la 8
g
% En este caso,
el principal inters radica pues en el estudio de transicin vtrea%
El estudio de compuestos orgnicos, inorgnicos y matrices comple6as como los
alimentos y compositos, se 3a reali<ado en los =ltimos a4os por medio de la calorimetra
diferencial de !arrido, ya que esta tcnica resulta de gran utilidad al ser empleada para
monitorear las condiciones de pure<a, esta!ilidad, transicin vtrea, 8g de polmeros,
capacidad calorfica, etc%%
;a tcnica de la )alorimetra (iferencial de arrido me6or conocida por sus
siglas en ingls (/) E(iferential /canning )alorimetryD, consiste en anali<ar los
cam!ios de fase, estudiando los cam!ios o!servados, por la medida del flu6o calorfico
dentro o fuera de la muestra, Erelativo a un material de referenciaD como una funcin de
la temperatura durante el propio proceso%
#or e6emplo, el punto de fusin es un proceso endotrmico, durante el cual la
muestra toma en red cantidades de calor Edeterminadas por el calor de fusin molar de
la muestraD, y se determina como un pico en la curva (/)% ;a posicin del pico en el
e6e de temperatura, est determinada por el punto de fusin y la forma del pico est
determinado por la pure<a de la muestra Eentre otros parmetrosD%
En (/) la muestra y la referencia se mantienen a la misma temperatura E8R 8
s
.8
r
R $D a travs de un programa controlador de la temperatura, cualquier diferencia de
energa en la fuente de la muestra y la referencia ser gra!ada en el programa de
temperatura%
7,0)IL0A5IE08L%
Antes de reali<ar medida alguna de!e de cali!rarse el calormetro para o!tener
en unidades de mcal la constante de cali!racin y la escala de caloras de!e
determinarse con e2actitud%
El rango de las temperaturas de operacin del (/).F #erNin Elmer es de
."G^) a 5$$^)%
8E)0I)A/ (E 5,E/89EL%
/o!re un crisol limpio de Al
3
se coloca la muestra, se tapa y se sella, el aspecto
cualitativo del termograma se ver afectado por la disposicin de la muestra aunque el
rea del pico no variar% #ara o!tener picos estrec3os y finos de!e asegurarse el
contacto total de la muestra con la superficie del crisol%
E2isten crisoles que son capaces de soportar 3asta + a 3 atm% dependiendo de su
forma y de la forma en que son prensados% /i la muestra se o2idara en el intervalo del
tiempo de tra!a6o de!en usarse este tipo de crisoles mencionados y encapsulados en
una atmsfera inerte% /e 3a o!servado tam!in una clula pero su elevada masa da lugar
a una menor precisin en los datos de entalpia o!tenidos%
A#$E'TO# E :I-IE!E 0 #E-URIA
8ener muc3o cuidado al introducir las muestras a la celda del equipo, ya que no
de!en presionarse, pues se corre el riesgo de da4ar los filamentos que se encuentran
de!a6o de estas%
Asegurarse de que los pans que contengan las muestras estn !ien sellados, para
evitar fugas y derrames que pueden da4ar el equipo%
8odo el material de!e estar limpio, los crisoles o pans de aluminio se lavan con
acetona y se secan en la estufa, no se tocan con las manos%
,sar siempre el material adecuado para cada fin por e6emplo, E usar pin<as, para
transportar los pans, no con la manoD
;os residuos que se generen de la prctica de!ern deponerse en el envase destinado
para ello%
MATERIALE# D MFTODO#$
'% A<=car
+% Aspartame
3% Has 0itrgeno%
4% #aneles de aluminio para lquidos%
5% Esptula
"% #in<as%
F% )alormetro (iferencial de arrido (/)F marca #erNin Elmer
G% Intra.cooler II marca #erNin Elmer%
&% alan<a analtica 5ettler
'$% #rensa para celdas de lquidos%
ROCEDIMIENTO$
'% #esar +%5 mg XS. $%+mg de la muestra de a<=car y aspartame por separado en
paneles limpios de aluminio previamente tarado
+% /ellarlo 3ermticamente con la prensa para lquidos
3% )olocar el panel que contiene el a<=car en la celda de (/) con una referencia que
consiste en un panel vaco, e2actamente igual al de la muestra%
4% Equili!rar la temperatura de la muestra e iniciar el calentamiento a partir de la
temperatura am!iente, a una velocidad de +$b)Smin 3asta +4$b)%
5% 9etirar el panel usado y colocar el que contiene la muestra de aspartame%
"% Anali<ar los resultados%
8emperatura inicial F;S'
8emperatura final GB;S'
-elocidad de !arrido G; S'Kmin
#eso de la muestra G%I m, Ecolocar el peso e2actoD
)ondiciones de encapsulamiento en +aneles +ara l.uidos
Atmsfera de tra!a6o !itr,eno
F% )omparar los termogramas que se o!tuvieron y discutirlos%
G% Lpcional% Ingresar una muestra de un polvo para preparar agua y tratar de
identificar si lo que contiene es a<=car o aspartame o !ien otro edulcorante%