Preparacin de medios de cultivo. Bacteriologa II.

OBJETIVO El objetivo de la presente prctica es aprender a preparar correctamente los principales de medios de cultivo que se utilizan en el laboratorio de Bacteriologa, como instrumentes de suma importancia en la dignosticacin de bacterias patgenas dentro de los individuos. Asimismo, conocer los di erentes tipos de cultivo, su calci icacin ! su importancia en la diagnosticacin. INTRODUCCIN "n m#todo undamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la super icie de un medio slido de agar. $os medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde az%cares simples &asta sustancias complejas como la sangre o el e'tracto de caldo de carne. Para aislar o puri icar una especie bacteriana a partir de una muestra ormada por muc&os tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las c#lulas que se multiplican no cambian de localizacin( tras muc&os ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de c#lulas similares a la original. )i esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria. *uc&as especies bacterianas son tan parecidas mor olgicamente que es imposible di erenciarlas slo con el uso del microscopio( en este caso, para identi icar cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos medios contienen un producto que in&ibe el crecimiento de la ma!ora de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est presente. +tras veces el medio de cultivo contiene determinados az%cares especiales que slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se a,aden indicadores de p- que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es ermentado ! se generan catabolitos cidos. )i las bacterias son capaces de producir ermentacin, generan gases que pueden ser apreciados

cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. .on otros medios de cultivo se identi ica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes/ as, algunas bacterias con enzimas &emolticas 0capaces de romper los glbulos rojos1 producen &emlisis ! cambios apreciables macroscpicamente en las placas de agar2sangre. $os di erentes medios ! t#cnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiologa de un &ospital, pues sirven bacterias. $os requerimientos necesarios para un cultivo de bacterias son/ *edio de carbono. Presencia o ausencia de o'igeno. Atms era adecuada. Agar2agar. Para un cultivo adecuado de bacterias ! microorganismos, se utiliza el agar, un gel
coloidal formado por hidratos de carbono, de extendido uso comercial, y que proviene de las paredes celulares de varias especies de algas rojas, en concreto de miembros orientales del gnero Gelidium. Se utiliza como agente solidificante en la preparacin de dulces, cremas y lociones, as como en las conservas de pescado y carne; para texturizar y emulsionar los helados y postres congelados; para clarificar, durante el proceso de fabricacin del vino y la elaboracin de la cerveza; y tambin para dar apresto almidonar! las telas" #dem$s, es un excelente medio de cultivo de bacterias, ya que no se disuelve por el efecto de las sales, ni se consume por la accin de la mayora de los microorganismos"

para identi icar las bacterias causantes de las

en ermedades in ecciosas ! los antibiticos a los que son sensibles esas

El agar se e'trae de las algas marinas &aci#ndolas &ervir. Posteriormente, el producto resultante se deja en riar ! secar, ! al inal se solidi ica en pastillas o en escamas. En un principio se llam agar2agar, un t#rmino que se utiliza en *alasia para denominar a un alga local. Pero e'isten di erentes tipos de agar de acuerdo a las especi icidades que cada uno tenga, sin embargo cada tipo de agar debe de cumplir con los requerimientos/ Fuente de energa.2 $as bacterias pueden ser ottro as o quimiottro as. $as otottro as absorben energa del sol ! las quimiottro as de compuestos orgnicos. Fuente de carbono.

Fuente de nitrgeno.- $as bacterias pueden obtener el nitrgeno atmos #rico a trav#s de las protenas o por la degradacin de aminocidos o p#ptidos. Azufre y fosfatos.- $a obtienen como elemento0)1, ! como os atos en sales 0P1. Vitaminas. Agua.- *edio de transporte que permite una mejor absorcin de los nutrimentos. 3ambi#n requiere de los requerimientos nutricionales ptimos para su desarrollo/ Protenas.- )e suministran generalmente peptonas, que se encuentran disponibles en el comercio, preparadas por digestin parcial de carne con enzimas peptdicas( consisten en polip#ptidos, dip#ptidos ! aminocidos. Carbohidratos.- )umistran carbono para la sntesis, ! adems su ermentacin libera energa utilizable en el metabolismo. Factores accesorios de crecimiento.- )on tambi#n requerimientos por algunas bacterias. Entre ellos estn las vitaminas del complejo B( estas suministran enzimas necesarias para que las bacterias que son incapaces de sintetizar otros actores necesarios para algunas bacterias son obtenidos de los nutrimentos ms complejos. Sales minerales.- Elementos como 4, .a, 5a, etc.( tambi#n son requeridas por algunas bacterias en su desarrollo. Atmsfera.Algunos microorganismos precisan o'geno para su desarrollo, otros son incapaces de reproducirse en presencia de este elemento, en cambio otros organismos pueden crecer en una atms era con o'geno, logran sobrevivir ! crecer sin el, se les llama anaerobios facultativos. Presin osmtica.- $as c#lulas pueden encogerse ! ser destruidas en soluciones &ipertnicas( inversamente se rompen por entrada de agua, en las soluciones &ipotnicas. Tem eratura.- $a temperatura para la cual los organismos microbianos crecen mejor, es considerada como temperatura ptima. Luz. $a ma!ora de las bacterias se desarrollan mejor en ausencia de luz. $a luz ultravioleta puede ser letal. !eaccin.- $a ma!ora de las bacterias crece en un medio ligeramente alcalino 0p- 6.7 a 6.81. $os &ongos crecen con acilidad en los medios cidos 0p- 91. Actualmente e'isten di erentes ormas ! m#todos de cultivar en el mercado, !a que pueden cultivarse en placas, tubos etc. "#todo de lacas.- El propsito de usar medios slidos pulverizados en cajas petris, consiste en inocular cantidades sucesivas menores de material en el medio, de manera que en alg%n tiempo sean colocados

en una capa tan delgada que les permita el crecimiento de colonias individuales aisladas. "edios inclinados.- Este tipo de cultivo es empleado principalmente para resembrar cepas aisladas, sea para identi icacin interior o para base cultivo. Culti$os or agitacin.Este medio de cultivo es empleado particularmente en el aislamiento de anaerobios esporulado. )e calienta un tubo o botella a 9:;. ! luego se deja en riar. Culti$os or icadura.- En este m#todo el material de laboratorio es colocado en un alambre recto e introducido al medio. El m#todo puede ser tambi#n empleado para conservar los cultivos patrn. Culti$os l%uidos.- Al inocular en un medio lquido como el agua con peptona o el caldo con tioglicolato, el tubo se inclina ! el material se e'trae del asa por rotamiento contra la pared del tubo. <e acuerdo a las especi idades de cada medio pueden clasi icarse en/ "edios b&sicos.- )on los medios ms simples, contienen e'tracto de carne, peptona, sal ! agua. El e'tracto o in usin de carne proporciona aminocidos, vitaminas, sales ! peque,as cantidades de elementos como ., 5 ! otros elementos. Ejem/ !"ar #e infusi$n% !"ar cerebro coraz$n. "edios enri%uecidos.- )on aquellos medios bsicos que &an sido complementados con lquidos corporales, vitaminas espec icas, aminocidos, protenas ! otros nutrientes. Ejem/ !"ar san"re & a"ar c'ocolate. "edios selecti$os.- )on medios de agar bsico, enriquecidos agregndole ciertos reactivos que impiden el crecimiento de la ma!ora de las bacterias ! permitiendo el desarrollo de unas cuantas. Ejem/ !"ar con san"re & bilis al ()*% !"ar sal & +anitol. "edios diferenciales.- )on medios a los que se les &an agregado ciertos que reaccionan con un tipo espec ico de bacterias. Ejem/ !"ar #e ,cConc-e&% !"ar E,B% !"ar .LD. "edios de enri%uecimiento.- )on los medios que contienen alguna sustancia in&ibidora por lo que se crea un medio avorable para lmites mas estrec&os de bacterias. Ejem/ !"ar /./.% !"ar #e Lo0ensten Jensen. "edios es eciales.- )on los medios para comprobar una o ms caracterziticas bioqumicas. Ejem/ !"ar T/I% !"ar CIT% !"ar LI!% !"ar ,IO. 1RE1!R!CIN DE 1RUEB!/ BIO2U3,IC!/. TS' o ('A. !"ar 'ierro tri4le az5car. ,e#io inclina#o #e color inicial ro6o. Esta#o s$li#o.

47 8.9 : ).; Peptona de casina Peptonas de carne 5a.l $actosa )acarosa <e'trosa )ul ato de &ierro ! amonio 3iosul ato de sodio >ojo de enol Agar

=: g =: g 9g =: g =: g =g :.7g :.7g :.79g =? g

C'T Utilizaci$n #el citrato. ,e#io inclina#o #e color ver#e. Esta#o s$li#o. 47 <.= : ).; @os ato di&idrogenado de amonio @os ato dipotsico. 5a.l .itrato de sodio *g)+A Agar Azul de bromo enol =.:: g =.:: g 9.:: g 7.:: g :.7: g =9.:: g :.:B g

)'A Lisina & ar"inina. ,e#io inclina#o #e color violeta. Esta#o s$li#o. 47 <.8 : ).; Peptona de gelatina E'tracto de levadura <e'trosa $2$isina .itrato de &ierro ! amonio 3iosul ato de sodio P%rpura de bromo enol Agar 9g ?g =g =: g :.9g :.:Ag :.:7g =?.9g

S'" /ulfato% in#ol & +ovili#a#. ,e#io 4lano #e color a+arillo. Esta#o se+is$li#o. 47 8.9 : ).; Peptona de caseina Peptona de carne )ul ato de &ierro ! amonio 3iosul ato de sodio Agar "'* ,ovili#a#% in#ol% ortinina. ,e#io 4lano #e color 45r4ura. Esta#o se+is$li#o. 47 <.> : ).; E'tracto de levadura Peptona de gelatina Peptona de caseina $2+rtinina <e'trosa Agar P%rpura de bromocresol ,!TERI!L ? RE!CTIVO/. ? *atraces de 9:: ml. .ajas petri. )oporte universal. *edio nutritivo de agar/ )angre, ) C ==:. E*B Agua destilada. Autoclave. *ec&ero de @is&er. C O N C L U / I N. En esta prctica se aprendi la importancia de preparar medios de cultivo, de que materiales pueden ser &ec&os, los distintos tipos de cultivos que pueden desarrollarse en el laboratorio, as como su clasi icacin, sus caractersticas ?.: g =:.: g =:.: g 9.: g = g 7 g :.:7g 7: g 8.=g :.7g :.7g ?.9g

principales, los distintos tipos que pueden servir para identi icar di erentes bacterias, as como las condiciones que estos deben de reunir.

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