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Bacterial zinc transporters and regulators

Resumen La homeostasis de Zinc 2+ en las bacterias se logra por sistemas de exportacion y aceptacin que se regulan separadamente por sus propios reguladores. Se han identificado tres tipos de sistemas exportadores de Zn 2+ que protegen a las celulas de concentraciones toxicas altas de zinc: . transportadores de eflu!o "#$ de multiples farmacos 2. %&'asas tipo ' (. facilitadores de difusion cationica Los exportadores tipo "#$ para zinc son encontrados solamente en algunas bacterias gram negati)as* permiten una exportacion muy eficiente atra)es de la membrana del citoplasma y la membrana externa de la celula. %&'asas tipo ' y facilitadores de difusion cationica pertenecen a familias de proteinas que se encuentran tambi+n en eucariotas. Los exportadores estan regulados en las bacterias por receptores y acti)adores ,er" o por represores %rs". 'ara la captacion de alta afinidad de Zn- )arios transportadores %./ dependientes de union a proteinas que pertenecen a una clase- se han identificado en diferentes bacterias. &ransportadores %./ de zinc son regulados por represores Zur- que perteneces a la familia proteica 0ur de reguladores de hierro. 'oco se sabe de la captacion de ba!a afinidad de Zn en condiciones altas 12zinc3replete conditions4 de zinc. 5n e!emplo conocido es el sistema de absorcin de fosfato 'it- que puede cotransportar zinc +2 en 6. coli. Similarmente- el cotransportador de citratp3metal /it, en .acillus subtilis puede ayudar a suministrar zinc +2. Introduccin 6l zinc es- para la mayor7a- si no todas las bacterias- un oligoelemento esencial. ,uchas enzimas bacterianas contienen zinc en el centro acti)o o en un sitio estructuralmente importante- el gran grupo de las prote7nas de unin al %$# con moti)os dedos de zinc- sin embargo- se encuentran principalmente en las c+lulas eucariotas- y rara )ez en las bacterias 1/lar8e 9 .erg ::;4. 6n :<=.ucheder y .roda mostraron en un estudio cuidadoso que la absorcin de >?Zn2 + en 6scherichia coli es energydependent- en las c+lulas de hambre en condiciones anxicas- la absorcin es estimulada por la glucosa y es m@s fuertemente estimulada por la adicin de ox7geno. Slo recientemente- con la disponibilidad de m+todos de gen+tica molecular- tener m@s detalles de Zn2 + bacteriana transporte y Zn2 + homeostasis sido re)elado. la primero transportadores identificados se muestran para conferir resistencia a las altas concentraciones de Zn2 +. 6n muchos casos- estos transportadores exportar- adem@s de Zn2 +- tambi+n otros iones txicos tales como /$2 +- /o2 +- y 'b2 +. 6n eucariotas- la resistencia a altas concentraciones de Zn2 + no slo se consigue mediante la exportacin- pero tambi+n mediante la unin a la metalotione7na. 6ntre las bacterias- este tipo de prote7nas tiene hasta la fecha slo se ha obser)ado en las cianobacterias 1"obinson et al. ::;4. &ambi+n- de alta afinidad de zinc3absorcin los sistemas se han detectado bacterias que ayudan a )i)ir en extremadamente ba!as concentraciones de Zn2 +- que se encuentran- por e!emplo- en el suero de los animales y los seres humanos. %dem@s- hay sistemas menos bien caracterizadas de ba!a afinidad de captacin que contribuyen a Zn2 + de alimentacin en + rica en un Zn2- pero el medio ambiente no txico. La figura muestra una )isin general de los diferentes sistemas que se encuentran en las bacterias gram3negati)as que crecen en condiciones de alta- media o Zn2 + ba!as concentraciones. 6!emplos de diferentes bacterias se combinan en esta figura y ser@n tratados en los p@rrafos siguientes. Lo que es

notable en la figura es la falta de sistemas de captacin. #o se han identificado transportadores espec7ficos acti)os con Zn2 +3condiciones repletas. Slo unos pocos sistemas inespec7ficos son conocidos para el transporte de Zn2 + entre otros cationes di)alentes. %unque la membrana externa tiene muchos sitios de unin para cationes bi)alentes- poco se sabe cmo Zn2 + pasa a tra)+s de esta membrana. .acterias Aram3positi)as- que no tienen una membrana externa 10igura 4- tienen muchos sitios de unin para cationes di)alentes en los @cidos teicoicos- los fosfatos ribitol polim+ricos unidos a la capa de peptidoglicano de espesor. 6stos sistemas parecen actuar como intercambiadores de cationes en la superficie de las bacterias. Sistemas de Zn2 + de exportacin (1): la difusin de cationes facilitadores Los altamente +3resistentes bacteria "alstonia metallidurans gram3negati)as Zn2 1anteriormente %lcaligenes eutrophus4 /B(=- aislado a partir de un tanque de decantacin de una f@brica de cinc- tiene una concentracin inhibitoria m7nima para Zn2 + de 2 m, en un medio basado en &ris. 6l grupo de genes czc#C/.%$"S encontrado en un pl@smido grande determina la resistencia alta de metal mediante la codificacin de dos sistemas para la exportacin de Zn2 +- /o2 + y /d2 + 1%nton et al :::*.. Arosse et al :::4. /zc$ es un miembro de la familia facilitador de difusin de cationes y exporta estos metales tra)+s de la membrana citoplasm@tica 1%nton et al. :::4. 6l Staphylococcus aureus Zn2 +3determinante de resistencia Znt% muestra identidad (;D a /zc$ de "alstonia eutropha 1Eiong y FayasGal ::;4. 5n mutante znt% es sensible a H.? m,Zn2 + en comparacin con ? m, de la cepa madre. Znt"- un miembro de la familia %rs"- regula la expresin de znt%. La nomenclatura es muy lamentable- ya que estas prote7nas Znt% y Znt" no est@n relacionados con las prote7nas Znt% y Znt" de 6. coli y otras bacterias- que se tratan m@s adelante en esta re)isin. Iarios otros miembros de esta familia de prote7nas caracterizado en eucariotas tienen funciones importantes en la carga de )es7culas con Zn2 + y en la exportacin de Zn2 + desde el citoplasma 1'almiter et al ::>.4* 6n bacterias similitudes de secuencia indican una distribucin m@s amplia 1'aulsen y Saier ::<4. 5n homlogo en 6. coli codificadas por ybg" tambi+n est@ presente en Zn2 + transporte 1'atzer y Bant8e- sin publicar4. Sistemas de Zn2 + de exportacin ( 2 ) : los exportadores de tipo RND La prote7na /zc$ parece ser la primera l7nea de defensa de "alstonia metallidurans contra altas concentraciones de Zn2 + - ya que en una expresin mutante czc$ de los genes czc/.% es inducida y el mutante czc$ es ligeramente m@s sensible a Zn2 + que la cepa parental 1 %nton et al . ::: 4 . Las prote7nas /zc% - /zc. - y /zc/ forman un sofisticado sistema de transporte que exporta Zn2 + - /o2 + - y /$2 + a tra)+s de dos membranas - la membrana citoplasm@tica y la membrana externa - por lo tanto - posiblemente- tambi+n la proteccin del espacio peripl@smico de ". metallidurans de los metales txicos . /zc% es un antiportador de cationes de protones se encuentra en la membrana citoplasm@tica . /zc. parece ser una prote7na de conector que est@ le!anamente relacionado con %cr% 1 22 D de identidad de amino@cidos 4 - una prote7na situada en el periplasma como parte de una bomba de exportacin de acrifla)ina . /zc/ tiene una relacin distante a &ol/ y puede conectar /zc. a la membrana externa - la formacin de un comple!o de prote7nas /zc%./ 1 "ensing et al . ::<a 4 . 6sta disposicin permite la extrusin de los metales txicos desde el citoplasma en el medio . 6l sistema de exportacin de todo pertenece a la "#$ ampliamente distribuido 1resistencia - nodulacin - di)isin 4 de la familia de prote7nas 1 &seng et al. ::: 4 . 6l /zc% prote7na por s7 sola y sin /zc. y /zc/ permite que slo un ba!o ni)el de resistencia a iones met@licos. /Z/S y /zc" pertenecen a la gran familia de los sensores de histidina quinasa reguladores de dos componentes . Los estudios con czc" y /Z/S deleciones - fusiones lacZ y el an@lisis de la s7ntesis de %"#m czc/.% ba!o inducir y no inducir condiciones ha demostrado que /zc" J S regulan los genes /Z/ 1 Arosse et al . ::: 4 . 6l sistema se indu!o con H-( m, de Zn2 + y menos bien con H-( m, de /d2 + - lo que indica una preferencia por

Zn2 + . Sistemas de Zn2 + de exportacin (3): !"asas de tipo " %&'asas de tipo '- llamado as7 por la enzima aspartato fosforilada intermedia- forman una gran familia de prote7nas de membrana de cationes transporte que se encuentran en los eucariotas y las bacterias. $os subgrupos relacionados con el transporte de /u + y %g + y Zn2 +- /d2 + y 'b2 + 1re)isado por Aatti et al. 2HHH4. %cd2 + 3 + andZn2 determinante de resistencia codificada por los genes cad% y /%$/ se ha encontrado en el pl@smido de estafilococos pC2?;. 6n una cepa de Staphylococcus aureuslos genes clonados plantearon la concentracin inhibitoria m7nima de /d2 + de H-HH? m, a 2-?> m,mientras que la concentracin inhibitoria m7nima de Zn2 + se ele) de H-> m, a -; m, 1Koon y la plata de :: 4. 6stos )alores ilustran la alta toxicidad de /d2 + para la c+lula sin proteccin. /ada es una %&'asa de tipo ' 1 &sai et al ::2 . 4 - K /%$/ - importante para la resistencia completa es una prote7na reguladora con similitudes a %rs" prote7nas - que regulan %&'asas de resistencia arsenito J %ntimonite 1 Shi et al ::= * . "osenstein y col . ::= 4 . 6l sistema de transporte Lada J / tambi+n se encuentra en la bacteria gram 3 negati)a Stenotrophomonas maltophila y tiene :> D de identidad de secuencia a la estafiloccica Lada J / 1 %lonso et al . 2HHH 4 . 6ste alto ni)el de identidad de secuencia de las dos prote7nas indica un reciente transferencia horizontal de genes de cad% y /%$/ entre un gram3positi)as y una bacteria gram 3 negati)a . 6n Listeria monocytogenes - las prote7nas /ada y /%$/ relacionados 1 >> D y =; D de identidad de secuencia de S. aureus /ada y /%$/ respecti)amente 4 - son codificadas por un transposn en un pl@smido y confieren slo /d2 + resistencia y sin Zn2 + resistencia 1 Lebrun et al . ::= 4 . La falta de Zn2 + resistencia pueden explicarse por la ele)ada resistencia intr7nseca de la L. monocytogenes y .. subtilis cepas utilizadas 1 a m, Zn2 + < y (-? - respecti)amente4 - lo que indica la presencia de Zn2 + exportadores adicionales codificados en el cromosoma. &ambi+n en S. aureus - la pC2?; codifica prote7nas Lada J / aument el Zn2 + ni)el de resistencia slo por un factor de ( lo que indica que la proteccin de /d2 + puede ser la funcin principal . La prote7na de 6. coli Znt%- otro miembro de las %&'asas de tipo '- confiere /d2 + y Zn2 + resistencia 1.arba et al ::<*.. "ensing et al- ::<b4. 6l contenido de Zn2 + de 6. coli se ha estimado como una concentracin nominal de H-> m, si todo fuera gratis 1Mung et al. :<>4. 6n c+lulas de mam7feros este )alor se ha estimado en H-2 m, 1'almiter y 0indley ::?4. La concentracin de libre Zn2 + es dif7cil de determinar- los resultados dependen de los m+todos utilizados. Los estudios in )itro sugieren que tiolato enlazado /d2 + o Zn2 + son los me!ores sustratos para Znt% 1Sharma et al. 2HHH4. 6n la c+lulala mayor7a de estos metales podr7a ser atado como tiolatos de ciste7na o glutatin. La funcin principal de /ad%and prote7nas Znt%3como parece ser la extrusin de /d2 + y 'b2 +- Zn2 +- mientras que la exportacin parece ser slo una funcin adicional. 6n 'roteus mirabilis- una mutacin en un homlogo Znt% conduce a un comportamiento defectuoso en!ambre con la migracin m@s lenta que la cepa parental 1Lai et al ::;*.. "ensing et al ::;4. 6sta inusual fenotipo podr7a surgir a tra)+s de la homeostasis alterada Zn2 + que tiene un efecto sobre la diferenciacin de c+lulas en!ambre. 6n los seres humanos- dos %&'asas de tipo ' homlogos transportar cobre. Las mutaciones en estas prote7nas causan trastornos del metabolismo del cobre conocido como enfermedades de Nilson y ,en8es. 'ara estudiar los efectos de las mutaciones de la enfermedad de Nilson en 6. coli- se construyeron dos mutantes con mutaciones dirigidas al sitio en Znt%- Bis=<?Aln y Alu=<H%la- los homlogos humanos de los que causan la enfermedad de Nilson. %mbas prote7nas mutantes muestran una acti)idad reducida de iones met@licos3%&'asa estimulada 1aproximadamente (H3=HD de la acti)idad de tipo sal)a!e4 y son fosforilados mucho menos eficiente que las prote7nas de tipo sal)a!e.

6stos resultados sugieren que las mutaciones afectan a las principales etapas en el proceso de transporte de ambos %&'asas de tipo ' 1O88eri y Baltia :::4. #os miem$ros de la familia %err & ZntR o de la familia rsR & S%!' re(ulan "$2 + ) *d2 + ) Zn2 + + extrusin 6l regulador de znt% en 6. coli - Znt" - induce znt% la transcripcin a : m, /d2 + o Zn2 + HH , 1 #oll y Lutsen8o 2HHH 4 . &ambi+n 'b2 + es un inductor eficaz del sistema 1 .inet y 'oole 2HHH 4 . Znt" es un regulador ,er"li8e que se une como un represor para el promotor znt% * en presencia de /d2 + o Zn2 + - Znt" se con)ierte en un acti)ador transcripcional que cambia la conformacin de la regin promotora y hace que sea un me!or sustrato para la %"# polimerasa 1 Outten et al . ::: 4 . ,er" es un regulador bien estudiado de un sistema de desintoxicacin Bg2 + . Bg2 + es reconocido por el resto de amino@cido /;2 a partir de un monmero del d7mero ,err y por / < y / 2> de la segunda monmero de ,err . 6n un estudio sistem@tico - mut ,er" se proyect para otras especificidades de metal. Las mutaciones en posiciones cambian la capacidad de respuesta de Bg2 + para Bg2 + y /$2 + 1 /aguiat et al . ::: 4 - haciendo que el regulador de menos espec7fica . /uriosamente - en estos mutantes - la respuesta a Zn2 + cambi slo ligeramente . Otras %&'asas de tipo ' como /%$% est@n regulados por los miembros de la superfamilia %rs" J S,&. de represores . La estructura de S,&. ha sido resuelto . Se trata de una prote7na represora dim+rica con un moti)o t7pico de h+lice3giro 3h+lice - la disposicin de las tres h+lices principales y la horquilla beta es similar a la B#03(Jfor8head - /%' y prote7nas toxina de la difteria represor 1/oo8 et al. ::; 4 . Sin embargo - los sitios de unin de Zn2 + no se han caracterizado bien . %mbos tipos de reguladores- %rs" J S,&. y ,er" J Znt" - se encuentran tambi+n en relacin con otros transportadores met@licos. /ada uno de estos reguladores regula muy espec7ficamente slo un sistema . !ransportadores de la prote,na de unin - dependientes '* coc.e de alta afinidad a$sorcin del metal / $e alta afinidad sistemas de captacin de Zn2 + en bacterias Aram 3 negati)as y gram3positi)as se han caracterizado . 5na de la primera descrito fue en 6. coli 1 'atzer y Bant8e ::; 4 . $urante la seleccin de recombinantes con fusiones lacZ reguladas por hierro utilizando el fago de transposicin ,5$ - se obtu)ieron fusiones regulados por la disponibilidad de Zn2 + . Las c+lulas que transportan estas fusiones crecen como colonias ro!as en agar ,ac/on8ey con Zn2 + 3 quelantes de comple!os - lo que indica la desrepresin de la fusin lacZ- mientras que la adicin de Zn/l2 conduce a la represin y el crecimiento de colonias de color blanco . 6n placas de agar de nutrientes comple!os - el crecimiento de estos mutantes se inhibe by?m,6A&%or H.=m,6$&%.Nhen Zn/l2 se )io en discos de papel de filtro - se obser)a una zona de crecimiento alrededor del disco . Otros metales- como el #i2 + - /u2 + - ,n2 + y 0e2 + - no estimulan el crecimiento. 5na zona mucho m@s pequePa de crecimiento se obser) con /o2 + - lo que podr7a sustituir a Zn2 + en algunas prote7nas y podr7a reducir la necesidad de Zn2 + . 6l fago ,5$ hab7a insertado en uno de los tres genes que codifican un transportador de prote7na de unin dependiente de %./ . 6l znu% gen 1 la absorcin de zinc 4 codifica una prote7na de unin peripl@smica - znu. codifica una prote7na de membrana - y znu/ codifica el componente %&'asa del transportador . 'ara probar la funcin in )i)o de estos genes - >?Zn2 + captacin se midi en los mutantes Z#5 y en la cepa parental . 6n un medio B6'6Sbuffered - la absorcin de >?Zn2 + es la misma para los mutantes y la cepa parental . Slo cuando las c+lulas fueron pre 3 culti)adas en presencia de ? m, 6A&% qu+ el mutante toma inesperadamente m@s >?Zn2 + que la cepa parental - lo que podr7a interpretarse como la induccin de otro transportador de Zn2 + en el mutante . La adicin de

6A&% H-? m, al medio de transporte reduce la absorcin en un factor de H en la cepa parental inducida - mientras que no se obser)a absorcin en mutantes Z#5 independientemente de las condiciones de crecimiento . 'or desgracia- el Zn2 + concentracin en el medio captacin no se defini exactamente . $e acuerdo con Zn2 + determinaciones - que estaba por deba!o de ?H n, - y el Zn2 + concentrationGas libre incluso inferior a tra)+s de la adicin de 6A&% H-? m, 1 en presencia de ( m, de ,g2 + 4 . La bQsqueda de similitud de secuencias re)el que znu% pertenece a una gran familia de prote7nas que reconocen ya sea Zn2 + - ,n2 + o 0e )inculanteR como su sustrato 1 0igura 2 4 . Las prote7nas de unin de los transportadores %./ se hab7an agrupado en ocho grupos 1 &am y Saier ::( 4 - pero ya que estas prote7nas de unin a metales ten7an nue)as caracter7sticas - se define como la familia de prote7nas de unin por $intilhac et al grupo : . 1 ::< 4 . 6stos autores obser)aron que la competencia de los mutantes adc%./ de Streptococcus pneumoniae es Zn2 +3 dependiente. Los mutantes con mutaciones en el opern %$/ tienen una tasa de crecimiento m@s ba!a y son competencedefecti)e durante una etapa despu+s de la interaccin con el p+ptido estimulante de la competencia . La competencia se restaura despu+s de la adicin de Zn2 + en el medio qu7micamente definido . La secuencia predicha %$/% es similar a la de las prote7nas de unin de los transportadores %./ 1 22 D de identidad a znu% 4 y tiene el # 3 terminal de caracter7stica de l7pidos de ancla!e se encuentra en bacterias gram3 positi)as . %dcb es similar a componentes de la membrana de los transportadores %./ 1 2: D de identidad a Znu. 4 - y %$// es una prote7na de unin a %&' 1 (> D de identidad con znu/ .4 La prote7na 'sa% 1 neumococo superficie adhesina %4 fue identificado como un segundo miembro de la agrupacin : prote7nas en S. pneumoniae 1 $intilhac et al. ::< 4 . La )irulencia y la competencia de los mutantes '%%S son ,n2 +3 dependiente. Las prote7nas estrechamente relacionadas con 'sa% se han detectado en )arios estreptococos caries asociadas . Las prote7nas 0im% 1 precursor de adhesina fimbrial 4 y S/%% 1 co 3 agregacin 3 mediar adhesina precursor 4 hab7an sido implicados en la adhesin a monocapas de fibrina - la adhesin a la hidroxiapatita recubiertos de sali)a - o de agregacin con una cepa de Streptomyces - ya que los mutantes con mutaciones en los genes respecti)os mostrar una adhesin reducida y las prote7nas generadas anticuerpos protectores . 5n doble funcin de estas prote7nas como prote7nas de unin de metal y adhesinas parece poco probable . Los mutantes con mutaciones en estos transportadores probablemente pierdan su condicin f7sica necesaria para la )irulencia y la adherencia. $esafortunadamente - muchos homlogos de estas prote7nas de unin son anotados en las bases de datos como adhesinas - que pueden ser correctos . 5na estructura cristalina de la prote7na de unin de 'sa% ,n2 +3espec7fica de S. pneumoniae est@ disponible 1LaGrence et al. ::;4. Los cuatro @cidos aminados B><- B (:- 62H? y $2;H son )inculantes para el metal. Se ha sePalado por LaGrence et al. 1 ::;4 que- en esta estructura- este sitio est@ ocupado por Zn2 + en una coordinacin tetra+drica. ,n2 + se encuentra generalmente en una geometr7a octa+drica- que es dif7cil de conciliar con 'sa% ser una prote7na de unin a ,n2 +. &roa es una prote7na de unin de metal en &reponema pallidum y tambi+n pertenece a la familia de prote7nas de unin de metal %./ clQster :. 6n la estructura cristalina- los cuatro @cidos amino B>;B ((- B ::- $2<: y se unen Zn2 + 1Lee et al. :::4. 6n la 0igura 2- es ob)io que estos cuatro amino@cidos est@n colocados en los lugares equi)alentes a las de los amino@cidos implicados en la unin en la estructura de 'sa%. Lee et al. 1 :::4 sostienen que la diferencia362H? en 'sa% y B :: en &roa 3'odr7a ser responsable de la especificidad de sustrato de &roa para Zn2 + y 'sa% para ,n2 + 1Lee et al :::*.. $e8a et al :::4. Sin embargo- los genes tro%./ que codifican el transportador %./ de metal est@n regulados por la $tx" homlogo &ro"- que slo acepta ,n2 + y no Zn2 + 1'osey et al. :::4- y

la alta similitud con las prote7nas de unin con ,n2 + especificidad argumentan a fa)or de un ,n2 + especificidad de este sistema de transporte 10igura 24. Se necesita m@s in)estigacin para aclarar este punto. 5n informe reciente sobre el protein,ts% estrechamente relacionado de Streptococcus pyogenes desaf7a aQn m@s la situacin . La prote7na de unin ,ts% muestra la identidad m@s de <H D a 'sa% S/%% - y 0im% - que han demostrado ser transportadores de manganeso . 6n contraste recombinant,ts% no muestra una interaccin espec7fica con ,n2 + - pero lo hace con /u2 + - Zn2 + y 0e( + in )itro- y un mutante ,ts% tiene un contenido de hierro ?H D inferior y un Zn2 (H D inferior + /ontenido de la cepa parental 1 Fanulczy8 et al. ::: 4 . % partir de estos resultados - se ha postulado que los genes codifican mts%./ un sistema de transporte dependiente de la prote7na de unin con una especificidad de metal muy amplio para /u2 + - 0e( + - Zn2 + y . 6xperimentos de transporte con el mutante ,ts% y la cepa parental deben )erificar los postulados. 6l sistema de transporte de K06 1 0igura 2 4 transporta el hierro y el manganeso y tambi+n posee una inusualmente ba!a especificidad 1 .earden 9 'erry ::: 4 . La familia de la prote7na de unin dependiente de los sistemas de transporte y la contro)ersia en torno a su especificidad de metal grupo : ha sido discutido ampliamente por /la)erys 1 2HH 4 . Sistemas de captacin de Zn2 relacionados + prote7na de unin dependiente en otras bacterias tambi+n se han caracterizado. 6n .. subtilis- los genes ycdBCyce% est@n regulados por Zn2 + y el represor Zur. $os l7neas de e)idencia sugieren que el opern ycdB codifica una alta afinidad Zn2 + transportista. 6n primer lugar- un mutante ycdB se altera en el crecimiento de ba!o Zn2 + medio. 6n segundo lugar- la mutacin de ycdB altera la regulacin tanto de la yci/ 1un gen regulado por Zn2 + y el represor Zur4 y operones ycdB de tal manera que se requieren ni)eles mucho m@s altos de Zn2 + exgeno para la represin 1Aaballa y Belmann ::;4. %dem@s- las prote7nas codificadas pertenecen a la familia de la prote7na de unin dependiente de transportadores %./ clQster de metal :. La prote7na de unin a Zn2 + 'zp de Baemophilus influenzae fue aislado porque es un homlogo de la prote7na 0im% estreptoccica. Se esperaba 'zp ser una adhesina 1)+ase m@s arriba4- pero m@s tarde estudios indic una ubicacin peripl@smico. La prote7na recombinante purificada de 6. coli contiene dos iones Zn2 + por monmero. 5n mutante pzp ha demostrado ser defectuoso en el crecimiento. Supresin se logr mediante la adicin de HH m, de Zn2 +- mientras que ninguna supresin se obtu)o con HH S,/a2 +- ,g2 +- /u2 +- #i2 +- /d2 +- ,n2 +- o 0e( + 1Lu et al. ::<4. /o2 + no ha sido probado. 5n mutante znu% de Baemophilus ducreyi muestra una fuerte disminucin de la )irulencia 1LeGis et al. :::4. La prote7na 'zp contiene una regin extendida rica en histidina- aspartato- y los residuos de glutamatoBB6B0B6$A$B$B$BM B6BMB$BMB$ B$B$B$BMB6 BMB$B6BB$B $BB6AL&&#N BIN- que puede tener una funcin en la unin de Zn2 + o Zn2 + entrega a otras prote7nas. 6s interesante obser)ar que slo Zn2 + inequ7)oca prote7nas de unin contienen este B3- $3- y la estructura 63rico delante del moti)o BEN conser)ada 1posicin < J <( de 'zp en la 0igura 24. B < est@ en una posicin de unin Zn2 + en las estructuras cristalinas de 'sa% y &roa. Los estudios estructurales de 'zp en comparacin con otras prote7nas znu% con regiones ricas en histidina mucho m@s pequePos ser7a interesante. Zur es un re(ulador de 0arios sistemas de captacin de alta afinidad de Zn2 + /on el fin de identificar el regulador de Zn2 +3dependiente de los genes Z#5 en 6. coli- se aislaron mutantes constituti)os y se ensayaron para la complementacin de un banco de genes de 6. coli. 5n

gen de complementacin- y!bM del genoma de 6. coli- fue identificado y nombrado zur 1para la regulacin de la absorcin de zinc4. La prote7na Zur muestra 2<D de identidad de secuencia con la piel del regulador de hierro. Bighaffinity >?Zn2 + transporte de la mutante zur constituti)a es diez )eces mayor que la de la cepa parental no inducido 1'atzer y Bant8e ::;4. 'or inacti)acin del gen zur - se ha demostrado que Zur actQa como un represor y no como un acti)ador . %lgunos mutantes alelos zur cromosmicas han sido secuenciados para correlacionar la p+rdida de la funcin de Zur con indi)idualmutations . $e tipo sal)a!e y mutante prote7nas Zur se han purificado a homogeneidad electrofor+tica. 5na parte considerable de las prote7nas mutantes Zur excepto Zur R =>3: - se acumulan en cuerpos de inclusin . $e tipo sal)a!e y Zur Zur =>3: formularioR Bomo 3 y heterod7meros . La dimerizacin es independiente de iones met@licos - ya que tambi+n se produce en presencia de quelantes de metales 1 'atzer y Bant8e 2HHH 4 . 6l uso de un ensayo in )i)o de titulacin en - el sitio proporcionando regulacin Zur se redu!o a una regin de ( pb en la regin promotora de znu% y znu/. . 6sta ubicacin se confirm mediante ensayos de footprinting $#asa C . 5na Qnica regin que comprende un pal7ndromo casi perfecto est@ protegido - lo que indica la unin directa de Zur . Tuelantes de zinc inhiben completamente la unin de Zur %$# - y la adicin de Zn2 + en concentraciones ba!as me!ora la unin . Zur ocupa su sitio de unin slo en la presencia de Zn2 + u otros cationes met@licos di)alentes a ba!as concentraciones - como se muestra por $#asa C de la huella . Zur protege un pal7ndromo aproximada de 2: nt en cada hebra de la Z#5 operatorGith un ( R escalonamiento de = nt 1 'atzer y Bant8e 2HHH 4 . 6sta huella se aseme!a a la de %$# t7pico d7meros - como las prote7nas cl@sicas h+lice3giro 3h+lice - por e!emplo- el represor /C del bacterifago U 1 Fordan 9 'abo :;; 4 )inculante. 6l obser)ado ( R escalonamiento es indicati)o para la cobertura del surco menor en los extremos - pero no proporciona informacin acerca de los contactos de reconocimiento prote7na3$#% . %n@lisis de las prote7nas mutantes Zur propuso un dominio aminoterminal de contactos de %$# alrededor de >? residuos y una dimerizacin carboxi 3 terminal y del dominio de unin a Zn2 + . 0ootprinting experimentos han indicado que aunque la mayor7a de las prote7nas Zur mutantes se unen a la Z#5 promotor in )itro - se obser) ninguna proteccin in )i)o 1 'atzer y Bant8e 2HHH 4 . Zur est@ acti)o slo en la forma reducida . /omo una prote7na citoplasm@tica - ha reducido predominantemente en lugar de tioles oxidados disulfuros debido a las condiciones de reduccin en el citoplasma 1 Ailbert ::H 4 . Cn )itro- los residuos de ciste7na de Zur se oxidan f@cilmente a disulfuros como se !uzga por la migracin m@s lenta en geles de S$Spolyacrylamide ba!o condiciones de reduccin en comparacin con condiciones no reductoras . Oxidado Zur no se une el %$# o cantidades considerables de Zn2 + . 6sto podr7a indicar que Zn2 + se une principalmente por algunos de los nue)e ciste7nas encontradas en Zur . 6n 6. coli de la piel - slo hay cuatro ciste7nas - todos los cuales se conser)an en Zur . %l menos dos o tres iones Zn2 + por d7mero se unen espec7ficamente a Zur 1 'atzer y Bant8e 2HHH 4 . Tueda por )er si uno de estos iones Zn2 + se limita para el mismo sitio en Zur como se encontr en la piel de las ciste7nas conser)adas 1posiciones :2 y :? - . Facquamet et al ::;4 . 6stos dos ciste7nas se encuentran en todas las prote7nas 0ur3 como excepcin los de 'seudomonas y organismos relacionados. La acti)idad represora de la prote7na Zur es Zn2 + espec7fica ya que la adicin de /d2 + - Bg2 + - 'b2 + - ,n2 + - 0e2 + - /u2 + y condu!o a una desrepresin del sistema de transporte Z#5 in )i)o 1 'atzer y Bant8e 2HHH 4 . Zur - como 0ur - que parece ser muy extendida entre las bacterias - incluso en las bacterias gram3 positi)as y cianobacterias - segQn lo indicado por la bQsqueda de similitud de secuencias. Sin embargoslo en algunos casos tiene un Zn2 + funcional 3 ha demostrado regulador dependiente. $ado que los pequePos cambios en la sequencemight cambian la especificidad de metal - predicciones siempre tienen

que ser examinados . 6n .. subtilis - aparte de 'iel y '6"" 1 regulador de la respuesta al estr+s de perxido 4 1 .sat et al . ::; 4 - la tercera homlogo de la piel 3 como KqfI puede actuar como Zur 1 Aaballa y Belmann ::; 4 . La similitud de secuencia a 6. coli Zur no es fuerte . 5n gen zur tambi+n se ha encontrado en L. monocytogenes 1 $alet et al . ::: 4 . /on base en la similitud de secuencias - la prote7na 0ur propuesto en Staphylococcus epidermidis 1 Beidrich et al. ::> 4 puede ser Zur lugar de 0ur . 6s posible que otras prote7nas designadas como de piel de homologuesGill resultan ser prote7nas Zur . 6n muchos de los genomas secuenciados parcialmente de di)ersas especies bacterianas - una Zur equi)alente se encuentra - por e!emplo - en cepas de Salmonella - Mlebsiella pneumoniae - Kersinia pestis - Iibrio cholerae - .ordetella pertussis - /aulobacter crescentus - 'seudomonas aeruginosa - y cepas de #eisseria . $ado que estos organismos tambi+n poseen un sistema homloga a Z#5 - se ha propuesto que estas prote7nas son igualmente reguladores de Zn2 + captacin . 5n alineamiento re)ela dos grupos de prote7nas Zur 3 5no se encuentra en las bacterias gram3negati)as- la segunda en las bacterias gram3positi)as. Zur a partir de bacterias gram3 positi)a es m@s similares que Zur a partir de bacterias gram3negati)as a la piel de 6. coli 1 'atzer y Bant8e 2HHH 4 . #o se han encontrado e)idencias de la autorregulacin del Zur o por la influencia de otros reguladores sobre el Zur . Zur tiene la funcin muy limitada de la regulacin de Zn2 + captacin y el metabolismo en un entorno pobre en Zn2 + . Basta la fecha - adem@s del promotor znu% - slo otros dos sitios de unin Zur han sido identificados en el cromosoma de 6. coli . #o se han encontrado similitudes con los genes con funcin conocida . Sistemas de a$sorcin de $a1a afinidad Zn2 + 'oco se sabe acerca de los sistemas de captacin de ba!a afinidad para Zn2 + en 6. coli u otras bacterias . 6stos sistemas son acti)os a concentraciones no txicas ricos de Zn2 + cuando znu%./ es reprimida por Zur . Se ha obser)ado cotransport de metales 1)an Ieen et al. ::=4 y Zn2 + 1.eard et al. 2HHH 4 con fosfato a tra)+s del sistema de transporte de fosfato inorg@nico 'it . 6ste sistema parece ser el principal responsable de la captacin de Zn2 + - pero - posiblemente- tambi+n ba!o ciertas condiciones se cataliza el flu!o de salida por intercambio metal. 6n .. subtilis - se han encontrado dos sistemas que se rige por Zur y Zn2 + - el transportador encima de mentioned%./ KcdBC - K/6% - y la prote7na de la membrana Kci/ - que se supone que es parte de un sistema de transporte de ba!a afinidad por Zn2 + 1 Aaballa y Belmann ::; 4 . Kci/ tiene similitud con nitrilo hidratasa acti)acin de las prote7nas y puede tener una funcin en la homeostasis de Zn2 + y no en el transporte - pero no se ha estudiado aQn m@s . 6n .. subtilis - la prote7na de la absorcin de metal citrato /C&, ha demostrado tener una amplia especificidad para cotransporte de ,g2 + - #i2 + - ,n2 + - /o2 + - y Zn2 + - sin embargo - /a2 + - .a2 + y Sr2 + son reconocidos por el diferente pero /C&B transportador homlogo 1 Mrom et al. 2HHH 4 . Zra2 + Zra3 re(ulan la proteina 0inculante a Zn2 + Zra" 6n 6. coli la Zn2 + prote7na de unin peripl@smica Zra' 1 designacin anterior K!aC 4 hab7a sido postulado para ser inducida por el Znt" homlogo ',&" de 'roteus mirabilis 1 #oll et al . ::; 4 . 6. coli transformadas con un pl@smido ',&" 3 codificacin crece me!or en la presencia de m, de Zn2 + de la misma cepa transformada slo con el )ector . %dem@s - m@s Zra' se produce por el ',&" 3 que contiene la cepa de 6. coli . 6studios recientes realizados por Leonhartsberger et al. 1 2HH 4 indican que los efectos obser)ados pueden ser indirectos . Su traba!o ha re)elado que zra' es inducida por la autoregulated dos histidina quinasa reguladora ZraS componente del sistema J " codificada a una distancia de 2(< pb a partir de zra' . ZraS - con la secuencia de la firma de un sensor de quinasa - se encuentra en la fraccin de membrana - y la unin espec7fica de la Zra" acti)ador a la regin promotora de zra' y zraS" se ha demostrado . %dem@s de ser un Zn2 + peripl@smico prote7na de unin - la funcin de Zra' es desconocido . 'uede ser que sea una prote7na de unin a Zn2 + que protege las enzimas peripl@smicas fromhigh Zn2 + concentraciones o puede ser un sensor de la concentracin de Zn2 + en el periplasma que se informa a ZraS . ZraS entonces actuar7a como transmisor de la sePal - y Zra" podr7a inducir una prote7na desconocida - adem@s de Zra' y ZraS J ".

La pregunta sigue siendo si otros genes est@n regulados por ZraS J ". 6n qu+ medida contribuye a la /C&, Zn2 + alimentacin en presencia de citrato no se conoce. 4s 4DDS un 5incop.ore 6 V S- S W de @cido disucc7nico de etilendiamina 1 6$$S 4 es producida por %mycolatopsis orientalis ba!o Zn2 + 3 /ondiciones l7mite 1 ZGic8er et al ::; . 4 K comple!os de Zn2 + y otros cationes di)alentes . 6$$S es un ismero de la 6$&% quelante bien conocido y est@ estructuralmente relacionada con ciertos siderforos 1 quelantes de hierro 4 . Los siderforos son producidos por bacterias y hongos en condiciones de hierro limitante . Los siderforos se unen espec7ficamente 0e( + * estos comple!os son absorbidos por los sistemas de transporte espec7ficos que se encuentran en casi cada tipo de bacteria 1 .raun et al ::; . 4 . $el mismo modo - es posible que %. orientalis utiliza 6$$S como un zincophore para satisfacer sus demandas Zn2 + . 'rueba experimental de esta hiptesis es insuficiente. 6. coli es incapaz de utilizar Zn2 + unido a 6$$S 1 'atzer y Bant8e ::; 4 . *onclusiones &ransportadores de zinc han sido encontrados en las siguientes familias de prote7nas : "#$ transportadores de eflu!o de mQltiples f@rmacos - %&'asas de tipo ' - facilitadores de difusin de cationes para la exportacin del txico Zn2 metal + - la prote7na de unin dependiente de %./ transportador y fosfato de metal o citrato cotransportadores para el captacin de Zn2 + necesaria para el crecimiento . 6s notable que casi cada sistema est@ regulado por su propio regulador . 6n 6. coli - tres reguladores 3 Znt" - ZraS J " - y Zur 3 son conocidos para responder a Zn2 + . 6sto es claramente diferente de la regulationGhere hierro de la piel 1 o $tx" en ciertas bacterias gram3 positi)a 4 actQa como un regulador global de muchos genes relacionados con la captacin de hierro y la respuesta al estr+s oxidati)o 1 Bant8e y .raun 2HHH 4 . "eguladores Zn2 + 3 dependiente de los sistemas de exportacin derepress o acti)an por encima de H- m, Zn2 + - mientras que las prote7nas Zur 3 como derepress el sistema de absorcin por deba!o del H , Zn2 + . 6s sorprendente que los informes sobre la especificidad de metal de diferentes transportadores %./ de unin a prote7nas dependientes que se encuentran en las bacterias patgenas son tan contradictorios. 6n las estructuras cristalinas de 'sa% y &roa - Zn2 + se encuentra en el sitio de unin de metal - aunque las obser)aciones in )i)o y la regulacin indican que ,n2 + es el sustrato principal 1 /la)erys 2HH 4 . 6s posible que estos transportadores son relati)amente inespec7fica porque el host regula sus ,e2 + concentraciones dentro de ciertos l7mites . 6ste entorno constante puede permitir la aplicacin XincontroladaX de diferentes cationes di)alentes por el patgeno . $ado que estos sistemas tienen un impacto importante en la )irulencia de los patgenos - este campo seguir@ siendo un tema de in)estigacin y los resultados se esperan con impaciencia .

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