Protocolo para medicin de alas de Drosophila melanogaster Regresin Progenitor Progenie.

Las fotos de las alas se encuentran dispuestas en la carpeta de proyectos del computador de GETEG. Se encuentran organizadas en las siguientes carpetas; Parental 1, Parental 2, F1 Machos, F1 Hembras, Parentales 1 F1, Parentales 2 F1, F2 Machos +, F2 Machos b, F2 Hembras + y F2 Hembras b. Cada una de estas carpetas contienen una serie de fotografas, cada una de estas fotografas recibe como nombre un nmero, este nmero indica la replica a la cual pertenece. De esta manea podemos reconstruir la linealidad de cada repeticin, por ejemplo podemos estar seguros que el P1.2 y el P2. 2 dieron origen a la progenie F1.2, y que de toda esta progenie solo un individuo fue elegido para el anlisis, pues deberan de ser todos genticamente iguales. Los Parentales F1.2, equivalen a los individuos hermanos de esta replica (la .2), tanto macho como hembra. As los Parentales F1.2 macho y Parentales F1.2 Hembra, dan origen a la progenie F2.2 Machos +, F2.2 Machos b, F2.2 Hembras + y F2.2 Hembras b. El ala de D. melanogaster presenta diferentes tipos de venas en intersecciones entre ellas que sern nuestro sujeto de estudio (Figura 1).

Figura 1. En esta figura se enumeran las intersecciones de izquierda a derecha, solo por conveniencia en el proceso de organizacin.

Debido a las diferentes posiciones en que quedaron organizadas las fotografas, para facilitar la identificacin de cada una de las intersecciones, a continuacin se muestran las 4 distintas posiciones de las alas y sus correspondientes nmeros (Figura 2).

Figura 2. Diferentes posiciones de las alas de D. melanogaster en las fotografas tomadas. Antes de comenzar las mediciones identifique el esquema que se ajusta a la fotografa que pretende medir, despus de definir uno de los cuatro esquemas, bsese en la numeracin de este esquema para realizar sus mediciones.

Para comenzar el proceso de medicin abra el programa tpsDig2, vaya a la pestaa File, Imput source, File en esta ventana busque la fotografa que pretende medir (si es necesario puede utilizar en esta ventana la opcin FileAll graphics para visualizar los archivos, si no estn presentes) escoja la fotografa a medir y de click en aceptar. Despus de abrir la imagen en este programa, la resolucin es muy alta y es muy difcil trabajar en una imagen tan grande, as que se puede ajustar el tamao en los botones (+) (-) en la barra de herramientas. Cuando tenga la imagen en un tamao apropiado, vaya a la barra de herramientas y una el botn Image edit tolos, en esta ventana vaya a la pestaa Measure. En esta pestaa digite el nmero 1en el espacio de Reference Length y seleccione a continuacin en la pestaa desplegable la opcin Milimeters.

Luego unda click en la opcin Set scale, esta opcin le permitir fijar la medida base para las posteriores mediciones, para este caso la medida que determine en la imagen equivaldr a 1 mm. Dirjase a la fotografa y hunda click en la lnea debajo del numero 0 de la gradilla presente en la foto justo en medio de las alas, y luego hunda click exactamente en la lnea que llega a 40. Se fijar una lnea en la fotografa, luego vaya a la ventana de Image tools que ha permanecido abierta y de click en ok. Repita este procedimiento cada vez que pierda la escala de medicin. Despus de definir la escala de medicin, determine si se encuentra midiendo el ala derecha o izquierda. El ala derecha se reconoce por que la graduacin del papel milimetrado bajo el ala se encuentra borrosa con respecto a la del otro lado, esto es debido a la ubicacin de un papel calcante sobre el portaobjetos en los momentos de las mediciones. Bsese en los esquemas de las posiciones de las alas (Figura 2), para establecer las posiciones de su numeracin. Comience a realizar las mediciones simplemente dado click en el punto de interseccin que pretende comenzar y luego otro click al punto que pretende llegar, la distancia de esta medicin que acaba de realizar, se muestra en la parte inferior de la ventana Image edit tools. Nota: Cada vez que realice una nueva medicin, el dato de la medicin anterior desaparecer Consigne los datos en la plantilla de Excel puesta a disposicin para este proceso Cuando haya terminado la medicin y salga del Programa NO GUARDE NINGUN CAMBIO la idea es mantener las fotografas intactas para posteriores verificaciones.