COGOLLO, VALENCIA, MORENO, 2010

Abril 2010

EVALUACIN DEL CRECIMIENTO DEL HONGO Psilocybe cubensis EN MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS
Cogollo Zuleta Mara Paulina, Valencia Querubn Marisol, Moreno Jos Rodrigo * Departamento de Ingeniera de Procesos ni!ersidad "#$I%, Medelln&Colombia' Cra () *+ sur ,-' $a./ ,+&(&011(02(, tel3ono/ ,+&(&014),-- ".t/ 1(-' ##55-*

#sesor Pro6ecto'

RESUMEN "n este estudio se e!aluaron dos medios de culti!o s7lidos 8sustrato de trigo 6 compost de c9ampi:7n; con el moti!o de identi3icar cu<l de estos era el m<s propicio para el crecimiento del P. cubensis 6 la producci7n de Psilocibina, utili=ando di3erentes concentraciones de precursor >umico 8triptamina; para anali=ar la incidencia de este en la producci7n del alcaloide' "n el sustrato de trigo no se obtu!ieron los resultados esperados, debido a >ue todos los tratamientos presentaron contaminaci7n con otros microorganismos >ue impidieron la propagaci7n del micelio del P' cubensis 6 la producci7n de los cuerpos 3ruct3eros' "l compost de c9ampi:7n present7 un adecuado crecimiento micelial 6 desarrollo de cuerpos 3ruct3eros en la ma6ora de los tratamientos e.perimentales' ?e e!aluaron !ariables cuantitati!as de e3iciencia biol7gica, rendimiento 6 precocidad de coloni=aci7n del 9ongo' @a precocidad de coloni=aci7n 3ue similar en todos los tratamientos, teniendo en cuenta >ue no todas las rplicas de los tratamientos presentaron primordios, mostrando aparici7n de los primeros carp73oros alrededor de los (- das' "l ma6or rendimiento obtenido en los tratamientos 3ue de -'44 g de 9ongos 3rescos cosec9ados Acm 0 de <rea ocupada por el sustrato 9Bmedo con -'4 g de triptamina 8rplica 4;, -'44 6 -'41 g de 9ongos 3rescos cosec9ados Acm0 de <rea ocupada por el sustrato 9Bmedo con -'0 g de triptamina 8rplica 4 6 rplica 5 respecti!amente;, igualmente los meCores resultados en cuanto a la e3iciencia biol7gica 8!ariable base para establecer el rendimiento;, 3ueron los tratamientos con -'4 6 -'0 g de triptamina' Para la e!aluaci7n del e3ecto del precursor >umico 8triptamina; sobre la producci7n de Psilocibina se utili=7 la tcnica instrumental de DP@C' @a resoluci7n de los picos obtenidos por DP@C del e.tracto del P. cubensis 3ue ma6or a medida >ue la concentraci7n de la triptamina aumentaba en los tratamientos, testigo, -'4, -'0 6 -'( g con <reas de ()+'5-, ,,-'0-, 4541'+- 6 4524'-- mm0 respecti!amenteE as mismo los tiempos de retenci7n arroCados por el DP@C mostraron la presencia de la Psilocibina en un rango de ( a 1 min para cada uno de los ensa6os' "l precursor >umico utili=ado en el pro6ecto arroC7 los resultados esperados en cuanto a la cantidad de alcaloide obtenido, por>ue al momento de reali=ar la cuanti3icaci7n por medio de la a6uda de un est<ndar interno 8ca3ena; se encontr7 >ue a ma6or cantidad de precursor >umico utili=ado ma6or cantidad de alcaloide obtenido' "n el tratamiento con -'( g de triptamina se obtu!o un porcentaCe de Psilocibina de -'-)00 F, mientras >ue el porcentaCe obtenido en el e.tracto del testigo para este alcaloide 3ue de -'-5,5 F' Palabras claves Psilocybe cubensis, Psilocibina, triptamina, ca3ena, sustrato de trigo, compost de c9ampi:7n, est<ndar interno, precursor >umico, DP@C'

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1! I"#r$%&cci'" @os 9ongos del gnero Psilocybe, el cual inclu6e la especie P. cubensis se 9a incrementado considerablemente en los Bltimos a:os, debido a su 3<cil culti!o 6 maneCo en medios s7lidos como el estircol de bo!inos, caballos 6 ele3antes' "stos 9ongos crecen 3<cilmente en temporadas de prima!era 6 !erano, donde la ma6ora de las especies se desarrollan en gran proporci7n, dos meses antes de llegar el !erano o perodo caliente 6 durante el periodo de llu!ia, entre 3ebrero 6 no!iembre 8Gottlieb, 4))+;' "l uso de los 9ongos alucin7genos como lo es el P. cubensis, se remota a los indgenas de ?udamrica, pero tambin a culturas de otros lugares como #rgelia, India 6 "uropa medie!al' "n cual>uier caso el inters por estos 9ongos responda Bnicamente a in>uietudes religiosas, culturales o curati!as 8Gri33it9s et al., 0--2;' "l empleo de este tipo de 9ongos resurgi7 en 4),+ con la publicaci7n de un artculo titulado Hen busca del 9ongo m<gicoI por R' Gordon Jasson en la re!ista @i3e 6 con el culti!o en el laboratorio del 9ongo Psilocybe mexicana por parte del microbi7logo 3rancs Roger Diem' Poco despus, se aislaron alcaloides ind7licos responsables de la acti!idad psicoacti!a de los 9ongos' #lgunos in!estigadores utili=aron la Psilocibina 83igura 4; con 3ines teraputicos en la dcada de los sesenta, pero las in!estigaciones cesaron ante la situaci7n legal de estas sustancias 6 s7lo en contadas ocasiones, como es el caso de ?ui=a en los a:os )-, se autori=7 su uso 8Gottlieb, 4))+;' "l gnero Psilocybe contiene en sus teCidos tres tipos de alcaloides 8Psilocibina, Psilocina, Kaeoc6stina; donde el m<s importante es la Psilocibina, deri!ado de la triptamina 6 mu6 similar al neurotransmisor ?erotonina 83igura 0; 8KrailosL6, 0--0;' @a Psilocibina 9a tomado gran

importancia debido a las in!estigaciones reali=adas en el <mbito medicinal 6 psi>ui<trico, en tratamientos de en3ermedades en pacientes con desordenes del comportamiento 6 en pacientes terminales de c<ncer 8Danes, 4))1;, 9aciendo de ste alcaloide un medicamento seguro 6 con3iable 6a >ue su uso no es perCudicial para la salud 6 no genera dependencia alguna 8@ee et al', 0--(;'

(i)&ra 1! "structura Qumica de la Psilocibina 8%lle=, 0--,;'

(i)&ra 2! "structura Qumica de la ?erotonina 8%lle=, 0--,;' Para el desarrollo del pro6ecto se utili=aron medios de culti!os s7lidos como el sustrato de trigo 6 el compost de c9ampi:7n, con el 3in de e!aluar el crecimiento del P. cubensis 6 la producci7n de Psilocibina en presencia de un precursor >umico 8%riptamina; 83igura 5;, 6 3inalmente la e.tracci7n de este alcaloide' "stos medios de culti!o son generalmente subproductos agrcolas >ue presentan un alto contenido de nutrientes 6 los cuerpos 3ruct3eros de los 9ongos >ue se producen son muc9o m<s resistentes 6 tienen meCor adaptabilidad al medio donde crecen 8Doelle 6 Mitc9ell, 4))0;'

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(i)&ra *! "structura Molecular de la %riptamina 8Jones, 4)21; 2! Ma#eriales + ,-#$%$s! 0'4' Experimental 2.1.1 Propagacin de la cepa

con los debidos cuidados de esterili=aci7nE las bolsas se mantu!ieron en la incubadora a una temperatura de 0+OC, 9asta obser!ar en ellas la coloni=aci7n total del sustrato de trigo por el micelio del 9ongoE este proceso tu!o una duraci7n apro.imada de 40 das' 2.1.3. Obtencin de los cuerpos ruct! eros ?e utili=7 triptamina como precursor >umico en el desarrollo del pro6ecto 6a >ue esta sustancia es la Bnica >ue se encontr7 reportada en la literatura por Gart= 84)2);, debido >ue al utili=ar 0, mg de triptamina en 4- g de sustrato se incrementa en un 5,5F la cantidad de alcaloide presente en el 9ongo 8Psilocibina;' 2.1.3.1. "iembra en sustrato de #rigo Para la obtenci7n de los cuerpos 3ruct3eros, se esterili=aron 40 bolsas de polipropileno con 5-- g de trigo en 0-ml de agua cada una por dos 9oras en autocla!e' "n el trigo esterili=ado se inocularon ,- g de semilla, esta me=cla 3ue sembrada en las caCas pl<sticas 80, cm de largo, 4) cm de anc9o 6 44 cm de pro3undidad; las cuales se limpiaron con per7.ido, para disminuir los riesgos de contaminaci7n en el <rea de siembra' %odo el procedimiento se reali=7 en la c<mara de 3luCo laminar de la ni!ersidad Cat7lica de Mriente' 2.1.3.2. "iembra en compost de $hampi%n "l compost de c9ampi:7n no 3ue sometido a ningBn tipo de esterili=aci7n, debido a >ue este se encontraba pasteuri=ado' @a siembra se reali=7 igualmente en caCas pl<sticas' "l compost de c9ampi:7n presentaba una 9umedad de 1,F' De igual 3orma >ue el e.perimento en trigo el precursor >umico 3ue me=clado con el sustrato 6Ao compost' Despus de obser!ar la coloni=aci7n completa del micelio en el sustrato

?e reali=7 la inoculaci7n de la cepa proporcionada por el cepario de la ni!ersidad Cat7lica de Mriente ubicado en el @aboratorio de Micologia, en agar e.tracto malta 8M"#;' @a cepa se aisl7 en la c<mara de 3luCo laminar en donde se inocul7 una muestra de 4.4cm del micelio del 9ongo en caCas Petri con 0-ml de M"# obtenindose la rplica de la cepa del P' cubensis "l crecimiento radial micelial de la cepa en las caCas Petri present7 coloni=aci7n total alrededor de 4, das' "stas se mantu!ieron en incubadora a una temperatura de 0+NC' 2.1.2. Obtencin siembra hongo) del micelio de (semilla del

Para la obtenci7n del micelio de siembra se inocularon pellets >ue se produCeron a partir de medio l>uido 8e.tracto de malta;, este medio l>uido se prepar7 con 4-- ml de agua destilada 6 0 g de e.tracto de malta en 1 erlenme6er en los cuales se inocularon con , cuadros de 4.4 cm de la cepa obtenida pre!iamente, en cada erlenme6er' @os erlenme6ers se mantu!ieron en el s9eaLer por 4- das a 0+NC 6 4,- rpm 9asta obser!ar la 3ormaci7n de abundantes pellets' Posterior a la obtenci7n de los pellets, se procedi7 a la inoculaci7n de stos en trigo, el cual 3ue pre!iamente esterili=ado 6 se utili=7 en proporciones de 1-- g en (-- ml de agua en bolsas de polipropileno, las bolsas con el trigo se lle!aron al autocla!e a 404OC 6 4, psi por dos 9oras, con una 9umedad del ,-F, en base 9Bmeda' "l da posterior a la esterili=aci7n, se inocularon las bolsas con trigo con los pellets >ue 3ueron obtenidos en el medio l>uido' "ste procedimiento se reali=7 en la c<mara de 3luCo laminar

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transcurrido un mes se procedi7 a colocar la cobertura 8compuesta de tierra 6 Carbonato de Calcio; en cada uno de los tratamientos, esta cobertura a6uda al desarrollo del 9ongo 6 la aparici7n de los primeros carp73oros, debido a >ue protege el micelio de la desecaci7n, proporciona una reser!a de agua para el desarrollo de los primordios 6 3a!orece el crecimiento de la micro3lora especial >ue estimula el proceso de 3ructi3icaci7n 8Pacioni, 4))-;' @a cobertura se prepar7 en un recipiente con poca cantidad de agua 6 se adicion7 una pe>ue:a capa 80 mm de espesor; >ue cubriera solamente la super3icie de los tratamientos' Con el 3in de e!aluar el e3ecto >ue tienen algunas de estas !ariables como lo son e3iciencia biol7gica, el rendimiento, la precocidad de coloni=aci7n 6 la cantidad de alcaloide presente en el 9ongoE se reali=7 un dise:o de e.perimentos de dos 3actores 8sustratos s7lidos 6 precursor >umico;, con 0 ni!eles para el primer 3actor 6 ( ni!eles para el segundo 3actor, se encuentra un total de 2 tratamientos 8tabla 4; los cuales tambin se reali=aron por triplicado' "ste dise:o de e.perimentos permite conocer por medio de un modelo matem<tico, >ue !alores de los 3actores presentan la meCor respuesta de acuerdo a los criterios establecidos' #dem<s, estima la super3icie de respuesta en la !ecindad del m<.imo 8o mnimo; local para poder comprender los e3ectos de los 3actores en la respuesta obtenida 8Dean 6 Voss, 4)))E Montgomer6, 0--,;' Tabla 1! Dise:o de e.perimentos para obtenci7n de cuerpos 3ruct3eros'
(ac#$r S&s#ra#$ C$,.$s# Tri)$ C/a,.i0'" 5-- g 5-- g 5-- g 5-- g 5-- g 5-- g 5-- g 5-- g

2.1.&. 'ecoleccin de los cuerpos ruct! eros @a recolecci7n de los cuerpos 3ruct3eros se reali=7 pasados + das de la primera aparici7n de los primordios en los di3erentes tratamientos' @os 9ongos se colectaron mediante un corte trans!ersal cerca de la base in3erior del mismo, sin >ue las 9i3as del 9ongo se !ean a3ectadas, en caso >ue se desee obtener segundas cosec9as' @os especmenes colectados se deCaron secar por ( das al aire libre 6 en oscuridad permanente, debido a >ue la lu= del sol puede llegar a o.idar la Psilocibina presente en el 9ongo 8#nastos et al., 0--,;' 2.1.(. Extraccin de la psilocibina @a tcnica >ue se utili=7 para e.traer la Psilocibina, se encuentra reportada en el artculo HDongos #lucin7genos en el Mercado #lem<n' ?imples Instrucciones para la ".aminaci7n e Identi3icaci7nI de la re!ista $orensic ?cience International por Muss9o33, $' Madea, K' KeiLe , J' 0---' "l cual describe un mtodo poco tradicional en el >ue utili=an el ultrasonido como mtodo de e.tracci7n' "l mtodo propuesto consiste en triturar 4-- mg de 9ongo seco 6 adicionarle ) ml de metanol' @a me=cla es lle!ada al ultrasonido por 40minutos a una temperatura m<.ima de ,-NC, luego la me=cla es 3iltrada 6 el clari3icado es lle!ado al DP@C para la respecti!a identi3icaci7n 6 cuanti3icaci7n de Psilocibina presente en la muestra 83igura (;' @a columna utili=ada es @iC9rosp9er 1-RP&select K 80,-P(mm, ,Qm;, el sol!ente # consiste en 0- mM de RD0PM( 6 el sol!ente K es acetonitrilo' 8Muss9o33, $' et al., 0---;' Para la e.tracci7n reali=ada se utili=aron 0,2 g de 9ongo seco en ,- ml de metanol, debido a >ue en ensa6os pre!ios se comprob7 >ue con la

Tra#a,ie"#$ 4 0 5 (

Tri.#a,i"a -g -'4 g -'0 g -'( g

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cantidad reportada en el artculo, el metanol se e!aporaba completamente sin obtener ningBn resultado en la e.tracci7n del alcaloide de inters'

(i)&ra 1! Cromatogra3a de e.tracci7n de la Psilocibina de P. cubensis 8Muss9o33, $' et al., 0---; 0'4'1 E)aluacin de la presencia de Psilocibina "3iciencia 8DP@C; a los e.tractos de los tratamientos de testigo, -'4, -'0 6 -'( g de triptaminaE con el 3in de 9allar la cantidad del compuesto de inters basado en las <reas obtenidas de los cromatogramas 6 la concentraci7n utili=ada en el est<ndar interno lo >ue corresponde al estudio cuantitati!o de cantidad de Psilocibina presente en las muestras' "l est<ndar interno >ue se utili=7 para reali=ar la cuanti3icaci7n del alcaloide Psilocibina 3ue ca3ena 8trimetil 4,5,+ .antina;, en proporciones de 0, ppm 6 se adicion7 en una relaci7n 4/4 con la muestra de inters para el an<lisis en el DP@C' @a columna utili=ada 3ue @iC9rosp9er 1-RP&select K 80,-P(mm, ,Qm;, el sol!ente # consiste en 0- mM de RD0PM( 6 el sol!ente K es acetonitrilo' 8Muss9o33, $' et al', 0---;' 2.2. +edicin (i)&ra 2! Presencia de Psilocibina en cuerpos 3ruct3eros 2.1.*. Estudio cuantitati)o de la presencia de Psilocibina ?e procedi7 a reali=ar la tcnica de Cromatogra3a @>uida de #lta 2.2.1 +edicin de la E iciencia ,iolgica (E,) "sta unidad de medida da una in3ormaci7n precisa cuando se tiene el sustrato 6a esterili=ado en los blo>ues respecti!os' Igualmente constitu6e la

"l mtodo >ue se utili=7 para reali=ar la e!aluaci7n cualitati!a de la presencia de Psilocibina 3ue la cromatogra3a de capa 3ina, utili=ando como agente re!elador el reacti!o de Dragendor33, la cual da positi!a a la presencia del alcaloide mostrando una coloraci7n naranCa&marr7n 8#rango, 0--0;' Mtro mtodo para determinar la presencia de Psilocibina es directamente sobre el 9ongoE se 9ace una presi7n 3uerte en el pie o estpite 8magulladura; re!elando una coloraci7n a=ul tpica de la presencia de Psilocibina en el 9ongo 83igura ,;'

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base para establecer el rendimiento 8@eat9am 6 ?tal9am, 4)2+;'

tratamientos 8llamados a menudo unidades e.perimentales; sea lo m<s uni3orme posible' Por lo tanto, este dise:o e.perimental es completamente aleatori=ado 8Montgomer6, 4))4;'

2.2.2 +edicin del 'endimiento Da idea del <rea >ue se necesita para mantener una cantidad determinada 6 constante de producci7n' "sta medida permite establecer los c<lculos te7ricos para una producci7n a escala 8@eat9am 6 ?tal9am, 4)2+;'

3.

Res&l#a%$s + %isc&si'"

3.1. "ustrato de trigo "l micelio del 9ongo 3ue coloni=ando el sustrato correctamente durante la primera semana despus de 9aberlo inoculado 6 posteriormente se obser!7 contaminaci7n en todos los tratamientos, la cual 3ue progresi!a en el tiempo' Por esta ra=7n se descart7 el sustrato, puesto >ue no se obser!7 posibilidad alguna de propagaci7n del micelio debido a su alta cantidad de contaminantes 83igura 1;'

2.2.3 +edicin de Precocidad de $oloni-acin "s el tiempo transcurrido entre el da de la inoculaci7n de la semilla en el sustrato 6 el da en >ue aparecen los primeros carp73oros 8primordios; 8@eat9am 6 ?tal9am, 4)2+;' 2.2.& +edicin de $uanti icacin del alcaloide Da idea de la cantidad de alcaloide presentes en las muestras obtenidas en la e.tracci7n reali=ada en el ultrasonido 6 e!aluadas en el DP@C 8Dellacassa, 0--0;'

(i)&ra 3! Tra#a,ie"#$s c$"#a,i"a%$s c$" Pe"icilli&, e" s&s#ra#$ %e #ri)$ @a contaminaci7n del sustrato no permiti7 obtener los su3icientes resultados para determinar las !ariables de respuesta 8e3iciencia biol7gica, rendimiento, precocidad de coloni=aci7n 6 cantidad de alcaloide;, >ue solo se pueden medir despus de la cosec9a, compararlas estadsticamente 6 determinar el meCor tratamiento' 3.2. $ompost de champi%n "l compost de c9ampi:7n, pre!iamente desin3ectado por pasteuri=aci7n, produCo carp73oros en la ma6ora de los tratamientos, e.cepto 0 rplicas de testigos 8- g de triptamina; 6 en una rplica con -'( g de triptaminaE por tal ra=7n se puede a3irmar >ue ste

Donde ?I es est<ndar interno 2.3. .n/lisis estad!stico "l an<lisis estadstico se reali=7 por medio del ?o3tSare ?tatgrap9ics plus ,'4 basado en un an<lisis de !arian=a 8#TMV#;' "ste modelo se denomina an<lisis de Varian=a de clasi3icaci7n en un sentido por>ue solo se in!estiga un 3actor' #dem<s se re>uiere >ue el e.perimento se realice en orden aleatorio, de manera >ue el medio ambiente en el >ue se usan los

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sustrato es adecuado para obtener cuerpos 3ruct3eros del 9ongo P' cubensis' 3.2.1 0ariables cuantitati)as e)aluadas en la produccin de cuerpos ruct! eros Tabla 2! "3iciencia biol7gica, Rendimiento 6 Precocidad de coloni=aci7n para los tratamientos con cosec9a
Variables Tes#i)$ %e R* Res.&es#a R1 R2 "3iciencia Kiol7gica - +'0( 8F; Rendimient o 8gAcm0; Precocidad de Coloni=aci 7n 8das; %ama:o de pleo 8mm; -'40!1 ) %e Tri.#a,i"a R1 R2 R* 2'4+ 5'55 0'--

causados por el comportamiento de cada rplica 6a >ue no todas presentaron aparici7n de carp73oros ni la misma cantidad de cuerpos 3ruct3eros por <rea de sustrato en el mismo perodo de tiempo' Tabla 1! Promedio de los tratamientos para las !ariables de respuesta
Variables %e Res.&es#a "3iciencia Kiol7gica 8F; Rendimiento 8gAcm0; Precocidad de Coloni=aci7n 8das; Tes#i)$ 0!1 ) %e #ri.! (',0!2 ) %e #ri.! 2'00 0!1 ) %e #ri.! 0'((

+'0(

-'4-

-'-1

-'40

-'-5

-'44

-'-,

-'-5

5-'--

5)'--

(-'--

01'55

(-

5+

5)

(4

+'+

2'(

1')

3.2.2 .n/lisis estad!stico para tratamientos 3.2.2.1 Precocidad de coloni-acin

los

0!2 ) %e Variables Tri.#a,i"a %e Res.&es#a R1 R2 R* "3iciencia 2'Kiol7gica ,'-- 44'1 8F; Rendimient -'4 o 8gAcm0; 4 Precocidad de Coloni=aci 7n 8das; -'-+ -'41

0!1 ) %e Tri.#a,i"a R1 5'1+ R2 5'1+ R* -

-'-,

-'-,

(-

(-

(-

5)

(-

%ama:o de 1'5 pleo 8mm;

+'4

,')

+'0

1'4

"l promedio reali=ado a los di3erentes tratamientos con respecto a las !ariables de respuesta 8tabla 5;, muestra >ue el tratamiento con -'0 g de triptamina present7 ma6or e3iciencia biol7gica 6 rendimiento comparados con los dem<s tratamientos' "sto puede deberse a >ue todas las rplicas del tratamiento con -'0 g de triptamina presentaron cuerpos 3ruct3eros' %ambin la !ariaci7n de los resultados obtenidos en los promedios pueden ser

@os resultados e!idenciados en el gr<3ico 4, muestran >ue los tratamientos presentaron aparici7n de los primeros carp73oros en tiempos mu6 similares' ?e obser!a una similitud en los tratamientos de -'4 6 -'0 g de triptamina debido a >ue se presentaron carp73oros en todas las rplicas reali=adas mientras >ue los tratamientos testigo 6 -'( g de triptamina no presentaron carp73oros en todas sus rplicas 8tabla 0;' %ambin se e!idenci7 >ue la coloni=aci7n completa del micelio en el sustrato se present7 5- das despus de la inoculaci7n de la semilla' $inalmente la precocidad de coloni=aci7n de los tratamientos en este trabaCo tu!o una duraci7n alrededor de (- das'

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Means and ),,- Percent @?D Inter!als

(2 52

3.2.2.3 E iciencia ,iolgica Para la e3iciencia biol7gica los meCores resultados obtenidos, igualmente >ue para el rendimiento, 3ueron los de los tratamientos de -'4 6 -'0 g de triptamina, con (',6 2'00F respecti!amente 8tabla 5;, 6a >ue esta !ariable 8e3iciencia biol7gica; constitu6e la base para establecer el rendimiento 6 por ende conocer cu<l es la cantidad de triptamina m<s adecuada >ue 3a!ore=ca el crecimiento del 9ongo' Igual >ue en el estudio reali=ado en el promedio del rendimiento del tratamiento de testigo, este presenta un resultado poco preciso debido a >ue solo se obtu!ieron resultados en una de las tres rplicas' Para las !ariables rendimiento 6 e3iciencia biol7gica, no se encuentra una di3erencia signi3icati!a 8gr<3ico 0 6 5;'

Precocidad de Coloni=aci7n

02 42 2 &0 -,4 -,0 -,(

%riptamina
Gr45ic$ 1! @?D para la precocidad de coloni=aci7n por tratamiento

3.2.2.2 'endimiento Para la !ariable rendimiento se encuentran algunas di3erencias en los resultados obtenidos 8tabla 0;' To se e!idencian di3erencias signi3icati!as entre los tratamientos del testigo 6 -'( g de triptamina debido a >ue en stos no se presentaron cuerpos 3ruct3eros en algunas de sus rplicasE ocurre lo contrario con los tratamientos de -'0 6 -'( g de triptamina por>ue stos si presentaron un crecimiento micelial 6 aparici7n de cuerpos 3ruct3eros en todas sus rplicas, por lo cual se con3irma el estudio reali=ado pre!iamente donde los tratamientos de -'4 6 -'0 g de triptamina muestran un ma6or rendimiento comparado con los dem<s 8gr<3ico 0;'

Means and ),,- Percent @?D Inter!als

4( 44 2

"K

, 0 &4 -,4 -,0 -,(

%riptamina
Gr45ic$ *! Inter!alo @?D para "3iciencia biol7gica por tratamiento 3.3. Estudio cuantitati)o de presencia de Psilocibina la

Gr45ic$ 2! Rendimiento promedio para los tratamientos

?e reali=7 la tcnica de Cromatogra3a @>uida de #lta "3iciencia 8DP@C; con el 3in de 9allar la cantidad del compuesto de inters basado en las <reas obtenidas de los cromatogramas 6 la concentraci7n utili=ada en el est<ndar interno lo >ue corresponde al estudio cuantitati!o de cantidad de Psilocibina presente en las muestras'

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@a corrida del est<ndar interno se reali=7 con el obCeti!o de obser!ar el tiempo de retenci7n 6 el <rea presentada por la muestra de ca3ena 83igura +;, obtenindose un tiempo de retenci7n de 40'202 min con un <rea de 405)') mm0' @os resultados obtenidos del DP@C en los di3erentes tratamientos 3ueron satis3actorios 6a >ue el tiempo de retenci7n del alcaloide Psilocibina se dio de ( a 1 minutos 8tabla (;'

literatura por Gart= 84)2); 6a >ue a ma6or cantidad de triptamina utili=ada ma6or cantidad de alcaloide presente en el 9ongo' # pesar de no conocer el procedimiento del autor 8Gart=; de la adici7n del precursor >umico en los tratamientos, la tcnica utili=ada en el desarrollo, >ue consisti7 en me=clar el precursor >umico con el sustrato, 3ue la m<s adecuada 8tabla ,;'
Variables %e Res.&es#a Urea de Psilocibina 8mm0; Tes#i)$ 061 ) %e 062 ) #ri.! %e #ri.! 061 ) %e #ri.!

()+'5-

,,-'0-

4541'+-

4524'--

7rea %e Tra#a,ie"#$s Psil$cibi"a 8,,29 %estigo -'4 g de triptamina -'0 g de triptamina -'( g de triptamina ()+'5,,-'04541'+-

Tie,.$ %e re#e"ci'" 8,i"9 ('+01 ,'4)2 ('+)0

Urea de Ca3ena 8mm0; Concentraci7n Ca3ena 8ppm; Concentraci7n Psilocibina 8ppm; F de Psilocibina

10)'4-

12('(-

+-2'2-

112',-

0,'--

0,'--

0,'--

0,'--

4)'+1

0-'4-

(1'((

,4'1,

4524'--

('+1)

-'-5,5

-'-5,)

-'-20)

-'-)00

Tabla 1! Ureas 6 tiempos de retenci7n obtenidos de los cromatogramas por tratamiento @os resultados de los cromatogramas 83iguras 2, ), 4-, 44; muestran una di3erencia en sus <reas, esto se debe a >ue los tratamientos 3ueron sometidos a di3erentes cantidades de precursor >umico, lo cual se puede obser!ar en los cromatogramas donde 9ubo un aumento de los picos de las <reas correspondientes al alcaloide Psilocibina' "l precursor >umico utili=ado 8triptamina; arroC7 el resultado esperado, puesto >ue al reali=ar la cuanti3icaci7n del alcaloide Psilocibina en los tratamientos por medio del est<ndar interno 8ca3ena;, se obtu!o un aumento en su concentraci7n' @os resultados con3irman lo reportado en la

Tabla 2! Concentraci7n de Psilocibina 8F;

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(i)&ra :! "st<ndar interno de la ca3ena

(i)&ra ;! Cromatograma tratamiento testigo

(i)&ra <! Cromatograma tratamiento -'4 g de triptamina

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(i)&ra 1! Cromatograma tratamiento -'0 g de triptamina

(i)&ra 11! Cromatograma tratamiento -'( g de triptamina cuerpos 3ruct3eros del 9ongo P' cubensis debido a >ue es mu6 1! C$"cl&si$"es propenso a presentar contaminaci7n en las etapas tempranas de la siembra' ?obre el compost de c9ampi:7n se present7 una adecuada propagaci7n 6 @as di3erentes concentraciones de crecimiento del micelio 6 se obser!7 la triptamina utili=adas en el dise:o de presencia de cuerpos 3ruct3eros del e.perimentos, in3lu6en 9ongo P' cubensis, debido a sus signi3icati!amente en el crecimiento propiedades nutricionales 6 a su alta micelial del P' cubensis debido a >ue la resistencia contra di3erentes triptamina en altas concentraciones contaminantes' Por ello se comprueba actBa como in9ibidor del crecimiento 6 >ue este sustrato es el medio de culti!o retrasando la aparici7n de los m<s propicio para el desarrollo del P' carp73oros, 6a >ue la energa se utili=a cubensis' en la producci7n del metabolito secundario 8Psilocibina; "l sustrato de trigo a pesar de tener un alto contenido nutricional, no es un sustrato adecuado para la obtenci7n de

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@os tratamientos >ue arroCaron rendimientos m<s altos, son a>uellos >ue presentaron una ma6or cantidad de cuerpos 3ruct3eros por el <rea ocupada en el sustrato 9Bmedo, en donde los tratamientos de -'4 6 -'0 g de triptamina tu!ieron un comportamiento ma6or en cuanto a la cantidad de 9ongos cosec9ados comparados con los tratamientos de testigo 6 -'( g de triptamina' @os meCores tratamientos en cuanto a la e3iciencia biol7gica son igualmente los tratamientos de -'4 6 -'0 g de triptamina, esto se debe a >ue esta !ariable constitu6e la base para establecer el rendimiento, lo >ue signi3ica >ue estadsticamente no e.isten di3erencias signi3icati!as entre estas dos !ariables de respuesta' @a resoluci7n de los picos obtenidos por DP@C del e.tracto del P' cubensis 3ue ma6or a medida >ue la concentraci7n de triptamina aumentaba en los tratamientos, lo >ue cuantitati!amente se pudo comprobar por medio de la utili=aci7n de un est<ndar interno' Despus de reali=ado el an<lisis de DP@C en cuanto a la producci7n de Psilocibina presente en un tiempo de retenci7n de (&1 min para cada uno de los ensa6os, no se e!idenci7 di3erencia signi3icati!as entre las dem<s concentraciones de triptamina utili=adas' "l precursor >umico utili=ado en el desarrollo de los tratamientos 3ue adecuado, puesto >ue este aument7 en 3orma gradual la cantidad del alcaloide producido intracelularmente por el 9ongo' ?e e!idenci7 >ue a una cantidad de -'( g de triptamina se obtu!o un porcentaCe de Psilocibina de -'-)00 F 8,4'1, ppm;, mientras >ue el porcentaCe obtenido en el e.tracto del testigo para la Psilocibina 3ue -'-5,5 F 84)'+1 ppm;' 2! =ibli$)ra5>a

#T#?%M?, T'E K#RT"%%, T'E P$"$$"R' $' 80--,;' In!estigation into t9e temporal stabilit6 o3 a>ueous standard solutions o3 Psilocin and Psiloc6bin using 9ig9 per3ormance li>uid c9romatograp96' ?cience and Custice, (1/ )4&)1' #R#TGM, J' 80--0;' #lcaloides 6 compuestos nitrogenados' $acultad de >umica 3armacutica' ni!ersidad de #ntio>uia, 1&45' KR#I@M?RV, ?' 80--0;' @os neurotrasmisores/ ?erotinina, en las sustancias de los sue:os' Teuropsico3armacologa' 5a edici7n 3ondo de cultura econ7mica' D"#T, # 6 VM??, Dl' Design and #nal6sis o3 ".periments' TeS VorL/ ?pringer& Verlang' 4)))' I?KT/ -52+)2,144' DM"@@", D' 6 MI%CD"@@, D' 84))0;' ?olid substrate culti!ation' "lse!ier #pplied ?cience, TeS VorL, 5/ 5,' G#R%Z, J' 84)2);' Kiotrans3ormation o3 tr6ptamine in 3ruiting m6celia o3 Psiloc6be cubensis' Planta Medica, ,,/ 0()&0,-' GM%%@I"K, #' 84))+;' Psiloc6bin Production' 0a "dition Ilustrated GRI$$I%D?, R'E RICD#RD?, J'E JMDT?MT, M'E MCC#TT, 'E J"??", R' 80--2; M6stical&t6pe e.periences occasioned b6 psiloc6bin mediate t9e attribution o3 personal meaning and spiritual signi3icance 4( mont9s later' Journal o3 Ps6c9op9armacolog6, 0-/4& 40' D#T"?, R' 84))1;' ?erotonin, Psiloc6bin and bod6 d6smorp9ic disorder' Journal o3 clinical ps6c9op9armacolog6, 41/ 422&4)4' JMT"?, R' 84)20;' %r6ptamine/ a neuromodulator or neurotransmitter in mammalian brain' Progress in neurobiolog6, 4)/ 44+&45)'

COGOLLO, VALENCIA, MORENO, 2010

@"#%D#M, G' 6 ?%#@D#M, R' 84)2+;' GroSt9 parameters 3or gourment and medicinal mus9rooms species, 04/ +2& 24' @"", K'E K#", J'E PVM, K'E CDM", K'E RIM, J'E DJ#TG, J'E V T, J' 80--(;' ?ubmerged cultural conditions 3or t9e production o3 micelial biomass and e.opol6sacc9arides' %9e edible Kasidiom6cete Gri3ola 3rondosa "n=6me and Microbial %ec9nolog6, 5,/ 51)W5+1' MMT%GMM"RV, D' 84))4;' Desing and anal6sis o3 e.periments' "ditorial TeS VorL/ Jo9n Jile6 and ?ons' "dici7n , M ??DM$$, $'E M#D"#, K'E K"IR",J' 80---;' Dallucinogenic mus9rooms on t9e German marLet&simple instructions 3or t9e e.amination and identi3ication' $orensic ?cience International, 445/ 52)&5),' P#CIMTI G' 84))-;' Culti!o moderno del c9ampi:7n' "ditorial De Vecc9i ?'#, 5/ 2-&),' %X@@"Z, J' 80--,;' VaC 6 Dongos #lucin7genos, #spectos Relacionados con su %o.icidad' #!ances en "n3ermera, 00/ )0&4-0'