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RMN Y RAYOS-X

Elucidando la Estructura 3-D de las


Proteinas
Cristalografia de rayos-X
La proteina debe cristalizarse.
Ls estructura elucidada se encuentra empacada
en un cristal y no esta en solucion; sin embargo,
los cristales de las proteinas tienen un elevado
contenido de agua.
Usualmente no hay limite en el tamao de las
proteinas.

Resonancia Magnetica Nuclear (RMN)
Estudio de la estructura en solucion.
Se puede utilizar para estudiar las dinamicas.
Solamente posible en estos momentos para
proteinas con una M
r
de < ~50,000.
Cristalografia de Rayos-X Utilizada para
Elucidar las Estructuras 3-D de las Proteinas
Max Perutz con el
modelo de la
hemoglobina y John
Kendrew con el modelo
de la mioglobina en 1962
Cristalografia de Rayos-X para Estudiar
las Estructuras de las Proteinas
Difracccion
de rayos-X
Mapa de
densidad
Electronica
Cristal de la Proteina
Estructura
3-D de las
proteinas

Resonancia Magnetica Nuclear (RMN)
Comparasion de las Estructuras de Rayos-X y RMN
del Inhibidor de la Tripsina Pancreatica Bovina
Ambos metodos cristalografia de
rayos-X y metodos de RMN
usualmente generan estructuras
similares.

Proteinas cristalizadas generalmente
adoptan una conformacion similar a
la estructura promedio en solucion de
RMN.
Movimientos Moleculares en la Proteinas
Las proteinas no son estructuras estaticas, si no moleculas
altamente dinamicas:
Vibraciones y oscilaciones
Cambios conformacionales grandes tanto en los elemntos
de estructura secundaria como en todo el dominio.

Estudiando las Dinamicas de Proteinas
RMN o metodos de menor resolucion (e.g., dicroismo
circular, espesctroscopia de absorcion, espesctroscopia
de fluorescencia, intercambio de hidrogeno por EM)
son utiles para estudiar dinamicas en solucion.

Cristalografia de Rayos-X no es util para estudiar
dinamicas, aunque es la tecnica mas poderosa para
determinar la estructura de proteinas. Sin embargo, si
puede formar cristales con la proteina en diferentes
conformaciones (e.g., proteina enlazada al ligando o a
el sustrato vs. una proteina libre), puede compara las
estructuras en ambos estados.