Beauveria bassiana as a Pathogen

of the Mexican Fruit Fly (Diptera: Tephritidae) Under Laboratory Conditions

Abraham Azael Morales Jurez 1422745 472

 En Mxico, Anastrepha ludens

Se usan insecticidas como el malation No se pudo controlar con insecticidas y cuarentenas

Uso de microorganismos como alternativa Beauveria bassiana.

Introduccin

 Medir el efecto de varias cepas de hongos usados extensamente Beauveria bassania sobre Anastrepha ludens bajo condiciones de laboratorio.

Objetivos

 Material biolgico: 8 cepas de B. bassiana. 1 de Brasil, 1 de Ecuador y 6 de Mxico Medio Agar sabourad dextrosa (SDA) [40 g dextrosa, 10 g
peptina, 15 g agar, 10 g extracto de levadura y 40 mg de tetraciclina]

en 1000 mL de agua destilada A. ludens de 3 das de adultas, larvas de 6 das con dieta artificial y de 8 das de pupa.

Materiales y metodos

Se comprob su viabilidad.

Material y mtodos

 Se comprob su viabilidad con el mtodo de microcultivo (Jimenez, 1989).Estos fueron preparados pasando medio de SDA sobre un porta objetos e inoculado con el hongo. El inoculo se preparo suspendiendo 0.5 mg en 5 mL de agua destilada, se mezclo con 0.025% de adherente/dispersante Triton X100 en un tuvo de vidrio con rosca y se homogenizo en vortex (11,000 x g) x 45 segundos. Se tomaron 0.3 mL de conidia (106 conidia x mL). Despus el porta objetos se coloc dentro de una caja de petri con papel filtro y se incubo x 36 hrs ( 27C, 5% de RH, 12:12 hrs de fotoperiodo) Se observ la germinacin bajo microscopio entre 100 - 200 conidia y se consideraron viables si poseian al menos 90% de germinacin.

Material y Mtodos

Material y mtodos

Patogenicidad a la larva y pupa. Se prepar una solucin de cada B. bassiana con una concentracin de 1 - 1.6 x 108 conidias /mL. 1g de conidias en 100 mL de agua estril plus con 0.025% de glicerina como dispersante y homogeneizador en un frasco de vidrio con un agitador magntico. 250 larvas y 250 pupas fueron lavadas c/agua destilada y colocadas en cajas de petri separadas c/u. Grupo de 50 individuos fueron inoculadas con 2.5 mL de solucin del hongo x 30 seg para verificar impregnacin. Control de 50 individuos igual inoculadas con agua esterilizada y dispersante. 5 repeticiones de c/tratamiento. C/tratamiento fue dividido en 2 grupos: 1ero.- colocados en cajas de petri con aceite esteril (20g/caja), 2do.- colocado en cajas de petri con dieta para larvas (20g/caja), bajo las condiciones antes mencionadas y checadas diariamente para mortalidad. Posteriormente las larvas y pupas muertas fueron colocadas en una cmara para estimular al hongo a produjera esporas.

Material y Mtodos Patogenicidad de B. bassiana a A. ludens adulto femenino.

Para probar su patogenicidad se tuvieron que realizar bajo condiciones diferentes y mezcladas a partir de las que se tenia: 8 tratamientos (8 cepas) y un control (sin hongos). 50 individuos x tratamiento y se repite 5 veces (250 individuos x tratamiento). En c/tratamiento las moscas adultas fueron rociadas con 0.5 ml de suspensin con el hongo 1x10*8 conidia/ml x 30 seg. Las moscas rociadas fueron puestas en cajas de petri con papel absorbente para absorber el exceso de humedad y la suspensin del hongo. Se hicieron grupo de 50 moscas y se colocaron dentro de botes de vidrio (1 lt) bajo condiciones ya mencionadas. Esas mosquitas fueron alimentadas diariamente con hidrolizado de protena y azcar. Se documento las muertas despus de 10 das. Las moscas muertas se colocaron en una cmara para estimular al hongo a la esporulacin.

Material y Mtodos LT50 tiempo medio letal.

Se calcul para cada una de las cepas. Se preparo una solucin con B. bassiana, 1g de conidia en 100ml de agua destilada y estril, se mezclo con agua destilada con 0.025% de glicerina en un frasco de vidrio y se homogenizo con un agitador magntico. Se hicieron diluciones (10*-1, 10*-2, 10*-3). Se us un mtodo similar al de patogenicidad de B. bassiana y en A. ludens, con hidrolizado de protenas, azcar (comida) y agua, bajo las mismas condiciones antes mencionadas. La mortalidad fue documentada diariamente y las moscas muertas fueron puestas en una cmara para estimular a esporulacin. Dando la verdadera mortalidad, usando la formula de Abbotts. Los adultos fueron los mas vulnerables.

 Dosis letal media LC50.

Usando cepas de B. bassiana mas virulentas vs A. ludens. Dosis de 105, 106, 107 y 108 conidias/mL y 1 control sin conidias. Para cada dosis se usaron 250 individuos, con 3 repeticiones c/u (750 individuos x cepa). La concentracin de conidias se midi con hemocitometro, se realiz de manera similar que el anterior.

Anlisis estadstico.
No se realizo anlisis estadstico para la pupa porque no hubo esporulacin. La patogenicidad en larvas y adultos se compar usando anlisis de varianza seguido por un anlisis del mtodo de tukey. Los datos obtenidos del bioensayo para determinar LC50 y LT50 se corrigieron usando la formula de Abbotts.

Material y Mtodos

 Patogenicidad en larvas Poca patogenicidad 2-8% de mortalidad teniendo como substrato aceite y de 1-4% teniendo a las larvas en dieta. 5 das despus las larvas se convirtieron en adultos 92-98% (larvas en aceite estril), 96-100% (larvas en dieta) control (100%). No hubo diferencia significativa en el desarrollo de adultos (tabla 1). Es posible que estas larvas produjeran sustancias que inhibieran el crecimiento del hongo como el acido caprlico encontrado en larvas de Heliothis, Zea, Psodoptera.
Los bajos niveles de patogenicidad de las cepas de B. bassiana sobre A. ludens puede deberse por la extensa esclerotizacin de la larva, la que incluye a todas las partes a excepcin de la cabeza, tambin a la naturaleza de la cutcula x su densidad, grosor y la esclerotizacin.

Resultados y Discusin

Tabla 1

 Patogenicidad en la pupa No afecto el patgeno a la pupa. No se desarrollo el micelio en cuerpos muertos y los adultos se desarrollaron normalmente. Otros trabajos con mosca tse tse mostraron una mortalidad de 2-8 %. En Ceratitis Capitata se uso M. anisopiliae, 65 % de las pupas se infectaron. La pupa posee una cutcula gruesa, escamosa y completamente esclerotizada.

Resultados y Discusin

 Patogenicidad en etapa adulta. Todas las cepas infectaron Etapa mas vulnerable, 82 100% de mortalidad 1.2 1.6x108 conidia/mL (Tabla 2). Mas txicos Bb16, Bb24 y Bb26 mortalidad de 100%, 98% y 98%. RESULTADOS SIMILARES Watson y Geden reportaron 99% y 94-100% de mortalidad en mosca casera y domstica L. respectivamente. Barson report que la mosca casera es altamente susceptible a B. bassiana.

Resultados y Discusin

Tiempo letal medio LT50. Promedio 4.4 d. Mas corto de 2.8d de Bb16 y mas largo de 5.9 d Bb7 No existe informacin previamente documentada sobre los efectos de este hongo sobre este dptero. Aidroos y seifert: 1.2 5.4 das despus de la inoculacin del mosquito con M. anisopliae sobre otros dipteros.

Resultados y Discusin

 Concentracin letal media LC50.

Mas virulenta Bb16, despus Bb24 y Bb26, con 5.03x105, 3.12x106 y 9.07x106 respectivamente. Las diferencias entre la virulencia podria deberse a la produccin de enzimas que son indispensables para infectar al husped. Similitudes en resultado Ostrinia furnacalis Guenue inoculada con B. bassiana obteniendo LC50 de 6.6x106 conidia/ml.

Resultados y Discusin

 B. bassiana en adultos femeninos de A. ludens. Despus de muertas las mosquitas se observaron y a las 24 hrs. Se estimularon mediante la humedad y la temperatura dentro de la cmara. Las moscas infectadas se colorearon de rosa o rojo y el hongo salio de las partes blandas del cuerpo (base de las piernas, base de las alas, abdomen y cuello. A las 72 hrs recubrimiento total del cuerpo por el hongo se observo la aparicin de un micelio indicador de inicio de la esporulacin Esporulacin completa a las 96 h. Bb16 (74.7%), Bb26 (67.2%) y Bb24 (66.4%) cuerpos que fueron recubiertos con la espora.

Resultados y Discusin

 Baker et al.: Reporto que B. bassiana infecta naturalmente a A. ludens y menciono igual la coloracin caracterstica del recubrimiento del hongo y su posterior formacin del micelio.

Resultados y Discusin

 Dentro de las limitaciones del laboratorio se sugiere usar a B. bassiana como un posible candidato para el control de A. ludens.

Conclusin