Análisis Instrumental

Tema 1: Metodologa Analtica
Anlisis Instrumental I
TEMA 1:
METODOLOGA ANALTICA
1.1. INTRODUCCIN
Qumica analtica: estudia el conjunto de principios, leyes y trminos cuya finalidad es la determinacin de la composicin qumica de una muestra natural o artificial. Este conjunto de leyes y trminos utilizados para dicho fin, constituyen el anlisis qumico. La qumica analtica se divide en dos ramas principales: Cualitativa Qu hay ? Cuantitativa En qu cantidad ?
El anlisis cualitativo determina que tipo de elementos o grupos qumicos se encuentran en la muestra analtica. El anlisis cuantitativo se refiere a la determinacin de las cantidades de los mismos en la muestra. Sern pues, mtodos de la qumica analtica, aquellos procedimientos que permitan conseguir los fines de determinacin e identificacin.
1.2. PROCESO ANALITICO

El proceso analtico sigue una secuencia lgica de etapas: 1.2.1. Planteamiento del problema Un primer paso que debe preceder al mtodo analtico, es una definicin clara del problema analtico, de manera que, el mtodo de trabajo seleccionado dependa de la respuesta a las siguientes cuestiones: a) Intervalo de concentracin de trabajo: Puede limitar el nmero de mtodos posibles. A menor concentracin ms sensible a de ser el mtodo empleado. b) Qu grado de exactitud se requiere ? Es preciso tener en cuenta que el tiempo necesario para llevar a cabo un trabajo, aumenta de forma exponencial con la exigencia de mayor exactitud, as, para mejorar la fiabilidad de un resultado desde, por
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ejemplo (desde un 2 % hasta un 02 %), el tiempo consumido por el analista puede aumentar en un factor de 100 o ms, lo que implica que, el nivel de exactitud exigido, con frecuencia, determina el proceso analtico a seguir. c) Qu otros componentes hay en la muestra ? Para elegir un mtodo de determinacin de una ms especies, es necesario saber, que otros compuestos lo acompaan, a fin de identificar ciertas interferencias, es posible que tengamos una muestra a parte de preguntar A y B, es necesario C. d) Qu propiedades fsico-qumicas tiene la muestra ? El qumico tambin debe considerar el estado fsico de la muestra para determinar se debe homogeneizarla, o si puede alterarse su composicin en las condiciones de laboratorio, as como, el tratamiento ms adecuado para su disolucin sin prdida de analito. e) Cuntas muestras se analizan ? Es un importante criterio en la seleccin de un mtodo, ya que: Para un gran nmero de muestras se puede emplear un tiempo considerable. El coste de estas operaciones se repartir entre todas las muestras. Para un nmero reducido de muestras, ser menos costoso un procedimiento ms largo y tedioso, que suponga un mnimo de estas operaciones. Ejemplo: Dos clientes, quieren determinar el porcentaje de Hg en la muestra de cada uno: A Quiere conocer con gran exactitud el contenido en Hg en un cargamento de mineral donde Hg es compuesto mayoritario, por lo que, podr proveer al laboratorio muestra en cualquier proporcin. B Contenido en Hg en una moneda antigua con Hg a un nivel de ppm, exigiendo que no sea daada la moneda. An cuando el problema es el mismo, el mtodo analtico tendr grandes diferencias:
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A Podrn utilizarse mtodos gravimtricos muy exactos, pero que destruyen la muestra. B Ser necesario someter la muestra a un bombardeo de e- , seguido de espectroscopia con rayos , de manera que no se destruya la muestra, aunque el mtodo es muy costoso.
1.2.2. Obtencin de la muestra para el anlisis

Muestra: porcin pequea seleccionada para su examen, de una cantidad de material que es mucho mayor. A la hora de recoger la muestra es de especial atencin que esta sea representativa de una mucho mayor. Su composicin debe reflejar lo mejor posible una porcin representativa de todo el material. Dentro de la muestra se hayan distribuidos constituyentes, es decir, las sustancias que trataremos de determinar. Segn el porcentaje de estos en la muestra, hablamos de: Constituyentes principales: > al 1% del total. Constituyentes secundarios : (01 1) % del total. A nivel traza: < al 01% del total. Ultratrazas: a nivel de ppm.
La cantidad disponible de un constituyente para un procedimiento analtico elegido, depende tanto del nivel del constituyente como del tamao de la muestra. As, segn el tamao de la muestra sea macroscpica, semimacroscpica, semimacroscpica, microscpica, submicroscpica o ultramacroscopica, las cantidades del constituyente se hacen cada vez menores se utilizan tcnicas analticas cada vez ms sofisticadas. Mtodo Macroanlisis Semimicroanlisis Microanlisis Ultramicroanlisis Peso de muestra (mg) > 100 10 100 1 10 <1 Volumen de muestra (ml) > 10 1 10 01 1 < 01
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Muestreo: proceso por el cual se obtiene una fraccin representativa siendo a menudo esta etapa la ms difcil de todo el procedimiento analtico, y la que limita la exactitud de todo el procedimiento. Conceptos: Lote: material completo del que se toman las muestras. Ej.: todo el agua de un lago. A menudo, los lotes estn formados por unidades mustrales. Ej.: Cajas individuales de un camin. Muestra Bruta: se obtiene del lote para anlisis o almacenamiento. Suele seleccionarse de modo que sea representativa del lote y su eleccin es crtica para realizar un anlisis vlido. De la muestra bruta se toma una muestra de laboratorio. Muestra de laboratorio: ms reducida. Debe tener exactamente la misma composicin de la muestra bruta. Para realizar los anlisis individuales se emplea alicuotas o porciones de prueba de la muestra de laboratorio.
La identificacin de la poblacin de la que debe obtenerse la muestra es inmediata, mientras que la obtencin de la muestra bruta, muestra de laboratorio, no son sencillas, y pueden requerir ms esfuerzo e ingenio que cualquier otra etapa del esquema general de todo el anlisis. Cuando las muestras son homogneas (igual composicin en todas sus partes), la variacin en los resultados debe reflejar solamente, la habilidad del analista y la variabilidad inherente del mtodo. En la realidad las muestras suelen ser heterogneas (distinta composicin en sus partes), con lo que el problema se complica en gran medida. Cuando se analiza un material heterogneo, el resultado final depende de la forma en que se elijan las muestras del material, y de cmo se trate la muestra una vez colectada. En cuanto a las estrategias de muestreo: Muestreo de caso homogneo: situacin ms fcil. Una vez obtenido, este se divide en unidades, y aleatoriamente se analizan distintas unidades. Se obtienen resultados ms precisos si se mezclan la n unidades, y se realizan n anlisis de los grupos mezclados, que analizando las n unidades separadamente.
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Muestreo de caso no homogneo: tomamos varias muestras de cada uno de los estratos, y de cada una de ellas tomamos otro par, se mezclan y as se obtiene la muestra representativa para el anlisis.
De modo general, se describen algunos de los mtodos de slidos, lquidos y gases: 1. Muestreo de Slidos: Slido en fragmentos o partculas: si las muestras consisten en lotes discretos se toman cogiendo una seleccin aleatoria de dichos lotes. Cuando existen variaciones dentro de los lotes porque ha tenido lugar una estratificacin o segregacin durante el transporte. Ej.: Un vagn con carbn en el que las partculas pequeas se depositan en el fondo. Se toma una muestra representativa del lote, o bien se convierte este lote en una corriente de material, tomndose las muestras aleatoriamente. Slido en forma compacta: las muestras de metales y aleaciones se obtienen por limaduras, trituracin o taladro. En general no es seguro suponer que todos los trozos de metal obtenidos de la superficie son representativos del total, por lo que se debe muestrear el interior del slido. En el caso de barras o lingotes, se puede serrar la pieza, y tomar el serrn acumulado, o bien, se puede taladrar al azar, tomando como muestras las virutas formadas. El taladro debe atravesar el bloque o llegar a la mitad desde los lados opuestos.
2. Muestreo de Lquidos: Homogneos: se toman aleatoriamente distintas muestras como en el caso de los slidos. Con materiales en suspensin: se pueden tomar muestras a distintas profundidades manteniendo en constante agitacin el conjunto. Frecuentemente se utiliza una sonda llamada ladrn toma muestras, la cual se sumerge a la profundidad que se desee y se habr para recoger la muestra. De esta forma se pueden obtener muestras a distintas profundidades, y por mezcla de todas ellas obtener una muestra representativa, ya que a veces es difcil la agitacin.
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Muestreo de gases: Gas libre en gran cantidad: llenar un tubo con el gas con desplazamiento del aire que en principio contienen estos recipientes, que despus se cierran por medio de llaves o sellando sus extremos. Gas de forma inaccesible al operador: ej.: muestra de gases existente en un horno o en una tubera: s prctica un orificio en las paredes del horno, y se introduce en el un tubo provisto de una camisa de refrigeracin que conduce el gas al aparato de anlisis (anlisis automtico), o que el gas valla a una ampolla que va a contener la muestra.
4. Errores de muestreo Los grandes errores son debidos con ms frecuencia a un muestreo incorrecto que a una aplicacin del mtodo no adecuado. Entre los qumicos analticos, existe un dicho popular: A menos que se conozca con certeza la historia completa de una muestra cualquiera, el analista har bien en no perder su tiempo analizndola . La libreta del analista debe contener informacin de cmo se colecta y almacena la muestra, antes de describir como se realiza el anlisis. Las causas ms frecuentes de error son: Que el material se encuentre estratificado y la toma que se realiza no tenga en cuenta la disposicin de los estratos, es decir, que no estn proporcionalmente representados. Que la propiedad analtica que se mida, vare de forma no uniforme desde la superficie hasta el centro. Que en emulsiones o suspensiones durante el transporte se produzca una separacin de partculas, no siendo posible agitar todo el volumen para obtener una muestra homognea.
Para errores aleatorios, la desviacin estndar global (S0), se relaciona con la desviacin estndar del proceso analtico (Sa) y la desviacin estndar global del muestreo (Sm): So2 = Sa2 + Sm2
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En la mayora de los casos la varianza del proceso analtico (Sa2) se conoce a partir de medidas repetidas sobre una nica muestra de laboratorio, por lo que, Sm se puede calcular a partir de medidas de So, de una serie de muestras procedentes de distintas muestras brutas. Younden, demostr que cuando la incertidumbre de la medida Sa es menor que un tercio de la incertidumbre del muestreo (Sm), no tiene sentido mejorar la incertidumbre de la medida.
Ejemplo: Sm = 10% S Sa = 5% : So = ( 012 + 0052 )05 = 011 = 11% S Sa = 1% :
So = ( 012 + 0012 )05 = 010 = 10%
1.2.3. Preparacin de materiales

La palabra reactivo se refiere a la sustancia o mezcla qumica usada para un propsito determinado en un procedimiento de anlisis. En la mayora de laboratorios lo normal es emplear reactivos de grado analtico, reactivos de gran pureza en los que el nivel de impureza es muy bajo, variando entre ( 10-2 10-4 ) % , ya que la presencia de impurezas puede tener efectos serios en el anlisis. Sin embargo, es ms importante preocuparse del ingrediente activo utilizado, es decir, la riqueza de un patrn determinado en la sustancia activa. Otros factores que deben ser considerados en la preparacin de un reactivo analtico disuelto, son su exactitud y su estabilidad. Para muchas aplicaciones no es necesario preparar una solucin con gran exactitud. Ej.: Reactivo en exceso, mientras que por ejemplo, en valoraciones la incertidumbre no debe ser mayor al 01 %. En cuanto a la estabilidad, algunas soluciones de reactivos se descomponen en cuestin de horas, por lo que, deben ser preparadas justo antes de su empleo mientras que otras son estables durante aos. Antes de llevar a cabo un anlisis se debe tener confianza en el procedimiento. Para ello el procedimiento completo se ha de llevar a cabo mediante estndares de referencia,
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similares en composicin a la muestra desconocida, y adems contienen una cantidad exactamente conocida del constituyente a ser determinado.
1.2.4. Tratamiento de la muestra

Antes de llevar a cabo el anlisis es necesario homogeneizar la muestra bruta si se trata de un lquido, un polvo fino o una suspensin puede ser suficientemente homognea para obtener de ella una muestra de laboratorio. Si es un slido debe pulverizar a fin de que la muestra de laboratorio tenga la misma composicin que la muestra bruta. Para ello se utiliza un mortero o molino de bolas. Antes del anlisis, los slidos suelen secarse a 110 C para eliminar el agua absorbida, aunque en algunos casos este no es efectivo, y en otros se producen cambios en la composicin de la muestra por efecto del calor. Una vez obtenida la muestra le laboratorio, se disuelve para realizar el anlisis. Si la muestra no se disuelve en condiciones moderadas, ni con ataques de reactivos diluidos o en condiciones de T moderada, puede recurrirse a la digestin cida o a la fusin. Los reactivos ms comunes para atacar muestras, son los inorgnicos ( HCl, HNO3) y menos frecuente disoluciones de amoniaco y de hidrxidos de metales alcalinos. El amoniaco concentrado mas calor, disuelve todos los metales excepto al cromo y aluminio, que s pasiban por la formacin de un xido superficial. Tampoco disuelve reacciones que contengan Sn, Sb W. Muchas sustancias comunes como Si, ciertos xidos minerales y algunas aleaciones no se disuelven en los reactivos acuosos que acabamos de indicar. En este caso esta indicado el recurso de la fusin con sales slidas. Para ello la muestra, una vez reducida a polvo fino, se mezcla ntimamente con un exceso de unas 10 veces de fndente, calentando hasta la fusin. Las Tas oscilan entre 300 y 1000 C, obtenindose un producto soluble en agua, llamado fundido. Sin embargo, en la medida de lo posible debe evitarse utilizar este mtodo, debido a los inconvenientes que se plantean: 1. Contaminacin de la muestra con las impurezas del fndente. 2. Las disoluciones acuosas resultantes tienen alto contenido en sales que pueden crear dificultades en las siguientes etapas del anlisis. 3. Las altas Tas necesarias para una fusin aumentan el peligro de prdidas por volatilizacin 4. l fndente ataca el recipiente donde se realiza la fusin, con lo que se produce una nueva fuente de contaminacin de la muestra.
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Por otra parte, la materia orgnica a veces debe destruirse a fin de liberar los elementos inorgnicos para su anlisis. Ej.: (determinacin de Mg en vegetales). El proceso de mineralizacin de la muestra se lleva a cabo por dos vas: 1. Mineralizacin hmeda u oxidacin hmeda utilizando agentes oxidantes lquidos (HSO4 , HNO3 , HClO4 concentrado y en calor, reacciona explosivamente con la materia orgnica). Es posible realizar la mineralizacin hmeda a elevadas presiones, trabajando en un autoclave a presiones de 100 atmsferas y Tas entre 250 300 C. Como reactivos oxidantes (HNO3 , HNO3 + HCl) Un procedimiento corriente de mineralizacin hmeda a elevada presin y T, se basa en la descomposicin por microondas con HNO3 y otros cidos minerales dentro de recipientes hermticos de tefln. La calefaccin se lleva a cabo en hornos de microondas (especialmente diseados), obtenindose deficiencias espectaculares en la mineralizacin. 2. Mineralizacin seca: calcinar el componente orgnico expuesto al aire o en corriente de O2
1.2.5. Eliminacin de Interferencias.

En el anlisis qumico, la muestra muchas veces contiene especies que pueden interferir en la determinacin de los analitos de inters, bien porque producen una seal indistinguible del analito o bien porque la atenan, siendo preciso eliminarlas. Pocas tcnicas analticas estn libres de interferencias, por lo que , una etapa importante en la mayora de estos anlisis es su eliminacin. La eliminacin de interferencias, puede llevarse a cabo de dos maneras: Qumicamente: usando agentes enmascarantes ( sustancia que reacciona con el interferente para formar una especie que ya no intensifica la seal del analito).Se consigue mediante un ajuste pH , un cambio en el estado de oxidacin ... Fsicamente: separndolas previamente a la determinacin. Se realiza mediante precipitacin, extraccin , cromatografa o destilacin. Todos estos procesos tienen en comn la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases que despus se pueden separar mecnicamente. En este captulo estudiaremos los mecanismos de separacin por precipitacin.
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Separacin por Precipitacin. Basadas en la existencia de grandes diferencias de solubilidad entre el analito y sus
interferencias. La posibilidad terica de este tipo de separacin, puede determinarse mediante clculos de solubilidad, pero otros factores como la coprecipitacin, la excesivamente lenta velocidad de precipitacin, o la dificultad para la floculacin de los precipitados coloidales pueden hacerla, inviable. Algunos de los agentes precipitantes ms tiles se describen a continuacin: a) Separaciones basadas en el control de la acidez: En la prctica: Separaciones en disoluciones relativamente concentradas de cidos fuertes. Separaciones en disoluciones tamponadas a pH intermedio. Separaciones en disoluciones concentradas.
b) Separaciones de sulfuros a excepcin de metales alcalinos y alcalinotrreos. La mayora de los cationes forman sulfuros poco solubles cuyas solubilidades difieren mucho entre s, dado que es relativamente fcil controlar la solubilidad de una disolucin acuosa por ajuste del pH. Las separaciones basadas en la formacin de sulfuros insolubles han sido siempre muy utilizadas. c) Otros precipitantes inorgnicos No existen iones de uso tan general para separaciones, como los iones hidrxido y sulfuro. Los iones cloruro y sulfato, son tiles por presentar un comportamiento selectivo. As, el cloruro se utiliza para separar Ag de la mayora de otros metales. El sulfato se utiliza para aislar Pb, Sr, Ba. d) Precipitantes orgnicos Existen algunos reactivos tiles para aislar varios iones inorgnicos, algunos como la dimetilgliocsima, que se caracteriza por su gran selectividad formando precipitados con unos pocos iones. Otros como la 8-hidroxiquinoleina forman compuestos poco solubles con muchos cationes. En este caso puede conseguirse la selectividad necesaria para la separacin, mediante el control del pH y la variabilidad de los productos de solubilidad de sus productos.
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e) Separar iones de constituyentes presentes en cantidades traza La separacin cuantitativa de un elemento traza por precipitacin presenta varios problemas incluso cuando no son importantes las prdidas por solubilidad. Entre ellas destaca la sobresaturacin porque de esta forma se retrasa la formacin del precipitado. Es difcil la coagulacin de pequeas cantidades de una sustancia dispersa en forma coloidal. Adems es posible que una porcin apreciable del slido se pierda en su manipulacin. (Ej.: (Trasvase y filtrado). Para minimizar esto, se aade a la disolucin una cantidad de otros iones que forman un precipitado con el reactivo. El precipitado del ion aadido se llama colector, y arrastra de la disolucin la especie minoritaria de inters. (Ej.: Para aislar una muestra de oxido de manganeso se aade una pequea cantidad de ion frrico a la disolucin antes de aadir NH3 como agente precipitante. As, el FeOH arrastra incluso pequeas cantidades de MnOH. Un colector puede arrastrar a un constituyente traza, debido a que tienen solubilidades parecidas, o bien, a fenmenos de coprecipitacin, y el colector no debe interferir en la determinacin del elemento traza. f) Separacin por precipitacin electroltica Constituye un mtodo muy til para hacer separaciones. Mediante ella se asla en una fase aparte, la especie ms fcilmente reducible (o bien oxidable, dependiendo del componente), ya sea el componente deseado o no deseado de la mezcla. En este sentido el ctodo de Hg ha encontrado una amplia aplicacin en la eliminacin de muchos iones metlicos antes del anlisis. Por lo general los iones metlicos ms frecuentemente reducibles que el Zn, se depositan fcilmente en el Hg, quedando en disolucin iones tales como el Al, Be y metales alcalinos. g) Otros mtodos Separacin por extraccin Se basan en el diferente grado en que los solutos (tanto inorgnicos como orgnicos), se distribuyen entre dos disolventes inmiscibles. Separaciones por intercambio inico Se basan en que las interferencias o el analito, son retenidos en un slido intercambindose por otros iones fijados previamente en l.
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Separacin de especies inorgnicas por destilacin Tiene lugar cuando los coeficientes de particin son muy diferentes para una sustancia entre la disolucin y la fase de vapor.
Separaciones cromatogrficas Aqu los componentes se reparten o distribuyen entre dos fases, una de las cuales es mvil (puede ser un lquido, un gas, o un fluido supercrtico, que fluye a travs de este lecho estacionario.
1.2.6. Medida (Determinacin propiamente dicha)

La parte de la medida en general significa la determinacin propiamente dicha. La medida dar lugar a la cantidad precisa del constituyente buscado en la muestra. Por ello constituye el ncleo fundamental de un anlisis. La eleccin del mtodo se hace entre una amplia variedad de tcnicas posibles. Las categoras principales de determinaciones analticas son las siguientes: 1.) Determinacin gravimtrica Se convierte el constituyente en una forma que se puede pesar con precisin. 2.) Determinacin volumtrica Se hace reaccionar el constituyente en una razn estequiomtrica conocida y precisa, con un reactivo estandarizado. 3.) Determinacin espectroscpica Se somete el constituyente a la absorcin o emisin de radiacin electromagntica. 4.) Espectroscopa de masa Los constituyentes de la muestra se examinan en espectros de masas tras hacerlos pasar por campos elctricos y magnticos. 5.) Determinacin electroqumica El constituyente afecta al equilibrio redox en un electrodo adecuado, aqu se realizan medidas de magnitudes elctricas como Voltios, Amperios, Capacidades, Resistencias, etc. 6.) Determinacin cromatogrfica Se separa el constituyente mediante el paso a travs de una columna y se caracteriza mediante un detector.
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7.) Determinacin radioqumica Se determina el constituyente por medicin de la emisin de partculas o rayos por istopos inestables. De todos estos mtodos, tenemos mtodos volumtricos y gravimtricos entre los clsicos, y espectroscpicos, electroqumicos y cromatogrficos entre los instrumentales.
1.2.7. Interpretacin y conclusiones

En la interpretacin de datos analticos, debemos distinguir dos aspectos: El primero se refiere a la confiabilidad de las mediciones, y por tanto al nivel de confianza en los resultados, es decir, como de bien se produjo todo el proceso cualitativo. El segundo es la aplicacin de los datos confiables a la resolucin del problema, por ejemplo, podemos deducir valores confiables de los resultados obtenidos para los niveles de cloruros de agua. Sin una interpretacin y unas conclusiones, el anlisis qumico no debera realizarse, pues solo constituira una mera recoleccin de datos y una prdida de tiempo valioso.
1.2.8. Acciones
Se incluye en esta etapa, ya que las conclusiones del proceso analtico completo deben conducir a una meta. Estos resultados pueden llevar a una mejora en los niveles de contaminacin ambiental o en la calidad de una manufactura, condena de un criminal, entre otros ejemplos.
TEMA 2:
TRATAMIENTO ESTADSTICO DE LOS RESULTADOS ANALTICOS
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2.0. INTRODUCCIN
La inferencia estadstica consiste en la obtencin de conclusiones a partir de un cierto nmero de observaciones experimentales de acuerdo a unas hiptesis formalizadas y con unas reglas de clculo objetivas, as mediante su uso se pueden investigar posibles tendencias en los datos y aplicar criterios que permitan descubrir las causas de error no aleatorias, as mismo, el tratamiento estadstico de una serie de experimentos planificados adecuadamente que permitan ver la influencia de diversas variables con ms eficacia y menos trabajo que mediante el mtodo tradicional de mantener constantes todas las variables excepto una de ellas y de su influencia y as una pro una cada variable sucesiva. Es importante sealar que las tcnicas de la estadstica clsica son solo aplicables a un nmero infinito de observaciones, una situacin que difiere de ser la de una serie tpica de resultados cualitativos (entre 2 5 repeticiones). Sin embargo, la propia estadstica ha realizado modificaciones para adaptar los conceptos a series pequeas de datos. En este punto se ha establecido lo que se llama Jerarqua metodolgica. x1 (Resultado individual) x (Media de n resultados) (Media de resultados) Una alicuota n alcuotas (n < 30) alcuotas (n > 30)
2.1. TIPOS DE ERRORES EN EL ANLISIS CUANTITATIVO

Los anlisis cuantitativos juegan un papel predominante en cualquier laboratorio analtico, por lo que, los errores que aparezcan en ellos son de gran importancia. Nuestro principio, ser que no existen resultados cuantitativos vlidos sino van acompaados de una estimacin de los errores inherentes a ellos, los cientficos experimentales harn una distincin fundamental entre tres tipos de errores:
2.1.1. Errores Accidentados o Crasos

Estos errores son tan graves que no queda otra alternativa que abandonar el experimento y empezar de nuevo. Ejemplos: Prdida de parte de la muestra Contaminacin de la muestra Avera de algn instrumento
Todos estos errores que ocurren, incluso en los laboratorios mejor controlados, se reconocen con mucha facilidad en consecuencias en el anlisis. Solo tenemos que distinguir con detenimiento entre los errores sistemticos y aleatorios.
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2.1.2. Errores Sistemticos o Determinados

Son aquellos que pueden determinarse y probablemente evitarse o corregirse. Afectan al resultado, siempre en el mismo sentido, bien por exceso o por defecto. Su magnitud puede ser constante para todas las muestras de una serie, o ser proporcional al tamao de la muestra, o bien variar de un modo ms complicado, por ejemplo el error cometido al pesar una muestra higroscpica, que es siempre positivo, ya que aumenta con el tamao de la muestra y vara con el tiempo que se emplea en la pesada, con la humedad atmosfrica y con la temperatura. El error originado por la adsorcin en las columnas cromatogrficas es negativo (adsorcin irreversible. Otros errores comunes de este tipo son causados por impurezas en los reactivos, tambin por errores instrumentales, por ejemplo: mal calibrado de las balanzas, pH-metros. Errores de operacin, errores del mtodo, por ejemplo: coprecipitacin de impurezas, solubilidad de precipitados, interferencias en la muestra. Estos errores sistemticos o determinados, afectan a la exactitud del mtodo analtico.
2.1.3. Errores aleatorios o indeterminados

Son errores fortuitos cuya magnitud y signo no pueden predecirse ni calcularse. Son producidos por el efecto de variables que no se pueden controlar, y se caracterizan porque se presentan por exceso o defecto con igual probabilidad. Se revelan por las pequeas diferencias en mediciones sucesivas efectuadas por el mismo analista. Producen este tipo de errores los pequeos cambios en la T, P, humedad del ambiente, fluctuaciones en el suministro elctrico, corrientes de aire a la hora de la pesada en balanzas de precisin. Estos errores afectan a la precisin de un experimento, y si se realiza un nmero elevado de experiencias, la exactitud puede no resultar necesariamente aceptada. Los errores sistemticos dan lugar a una prdida de exactitud pudiendo o no afectar a la precisin segn que dicho error sea constante o variable.
2.2. EXACTITUD Y PRECISIN

En anlisis cuantitativo de cualquier propiedad de la materia (peso, volumen, etc.), esta sujeto a cierto grado de incertidumbre, por lo que jams se podr conocer el verdadero
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valor de la magnitud. A lo que se aspira es a obtener una estimacin de la magnitud que sea satisfactoria. La exactitud es el grado de concordancia entre el valor medido y el valor real. Como nunca se conoce el valor verdadero absoluto, una definicin ms realista es la concordancia entre el valor medido y el valor real aceptado. La precisin es el grado de concordancia entre replicas de mediciones de la misma cantidad, es decir, es la repetibilidad de un resultado. Es necesario distinguir entre repetibilidad y reproducibilidad, para hacer referencia a la precisin de un experimento: Repetibilidad: estimacin del grado de dispersin en una serie de replicas de la misma cantidad. Son experiencias llevadas a cabo por un mismo analista en un tiempo relativamente corto sin cambiar de instrumento ni de material de laboratorio, y usando las mismas disoluciones. Reproducibilidad: mide el grado de dispersin entre series de resultados, o sea, experiencias realizadas en ocasiones distintas con disoluciones distintas y con material de laboratorio distinto. Segn diferentes facetas, podemos calcular la reproducibilidad de distintas formas. La relacin entre precisin y exactitud puede visualizarse en la fotocopia de la Tabla 1 (desviacin estndar):
En esta fotocopia se observa como las medidas de una serie pueden ser muy precisas y sin embargo poco exactas. La precisin no es garanta de exactitud, pero son necesarias medidas precisas para conseguir exactitud. Con poca precisin difcilmente se tendr una buena exactitud.
2.2.1. Maneras de expresar la exactitud

Existen varias maneras y unidades para expresar la exactitud de una medida. Siempre se supone que existe un valor verdadero para establecer la comparacin: A.) Error Absoluto: diferencia entre el valor medido y el valor verdadero con respecto al signo. Se expresa en las mismas unidades que la medicin.
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Cuando el valor medido es el promedio de varias mediciones, el error se llama error medio. Aqu el trmino absoluto tiene un significado distinto al significado matemtico. Es una magnitud ignorando su signo. Aqu error absoluto es la diferencia entre el resultado experimental y su valor aceptado incluyendo su signo. Ea = X1 Xv
Xv = verdadero valor
Ea = X Xv
siendo X = N
B.) Error Relativo: error absoluto o medio expresado como % del valor verdadero: Xi Xv ER = 100 Xv X Xv ER = 100 Xv EJEMPLO: El resultado de una anlisis es de 252 gr. en comparacin con el valor real que es 262 gr. Calcular Ea y ER :
Ea = 252 262 = 01 gr. 252 262 ER = 100 = 38 % 262
2.2.2. Maneras de expresar la precisin

A.) Desviacin estndar: medida ms medida de la variabilidad de un resultado. Se define como la raz cuadrada de la suma de los cuadrados de las diferencias, entre los valores medidos individualmente y la media de las mediciones dividida por (N 1):
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S =
x)2 N1
i
(x
05
Este parmetro proporciona una medida de la dispersin de un conjunto de resultados alrededor del valor medio. Tiene las mismas unidades que los datos. Al aumentar N, la cantidad (N 1) se acerca cada vez ms a N (poblacin), por lo que, no tiene trascendencia usar N N 1, en el clculo de la desviacin estndar. Aunque para nmeros pequeos de observaciones (caso especialmente importante en Q. Analtica), la distincin es significativa. x)2 N
(xi
05
Experimentalmente, la S de la muestra constituye una estimacin de la desviacin estndar de la poblacin (), que es la que se desea conocer. No se puede determinar realmente un nmero infinito de mediciones. S se aproxima a , cuanto mayor es el tamao de la muestra. Anlogamente, la media de la muestra, resulta ser una estimacin tanto ms exacta en la medida de la poblacin, cuanto mayor es el tamao de la muestra aleatoria. El cuadrado de la desviacin estndar, se denomina varianza (V = S2). B.) Desviacin estndar relativa (DER): mejor medida de la precisin para fines comparativos: S CV (coef. de variacin) = DER = 100 x Sus unidades son %, y es un ejemplo de error relativo, es decir, es una estimacin del error dividida por una estimacin del valor absoluto de la cantidad medida. Los errores relativos se utilizan con frecuencia en la comparacin de las precisiones de los resultados obtenidos y son importantes en el clculo de la propagacin de errores.
2.3. DISTRIBUCIN DE ERRORES

Aunque la S proporciona una medida de la dispersin de un conjunto de resultados alrededor del valor medio, no indica la forma en que se encuentran distribuidos los resultados.
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Consideremos los resultados obtenidos en 50 determinaciones repetidas de la concentracin de ion nitrato, dada con dos cifras significativas en una muestra concreta de agua. (Tabla 2.2).
En estos grficos (figura 2.1.), las medidas quedan distribuidas en forma casi simtrica en torno a la media, es decir, con las medidas agrupadas respecto al centro. Los resultados obtenidos en las medidas, constituyen una muestra finita de una poblacin, por lo que, presentan los valores discretos. En teora, una concentracin puede tomar cualquier valor de manera que la distribucin de la poblacin se ajusta a una curva continua. El modelo matemtico habitualmente empleado es la distribucin normal o Gausiana descrita por la ecuacin: Exp. (x )2 22 Y = 2 Un anlisis un poco ms detallado demuestra que cualquiera que sean los valores de y , aproximadamente un 60 % de los valores de la poblacin caen dentro de de la media, cerca de un 95 % se ubican dentro de 2 de la media, y cerca de un 997 % se encuentran dentro de 3. La distribucin normal no solo se obtiene cuando se realizan mediciones repetidas de una misma muestra, tambin los resultados obtenidos a menudo se adaptan a la distribucin normal cuando se mide la misma magnitud para diferentes muestras de la misma poblacin. 2.4. DISTRIBUCIN MUESTRAL DE LA MEDIA O ERROR ESTNDAR DE LA ........MEDIA Hemos estudiado que la distribucin estndar se encuentra relacionada con el error probable de cada observacin individual. Si de una poblacin infinita se toman diversas muestras aleatorias, todas de n observaciones, los valores medios de los diversos grupos de n observaciones, presentarn una cierta dispersin tanto menor cuanto mayor sea n. En el limite cuando n tiende a infinito, la media de cada muestra tiende a la media de la poblacin (), entonces su dispersin tiende a cero. La desviacin estndar de la media o error estndar de la media, es inversamente proporcional a la raz cuadrada del nmero de observaciones:
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m = e.e.m. = n 2.5. APLICACIONES DE LA ESTADSTICA A LOS RESULTADOS ANALTICOS
2.5.1. Intervalos de Confianza

El intervalo alrededor de la media, determinada experimentalmente, dentro del cual podemos encontrar la media verdadera con cierto grado de probabilidad, se denomina intervalo de confianza, y los valores extremos de este intervalo son los limites de confianza. Podemos expresar los limites de confianza como: t = x n Intervalo, limite de confianza t : Student, depende del nmero de grados de libertad, en nuestro caso (n 1), y el grado de probabilidad (certeza o confianza) en nuestros resultados. Si suponemos que la distribucin es normal, entonces el 95 % de las distribuciones normales se encontrarn en el intervalo dada por: x 196 < < x + 196 n n
Tambin se utiliza con diferencia el intervalo de confianza al 99 % que viene dado por: x 258 < < x + 258 n n
Los limites de confianza al 95 % para la concentracin de ion nitrato, se calcularan: x = 0500 n = 50 S = 00165
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00165 00165 0500 196 < < 0500 + 196 50 50 = 0500 00046 gr / m A medida que el tamao de la muestra disminuye la incertidumbre al utilizar S para aproximar aumenta, y a fin de permitir usar S, la ecuacin usada para calcular los limites de confianza se puede modificar como: S = x t n EJERCICIOS: Se determin el contenido de ClNa de una muestra de orina, utilizando un electrodo selectivo de iones, obtenindose los siguientes valores: 102 mM, 97 mM, 99 mM, 98 mM, 101 mM, 106 mM x = 1005 mM; S = 327 mM; n 1 = S; Nivel de confianza = 95 %; t = 257 327 = 1005 257 6 = (1005 34) mM
Calcular los limites de confianza al 95 y 99 %, para la concentracin de iones de sodio: 327 = 1005 403 = (1005 54) mM 6 Los limites de confianza se pueden utilizar como una prueba para detectar errores
sistemticos como se muestra en el siguiente ejemplo: Se comprueba la escala de absorbancia de un espectrofotmetro a una concreta, usando un patrn que da una absorbancia de 047. Los valores determinados fueron 10, de los que se obtuvieron unos valores de: x = 0461 y S = 003. Calcular el intervalo de confianza del 95 % de la absorbancia media y decir se existe un error sistemtico. 0003 = 0461 226 10
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0463 = 0461 0002 0459 Esta fuera del rango 047, por lo que podemos decir que existe un error sistemtico en estas afirmaciones. Rango de trabajo obtenido
2.5.2. Rechazo de Resultados

Con frecuencia al efectuar una serie de replicas de anlisis, uno de los resultados obtenidos ser muy distinto de los otros. A este valor se le conoce como valor anmalo. Se han sugerido diversas pruebas estadsticas para determinar si una observacin debe rechazarse. Una de las ms correctas desde el punto de vista estadstico es la prueba de la Qumica de Pixon. Para su clculo, se ordenan los datos en orden decreciente de su valor, y en la relacin que se calcula como el cociente entre la diferencia entre el valor sospechoso y el ms prximo a l dividido por el Ecubito, es decir, la diferencia entre el mayor y menor valor: valor sospechoso valor ms prximo Q = valor ms grande valor ms pequeo La relacin Q experimental calculada se compara con los valores tabulados de Q
para un nivel de confianza determinado. Si la relacin calculada resulta mayor o igual que el valor tabulado, se puede rechazar la observacin sospechosa. Determinar la concentracin de nitrato (NO2-) en una muestra de agua, teniendo en cuenta los siguientes resultados: Anlisis [NO-2] gr/L 1 0403 2 0410 3 0401 4 0320
Determinar si el valor de 038 es rechazable segn el nivel de confianza del 95 %:
1.) 0401; 0403; 0401; 0320 0380 0401 2.) Q = = 070
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0410 0320 3.) 070 < 0831 valor no rechazable La prueba Q es bastante estricta, no es aplicable en el caso de series pequeas de datos. En una situacin ideal, habra que tomar nuevas medidas cuando aparezca un dato sospechoso, sobre todo si se han tomado inicialmente pocos valores. Esto podra aclarar si debiera rechazarse o no el valor sospechoso, o si se debiera mantener. Tambin se reducira su efecto sobre la media y la desviacin estndar. En el ejemplo anterior se aaden: 0400; 0413; 0411; Se debera mantener el valor de 0380? 0380 0400 Q = = 0606 0413 0380 Para n = 7 y 95 % de confianza, obtenemos una Q terica de 0568 < Q calculada s tendramos que rechazar 0380 Es importante tener en cuenta, que para un nivel de confianza del 95 %, existe un 50 % de riesgo de rechazar incorrectamente un valor sospechoso. Cuando las medidas se repitan unas cuantas veces, lo que es normal en el anlisis qumico, el rechazo de un valor origina una gran variacin sobre la media y la desviacin estndar. Adems, debe evitarse el hecho de tomar tres medidas y rechazar la que ms difiere de las otras dos. En general, se puede demostrar que se obtiene una estimacin ms confiable de la media utilizando el valor que esta en medio de los otros tres, en lugar de utilizar la media de los dos que no fueron rechazados. Pueden presentarse tambin valores sospechosos que pueden ser los dos prximos, o uno a cada extremo del intervalo de valores. Esto origina una reduccin en el valor calculado de Q, ya que en el primer caso se produce una reduccin del numerador, y en segundo un aumento del denominador. En este caso es necesario emplear una prueba para un par de valores anmalos. B.) Otro criterio de rechazo (Test Tn) xq x
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Tn = S Rechazo sii Tn calculada > Tn terico
Ejemplo: El anlisis de una muestra de calcita dio unos porcentajes de CaO de: [CaO] 5595 5600 5604 5623
El ltimo valor parece anmalo, se puede rechazar? 015 Q = = 054 028
QTerica = 0710 para nivel de confianza del 95 %
Como Q < Q terica no se rechaza Aplicar Test Tn a estos datos: x = 5606 S = 0107 para n = 6 5623 5606 Tn = = 159 0107 Para un 95 % de confianza, la Tn terica = 167 Como Tn terico es > Tn calculado no se rechaza
2.5.3. Presentacin de los resultados

Como ya hemos sealado, los resultados experimentales carecen de importancia si no van acompaados de una estimacin de los errores que han tenido lugar durante la medida. Es casual citar la media como la estimacin de la cantidad medida, y la desviacin estndar como la estimacin de la precisin. Menos frecuente es dar el resultado en la forma de los limites de confianza al 95 % de la media. ts =x n
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Redondeo de la respuesta: el nmero de cifras significativas indica la precisin del experimento. El nmero de cifras significativas es el nmero de dgitos que se necesitan para expresar cientficamente un valor sin prdida de exactitud.
Ejemplos: 1427 14270102 6302106 4 cifras significativas (1427 102) 5 cifras significativas 4 cifras significativas (0000006302)
92500 Este es un caso ambiguo, porque segn como se exprese tendr diferentes cifras significativas: 925104 92500 9250104 92500104 3 cifras significativas 4 cifras significativas 5 cifras significativas
Los ceros son significativos cuando se localizan en medio de un nmero, al final de un nmero y a la derecha de la coma decimal. En los dems casos no son cifras significativas. Este nmero de cifras significativas en un anlisis est condicionado por la medida menos exacta: 16235 63 = 75
2 cifras 2 cifras
En cuanto al redondeo se hace uso de las siguientes reglas: Si la ltima cifra significativa es menor que S, esta no sufre modificacin. Si es mayor que 5 se incrementa en uno. Si es igual a 5 y no hay ms cifras significativas a continuacin o son cero, la anterior aumenta en una unidad si es impar la que lo precede y no se modifica si esta es par: 63765 0028 = 6377 003
63665 0028 = 6366 003
2.6. PROPAGACIN DE ERRORES
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Una determinacin analtica requiere de ordinario la realizacin de varias operaciones (pesar, pipetear, etc...) cada una de las cuales puede suponer la introduccin en el anlisis de un error sistemtico, y cada una est sujeta a errores aleatorios. Se puede calcular el error que afectar al resultado final, a partir de los errores que afectan a cada uno de los datos experimentales de partida. La naturaleza de los clculos para tener en cuenta los errores aleatorios y sistemticos es diferente, ya que no se propagan de igual manera. Esto se debe a que algunos errores aleatorios se compensan entre s, mientras que cada error sistemtico ocurre en un sentido definido y conocido. Ejemplo: Si el resultado final de un experimento Y viene dado por la suma A y B. Si A y B tienen un error sistemtico de +1, es evidente que el error sistemtico ser +2. Sin embargo, si A y B tienen un error aleatorio de 1, el error aleatorio de Y no es 2. Esto se debe a que en ocasiones el error aleatorio de A ser positivo, y el de B negativo o viceversa, siendo de esperar que ambos errores se neutralicen en cierta extensin.
2.6.l. Propagacin de Errores Aleatorios.

Si se conoce la precisin de cada observacin se pueden usar reglas matemticas sencillas para estimar la precisin del resultado final. Reglas: A.1.) Combinaciones lineales. En este caso el valor final de Y se calcula a partir de una combinacin lineal de medidas a, b, c, : Y = x + ka a + kb b + kc c + ... La varianza tiene la propiedad de que la varianza de una suma o diferencia de cantidades independientes es igual a la suma de sus varianzas, es decir: Var Y = Sy2 = (ka Sa)2 + (kb Sb)2 + (kc Sc)2 + .... Sy = (ka Sa)2 + (kb Sb)2 + (kc Sc)2 + ....
05
Ejemplo:
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En una valoracin la lectura final de la bureta es 3,51 ml y la inicial es 15,67 ml. Ambas con una desviacin estndar de 002 ml. su desviacin estndar? Vol. (utilizado) = 1567 351 = 1216 ml S = [(002)2 + (002)2]05 = 0028 ml Cul es el volumen de agente utilizado y
Como puede observarse la S del resultado es mayor que la de las lecturas individuales de la bureta. Incluso el volumen utilizado se calcula a partir de una diferencia, pero es menor que la suma de las desviaciones estndar. A.2.) Expresiones multiplicatvas Si Y se calcula a partir de una expresin del tipo: k ab Y = cd
donde a, b, c, d son cantidades medidas independientemente y k
es una constante, existiendo una relacin entre los cuadrados de las desviaciones estndar relativas: Sy = Y Sa 2 Sb + a b
2
Sc 2 Sd + + c d
05
El rendimiento cuntico de la fluorescencia , se calcula a partir de la expresin:
If = k c l Io
If = Intensidad de luz fluorescente (S = 2 %) Io = Intensidad de la luz incidente (S = 05 %) k = Cte. del instrumento = Abructividad molar (S = 1 %) c = Concentracin (S = 02 %) l = Paso ptico (S = 02 %)
donde los parmetros se definen como una estimacin de las desviaciones estndar relativas. d.e.r = (22 + 022 + 022 + 052 + 12)05 = 23 %
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Puede observarse que la d.e.r. del resultado final no es mucho mayor que la mayor de todas las d.e.r., usadas para calcularla. Esto es fundamentalmente una consecuencia de elevar al cuadrado las d.e.r., y explica una cuestin general, cualquier esfuerzo por mejorar la precisin de un experimento, debe dirigirse a mejorar la precisin de los valores menos precisos. Cuando una cantidad se eleva a una potencia (b3), el error no se calcula como para una multiplicacin (bbb), debido a que las cantidades implicadas no son independientes. Entonces, si Y = bA :
Sy = Y
Sb n b
A.3.) Otras funciones Si Y es una funcin general de X (Y = (x)) la S de X e Y, estn relacionadas de la siguiente forma: dy Sx dx
Sy =
Ejemplo: La absorvancia de una muestra est dada por A = log (T), siendo T la
transmitancia. Si el valor medio de T = 0501 con S = 0001, calcular A y su desviacin estndar. A = log 0501 = 0300 dA log e = dT T 0434 0434 = = = 0866 T 0501
A =
log e T
0434 0001 0501
= 00008
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Es importante observar que para este mtodo experimental se pueden encontrar las condiciones para que sea mnima la d.e.r. 100 T log e 100 A d.e.r. de A = = A T log T Ejemplo: La ecuacin de Nerst aplicada a un anlisis potenciomtrico es la siguiente: RT nF E = potencial del electrodo E = potencial estndar del ion que se determina T = T absoluta n = n de e- que participan en la semiclula c = [ ] del ion R = Cte. de los gases F = Faraday
E = E +
ln c
Obtener una expresin para la d.e.r. de la [ ] suponiendo que T = 298 K y que no tiene error. Calcular la d.e.r. s n = 1 y la S (E) = 0001 voltio. c = exponencial {40 n (E E)} dc = 40 n exponencial {40 n (E E)} dE c = 40 n E exponencial {40 n (E E)} = 40 n c E 40 n E (%) c La d.e.r. de c ser = 100 = 100 c c d.e.r. (c) = 100 0001 40 = 4 %
2.6.2. Propagacin de Errores Sistemticos

Se distinguen grupos en funcin de cmo se calcula el resultado final. El error sistemtico y la desviacin estndar de un resultado se calcula mediante ciertas reglas sencillas:
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B.1.) Combinaciones lineales Si Y se calcula a partir de cantidades mediadas usando la expresin y = k + ka a + kb b + ..., y los errores sistemticos de a, b, c, ... se calculan como incrementos (a, b, ...) podemos decir que: y = ka a + kb b + kc c + ... El error sistemtico total puede ser a veces cero (s se usa una balanza con un error de 001 gr para pesadas utilizadas en la preparacin de una disolucin estndar). Puesto que el peso del soluto se calcula por diferencia entre dos pesadas, se eliminan los errores sistemticos. B.2.) Expresiones multiplicatvas ab Si Y se calcula de la forma y = k , el error sistemtico relativo ser: cd y a b c d = + + + y a b c d Si se trata de una potencia: Y = bn , error sistemtico relativo ser: y b = n y b B.3.) Otras funciones Para y = (x), el error sistemtico ser: dy y = x dx
TEMA 3: ANLISIS INSTRUMENTAL: CALIBRACIN - 30 -
1. INTRODUCCIN
Los mtodos analticos se suelen clasificar en: 1. - Mtodos clsicos: en los mtodos clsicos de anlisis cuantitativo la cantidad de analito se determina por medidas gravimtricas o volumtricas que son ideales para anlisis de alta precisin, especialmente cuando se analiza un nmero pequeo de muestras que son necesarias para el anlisis de materiales estndar. 2. - Mtodos Instrumentales: utilizan un instrumento ms o menos complejo para evaluar una propiedad fsica o fsico-qumica del sistema objeto de anlisis. Esta definicin es un poco ambigua, pues no existe ningn anlisis qumico gravimtrico o volumtrico que no recurra por una parte al examen de una propiedad fsica como la precipitacin, cambio de volumen, y por otra parte que no emplee algn artificio experimental (buretas). Adems actualmente la instrumentacin se utiliza tambin para otras muchos fines, entre los cuales cabe destacar aquellas que conducen a la morfologa y estructura de las molculas. En definitiva, las tcnicas instrumentales implican por una parte el estudio terico de los principios fsicos y fsicos-qumicos de los mtodos utilizados, as como el conocimiento de tamao, forma, estabilidad y estructura de las molculas; y por otra parte implican la descripcin y conocimiento de los componentes bsicos de los instrumentos empleados.
2. GRFICAS DE CALIBRACIN EN ANLISIS INSTRUMENTAL
Segn la ISO (International Stndar Office), la calibracin se define como el conjunto de operaciones que permiten establecer en determinadas condiciones experimentales, la relacin existente entre los valores indicados por el aparato, con los valores obtenidos en la medida de un valor conocido. El procedimiento operatorio en anlisis instrumental para la calibracin es: El analista prepara una serie de muestras (5 6) con [ ] conocidas de analito, y las mide en el instrumento en iguales condiciones y seguidamente medir las muestras problema. De esta manera, a partir de la seal obtenida para cada patrn de [ ] conocida
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se construye la grfica de calibracin, y a partir de ella se obtiene la [ ] de analito en las muestras problema. El procedimiento anterior generalmente presenta varias preguntas estadsticas: a*) Es lineal la grfica de calibracin?, y si es curva qu grfica tiene? Teniendo en cuenta que cada uno de los puntos de la grfica est sujeto a errores, cul es la mejor recta que pasa por esos puntos? Suponiendo que la calibracin es lineal, cules son los errores estimados y los limites de confianza para la pendiente y la ordenada en el origen? Cundo la grfica se usa para el anlisis de una muestra problema, cules son los errores y los limites de confianza para una [ ] determinada? Cul es l limite de deteccin del mtodo, es decir, la menor [ ] de analito que se puede detectar con un nivel de confianza predeterminado? Antes de abordar estas cuestiones debemos considerar aspectos sobre el trazado de las grficas de calibracin: a.) Es esencial que los patrones de calibracin cubran el intervalo completo de [ ] requerido en los anlisis en los que se encontraron las muestras problema. b.) La [ ] de las muestras problema se calcula por interpolacin, a excepcin del mtodo de la adicin estndar, que se hace por extrapolacin. c.) Es importante incluir una muestra en blanco en la curva de calibracin. Esta muestra no contiene ningn analito, pero si contiene la misma composicin que las otras muestras estndar de referencia, y est sujeta a la misma secuencia del proceso analtico. Su respuesta en la medida podra ser cero, pero por impurezas de reactivos u otras causas puede no ser as. d.) La curva de calibracin se representa siempre con la respuesta del instrumento en el eje de ordenadas y la [ ] de los patrones en el eje de abscisas. Tres de las tcnicas de calibracin mas comnmente usadas son la curva o grfica analtica, el mtodo de las adiciones estndar y el mtodo de estndar interno.
2.1. Curva o grfica analtica
En esta tcnica se prepara una serie de soluciones estndar que contienen [ ] conocidas del analito teniendo en cuenta los puntos antes sealados. Dichas soluciones deben cubrir el intervalo de [ ] de inters, as como tener una composicin matricial tan
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parecida como se pueda a la de las soluciones de las muestras problema. Tambin se analiza una solucin en blanco de fondo. Las respuestas netas de cada solucin estndar menos la de fondo se representan frente a las [ ] de las soluciones estndar a fin de obtener la grfica de calibracin. Generalmente hay una relacin lineal entre la seal analtica Y, y la [ ] X. Por ello, los datos se ajustan a una recta por el mtodo de mnimos cuadrados, es decir, minimizando la suma de los cuadrados de los residuos Y. Una vez establecida la grfica de calibracin se puede obtener la [ ] de analito en cualquier muestra problema por interpolacin del valor en dicha recta.
2.1.1. Coeficiente de Correlacin momento-producto Aqu se analiza el primer problema planteado en la pregunta anterior a*. Supongamos que la representacin de una lnea recta toma la expresin y = b x + a, los puntos individuales sobre la recta los denotaremos como (x1, y1), (x2, y2), etc., siendo l primer punto el blanco.
blanco
La media de los valores de x la denotaremos x y la de y ser y , as que el punto ( x,y ) se conoce como centro de gravedad de todos los puntos. Para estimar si los puntos experimentales se ajustan a una recta, calculamos el coeficiente de correlacin que viene dado por R y tiene la siguiente expresin: r = (xi x)2 (yi y)2 En qumica analtica, normalmente comunes los valores de r < 09. Es importante no despreciar cifras decimales durante los clculos, como se muestra, aunque dos puntos de desven de la mejor recta, el valor de r es muy prximo a 1, sin embargo, se obtendr un valor de r que en algunos cosos ser prximo a 1, an cuando la representacin no sea lineal, por tanto siempre es necesario representar la curva de calibracin. Por otro lado, un r = 0 no significa que x e y no estn relacionadas, sino que no estn linealmente relacionadas, los valores de r obtenidos en el anlisis instrumental son generalmente muy altos, de manera que un valor calculado junto con la propia grfica de r
(xi x) (yi y)
1 < r < +1
es > 099, siendo relativamente poco
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calibracin suele ser suficiente para asegurar al analista que ha obtenido una relacin lineal til. En ocasiones se obtienen valores de r ms bajos, siendo necesario utilizar una
prueba estadstica para establecer si r es realmente significativo. El mtodo ms simple es calcular un valor de t usando la ecuacin:
r (n 2)05 t =
(1 r2)05 Este valor est tabulado y se compara usando una prueba t de dos colas y n 2 grados de libertad. Si t (calculado) es mayor que t (terico), se puede asegurar que existe una
correlacin significativa. Tambin se pueden calcular los limites de confianza de la pendiente y la ordenada en el origen, y comparar que estos parmetros estn incluidos dentro de estos limites. 2.1.2. Clculo de la Recta de Regresin de Y sobre X (Y/X)
Supone obtener la mejor recta a travs de los puntos de la grfica de calibracin. Hablamos de regresin entre estas dos variables, ya que aceptamos que las desviaciones o errores se producen en una de ellas, en este caso la Y, y que en la otra variable posee un valor fijo y no sometido a error. En el caso en que ambas variables estn sometidas a error, hablaramos de correlacin entre ellas. (Transparencia)
Aceptando que las desviaciones solo se producen en las ies, la recta buscada ser aquella que minimice las desviaciones o residuos (diferencia entre el valor real y el calculado) de la variable Y, entre los puntos experimentales y la lnea calculada. Como los residuos de Y algunas veces sern negativos y otros positivos, se intenta minimizar la suma de los cuadrados de los residuos. Esto explica el uso del trmino de mnimos cuadrados para este procedimiento. La recta buscada pasa por el centro de gravedad, y su pendiente y ordenada en el origen sern:
b =
(xi x) (yi y) (xi

x)
a =y bx
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La forma de la recta calculada se conoce como recta de regresin de Y sobre X. Ejemplo: Calcular la pendiente y la ordenada en el origen para los datos: (Datos en transparencia )
(xi x) (yi y) = 2162 ( xi x)2 = 112 x = 6 y = 131 21612 b = = 193 112

a = y bx
a = 152
y = 193 x + 152
Errores en la pendiente y ordenada en el origen La recta de regresin calculada se utiliza para estimar la concentracin de las muestras problema por interpolacin, y quiz tambin para estimar el limite de deteccin del mtodo. Por ello son importantes los errores aleatorios en el clculo de la pendiente y la ordenada en el origen. La desviacin estndar de la pendiente y ordenada en el origen, tiene las siguientes expresiones: SY/X
Sb = { (xi x)2 }05
Sa = SY/X
xi n (xi x)2
05
(yi y )2 05 SY/X =
n2
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y = puntos sobre la recta de regresin calculada, correspondientes a los valores de X, es decir, los valores de Y ajustados. El valor de y para un valor de x dado, se calcula a partir de la ecuacin de regresin. Los valores de Sa y Sb se pueden utilizar para estimar los limites de confianza para la pendiente y la ordenada en el origen. As, los limites de confianza para la pendiente vienen dados por: b = t Sb deseado y n 2 grados de libertad. De manera similar, los limites de confianza para la ordenada en el origen son: a = t Sa Ejemplo: Calcular los limites de confianza y la desviacin estndar para la pendiente y ordenada en el origen. (Datos en la transparencia ) 09368
05
t se obtiene para un nivel de confianza
Sy/x = 5
= 04329
( xi x)2 = 112
Sy/x 07329
Sb = = = 00409 ( xi x)2 05 112 n2 = 5 95 %
t = 257
b = 193 257 00409
b = 193 011 x2 = 364

Sa = Sy/x
x2
05
= 02950
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n ( xi x)2 a = 152 257 02950 a = 152 076
Clculo de la Concentracin Una vez determinadas la pendiente y la ordenada en el origen en la recta de regresin, el fcil calcular el valor de x correspondiente al valor de y medido. Sin embargo, cuando necesitamos estimar el error en una concentracin calculada utilizando una recta de regresin, el problema se complica, ya que tanto la pendiente como la ordenada en el origen estn sujetas a error. La determinacin del error en la concentracin es bastante compleja, y en muchos casos se utiliza la siguiente frmula aproximada: SY/X Sxo = B 1 1 (yo y) + + m n b2 (xi x)2
2 05
yo m n
valor experimental de y a partir del cual se determina el valor de la [ ] de xo.
Sxo = desviacin estndar de xo. = n de lecturas para obtener el valor de Yo. = n de puntos medidos para el calibrado.
05
S m = 1: Sxo = b SY/X
1 + + n b2 (xi x)2
(yo y)2
Los limites de confianza pueden calcularse como: xo t Sxo
para n 2 grados de libertad
Los resultados ms precisos se obtienen cuando yo tiende ay. Si deseamos mejorar (reducir los limites de confianza), podemos proceder de dos maneras:
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1.) Realizando m medidas para el valor de yo , y utilizando el valor medio de esas m medidas en el clculo de yo. De esta manera, el primer sumando disminuye. Por ej.: Si el valor de yo = 135 se hubiese calculado como media de y determinaciones, los limites de confianza seran: 621 036 para (Sxo = 014) frente a 621 062 para (Sxo = 024). Sin embargo, si se realizan muchas mediciones repetidas, en el supuesto de que se disponga de muestra, se genera mucho ms trabajo y se obtiene solo un beneficio adicional. 2.) Aumentando el nmero de puntos de la recta de regresin en la etapa de calibracin. El efecto de n sobre los limites de confianza y la
determinacin de [ ] es ms complicada, ya que adems de afectar al segundo sumando en la ecuacin de Sxo, influye en el valor de t. Adems es necesario tener en cuenta que el uso de un gran nmero de muestras de calibracin supone un trabajo extra considerable, pero por otra parte no es adecuado usar pocos puntos ya que entonces el cociente 1 / n aumentar a la vez que n 2 disminuya, y aumente t, de manera que se incrementan los limites de confianza. (Lo normal es utilizar entre 6 8 puntos).
Ejercicio: Calcular los valores de xo y los limites de confianza a partir de los siguientes datos:
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2.2. Mtodo de adiciones estndar
Se utiliza cuando es imposible suprimir interferencias fsicas o qumicas en la matriz de la muestra. Supongamos que un analista desea determinar cido Acetilsaliclico en una aspirina comercial. Si utilizamos este mtodo, podra realizar una calibracin con disoluciones acuosas de acetilsaliclico, y utilizar la grfica de calibracin resultante para la determinacin de la [ ] del analito en la muestra problema. Sin embargo, utilizar soluciones puras para establecer la grfica de calibracin, solo es vlido cuando no existen efectos matriz, es decir, no se produce aumento o disminucin en la seal correspondiente al analito debido a la presencia de otros componentes en la muestra. Una primera solucin a este problema podra ser realizar la calibracin aadiendo cantidades conocidas de analito a una disolucin de composicin semejante a la muestra problema, pero exenta de analito. Sin embargo, esta disolucin en la mayora de los casos no se puede conseguir. Otra solucin consiste en realizar todas las medidas sobre la muestra problema, esto se consigue usando el mtodo de la adicin estndar. Este mtodo consiste en tomar volmenes iguales de problema, aadir a cada uno por separado cantidades distintas de analito, excepto a una de las muestras, y finalmente diluir todas las muestras al mismo volumen final. Seguidamente se determinan las seales instrumentales para cada disolucin y se representan los resultados. La escala de concentracin (x) se define con las [ ] de analito agregadas a las soluciones muestra. Por tanto, la [ ] desconocida est dada por el punto en el cual la lnea extrapolada corta al eje x, es decir, el valor de x para y = 0. Este valor es igual a la razn de la ordenada en el origen y la pendiente de la recta de regresin establecida por mnimos cuadrados. (Transparencia Fig. 5.9.)
a y b estn sujetos a error, as el valor calculado para la [ ], tambin lo estar. Pero en este caso el resultado no se obtiene a partir de medidas de una sola muestra, por lo que, la desviacin estndar del valor extrapolado se calcula de la siguiente forma:
05
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SxE = b
SY/X
y2 + n b2 (xi x)2
1
Puede observarse que al aumentar n mejora la precisin de la cantidad estimada, siendo necesarios al menos 6 puntos en un experimento de este tipo. Adems se mejora la precisin maximizando esta cantidad, por lo que, el intervalo de [ ] a cubrir por las
disoluciones de calibracin debe ser lo ms amplio posible. Los limites de confianza para la [ ] vendrn dados por: xE t SxE
Ejemplo: La [ ] de Ag en una muestra de derechos fotogrficos se determin por absorcin atmica por el mtodo de desviaciones estndar, obtenindose: [Ag adicionada] mg / ml Abs. 0 032 5 071 10 052 15 060 20 070 25 077 30 089
Obtener la [ ] de Ag, los limites de confianza al 95 % de esta [ ].
[(xi x) (yi y)] b = = 00186 (xi x)2

a =y bx = 03218
= 173 mg / ml
b
Limites de Confianza: (yi y )2 SY/X = n2
05
y = 06014 (xi x)2 = 700

001094 1 (06014)2
SxE =
+
- 40 -
00186
(00186)2 700
SxE = 0749 xE = 173 257 0749 n2 = 5 t = 257 95 %
xE = (17,3 19) mg / ml
Aunque este mtodo es una forma de evitar los efectos de interferencia causados por la matriz, tiene dos desventajas: 1.) Es un mtodo de extrapolacin, y por tanto, menos preciso que las tcnicas de interpolacin. 2.) Es difcil de automatizar, y requiere de mayores cantidades de muestra.
2.3. Mtodo de Estndar Interno
Una cantidad fija de una sustancia pura (estndar interno), se aade tanto a las soluciones muestra como a las soluciones estndar. El estndar interno debe ser una sustancia similar al analito con una seal fcilmente medible y que no interfiere con la respuesta del analito. Despus se determinan las respuestas del analito y del estndar interno, y se calcula el cociente de las dos respuestas. De esta manera, si s varia algn parmetro que afecte a las respuestas medidas, dichas respuestas del analito y del estndar interno, deben ser afectadas por igual. Por tanto, el cociente de respuestas depende solamente de la concentracin de analito. Una representacin de la relacin o cociente de respuestas analito a estndar interno como funcin de la [ ] del analito, da una grfica de calibracin cuyo ajuste se hace por mnimos cuadrados:
Respuesta e. interno Respuesta analito
[analito] - 41 -
[estndar interno]
3. PARMETROS CARACTERSTICOS 3.1. Limites de deteccin y cuantificacin
En trminos generales se puede definir l limite de deteccin de un analito, como aquella [ ] que proporciona una seal instrumental significativamente diferente de la seal de una muestra en blanco, o la seal de fondo. Significativamente diferente, da al analista un buen margen de libertad para establecer la definicin exacta del limite de deteccin. De hecho, en la prctica existe poco acuerdo entre los Organismos Oficiales sobre este acuerdo. Una definicin aceptable de limite de deteccin, que ha sido sugerida recientemente por organismos de EEUU, es que el limite de deteccin es la cantidad de analito que proporciona una seal y e igual a la del blanco ms tres veces la desviacin estndar del blanco: yLD = yB + 3 SB El limite de cuantificacin o determinacin considerado como el limite de [ ] ms bajo para mediciones cuantitativamente precisas, se define como la cantidad de analito que proporciona una seal y e igual a la del blanco ms diez veces la desviacin estndar del blanco: yLQ = yB + 10 SB En la prctica, cuando se trabaja con una recta de regresin convencional, se puede usar la desviacin estndar de residuos Sx/y en lugar de SB, y se puede emplear el valor de A = (0,0) como una estimacin de la seal correspondiente al blanco. Una vez obtenido el valor de y obtendremos la [ ] correspondiente al limite de deteccin o cuantificacin, a partir de la recta de calibrado. yLD = yB + 3 SB yLD = a + 3 Sy/x y = bx + a a + 3 Sy/x = b x + a (a + 3 Sy/x a) 3 Sy/x x = = b b
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Ejemplo: Estimar los limites de deteccin para determinar la fluorescencia del ejemplo anterior: a = yB = 152 030 b = 193 004 r = 09989 Sy/x = SB = 0433 Limite de deteccin (LDD) = 067 pgr / ml Sx = 025
3.2. Rango lineal
El intervalo de [ ] en que es aplicable un mtodo analtico va desde el limite de cuantificacin hasta la [ ], a la cual, la curva de calibrado se desva de la linealidad. En el limite de cuantificacin, la desviacin estndar relativa de las medidas es de aproximadamente un 10 %, y disminuye con rapidez cuando aumentan las [ ].
3.3. Sensibilidad
La sensibilidad de un instrumento o mtodo se define como, su capacidad para discriminar entre pequeas diferencias en la [ ] de un analito. La sensibilidad viene limitada por la pendiente de la curva de calibracin y la reproducibilidad o precisin del sistema de medida, de manera que para dos mtodos que tengan igual precisin, el que presente mayor pendiente en la curva de calibracin ser el ms sensible, y viceversa. La IUPAC, define la sensibilidad como la pendiente de la curva de calibracin a la [ ] de inters. Como la mayora de las curvas de calibracin son lineales, en ellas la sensibilidad de calibracin es independiente de la [ ], e igual a la pendiente de la recta de calibrado. Mandel y Stichler, definen la sensibilidad analtica a una determinada [ ], teniendo en cuenta la precisin, como:
b = pendiente donde
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Ss seales
Ss
Ss = desviacin estndar de las
3.4. Selectividad
La selectividad de un mtodo analtico durante el grado de ausencia de interferencias, debidas a otras especies contenidas en la matriz de la muestra. Desafortunadamente, ningn mtodo analtico est totalmente libre de
interferencias, y con frecuencia deben realizarse distintas operaciones para eliminarlas. Consideremos una muestra que contiene un analito A, as como dos especies
potencialmente interferentes (B y C), encontrndose en [ ] CA, CB, CC, con sensibilidad de calibracin: ma, mb, mc. La seal medida en el instrumento vendr dada por: S = ma CA + mb CB + mc CC + Sbl
Blanco
Se define el coeficiente de selectividad de B con respecto de A, como: KB,A= mA El coeficiente de selectividad nos da la respuesta relativa del mtodo para la especie B cuando se compara con A. Anlogamente, el coeficiente de selectividad de C con respecto de A, ser: KC,A = mA Si sustituimos en la ecuacin anterior estos coeficientes, obtenemos que: mC mB
S = mA (CA + KB,A CB + KC,A CC) + Sbl Los coeficientes de selectividad pueden variar desde 0 en ausencia de interferencias hasta 1 ms. Un coeficiente ser negativo si la interferencia causa una reduccin en la intensidad de la seal del analito y a la inversa. Los coeficientes de selectividad son parmetros de calidad tiles para describir la selectividad de los mtodos analticos, pero son poco usados.
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Ejemplo: Anlisis por mininos cuadrados de datos de calibracin para la determinacin de Plomo, basada en el espectro de emisin de llama, condujo a la ecuacin: y = 112 CPb + 0312 obtenindose:
[Pb] ppm 10 0 10 0 00
N de replicas 10 10 24
y
1162 112 00296
S 015 0025 00082
Calcular: a) Sensibilidad de la calibracin. b) Sensibilidad analtica a 1 y 10 ppm de Pb. c) Limite de deteccin.
a) Sensibilidad = pendiente ==> m = 112
b) Para 10 ppm de Pb:
= = = 75
Ss 015
112
+ discriminacin + sensibilidad + precisin + selectividad
Para 1 ppm de Pb:
= = 45
0025
112
c) y = yB + 3 SB y = 00296 + 3 00082 = 0054
y = bx + a
x = b
ya
x = 112
0054 00296
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La [ ] en el limite de deteccin es x = 0022 ppm de Pb
3.4. RELACIN SEAL - RUIDO La seal analtica puede dividirse en dos partes: una causada por l / los analitos y la otra, por los componentes de la matriz de la muestra y por la instrumentacin usada en la medicin. En este ltimo, parte de la seal se conoce como ruido, y constituye informacin no deseada, ya que degrada la exactitud y precisin del anlisis, a la vez que aumenta el limite de deteccin. El efecto del ruido sobre la seal consistente en una parte del registro grfico de una pequea seal de corriente continua. (Fig. 4.1.) En la mayora de las medidas, el valor promedio de la seal correspondiente al ruido se mantiene cte., y es independiente de la magnitud de la seal total. As pues, el efecto del ruido sobre el error relativo de una medida, aumenta a medida que baja el valor de la cantidad medida. Por esta razn, para describir la calidad de un mtodo analtico o el funcionamiento de un instrumento, la relacin seal ruido es un parmetro de calidad mucho mejor que el ruido solo. Para una seal cualquiera, la magnitud del ruido se define como la desviacin estndar del valor de la seal medida, mientras que la seal viene dada por la media de la medida.
x S / N = = =
Media Sd 1 D.E.R Sd desviacin estndar
Como norma general, la deteccin cierta de una seal mediante un sistema visual resulta imposible cuando la relacin seal ruido es < 2 3. S / N < 2 3 Ej. Fig. 4. 2 S / N = 4,3 S / N = 43 Mejor.
Conforme la [ ] disminuye hacia el nivel traza, el problema de distinguir las seales respecto al ruido, se hace cada vez ms difcil, lo que ocasiona una disminucin en la
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exactitud y precisin de las mediciones a la vez que se aumenta el lmite inferior de la cantidad de analito que se puede detectar. Un aumento en la relacin seal ruido, generalmente indica una reduccin del ruido, y por tanto, una medicin ms deseable. Los dos mtodos principales para la reduccin del ruido, es decir, instrumental son: En primer lugar, mediante el uso de dispositivos electrnicos como filtros, para procesar seales mientras pasan a travs del instrumento o detectores sincrnicos que atenan el ruido sin afectar de manera significativa a la seal analtica. Se puede hacer un posterior tratamiento matemtico de los datos, con un software adecuado, que permite extraer las seales de entornos ruidosos. el aumento en la relacin seal ruido en anlisis
TEMA 4:
INTRODUCCIN A LOS MTODOS ESPECTROSCPICOS DE ANLISIS

4.1. INTRODUCCIN Para la determinacin de un analito hay mtodos clsicos y mtodos instrumentales. Estos ltimos tienen unas ventajas sobre los primeros: 1.) Permiten realizar anlisis difciles o imposibles por los otros mtodos con una elevada selectividad y sensibilidad. Adems, mientras en los mtodos clsicos solo podemos determinar un analito por anlisis, en los instrumentales podemos determinar simultneamente varios analitos en un anlisis. 2.) Suelen ser ms rpidos y baratos que los clsicos. Es fcil la
automatizacin de estos mtodos instrumentales. 3.) Los instrumentos analticos pueden conectarse a ordenadores, lo
que permite un ptimo control del instrumento y manejo de datos. 4.) Desarrollo de instrumentos inteligentes.
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A partir de ahora solo vamos a hablar de mtodos instrumentales. Estos mtodos tienen ciertas desventajas: 1.) Requieren ser manejados por tcnicos expertos. 2.) Es necesario una calibracin previa del equipo. Esta calibracin
previa se hace a base de mtodos qumicos, por lo cual la exactitud del mtodo instrumental depende de la exactitud del mtodo qumico empleado. Esta calibracin suele ser cara. Existe una gran cantidad de tcnicas instrumentales. Estas pueden clasificarse en: Espectroscpicas Electroqumicas Cromatogrficas Acopladas o conjuntadas Diversas 4.2. MTODOS PTICOS: DEFINICIN Y CLASIFICACIN Los mtodos pticos se definen como aquellos que miden la radiacin electromagntica que emana de la materia o interacciona con ella. Los mtodos pticos se dividen en: 1.) Mtodos pticos espectroscpicos: se basan en la medida de la intensidad y longitud de onda de la energa radiante. La caracterstica comn a todos ellos es que se basan en la medida de espectros. Estos son debidos a transiciones entre estados de energa caractersticos. Son los mtodos ms utilizados donde el mecanismo de extraccin es la absorcin o emisin de la radiacin. 2.) Mtodos pticos no espectroscpicos: se basan en una interaccin entre radiacin electromagntica y la materia que produce como resultado un cambio en la direccin de las propiedades fsicas de la radiacin electromagntica.
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En estos mtodos los mecanismos de interaccin son la reflexin, refraccin, difraccin, dispersin, interferencias, polarizacin o la dispersin refractiva. Los mtodos espectroscpicos van acompaados de un espectro. 4.3. PROPIEDADES DE LA RADIACIN ELECTROMAGNTICA Radiacin electromagntica: propagacin de la energa en el espacio sin soporte de la materia por medio de ondas transversales. Clsicamente el comportamiento de la luz se ha atribuido a su naturaleza ondulatoria, pero hay fenmenos (absorcin o emisin) que no pueden explicarse con la teora ondulatoria y que requieren que la radiacin se comporte como pequeos haces de energa, es decir, como partculas llamadas fotones. En la prctica, la mayor parte de la radiacin electromagntica no est polarizada, es decir, presenta vectores elctricos y magnticos en todas las direcciones perpendiculares a la direccin de propagacin, aunque para explicar la interaccin de la radiacin electromagntica de la materia puede utilizarse tanto el componente elctrico como el magntico. (Resulta ms fcil representar el componente elctrico, y con l vamos a trabajar). Parmetros Ondulatores - Amplitud de una onda sinusoide: longitud del vector elctrico en el mximo de la onda. Periodo de la radiacin: tiempo en segundos necesario para el paso de dos
mximos o mnimos consecutivos por un punto fijo del espacio. Los diferentes tipos de radiacin electromagntica se caracterizan generalmente por su longitud de onda o su frecuencia: Longitud de onda ():longitud de un ciclo o distancia entre dos mximos o Frecuencia (): nmero de ciclos que pasan por segundo por un punto fijo.
mnimos consecutivos. -
La longitud de onda y la frecuencia se relacionan mediante la expresin:
V velocidad de propagacin del medio
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Si es en el vaco, la velocidad en el medio seria igual a la velocidad de la luz (c = 31010 m / s): c = Es importante sealar que la frecuencia es la nica caracterstica verdadera de una radiacin dada, ya que viene determinada por la fuente y permanece invariable. Por el contrario, la velocidad de propagacin y la longitud de onda, dependen de la naturaleza del medio de propagacin. En el vaco la velocidad de la radiacin electromagntica es independiente de la longitud de onda, y alcanza su valor mximo. La radiacin electromagntica se mueve en el vaco con una velocidad de 299791012 cm / s. La velocidad de la luz en el aire difiere un 003 % de la velocidad de la luz en el vaco, por lo que se puede aproximar a:
En lugar de expresar la frecuencia en ciclos / s, Hz s-1, se utiliza frecuentemente el nmero de onda () que es el inverso de la longitud de onda. Como la longitud de onda se expresa en cm, el nmero de onda se expresar en cm-1. El nmero de onda representa el nmero de ondas que hay por centmetro, y es directamente proporcional a la frecuencia:
= c
Dualidad onda-partcula de la radiacin Hasta ahora hemos comentado la naturaleza ondulatoria de la radiacin electromagntica. Sin embargo, existen ciertos fenmenos como el efecto fotoelctrico, el efecto Compton la distribucin espectral del cuerpo negro, que requieren que la radiacin sea considerada como un flujo de partculas o corpsculos. Esta teora fue establecida finalmente por Newton, y la controversia entre defensores de ambas teoras se prolong hasta principios del siglo XX. El dilema fue resuelto por Max Planck que en 1.900 unific ambas teoras. Para ello Planck consider que la energa de las partculas en movimiento
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trmicamente excitadas, est cuantizada, es decir, que nicamente estn permitidas ciertas energas. Posteriormente supuso que cuando un sistema pasa de un nivel de energa a otro de menor energa, se emite un cuanto de energa, y que esta energa est relacionada con la frecuencia de la radiacin emitida, mediante:
E = = h
radiacin.
hc
E Energa del cuanto de radiacin. Longitud de onda de la Frecuencia de la radiacin. h Cte. de Planck = 662410-27Hz / s
La ecuacin de Planck unifica las dos teoras ya que relaciona la energa de un cuanto de radiacin (concepto corpuscular), con la frecuencia de la radiacin (concepto ondulatorio). 4.4. ESPECTRO ELECTROMAGNTICO Abarca un intervalo enorme de longitudes de onda y frecuencias. Sin embargo las zonas de separacin entre las regiones no estn establecidas de un modo rgido. El espectro de la figura 5.1. est casi completo, ya que le faltan algunas regiones que estn en los extremos. En el extremo de alta energa se han omitido los rayos csmicos que son ms energticos que los rayos . En el extremo de baja frecuencia se ha omitido la longitud de onda perteneciente a los generadores de corriente. Las divisiones son funcin de los mtodos que se precisan para generar y detectar los distintos tipos de radiacin, siendo la regin visible del espectro (percibida por el ojo humano) muy pequea en comparacin con otras regiones espectrales.
4.5. PRINCIPIOS EN LOS QUE SE BASAN LOS MTODOS PTICOS NO ESPECTROSCPICOS

Existen algunas formas de interaccin entre la radiacin electromagntica y la materia, que se explican considerando la luz como una onda. Algunas de estas interacciones son el fundamento de un gran nmero de mtodos analticos, y la mayora de ellas juegan un papel esencial en el diseo de los instrumentos pticos. Mtodos Espectroscpicos: 4.5.1. Refraccin Base de la refractometra. Se define como el cambio de direccin de la radiacin al pasar de un medio a otro, pudiendo atribuirse a la diferencia de velocidad en los dos
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medios. Siempre que la luz pasa de un medio a otro es parcialmente reflejada y parcialmente refractada o trasmitida. La energa reflejada aumenta cuando la diferencia de velocidad entre los dos medios aumenta y esta es superior cuanto mayor sea la diferencia de densidad entre los dos medios. Una ley de refraccin til, es la ley de Snell, que indica que el cociente entre el seno del ngulo de incidencia y el seno del ngulo de refraccin es una constante conocida como ndice de refraccin. Las mismas relaciones pueden establecerse entre las velocidades relativas de la radiacin en ambos medios: La velocidad de la radiacin en un medio determinado depende de su longitud de onda, de manera que en la prctica para establecer los ndices de refraccin con un criterio absoluto se utiliza la lnea D del sodio, y el medio uno es la del vaco. (589 nm) Dado que la velocidad de la luz en el vaco es una constante, la definicin del ndice de refraccin absoluto vendr dada como c / V2 = n2. En la prctica el medio uno es el aire, por que n2 = Vaire / V2 El ndice de refraccin (n) se utiliza con frecuencia para la identificacin de sustancias. La razn por la cual las mismas permiten descomponer la luz en funcin de sus longitudes de onda, radica en que la velocidad de la radiacin en un medio determinado depende de sus longitudes de onda. De n = V1 /V2 pueden deducirse que los mejores prismas sern los de materiales elevados (ndice de refraccin elevados). 4.5.2. Reflexin Se produce siempre que incide radiacin en la interfase entre dos materiales de ndice de refraccin diferentes. Si la superficie es lisa, el ngulo de incidencia es igual al ngulo de reflexin. Mientras que superficies irregulares dan lugar a reflexiones difusas con poco inters desde el punto de vista ptico. Se define reflexin como la refractancia o poder de reflexin entre la intensidad de la radiacin reflejada y la de la radiacin incidentes en la interfase. As para un ngulo de incidencia como la refractancia (l) ser mayor cuanto mayor sea el ndice de refraccin del medio dos, aunque tambin interviene el medio uno:
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(n2 n1)2 Ir l = = I0 (n1 + n2)2 refraccin del
Ir = intensidad reflejada I0 = intensidad incidente n1 , n2 = ndice de medio 1 y 2.
Cuanto mayor sea la diferencia entre (n2 n1) mayor ser la reflectancia. Si n1 = n2, no se producir reflexin y si una superficie de un objeto no refleja luz esta es invisible, por tanto, los objetos invisibles lo son cuando estn rodeados por un medio de ndice de refraccin idntico al suyo propio. 4.5.3. Dispersin La turbidemetra y nefelometra se basan en la dispersin. Cuando la radiacin electromagntica interacciona con partculas de pequeo tamao induce oscilaciones en las capas elctricas de la materia y los dipolos as inducidos emiten ondas secundarias en todas las direcciones. En este proceso parte de la energa se emite sin cambiar su longitud de onda. Se produce dispersin cuando las partculas tienen dimensiones del mismo o menor orden de magnitud que la longitud de onda incidente y adems se encuentran en un medio con ndice de refraccin diferente al suyo propio si el tamao de las partculas es 2 inicialmente se produce reflexin y refraccin. Dispersin de la luz por los gases se observa en el aire, y es la responsable del color azul del cielo y del color rojo del sol en el ocaso. TABLA: Partculas que producen dispersin en diversas regiones del espectro.
Dos tipos de dispersin: Dispersin Rayleigh: Es producida por partculas cuyo tamao es del 5 al
10 % de la longitud de onda de la radiacin incidente. Este tipo de dispersin da lugar a una distribucin de las intensidades de la radiacin dispersada que es relativamente simtrica en todas las direcciones. Figura 1 10 (partculas pequeas)
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Dispersin por partculas grandes: Se produce cuando las dimensiones
de las partculas son superiores al 10 % de la longitud de onda e inferiores a 3/2 de la longitud de onda, ya que para estos ltimos valores desaparece la dispersin. En este caso la distribucin de intensidad no es larga y se desva en el mismo sentido que la radiacin incidente. Figura 1 11. 4.5.4. Interferencias Una onda puede describirse mediante una ecuacin sinusoidal de la forma: y = campo elctrico A = amplitud = ngulo de fase = frecuencia angular
y = A sen (t + )
tambin puede escribirse como = 2 y = A sen (2 t + )

Cuando n-ondas electromagnticas que se diferencian en frecuencia (), amplitud (A) y ngulo de fase (), pasan al mismo tiempo por un punto del espacio, se puede escribir que: y = A1 sen (21 t + 1) + A2 sen (22 t + 2) + ........ + An sen (2n t + n) siendo y el campo resultante. Estas ondas interaccionan o interfieren de modo que la onda resultante es la superposicin de las ondas originales. La intensidad de la onda resultante depende de la diferencia de fase entre las ondas que interaccionan. Figura 1 12. En esta figura se muestra la superposicin para dos ondas de distinta amplitud pero de igual frecuencia. Se superponen para dar una onda resultante. Puede observarse que en este caso se produce una interferencia constructiva que es la mxima situacin que se produce siempre que 1 y 2 son iguales a 0 bien 360 , mltiplos enteros. De igual manera una interferencia destructiva mxima se produce cuando la diferencia (1 2) sea de 180 180 ms un mltiplo de 360 . Las interferencias son la base de la interferometra. Un aspecto importante de la superposicin de ondas consiste en que una onda compleja puede descomponerse en componentes simples por medio de una operacin matemtica denominada transformada de Fourier.
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Fourier entre 1768 1830 demostr que cualquier movimiento peridico independientemente de su complejidad puede describirse mediante una suma sencilla de trminos seno y coseno por ejemplo la forma de onda cuadrada muy usada en electrnica puede describirse por medio de la siguiente ecuacin: y = A sen 1 1 1 2 t + sen 6 t + sen 10 t + + sen n2 t 3 5 n
en la que n toma los valores 3, 5, 7, 9, 11, 13, ..... Una representacin grfica de este proceso sumatorio se muestra en la transparencia (figura 5 6) En la parte: a) la lnea continua representa la suma de tres ondas sinusoides con distinta amplitud (5:3:1) y de frecuencia (1:3:5). Se observa que la resultante empieza a aproximarse al perfil de una onda cuadrada. b) resultado de incorporar nueve ondas. Se aproxima ms a una onda cuadrada. Esta descomposicin es tediosa si se realiza manualmente pero con un ordenador y un programa adecuado se convierte en tarea de rutina.
4.5.5. Difraccin Es un proceso por el cual un haz paralelo de radiacin electromagntica se curva cuando pasa por un obstculo puntiagudo o a travs de una abertura estrecha. Este fenmeno es de gran importancia para la comprensin de las rendijas y redes de difraccin usadas en los instrumentos pticos. La difraccin se demuestra con facilidad en el laboratorio cuando se generan mecnicamente en un depsito de agua, ondas de frecuencia constante. Observando las ondas antes y despus de pasar a travs de una abertura o rendija. Cuando la rendija es ancha en comparacin con la longitud de onda del cuanto, la difraccin es insignificante y difcil de detectar. Sin embargo, cuando la longitud de onda y la abertura de la rendija son del mismo orden de magnitud, la difraccin llega a ser intensa. En este caso la rendija se comporta como un nuevo origen a partir del cual las ondas se irradian en una serie de arcos de cerca de 180 , de manera que la direccin del frente de onda parece como si se curvara al pasar entre los bordes de la rendija.
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La difraccin est relacionada con la interferencia como puede demostrarse considerando el experimento realizado por Thomas Young en 1800, en el que se demuestra de modo inorgnico la naturaleza de la luz. (Figura 5 7 y 5 8) Cuando un haz paralelo atraviesa una rendija u orificio pequeo, se difracta e ilumina casi por igual a las dos rendijas b y c que hay prximas entre s. La difraccin que sale de estas rendijas se observa entonces en una pantalla en el plano x y y si la radiacin era monocromtica, se observar una serie de imgenes oscuras y luminosas que son consecuencia de la existencia de interferencias destructivas mximas y constructivas mximas. La banda central presenta un mximo de intensidad en el punto Po debido a que la interferencia entre las ondas es mxima in la direccin = 0, mientras que la interferencia destructiva entre las ondas da lugar a mnimos de intensidad. Esta difraccin de Fraunhober implica la utilizacin de lentes, las cuales se utilizan en la mayora de los trabajos pticos. Si no se utilizan lentes se emplea el trmino difraccin de Fresnel. En esta figura se muestra un diagrama de difraccin de Frenchouse en el que puede observarse la existencia de un mximo central en Po y mnimos en P1, P2, P3. El ngulo al cual aparece el mnimo en la figura se puede calcular a partir de la longitud de onda y la anchura de la rendija:
Sen =
b de manera que disminuye cuando la anchura de la rendija (b) aumenta, o cuando la longitud de onda () disminuye. Se deduce que cuando la rendija es grande en comparacin con la longitud de onda, la difraccin no tiene importancia. En los instrumentos pticos en general presentan ventajas utilizando nicamente la banda central de intensidad mxima, sacrificando la pequea cantidad de energa de los mximos secundarios.
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Anchura ptima de rendija

Para obtener el mximo rendimiento al utilizar un prisma o una red de difraccin para descomponer la radiacin electromagntica en sus longitudes de onda, es conveniente iluminar toda la cara del prisma o toda la longitud de la radiacin. Del estudio realizado se deduce que existe una anchura ptima de rendija que permite enfocar la banda central y la banda de mxima intensidad sobre toda la longitud del prisma o la red. Puede demostrarse que la anchura ptima viene dada por: bptica = w iluminarse 4.5.6. Dispersin Refractiva Separacin de un haz de radiacin en las longitudes de onda que lo componen. Esta separacin se puede conseguir mediante un prisma utilizando el fenmeno de la refraccin o mediante una red utilizando el fenmeno de la difraccin. Dispersin mediante un prisma Si una radiacin incide sobre un dielctrico que posea caras paralelas, los rayos que emergen son paralelos a los rayos incidentes. En cambio, si las caras del material no son paralelas cambiar la direccin del haz refractado por segunda vez o emergente. Adems debido a que la velocidad de la luz en cualquier medio diferente al vaco depende de la longitud de onda, cada componente de una mezcla de longitudes de onda seguir su propio camino, y por tanto, el grado de desviacin depender de su longitud de onda, dando lugar a la dispersin refractiva del haz. La capacidad de un prisma para dispersar la radiacin se caracteriza con frecuencia por su dispersin angular, que es una medida de la separacin angular entre dos rayos de luz que difieren en sus longitudes de onda en una cantidad d: d 2 1 = = d 2 1 Esto es vlido sii y son pequeos. Tambin podemos expresar la dispersin angular como: 2 d
= longitud de onda
d = distancia entre la rendija y el prisma w = anchura del prisma que debe
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d d
d = dn
dn d
4.5.7. Polarizacin La mayor parte de las fuentes de radiacin producen perturbaciones electromagnticas en las cuales las vibraciones de los vectores elctrico y magntico tienen lugar en todas las direcciones perpendiculares a la direccin de propagacin de la radiacin, es decir, las direcciones de estos vectores se distribuyen igual en una serie de planos centrados a lo largo de la trayectoria del haz, tal como se muestra en la figura: 1 25 (dispersin de la luz). Esta radiacin no polarizada puede representarse convirtiendo hipotticamente y mediante una suma de vectores, los infinitos planos direccionales en dos planos principales perpendiculares. La eliminacin de uno de los dos planos de vibracin resultantes, da lugar a la luz polarizada en un plano. La polarizacin es la base de la polirametra y de la dispersin ptica rotatoria. Se puede obtener radiacin polarizada en un plano mediante reflexin, dicroismo, doble difraccin y dispersin. 4.6. TIPOS DE ESPECTROS Y MECANISMOS DE INTERACCIN Todos los aspectos pueden dividirse en tres tipos fundamentales: de absorcin, de emisin y rama: 4.6.1. Espectros de Absorcin La absorcin es el fundamento de mtodos espectroscpicos en todo el espectro electromagntico. El proceso de absorcin puede representarse de modo sencillo: x + h x* x* x + Q
La primera ecuacin engloba todos los procesos de absorcin de importancia. La segunda representa la disipacin posterior de la energa absorbida, generalmente debida a la colisin con otros tomos o molculas. En general esta disipacin no se considera cuando se estudian procesos de absorcin debido a que la cantidad de calor liberado es generalmente
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despreciable. Sin embargo su consideracin es importante para comprender su espectro de absorcin y para distinguirlo del de fluorescencia y el de otros espectros. Para que una radiacin electromagntica sea absorbida por la materia deben cumplirse: 1.) Debe haber una interaccin entre el campo elctrico de la radiacin
electromagntica y alguna carga elctrica de la sustancia. 2.) La energa de la radiacin incidente a de ser exactamente igual a la
diferencia de energas entre el estado fundamental y uno de los estados excitados de la especie absorbente. Si no se cumple la condicin 2, la energa ser trasmitida sin absorcin. Por otro lado la energa o frecuencia del fotn incidente para que pueda ser absorbido, viene dado por la ecuacin de Bohr: h = Ef Ei Ei = energa de la especie absorbente en el estado fundamental Ef = estado permitido de energa superior
A.) Absorcin Atmica El paso de la radiacin policromtica ultravioleta o visible a travs de un medio constituido por partculas monoatmicas (Na, Hg) da lugar a espectros de absorcin constituido por lneas definidas que corresponden a las transiciones de los estados de energa permitidos del tomo. La simplicidad de tales espectros se debe al pequeo nmero de posibles estados energticos de las partculas absorbentes. As por ejemplo el vapor de Na presenta dos picos agudos de absorcin muy prximos entre s en la regin del visible (589 5897). Picos: corresponden a la excitacin del e- desde el 3s a los estados 3p, que difieren muy poco en su energa. B.) Absorcin Molecular Los espectros de absorcin de radiacin poliatmicos son ms complicados, ya que el nmero de estados de energa es mucho mayor que el que corresponde a los tomos aislados, adems las transiciones electrnicas vienen acompaadas de cambios simultneos en los estados vibracionales o rotacionales de la molcula, de modo que se obtienen espectros de bandas. Este hecho puede explicarse mediante los diagramas de niveles de energa. (Figura 16).
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Los niveles de energa principales n son los niveles de energa electrnicos, los cuales solo se indica en la figura y se designan por el nmero electrnico n, siendo n = 1, 2, 3, .... Asociados a cada uno de los niveles energticos electrnicos se encuentran los diferentes subniveles vibracionales que se designa por el nmero cuntico = 0, 1, 2, 3,.... y cada uno de los niveles vibracionales se encuentra subdividido en diferentes niveles rotacionales que se designan por el nmero cuntico rotacional = 0, 1, 2,... Esta representacin de la figura esta simplificada ya que en realidad la difraccin de energa entre los niveles energticos electrnicos es muy grande, los niveles vibracionales tienden a converger a energas elevadas y por otro lado, los niveles rotacionales tienden a divergir a energas elevadas. Las reglas de seleccin permiten generalizar qu transiciones estn permitidas y cuales no. Algunas de estas reglas para molculas simples lineales tienen lugar en: 1.) Las transiciones rotacionales puras solo pueden tener lugar entre niveles
rotacionales adyacentes: 2.)
= 1 = 1 = 1
Las transiciones vibracionales deben ir acompaadas de transiciones
rotacionales simultaneas:
3.) Las transiciones elctricas van generalmente acompaadas de transiciones vibracionales y rotacionales, aunque esto no es imprescindible:
n = 1
= 1
= 1
Segn acabamos de ver, el espectro electrnico contiene siempre superpuestos a las transiciones electrnicas, transiciones vibracionales y rotacionales, dado que un gran nmero de molculas que se encuentran en el estado electrnico fundamental se pueden encontrar en estados vibracionales excitados, se pueden obtener un gran nmero de transiciones distintas, pero de parecida energa. Por esta razn, los espectros de absorcin en radiaciones tanto en el ultravioleta como en el visible, se caracterizan por presentar varias ondas de absorcin. 4.6.2. Espectros de emisin Los espectros de emisin se deben a un proceso que es exactamente el inverso a la absorcin: x* x + h
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de manera que la sustancia pasa de un estado exaltado de elevada energa a uno de baja energa y emite radiacin. Pueden distinguirse tres clases distintas de procesos de emisin que definen como la sustancia alcanza el estado excitado. Emisin del ncleo radiactivo Los ncleos de las sustancias radiactivas naturales o producidas por bombardeo de neutrones, se pueden desintegrar de manera espontnea emitiendo rayos , y as el espectro de rayos que se obtiene es caracterstico del ncleo emisor. Emisin despus de la absorcin de radiacin electromagntica La sustancia puede pasar de un estado excitado al estado fundamental perdiendo el exceso de energa en forma de calor. Sin embargo, algunas sustancias pueden desactivarse por otros mecanismos de emisin como son la resonancia, fluorescencia, fosforescencia: Resonancia: fenmeno poco frecuente que tiene lugar cuando un tomo o molcula que ha absorbido una determinada radiacin vuelve al estado fundamental emitiendo radiacin de la misma frecuencia que la absorbida. Este tipo de emisin se da casi exclusivamente en sistemas con tomos aislados en los cuales no existe posibilidad de choques con otra sustancia antes de la emisin. Fluorescencia y Fosforescencia: son reemisiones de radiacin de longitudes de onda superior, es decir, de menor energa que la radiacin absorbida. Esto es debido a que parte de la radiacin absorbida se pierde generalmente por desactivacin vibracional antes de la emisin. En la fluorescencia el tiempo transcurrido entre la absorcin y emisin de radiacin oscila entre 10-4 y 10-8 segundos, de modo que la reemisin parece instantnea y cesa cuando se elimina la fuente de radiacin. En la fosforescencia el tiempo transcurrido entre la absorcin y la emisin es mucho mayor, variando entre 10-4 y 10 segundos o ms. Emisin a partir de una excitacin no electrnica Tambin puede usarse energa no electromagntica para llevar a un tomo o molcula al estado excitado capaz de producir emisin de radiacin. Esta energa puede ser elctrica o trmica, pudiendo describirse el proceso: x + (energa elctrica o trmica) x* x + h x*
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La excitacin elctrica se produce bsicamente mediante el bombardeo con electrones de mayor energa, por ejemplo en tubos de rayos X y en la fuente de chispa de corriente alterna, y son ejemplo de excitacin trmica la utilizacin de la espectrofotometra de llama y las fuentes de arco de corriente continua. 4.6.3. Espectro Raman En la espectroscopia Raman interviene un proceso nico, en el cual la molcula es excitada a un nivel de energa que no pertenece a la molcula, sino que corresponde a la radiacin de excitacin. (Figura 1 5). 4.7. LEYES DE ABSORCIN DE LA RADIACIN Al interaccionar la radiacin electromagntica con la materia se produce absorcin si la frecuencia de la radiacin es tal que su energa coincide con la necesaria para que el sistema pase al nivel de mayor energa y permitido. Las dos leyes fundamentales que rigen el comportamiento de la fraccin de la radiacin incidente absorbida al pasar a travs de una muestra dada, son la ley de LAMBERT BEER: 1.) Ley de LAMBERT: formulada por Bouguer en 1.729 y restablecida por Lambert en 1768 se conoce como Ley de Lambert, y predice el efecto que produce el espesor de la muestra sobre la fraccin de radiacin que se absorbe. 2.) Ley de BEER: establecida en 1852 y llamada Ley de Beer, establece el efecto de la concentracin. La forma combinada de las dos leyes se conoce como Ley de Beer, ya que la concentracin de la especie absorbente es el factor ms importante en la aplicacin de estas leyes. Aunque la Ley de Beer se usa en la zona central del espectro electromagntico (ultravioleta a infrarrojo), se cumple tambin para procesos de absorcin en cualquier zona del espectro, y de hecho constituye la base de las aplicaciones cuantitativas de la absorcin. 4.7.1. Ley de Lambert Este autor lleg a la conclusin intuitiva y razonada de que cada unidad de longitud del material a travs del cual pasa la radiacin absorbe la misma fraccin de radiacin.
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Si dado un haz monocromtico y paralelo de intensidad Io que pasa a travs de un espesor db del material absorbente, la perpendicular de la intensidad puede establecerse mediante la expresin: dI = k I db
variacin de intensidad constante de `proporcionalidad anchura de la cubeta o espesor del material absorbente
el signo menos de la expresin indica que la intensidad disminuye al aumentar b. Reordenando esta ecuacin tenemos: dI = k db I lo cual establece que la fraccin de radiacin absorbida es proporcional al espesor atravesado. Si Io es la intensidad incidente, si integramos obtenemos:
I b
dI = k I
db
0
teniendo
en
cuenta
los
lmites
de
integracin
I
I Log = k b I0
I k lg = b I0 2303
Esta ecuacin constituye la forma definitiva de la Ley de Lambert que es una ley exacta y aplicable a cualquier medio homogneo y no dispensivo (gas, lquido, slido o en disolucin), y por otro lado la constante de proporcionalidad k depende para una sustancia absorbente dada de la longitud de onda y de la temperatura. Adems para una disolucin, la concentracin a de permanecer constante. Esta ley aunque es exacta no es de gran aplicacin en qumica.
4.7.2. Ley de Beer Beer encontr que un aumento de la concentracin del soluto absorbente produce el mismo efecto que un aumento proporcional en la distancia que recorre el haz a travs de la muestra. La constante de proporcionalidad (k) es a su vez proporcional a la concentracin del soluto absorbente: Io k
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Log = b I 2303 Segn Beer: K concentracin = a c 2303 nueva constante de proporcionalidad Teniendo en cuenta la Ley de Lambert: Io Log = a b c I La Ley de Beer es fundamental en los mtodos pticos de anlisis, ya que nos permite calcular la concentracin de una sustancia a partir de la medida de la radiacin absorbida por una disolucin de la misma. La relacin I / Io se conoce como trasmitancia, y no tiene unidades. b es el espesor de la cubeta en centmetros, siendo constante en la mayora de los casos. a es una constante caracterstica de la sustancia absorbente y de la longitud de onda de la radiacin utilizada. Si c se expresa en moles por litro, la constante a se transforma en , que se llama absortividad molar o coeficiente de extincin molar. Frecuentemente se usa en el trabajo experimental: I % T = Io Io A = log I La absorbancia tambin se llama densidad ptica. Todas estas definiciones se resumen en la Tabla 1 5 (Nomenclatura de la Ley de Beer) Ejemplo: La intensidad de un haz de luz disminuye en un 20 % al atravesar 1 cm de un medio absorbente. Cul ser la disminucin despus de atravesar 5 cm del mismo medio?
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100
T = Transmitancia
% T = 100 % 20 % = 80 % Io log = log T = a b c (1) I b = 1 cm a c = log T = log 080 = 0096 b = 5 cm 048 (1) T = 0331 % T = 331 % de disminucin = 100 331 = 67 % Ejemplo: La absortividad molar de un soluto es igual a 110104. Hallar la absorbancia y el tanto por ciento de transmitancia a travs de una disolucin de concentracin igual a 3 10-5 M, en una cubeta de 05 cm: A = b c = (110104) (05) (310-5) = 0165 = log T T = 0685 % T = 6856 log T = a b c = 0096 5 =
La Ley de Beer tambin se aplica a disoluciones que contengan ms de una especie absorbente, y as suponiendo que no existen interacciones entre las distintas especies, la absorbancia total para un sistema multicomponente se expresara: ATOTAL = A1 + A2 +.......+ An Propiedad importante ATOTAL = 1 b c1 + 2 b c2 +.......+ n b cn Aditividad
Curvas Espectrales La Ley de Beer es la base de anlisis cuantitativo, ya que pone de manifiesto que la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de un soluto. Para aplicar la Ley de Beer es necesario seleccionar la longitud de onda optima, y por esta razn se determina la curva espectral. Esta se obtiene representando la absorbancia el % de T en funcin de la longitud de onda, mantenindose la concentracin de la disolucin y la longitud b de la cubeta constantes. (Figura 1 35). Estas curvas reciben el nombre de espectro de transmitancia y espectro de transicin. Las curvas espectrales son caractersticas de la sustancia absorbente, y por tanto pueden utilizarse para el anlisis cuantitativo de soluto.
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Para el anlisis cuantitativo se elige una longitud de onda a la cual el soluto absorba fuertemente y no presente absorbancia otras sustancias presentes. Aplicacin de la Ley de Beer Debe comprobarse siempre antes de utilizarla para un anlisis cuantitativo exacto. Para ello se preparan una serie de disoluciones de concentracin perfectamente conocidas en el intervalo en el cual se supone que se encuentra la concentracin de la muestra problema, y se mide la absorbancia de estas disoluciones a una longitud de onda dada y con un paso de cubeta de longitud determinada. Las absorbancias medidas se representan en funcin de las concentraciones segn la Figura 1 36. 4.7.3. Limitaciones de la Ley de Beer Las causas que llevan a que no se cumplan pueden dividirse en dos grupos principales: 4.7.3.1. Limitaciones propias de la Ley de Beer Aunque en la deduccin no lo hemos considerado la absorbancia medida es funcin de la absorbancia real y del ndice de refraccin, mediante la expresin: a = areal acalculada Debido a que el ndice de refraccin varia con la concentracin tambin lo hace la absorbancia. Sin embargo, en la prctica el ndice de refraccin (n) se considera constante para concentraciones menores o iguales a 10-2 M, por tanto, puede considerarse exacta a estas bajas temperaturas. Esto hace que la ley de Beer sea una ley limite que solo es estrictamente vlida a bajas concentraciones.
4.7.3.2. Limitaciones debido al incumplimiento de las premisas de la Ley de Beer

Se puede dividir en cuatro premisas que implcitamente se han aceptado en la deduccin de la ley de Beer son: 1.) El nico mecanismo de interaccin entre la radiacin electromagntica y la muestra es la absorcin.
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2.) Se utiliza radiacin monocromtica. 3.) Las especies problema actan independientemente unas de otras. 4.) La absorcin estudiada corresponde a un volumen de seccin transversal uniforme. Interacciones de la luz con el analito debido a mecanismos distintos de la radiacin. Existen mecanismos diferentes que influyen en la intensidad de la luz trasmitida, que son: Emisin por Resonancia: x + h x x* x + Q Sin embargo h se emite en todas las direcciones, por lo que la absorbancia aparente es menor que la absorbancia real, en una cantidad que es igual a la emisin por resonancia que emite en la direccin de la radiacin incidente. La emisin por resonancia se produce casi exclusivamente en sistemas que contienen tomos aislados. Fluorescencia o Fosforescencia: x + h x* x* x + h + Q = frecuencia de la emisin fluorescente o fosforescente que menor que la de la radiacin incidente. La radiacin h tambin se emite en todas las direcciones dando lugar a una absorbancia aparente menor que la absorbancia real. Dispersin: x + h x* x* x + h = frecuencia igual a la radiacin incidente, pero emitida en todas las direcciones a partir de la partcula que causa la dispersin. La dispersin se produce para frecuencias de la radiacin de absorcin mayores que la probabilidad de dispersin al aumentar la frecuencia de la radiacin incidente. La dispersin es generalmente insignificante en presencia de Utilizacin de radiacin no monocromtica
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El cumplimiento estricto de la ley de Beer solo tiene lugar cuando se utiliza una radiacin monocromtica. Sin embargo, en la prctica no es posible utilizar radiacin monocromtica (radiacin de una sola longitud de onda), ya que los dispositivos instrumentales aslan una banda ms o menos simtrica de longitudes de onda en torno al valor deseado. El efecto de la radiacin policromtica sobre la Ley de Beer lo podemos ver en la trasparencia siguiente: 4.8. ERRORES COMETIDOS AL APLICAR LA LEY DE BEER Vamos a considerar tres tipos de errores: Errores qumicos Errores instrumentales Errores personales 4.8.1. Errores Qumicos 1. Efecto del disolvente: El efecto que produce el cambio de disolucin en un soluto no puede predecirse de manera general aunque a menudo origina corrimientos espectrales, ensanchamientos de bandas y desviaciones de la Ley de Beer. 2. Efectos debidos a sistemas en equilibrio: Se producen desviaciones de la Ley de Beer cuando un analito se disocia, asocia o reacciona con le disolvente para originar un producto con un espectro de absorcin diferente. Ejemplos: Cr2O72 tiene un mximo de absorcin a 4500 nm Cr2O72 + H2O 2HclO4 2H+ + 2CrO4 2
Estos productos de cromato dicido y el cromato tienen propiedades de absorcin distintas del dicromato. 3. Efectos debidos a impurezas en el agua destilada o de los reactivos as como sustancias interferentes en la muestra. 4.8.2. Errores Instrumentales Desviaciones debidas al uso de radiacin no monocromtica.
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Desviaciones debidas a la presencia de radiacin parsita.
Se conoce como radiacin parsita a toda radiacin extraa que llega al detector, pero que no proviene de la muestra. Puede producirse por la presencia de polvo, defectos en el sistema ptico (rayaduras, etc.). Aunque esta radiacin parsita existe siempre sus efectos son ms importantes a valores elevados de absorvancia tal como se puede demostrar en la ecuacin: I0 Is llega al detector I
Is Intensidad de la radiacin parsita que
Iabsorbida
I + Is = I0 + Is I0 + I s I + Is
A = log
De esta forma, por el uso de radiacin no monocromtica, los errores instrumentales llevan siempre a desviaciones negativas de la Ley de Beer.
4.8.3. Errores Personales Se pueden producir un gran nmero de estos errores, aunque nos centraremos en: Cuidado de las cubetas de absorcin: deben de estar limpias y sin huellas. Si trabajamos en el ultravioleta, hay que limpiarlas con cido ntrico concentrado, o bien con agua regia. No se limpiara con cido sulfrico concentrado o caliente, porque podra atacar a la cubeta.
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Control de Temperatura: en la mayor parte de las medidas cuantitativas de absorcin se realizan a temperatura ambiente. Pero si el soluto absorbente interviene en una reaccin de equilibrio, el control de la temperatura puede ser crtico y por ello en algunos casos debe de controlarse. En general, un aumento de la temperatura, lleva consigo un desplazamiento de los mximos de absorcin (o de las bandas de absorcin) a longitudes de onda mayores en regiones del Ultra Violeta y del visible, ocurriendo lo contrario en el infrarrojo.
TEMA 5:
ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN MOLECULAR UV - VIS

1. INTRODUCCIN La espectroscopia de absorcin UV Visible fue uno de los primeros mtodos fsicos que se aplic al anlisis cuantitativo y a la determinacin de estructuras. Si bien la espectroscopia del Infrarrojo y Radiacin Monocromatica, son las tcnicas ms idneas para el anlisis cuantitativo y estructural. La espectroscopia UV Visible es una tcnica auxiliar til para la elucidacin de estructuras. La regin de longitud de onda que estudiaremos ser:
200
vaco lejano UV
400
vaco prximo
750
(nm)
Visible
El UV se divide en UV de vaco (10 200) nm y el UV prximo (200 400) nm. El UV de vaco se llama as porque en estas longitudes de onda, el oxgeno absorbe y lo debemos eliminar de la disolucin si vamos a medir en esta zona. Para eliminarlo hacemos burbujear una corriente de nitrgeno. La radiaciones UV Visible tienen en comn que la absorcin en ambas regiones provoca la excitacin de electrones a niveles de energa superiores. 2. TEORA DE LA ABSORCIN La energa y la variacin de energa de una molcula es:
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Tema 1: Metodologa Analtica = Elctrico + Vibracional + Rotacional + Translacional
El proceso que requiere mayor cantidad de energa es la excitacin del electrn a un nivel electrnico superior, siendo la diferencia energtica entre dos estados vibracionales aproximadamente diez veces menor que la requerida entre dos estados electrnicos. La Rotacional (entre dos estados rotacionales) es del orden de 10 100 veces menor que la diferencia de energa entre dos estados vibracionales. Aunque la Translacional tambin est cuantizada, estos son tan pequeos que no influyen en la radiacin absorbida en el UV Visible. 2.1.
Estructura fina vibracional rotacional de espectro electrnico
La excitacin electrnica va acompaada de cambios vibracionales y rotacionales, y por ello lo que debera de ser una lnea fina de absorcin, aparece como una banda ancha pero que sin embargo, debido a estos cambios vibracionales y rotacionales, posee una estructura fina. En la fase gaseosa, el espectro observado es debido a tomos o molculas aisladas y generalmente, es posible resolver la estructura fina vibracional / rotacional. En disolucin, las molculas se encuentran solvatadas por molculas de disolvente que frenan la rotacin y desaparece la estructura fina. Esto mismo ocurre en gases a alta presin. Adems, los campos de disolvente modifican irregularmente los niveles de energa vibracionales y si tenemos un nmero de molculas grande, los niveles de energa sern poco definidos y el resultado es una banda ancha. En general, un aumento en la polaridad del disolvente provoca una disminucin en la resolucin de las bandas vibracionales, mientras que una disminucin de la temperatura, incrementa la resolucin de los niveles vibracionales. (Transparencia: Fig. 2.2.).
2.2.
Tipos de bandas de absorcin
Todos los compuestos orgnicos son capaces de absorber radiacin, ya que contienen electrones de valencia que pueden ser excitados a niveles superiores de energa. Las energas necesarias para excitar los electrones que forman los enlaces ms sencillos son elevadas, y caen dentro de la regin del UV de vaco (810 185) nm. La absorcin de radiacin UV Visible de longitud de onda mayor que 185 nm se restringe a un nmero limitado de grupos funcionales llamados cromforos, que contienen electrones de valencia con energas de excitacin relativamente bajas. Los electrones que contribuyen a la absorcin por parte de una molculas pueden ser de dos tipos: 1.) Aquellos que participan directamente en la formacin del enlace entre tomos y que adems se encuentran asociados a mas de un tomo. 2.) Los electrones no enlazantes o externos que no participan en el enlace y estn localizados alrededor de tomos como oxgeno, nitrgeno, azufre y halgenos. - 71 -
Cuando se combinan dos orbitales aparece un orbital molecular enlazante de baja energa o uno antienlazante de energa superior. Los orbitales moleculares asociados a los enlaces sencillos (C H) se designan como orbitales electrones . El doble enlace en una molcula orgnica contiene dos tipos de orbitales moleculares: 1) Un orbital correspondiente a un par de electrones enlazante . 2.) Un orbital enlazante correspondiente a dos electrones .
Adems de los electrones y , muchos compuestos orgnicos poseen tambin electrones n que son no enlazantes, es decir, que no participan en el enlace. Ej.: Formaldehido.
y los electrones correspondientes son los
. H.
H .
x x C . .C O
n El doble enlace tiene un par de e y un par de e .
Para comprender e interpretar los espectros electrnicos es preciso tener en cuenta los tipos de transiciones que pueden ocurrir cuando una molcula absorbe radiacin. En esta regin pueden darse cinco tipos de transiciones electrnicas:
-
Bandas de absorcin y n Bandas de Absorcin Bandas de absorcin n Bandas de absorcin de transferencia de carga Bandas de absorcin de campo ligando
Los distintos tipos de transiciones se pueden distinguir en funcin de la zona del espectro donde aparecen por sus intensidades relativas, y en algunos casos por los desplazamientos observados al vaciar el disolvente. Las intensidades de absorcin suelen expresarse en trminos de la absortividad molar: A = bc Dependiendo del valor de , del tamao de la especie absorbente y de la probabilidad de la transicin. A = bc Para que haya una interaccin, la radiacin debe de chocar con la molcula dentro de un espacio de dimensiones aproximadas al tamao de la molcula y la probabilidad de la transicin es proporcional al nmero de impactos que producen absorcin.
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P : probabilidad de la transicin (varia entre 0 y 1)
= 087 10
20
PA
A : superficie transversal de la molcula absorbente (se mide con rayos x y tiene valores 1015 cm2)
Para una transicin cuya probabilidad sea la unidad, tendremos una = 105. En general, valores de entre 105 y 104, se consideran procesos de absorcin de intensidad muy fuerte y son debidas a transiciones con probabilidad de transicin (P) muy elevada (01 1). Los procesos con del orden de 104 103, son procesos de intensidad fuerte y P varia entre 001 y 01. Los procesos con inferior a 103, son procesos de baja intensidad y una P < 001. A veces, a estos procesos se les llama procesos de transiciones prohibidas. 2.2.1. Bandas de absorcin y n
Las estudiaremos de manera conjunta. Son muchas las molculas orgnicas que las contienen a ambas. Todos los enlaces C=C, CC, C=N poseen electrones , y todos los tomos situados a la derecha del C en la tabla poseen electrones n (electrones no enlazantes). Ej.: N2, S, halgenos
x
..
> C: .O:
.. > C: :O:
x
. > C: : O: Los mximos de absorcin corresponden a transiciones *, son independientes de la naturaleza de los tomos que intervienen en el enlace mltiple, mientras que en el caso de las transiciones n *, si tiene mucha influencia la naturaleza de los tomos. Esto se debe a que los electrones estn deslocalizados y por tanto son relativamente independientes de los tomos que forman el enlace, mientras que los electrones n estn asociados cada uno a su tomo respectivo y un aumento en la electronegatividad del tomo implica que estos electrones sean ms atrados por el tomo, lo que supone un desplazamiento hacia longitudes de onda ms cortas, es decir, se necesita ms energa para excitar a los electrones que se encuentran atrados a tomos mas electronegativos. En las bandas de absorcin tienen influencia los sustituyentes que puedan acompaar a la molcula. Por otra parte los sistemas con electrones * son ms fcilmente accesibles y dan transiciones * en el ultravioleta prximo. Estas adsorciones constituyen la base ms importante de las aplicaciones en espectrofotometra UV / Visible. CC=CC=C OC=CC=O
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Estos sistemas presentan una mayor intensidad de absorcin y adems la conjugacin produce el desplazamiento de los mximos de absorcin hacia longitudes de onda mayores. (Transparencia: Tablas 2-2, 23).
Definicin de algunos trminos espectrales

- Cromforo: Son grupos de tomos responsables de bandas de absorcin en las regiones del UV Visible. De forma general, los sistemas con electrones son cromforos en la regin del UV Visible, y los sistemas con electrones son cromforos en la regin del UV lejano UV de vaco. Auxocromo: Son grupos saturados que cuando se unen a los cromforos desplazan un mximo de
absorvancia a longitudes de onda mayores a la vez que aumenta la intensidad de absorcin. Entre los grupos auxocromos, estn los grupos - OH, - SH, - NH2 y halgenos. Todos estos grupos tienen electrones n (electrones no enlazantes) y su efecto se atribuye generalmente a transicin n *. Ej.: El benceno tiene una = 254 nm con una = 204 nm, pero cuando le sustituimos un H del benceno por un grupo OH: = 270 nm = 1450 nm
- Efecto batocrmico o desplazamiento hacia el rojo: Es el desplazamiento del mximo de absorcin hacia longitudes de onda mayores. Los espectros de iones y radicales libres sufren este efecto en relacin a las molculas no disociadas, por ello es frecuente que iones y radicales libres presenten valor cuando las molculas neutras inicialmente eran incoloras. menores. - Efecto hipercrmico: Es un aumento en la intensidad de absorcin. - Efecto hipocrmico: Supone una disminucin en la intensidad de absorcin. Efecto hipsocrmico: Es el desplazamiento del mximo de absorvancia hacia longitudes de onda
Influencia del disolvente en las transiciones ( / n )

En general, un aumento en la polaridad del disolvente produce un efecto hipsocrmico de las bandas n , y un gran efecto batocrmico en las bandas . Esto puede explicarse teniendo en cuenta que en las transiciones , el estado excitado es ms polar que el estado fundamental, y por tanto, las interacciones dipolo dipolo disminuyen la energa del estado excitado. Por otra parte, los enlaces por puentes de hidrgeno o las interacciones electrostticas con disolventes polares estabilizan los electrones n del estado fundamental ms que a los electrones del estado excitado. 2.2.2. Bandas de Absorcin
Los electrones , son los electrones enlazantes de los enlaces sencillos y las transiciones se producen a causa de la absorcin en el UV Visible lejano. Para trabajar en el UV Visible lejano, hay dificultades instrumentales porque es necesario eliminar el O2 de las disoluciones, porque absorbe. Se ha trabajado poco en esta regin y no tiene mucha aplicacin.
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Se da en los enlaces sencillos C H 2.2.3. Bandas de absorcin n
Se producen en compuestos saturados que contienen en su molcula, sustituyentes con electrones no compartidos. Ejemplo: tomos de S, N, Br, J absorben a 200 nm tomos de Cl, O absorben a < 200 nm Cuanto mayor es la electronegatividad del sustituyente, se requiere mayor energa para excitar al electrn, debido a la mayor energa de unin entre el electrn no enlazante del tomo. El hecho de que la mayora de los compuestos que tienen O2 absorba a < 200 nm, permite el uso de disolventes tales como H2O, alcoholes y teres en la zona del UV prximo. (200 400 nm) Si el compuesto posee dos sustituyentes y existe solapamiento entre los orbitales con pares de electrones libres, el mximo de absorcin se desplaza a mayores. mxima _ (nm) CH3 259 _ CH2 2 292 _ CH 3 349
_ La presencia de ms de un sustituyente (como el ) hace que se desplace el mximo de absorcin hacia mayores. 2.2.4. Bandas de absorcin de transferencia de carga
La absorcin de transferencia de carga, es un tipo de absorcin muy importante en la regin UV, y a veces, tambin en el V, para muchos compuestos orgnicos e inorgnicos. En este proceso, se produce la transferencia de un electrn de una parte a otra parte del sistema.
Ejemplo: M L+ hV M- LSe ha producido la transferencia del electrn del metal al ligando, pero puede ocurrir al revs. En estos procesos hay dos componentes, un aceptor y un dador de electrn, y la absorcin de la radiacin implica la transferencia de un electrn desde el dador hasta el aceptor. En consecuencia, el estado excitado es el producto de un proceso redox o un proceso redox interno. En la mayora de los complejos de transferencia de carga que implica un ion metlico, ste acta como aceptor del electrn. Una excepcin es el complejo que forma la donde el ion metlico es el dador y el ligando es el aceptor. ( la o fenantrolina con Fe2+ y Cu2+ o fenantrolina).
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hV Fe3+ - SCN Fe2+ - SCN En estos procesos de transferencia de carga, implican la absorcin en el UV de muchos iones hidratados. Cl (H2O)n hV Cl (H2O)n
hV Fe2+ (H2O)n Fe3+ (H2O)n Fe3+ - OH hV Fe2+OH
En la molcula orgnica tambin puede producirse la absorcin por transferencia de carga intramolecular.
h NR2 = NR2
h C0 R =CO R
2.2.5.
Bandas de absorcin de campo de ligando
Los iones y compuestos de los metales de transicin, presentan dos tipos de espectros. Junto a las bandas de absorcin de transferencia de carga, con valores de absortividad molar 103 104 presentan tambin bandas de absorcin de campo de ligando con valores de 10-1 - 102. Mientras que las bandas de absorcin de transferencia de carga aparecen fundamentalmente en el CV, y alguna vez en el V, las bandas de campo de ligando aparecen en el V, aunque rara vez llegan hasta el UV prximo e infrarrojo prximo. Generalmente, estas bandas de absorcin de campo de ligando, son bandas anchas debido a que la excitacin electrnica lleva asociada mltiples excitaciones vibracionales. La coloracin caracterstica de iones y compuestos de transicin generalmente pueden atribuirse a absorciones de campo de ligando. El nombre de campo de ligando proviene del hecho de que un tomo o metal de transicin posee orbitales degenerados con igual energa y la presencia de un ligando crea un campo electrosttico que desdobla estos niveles en diferentes niveles de energa o subniveles. Si los subniveles d o f no estn completos, pueden producirse transiciones electrnicas entre estos niveles de energa mediante la absorcin de radiacin de adecuada. Ejemplo: Complejo octadrico del titanio. Ti (H2O)6 3+
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Tema 1: Metodologa Analtica El titanio posee un orbital d con un solo electrn: Ti 3d1 (Transparencia:
Fig. 2 5).
Al unirse las seis molculas de agua al titanio se produce una repulsin de la parte negativa del agua (de un H) con el electrn del orbital d del titanio. Se produce una degeneracin de estos niveles resultando que los orbitales dz2 y dx2y2 tienen mayor probabilidad que los otros tres. Este incremento representa la amplitud del desdoblamiento de estos orbitales y es una medida de la fuerza del campo de ligando, es decir, una medida de la extensin con que un grupo complejante desdoblar los niveles de energa, en este caso, los niveles de energa d. El valor de este incremento es = 20400 cm 1. Esto corresponde a una longitud de onda de 490 nm., como observamos en el espectro de absorcin de la figura 2 1 (Transparencia). La magnitud de este incremento depende de varios factores: 1. ) La carga del ion metlico; aumentando este valor a la vez que aumenta la carga del ion metlico.
2. ) La posicin del elemento en el sistema peridico, para un determinado elemento, este incremento aumenta con el nmero cuntico principal del orbital del ion metlico. 3. ) La naturaleza del ligando. Este incremento es la funcin de la distribucin de su densidad de carga y de su polarizabilidad.
Con pocas excepciones, los ligandos se suelen ordenar en valores crecientes de este incremento, obtenindose la serie espectroqumica: I < Br < Cl < F < OH < C2O42 < C2H2OH < H2O < SCN < NH3 < < NO2 < o fenantrolina Un efecto visible de la serie espectroqumica es por ejemplo en el cobre: Cu (H2O)42+ azul plido Cu (NH3)42+ azul intenso debido al efecto del aumento del campo de ligando cuando sustituimos el agua por el amoniaco. Los lantnidos y los actnidos, poseen subniveles 4f y 5f incompletos, y por tanto, presentan bandas de absorcin de campo de ligando. 3. INSTRUMENTACIN Existen dos tipos de instrumentacin para medidas de absorcin UV: Filtros - Fotmetros Fototubos < etilendiamina
Monocromadores - Espectrofotmetros Fototubos o tubos multiplicadores
Los fotmetros, son instrumentos sencillos que permiten medir la intensidad de radiacin, ya que van provistos de filtros para seleccionar un rango estrecho de longitudes de onda, y como detectores, usan fototubos.
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Los espectrofotmetros, son instrumentos ms o menos sofisticados que usan monocromadores para seleccionar estas bandas estrechas de longitud de onda. El monocromador permite una variacin continua al seleccionar las longitudes de onda, y tambin permite realizar un barrido en una zona amplia de longitud de onda. Como detectores usan fototubos o tubos multiplicadores. 3.1.
Componentes
bsicos
de
los
fotmetros
espectrofotmetros
Los componentes bsicos son: 1. 2. 3. 4. 5. Fuentes de energa (lmpara) Seleccionador de longitud de onda (filtros, monocromadores) Recipiente porta muestras (cubeta) Detector Procesador de seales
La muestra la colocamos entre el seleccionador de longitud de onda y el detector. 1. Fuente de energa Una fuente de radiacin ideal debe ser continua en una amplia zona del espectro, tener una intensidad elevada y que no vare esta intensidad con la longitud de onda. Las fuentes de radiacin que emiten en el UV Visible pueden dividirse en tcnicas (en las que la radiacin es debida a la temperatura) y fuentes cuya radiacin es debida a descargas elctricas a travs de gases. a.) Fuentes trmicas: La lampara ms usada es la lmpara de filamento de Wolframio, que es una fuente trmica que emite en el visible. Presenta el inconveniente de que la mayor energa la emite en la regin del IR. (Transparencia Fig. 2.8) Si trabajamos a alta temperatura la lmpara se fatiga, es decir, la vida de la lmpara se acorta. Si queremos conseguir altas intensidades en el Visible, podemos usar una lmpara de arco de carbono que trabaja a altas temperaturas (llega a los 4000 K) Cualitativamente, un aumento en la temperatura de la lmpara, provoca la excitacin en un nmero mayor de tomos a mayores niveles de energa, y ello debe de traducirse en una mayor I de radiacin y un desplazamiento de las bandas hacia menores. La de mxima emisin puede calcularse a partir de la ley de
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max T (K) = 3 106 b.) Fuentes de descarga elctrica: En esta regin del UV- Visible, se utilizan varios tipos de lmparas, en donde estn: Lmpara de H Lmpara de H (Deuterio) Lmpara de descarga de Xe Lmpara de arco de Hg En todos los casos, se hace pasar una corriente de electrones a travs de un gas y las colisiones entre ellos provocan la excitacin electrnica, vibracional y rotacional. El espectro emitido por gases a bajas presiones es de lneas o rayas, mientras que los de gases a altas presiones, son de bandas o continuos. La lmpara de H, es la fuente ms sencilla utilizada en el UV; generalmente, se usa a bajo voltaje (aproximadamente a 40 V), aunque existen lmparas de alto voltaje. En estas lmparas de H, trabajan a una presin de 0,2 y 5 milmetros de Hg. (Transparencia. Figura 2.9) Esta lmpara es muy adecuada para trabajar con ella en el UV prximo. La lmpara de 2H, abarca una zona de similar a la de H, pero su intensidad es de 3 a 5 veces superior. La lmpara de descarga de Xe, presenta buenas cualidades como fuente de radiacin en el UV. Posee dos electrodos de Wolframio separados unos 3 mm, que forman un cubo. Esta lmpara posee una intensa radiacin al pasar una corriente a travs de una atmsfera de Xe. El espectro de esta lmpara es continuo entre 250 y 600 nm, con un mximo en 500 nm. Su intensidad en el UV prximo, es muy superior a la de H, pero en el V presenta problema de radiacin parsita. (Transparencia. Figura 2.10) La lmpara de arco de Hg, es una fuente patrn para muchos trabajos en el UV, pero en general, es poco adecuado para estudios espectrales continuos, ya que presenta bandas estrechas superpuestas a un fondo continuo a elevada presin. (Transparencia. Figura 2.11) Esta lmpara se utiliza ms, para el calibrado de instrumentos. La estabilidad de las fuentes es importante, especialmente cuando se trabaja con instrumentos de haz sencillo. La energa emitida por estas fuentes depende del
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potencial aplicado a la lmpara y la seal del detector es proporcional al voltaje de la lmpara elevado a una determinada potencia, generalmente mayor de 1, por ello, la fuente de voltaje ha de ser muy estable, y ello se consigue usando acumuladores o transformadores de voltaje constante y reguladores electrnicos de voltaje. 2. Seleccin de Para conseguir medidas de absorbancia exactas, selectivas y sensibles, es importante poder seleccionar una banda estrecha de del amplio espectro que proporciona la fuente de radiacin. La importancia de este factor sobre la sensibilidad de las medidas de absorcin puede ponerse de manifiesto con un sencillo ejemplo: (Transparencia. Figura 2.12)
T (%) A (%) 80 35 20 65
Bsicamente, se utilizan dos clases de filtros: Filtros de absorcin Filtros de interferencia
Los filtros de absorcin, se basan en la absorcin selectiva de que no interesan y generalmente, son de vidrio, en el cual se ha dispersado o disuelto un pigmento adecuado que permite esta absorcin selectiva. Estos filtros slo operan en el V. La mayor parte de estos filtros de absorcin tienen anchuras de banda entre 35 50 nm y su transmitancia son slo de un 5 a un 20 %, disminuyendo esta transmitancia a medida que mejora el aislamiento espectral. Los filtros de interferencia, se basan en el fenmeno de interferencia ptica, es decir, una parte de la radiacin que llega es absorbida y otra, se refleja. Proporciona anchuras de banda ms estrechas que los de absorcin y transmitancias de tipo mayores. Estos filtros operan en el UV / V / IR. (Transparencia. Figura 2.14) Un monocromador es un dispositivo que genera un haz de radiacin de gran pureza espectral (anchura de banda estrecha) y que permite ir variando la de manera continua.
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Hay dos tipos de monocromador: Monocromador tipo prisma. Monocromador tipo red.
Los elementos esenciales de un monocromador, son una rendija de entrada (determinando el haz de radiacin policromtica entrante), un elemento dispersante (que puede ser un prisma o una red de difraccin) y una rendija de salida. El prisma o red, dispersa la radiacin policromtica en las que la componen, y la rendija de salida transmite la correspondiente al mximo de intensidad junto a una banda de a ambos lados. (Transparencia. Tabla 2.8) Cuanto menor sea la rendija, menor ser la banda de considerada. Pero si se disminuye demasiado (< 001 nm), se producen fenmenos de refraccin. Cuanta mayor resolucin tenga el espectrofotmetro, menor ser la banda de que pueda tomar. 3. Recipiente porta muestras. Se llaman tambin cubetas, y tienen paralelas y rectangulares, y se
fabrican en diversos materiales, de manera que, permitan el paso de luz pero no absorban radiacin. Por ello, en el UV y V utilizamos cubetas de cuarzo y en el V tambin de plstico o vidrios de silicato para V e IR. Las hay de diferente recorrido ptico, pero lo normal es de 1 cm de paso de luz. 4. Los detectores. Son elementos que convierten la radiacin en un flujo de electrones y posteriormente, en una corriente o voltaje en el circuito de lectura. El detector ideal debera tener un amplio intervalo de con una elevada sensibilidad, una relacin seal ruido grande, un tiempo de respuesta rpido, mnima seal de salida en ausencia de iluminacin, as como tener una respuesta constante. Los tres tipos de detectores usados en el UV / V son: Clulas fotovoltaicas Fototubos (Tubos fotoemisores) Tubos fotomultiplicadores
La caracterstica comn a todos estos detectores es que tienen una superficie activa capaz de absorber radiacin, de manera que, la energa absorbida causa la emisin de electrones y el desarrollo de una fotocorriente.
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Clulas fotovoltaicas, en ellas, la energa radiante genera una corriente en la interfase entre una capa semiconductora y un metal, y se usan fundamentalmente en el V. Consisten en un electrodo plano (nodo) de un metal (Cu, Fe o Al) en el que se deposita un material semiconductor como es el Selenio, y despus se recubre por una fina pelcula de Ag o Au. Esto sirve como electrodo colector. Cuando al Se llega una corriente o una radiacin, se produce la excitacin de electrodos de la interfase Se Ag (o Se Au), los cuales pasan al electrodo colector (Ag). Los electrodos liberados migran a travs del circuito hacia el metal, resultando una corriente de electrodos proporcional al nmero de fotones que inciden sobre el semiconductor. Entre las desventajas estn: Es difcil amplificar la seal de salida, debido a la pequea resistencia interna de la clula; por esto se usan en fotmetros de filtro. Manifiestan fatiga (sobre una radiacin continuada, la respuesta no siempre es constante)
Fototubos o tubos fotoemisores, consisten en un ctodo semicilndrico (capa de metal recubierta de otra capa de xido alcalino) que es sensible a la luz, y un nodo que es un alumbre metlico. Ambos estn encerrados hermticamente en un recipiente cilndrico con vaco. Cuando la radiacin llega al ctodo, ste emite electrones que son atrados hacia el nodo, el cual a travs del circuito los devuelve al ctodo. Esta corriente fotovoltaica producida, causa una cada de potencial a lo largo de la resistencia que es proporcional a la intensidad de corriente. La resistencia es normalmente, la resistencia de entrada en un circuito amplificador, y por ello, la cada de potencial puede amplificarse. La seal del fototubo es aproximadamente unas diez veces menor a la de las clulas fotovoltaicas, pero debido a la posibilidad de amplificar la seal de estos, stos resultan ms sensibles que las primeras. La sensibilidad del fototubo depende de la naturaleza de la sustancia que recubre el ctodo y puede variarse utilizando diferentes metales alcalinos o variando el mtodo de recubrimiento.
Tubos fotomultiplicadores, son una combinacin de un ctodo fotoemisivo y una cadena interna de dnodos fotomultiplicadores de electrones. Cuando la radiacin llega al ctodo de composicin similar a la de los fototubos, provoca la emisin de electrones (electrones primarios), de manera anloga a la de un fototubo, pero en este caso, los electrones son acelerados, por la aplicacin de un potencial positivo hacia una segunda superficie sensible, de forma que al incidir cada electrn primario es capaz de producir la emisin de 4 5 electrones secundarios. Estos electrones son acelerados de nuevo hacia otra superficie sensible que se encuentra a un potencial posiblemente superior, de forma que el nmero de electrones emitidos vuelve a multiplicarse por 4 5.
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Este proceso se puede repetir tantas veces como queramos, pero en general los aparatos no llevan ms de 10 12 dnodos. La seal de salida puede a su vez amplificarse. Por tanto, es el detector ms sensible en el UV V.
5. Procesador de seales.
En general, es un dispositivo electrnico que amplifica la seal elctrica del detector; as mismo, permite eliminar componentes indeseados. Puede tambin alterar la seal de la corriente, cambiarla de fase, filtrarla. Tambin puede realizar operaciones matemticas con la seal como diferenciales, derivadas, integral... 3.2.
Diseo de los instrumentos para medidas de absorcin UV Visible
Existen dos tipos de instrumentos:

Fotmetros Espectrofotmetros
De los dos tipos hay de: Haz simple Doble haz
Y a su vez, estos pueden ser: Lectura directa - Haz simple Compensacin
Lectura directa - Doble haz Compensacin
En el instrumento de haz simple, la radiacin pasa slo a travs de una disolucin, mientras que en los de doble haz, un haz pasa a travs de la disolucin de un blanco, mientras que el otro pasa a travs de una disolucin que contiene la muestra. (Transparencia. Figura 7.14) (Instrumento de haz simple) Las etapas para el calibrado del instrumento son: Poner un obturador de manera que no llega radiacin al detector, se ajusta el detector a cero (en unidades de transmitancia) o mxima (en unidades de absorbancia). Con la disolucin del blanco, ajusto a cero la absorbancia.
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Con otra cubeta de disolucin incgnita, mido la absorbancia.
Si trabajamos a ms de una estas tres etapas se deben repetir para cada Este instrumento requiere que la fuente y el sistema electrnico tengan un comportamiento constante durante el tiempo necesario para realizar estas tres etapas. Estos problemas se resuelven con los instrumentos de doble haz. Las etapas para la calibracin seran: Ponemos el blanco en ambas cubetas; ajustamos a cero la absorbancia. Quitamos la cubeta de la muestra, cerramos este obturador para ajustar de nuevo a cero la transmisin o al mximo la absorbancia. Colocamos la muestra y medimos la absorbancia.
Los de lectura directa utilizan un medidor para medir la absorbancia o transmitancia. En cambio, los de compensacin, en la etapa de medida utilizan un dispositivo que permite comparar la seal a medir con un haz de referencia. Los primeros son ms sencillos que los segundos, pero los de compensacin presentan una mayor exactitud fotomtrica Existe un tercer tipo de instrumento que utiliza como detector, una serie de diodos; en stos, la muestra se coloca entre la fuente y el selector de (monocromador) 3.3.
exactitud es bastante buena. Existen fotmetros para V, y otros para UV, y tambin fotmetros tipo sonda, donde en estos, la absorbancia se mide sumergiendo la sonda en la disolucin analito. Existen espectrofotmetros de un solo haz para el V. Son equipos sencillos que utilizan monocromadores tipo red, como fuente o lmpara, aunque de W como detector fototubo; la anchura de banda es de unos 20 nm y una exactitud en la 2,5 nm. Existen tambin espectrofotmetros de haz simple para medidas en UV, como en V. En estos, la anchura de banda es menor (entre 2 y 8 nm) y la exactitud en la es de 0,5 y 0,2 nm. Estos tienen lmparas intercambiables de W e H; utilizan redes para la dispersin y tubos fotomultiplicadores como detectores. Hay espectrofotmetros de un solo haz controlados por ordenador. En stos, se realiza un barrido con la solucin de referencia, y la seal de sta se almacena en el ordenador. A continuacin, se mide la absorbancia de las muestras, de manera que, la absorbancia leda tiene ya restada la seal de la referencia previamente almacenada. La exactitud fotomtrica oscila entre 0,005 nm y la anchura de la rendija 0,5 2 nm. Existen tambin espectrofotmetros de doble haz (son ms caros que los de haz simple). Hay otros instrumentos de doble dispersin, para mejorar la resolucin espectral y lograr una reduccin notable de la radiacin dispersada; se disean instrumentos con dos prismas o dos redes dispuestos en serie con una rendija interpuesta entre ambos.
Instrumentos caractersticos (comerciales).
Los fotmetros son ms sencillos que los espectrofotmetros, y ms baratos. Se utilizan en el V y su
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Existen finalmente, los instrumentos multicanal; en stos, la radiacin de la fuente pasa a travs de la muestra y, a continuacin, sta radiacin se enfoca en una rendija de entrada que pasa luego a una red de reflexin. El detector consiste en una serie de 316 diodos, obtenindose una resolucin espectral de 2 nm en toda la regin (200 820) nm. La estabilidad de la fuente y del sistema electrnico es tal que, la seal del blanco necesita ser almacenada cada diez minutos aproximadamente. Estos instrumentos tambin van acoplados a ordenadores. Debido a los pocos instrumentos pticos que poseen, el rendimiento de la radiacin es ms elevado que en los espectrofotmetros tradicionales. (Transparencia. Figura 7.20) 4. APLICACIONES
4.1.
Aplicaciones de las medidas de absorcin al anlisis cualitativo
En este campo, las aplicaciones son muy limitadas; algunos efectos son los siguientes: Efecto del disolvente
Disolventes pobres (agua, alcoholes, cetonas y teres) tienden a eliminar la estructura fina vibracional del espectro. Sin embargo, los disolventes apolares (hidrocarburos) tienden a mantenerla. Adems, las posiciones de los mximos de absorcin dependen de la naturaleza del disolvente. Por ello, para comparar e identificar espectros, es necesario conocer el disolvente en el que estn registrados. (Transparencia. Figura 8.8 / Tabla 8.6) Esto da la a partir de la cual el propio disolvente dara la seal. Deteccin de grupos funcionales
Esta tcnica de espectrofotometra en UV/V, no permite una identificacin inequvoca de un componente orgnico, pero sin embargo, los espectros de absorcin UV/V son tiles para detectar la presencia de ciertos grupos funcionales que actan como cromforos.
4.2.
Aplicaciones de las medidas de absorcin al anlisis cuantitativo
Esta tcnica es una de las ms utilizadas para el anlisis cuantitativo; las caractersticas ms importantes de estos mtodos espectrofotomtricos son: Tienen una amplia aplicabilidad tanto a sistemas orgnicos como inorgnicos. Sensibilidades en torno a 10-4 10-5 M, pudiendo en algunos casos llegar a 10-7M. Tienen, de moderada a alta selectividad. Tienen una buena precisin. Tienen una fcil y adecuada adquisicin de datos. Son mtodos relativamente baratos.
Las aplicaciones de las medidas de absorcin al anlisis cuantitativo, son muy numerosas. 4.2.1. Anlisis de especies absorbentes - 85 -
Los componentes que contienen grupos cromforos, son susceptibles de esta determinacin (alquenos, alquilos, cetonas). As mismo, se pueden determinar tambin componentes inorgnicos como nitratos, nitrito, ozono, iones de los metales de transicin, yodo, etc. 4.2.2. Anlisis de especies no absorbentes
Numerosos reactivos reaccionan selectivamente con especies no absorbentes originando productos fuertemente absorbentes en esta regin. El uso de tales reactivos exige que la reaccin de formacin de los compuestos sea completa. Por otra parte, los reactivos que toman color se forman a menudo para la determinacin de especies absorbentes como los iones de los metales, ya que la absortividad molar del producto es varios rdenes de magnitud mayor que la de la especie no combinada. Ejemplo de agentes complejantes para la determinacin de especies inorgnicas: SCN Fe3+, Mo6+ H2O2 Ti4+, V5+, Cr3+
Ejemplo de agentes formadores de complejos: 0 fenantrolina Dimetilglioxima Fe3+ Ni2+
Dimetilditiocarbonato Cu2+ Para la determinacin de estas especies en anlisis cuantitativo, el procedimiento operatorio que llevamos a cabo es: - Seleccin de la longitud de onda donde vamos a realizar medidas de absorvancia. Las longitudes de onda sern las correspondientes a mximos de absorcin del compuesto, ya que aqu se alcanza una mayor sensibilidad:
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En estas zonas de los mximos tenemos un intervalo de donde la absorvancia no se modifica demasiado, por lo que las fluctuaciones a la hora de la medida no crean muchos errores. Conocer las variables que afectan a la absorvancia natural del disolvente, pH de la disolucin,
temperatura, [electrolitos] y la presencia de sustancias interferentes. Los efectos de todas estas variables se deben de conocer, y las condiciones para el anlisis se eligen de manera que la absorvancia no este afectada por variaciones incontroladas de estos parmetros. - Medida de la muestra: hay que tener en cuenta la limpieza y manipulacin de las cubetas. Determina la relacin entre absorbancia y concentracin. Una vez seleccionadas las condiciones
ptimas pasamos a construir la curva de calibrado usando patrones de [ ] conocidas, y que abarquen el intervalo de [ ] esperado en las muestras problema:
A Y = mx + a m=
[ ] El valor de la pendiente m es igual a la absortividad molar: A=bc + a y=mx + b Cuando hay interferencias en la matriz de la muestra es necesario aplicar el mtodo de adicin de patrn ( adicin estndar) lo cual por extrapolacin:
* C
4.2.3.
Anlisis de mezclas de sistemas absorbentes
La absorvancia de una disolucin a una longitud de onda determinada es igual a la suma de la absorvancia de los compuestos individuales:
ATotal = A1 + A2 + ... + An ATotal = 1 b c1 + 2 b c2 + ... + n b cn - 87 -
Esta relacin hace posible la determinacin cuantitativa de los compuestos de una mezcla incluso si sus espectros se superponen. (Transparencia Figura 6 10). Es posible resolver estos dos componentes simultneamente presentes en la misma disolucin. Para ello la absorbancia a es:
Compuesto N
A = M b cM + N b cN
compuesto M
y a A = M b cM + N b cN Es posible llevar a cabo la determinacin simultanea sin conocemos laos valores de la absortividad molar a estas dos longitudes de onda. Esto se determina utilizando rectas de calibrado construidas a partir de estndares individuales de cada una de ellas. Conocidos los valores de la absortividad molar, medimos las absorvancias A y A, por lo que solo tenemos que despejar la [ ] de cada uno de ellos. Para la eleccin de estas longitudes de onda, lo ideal es usar aquellas longitudes de onda donde aquellos de los compuestos presenten una seal mxima y la otra mnima o despreciable. Esto se puede aplicar siempre que no haya interacciones entre los compuestos. Tericamente, se puede aplicar a sistemas con ms de dos componentes, sin embargo, las indeterminaciones en los datos se hacen mayores a medida que el nmero de medidas aumenta. 4.2.4. Espectroscopia de derivada y longitud de onda dual
En la espectroscopia de derivada, los espectros se obtienen en la derivada de orden n, en funcin de la longitud de onda. A menudo, esta representacin muestra detalles que no se aprecian en un espectro ordinario (o de orden cero). Adems en ocasiones, es posible eliminar las interferencias debidas a compuestos no deseados en cuanto determinamos algn analito de inters. Es decir, podemos medir la seal del componente de inters donde la del otro componente, es cero. Esta tcnica se denomina, la tcnica del zero-crossing. ( Fig. 3)
En general, para ver las mezclas de los dos componentes, se suelen encontrar ceros. Pero es ms difcil en mezclas de ms de dos componentes. Existe tambin la posibilidad de transformar el espectro de una mezcla en otro independiente de la [ ] de uno de los componentes. Am = M b cM + N b cN Si dividimos esta expresin por un espectro de [ componente CM. As, la absorvancia resulta: d d Am =
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] conocida del
m b CM d +
m b CN
M b CM
m b CM
m b CM
Si derivamos esta expresin con respecto a : d d Am CN = M b CM CM d

d
N M
Esta expresin solo depende de la [ ] del otro componente y de la [ ] utilizada como divisor. En general, la tcnica de derivadas se ha usado para la resolucin de mezclas de analitos con seales solapadas. Una desventaja de los espectros derivados es que se produce una degradacin en la relacin seal/ruido al derivar. Sin embargo, en esta regin del ultravioleta visible, no hay un factor serio. Para obviar esta relacin seal/ruido utilizamos filtros analgicos. En cuanto a la espectroscopia de longitud de onda dual, sabemos que tienen un elemento dispersante, de manera que, dos haces de longitud de onda ligeramente diferente (l 2 nm) se hacen incidir alternativamente sobre la muestra pasando la radiacin transmitida seguidamente al detector y sin tener un haz de referencia. (Fig. 8.ll)
El parmetro generador, es la diferencia entre las seales alternas y da una buena aproximacin de las derivadas de la absorvancia en funcin de la longitud de onda. Esta tcnica es adecuada para la obtencin de espectros de analitos presentes en disoluciones turbias. Otra aplicacin de esta tcnica, es en el anlisis de un analito en presencia de una interferencia espectral. El procedimiento consiste en medir la absorvancia a 2 en que la interferencia tiene una absortividad molar () parecida o similar, mientras que el analito presenta una gran diferencia en los valores de . Entonces, la absorvancia diferencial es directamente proporcional a la [ ] de analito.
A 2
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Interferencia
1 1 1 1 2
= []
4.3. Valoraciones fotomtricas

Las medidas fotomtricas, pueden utilizarse para la localizacin del punto de equivalencias en una valoracin siempre que el analito, los reactivos o productos absorban radiacin.
Alternativamente un indicador absorbente puede proporcionar este punto de equivalencia. 4.3.1. Curvas de valoracin
Consiste en representar la absorbancia en funcin del volumen de valorante aadido. Las curvas de valoracin fotomtricas, presentan dos tramos rectos con diferentes pendientes; uno al principio de la valoracin y otro, pasado el punto de equivalencia formndose el punto final como la interseccin entre las dos rectas extrapoladas. La valoracin (por ej.) de una especie no coloreada con un valorante coloreado que se decolora en la reaccin, da lugar a una lnea horizontal en las etapas iniciales, seguido por una rpida absorbancia pasado el punto de equivalencia. (Fig. 2.40)
Con objeto de obtener el punto de equivalencia fotomtrico de manera satisfactoria, es necesario que el sistema absorbente cumpla la Ley de Beer.
4.3.2.
Aplicaciones de las valoraciones fotomtricas
Estas valoraciones presentan resultados ms satisfactorios que los obtenidos mediante anlisis fotomtrico directo, ya que se utilizan los datos de varias medidas para determinar el punto final y adems, la presencia de otras especies absorbentes pueden no interferir. Algunos ejemplos concretos son valoraciones son EDTA y otros agentes complejantes, muchos de los reactivos usados en reacciones redox que presentan espectros de absorcin caractersticos o valoraciones de mezclas de cationes con un mismo reactivo mediante la formacin de complejos por diferente absortividad molar.
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A (340nm) Cu2+ P.F.
Bi3+ P.F.
V (EDTA)
TEMA 6:
ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA Y FOSFORESCENCIA MOLECULAR
1. INTRODUCCIN
La mayor de las sustancias que absorbe radiacin ultra violeta visible, pierden exceso de energa en forma de calor mediante choques con otros tomos o molculas. Existen algunas sustancias que solo pierden una parte de la energa absorbida en forma de calor y otra emitida en forma de radiacin electromagntica de mayor longitud de onda, por tanto, de menor energa que la radiacin absorbida.
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Este proceso de emisin se conoce con el nombre de luminiscencia, trmino que engloba la fluorescencia y fosforescencia.
La diferencia entre estos dos trminos se basa en el mecanismo en el que la molcula vuelve a su estado fundamental y por el tiempo transcurrido entre la absorcin y la emisin.
2. FUNDAMENTO DE LOS PROCESOS LUMINISCENTES En general, cuando una molcula absorbe radiacin desde el estado electrnico y vibracional
fundamental hasta un estado electrnico y vibracional excitado para que se produzca luminiscencia, es necesario que la sustancia absorba previamente radiacin de longitud de onda adecuada. Cuando esto ocurre la radiacin es absorbida a unos 10 15 segundos. Una molcula en estado excitado tiene una vida de (10 7 10 8) segundos y durante ese tiempo pierde toda parte de su exceso de energa mediante tres procesos: 1.) 2.) Remitir un fotn de la misma frecuencia que el absorbido emisin de Resonancia. Perdiendo su energa vibracional emitiendo un fotn de radiacin infrarroja y que pase al nivel vibracional mas bajo del estado electrnico excitado. 3.) Perdiendo su energa vibracional y que pase al estado vibracional mas bajo del estado electrnico excitado sin emitir radiacin por colisiones. Las dos primeras alternativas son poco probables y solo ocurren en gases a presiones muy bajas. Cuando la molcula se encuentra en el nivel vibracional ms bajo del estado electrnico excitado, puede perder el exceso de energa para volver al estado fundamental de tres maneras: 1.) Sin omitir radiacin perdiendo la energa electrnica mediante choques o interacciones, es decir, en forma de calor. 2.) 3.) Emitiendo un fotn de radiacin ultra violeta o visible Fluorescencia. Pasando a un nuevo estado excitado metaestable llamado triplete, y volviendo al estado fundamental despus de un cierto tiempo emitiendo un fotn de radiacin ultravioleta - visible Fosforescencia.
Estados Singletes y Tripletes

En la mayora de las molculas que estn en estado fundamental cada orbital molecular est ocupado por un par de electrones que como consecuencia del Principio de Exclusin de Pauli, tendrn espines opuestos, y por tanto, el espn neto ser cero, tal estado es conocido como Singlete. Cuando un electrn de un estado singlete es promovido a un nivel de energa superior, su espn puede mantenerse apareado ante el electrn, ante el orbital original, (Fotocopia), obtenindose un singlete excitado o bien en el estado excitado puede alinearse con dicho espn, dando lugar a un Triplete. En este caso los espines sern iguales. Segn la regla de Hund, la energa asociada a espines paralelos es menor que la asociada a espines opuestos, y por tanto, el estado triplete en estado excitado tiene menor energa que el singlete excitado, ya que - 92 -
una transicin singlete triplete o viceversa es menos probable que una transicin singlete singlete, puesto que supone un cambio ms profundo en el estado electrnico. La vida media de un estado excitado triplete ser siempre ms larga que la de un singlete, pudiendo oscilar desde 10 4 seg. a varios segundos. Procesos en molculas en estado excitado: los principales procesos que implican estado excitados son: 1.) Absorcin Cuando una molcula absorbe energa de una longitud de onda determinada, una de los electrones acoplados pasa del nivel vibracional ms bajo del estado fundamental a cualquier nivel ms bajo del primer singlete excitado o tal vez si la energa es la adecuada al segundo singlete excitado. Estas transiciones son altamente especificas, de manera que la radiacin de una determinada energa es absorbida por solo una estructura caracterstica y son las responsables del espectro de absorcin ultravioleta de la sustancia en cuestin.
Por otro lado, la excitacin directa a un estado triplete por absorcin generalmente no ocurre por tratarse de una transicin prohibida. Sin embargo, un triplete puede originarse a partir de un singlete excitado de mayor energa. La molcula en estado excitado puede volver a estado fundamental por varios caminos.
Estado favorecido: aquel que conduzca al mnimo la vida del estado excitado. La interpretacin de la luminiscencia requiere adems considerar estos procesos. 2.) Relajacin Vibracional Una molcula puede ser excitada a cualquier nivel vibracional de un estado electrnico excitado, sin embargo en disolucin la energa vibracional excesiva se pierde rpidamente sin emisin de radiacin a consecuencia de choques entre las molculas de la especie excitada y otras molculas presentes como el disolvente,... resultando un pequeo aumento de la temperatura de la disolucin. Este proceso ocurre en un tiempo de 10 13 10 10 segundos, siendo suficientemente rpido para que otros procesos no compitan con l. Por ello todos pos dems procesos del estado excitado pueden considerarse como originados desde el nivel vibracional ms bajo de un estado electrnico excitado. Una consecuencia de la relajacin vibracional es que la emisin fluorescente tiene lugar a una longitud de onda mayor que la de la radiacin excitante. Fig. (Diagrama de energa). 3.) Conversin Interna Trmino que se designa a la transicin desde el nivel vibracional inferior de una estado electrnico de energa superior a uno de los niveles vibracionales superiores de un estado electrnico de energa inferior. Esto implica que esta transcurre sin emisin de radiacin. La conversin interna se produce ms fcilmente cuando dos niveles de energa se encuentran suficientemente prximos como para que se de un solapamiento entre sus niveles vibracionales. Este proceso que tiene lugar es inmediatamente seguido de una relajacin vibracional al estado inferior del nivel energtico. La conversin interna tambin proporciona un mecanismo para ir de estados excitados al estado fundamental.
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4.) Cruzamiento entre sistemas Implica la transicin desde el nivel vibracional ms bajo de un singlete a uno de los niveles paralelos superiores de un triplete, o viceversa, sin emisin de radiacin. Este proceso implica un cambio en el espn y por ello su velocidad es menor que la de la conversin interna, aumentando a medida que baja la diferencia de energa entre el singlete y el triplete implicados en el mismo y cundo ocurre tambin es inmediatamente seguido de relajacin vibracional. 5.) Fluorescencia Se observa que cuando la transicin desde el primer singlete excitado al estado fundamental va acompaado por la emisin de un fotn, en el proceso inverso de la absorcin existe una relacin inversa sencilla entre la vida de un estado excitado y la absortividad molar del pico correspondiente aumentando la absortividad molar se deriva que la vida del estado estacionario es menor que la vida del estado excitado aumenta la probabilidad de que el camino fluorescente sea ms rpido que otros procesos. La fluorescencia implica tambin transiciones desde el nivel vibracional inferior del primer singlete a distintos niveles vibracionales del estado fundamental. Una consecuencia es que los fotones fluorescentes van a tener menor energa, y por tanto, mayor longitud de onda que los fotones absorbidos para producir el estado excitado. 6.) Fosforescencia Cuando la transicin desde un estado excitado triplete al estado fundamental es acompaada por la emisin de un fotn, como es un proceso de espn prohibido, una transicin triplete singlete es mucho menos probable que una transicin singlete singlete. La vida media del estado triplete excitado respecto a la desactivacin por emisin, es siempre menor que la de un singlete. 7.) Conversin Externa
Consiste en la desactivacin de un estado electrnico excitado por transferencia de energa entre las molculas excitadas del disolvente y otros solutos. Una evidencia de este fenmeno es el efecto que ejerce el disolvente sobre la intensidad de fluorescencia.
3.
VARIABLES QUE AFECTAN A LA FLUORESCENCIA Una sustancia ser fluorescente o no, dependiendo de su estructura y del medio qumico, aunque el
rendimiento cuntico y el tipo de transicin influyen en la intensidad de la fluorescencia.
3.1.
Rendimiento cuntico y tipo de transicin

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La intensidad de fluorescencia va a estar determinada por un factor conocido como eficacia o rendimiento cuntico de la fluorescencia, que es la razn entre el nmero de molculas que se desactivan por emisin de fluorescencia y el nmero total de molculas excitadas. (Fotocopia) 3.2.
Factores estructurales
a) Extensin del sistema electrnico: El aumento en la estructura del sistema electrnico de forma conjugada forma el efecto de aumentar la velocidad de absorcin de la fluorescencia y disminuir la diferencia de energa entre el estado fundamental y el primer singlete excitado. La conjugacin efectiva entre los enlaces es mayor si estos se encuentran en el mismo plano, y por ello las sustancias mas intensamente fluorescentes son aquellas que poseen menor nmero de grupos funcionales sobre anillos aromticos en su molcula. As en los hidrocarburos aromticos no sustituidos, la eficacia cuntica aumenta conforme la hace el nmero de anillos. (Fotocopia). En cuanto a los sistemas heterociclos ms simples como furano, piridina...... no presentan fluorescencia, pero la fusin de stos con un anillo bencnico hace que aumente la absortividad molar y la probabilidad de absorber fluorescencia. b) Efecto de los sustituyentes Las sustancias en el anillo bencnico originan cambios en la longitud de onda del mximo de absorcin, el de la emisin y tambin el la eficacia cuntica. Las sustancias aceptoras de electrones como el grupo carboxilo, nitro y los haluros, disminuyen la fluorescencia, mientras que los dadores como amino e hidroxilo la intensifican.
c)
Efecto de la rigidez estructural
Experimentalmente se observa que la fluorescencia se favorece en aquellas molculas que poseen estructuras rgidas o que tienen anillos o forman quelatos. As por ejemplo, el bifenilo es poco fluorescente mientras que el fluoreno lo es mucho. (Estructuras) d) Efecto del impedimento estrico En general, fomenta la desactivacin sin emisin de radiacin. Ej.: Estilbeno fotocopia
3.3. a)
Efectos ambientales
Efecto de la temperatura:
La eficacia cuntica decrece con el aumento de la temperatura, ya que esta contribuye al aumento de las colisiones entre molculas, y por tanto a la desactivacin mediante colisin. b) Efecto del disolvente: La eficacia cuntica de la fluorescencia aumenta con la viscosidad del disolvente debido a que disminuye las colisiones.
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Sin embargo, la prdida del disolvente y la capacidad para la formacin de enlaces por puentes de hidrgeno son crticos, ya que afecta a la naturaleza del estado excitado. c) Efecto del pH:
El pH ejerce un marcado efecto sobre la fluorescencia de los compuestos aromticos con sustancias cidas o bsicas en el anillo, afectndose normalmente tanto la longitud de onda como la intensidad de emisin. Esto es debido a que el pH afecta principalmente a la carga y formas resonantes del fluorforo. Ej.: la anilina presenta fluorescencia en la regin visible en medio neutro o alcalino, pero no en medio cido. Algunas sustancias presentan una fluorescencia tan sensible a los cambios del pH que pueden usarse como indicador cido base. d) Efecto del oxgeno disuelto y de los iones paramagnticos: La presencia de oxgeno disuelto a menudo reduce la intensidad de emisin de una solucin fluorescente. A veces este efecto es debido a la oxidacin de la sustancia fluorescente, pero la mayor frecuencia se debe al carcter paramagntico del oxgeno molecular que puede esperarse que favorezca el autocruzamiento entre sustancias y la conversin de las molculas excitadas al estado triplete. e) Relacin entre intensidad de fluorescencia y concentracin:
La ltima variable que consideraremos es la concentracin y precisamente la relacin entre la intensidad de fluorescencia observada. La concentracin es la base de las aplicaciones cuantitativas de esta tcnica de intensidad de fluorescencia, que va a ser proporcional al nmero de estados excitados fluorescentes que se forman, y este a su vez ser proporcional a la intensidad de la radiacin excitante absorbida. (Fotocopia).
Cuando la concentracin de una muestra es muy alta o es muy absorbente, tienen lugar unos procesos de autoabsorcin de la radiacin de excitacin y de la emisin fluorescente, a lo largo de su recorrido a travs de la cubeta, como consecuencia de ella, las rectas de calibrado:
Sf = f (c) Esta relacin que se ve modificada produce una inversin de la seal de fluorescencia. A este fenmeno se le conoce como Inversin de la Fluorescencia por concentracin, y es debido a lo que se conoce como efecto de filtro interno. La concentracin de inversin depende de las caractersticas de absorcin de la disolucin y de la geometra del sistema, siendo independiente de y0. 4. INSTRUMENTACIN Fig. (8 7)
Los fluormetros (anlogos a los fotmetros de absorcin en los que se usan filtros para seleccionar la longitud de onda de los haces de excitacin y emisin) y los espectrofluormetros (que utilizan monocromadores).
1.) Fuente:
Normalmente en los fluormetros se emplea una lampara de arco de Hg y en los espectrofluormetros se usa una lampara de arco de Xe, siendo el espectro de esta lampara continuo desde 300 a 1300 nm. - 96 -
2.) Filtros: Los monocromadores utilizan filtros de interferencia y absorcin en fluormetro y cromatografa en espectrofluorimetros. En cuanto a los monocromadores, actualmente se usan los de tipo red, ya que proporcionan rejas de separacin de longitud de onda como en los prismas, y dispersan linealmente la radiacin. 3.) Celdas portamuestras: Se utilizan tanto cubetas cilndricas como rectangulares de 1 cm de lado, puede ser de cuarzo o slice fundida. Para el ultravioleta ya que el cuarzo presenta una fluorescencia nativa por enzima de 320 nm, mejor usar vidrio Pyrex. 4.) Detectores: Para amplificar la seal se usan tubos fotomultiplicadores, en espectofluorimetros tambin se han usado detectores con diodos (componente electrnico que permite el paso de la corriente en un solo sentido) alineados. 5.) Dispositivo de salida de detectores o registradores: El instrumento de lectura ms simple es un medidor que se emplea en fluormetros. Equipos superiores suelen estar equipados con registradores. Los espectrofluormetros incluyen microprocesadores para la adquisicin de datos. Se han desarrollado comercialmente una gran variedad de aparatos cuya complejidad y costes difieren mucho. Los fluormetros son una herramienta simple y de menor coste, los espectrofluormetros van equipados con dos monocromadores y usa como detector los tubos fotomultiplicadores con los que se consiguen grandes factores de amplificacin de la seal, adems los espectros fluormetros suministran tanto los espectros de excitacin como la emisin. El espectro de excitacin se obtiene registrando la variacin de la intensidad de fluorescencia manteniendo el monocromador de emisin a longitud de onda fija, generalmente suele ser la del mximo de emisin del compuesto y se varia la longitud de onda de excitacin. El espectro de emisin se obtiene registrando la variacin de la intensidad de fluorescencia, manteniendo el monocromador de excitacin a una longitud de onda fija generable del mximo de absorcin del compuesto y se varia la longitud de onda de emisin. El espectro de excitacin de una molcula debe ser idntico al de absorcin. Los espectros de emisin obtenidos con diferentes instrumentos no son comparables, ya que la intensidad de fluorescencia depende en gran medida de las caractersticas de la lampara, detector y monocromador. Se han desarrollado mtodos para obtener el espectro corregido, que es el espectro verdadero libre de efectos instrumentales aunque los instrumentos modernos lo corrigen automticamente, en cuanto a la fosforescencia. Modificacin en la intensidad para medir fosforescencia. Al relacionar la intensidad de fosforescencia con la concentracin, es preciso hacer las mismas consideraciones que en el caso de fluorescencia. Ip = K p I0 (23 bc)
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no sea superior a 005 que es mejor al disminuir 001, aunque el intervalo de concentracin para el que la curva es lineal suele ser mayor que en el caso de la fluorescencia. (Fig. 9 7).
La fosforescencia debe realizarse a la temperatura del nitrgeno lquido, que es de 177 K, mientras que las medidas de la fluorescencia se realizan a temperatura ambiente.
5.
APLICACIONES
Los mtodos de fluorescencia y fosforescencia son ms sensibles, selectivos y aplicables a intervalos de concentracin ms bajos que los espectrofotomtricos. Por otro lado la exactitud y precisin de los mtodos fotoluminiscentes es normalmente peor que la de los espectrofotomtricos.
Generalmente los mtodos fosforescentes son menos precisos que los fluorescentes. Los campos de aplicacin pueden incluirse en dos grandes grupos: Anlisis cualitativo y estructural Anlisis cuantitativo
Si bien es usada tambin la fluorescencia como tcnica auxiliar de otras tcnicas. 5.1.
Anlisis cualitativo y estructural
Entre los procedimientos base de la identificacin tenemos la formacin de un quelato fluorescente, el cambio de fluorescencia de un compuesto orgnico, la fluorescencia nativa. Sin embargo esta tcnica tiene solo un valor limitado para identificacin de compuestos, no alcanzando los resultados obtenidos por otras tcnicas como infrarrojos o de RMN ( Radiacin Magntica Nuclear ).
5.2. Anlisis cuantitativo
La concentracin de analito necesaria para producir fluorescencia medible es normalmente muy pequea, por lo que
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esta tcnica es til en la determinacin de trazas tanto de compuestos inorgnicos, como orgnicos o biolgicos. En cuanto al anlisis de iones inorgnicos, existen dos tipos de mtodos: - Mtodos directos: implican la formacin de un quelato fluorescente y la medida de su emisin, por ej. Cationes Al3+ con rojo de alizarina. - Mtodos indirectos: se basan en medidas de mnimos de intensidad de fluorescencia que resulta de la accin alternadora, lo que se llama quenching de la sustancia que se va a determinar. Ej. Aniones, F con complejo Al3+ con alizarina. Anlisis de compuestos orgnicos y biolgicos Las aplicaciones ms importantes de la fluorescencia se encuentran en este campo y los mtodos se basan en la medida de la fluorescencia directa o bien de la fluorescencia inducida por reaccin qumica. Entre los compuestos orgnicos fluorescentes de inters estn los hidrocarburos aromticos policclicos PDH5. Existe tambin un nmero elevado de compuestos biolgicos fluorescencia en aminocidos, enzima... Entre las reacciones qumicas empleadas para crear compuestos luminiscentes, podemos sealar:
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a) Reacciones de marcaje en las que un fluoroforo se une directamente al analito con el fin de hacerlo ms detectable. Ej. Cl (Cloro densilo con aminas secundarias). b) Reacciones basadas en la formacin de complejos metlicos. Los iones metlicos pueden servir para hacer fluorescente a un analito. Ej. Anlisis de tetraciclina.
5.3. Aplicacin de fotoluminiscencia como tcnica auxiliar de otras tcnicas
En otras ocasiones, el fenmeno de la fluorescencia se emplea como auxiliar en otras tcnicas.
Casos: Uso de indicadores fluorescentes en volumetras cido-base, precipitacin y complejacin. Deteccin fluorescente en cromatogrfia de papel y capa fina preparado de derivados fluorescentes de compuestos no fluorescentes antes o despus de la separacin. As igual es un mtodo sensible para la deteccin en HPLC la derivatizacin postcolumna. Tambin se puede usar para seguir reacciones catalizadas por enzimas y determinar la actividad de la enzima. Ej. Tomamos una sustancia no fluorescente sobre la cual acta la enzima para producir fluorescencia o concentracin de la misma.
Mtodos fosforimtricos. Aplicaciones

Los mtodos fosforescentes y fluorescentes suelen ser complementarios ya que los compuestos que son fuertemente fluorescentes presentan una dbil o nula fosforescencia y viceversa. La fosforescencia ha sido usada para la determinacin de una gran variedad de especies orgnicas u bioqumicas, pero debido a la necesidad de trabajar a bajas temperaturas y a la generalmente pobre precisin de esta tcnica no ha tenido una utilizacin tan amplia como la fluorometra. Resulta atractiva su selectividad potencial.
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TEMA 7:
ESPECTROSCOPIA ATMICA BASADA EN LA ATOMIZACIN CON LLAMA Y ELECTROTRMICA

1. ESPECTROSCOPIA ATMICA: FUNDAMENTOS Y CLASIFICACIN La espectroscopia atmica se basa en la absorcin, emisin o fluorescencia por tomos o iones elementales. Existen dos regiones del espectro que dan informacin atmica: ultravioleta visible y rayos x, siendo la primera, la que se estudia aqu. Los espectros atmicos ultravioleta visible, se obtienen mediante un adecuado tratamiento trmico que convierte los componentes de una muestra en tomos o iones gaseosos. El proceso por el cual la muestra se convierte en un vapor atmico se denomina ATOMIZACION. Depende la precisin y exactitud de estos mtodos, en gran medida de esta etapa. (Tabla 10 1) Entre estos mtodos se han aplicado con xito a la determinacin de ms de setenta elementos con sensibilidades de entre ppm ppb. 2. ATOMIZACIN DE LA MUESTRA Los atomizadores son de dos tipos: - Continuos. - Discretos. 2.1. Atomizadores continuos La muestra se introduce en el atomizador a una velocidad constante y la seal espectral es, por tanto, constante en el tiempo. Los tres primeros mtodos de atomizacin (Tabla 10 1, son de este tipo). En cada uno de ellos, la disolucin de la muestra se transforma en una niebla de pequeas gotas firmemente divididas mediante un flujo de gas comprimido. Este proceso se denomina NEBULIZACION. A esta nebulizacin le sigue la etapa de disolvatacin en la que el disolvente se evapora para producir un aerosol molecular slido, firmemente dividido. La disociacin de las molculas conduce luego a la formacin de un gas atmico, y a su vez, los tomos pueden disociarse en iones y electrones y se producen as, espectros de emisin molecular, y dos tipos de espectros de emisin atmicos (Todo esto, en diagrama bloque resumen) 2.2. Atomizadores discretos En estos, una cantidad medida de la muestra, se introduce en el dispositivo como un bolo de lquido o slido. La disolvatacin tiene lugar al subir la temperatura hasta el valor en que tiene lugar la evaporacin rpida del disolvente. A continuacin, la temperatura se eleva de forma drstica, de tal manera que las otras etapas de la - 101 -
atomizacin se producen en un breve periodo de tiempo. En estas circunstancias, la seal espectral adquiere la forma de un pico bien definido. Los atomizadores electrotrmicos son de este tipo, as como la atomizacin con chispa elctrica. Mientras que, en un arco elctrico se emplean tanto el modo continuo como el discreto, dependiendo del tipo de muestra que se analiza. 3. ESPECTROS ATMICOS Cuando una muestra se atomiza por cualquiera de los procedimientos anteriores, una importante fraccin de los constituyentes metlicos se transforman en tomos gaseosos y adems, segn la temperatura del atomizador, una cierta fraccin de estos tomos se ioniza originndose as una mezcla gaseosa de tomos e iones elementales. 3.1. Diagramas de niveles de energa Los espectros de absorcin, emisin o fluorescencia de las partculas atmicas gaseosas, estn
constituidas por lneas estrechas que son bien definidas y que provienen de las transiciones de los electrones ms externos. En el caso de los metales, las energas de esas transiciones son tales que implican a la radiacin ultravioleta visible y al infrarrojo cercano. Los diagramas de energa de los electrones externos proponen un mtodo adecuado para la descripcin de los procesos en los que se basan los distintos tipos de espectroscopia atmica. As, el diagrama del Na+ es un diagrama caracterstico. (Figura 10 2) Las energas correspondientes a las distintas orbitales atmicas, se indican mediante lneas horizontales. Las orbitales p, se desdoblan en ms niveles, que difieren ligeramente en energa, pudiendo justificarse este hecho mediante las interacciones entre el movimiento orbital del electrn alrededor de su propio eje y el espn. Con las orbitales d y f, se producen diferencias similares, pero sus magnitudes son normalmente tan pequeas que resultan indetectables. El desdoblamiento de las orbitales p, d y f de elevada energa en dos estados, es caracterstico de todas aquellas especies si tienen un nico electrn externo. As, el diagrama de niveles de energa para Mg+ tiene la misma apariencia que el correspondiente Na+. A medida que sube el nmero de electrones fuera de las capas ms internas, los diagramas de niveles de energa se hacen cada vez ms complejos, de manera que para los metales pesados, y particularmente para metales de transicin, existe un gran nmero de niveles de energa muy poco espaciados, y en consecuencia, el nmero de lneas de absorcin o emisin puede ser muy alto. Hay que tener en cuenta, que las transiciones que producen radiacin se observan solamente entre ciertos estados de energa. Por ejemplo: no se dan las transiciones de los estados 5s 4s al 3s ni entre los distintos estados p, o en los de d. Estas transiciones se llaman prohibidas, y existen reglas de seleccin que permiten la prediccin de cules son las transiciones ms probables y cules no. 3.2. Espectros de emisin atmica A temperatura ambiente, todos los tomos de una muestra se encuentran esencialmente en el estado fundamental. En estas circunstancias, por ejemplo, el nico electrn externo del Na metlico ocupa el orbital 3s. La excitacin de este electrn a orbitales ms altos, se puede conseguir mediante el calor de una llama, una chispa o un arco elctrico. El tiempo de vida de un tomo excitado es breve y su vuelta al estado fundamental va acompaada de la emisin de un fotn de radiacin. Las dos lneas que presenta el Na son 5890 y 5896 , y son
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las ms intensas y las responsables del color amarillo que se observa cuando se introducen las sales del Na en una llama. (Figura 10 5). Adems, este pico ms ancho corresponde a las transiciones de 3p a 3s y el pico que aparece a 5700 corresponde a dos picos no resueltos a las dos transiciones 4d a 3p. El poder de resolucin del monocromador es insuficiente para poder separar los picos. 3.3. Espectros de absorcin atmica En un medio gaseoso a elevada temperatura, los tomos de los metales son capaces de absorber radiacin de (longitud de onda), caracterstico de transiciones del estado fundamental a niveles superiores. De este modo, un espectro de absorcin atmica est constituida por lneas de resonancia, que son el resultado de transiciones del estado fundamental a niveles superiores. As, por ejemplo, en el caso de Na, se observan experimentalmente, picos de absorcin aguda a 5890, 5896 y 3302, 3302 . Cada par adyacente de estos picos corresponden a transiciones desde el nivel 3s a 3p y desde 3s a 4p. 3.4. Espectros de fluorescencia atmica En una llama, los tomos pueden presentar fluorescencia cuando se irradian en una fuente intensa que contiene las longitudes de onda que son absorbidas por el elemento. Los espectros de fluido resultante, se miden adecuadamente a un ngulo de 90, con respecto a la trayectoria luminosa y la radiacin que se observa. Es por lo general, el resultado de la fluorescencia de resonancia. Cuando los tomos de Mg se exponen a fuente ultravioleta, se absorbe la radiacin de 2852 que corresponde al salto de 3s a 3p, emitindose posteriormente, fluorescencia de resonancia a esa misma longitud de onda. Sin embargo, cuando los tomos de Na absorben radiacin de longitud de onda de 3303 , los electrones pasan al estado 4p, producindose a continuacin, una desactivacin no radiante hacia estados 3p mucho ms rpidamente que la fluorescencia de resonancia como consecuencia de la fluorescencia que se observa y se presenta a 5890 y 5890 . Y un tercer mecanismo para la fluorescencia atmica, en que los tomos de Talio excitados en una llama, vuelve al estado fundamental en dos etapas: una de ellas es fluorescente y produce lneas a 5350 , y a continuacin se produce rpidamente una desactivacin no radiante hasta el estado fundamental. Adems se puede observar fluorescencia de resonancia a 3776 . (Figura 10 6) 3.5. Anchura de las lneas espectrales
En espectroscopia atmica, la anchura de lneas espectrales es de gran importancia, as como las lneas estrechas son muy convenientes tanto en absorcin como emisin, ya que as se reducen las posibles interferencias debidas al solapamiento de espectros. Las lneas de absorcin y emisin atmica presentan generalmente, una distribucin de longitud de onda simtrica alrededor de una longitud de onda media, que coincide con la longitud de onda del mximo de absorbencia de la radiacin absorbida o la mxima intensidad de la radiacin emitida. La observacin de diagramas de energa sugiere que, una transicin entre dos niveles discretos de energa dara lugar a una lnea, a una longitud de onda nica. Sin embargo, distintos fenmenos como el efecto doppler,
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efecto del campo magntico o elctrico, y efectos de presin, debido a colisiones del tomo, dan lugar a que estos efectos generen el ensanchamiento de las lneas espectrales. 4. ATOMIZACIN CON LLAMA Una disolucin de muestra se pulveriza en una llama mediante nebulizador, el cual transforma la disolucin en un aerosol constituido por diminutas gotitas de lquido. A continuacin, tiene lugar una serie de procesos que dan lugar a una mezcla de tomos de analito, iones de analito, molculas de muestra, molculas de xido de analito y una variedad de especies moleculares y atmicas que se forman por reacciones entre el combustible, el oxidante y la muestra, debido a la gran variedad de procesos complejos que se dan en la llama. La atomizacin es la etapa ms crtica en la espectroscopia de llama, y la que limita la precisin de estos mtodos. Por ello, es importante conocer las caractersticas de las llamas y las variables que les afectan. 4.1. Tipos de llamas (Tabla 10 2) En el caso de usar O2 en el aire, se obtienen temperaturas entre 1700 - 2400C haciendo mezclas con gas natural, H2 y acetileno. A estas temperaturas, slo los metales ms fcilmente excitables como los alcalinos y alcalinotrreos, producen efectos de emisin adecuados. Los metales pesados se excitan con oxido nitroso, ya que estos oxidantes producen temperaturas entre 2500 3100C con los combustibles ms comunes. Tambin son de considerable importancia, las velocidades de combustin, ya que las llamas slo son estables en ciertos intervalos de caudal; si el caudal no sobrepasa la velocidad de combustin, la llama se propaga hacia atrs en el interior del quemador, Cuando el caudal y velocidad de combustin se encuentren ajustados, la llama sube hasta alcanzar un punto por encima del quemador, donde el caudal y la velocidad de combustible son iguales. En esta regin es donde la llama es estable; a caudales ms altos, la llama sube y al final alcanza un punto donde se aparta del quemador. El caudal de la mezcla combustible oxidante, depende mucho del combustible y del oxidante que se usan y es una importante variable que es preciso controlar rigurosamente. 4.2. Estructura de la llama La zona de la combustin primaria se conoce por su luminiscencia azul, debido a la presencia de radicales C2, CH. En esta zona no se alcanza el equilibrio trmico y rara vez se usa en espectroscopia de llama. El rea interconal puede alcanzar varios centmetros de altura en llama rica de acetileno O2 o, acetileno xido nitroso. Esta zona es rica en tomos libres, y es la que ms se usa en espectroscopia. El cono externo es zona de reaccin secundaria, dados los picos formados, una regin interna se transforma en xidos moleculares libres, estables. El perfil de la llama proporciona una informacin til respecto a los procesos que tienen lugar en las distintas partes de la llama. (Figura 10 11) Tambin tenemos los perfiles de absorbancia (figura 10 12). El perfil de absorbancia, por ejemplo para Mg, presenta a la mitad de la llama un mximo, debido en primer lugar, al aumento inicial de la absorbancia al aumentar la distancia a la base de la llama y que se debe a que se produce un aumento en el nmero de tomos de Mg, debido al mayor tiempo de exposicin a la llama. Sin embargo, al acercarse a la zona externa, comienza una apreciada oxidacin del Mg, lo que origina una disminucin en la absorbancia.
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El comportamiento de la plata es que no se oxida con facilidad; es distinta, observndose un aumento en la absorbancia debido a que se produce un aumento continuo de tomos desde la base hasta la periferia de la llama. Disminuye el Cr, que forma xido fcilmente, y muestra una disminucin continua de la absorbancia desde la zona cercana al quemador, lo que sugiere la formacin de xidos desde el principio. Por tanto, por el anlisis de cada uno de estos elementos, se debe usar una zona distinta de la llama. Por otro lado, el perfil de emisin, que es un perfil tridimensional muestra la intensidad de emisin de una lnea. Por ejemplo: produccin en una llama.
4.3.
Perfiles de la llama (temperatura, absorbancia y emisin)
(Ver figuras 10 10 y 10 11)
4.4. Atomizadores de llama

Se aplican para medidas de absorcin, emisin y fluorescencia atmica. Un atomizador de llama consiste en un nebulizador neumtico que transforma la disolucin de muestra en una niebla o aerosol que se introduce en un quemador. (Figura 10 14) En trminos de reproducibilidad, la atomizacin en llama resulta ser superior a todos los dems mtodos hasta ahora desarrollados para la introduccin de nuestros lquidos con la posible excepcin ICP. (Figura 10 15) En trminos de sensibilidad, otros mtodos de atomizacin son claramente mejores, pudiendo darse dos razones: 5. Una gran porcin de la muestra se pierde por drenaje. El tiempo de residencia de los tomos individidos en el camino ptico, es breve.
ATOMIZACIN ELECTROTRMICA Los atomizadores electrotrmicos proporcionan mayor sensibilidad, debido a que toda la muestra se atomiza
en un periodo muy breve y el tiempo de residencia de los tomos en el camino ptico es de un segundo o ms. Los atomizadores electrotrmicos se usan para las medidas de absorcin atmica y fluorescencia atmica, pero no se han aplicado en los mtodos de emisin Con estos atomizadores, se evaporan primero unos pocos microlitos de muestra a baja temperatura, y luego se calcina a una temperatura alta, en un tubo o cubeta de grafito calentado elctricamente. Despus de la calcinacin, la corriente se incrementa a varios cientos de amperios, lo que hace que la temperatura suba aproximadamente a 2500C, producindose la atomizacin de la muestra en un tiempo que va de unos pocos milisegundos a un segundo. Es estas condiciones, se mide la absorcin o la fluorescencia de las partculas atomizadas en la zona situada inmediatamente encima de la superficie calentada. (Figura 10 16) (Figura 10 17) Los atomizadores electrotrmicos presentan la ventaja de su elevada sensibilidad. La precisin relativa de estos mtodos est entre el 5 10% en comparacin del 1% o menos, que se puede obtener en la atomizacin con llama o plasma. Adems estos mtodos son cortos.
- 105 -
Una desventaja es el intervalo analtico en el que se puede trabajar, pues es pequeo, siendo por lo general, mayor de dos rdenes de magnitud. En consecuencia, la atomizacin electrotrmica se usa slo cuando la atomizacin con llama o plasma no proporciona los lmites de deteccin adecuados. 6. ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA Ha sido el mtodo ms usado de los mtodos espectrales atmicos, debido a su simplicidad, efectividad y bajo coste relativo.
6.1. Fuentes de radiacin para los mtodos de absorcin atmica

Los mtodos analticos basados en la absorcin atmica son muy especficos debido a que las lneas de absorcin atmica son considerablemente estrechas, y la energa de transicin electrnica es nica para cada elemento. Sin embargo, esta limitacin en la anchura de las lneas crea un problema, ya que para que se cumpla la Ley de Beer, es necesario que la anchura del borde de la fuente sea mayor que la del pico de absorcin. El principal inconveniente para solventar este problema es cambiar la lmpara para cada elemento que se analiza. 1) Lmparas de ctodo hueco. Es la fuente ms comn para las medidas de absorcin comn, y consiste en un nodo o ctodo cilndrico cerrados hermticamente en un tubo de vidrio lleno de Ar o Ne. El ctodo est constituido por un metal cuyo aspecto se desea obtener o bien sirve de soporte para una capa de dicho metal. Cuando se aplica un potencial suficientemente entre los electrodos, se produce la ionizacin del gas y los cationes electrones migran hacia los electrodos, de manera que los cationes son capaces de arrancar algunos de los tomos metlicos de la superficie del electrodo y producir una nube atmica. A este proceso se le denomina Chisporreteo. Una parte de los tomos metlicos desprendidos se encuentran excitados y al volver al estado fundamental emiten su radiacin caracterstica. Finalmente, los tomos metlicos se vuelven a depositar en la superficie del ctodo o en las paredes del vidrio del tubo. La eficacia de la lmpara del ctodo hueco depende de su geometra y del potencial aplicado. 2) Lmparas de descarga sin electrodos. Son buenas fuentes de espectros atmicos de lneas, y producen intensidades radiantes que son una o dos rdenes de magnitud superiores a los del ctodo hueco. Una lmpara con estas caractersticas, se construye en un tubo de cuarzo hermticamente cerrado, que contiene una pequea cantidad del metal cuyo espectro se desea obtener de su sal y un gas inerte como el Ar. La lmpara no contiene electrodos y para su activacin, se usa un campo intenso de radiofrecuencias o de microondas produciendo as, la ionizacin del Ar. Existen lmparas comerciales de descarga sin electrodos para quince o ms elementos, aunque su funcionamiento no parece ser tan fiable como el de las lmparas del ctodo hueco.
Modulacin de la fuente - 106 -
Es un instrumento de absorcin atmica para eliminar las interferencias producidas por la emisin de radiacin de la llama. La mayor parte de la radiacin emitida por la llama se elimina mediante el monocromador, pero la radiacin emitida correspondiente a la longitud de onda seleccionada por el monocromador, est siempre presente en la llama, debido a la excitacin y emisin de los tomos del analito. A fin de eliminar los efectos de la emisin de la llama, es necesario modular la salida de la fuente para que su intensidad oscile a una frecuencia constante. Una forma, es ir interponer entre la fuente y la llama un contador. De este modo, el detector recibe dos tipos de seales, una alterna de la fuente y otra continua de la llama.
6.2.
Instrumentos atmica
para
la
espectroscopia
de
absorcin
El instrumento ha de proporcionar una anchura de banda lo suficientemente estrecha como para evitar la medida de la lnea elegida de entre otras que pueden interferir, o que disminuyan la sensibilidad de los anlisis. Para ello, pueden usarse filtros de interferencias, pero la mayora de los instrumentos usan un monocromador ultravioleta visible. Los detectores y sistemas de lectura son similares a los descritos para la espectroscopia de absorcin molecular ultravioleta visible. Se usan detectores fotomultiplicadores, siendo necesarios sistemas electrnicos que pueden discriminar entre la seal modulada de la fuente y la continuacin de la llama. La mayora de los instrumentos van equiparados con ordenador, para el control de los parmetros instrumentales y para la adquisicin y manipulacin de datos. En cuanto a los espectrofotmetros de un solo haz, consisten en varias fuentes de ctodo hueco, un contador, o una fuente de alimentacin para impulsar un atomizador y un espectrofotmetro sencillo de red o difraccin con un fotomultiplicador. En los espectrofotmetros de doble haz, el haz que proviene de la fuente de ctodo hueco, se divide mediante un contador reflectante, de manera que la intensidad pasa a travs de la llama y la otra mitad, por fuera de ella. Posteriormente, los dos haces lo recombinan mediante un espejo semiplateado y llega a un monocromador de red y al tubo fotomultiplicador. A continuacin, pasa a un amplificador donde se amplifica la relacin entre las seales de referencia, y la muestra mayor pasa al sistema de adquisicin.
6.2. Interferencias espectrales

Se produce cuando la absorcin o emisin de una especie que interfiere, se solapa o aparece muy prxima a la absorcin o emisin del analito, de modo que, su resolucin por el monocromador resulta imposible. Dado que las lneas de emisin de las fuentes de ctodo hueco son muy estrechas, es rara la interferencia que se produce por superposicin de ellas. Tambin se producen interferencias espectrales debido a la produccin de combustin que poseen bandas de absorcin anchas, o de aerosoles que dispersan la radiacin, y as, ambos bajan la intensidad del haz transmitido, dando lugar a resultados analticos con errores. Cuando la nica fuente de estos productos es la mezcla de combustible y oxidante, se puede realizar fcilmente la correccin, midiendo la absorbancia de un blanco. Cuando la absorcin o dispersin se debe a la matriz de la muestra, con frecuencia se puede evitar modificando parmetros analticos, tales como temperatura, relacin combustible oxidante, si se conoce la - 107 -
causa de la interferencia. Se puede aadir un exceso de la sustancia interferente, tanto a la muestra como a los patrones, de manera, que si el exceso es elevado con respecto a su concentracin en la matriz de la muestra, la contribucin de sta ltima ser despreciable. La sustancia aadida se denomina Amortiguador de la radiacin.
6.3. Interferencias qumicas

Se producen como consecuencia de diversos procesos qumicos que ocurren durante la atomizacin y que alteran las caractersticas de absorcin del analito. Son ms comunes que los espectrales, y afectan pudiendo ser mnimos si se eligen condiciones de trabajo adecuadas. Los procesos de mayor inters son: La formacin de componentes de baja volatilidad. La reaccin de disociacin y, Las reacciones de ionizacin
En cuanto a la formacin de compuestos poco voltiles, el tipo ms comn de interferencia es el producido por aniones que forman compuestos de baja volatilidad con el analito, y por tanto reducen su velocidad de atomizacin, originando errores negativos. Este tipo de interferencias pueden eliminarse o atenuarse de tres formas: a elevada temperatura empleando agentes liberadores empleando agentes protectores que forman con el analito, especies estables voltiles.
En cuanto a los equilibrios de disociacin, son los xidos e hidrxidos de los metales alcalinos, los que se disocian con mucha mayor facilidad, por lo que las intensidades de las lneas son elevadas, incluso a temperatura relativamente baja. La ionizacin en las llamas se da en las que contienen aire, como oxidante, y la ionizacin de tomos y molculas, aqu es pequea, y por lo general, puede despreciarse. Sin embargo, en las llamas en las que el oxidante el O2 o No, la ionizacin es ms importante y hay una concentracin notable de electrones libres. El grado de ionizacin del metal, se encuentra fuertemente influido por la presencia de otros metales ionizables en la llama. Los efectos de estos desplazamientos se pueden eliminar con la adicin de un supresor de ionizacin, el cual proporciona una concentracin relativamente alta de electrones en la llama y como consecuencia, se suprime la ionizacin del analito.
6.4. Procedimiento absorcin atmica

a) Preparacin de la muestra.
analtico
en
espectroscopia
de
La muestra ha de introducirse disuelta en agua sin que intervengan muchos de los materiales de inters, como pueden ser muchos tejidos animales, plantas, derivados de petrleo y minerales no solubles en agua y con frecuencia se requiere un tratamiento previo laborioso. Las etapas de descomposicin y disolucin de la muestra, a menudo introducen ms errores que las propias medidas espectroscpicas. Adems, los reactivos que se usan, introducen los tipos de interferencias qumicas y espectrales.
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Para la descomposicin y disolucin de la muestra, alguno de los precedentes ms habituales es el de los tratamientos con cidos minerales y oxidacin con reactivos lquidos sulfrico HNC, perclrico mineralizacin por va hmeda, adems de combustin en banda de O2. Tambin la mineralizacin a elevada temperatura mineralizacin por va seca; y finalmente, fusin a elevada temperatura con reactivos con xido brico y carbonato sdico. Una de las ventajas de la atomizacin electrotrmica, es que algunos materiales se pueden atomizar directamente, evitando de este modo, la etapa de disolucin. b) Patrones de calibracin. Idealmente, los patrones de calibracin para el anlisis de absorbancia atmica, deberan contener no slo el analito, sino que tambin debera parecerse lo ms posible a la muestra en cuanto a la matriz. c) Efectos que se producen por el empleo de disolventes en la espectroscopia de llama.
La altura de los picos de absorcin se elevan en presencia de alcoholes de bajo Pn, y se atribuye el aumento en la eficacia del nebulizador, ya que la baja tensin superficial origina gotas de pequeo tamao, y as se produce la evaporacin del disolvente de forma ms rpida.
d) Tcnicas de generacin de hidruros. Proporcionan un mtodo para la introduccin de As, Sn, Se, Bi y Pb, como gases en un atomizador. La generacin rpida de hidruros voltiles se produce normalmente por adicin de una disolucin de la muestra en medio cido, a un pequeo volumen de una disolucin acuosa de Borohidruro Sdico al l%, contenido en una cubeta de vidrio. Despus de mezclarse las disoluciones durante un breve periodo de tiempo, el hidruro que se forma se arrastra a la cmara de atomizacin mediante un gas inerte. Esta cmara, por lo general, consiste en un tubo de slice, calentado a unos cientos de grados en un horno o en la llama, a travs del cual, la radiacin de la fuente pasa hacia el monocromador y al detector. La seal es un pico similar al que se obtiene con la atomizacin electrotrmica, aumentando la sensibilidad en un factor de 10 100. e) Curvas de calibracin.
Peridicamente, debe prepararse una curva de calibracin en el intervalo de concentracin donde se encuentra la muestra. Adems, debido a que en la atomizacin y en la medida de absorbancia existe un gran nmero de variables incontroladas, cada vez que se realiza un anlisis, es necesario medir dos patrones, cubriendo un rango de concentracin que englobe la concentracin del analito en la muestra. d) Mtodo de la adicin estndar. Se usa para la absorcin atmica, para contrarrestar las interferencias qumicas y espectrales producidas por la matriz de la muestra.
6.5.
Aplicaciones de la espectroscopia de absorcin atmica
Constituyen un medio sensible para la determinacin cuantitativa de ms de sesenta elementos. Las lneas de resonancia de elementos no metlicos, se localizan por debajo de 200mm y slo es posible su determinacin por los espectrofotmetros que operan en el vaco.
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Para muchos elementos, las lneas de deteccin en espectroscopia de absorcin, en la atomizacin con llama, se encuentran en el intervalo de 1 20 microlitos ppb 10-3 2 10-2 ppm, y con la atomizacin electrotrmica, los valores correspondientes son 2 10-3 10-2 ppb o 2 10-6 10-5 ppm. En cuanto a la exactitud, en condiciones normales, el error relativo asociado al anlisis de absorcin con llama, es del orden de l 2 %, pudiendo disminuir estas cifras cuando se toman precauciones especiales, y los errores que se muestran con la atomizacin electrotrmica son de 5 10 veces ms altas que los obtenidos con la atomizacin con llama.
7.
ESPECTROSCOPIA DE EMISIN DE LLAMA Tiene como principal aplicacin, la determinacin de Na, K, Li y Ka, especialmente en fluidos biolgicos y
en tejidos. Por razones de conveniencia, rapidez y por la relativa falta de interferencias, se ha convertido en el mtodo ms adecuado para el anlisis de estos elementos que suelen ser difciles de determinar por otras tcnicas.
7.1. Instrumentacin
Los instrumentos para trabajar con la emisin de llama, son parecidos a los de absorcin, excepto por el hecho de que en los primeros, la llama acta como fuente de radiacin, y en consecuencia, la lmpara de ctodo hueco y el contador, son necesarios. Para los anlisis que no son de rutina, resulta ms conveniente usar un espectrofotmetro ultravioleta visible. Con un registrador de una resolucin aproximada de 0,5 . El registrador constituye un medio sencillo para realizar correcciones de fondo. Para el anlisis de rutina para metales alcalinos y alcalinoterreos, es suficiente la utilizacin de fotmetros simples de filtros; en estos casos se usa una llama a baja temperatura, para evitar la excitacin de los dems metales, por lo que los espectros obtenidos son simples y pueden usarse filtros de interferencia para aislar la lnea de emisin que se desee. Algunos fabricantes construyen fotmetros de llama diseados especficamente para el anlisis de Na, Ka, Li en suero sanguneo y otras muestras biolgicas. En ellos, la radiacin que proviene de la llama, se divide en tres haces de aproximadamente la misma intensidad, y cada uno de ellos pasa a travs de la superficie fotomtrica independiente, constituido por un filtro de interferencias, un fototubo y un amplificador.
7.2. Interferencias
Interferencias de banda
En muchas ocasiones, se observa que las lneas de emisin aparecen superpuestas sobre bandas emitidas por xidos y otras especies moleculares de la muestra, combustible u oxidante, y es posible corregir el fondo tocando datos, es decir, unos pocos nm (nanmetros) a cada lado del pico del analito. En instrumentos que no tienen registrador, se realiza una medida a cada lado del pico, aumentando el promedio de las dos medidas, y se resta de la altura total del pico. Interferencias qumicas
Son esencialmente las mismas que se encuentran en los mtodos de absorcin de llama. Se evitan mediante la eleccin de la temperatura y el uso de agentes protectores, liberadores y supresores de ionizacin. - 110 -
Autoabsorcin
El centro de una llama est ms caliente que su parte externa, y por ello los tomos que emiten en la zona central, estn rodeados por una regin ms fra que contiene una elevada concentracin de tomos no excitados, de manera que se produce la autoabsorcin de la longitud de onda de resonancia por los tomos de la capa ms fra. En una situacin extrema, el centro puede resultar menos intenso que los bordes, o incluso desaparecer, y el resultado es el desdoblamiento por autoinversin del mximo de emisin en lo que aparentemente son dos picos. La autoabsorcin resulta molesta cuando el analito est a elevada concentracin. En estas circunstancias, es preferible emplear para el anlisis, una lnea no resonante, la cual, no puede experimentar autoabsorcin. La autoabsorcin y la ionizacin, producen a veces, unas curvas de calibracin de emisin con forma de S en tres segmentos distintos, y as en concentraciones intermedias. Por ejemplo; de K se observa una relacin lineal entre intensidad y concentracin, pero la baja concentracin aparece una curvatura que se debe al elevado grado de ionizacin en la llama y a concentracin elevada, la autoabsorcin provoca desviaciones negativas de la linealidad.
8.
COMPARACIN ENTRE LOS MTODOS DE ABSORCIN ATMICA ATMICA
Y DE EMISIN
En cuanto a los instrumentos, la principal ventaja de los procedimientos de emisin, consiste en que la llama acta como fuente. Los mtodos de absorcin necesitan, por el contrario, una lmpara distinta para cada llama. Por otra parte, la calidad del monocromador de un instrumento de absorcin, no tiene que ser tan alta para alcanzar el mismo grado de selectividad debido a la estructura de las lneas emitidas por la lmpara de ctodo hueco. En cuanto a la habilidad del operador, los mtodos de emisin requieren un elevado grado de habilidad, debido a la naturaleza de emisin de ajuste, tales como la combustible oxidante. Correccin de fondo En los espectros de banda que provienen de los constituyentes de la muestra, se realiza con facilidad y por lo general, y con ms exactitud, en los mtodos de emisin. la zona de la llama escogida y la relacin
Precisin y exactitud La incertidumbre obtenida por los operadores expertos, es ms o menos la misma para ambos procedimientos. Los mtodos de absorcin atmica presentan menos problemas. Los procedimientos de absorcin atmica, estn menos sujetos a interferencias de lneas espectrales, aunque los mtodos de emisin de este tipo de interferencias se reconocen y se pueden evitar fcilmente.
- 111 -
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1.2. PROCESO ANALITICO

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1.2.2. Obtencin de la muestra para el anlisis

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Ejemplo: Sm = 10% S Sa = 5% : So = ( 012 + 0052 )05 = 011 = 11% S Sa = 1% :

So = ( 012 + 0012 )05 = 010 = 10%

1.2.3. Preparacin de materiales

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1.2.4. Tratamiento de la muestra

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1.2.5. Eliminacin de Interferencias.

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Tema 1: Metodologa Analtica

1.2.6. Medida (Determinacin propiamente dicha)

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1.2.7. Interpretacin y conclusiones

TRATAMIENTO ESTADSTICO DE LOS RESULTADOS ANALTICOS

Tema 1: Metodologa Analtica

2.1. TIPOS DE ERRORES EN EL ANLISIS CUANTITATIVO

2.1.1. Errores Accidentados o Crasos

Tema 1: Metodologa Analtica

2.1.2. Errores Sistemticos o Determinados

2.1.3. Errores aleatorios o indeterminados

2.2. EXACTITUD Y PRECISIN

Tema 1: Metodologa Analtica

2.2.1. Maneras de expresar la exactitud

Tema 1: Metodologa Analtica

Ea = 252 262 = 01 gr. 252 262 ER = 100 = 38 % 262

2.2.2. Maneras de expresar la precisin

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2.3. DISTRIBUCIN DE ERRORES

Tema 1: Metodologa Analtica

Tema 1: Metodologa Analtica

m = e.e.m. = n 2.5. APLICACIONES DE LA ESTADSTICA A LOS RESULTADOS ANALTICOS

2.5.1. Intervalos de Confianza

Tema 1: Metodologa Analtica

Tema 1: Metodologa Analtica

2.5.2. Rechazo de Resultados

Determinar si el valor de 038 es rechazable segn el nivel de confianza del 95 %:

1.) 0401; 0403; 0401; 0320 0380 0401 2.) Q = = 070

Tema 1: Metodologa Analtica

Tema 1: Metodologa Analtica

Tn = S Rechazo sii Tn calculada > Tn terico

El ltimo valor parece anmalo, se puede rechazar? 015 Q = = 054 028

QTerica = 0710 para nivel de confianza del 95 %

2.5.3. Presentacin de los resultados

Tema 1: Metodologa Analtica

63665 0028 = 6366 003

2.6. PROPAGACIN DE ERRORES

Tema 1: Metodologa Analtica

2.6.l. Propagacin de Errores Aleatorios.

Tema 1: Metodologa Analtica

donde a, b, c, d son cantidades medidas independientemente y k

El rendimiento cuntico de la fluorescencia , se calcula a partir de la expresin:

Tema 1: Metodologa Analtica

0434 0001 0501

Tema 1: Metodologa Analtica

2.6.2. Propagacin de Errores Sistemticos