Medios de cultivo para el crecimiento de bacterias

2000 Kenneth Todar, University os Wisconins-Madison Medios de cultivo para el crecimiento de bacterias Para cada bacteria a ser cultivada para cualquier propsito es necesario proveer el ambiente bioqu mico y bio! sico apropiado" #l ambiente bioqu mico $nutricional% se hace disponible como medio de cultivo, y dependiendo de las necesidades especiales de cada bacteria particular se ha desarrollado una &ran variedad y tipos de medios de cultivo con di!erentes propsitos y utili'aciones" (os medios de cultivo son empleados para el aislamiento y mantenimiento de cultivos puros de bacterias y tambi)n son utili'ados para la identi!icacin de bacterias de acuerdo a sus propiedades bioqu micas y !isiol&icas" #l modo en que las bacterias son cultivadas, y el propsito de los medios de cultivo, var an ampliamente" (os medios lquidos son utili'ados para el crecimiento de lotes de cultivos puros mientras que los medios slidos son ampliamente utili'ados para el aislamiento de cultivos puros, para la estimacin de poblaciones de bacterias viables, y una variedad de otros propsitos" #l agar, a&ente &)lido m*s utili'ado para medios slidos o semislidos, es un hidrocoloide derivado de las al&as ro+as" #l a&ar es utili'ado por sus propiedades ! sicas ,nicas $se !unde a -00 &rados y permanece l quido hasta en!riarse a .0 &rados, la temperatura a la que se vuelve &el% y porque no puede ser metaboli'ado por la mayor a de las bacterias" Por lo tanto, como un componente del medio es relativamente inerte, simplemente mantiene $&eli'a% los nutrientes que se encuentran en la solucin acuosa" (os medios de cultivo pueden ser clasi!icados en varias cate&or as dependiendo de su composicin o uso" Un medio qumicamente definido (sinttico) $Tabla ./ y .b% es un medio en el que se conoce la e0acta composicin qu mica" Un medio complejo (indefinido) $Tabla 1/ y 1b% es un medio en el que no se conoce la composicin qu mica e0acta" (os medios de!inidos est*n habitualmente compuestos por bioqu micos puros sacados del stoc23 los medios comple+os habitualmente contienen materiales comple+os de ori&en biol&ico tales como la san&re, la leche, el e0tracto de levadura o el e0tracto de carne, cuya composicin qu mica e0acta es obviamente indeterminada" Un medio de!inido es un medio mnimo $Tabla ./% si provee slo los nutrientes e0actos $incluyendo al&unos !actores de crecimiento% necesarios para el crecimiento del or&anismo" (a utili'acin de medios m nimos de!inidos requiere que el investi&ador cono'ca los requerimientos nutricionales e0actos de los or&anismos en cuestin" (os medios de!inidos qu micamente son de valor para el estudio de los requerimientos nutricionales m nimos de los microor&anismos, para cultivos enriquecidos, y para una amplia variedad de estudios !isiol&icos" (os medios comple+os habitualmente proveen la &ama completa de !actores de crecimiento que pueden ser requeridos por un or&anismo por lo que pueden ser utili'ados m*s pr*cticamente para cultivar bacterias desconocidas o bacterias cuyos requerimientos nutricionales son comple+os $por e+emplo, or&anismos que requieren muchos !actores de crecimiento%" 4tros conceptos empleados en la construccin de medios de cultivo son los principios de seleccin y enriquecimiento" Un medio selectivo es aquel que tiene a&re&ados componentes que inhibir*n o prevendr*n el crecimiento de ciertos tipos o especies de bacterias y5o promover*n el crecimiento de las especies deseadas" Uno puede

tambi)n a+ustar las condiciones ! sicas del medio de cultivo, como el p6 y temperatura, para hacerlo selectivo para or&anismos capaces de crecer ba+o esas condiciones" Un medio de cultivo puede tambi)n ser un medio diferencial si permite al investi&ador distin&uir entre di!erentes tipos de bacterias basado en al&,n ras&o observable de su pauta de crecimiento en el medio" 7s , un medio selectivo, diferencial para el aislamiento de Staphylococcus aureus, el pat&eno bacteriano m*s com,n en los humanos, contiene una concentracin muy alta de sal $que el esta!ilococo tolerar*% que inhibe a la mayor a de las otras bacterias, mannitol como !uente de a',car !ermentativo, y un tinte de indicador de p6" 8e los especimenes cl nicos, slo el esta!ilococo crecer*" S. aureus es di!erenciado de S. epidermidis $un componente no pat&eno de la !lora normal% por su capacidad de !ermentar el mannitol" (as colonias !ermentadoras de mannitol $S. aureus% producen *cidos que reaccionan con el tinte indicador !ormando un halo coloreado alrededor de las colonias3 las no !ermentadoras del mannitol $S. epidermidis% utili'an otros sustratos no !ermentadores en el medio para el crecimiento y no !orman un halo alrededor de sus colonias" Un medio enriquecido emplea un &iro al&o di!erente" Un medio enriquecido $Tabla 1a y 1b% contiene al&unos componentes que permiten el crecimiento de tipos o especies espec !icas de bacterias, habitualmente porque ellas solas pueden utili'ar el componente de su ambiente" 9in embar&o, un medio enriquecido puede tener caracter sticas selectivas" Un medio enriquecido para bacterias no simbiticas !i+adoras de nitr&eno omite la !uente de nitr&eno a&re&ado al medio" #l medio es inoculado con una !uente potencial de esta bacteria $por e+emplo, una muestra de suelo% e incubado en la atms!era en donde la ,nica !uente de nitr&eno disponible es es :2" Un medio selectivo enriquecido $Tabla 1b% para el crecimiento de la halo! lica e0trema $Halococcus% contiene cerca de un 21; de sal <:a=l>, que es requerido por la halo! lica e0trema y que inhibe el crecimiento de otros procariotes" Tabla 4a. Medio mnimo para el crecimiento de Bacillus megaterium. n ejemplo de medio qumicamente definido para el crecimiento de bacterias !eterotrficas. "omponente "antidad #uncin del componente sucrose -0"0 & = y !uente de ener& a K26P4. 2"1 & bu!!er p63 !uente de P y K K62P4. 2"1 & bu!!er p63 !uente de P y K $:6.%26P4. -"0 & bu!!er p63 !uente de : y P M&94. ?624 0"20 & !uente de 9 y M&@@ Ae94. ?624 0"0- & !uente de Ae@@ Mn94. 624 0"00? & !uente de Mn@@ a&ua BC1 ml p6 ?"0

Tabla 4b. Medio definido (tambin medio enriquecido) para el crecimiento de Thiobacillus thiooxidans, una bacteria litoautotrfica. "omponente "antidad #uncin del componente :6.=l 0"12 & !uente de : K62P4. 0"2C & !uente de P y K M&94. ?624 0"21 & !uente de 9 y M&@@ =a=l2 2624 0"0? & !uente de =a@@ 7'u!re elemental -"1D & !uente de ener& a =02 1;E !uente de = a&ua -000 ml

p6 F"0 E 7erear el medio en !orma intermitente con aire conteniendo 1; de =42" Tabla $a. Medio complejo para el crecimiento de bacterias fastidiosas. "omponente "antidad #uncin del componente Auente de vitaminas y otros !actores #0tracto de carne -"1 & de crecimiento Auente de vitaminas y otros !actores #0tracto de levadura F"0 & de crecimiento Peptona D"0 & Auente de amino*cidos, :, 9, y P Glucosa -"0 & = y !uente de ener& a 7&ar -1"0 & 7&ente inerte solidi!icante a&ua -000 ml p6 D"D Tabla $b. Medio selectivo enriquecido para el crecimiento de !aloflicas e%tremas. "omponente "antidad #uncin del componente 7cidos =asamino ?"1 & Auente de amino*cidos, :, 9 y P #0tracto de -0"0 & Auente de !actores de crecimiento levadura =itrato trisdico F"0 & = y !uente de ener& a K=l 2"0 & !uente de K@ M&94. ? 624 20"0 & !uente 9 y M&@@ Ae=l2 0"02F & !uente Ae@@ !uente de :a@ para halo! licas e :a=l 210 & inhibidor para no halo! licas a&ua -000 ml p6 ?".