1.

VELOCIDAD DE CONDUCCIN NERVIOSA Y POTENCIAL DE ACCION COMPUESTO

INTRODUCCIN La funcin principal de las fibras nerviosas es la conduccin del impulso nervioso (potencial de accin). En el caso de la fibras sensoriales (aferentes) el potencial de accin es generado en la terminal nerviosa perifrica y es conducido hacia la terminal nerviosa central. El potencial de accin en las fibras motoras (eferentes) es generado en el cono axnico y es conducido hacia la periferia hasta su efector. Conduccin ortodrmica significa la conduccin del impulso nervioso en la direccin adecuada. La conduccin antidrmica significa lo opuesto. Los nervios perifricos estn constituidos por un grupo heterogneo de fibras nerviosas. La heterogeneidad de las fibras nerviosas se debe tanto a sus caracter sticas geomtricas (dimetro)! histolgicas (presencia o ausencia de mielina)! pertenencia (somticas o autnomas)! funcionales (sensoriales o motoras). "ambin son heterogneas en cuanto a propiedades de excitabilidad como ser a la magnitud del est mulo umbral y la duracin de su per odo refractario! tanto absoluto como relativo. Considerando todas estas caracter sticas las fibras nerviosas pueden ser clasificadas de diversas maneras. La clasificacin ms general las clasifica como # (alfa! beta! gamma y delta)! $ y C. %tra clasificacin! la cual es utili&ada principalmente para fibras sensoriales musculares! las clasifica en fibras tipo 'a y 'b! ''! ''' y '(. 'ndependientemente del tipo de fibra nerviosa! la generacin y la conduccin del potencial de accin tienen los mismos principios. La generacin del potencial de accin es debida a un potencial electrotnico producido ya sea por actividad sinptica o por el est mulo aplicado directamente sobre la terminal nerviosa! libre en muchos casos! o asociada a una estructura con caracter sticas espec ficas. Este potencial electrotnico activa canales inicos operados por volta)e generando corrientes catinicas entrantes y salientes *ue se propagan a travs y a lo largo de la membrana (axolema) y de los l *uidos intersticial e intracelular (axoplasma). Los responsables de las corrientes inicas son canales de sodio y de potasio operados por volta)e *ue se activan de manera secuencial! produciendo corrientes inicas *ue dan lugar al cambio transitorio del potencial de membrana conocido como potencial de accin! el cual una ve& producido! con caracter sticas todo o nada! se propaga a lo largo de la fibra nerviosa activando automticamente a los canales inicos! influidos por el campo elctrico del mismo potencial de accin. El potencial de accin es conducido tanto activamente como pasivamente! la conduccin pasiva se reali&a en segmentos de membrana *ue carecen de canales inicos operados por volta)e! en la conduccin activa intervienen los canales inicos. Cuando un nervio es dispuesto sobre electrodos de registro y se aplica un est mulo de magnitud suficiente! es posible registrar la suma (por sumacin espacial) de los potenciales de accin de todas las fibras *ue lo constituyen (potencial de accin compuesto). El registro obtenido de esta manera (electroneurograma) muestra diversos componentes *ue corresponden a los diferentes tipos de fibras *ue constituyen al nervio

y *ue son separados en base al est mulo umbral y en base a la latencia relativa (debido a su diferente velocidad de conduccin) con *ue aparecen. #dems de investigar el tipo de fibras *ue constituyen al nervio! este modelo es +til para ilustrar conceptos fisiolgicos relacionados con las propiedades de excitabilidad de las fibras nerviosas y de otros te)idos excitables! investigar el efecto de frmacos y xenobiticos sobre la conduccin nerviosa! estudios sobre regeneracin y enfermedades degenerativas (desmielini&antes)! etc. OBJETIVOS ,) -eterminar el est mulo umbral para diferentes poblaciones de fibras nerviosas. .) 'nvestigar el est mulo mximo para una poblacin de fibras nerviosas. /) 0eclutar espacialmente diferentes tipos de fibras nerviosas. 1) -eterminar la velocidad de conduccin de diferentes tipos de fibras nerviosas. 2) -eterminar los parmetros de excitabilidad de reobase y cronaxia para un tipo de fibras nerviosas. 3) %bservar el efecto de los anestsicos locales (xiloca na) sobre la conduccin nerviosa. MATERIAL Y METODOS Material y equi ! 4aterial biolgico5 0ana (aun*ue tambin pueden emplearse otras especies como la rata o el gato Material. ,) 'nstrumental de diseccin y disectores de vidrio. Es importante contar con pin&as y ti)eras finas (aun*ue no indispensable) .) Cmara para nervio! de preferencia de lucita /) Estimulador 1) %sciloscopio e*uipado con amplificador #C6-C. 7ueden utili&arse amplificadores acoplados a convertidores analgico6digital si se cuenta con tal e*uipo 2) 4icroscopio estereoscpico (puede ser suficiente una lupa). S!lu"i!#e$. ,) 0inger rana. (puede ser suficiente solucin salina isotnica) .) 8olucin de 9iloca na al .:. 1% O&te#"i'# (el #er)i! "i*ti"! (e ra#a. La rana es sacrificada por decapitacin! en seguida se destruye la mdula espinal! utili&ando para ello un estilete. Esta +ltima maniobra es con el fin de evitar los refle)os motores medulares durante la diseccin del nervio. 8e abre cavidad abdominal hasta visuali&ar la pared posterior! donde podrn distinguirse la columna vertebral y las +ltimas ra ces nerviosas *ue emergen de ella! y de las cuales se origina el nervio citico. 8e procede a la diseccin del nervio citico! desde su origen en la mdula espinal hasta el tobillo (figura ,#;<). El nervio se refiere con un tro&o de hilo en su extremo proximal! se corta y se diseca hasta su emergencia hacia la parte posterior! donde se hace un orificio para poder pasarlo hacia la parte posterior! se voltea a la rana y se prosigue con la diseccin del nervio citico hasta la altura de la rodilla! donde se divide en dos ramas principales! ambas pueden ser disecadas! o bien optar por una de ellas! siguiendo su trayecto hasta la altura del pie de la rana. Es conveniente obtener la mayor longitud posible del nervio!

*ue en ranas de mediano tama=o sobrepasa los 3> mm. 8e recomienda manipular al nervio con disectores de vidrio! evitando al mximo tocarlo con metales. ?na ve& separado el nervio es conveniente retirar restos de vasos sangu neos y el te)ido conectivo extraneural con el fin de evitar contactos deficientes con los electrodos de registro.

AA

+i,ura 1. 8ecuencia de fotograf as *ue ilustra la obtencin del nervio citico de la rana. A- vista de la parte inferior del cuerpo de la rana despus de haber retirado las v sceras abdominales@ B- #cercamiento *ue ilustra las +ltimas ra ces nerviosas! donde se origina el nervio citico@ C- lustracin de la manera como se refiere el nervio citico para su diseccin@ D- ilustracin de la pared posterior de la cavidad abdominal con el nervio citico referido@ E- ilustracin del nervio citico disecado hasta la altura de la rodilla@ +en este caso se ha seleccionado el nervio tibial! cuya diseccin se contin+a hasta el tobillo ./%. 0% M!#ta1e (e la re ara"i'# e# la "*2ara ara #er)i!. ?na ve& obtenido el nervio! se coloca sobre los electrodos dispuestos en la cmara! cuidando de *ue estos se encuentren limpios (Aigura . #;$). 8e vierte un poco de 0inger o solucin salina sobre el fondo de la cmara y en seguida se sella con la tapa (aplicando un poco de vaselina). El sello de la cmara es importante para *ue el nervio se mantenga h+medo durante todo el curso de la prctica. 3% Pr!"e(i2ie#t! ara la e$ti2ula"i'# y re,i$tr!. ?na ve& *ue se ha montado el nervio citico en la cmara para nervio! se procede a conectar los electrodos para estimulacin y para registro (Aigura .#;-). Los electrodos para estimulacin se conectan al extremo proximal (ms grueso) del nervio y los electrodos para registro se conectan al extremo distal (ms delgado).

C
o

u e

+i,ura 0. Aotograf as *ue ilustran las caracter sticas de la cmara para nervio y su disposicin para el est mulo del nervio y registro del electroneurograma. A- cmara de lucita y la placa para sellarla despus de colocar el nervio@ B y C- nervio montado sobre los electrodos de est mulo y registro@ D- dispositivo para la estimulacin y el registro (eestimulador@ u5 unidad aisladora de est mulos y !- oscilocopio). RE/ISTRO DE DATOS 1. Deter2i#a"i'# (el e$t42ul! u2&ral y el e$t42ul! 2*5i2!. 8e selecciona un est mulo cuya duracin sea de >.>, ms. 8e selecciona la escala de la base de tiempo del osciloscopio en >.2 ms6divisin. 8e incrementa de manera gradual la amplitud del est mulo hasta obtener la respuesta m nima observable (en el caso de utili&ar un osciloscopio la escala de la amplitud para esta maniobra debe de ser de >.2 a , mv6divisin). Cuando se obtenga el est mulo umbral se cambia la polaridad del est mulo para seleccionar el tipo de corriente (andica o catdica) ms adecuada a utili&ar. En seguida se aplican est mulos de amplitud creciente y se miden las amplitudes de las respuestas obtenidas (podr ser necesario modificar la escala de la amplitud en el osciloscopio). Con estos resultados construya una grfica5 amplitud del est mulo versus amplitud de la respuesta. Con esta grfica se ilustran los conceptos de est mulo umbral! est mulo mximo! subumbral! y supraumbral. Bota5 cuando la magnitud del est mulo es suficientemente grande aparecern varios componentes (distinguidos con latencias diferentes) en nuestro registro. 8e recomienda hacer el anlisis en el primer componente! el cual corresponde a la poblacin de fibras ms rpidas. -escriba sus observaciones en la ho)a de resultados 0. Deter2i#a"i'# (e l!$ ar*2etr!$ (e re!&a$e y "r!#a5ia. Con el componente *ue aparece primero. 8e selecciona un est mulo con 2 ms de duracin y se busca la amplitud del est mulo *ue nos dar la respuesta m nima (est mulo umbral)! en seguida se reduce gradualmente la duracin del est mulo y se busca la amplitud necesaria para la respuesta umbral. -e esta manera se obtienen varios puntos. Con estos datos construya una grfica5 duracin del est mulo versus amplitud del est mulo. En esta grfica (curva de excitabilidad) se anali&an los conceptos de reobase! cronaxia y est mulos subumbrales y supraumbrales. -escriba sus observaciones en la ho)a de resultados.

3. Deter2i#a"i'# (e la )el!"i(a( (e "!#(u""i'#. 8e aplica un est mulo mximo de corta duracin y se selecciona el primer componente del registro para la determinacin de este parmetro. 8e aplican est mulos mximos variando la distancia entre los electrodos de estimulacin y los electrodos de registro (los electrodos de estimulacin pueden irse acercando gradualmente a los electrodos de registro o viceversa. 8e construye una grfica5 distancia entre electrodos versus latencia. En esta grfica se calcula la velocidad de conduccin y se demuestra adems *ue esta es constante a lo largo de la fibra nerviosa. 6. I(e#ti7i"a"i'# (el ti ! (e 7i&ra$ e# &a$e a $u )el!"i(a( (e "!#(u""i'#. Con la escala de la base de tiempo del osciloscopio seleccionada en ,.> ms6divisin seleccionado un est mulo de duracin de >.>2 ms se procede a ir incrementando gradualmente su amplitud hasta observar el mayor n+mero de componentes posibles! se mide la latencia de cada uno de ellos y se calcula su velocidad de conduccin. Esta maniobra ilustrar (en base a su velocidad de conduccin) los principales grupos *ue constituyen el nervio citico de la rana. Calcule las diferentes velocidades de conduccin y pase los datos a la ho)a de resultados. 8. E7e"t! (e l!$ a#e$t9$i"!$ l!"ale$ $!&re la "!#(u""i'# #er)i!$a. Ainalmente! se procede a colocar un tro&o de algodn impregnado con xiloca na al .: entre los electrodos de registro y los de estimulacin (se recomienda colocarlo en la parte media del nervio). 8e selecciona un est mulo mximo y se estimula repetitivamente con una frecuencia de >., C&! midiendo la amplitud del potencial de accin compuesto cada minuto hasta la desaparicin de la respuesta. 8e grafica el tiempo versus la amplitud de la respuesta! esta grfica nos ilustrar el curso temporal del blo*ueo con este anestsico local. -espus de haberse obtenido el blo*ueo completo! el nervio se retira de la cmara y se coloca en un vaso de precipitado conteniendo un volumen suficiente de 0inger o solucin salina! de)ndolo unos 2 minutos! tiempo despus del cual se retira y se vuelve a colocar sobre la cmara de registro. 8e vuelve a estimular y se observar la recuperacin de la respuesta! lo cual ilustra el efecto reversible del blo*ueo con la xiloca na. RESULTADOS -escriba y discuta las observaciones reali&adas y enumere las conclusiones correspondientes a cada ob)etivo.

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