Micro Biolog I A

UNIVERSIDAD DE COLIMA
DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN MEDIA SUPERIOR
MANUAL DE PRCTICAS DE MICROBIOLOGA
Elaborado por: Q. .B. M!"#$a Al$ara% M&"'&(a Aprobado por la A$ad)*#a E+,a,al d) M#$rob#olo'(a: M.V.-. Ed&ardo A'&#lar Torr)+ M.V.-. G&+,a.o Valp&)+,a V)'a Q B. Mar(a M)r$)d)+ S&/r)% Bra.o Q B. Pa,r#$#a Ed0#'#+ Valladar)+ C)l#+ S&p)r.#+ado por: L#$da. La&ra Ara$)l# 1#*2")% Cob#/"
AGOSTO DEL 3445
1USTI ICACIN
El presente trabajo se elabor con la finalidad de proporcionar un material ordenado y de fcil acceso al trabajo acadmico el cual se complementa con la actividad cientfica en el laboratorio. Actualmente no se encuentra un manual de prcticas de microbiologa en el nivel medio superior dentro de la pgina de la Universidad de Colima ni en bachilleratos ue tengan el rea !umico "ilogo o un rea en com#n en donde se contemple la asignatura de microbiologa general en el nivel medio superior. $a intencin de este manual es satisfacer las necesidades del docente en los aspectos tericos llevados en el aula con la actividad cientfica desarrollada en el laboratorio de tal forma ue se nos facilite el trabajo ordenado y uniforme en todos los bachilleratos. El manual consta de uince prcticas y fue elaborado tomando en cuenta las referencias bibliogrficas ue marca el programa de educacin media superior de la Universidad de colima para la asignatura de %icrobiologa. $a elaboracin del manual se reali& en varias etapas mediante la recopilacin de prcticas. Cada prctica inicia con el ttulo en la parte central el cual se seleccion de acuerdo a la dosificacin del programa por semana. El objetivo hace referencia al aspecto significativo ue se pretende ue los alumnos logren al final del e'perimento. $a introduccin es la parte terica de cada una de las prcticas( fue tomada de diversas referencias bibliogrficas. En la parte e'perimental el procedimiento se tom de diversos manuales de otras Universidades y de la misma Universidad de Colima. El cuestionario en el ue el alumno demuestra su aprovechamiento logrado al final de la secuencia de aprendi&aje se elabor basado
en el aspecto introductorio y resultados e'perimentales ue se esperan de cada prctica. As mismo se complementa con observaciones ue el alumno reali&ar mediante dibujos o es uemas y finali&ar con conclusiones personales del mismo.
INDICE DE PRCTICAS
)gina Pr/$,#$a No 6 Empacado del material y esterili&acin por calor seco.............................................................................. Pr/$,#$a "o 3 Pr/$,#$a No 7 ,Pr/$,#$a No 8 )reparacin de medios de cultivo ,Esterili&acin por calor h#medo )reparacin de medios de cultivo +lidos........................................................................................ *
$ uidos....................................................................................... Pr/$,#$a No 9 +embrado en placa de microorganismos del medio ambiente..................................................................... Pr/$,#$a No : Aislamiento de /ongos mediante el mtodo e'tensin en placa.......................................................... Pr/$,#$a No ; 0, Aislamiento de bacterias mediante el mtodo sembrado en placa por estras........................................ Pr/$,#$a No < 01 %anejo y uso del microscopio ,.
ptico Compuesto22222222222222222222
4 Pr/$,#$a No 5 Pr/$,#$a No 64 Pr/$,#$a No 66 Pr/$,#$a No 63 Pr/$,#$a No 67 3incin de la cpsula 45 4, 47 3inciones 3incin de 3incin cido8Alcohol 49 Efecto de la presin osmtica sobre la viabilidad y el crecimiento de los microorganismos.................................. Pr/$,#$a No 68 mortal en microorganismos....................................................... Pr/$,#$a No 69 ;nhibidores 1. bacterianos.............................................................. 14 1:eterminacin del tiempo y punto trmico
bacteriana..................................................
selectivas..................................................................... 6ram........................................................................ resistente.................................................
RECOMENDACIONES GENERALES
-.8$a hora de entrada tendr -5 minutos de tolerancia( despus de este tiempo( no se permitir al acceso al laboratorio ,.8Al entrar al laboratorio( el alumno deber ponerse la bata y abotonarla completamente( slo podr ste. 0.8 $as mesas debern estar siempre limpias y desocupadas( las mochilas debern ser colocadas en los cajones de las mesas de trabajo. 4.8 <o comer ni fumar en el laboratorio( no introducirse ning#n objeto a la boca. uitrsela al salir de
1.8 =ecogerse el pelo para efectuar el trabajo de laboratorio. 7.8 $impiar y desinfectar el rea de trabajo antes y despus de usarla. *.8 <o pasear entre las mesas del laboratorio( el trabajo deber efectuarse sentado y en su e uipo de trabajo. ..8/ablar slo lo necesario con los compa>eros. 9.8 :as antes de iniciar la prctica lea cuidadosamente ue se va a reali&ar( si no entiende pregunte al profesor. -5.8 +i hay necesidad de llevar material biolgico para la reali&acin de la prctica( es necesario conseguirlo de lo contrario la prctica se suspender para todo el e uipo. --.8 El asa utili&ada para el cultivo de microorganismos deber esterili&arse en la flama del mechero( antes y despus de su uso. -,.8;nforme al profesor de cual uier accidente ue ocurra. -0.8En caso de derramar material profesor. -4.8 3odo el material colocarse en el sitio indicado por el profesor. -1.8Eti uete todo el material datos? e uipo( grupo( fecha( nombre del alumno. -7.8 :espus de la incubacin es necesario la esterili&acin del material para eliminar microorganismos da>o a nuestra salud. ue pudieran hacernos ue va a incubar con los siguientes nombre del material e iniciales del ue se va a incubar o desechar( debe ue contenga microorganismos( c#bralo con fenol o ben&al y deje actuar die& minutos y de aviso al ue es lo
-*.8 $vese las manos con agua y jabn antes de salir del laboratorio. -..8 Es obligacin de cada e uipo entregar todo el material limpio.
RMULA = PREPARACIN DE REACTIVOS USADOS EN LAS DI ERENTES PRCTICAS DE ESTE CURSO

6.> SOLUCIN DE AGUA O?IGENADA AL 64@ )=E)A=AC;@< )reparar antes de usarse. Colocar - ml de agua o'igenada en 9 ml de agua destilada 3.> COLORANTE DE A-UL DE METILENO AL 9@ )=E)A=AC;@<
7 A&ul de metileno 1.5 gr Agua destilada -55 ml 7.> REACTIVOS DE LA TACNICA DE GRAM AA CB$B=A<3E C=;+3A$ C;B$E3A D@=%U$A? Cristal violeta ,.5 gr Etanol al 91E ml B'alato de amonio 5.. gr Agua destilada .5 ml )=E)A=AC;@<? -.8 :isolver el cristal violeta en el etanol ,.8 :isolver el o'alato en el agua 0.8 %e&clar las dos soluciones "A +B$UC;B< :E $U6B$ DB=%U$A Foduro de potasio -5.5 gr Agua destilada ,5.5 ml Fodo metlico gr Etanol( aforar a -55.5ml )=E)A=AC;@<? -.8 :isolver el yoduro de potasio en el agua ,.8 Agregar el yodo metlico y disolver 0. Aforar a -55 ml con etanol CA +B$UC;@< :E A$CB/B$ ACE3B<A DB=%U$A Acetona volumen Etanol al 91E vol#menes :A CB$B=A<3E +AD=A<;<A DB=%U$A +afranina 5.1 gr
,5
1.5
8 Agua destilada -55.5 ml )=E)A=AC;@< :isolver la safranina en apro'imadamente ,5 ml de agua( despus aforara a -55 ml con ms agua. 8.> REACTIVOS DE LA TACNICA DE -IEBL> NEELSEN AA CB$B=A<3E DUC+;<A DE<;CA:A DB=%U$A? Ducsina bsica 1.5 gr Denol ,1.5 grs Etanol al 91E 15 ml Agua destilada aforar a 155 ml )=E)A=AC;@< -.8 Colocar el fenol en -55 ml de agua destilada y calentar en ba>o a ebullicin ,.8 A>adir la fucsina bsica y disolver 0.8 A>adir el etanol y me&clar 4.8 Aforar la solucin a 155 ml con agua destilada "A +B$UC;@< :E A$CB/B$ GC;:B DB=%U$A Gcido clorhdrico 0.5 ml Etanol al 91 -55.5 ml )=E)A=AC;@< Adicionar el cido clorhdrico al etanol( lentamente y agitando CA CB$B=A<3E AHU$ :E %E3;$E<B DB=%U$A A&ul de metileno 1.5 gr Agua destilada -55.5 ml 9.> ME-CLA CRMICA :icromato de potasio ,5.5 gr Gcido sulf#rico concentrado ,5.5 ml. Agua destilada ,15.5 ml.
EMPACADO DEL MATERIAL = ESTERILI-ACIN POR CALOR SECO

Pr/$,#$a No 6 <ombre :el Alumno?IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII+emestreIIIIII 6rupoIIIIII <ombre del titularIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIDechaIIIIIIIIIIIIIIIIIIII <ombre del )rofr. de $aboratorioIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Calif?IIIIIIIIII
OB1ETIVO?
El alumno aprender el procedimiento para empacar diversos materiales de uso en microbiologa as como el procedimiento de la esterili&acin por calor seco de estos.
SUSTANCIAS MATERIAL
:etergente E'tran %atraces Agua destilada de ensaye /orno a -*5JC 3ermmetro petri estra&a
QUIMICAS
3ubos )ipetas Cajas de )apel Algodn
Escobillones
INTRODUCCION.
E%)ACA:B :E$ %A3E=;A$ Antes de iniciar un empa ue del material ue se desea esterili&ar( es necesario ue todas las prcticas ue se realicen estn en condiciones de esterilidad y se debe( en primer lugar( limpiar el rea de trabajo con alguna sustancia desinfectante y encender el mechero. +e emplearn distintos agentes germicidas y desinfectantes Ksoluciones de hipoclorito de sodio( cloro'ilenol( formaldehdo( etc.A para desinfectar superficies. El material a esterili&ar se deber de empacar correctamente con papel estra&a Una de las ra&ones de la importancia del papel en nuestra vida cotidiana es la enorme cantidad de usos ue se le pueden dar a este producto.
10 :e la misma manera( el papel puede adaptarse a las diferentes utilidades ue se vayan a reali&ar llegando a contabili&arse hasta 41* variedades diferentes de papel. $as variedades dependen de una serie de caractersticas fsicas ue hacen ue el papel se pueda adaptar a diferentes usos como? ;mpedir el ingreso de microorganismos al interior( +ellar en forma completa para evitar contaminacin( +oportar la traccin y manipulacin habitual sin sufrir deterioro y hacer permeable al mtodo de esterili&acin seleccionado. 3odo esto se logra Empacando en primer lugar en campo de algodn( y posteriormente en empa ue mi'to o en polipropileno de acuerdo con el tama>o del material.
ESTERILI-ACIN POR CALOR SECO $a muerte microbiana se produce por una esterili&acin( ya sea como consecuencia de mecanismos de transferencia de energa( adems de la o'idacin. En la )+,)r#l#%a$#!" por Calor +)$o e'iste una destruccin de los microorganismos o'idando sus constituyentes umicos( desnaturali&ando las protenas y los cidos nucleicos de las clulas as como fragmentando las membranas celulares. )ara materiales ue deben permanecer secos como ciertos instrumentos de vidrio de laboratorio tales como? cajas de petri( pipetas( as como aceites( polvos K por ser impermeables al vaporA( los materiales ue no se pueden esterili&ar por calor seco son? %aterial te'til Kalgodn( sedas( lino( etc.A( 6omas y %ateriales sintticos 3odo material ue se altere a la temperatura de trabajo se dispone de hornos elctricos por los ue circula aire caliente( en vista Lde ue el calor es menos efica& en materiales secos( se acostumbra a aplicar una temperatura de -75JC a -*5JC durante una hora o ms. )ara materiales de vidrio de laboratorio es suficiente una e'posicin de dos horas de duracin a -75JC K 0,5 JDA para ue uede esterili&ado. Btras formas #tiles de calor seco incluyen incineracin para objetos ue deben ser destruidos y flameados por pasaje de agujas o pe ue>os instrumentos a travs de la llama de un mechero bunsen
PROCEDIMIENTO
IC EMPACADO DEL MATERIAL l.8 $ava el material de laboratorio( principalmente la cristalera con detergente E'tran o AlMo' KDcilmente se contamina con esporas difciles de eliminarA enjuaga con abundante agua de la llave y en seguida con agua destilada. ,.8 +ecar el material utili&ando papel absorbente para acelerar el secado 0.8Empaca el material correctamente AA CANA+ :E )E3=; Corta el papel estra&a( en forma de rectngulos adecuados para la cantidad de , a 0 cajas. Colcalas en la parte central y Envulvelas seg#n te indi ue tu profesor.?+e toman los e'tremos de )apel y se unen ( +e hace un
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11 nuevo doble& recargando ligeramente en la caja para marcarlo( $os e'tremos se doblan en forma triangular .Fa en forma triangular se doblan hacia atrs uedando listas para esterili&ar. "A );)E3A+ ;ntroduce una pe ue>a porcin de algodn en el cuello de la pipeta( procurando ue uede lo suficientemente apretada. Con tiras de papel de 0 cm de ancho envulvelas( comen&ando por la punta y en forma de espiral gira hacia arriba hasta el final de la pipeta. CA 3U"B+ :E E<+AFE. +e toma el tubo con la mano i& uierda y con la derecha el tapn de algodn. Coloca algodn en la boca del tubo a -O1 parte de la longitud del mismo procurando ue uede bien apretado( depostalos en recipientes adecuados( tpalos con papel estra&a y talos. :A %A3=ACE+. 3apa el cuello del matra& con algodn( lo suficientemente apretado para evitar ue se destape K se tapa en la misma forma ue el tuboA. Como proteccin coloca un gorrito de papel estra&a y talo con cinta. EA %A3E=;A$ %E3G$;CB El asa de platino( tijeras( bistur( material empacarlo para su esterili&acin. uir#rgico no es necesario
IIC ESTERILI-ACIN POR CALOR SECO -.8$as normas de )rocedimiento de la ;nstitucin establecern las condiciones de trabajo seg#n la carga( volumen( peso( resistencia trmica del material. Es imprescindible respetar los parmetros obtenidos en la validacin del procedimiento. $a temperatura de esterili&acin por Calor +eco deber estar entre -75JC a -*5 PC. y el tiempo de aplicacin ser de una hora o ms. ,.8 El material a esterili&ar se deber cargar con el esterili&ador fro( teniendo en cuenta las siguientes recomendaciones? Cada unidad deber uedar separada de las vecinas $os materiales no debern estar en contacto con las paredes( piso y techo del esterili&ador $a carga del esterili&ador ser homognea y no deber superar el .5E de la capacidad total de la cmara 0.8Colocar el material dentro del Esterili&ador. Encender el Esterili&ador( Cerificar ue los instrumentos de control de ciclo( tiempo K l horaA y temperaturaK -*5JCA se encuentren en la posicin correcta. Esperar hasta ue los instrumentos de medicin alcancen la temperatura seleccionada para el ciclo
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12 4.8 Cuando se alcance la temperatura seleccionada( se comen&ar a descontar el tiempo de esterili&acin. Cumplido el tiempo de e'posicin se apagar el Esterili&ador $a descarga del Esterili&ador se efectuar una ve& ue el material se haya enfriado. 1.8:urante el ciclo de Esterili&acin no deber abrirse la puerta del Esterili&ador por ue ello implicara abortar el ciclo( debiendo en este caso recomen&arlo( adems de ue el cambio de temperatura rompera la cristalera 7.8 una ve& alcan&ada la temperatura de -75QC en el horno con aire caliente coloca todo el material ue se empac y toma el tiempo de , horas para su esterili&acin
CUESTIONARIO?
-.8 )or u antes de una esterili&acin es necesario lavar y desinfectar el materialR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8 SEs necesario un secado del material en el horno antes del empacado con papel estra&aR S)or ueR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8 !u finalidad tiene el empacado antes de la esterili&acinR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8 )uede ser utili&ado otro tipo de papel ue el de estra&aR S)or uR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8 !u finalidad tienen los tapones de algodn ue se colocan en los e'tremos de las pipetas y de los %atraces Erlen %eyerIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7.8 !u desventaja tiene el utili&ar la esterili&acin por calor seco en este laboratorioR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
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13 *.8 Cmo act#a la esterili&acin por calor seco en los microorganismosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ..8 A u temperatura y cunto tiempo tendrs ue emplear para esterili&ar por calor seco el material de laboratorio para asegurar la destruccin de microorganismos patgenos y esporasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
OBSERVACIONES
=eali&a los dibujos correspondientes del procedimiento de empacado ue reali&aste para cada tipo de material de laboratorio. As mismo dibuja el horno en donde reali&aste la esterili&acin por calor seco.
CONCLUSIONES
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
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14 IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
ESTERILI-ACIN POR CALOR BDMEDO

Pr/$,#$a No 3 <ombre :el Alumno?IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII+emestreIIIIII 6rupoIIIIII <ombre del titularIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIDechaIIIIIIIIIIIIIIIIIIII <ombre del )rofr. de $aboratorioIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Calif?IIIIIIIIIIIII
OB1ETIVO?
El alumno conocer y aplicar el procedimiento de esterili&acin por calor h#medo( as como las ventajas del procedimiento.
MATERIAL SUSTANCIAS
=eloj la llave Autoclave u olla de presin 0 +oporte universal , mechero fischer %aterial de cristalera limpio( seco y empacado Agua de E'tran AlMo'
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15 Asa de platino INTRODUCCIN AGENTES SICOS ANTIMICROBIANOS. AC CALOR BDMEDO.8 $a temperatura elevada( combinada con una humedad elevada( es uno de los mtodos ms efectivos para matar microorganismos. El calor h#medo mata a los microorganismos coagulando sus protenas. Es mucho ms rpido y efectivo ue el calor seco. El vapor a presin proporciona temperaturas por encima de las ue se pueden obtener al hervir. 3iene la ventaja de un calentamiento rpido( as como penetracin rpida y abundante humedad.. El aparato a esterili&ar ue utili&a vapor de agua a presin regulada se denomina autoclave. Consta de una cmara de doble pared ue se llena de vapor saturado libre de aire y se mantiene a la temperatura indicada y a la presin establecida durante un periodo de tiempo determinado. 6eneralmente el autoclave funciona a una presin de -1 librasO pulgada cuadrada a -,-JC K ,49JDA. El tiempo de funcionamiento para lograr la esterilidad depende de la naturale&a del material ue se va a esterili&ar( del tipo de envase y del volumen del material. Una temperatura de l55JC es la suficiente para matar a todas las formas bacterianas en , o 0 minutos( e'cepto a las esporas( para matar a estas se re uiere una temperatura de -,-JC durante -1 minutos y a una presin de -1 libras. Este mtodo es adecuado para esterili&ar aparatos ue tienen hule( jeringas ue contienen metal( para medios de cultivo ue contienen un a&#car especial de'trosa. El autoclave se puede sustituir por la olla de presin. BC CALOR SECO.> En este tipo de esterili&acin e'iste una destruccin de los microorganismos o'idando sus constituyentes umicos( desnaturali&ando las protenas y los cidos nucleicos de las clulas as como fragmentando las membranas celulares. )ara materiales ue deben permanecer secos como ciertos instrumentos de vidrio de laboratorio tales como? cajas de petri( pipetas( as como aceites( polvos K por ser impermeables al vaporA( los materiales ue no se pueden esterili&ar por calor seco son? %aterial te'til Kalgodn( sedas( lino( etc.A( 6omas y %ateriales sintticos 3odo material ue se altere a la temperatura de trabajo se dispone de hornos elctricos por los ue circula aire caliente( en vista Lde ue el calor es menos efica& en materiales secos( se acostumbra a aplicar una temperatura de -75JC a -*5JC durante una hora o ms. )ara materiales de vidrio de laboratorio es suficiente una e'posicin de dos horas de duracin a -75JC K 0,5 JDA para ue uede esterili&ado. Btras formas #tiles de calor seco incluyen incineracin para objetos ue deben ser destruidos y flameados por pasaje de agujas o pe ue>os instrumentos a travs de la llama de un mechero bunsen
PROCEDIMIENTO
CC ESTERILI-ACIN POR CALOR BDMEDO E.apor a pr)+#!"C
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16 -.8 $ava el material ue te proporcione tu profesor con me&clas adecuadas como E'tran( me&cla Crmica con concentraciones adecuadas tomando en cuenta lo sucio del material( seca en estufa o en forma manual con papel absorbente y empcalo. 3enlo listo para su esterili&acin. ,.8 Coloca el agua necesaria en la autoclave u olla de presin hasta la marca e introduce unas gradillas metlicas ue servirn de base al material a esterili&ar. Coloca el material a esterili&ar dentro de la autoclave u olla de presin( evitando ue el material to ue las paredes. 0.8 Cierra la autoclave u olla de presin( cuidando de dejar abierta la vlvula de salida de vapor ue ayudar a e'pulsar el aire contenido dentro y ue ste es despla&ado por el vapor ue se produce. .8 si el aire no fue eliminado totalmente de la autoclave( el manmetro aumentar a -1 libras. )ero la temperatura no habr alcan&ado los -,lJC. )or esto se debe medir el tiempo cuando la temperatura llegue a l-,JC 4.8 Cierra la vlvula cuando el vapor sea continuo. $a temperatura de l51JC indica ue est libre de aire. Cigila el termmetro. Cuando vaya en -,5JC( mantenla durante -1 minutos para ue se efect#e la esterili&acin K-1 libras de presinA. 3ranscurrido este tiempo se corta la fuente de calor. 1.8:eja enfriar hasta ue el manmetro mar ue cero. Abre la vlvula de salida de vapor( para e'pulsar el vapor restante. Abre el autoclave y retira el material 7.8 +i el material no est en estado l uido la vlvula se puede abrir rpido a la salida de vapor( pero si est en estado l uido la rpida prdida de presin las hace hervir o bien saltar los tapones. )or lo tanto se espera unos minutos a ue se enfre perfectamente
CUESTIONARIO.
-.8 Cul material se puede esterili&ar por calor seco y cul no. S)or uR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8 !u tipo de material se puede esterili&ar por calor h#medoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8 A u condiciones de temperatura y presin se destruyen todas las formas vegetativasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8 A u condiciones de temperatura y presin se destruyen las esporasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
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17 1.8 Cules son las condiciones necesarias de tiempo y temperatura para esterili&ar por calor secoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7.8 Cules son las condiciones necesarias de tiempo y temperatura para esterili&ar por calor h#medoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII *.8Cmo act#a la esterili&acin por calor seco en los microorganismosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ..8 Cmo act#a la esterili&acin por calor h#medo en los microorganismosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 9.8 !u tipo de esterili&acin es ms recomendable y por uR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
OBSERVACIONES?
=eali&a es uemas y dibujos correspondientes a la esterili&acin por calor h#medo ue reali&aste en la prctica
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CONCLUSIONES?
________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS

Pr/$,#$a No 7 <ombre :el Alumno?IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII+emestreIIIIII 6rupoIIIIII <ombre del titularIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIDechaIIIIIIIIIIIIIIIIIIII <ombre del )rof. de $aboratorioIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Calif?IIIIIIIIIII
OB1ETIVO:
Adiestrar al alumno en la preparacin de diferentes medios de cultivo
MATERIAL SUSTANCIAS
4 %atra& Erlen %eyer de ,15 ml Agar nutritivo
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19 - "a>o mara 0 3ripies sangre , %echeros Disher %acconMey 0 3elas de asbesto +al8 Agar Agitador 4 Caso de precipitado de ,15 ml - Esptula - Cidrio de reloj Cajas de petri 3apones de algodn Autoclave u olla de presin )apel estra&a 3ubos de ensayo -7T-15 %iuller /inton Agar base Agar Agar8 %anitol8
INTRODUCCIN
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el ue crecen los microorganismos es el M)d#o d) C&l,#.o y el crecimiento de los microorganismos es el C&l,#.o.. )ara ue las bacterias cre&can adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son? temperatura( grado de humedad y presin de o'geno adecuado( as como un grado correcto de acide& o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar e'ento de todo microorganismo contaminante. $a mayora de las bacterias patgenas re uieren nutrientes complejos similares en composicin a los l uidos orgnicos del cuerpo humano. )or eso( la base de muchos medios de cultivo es una infusin de e'tractos de carne y )eptona a la ue se a>adirn otros ingredientes. El Agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enri uecimiento como hidratos de carbono( suero( sangre completa( bilis( etc. $os hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales? para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos ue ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se a>aden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. )or su aspecto fsico. $os medios de cultivo preparados pueden ser clasificados por su a+p)$,o en? ? $ uidos( +emislidos( +lidos. F por su &+o )": ;.8 %edios de cultivos bsicos ;;?I %edios de cultivos especiales como? mejorados( selectivos( diferenciales( de transporte.
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20 PROCEDIMIENTO: -8 )rimeramente se desinfecta el rea de trabajo con fenol al 1E o alcohol y se enciende el mechero PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS -.8 $eer las instrucciones del fabricante para cada medio de cultivo y pesar la cantidad necesaria seg#n el volumen re uerido. ,.8 Colocar el medio en un vaso de precipitado ue contenga el agua destilada en el volumen re uerido( agitar y calentar a ebullicin para disolver el Agar. En el #ltimo paso se debe tener cuidado ya ue el recipiente se calienta en e'ceso y el producto tiende a hervir y proyectarse( lo cual puede producir serias uemaduras. El Agar disuelto hace transparente al medio ue originalmente estaba turbio. )uede utili&arse un ba>o mara para aumentar la solubilidad. 0.8 +i se va a envasar en cajas de petri( es necesario conservar el medio en un matra& y esterili&arlo a -,-JC durante -1 minutos. Al terminar( es conveniente mantener el mechero encendido para formar un rea de esterilidad al momento del vaciado en las cajas de petri apro'imadamente de -1 ml. A ,5 ml :e Agar por caja procurando ue no se forman burbujas. 3apar la caja inmediatamente 4.8 +i se desea ue el Agar uede en tubos( entonces se esterili&ar el Agar directamente en ellos a -,-JC durante -1 minutos tapados con algodn( gasa y papel estra&a. +i desea ue solidifi uen inclinados( colocarlos en una superficie lisa inclinndolos en un ngulo de ,5 a 05 J sobre una varilla de vidrio. 1.8 . Para pr)parar )l A'ar ba+) Sa"'r) )+ ")$)+ar#o Ad#$#o"ar )" $o"d#$#o")+ d) a+)p+#a +a"'r) d)+F#br#"ada )+,2r#l )" $o"$)",ra$#!" F#"al d) 69@. D)+p&2+ d) la )+,)r#l#%a$#!" d)l A'ar ba+) M)%$lar $&#dado+a*)",) G po")r )" $aHa+ p),r# )+,2r#l)+.
AC VACIADO EN CA1AS DE PETRI 0.8 <o destapar las cajas de petri( sino hasta el momento ue vayan a ser utili&adas. Es conveniente colocarse un cubre bocas la persona ue va a reali&ar el vaciado y evitar hablar en todo momento para no contaminar el medio de cultivo. 4.8 Es conveniente mantener el mechero encendido y trabajar cerca del rea estril al momento del vaciado en las cajas de petri. $evantar la tapadera de la caja petri con la mano i& uierda ( sin soltarla y sin retirarla demasiado de la
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21 base de la misma caja mientras ue con la mano derecha tomar el matra& ue contiene el medio de cultivo y reali&ar el vaciado de apro'imadamente -1 ml. A ,5 ml de Agar por caja procurando ue no se forman burbujas( se procede a tapar la caja inmediatamente 1.8 +i se forman burbujas( tomar el mechero( flamear el medio de cultivo sobre la superficie de la caja de petri y de manera rpida. +e procede a tapar la caja. 7.8 Esperar a ue el medio solidifi ue( +e rotulan los medios de cultivo( anotando la fecha y con iniciales el tipo de medio de cultivo. +i las placas no se van a utili&ar el mismo da se sujetan con cinta y se colocan en el refrigerador de manera invertida para evitar ue el vapor condensado caiga sobre el medio de cultivo y lo pueda contaminar *.8 Cuando se vayan a utili&ar los medios de cultivo preparados( ser necesario secar las placas invertidas en estufa a 0* PC. Antes de reali&ar el sembrado de microorganismos.
CUESTIONARIO -.8 S!u es un medio de cultivoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8 !u es un cultivo de microorganismoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8 !u finalidad tiene utili&ar medios de cultivo slidosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8 Escribe el nombre de 1 medios de cultivo laboratorio de microbiologa. ue pueden ser empleados en el
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8 :e dnde es obtenido el e'tracto Agar8 Agar para la preparacin de medios de cultivosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII7.8 )or u es necesario esterili&ar la mesa entes de reali&ar el vaciado del medio de cultivo en las cajas de petriR
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22 IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII *.8)or u la base de muchos medios de cultivo es una infusin de e'tractos de carne y )eptonaR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII..8 Escribe la composicin umica para cada medio de cultivo ue utili&aste. Agar nutritivo %iuller /inton
Agar base sangre %acconMey
Agar
Agar8 %anitol8 +al8 Agar
OBSERVACIONES. :ibuja todos los pasos reali&ados en la preparacin de los medios de cultivo.
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CONCLUSIONES:
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO LQUIDOS

Pr/$,#$a No 8 <ombre :el Alumno?IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII+emestreIIIIII 6rupoIIIIIII <ombre del titularIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIDechaIIIIIIIIIIIIIIIIIIII <ombre del )rof. de $aboratorioIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Calif?IIIIIIIIIII
OB1ETIVO: El alumno aprender la tcnica del vaciado en placa del medio de cultivo preparado en la sesin anterior en cajas de petri ya esterili&adas adems preparar medios de cultivo l uido estril. MATERIAL 0 3elas de asbesto 0 3ripies o soportes Universales , %echeros Disher , Agitadores nutritivo , Casos de precipitado de ,15 ml triptona , Esptulas , Cidrio de reloj 3ubos de ensaye ,5 T ,55 mm 3apones de algodn Autoclave u olla de presin )apel estra&a E uipo para "a>o %ara SUSTANCIAS
%edio de cultivo para caldo %edio de cultivo para caldo Denol al 1E
INTRODUCCIN
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24 CLASI ICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO: )ara el aislamiento( estudio y clasificacin de los microorganismos( es necesario utili&ar un medio de cultivo en el ue dispongan de las sustancias orgnicas e inorgnicas necesarias indispensables para el normal desarrollo de su metabolismo. En estos medios( los microorganismos adems de poder multiplicarse( pueden manifestar caractersticas de crecimiento y propiedades bio umicasU aspectos de gran importancia para su clasificacin. Estos preparados estriles ue poseen los elementos necesarios para el desarrollo de un microorganismo( se denominan medios de cultivos y pueden dividirse por su? AA A+)EC3B? %edios l uidos. +e emplean fundamentalmente para?8 Cultivar los microorganismos y obtener grandes cantidades de los mismos o bien la produccin de metabolitos especficos $a multiplicacin bacteriana en los medios de cultivos l uidos se manifiesta generalmente por el enturbiamiento de steU.8 Estimular y promover la seleccin de alg#n o algunos microorganismos e impedir ue otros se multipli uen.8 ;dentificar al microorganismo estudiado mediante pruebas bio umicas. %edios semislidos.8 +e utili&an para identificaciones bio umicas y averiguar si el germen estudiado es mvil. $os medios semislidos tienen una consistencia blanda. %edios slidos.8 +e utili&an para obtener colonias aisladas de microorganismos. $os medios slidos constituyen la mayor parte de los medios de cultivo ue se emplean en %icrobiologa. ( En los medios de cultivos slidos la multiplicacin bacteriana se manifiesta por una formacin macroscpica denominada colonia bacteriana( ue es el resultado de la multiplicacin de una sola clula bacteriana. "A U+B ;.> M)d#o+ d) $&l,#.o+ b/+#$o+. +e caracteri&an por ser pobres en material nutritivo( de manera ue su uso es muy restringido( constituyen la base para la preparacin de otros medios. Como ejemplo pueden citarse el caldo peptonado y el Agar8Agar corriente. II:I M)d#o+ d) $&l,#.o+ )+p)$#al)+. Entre estos se encuentran? aA %edios mejorados. En general son los mismos medios bsicos a los ue se les agrega una sustancia enri uecedora como sangre( suero( etc. El uso de estos medios es universal y est orientado especialmente a obtener buen desarrollo de cual uier tipo de bacteria( se utili&an en primera instancia en el aislamiento bacteriano( ya sea a partir de otros cultivos o de productos patolgicos.$os medios de este tipo de uso ms frecuente son? Agar tripticasa8 sangre( caldo tripticasa( Agar chocolate( medio de %ueller8/inton.
bA %edios selectivos. +on medios ue contienen sustancias ue impiden o

limitan el crecimiento de algunas especies microbianas y permiten el desarrollo
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25 de otras. consiste en aislar un microorganismo de un sustrato ue contiene numerosas otras especies.+e incluyen en este grupo el agar cristal violeta para el aislamiento de bacterias 6ramK8A y el agar telurito de potasio para el aislamiento de bacterias 6ramKVA.
cA %edios de cultivos diferenciales . +e emplean para demostrar alguna

propiedad bio umica de la bacteria como degradacin de hidratos de carbono( protenas( hidrlisis de la urea( etc.( contienen indicadores de cido base( redo' o sustancias ue detectan cambios en el medio o en las caractersticas tpicas de las colonias el estudio en estos medios debe reali&arse empleando cepas bacterianas puras. E'isten numerosos medios de este tipo( de uso preferencial en la bioidentificacin de bacilos 6ramK8A ya ue ellos no tienen caractersticas muy distintivas en las colonias o cultivos en general. Entre los de uso ms corriente se encuentran? Agar fierro8triple8a&#car K3+; agar %edio de +;%( Caldo glucosado fosfatado( Coges8)rosMauer o del rojo de metilo( %edio agar8citrato de sodio K%edio de +immons8 %edio caldo urea( dA %edios de transporte. +irven para transportar los especimenes ue contienen a los microorganismos( del sitio de la toma del producto hasta el laboratorio donde va a efectuarse el estudio. Estos medios impiden ue se altere la proporcin original de la flora microbiana en los especimenes.
PROCEDIMIENTO:
BC PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO LQUIDOS J Pr)parar $aldo "&,r#,#.o G $aldo ,r#p,o"a -.8 $eer las instrucciones del fabricante y pesar la cantidad necesaria seg#n el volumen de medio de cultivo re uerido. ,.8 :isolver el medio en agua destilada agitando el recipiente 0.8 Envasar el volumen necesario en matraces( tubos u otros recipientes. )rocurar ue el volumen del medio no rebase la mitad de la capacidad del recipiente( pues de otra manera el medio se puede regar 4.8 3apar el recipiente con algodn( gasa y papel estra&a. 1.8 Esterili&ar en autoclave a -,-JC durante -1 minutos( a menos indi ue otra cosa. ue se
7.8 antes de usar el medio de cultivo( se debe someter a una prueba de esterilidad( para lo cual se debe meter a una estufa a 0*JC durante ,4 horas. El medio debe permanecer libre de crecimiento.
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26
CUESTIONARIO
-.> !u es un medio de cultivoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ________________________________________________________________________________ ,.8 !u tipo de nutrientes re uieren los microorganismos para poder crecer en un medio de cultivoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8 S Cmo nos podemos dar cuenta ue e'isti crecimiento de microorganismos en un medio l uidoR 4.8SCmo se manifiesta el crecimiento de los microorganismos en un medio de cultivo slidoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8SCul es el elemento principal del medio de cultivo ue favorece su solidificacinR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7.8 :e acuerdo a su uso S !u tipo de medios de cultivos podemos encontrar en el mercadoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII *.8 Escribe dos ejemplos de medios +)l)$,#.o+ encontrados en el laboratorio en donde puedan desarrollarse los microorganismos IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII .(. !u finalidad tiene guardar invertidos los medios de cultivo ya preparados en las cajas de petri en el refrigerador o en la estufa de incubacinR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 9.8 Escribe dos medios de cultivos ue nos permiten determinar alguna prueba bio umicaIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII I
OBSERVACIONES?
:ibuja todos los pasos del proceso de vaciado del Agar en cajas de petri esterili&adas
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CONCLUSIONES:IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII II
SEMBRADO EN PLACA DE MICROORGANISMOS DEL MEDIO AMBIENTE

Pr/$,#$a No 9 <ombre :el Alumno?IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII+emestreIIIIII 6rupoIIIIIII <ombre del titularIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIDechaIIIIIIIIIIIIIIIIIIII <ombre del )rofr. de $aboratorioIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Calif?IIIIIIIIIII
OB1ETIVOS
Bbservar la gran variedad de microorganismos presentes en el medio ambiente( determinando las diferentes morfologas de colonias ue se obtienen. $os efectos de un desinfectante por medio del crecimiento de colonias de bacterias en un medio de cultivo en cajas de )etri.
MATERIAL

0 cajas de )etri estriles preparadas con Agar nutritivo Caja de hisopos estriles +#" abr#r toallas de papel 0 cajas de petri estriles preparadas con Agar sangre. Cinta pegante %arcador permanente o lpi& de cera Un desinfectante con *5E de solucin de alcohol( -5E de una solucin blan ueadora ( jabn l uido E'tran o alMo'.
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INTRODUCCIN
$a poblacin microbiana e'istente en nuestro entorno es grande y compleja. Cientos de especies microbianas habitan normalmente en distintas partes de nuestro cuerpo( incluidas la boca( el tracto intestinal y la piel. Al nacer( los microbios inmediatamente empie&an a coloni&ar nuestros cuerpos( as como a casi todos los objetos del mundo. Ellos flotan alrededor hasta ue entran en contacto con una superficie ue ofre&ca comida y resguardo. +e encuentran ms frecuentemente en la oscuridad( en objetos h#medos ue a menudo entran en contacto con la comida( la suciedad o la vegetacin. $as superficies del ba>o( los cepillos para el cabello( los refrigeradores( los lavaplatos y las tablas de cocina tienen a menudo muchos microbios. $as manijas y las paredes tienen menos por ue son pobres en nutrientes y secos. Un estudio adecuado de microorganismos ue hay en estos hbitat re uiere tcnicas ue permitan conocer y ordenar la compleja poblacin mi'ta o cultivo mi'to( separndole en sus distintas especies como cultivos puros. Un cultivo puro consta de una poblacin de clulas derivadas todas ellas de una clula parental. $os microorganismos se cultivan en el laboratorio sobre materiales nutritivos denominados medios. +e dispone de una gran cantidad de medios y la clase ue se debe de utili&ar depende de muchos factores( uno de los cuales es la clase de microorganismos ue se va a cultivar. El material ue se inocula sobre el medio se denomina inculo mediante alguna tcnica Ksiembra por estra en placa o siembra en masa en placaA. :urante la incubacin a 0*?C ( las clulas microbianas individuales se reproducen tan rpidamente ue en un lapso de -. a ,4 horas producen masas visibles de clulas denominadas colonias. Una colonia es visible a simple vista. Cada colonia diferente es presumiblemente un cultivo puro de una sola clase de microorganismo. +i dos clulas microbianas procedentes del inculo original uedan muy cerca una de otra sobre el medio de Agar( la masa de clulas observables no ser un cultivo puro. $a mayora de los microbios en nuestro cuerpo y otras superficies son inofensivas( pero algunos son patgenos o causan enfermedad. )or esta ra&n( ueremos controlar el n#mero de microbios ue nos rodea. $a posibilidad de infectarnos aumenta con el n#mero de microbios en los objetos circundantes. )ero S u podemos hacer para reducir el n#mero de microbios en las superficies ue nos rodeanR
PROCEDIMIENTO
En esta actividad escogers un fomite Kcual uier objeto inanimado ue pueda causar enfermedad en los organismos por contener microorganismos como? la manija( el marco( el control remoto de la televisin( una monedaA. Este fomite ayudar a confirmar la presencia de microbios y los efectos de un desinfectante por medio del crecimiento de colonias de bacterias en un medio de cultivo en cajas de )etri.
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29 -. +i tienes el cabello largo( recgetelo para mantenerlo lejos de las cajas de )etri cuando ests trabajando. $ava tus manos. $impia t# rea de trabajo frotando suavemente( con la solucin desinfectante en una toalla de papel. +aca tus cajas de )etri pero no abras las cajas hasta ue se te indi ue. ,. Escoge un objeto del saln de laboratorio Kla manija( el marco( el control remoto de la televisin( una moneda( etc.A. 3oma una caja de )etri +#" abr#r y con t# lpi& de cera o marcador( divide la base de la caja en cuatro secciones iguales. Escribe el nombre del objeto al otro lado y designa las secciones de - hasta 4. Abre la caja de hisopos de algodn y escoge uno con cuidado para no tocar la punta. $impia t# objeto escogido con todos los lados de la punta del hisopo voltendolo y retorciendo el hisopo a medida ue lo mueves por la superficie del objeto. 0. Ahora abre la tapa de la caja y +&a.)*)",) ha& cuatro siembras sobre la superficie de la caja como se muestra en la ilustracin( empe&ando en la seccin designada W-W y continuando en el orden de las secciones( de manera ue la #ltima siembra est en la seccin 4. )resiona firme pero suavemente y no reti>as las siembras anteriores. 3us siembras slo deben dejar una impresin muy ligera en el Agar. Cierra la caja y sllala con dos peda&os de cinta. <o cubras la caja con cinta o no podrs verla bien. 4. :ivide una segunda caja de )etri en 4 secciones numeradas de - hasta 4 y desgnala KCo",rol.L $impia la *#,ad del objeto ue escogiste anteriormente con una toalla de papel humedecida con a'&a8solo frtala un par de veces M "o la r)+,r#)'&)+. Con un nuevo hisopo estril( toma muestra del rea limpiada. Abre la tapa de la segunda caja y ha& +UACE%E<3E 4 siembras en la superficie de la caja( siguiendo el orden de las secciones numeradas como lo hiciste previamente. Cierra la caja y sllala. 1. :ivide la tercera caja de )etri en 4 secciones numeradas y desgnalas con el nombre del d)+#"F)$,a",) ue escogiste Kpor ejemplo Wblan ueadorWA. Usa el desinfectante escogido para limpiar la o,ra *#,ad del objeto ue trabajaste antes. Con un nuevo hisopo estril( toma muestra del rea. =epite el proceso de sembrar la caja. Cirrala y sllala. 7. Esterili&a los hisopos usados con desinfectante y descrtalos. )on las cajas en un lugar apartado y djalas incubar a la temperatura de 0*JC durante ,4 a 4. horas. $impia tu rea de trabajo con la solucin desinfectante y lava tus manos. *.8 =epite todo el e'perimento utili&ando Cajas de cultivo con Agar sangre slo ue ahora selecciona otro o*#,) ue no hayas empleado
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30 *. :espus de ue hayan pasado dos das( mira las cajas de )etri iniciales. <o la abras. A la ve& e'amina las otras cajas de )etri sin abrirlas. Crea una tabla ue compare las cajas sembradas antes y despus de limpiar el objeto Kmira la tabla de ejemploA. Aseg#rate de indicar si los microbios crecieron en cada siembra. .. No,a: &" ad&l,o +&p)r.#+or d)b) Na$)r )+,) pa+o pr)F)r#bl)*)",). Cuidadosamente abre las cajas de )etri en un lavaplatos e in#ndalas con blan ueador o alcohol sin diluir. :jalas por una hora y enjugalas completamenteU colcalas en una bolsa plstica( amrrala y descrtala. Aseg#rate de no tocar la superficie de las cajas cuando las abras y lava tus manos cuidadosamente despus de manipularlas. $impia t# rea de trabajo con la solucin desinfectante.
CUESTIONARIO
-.8 !u es un cultivo puro de microorganismosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8 !u es in inculoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8 Dsicamente en un medio de cultivo de microorganismos cuando se dice ue no forma un cultivopuroR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8 !u tipo de tcnica empleaste para la siembra de microorganismosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8 SEn cul caja crecieron ms y ms grandes las coloniasR S)or u piensas esoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7.8SCmo es el patrn ue observas en el tama>o y cantidad de colonias en cada cajaR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII *.8 SCmo podemos controlar la contaminacin microbianaR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ..8 Completa en la siguiente tabla anotando ? en los espacios correspondientes a las divisiones reali&adas en donde hayan crecido los microorganismos AA %E:;B+ :E CU$3;CB CB< A6A= <U3=;3;CB
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Caja +iembra Crecimient o

, 0 4
Caja ,
, 0 4
Caja 0
, 0 4
"A%E:;B+ :E CU$3;CB CB< A6A= +A<6=E Caja +iembra Crecimient o

, 0 4
Caja ,
, 0 4
Caja 0
, 0 4
OBSERVACIONES? :ibuja todos los pasos empleados en el sembrado de

las cajas de petri con Agar nutritivo. F los resultados de las colonias bacterianas ue crecieron.
CONCLUSIONESIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII II
AISLAMIENTO DE BONGOS MEDIANTE EL METODO E?TENSIN EN PLACA

Pr/$,#$a No : <ombre :el Alumno?IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII+emestreIIIIII 6rupoIIIIIII <ombre del titularIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIDechaIIIIIIIIIIIIIIIIIIII <ombre del )rofr. de $aboratorioIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Calif?IIIIIIIIIII
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OB1ETIVO?
El alumno aislar actinomiceto del suelo mediante el mtodo e'tensin en placa utili&ando una varilla angular de vidrio MATERIAL MATERIAL BIOLGICO
- varilla de vidrio doblada %uestra de suelo , pipetas de - ml , caja con medio de cultivo estril C&apecM 1 tubos de ensayo , caja con medio estril de 6elosa glicerol e'tracto de levadura K66$A Asa bacteriolgico , caja con medio estril 6elosa peptona :e'trosa e'tracto de levadura K6):$A Alcohol al *5E
INTRODUCCION
Uno de los problemas ms frecuentes en %icrobiologa es el aislamiento de un cultivo puro de una especie bacteriana dada. A pesar de ue es muy difcil aislar una sola clula( e'isten tcnicas capaces de apro'imar este ideal En %icrobiologa( todas las manipulaciones deben ser llevadas a cabo de modo ue se impida cual uier tipo de contaminacin en el rea de trabajo. $os procedimientos utili&ados par conseguirlo se conocen con el nombre de tcnica asptica( y se citan a continuacin? 8$as asas deben esterili&arse antes de utili&arlas y enfriarse sobre el agar o el material de vidrio Ken &onas estrilesA antes de tomar la muestra de microorganismos( con objeto de no destruirlos por calor. 8:espus de utili&arlas( las asas se vuelven a esterili&ar. 8$as bocas de los tubos y matraces de vidrio se flamean ligeramente una ve& destapadas( y despus de la inoculacin. 8:urante la inoculacin( los tapones se mantienen en la mano sujetndolos por la parte ue no entra en contacto con tubos y matraces. 8$os tubos abiertos deben mantenerse en posicin inclinada para ue el riesgo de contaminacin sea mnimo. 8$as tapas de las placas )etri no deben colocarse nunca sobre la mesa de trabajo. T2$"#$a+ d) +#)*bra $a siembra de microorganismos puede reali&arse en medios l uidos o en medios slidos. En el primer caso( para la inoculacin se utili&ar asa estril si el medio de partida es slido( o pipeta estril K)asteur o graduadaA si es l uido. En el segundo caso( cuando se parte de otro medio slido( se utili&a el asa de platino normal para siembra en placa o tubo inclinado y el asa recta para siembra en picadura en tubos rectos o( en general( cuando se uiere introducir el microorganismo en el seno del medio de cultivo slidoU cuando el medio de partida es l uido( se puede pasar al medio slido con un asa de platino calibrada( con la ue se e'tiende la muestra directamente( o con pipeta
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33 K)asteur o graduadaA( depositando la muestra ue luego se e'tender sobre la placa con un asa de :igralsMy. B con una varilla doblada. En general( en %icrobiologa se trabaja con cultivos puros de microorganismos. Un cultivo puro es a ul en ue todas las clulas provienen de una sola clula inicial. Una colonia de cual uier microorganismo es un cultivo puro( ya ue todas sus clulas proceden de una inicialU por lo tanto( cuando se desea aislar un microorganismo de una muestra cual uiera( es preciso ver colonias del mismo( lo ue implica ue el aislamiento ha de reali&arse en medio slido en placa. $os pasos de un proceso de aislamiento de una especie microbiana se pueden resumir en los siguientes? 8+iembra en placa de la muestra de partida. 83omar una colonia de la placa una ve& incubada( resuspenderla en agua estril y sembrar una segunda placa( en la ue todas las colonias ue cre&can deben ser idnticas. 8A partir de la segunda placa se puede resuspender una de las colonias en medio l uido( consiguindose ya un cultivo puro. 8)ara la conservacin de los cultivos puros de un microorganismo e'isten diversos mtodos( el ms simple es la resiembra en tubos inclinados ue se mantienen( normalmente refrigerados( durante 087 meses.
PROCEDIMIENTO
-.8 /acer diluciones decimales a partir de la muestra de suelo hasta -581 ,.8 +lo vas a necesitar las #ltimas dos diluciones es decir? -5 84 ( -5 X1 las dems se desecharn. 0.8 =otula dos cajas de petri con el nombre del medio de cultivo C&apecM en una anota la dilucin -584( y en la otra anota la dilucin -581 4.8 =otula dos cajas de petri con el nombre del medio de cultivo K66$A en una anota la dilucin -584( y en la otra anota la dilucin -581 1.8 =otula dos cajas de petri con el nombre del medio de cultivo K6):$A en una anota la dilucin -584( y en la otra anota la dilucin -581 7.8 Esterili&a el asa bacteriolgica en el mechero( espera ue se enfre cerca del rea estril e introd#cela en la dilucin -584 *.8 Coloca una gota de esta dilucin -58 4 en el centro de la superficie del Agar en el primer medio de cultivo C&apecM.( tapa la caja de petri ..8 Cuelve a introducir en la misma dilucin -5 84 y coloca una gota en el siguiente medio K66$A( repite lo mismo y coloca una gota en el tercer medio de cultivo K6):$A . <o olvides tapar las cajas para evitar ue se contamine. 9.8Esterili&a el asa bacteriolgica y ahora introd#cela en la dilucin -5 81 repite los pasos anteriores( pero ahora para todas las cajas ue estn rotuladas con la dilucin -581 <o olvides tapar los medios de cultivo. -5.8 Cierte una o dos gotas de alcohol al *5E sobre el bra&o ms corto de la varilla de vidrio y con el mechero enciende el alcohol ue se encuentra en la
33
34 varilla . )ermite ue arda hasta ue se ueme todo el alcohol. :eja ue la varilla de vidrio se enfre por un minuto --.8 Utili&a el bra&o corto de la varilla para dispersar uniformemente la gota de cada dilucin sobre toda la superficie de cada placa de Agar inicia con las diluciones -581 -,.8 ;nvierte la caja de petri( inc#bala a temperatura de 0*QC por ,4 horas.
CUESTIONARIO
-.8 A u grupo de microorganismos pertenecen los actinomicetosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8 S)ara u son utili&ados en el rea mdica los actinomicetosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8!u tipo de tcnica utili&aste para sembrar a estos microorganismosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8 %enciona otra tcnica para aislar cultivos puros de microorganismosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8 SCul fue la finalidad de uemar el alcohol sobre la varilla de vidrioR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7.8 S)or u iniciaste a distribuir con la varilla en forma uniforme las diluciones l581 ue contenan a los microorganismos y no con las diluciones de l54R IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII *.8S!u apariencia presentaron las colonias despus del tiempo de incubacinR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ..8 Es uemati&a el proceso de dilucin para la muestra de tierra ue reali&aste
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35
OBSERVACIONES
:ibuja todo el proceso llevado a cabo para el aislamiento del cultivo puro de microorganismo por e'tensin en placa( as como los resultados obtenidos al cabo de ,4 horas.
CONCLUSIONES
35
36
AISLAMIENTO DE BACTERIAS MEDIANTE EL METODO SIEMBRA EN PLACA POR ESTRAS

Pr/$,#$a No ; <ombre :el Alumno?IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII+emestreIIIIII 6rupoIIIIIII <ombre del titularIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIDechaIIIIIIIIIIIIIIIIIIII <ombre del )rofr. de $aboratorioIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Calif?IIIIIIIIIII
OB1ETIVO?
:emostracin de los medios de defensa del husped en la piel y garganta mediante el mtodo de siembra en placa por estra.
MATERIAL BIOLGICO
Cajas de petri con faringeo Cajas de petri con salina estril Cajas de petri con piel Cajas de petri con %echero Disher Asa de platino /isopos estriles Agar8 +angre K6+A %anitol sal Agar K%+AA Agar vogel y Nonson KACNA Agar Estafilococo +--5
MATERIAL
E'udado +olucin =aspado de
INTRODUCCIN
$a piel Ken condiciones normalesA es una barrera ue impide la penetracin de los grmenes( por ello act#a como mecanismo de defensa. $os mamferos son frecuentemente infectados por algunas de las bacterias pree'istentes en su medio ambiente( aun ue en general viven en e uilibrio con estos microorganismos( mantenindoles limitados a &onas relativamente superficiales de su organismo. +in embargo las bacterias infecciosas producen enfermedades al invadir tejidos ms profundos. )or lo tanto para mantener la salud( el husped debe defenderse constantemente frente a la invasin por parte de las bacterias. $os factores mecnicos( umicos y microbianos desempe>an un papel importante al restringir la coloni&acin de las bacterias a las superficies corporales.
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37 a$,or)+ *)$/"#$o+? $as superficies epiteliales de la piel y de las mucosas constituyen barreras ue resultan ms o menos impermeables a las bacterias. $a impermeabilidad de la piel es mayor ue en la mayora de las mucosas. Cuando se altera la integridad de la superficie epitelial( pueden desarrollarse infecciones subcutneas. $as bacterias ue causan ms frecuentemente estas infecciones son las ue e'isten habitualmente en la superficie cutnea( folculos pilosos y glndulas sudorparas en la piel( es decir los estafilococos. a$,or)+ O&(*#$o+: La acide& de las secreciones gstricas mantienen sin duda la esterilidad habitual del estmago. El )h bajo de la piel K081A( debido en gran parte a los productos cidos del metabolismo bacteriano( frena sin duda el crecimiento de muchos microorganismos ue toman contacto con sus superficie a$,or)+ *#$rob#a"o+: El antagonismo microbiano inhibe el crecimiento de muchas bacterias y hongos potencial mente patgenos en lugares superficiales donde de no ser as( podran producirse enfermedades. $a flora de la regin farngea presenta problemas peculiares para el aislamiento e identificacin de microorganismos( por lo tanto se refiere a los componentes de la flora normal como a microorganismos con accin patgena. Es importante recordar ue algunos microorganismos tienen capacidad patgena definida y su presencia es un indicio claro de enfermedades( en tanto ue otros( llamados oportunistas( guardan una posicin ambigua y pueden encontrarse tanto como componentes de la flora normal( como asociados a procesos patolgicos( causados por otros microorganismos ue son verdaderos responsables Kpor ejemplo los virusA $os estafilococos estn entre las primeras bacterias ue se reconocieron como patgenas( y se descubrieron por primera ve& a principios de la dcada de-..5. +e encuentran ampliamente distribuidos por la naturale&a( y a menudo forman parte de la flora bacteriana de la piel y el tracto respiratorio superiorU muchas de las especies ue se encuentran en el hombre son comensales. $a especie predominante patgena para el hombre es el staphylococcus aureus( constituye la causa ms com#n de las infecciones supurativas para el hombre. El aislamiento de +. aureus a partir del e'udado farngeo y e'udado de piel( no tiene importancia diagnstica( ya ue se considera parte de la flora normal de la faringe y nasofaringe( por lo ue no tiene significado clnico.
PROCEDIMIENTO:
-.8 $impiar y esterili&ar el rea a trabajar con fenol al 1E ,.8 )render el mechero fischer cerca de donde se va a trabajar( si es posible colocar otro 0.8 /umedecer el hisopo en solucin salina estril( pasarlo sobre la superficie de la piel Kcon o sin peloA 4.8 :escargar el hisopo en dos cajas de petri con el medio ya preparado. KEs recomendable ue para cada dos cajas se utilice un solo hisopo con muestraA. <o retires completamente las tapas de los medios de cultivo para evitar ue se contaminen 1.8 uemar el hisopo y tirarlo.
37
38 7.8 Esterili&a el Asa de platino hasta el rojo vivo( enfralo introducindolo en un e'tremo del Agar *.8 =eali&a el sembrado de los microorganismos por el mtodo de estra utili&ando el asa y como se muestra en la figura. Evita destapar completamente la tapa de los medios de cultivo. .8 =epetir el mismo proceso con otro hisopo estril y con solucin salina para otras dos cajas . siembra por estra utili&ando el Asa de platino y as hasta ue se terminen se sembrar todos los medios preparados. 9.8 ;ncubar a 0*QC por ,484. horas y observar resultados. -5.8 =epite el mismo procedimiento pero ahora toma muestra de la faringe con hisopos estriles en las &onas afectadas como? amgdalas( pared posterior de la faringe( en general cual uier rea ue manifiesta signos de inflamacin( e'udados y #lceras( procurando no tocar con el hisopo la lengua.
INTERPRETACIN DE RESULTADOS:
AC REACCIONES POSITIVAS EN DISTINTOS MEDIOS

GELOSA SANGRE )ara el aislamiento( cultivo y deteccin de actividad hemoltica de +taphylococcus( +treptococcus y otros microorganismos fastidiosos. +e observan colonias blancas casi grises( 6randes( conve'as de consistencia butircea( )resentan bordes regulares. +e observa ue )resenta hemlisis. $as colonias en medio slido son redondeadas( uniformes( Estos crecen rpidamente a 0* C pero tienden a formar pigmentos mejor a temperatura ambiente K,5 CA. MANITOL SAL AGAR EMSAC
38
39 +e utili&a como medio selectivo( para cultivar y enumerar especies clnicas de estafilococos El manitol cuando es utili&ado por los microorganismos( vira de su color original rojo a amarillo. +e observan colonias chicas( blancas( conve'as( de consistencia butircea ( presentan bordes irregulares. S. aureus %anitol sal Colonia amarilla S. epidermidis %anitol sal Colonia incolora AGAR VOGEL = 1ONSON EAV1C )ara la deteccin de +taphylococcus aureus coagulasa8positivo( se observan colonias negras )e ue>as. bordes irregulares con halo amarillo. )ara +. epidermidis y otros )e ue>as( negro8grisceos( sin halo( El medio presenta un vire de rojo plido a amarillo. ESTA ILOCOCO S664 +--5 Colonias blancas un poco amarillentas( +e observan colonias chicas( conve'as( :e consistencia butircea y bordes =egulares.
BC DESCRIPCIN DEL TIPO DE COLONIAS OBTENIDAS

Bbservar las colonias obtenidas y describirlas teniendo en cuenta las siguientes caractersticas? . ORMA? puntiforme( circular( ri&oide( irregular( filamentosa. .TAMAPO? grande Kms de 0 %m.A( mediana K,80 %m.A( pe ue>a K-8, %m.A .COLOR. =eportar el color final despus de la incubacin .BORDE? entero( ondulado( lobulado( filamentoso( ondeado .ELEVACIN? plano( elevado( conve'o( pulvinado( umbonado .SUPER ICIE: suave( brillante( rugosa( plegada( seca( polvorienta
CUESTIONARIO:
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-.8 SCundo los microorganismos pueden causar da>o en nuestro

organismoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8 !u tipo de bacterias son encontradas con mayor frecuencia en nuestra piel y ue pretenden aislarse en esta prcticaR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8S !u finalidad tiene humedecer el hisopo con solucin salina estrilR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8 S)or u no es recomendable utili&ar el mismo hisopo para descargar en las cinco cajas de petri con los medios ya preparadosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8 S)or u se recomienda enfriar el asa de platino en el medio de cultivo ya preparado antes de reali&a el sembrado por estras de los microorganismosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7 SEn u cosiste el aislamiento por estrasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII *.8 :espus de haber incubado a ,1JC por 4. horas describe las colonias obtenidas en cada medio de cultivo utili&ado GELOSA SANGRE EMSAC . ORMA? .TAMAPO? .COLOR. .BORDE? .ELEVACIN? AGAR VOGEL = 1ONSON EAV1C . ORMA? .TAMAPO? .COLOR. .BORDE? .ELEVACIN? MANITOL SAL AGAR ORMA: TAMAPO: COLOR: BORDE: ELEVACIN: ESTA ILOCOCO S664 ORMA: TAMAPO: COLOR: BORDE: ELEVACIN:
OBSERVACIONES:.
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41 :ibuja y colorea todos los resultados obtenidos despus de las 4. horas de haber sido incubados.
CONCLUSIONES:
MANE1O = USO DEL MICROSCOPIO PTICO COMPUESTO

Pr/$,#$a No < <ombre :el Alumno?IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII+emestreIIIIII 6rupoIIIIIII <ombre del titularIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIDechaIIIIIIIIIIIIIIIIIIII <ombre del )rofr. de $aboratorioIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Calif?IIIIIIIIII
OB1ETIVO
El alumno reconocer el microscopio compuesto( identificar cada una de sus partes y lo manejar correctamente observando la )resencia de microorganismos en muestras biolgicas MATERIAL. SUSTANCIAS %icroscopio compuesto al 5..1E )orta y cubre objetos lugol )alillo /isopo MATERIAL BILGICO +arro dental %uestra de orina %uestra de E'cremento +ol. +alina. <aCl +ol. de yodo8
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INTRODUCCION.
El microscopio es el instrumento ms frecuentemente utili&ado y el ms #til en un laboratorio de microbiologa( proporciona la amplificacin o agrandamiento ue nos permite ver organismos y estructuras invisibles a simple vista. $os microscopios permiten una amplia gama de amplificaciones( desde cien veces a cientos miles de veces. $as dos categoras de microscopios disponibles son los microscopios pticos y los microscopios electrnicos. $os microscopios pticos utili&an un sistema de lentes pticas y comprenden los microscopios de campo claro( campo oscuro( fluorescencia y contraste de fases. $os microscopios electrnicos emplean haces de electrones en lugar de ondas de lu& para producir una imagen ampliada.
MANE1O = USO DEL MICROSCOPIO PTICO -. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. +i el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior( ya debera estar en esas condiciones. ,. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pin&as metlicas. 0. Comen&ar la observacin con el objetivo de 4' Kya est en posicinA o colocar el de -5 aumentos K-5'A si la preparacin es de bacterias. 4. )ara reali&ar el enfo ue? a. Acercar al m'imo la lente del objetivo a la preparacin( empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular( ya ue se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose da>ar alguno de ellos o ambos. b. %irando( ahora s( a travs de los oculares( ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el macromtrico y( cuando se observe algo ntida la muestra( girar el micromtrico hasta obtener un enfo ue fino. 1.8 )asar al siguiente objetivo. $a imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfo ue fino. +i al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen( es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 0. El objetivo de 45' enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil ue ocurran dos tipos de percances? incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin ue ya se enfoc con el objetivo de inmersin.
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PROCEDIMIENTO
3EC<;CA+ :E %B<3ANE /Y%E:B $a gota pendiente o las preparaciones h#medas permiten e'aminar organismos vivos suspendidos en un fluido. $as preparaciones h#medas se hacen colocando una gota del fluido ue contiene el organismo sobre una lmina de vidrio y cubrindola con una fina pie&a de vidrio KcubreobjetosA? para reducir la tasa de evaporacin y eliminar corrientes de aire( generalmente se rodea la gota con vaselina. Cuando se e'aminan las preparaciones h#medas por microscopa de campo claro( es importante ajustar la fuente de lu& de forma adecuada. Es posible disminuir la intensidad de la lu& mediante la utili&acin de filtros especiales. %B<3ANE E< +B$UC;B< +A$;<A D;+;B$@6;CA K<aCl 5..1EA B A6UA Utili&ada para estudiar la movilidad de las bacterias AC -.8 En el centro de un portaobjetos coloca una gota de solucin salina ,.8 Con un hisopo toma muestra de +arro d)",al de un compa>ero ue no se haya lavado los dientes y colcala en la solucin salina me&clando cuidadosamente 0.8 . E'aminar con objetivos de 45T y 75 T. BC -.8 Centrfuga apro'imadamente -5 ml de or#"a a ,(155 rpm durante 1 minutos. ,.8 :esecha el l uido sobrenadante y procede a me&clar el sedimento urinario 0.8 Coloca una gota del sedimento me&clado en el centro de un portaobjetos limpio y seco 4.8 +obre el sedimento pon un cubreobjetos y observa con el objetivo de 45T y 75T CC -.8 En un tubo de -0 T -55mm coloca las tres cuartas partes de solucin salina fisiolgica ,.8 Con un aplicador de madera toma muestra de e'cremento de varias partes de la muestra y depostalo dentro del tubo con la solucin salina( agita uniformemente. 0.8 En un portaobjetos limpio y seco( coloca una gota de muestra preparada en los pasos anteriores 4.8Coloca un cubreobjeto sobre la preparacin y observa en el microscopio con objetivo 45T y 75T %B<3ANE E< +B$UC;@< FB:B $U6B$ Utili&ada para identificar en heces fecales )roto&oos intestinales con sus organelos citoplasmticos -.8 En un portaobjetos limpio y seco( coloca una gota de solucin de yodo lugol
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44 ,.8 Con un palillo de madera toma una pe ue>a cantidad de *&)+,ra F)$al y depostala en el portaobjetos mediante movimientos de rotacin y e'tendiendo la muestra por toda la gota E" )l pa+o No 3 P&)d)+ &,#l#%ar la *&)+,ra +al#"a pr)parada )" )l #"$#+o C )" l&'ar d) la *&)+,ra d) )Q$r)*)",o )" For*a d#r)$,a 0.8Coloca un cubreobjeto sobre la preparacin y observa en el microscopio
CUESTIONARIO:
-.8 S!ue es poder de resolucinR ,.8 S!u finalidad te proporciona el utili&ar microscopio compuesto? IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII8IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8 SCul es la importancia ue tiene el diafragma en el microscopioR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8 S!u tipo de bacterias pudiste observar en las muestras ue se estudiaron IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8 S!u importancia tiene el estudiar y observar los microorganismos en muestras biolgicasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7.8 Escribe el nombre de cada una de las partes del microscopio compuesto
OBSERVACIONES.
:ibuja lo observado en los muestra ue preparaste diferentes objetivos para cada durante el e'perimento.
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CONCLUSIONES
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
TINCIN DE LA CPSULA BACTERIANA

OB1ETIVO
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El alumno aprender diversas tcnicas para la tincin de la cpsula bacteriana en distintos cultivos bacteriolgicos.
MATERIAL
Cultivo de ,4 horas de Zlebsiella =hinoscleromatis en %acconMey o citrato de simmons Kpuede aislarse del e'cremento seco de palomasA Cultivo de ,4 horas de +taphylococcus aureus en manitol sal Agar KmsaA Cepa de ,4 horas en Agar +aboraud Cryptococcus neoformans. 3inta china K recientemente filtradaA Drasco con mordente de Znaysi Drasco con rojo congo Drasco con mordente de cpsula
INTRODUCCION
$a cpsula bacteriana es una capa de material viscoso o mucoide. El tama>o de estas cpsulas est influenciado por el medio en el ue crece la bacteria. En algunos casos el grosor de la cpsula es slo una fraccin del dimetro de la clula( en otros casos la cpsula es mucho mayor ue la clula. $as cpsulas bacterianas son importantes tanto para la bacteria como para otros organismos. A las bacterias les proporcionan una cubierta protectora y adems sirven de reservorio de alimento almacenado. 3ienen )ropiedad Antifagocitaria ? :ificulta o impide la fagocitosis( lo cual potencia su virulencia ya ue favorece la multiplicacin y facilita la invasin. "rinda )roteccin frente a Dagos.? :ificulta la fijacin de bacterifagos e impide el pasaje su pasaje ue puedan afectar a la bacteria $as cpsulas de ciertas bacterias productoras de enfermedades aumentan la capacidad infectiva de las bacterias. +i la bacteria pierde totalmente su cpsula( puede perder su virulencia y por lo tanto su capacidad de producir enfermedad Algunos ejemplos de bacterias productoras de cpsulas son? neumococos( Zlebsiella.( aun ue tambin puede estar presente en bacterias gram positivas y 6ram. negativas +in embargo las cpsulas tiene diversas propiedades como? ;nduce la produccin de anticuerpos protectores Kesto es #til en la produccin de algunas vacunasA y )ermite la diferenciacin de tipos serolgicos dentro de la misma especie ya sea por aglutinacin con sueros
PROCEDIMIENTO
TINCION DE CPSULA AA %E3B:B :E :U6U;: -.8 )oner con el asa una gota pe ue>a de tinta china en el centro de un portaobjetos limpio. ,.8)oner una gota de agua del mismo tama>o junto a la gota de tinta china 0.8 3omar con el Asa bacteriolgica un pe ue>o fragmento del cultivo de bacterias
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47 4.8 /acer una suspensin K sin e'tenderlaA en la gota de agua 1.8 %e&clarla con la tinta china 7.8 Colocar un cubreobjetos sobre la suspensin( evitando ue ueden burbujas *.8 Bbservar la preparacin al microscopio con el objetivo seco fuerte y de inmersin. La $/p+&la +) ob+)r.a $o*o &"a %o"a br#lla",) alr)d)dor d) la ba$,)r#a )" &" $a*po o+$&ro. "A %E3B:B :E$ =BNB CB<6B -.8 )oner una gota pe ue>a de rojo congo en el centro de un portaobjetos limpio ,.83omar con el asa bacteriolgica un pe ue>o fragmento de crecimiento de colonia bacteriana 0.8 +uspender la muestra en la gota de rojo congo y hacer un frotis 4.8 cubrir el frotis K +;< D;NA=$B A $A D$A%A :E$ %EC/E=BA con una gotas del mordente de cpsula y dejarlo actuar durante un minuto. 1.8$avar el frotis con agua destilada y dejarlo secar al aire 7.8 Bbservar la preparacin al microscopio con el objetivo de inmersin La $/p+&la +) ob+)r.a $o*o &"a %o"a br#lla",) alr)d)dor d) la ba$,)r#a d) $olor roHo )" &" $a*po d) a%&l o+$&ro.
CUESTIONARIO
-.8 S!u importancia mdica tiene la cpsula bacterianaR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8S!u caractersticas presenta la cpsula en las bacteriasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8 S!u importancia tiene la presencia de la cpsula en las bacteriasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8 S!u sucede con las bacterias cuando estas llegan a perder la cpsulaR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8 ;nvestiga de u est compuesta la capa de material mucosa ue forma la cpsula IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
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OBSERVACIONES
:ibuja lo ue observaste en ambos objetivos indicados en la prctica con el microscopio compuesto
CONCLUSIONES:
TINCIONES SELECTIVAS
Pr/$,#$a No 64 <ombre :el Alumno?IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII+emestreIIIIII 6rupoIIIIIII <ombre del titularIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIDechaIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
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49 <ombre del )rofr. de $aboratorioIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Calif?IIIIIIIIIII
OB1ETIVO
El alumno aplicar la tcnica de tincin especfica para lograr observar en el microscopio la pared celular y endoesporas en distintas muestras bacteriolgicas MATERIAL Cultivo de -, a -. horas de "acillus +uptillus K lacto bacilosA en Agar nutritivo y Agar sangre Cultivo de "acillus cereus K tierra contaminada y tratada a .5JC por -5 minutosA en Agar nutritivo y Agar sangre Cultivo de ,4 horas de +taphylococcus aureus en manitol sal Agar KmsaA +olucin de cido fosfomolbdico K -EA +olucin acuosa de verde de metilo K -EA Cerde mala uita K solucin acuosa al 1EA +afranina K solucin acuosa al 1E A )ortaobjetos Cubreobjetos %icroscopio compuesto Asa bacteriolgica %echero "unsen
INTRODUCCIN
PARED CELULAR :ebajo de las sustancias e'tracelulares tales como las cpsulas o capas mucosas y e'ternas a la membrana citoplasmtica est la pared celular ue es una estructura muy rgida y ue da forma a la clula. El espesor de la pared celular oscila entre -5 y 01 nm( sin embargo algunas paredes celulares son considerablemente ms gruesas. $as paredes celulares bacterianas son esenciales para el crecimiento y la divisin. 3odas las bacterias poseen paredes celulares rgidas ue protegen a la clula de e'plotar en medios de baja presin osmtica. Composicin umica de las paredes celulares.8 $os peptidoglicanos proporcionan a la pared celular una estructura rgida. Estos grandes polmeros( estn compuestos de tres clases de blo ues estructurales? <8 Acetil8 6lucosamina( Gcido <8 Acetil8%urmico y un pptido ue consta de cuatro o cinco aminocidos ue son? $8 alanina( :8Alanina( I:8Gcido 6lutmico y $isina. Adems contiene protenas con polisacridos( lipoprotenas y lipopolisacridos )ropiedades y Dunciones? -[ "rinda proteccin y resistencia a la bacteria frente a los posibles cambios de presin osmtica del medio en el ue se encuentra y a la accin de ciertos agentes e'ternos.,[ )resenta )oros ue act#an como filtros( permitiendo el pasaje de agua y metabolitos esenciales.0[
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50 )resenta antgenos de tipo y grupo especficos.4[ )articipa en la divisin KmultiplicacinA bacteriana Kse invagina junto con la membrana plasmticaA1[ En las bacterias 6ram .negativas tiene poder patgeno debido a ue presenta endoto'inas K$pido AA.7[ Es el sustrato donde act#an los 8 $actmicos y otros antimicrobianos. $a tincin para la pared celular se aprovecha del hecho de ue los contenidos citoplasmticos se pueden hidroli&ar diferencialmente con cido fosfomolbdico( dejando la pared sin afectar. :espus de te>ir se puede observar la pared celular con citoplasma como ahuecado ESPORAS +on elementos de reproduccin yOo de resistencia a un medio adverso ue presentan algunas bacterias ( especialmente del gnero bacilar. +u forma( tama>o y ubicacin vara seg#n la especie. Estos cuerpos son producidos en el #ltimo estado del crecimiento celular( ue bajo condiciones apropiadas( germinan y producen la clase original de clula en crecimiento o vegetativa. $as esporas son resistentes a muchos agentes umicos y fsicos. /esiten dos tipos de esporas? E"do+pora+ ? espora presente en el interior de la bacteria. :estinada a germinar originando la forma vegetativa de la ue deriva. Es un cuerpo de pared gruesa muy refringente y sumamente resistente. +on producidas por especies "acillus( clostridium y +porosarcina. $as endoesporas resisten las condiciones ambientales adversas de desecacin( calor y mal suministro de nutrientes K agentes umicos como desinfectantesA EQo+pora+ ? esporo ue permanece libre en el ambiente( constituyendo la forma de resistencia bacteriana ante condiciones adversas o desfavorables Knutricin( desecacin( temperatura( presencia de agentes umicos( presiones( etc.A
PROCEDIMIENTO
AC TINCIN DE LA PARED CELULAR -.8 )repara un frotis h#medo relativamente concentrado de "acillus +uptillus sobre un portaobjetos limpio . <B $B D;NE+ A $A D$A%A. )repara otro con ". cereus ,.8Antes de ue la suspensin bacteriana se se ue sobre el portaobjetos( adicinale la solucin del cido fosfomolbdico cubrindola por completo. 0.8 :jalo reaccionar 4 minutos. 4.8 ;nclina completamente el portaobjetos sobre el fregadero para eliminar totalmente el cido fosfomolbdico 1.8Agrega el verde de metilo directamente sobre el frotis h#medo y djalo reaccionar 1 minutos. 7.8 $ava suavemente en la llave. Es inevitable ue al lavar en la llave( algo del material se desprenda del frotis( trata de minimi&ar el desprendimiento pero al mismo tiempo lava bien( hasta ue el agua ya no arrastre colorante. *.8 +eca al aire y despus e'amina con aceite de inmersin
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51 ..8 +i se ti> correctamente( las paredes celulares aparecern de verde oscuro o a&ul( mientras ue el citoplasma se ver de un verde claro o incoloro. TINCIN DE LA PARED CELULAR ETACNICA DE RNA=SIC -.8 /acer un frotis de "acillus subtilis en la forma usual y fijarlo con calor. )repara otro con "acillus cereus ,.8 Cubrir el frotis con mordente de Znaysi y dejarlo actuar durante -5 minutos. 0.8 $avar la preparacin con agua 4.8 Colocar con el asa bacteriolgica una gota de fuscina fenicada sobre la preparacin. 1.8 )oner un cubreobjetos sobre la preparacin y observar al microscopio con el objetivo de inmersin. La par)d $)l&lar +) ob+)r.a d) $olor roHo #",)"+o alr)d)dor d) la ba$,)r#aS $&Go $#,opla+*a +) .) d) &" $olor ro+a o roHo ,)"&). AC TINCIN DE ESPORAS E TACNICA DE SBEA ER = ULTONC -8)repare un dos e'tendidos del microorganismo aislado del cultivo de microorganismo uno de "acillus +uptillus y otro de "acillus cereus ,8Dijar por calor y cubrir todo el portaobjeto con una solucin de .)rd) d) MalaO&#,a. 08Calentar hasta emisin de vapores y seguir dicho calentamiento durante 0 minutos Kno permitir ue se se ue el colorante. +i esto ocurriera( agregar colorante( sobre el pree'istente y no sobre la parte seca( hasta cubrirlo nuevamente.A 48$avar con agua y cubrir con solucin de SaFra"#"a. :ejar actuar 05 segundos. $avar con agua( secar y observar con objetivo de inmersin. 18;nformar? morfologa( color y tipo de espora. El $olora",) V)rd) *alaO&#,a: $apa% d) ,)T#r la+ )+pora+ )" $al#)",).. La SaFra"#"a: $olora",) d) $o",ra+,) O&) ,#T) la+ For*a+ .)'),a,#.a+. La+ )"do+pora+S ,ra+ la pr#*)ra ,#"$#!"S "o p)rd)r/" )l $olora",) )" )l la.ado $o" a'&aS G +( lo Nar/" la+ For*a+ .)'),a,#.a+S O&) O&)dar/" ,)T#da+ $o" )l +)'&"do $olora",) TINCIN DE ESPORAS E TACNICA DE COLORACIN DE GRAMC -.8 /acer un frotis de ".suptilis de la forma usual y otra de ". cereus ,.8 3e>ir con la coloracin de 6ram 0.8Bbservar al microscopio con el objetivo de inmersin la+ )+pora+ +) p&)d)" ob+)r.ar +#" ,)T#r o +# +) )"$&)",ra d)",ro d)l ba$#loS la )+pora "o +) ,#T) G )l $#,opla+*a +) .) d) $olor *orado
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Localizacin y morfologa de las esporas en Bacillus
CUESTIONARIO
-.8 %enciona dos funciones ue tiene la pared celular en las bacterias IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8SCules son los principales compuestos orgnicos de las paredes celularesR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0. S!u caracterstica y ue color ti>eron las paredes celulares de las bacterias ue lograste observarR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8 ;nvestiga las diferencias de la pared celular de las bacterias 6ram positivas y 6ram negativas IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8 :escribe dos diferencias para distinguir a una endospora de una e'ospora IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7. S!u caracterstica y ue color ti>eron las esporas observadas en las distintas muestras microbiolgicasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII *.8 %enciona algunos microorganismos capaces de producir esporas IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
OBSERVACIONES
:ibuja las estructuras celulares inmersin ue lograste observar con el objetivo de
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CONCLUSIONES
TINCIN DE GRAM
OB1ETIVO
El alumno aplicar una tcnica de coloracin diferencial para la identificacin de bacterias 6ram positivas y 6ram negativas..
MATERIAL
Asa de platino coli %icroscopio aureus )orta objetos albicans Aceite de inmersin autoclave SUSTACIAS COLORANTES Colorante violeta cristal de 6ram +olucin decolorante alcohol acetona +afranina de 6ram Cultivos de Escherichia Cultivo de +taphylococcus Cultivo de Cndida Esputo de tuberculoso procesado en
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54 Fodo de 6ram o lugol para gram
INTRODUCCIN TINCION DE GRAM.

3incin empleada en microbiologa para la visuali&acin de bacterias en muestras clnicas. 3ambin se emplea como primer paso en la diferenciacin bacteriana. El e'amen con microscopio ptico de preparacin con tincin de 6ram se emplea de rutina para determinar la forma de las bacterias. $as formas comunes son cocos K esfricasA( bacilos KalargadasA y formas espiraladas $as bacterias pueden diferenciarse con esta tincin en dos grupos. $os microorganismos Gra*. po+#,#.o+ +) ,#T)" d) a%&l ( mientras ue apro'imadamente un tercio de los cocos( la mitad de los bacilos y todos los organismos espira lados +) ,#T)" d) roHo G +) d#$) O&) +o" 'ra*")'a,#.o+. $as aplicaciones ms comunes de la coloracin de 6ram son las siguientes? $a presencia de $o$o+ 'ra*po+#,#.o+ agrupados sugiere estafilococosU en cadenas sugiere estreptococosU en forma de lanceta a los diplococos $a presencia de d#plo$o$o+ 'ra*")'a,#.o+ son caractersticas de especies de <eisseria $os ba$#lo+ Gra*. po+#,#.o+ 'ra"d)+ sugieren especies de "acillus o clostridium( lo+ ba$#lo+ Gra*. po+#,#.o+ p)O&)To+ sugieren especies de $isteria o una de las corineiformes K difteroidesA Lo+ ba$#lo+ Gra*. ")'a,#.o+ son las bacterias mas comunes halladas en los laboratorios clnicos e incluyen a Enterobacteriaceae( bacilos no fermentados y especies de /aemophilus. El valor diagnstico de esta tincin es variableU normalmente permite una buena orientacin al microbilogo para seleccionar las tcnicas de cultivo ms adecuadas y tambin tiene valor en orientar hacia un diagnstico etiolgico( en especial para instaurar un tratamiento inicial.
PROCEDIMIENTO REALI-ACIN DEL ROTIS

-. Colocar una pe ue>a gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua( por lo ue se puede usar el asa de siembra( ya ue en el e'tremo curvo de su filamento ueda retenida una mnima gota de agua( ue resulta suficiente. ,. Dlamear el asa de siembra( tomar( en condiciones aspticas( una pe ue>a cantidad del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. =emover la me&cla con el asa de siembra hasta formar una suspensin homognea ue uede bastante e'tendida para facilitar su secado. +i la muestra se toma de un cultivo en medio l uido( no es necesario reali&ar los dos primeros pasos ya ue basta con colocar y
54
55 e'tender una gota de la suspensin bacteriana( ue se toma con el asa de siembra( directamente sobre el portaobjetos. 0. Esperar hasta ue el l uido se evapore o acelerar su evaporacin acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay ue tener mucha precaucin de no calentar demasiado el porta pues las clulas pueden deformarse o romperse. AC TINCIN DE GRAM -. =eali&a la preparacin del frotis bacteriano como se e'plic en el paso anterior ,. 3e>ir con cristal violeta -min. 0. $avar con abundante agua el e'ceso de colorante. 4. Cubrir con $ugol -min. 1. $avar con agua el e'ceso de $ugol. 7. :ecolorar con alcohol8acetona o simplemente con alcohol hasta ue la preparacin deje de perder color K05segA *. $avar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente. .. 3e>ir con safranina -min. 9. $avar con agua para eliminar el colorante de contraste. -5. +ecar la preparacin. --. E'aminar al microscopio con aceite de inmersin y fijndose sobre todo en el color de cada preparacin.
CUESTIONARIO
-.8 S!u es un frotisR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8 SCon u finalidad se fija la muestra de microorganismos en el porta objetosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8S!u importancia tiene te>ir las muestras bacterianasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
55
56 IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8 S)or u es necesario emplear aceite de inmersin para la observacin de los microorganismosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8:e los reactivos ue utili&aste para la tincin de 6ram( Scul es el ue funciona como colorante primarioR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7.8S!u funcin tiene el Fodo en la tincin de 6ramR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII *.8S!u coloracin ti>en las bacterias 6ram positivasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ..8 S!u coloracin ti>en las bacterias 6ram. negativasR 9.8 %enciona tres bacterias ue ti>en 6ram positivas y escribe la enfermedad ue causa cada una de ellas IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII -5.8 %enciona tres bacterias ue ti>en 6ram negativas y escribe la enfermedad ue causa cada una de ellas. IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
OBSERVACIONES:
=eali&a los dibujos y es uemas correspondientes a las tinciones reali&adas
56
57
CONCLUSIONES?
TINCIN CIDO>ALCOBOL RESISTENTE

OB1ETIVO:
El alumno aplicar las tcnicas de coloracin de microorganismos cido8resistentes para diferenciarlos e identificarlos( en base a sus propiedades morfolgicas
MATERIAL:
\Un cultivo de *, horas de mycobacterium. +i es posible se les facilitar un esputo de tuberculoso procesado en autoclave. \ Un cultivo de ,4 horas de streptococcus
REACTIVOS
\ Ducsina de Hiehl8 <eelsen
57
58 \ A&ul de metileno \ Alcohol acidulado
INTRODUCCIN
$os microorganismos pertenecientes al gnero MG$oba$,)r#&* se caracteri&an por tener una pared celular completamente diferente a las restantes bacterias. $a pared de las %ycobacterias posee un alto contenido de lpidos ue la hace impermeable a los agentes hidroflicos( por lo tanto estos microorganismos no se ti>en adecuadamente con los reactivos utili&ados en la coloracin de 6ram y no pueden ser clasificados como 6ram positivos o negativos. $as %ycobacterias son te>idas adecuadamente por el mtodo de -#)Nl>N))l+)" ET#"$#!" $#do>R/p#da o A$#d> a+, S,a#"C ue utili&a como solucin decolorante una me&cla de etanol y cido clorhdrico. +on bacilos cido8alcohol resistentes por lo ue la tincin de Hieh-<eelsen es #til para la coloracin de estos microorganismos obtenidos de muestras clnicas o de cultivo. Con esta tincin( los bacilos aparecen de color rojo brillante sobre un fondo a&ul. $os bacilos tuberculosos son difciles de te>ir con la tincin de 6ram( y se observan como bacilos gram positivos con tincin irregular. Estos microorganismos una ve& coloreados son resistentes a la decoloracin cido8 alcohlica y por eso se denominan Ba$#lo+ $#do Al$oNol R)+#+,)",)+ EBAARC. El gnero Mycobacterium incluye ms de -55 especies ue pueden clasificarse en seis grupos desde el punto de vista bacteriolgico( pero con fines didcticos se dividen en tres apartados? Co*pl)Ho ,&b)r$&lo+#+. ;ncluye las especies M. tuberculosis, Mycobacterium bovis Kincluida la cepa "C6A y Mycobacterium africanum( productoras todas ellas de tuberculosis. +e incluye tambin Mycobacterium microti, productor de tuberculosis en rata Co*pl)Ho l)pra. En el ue se incluyen las especies M. leprae( productor de la lepra humana( y Mycobacterium lepraemurium( ue produce lepra en roedoresel. El Mycobacterium leprae ue es un parsito intracelular obligado ue se multiplica lentamente en clulas fagocitarias mononucleares como los histiocitos de la piel y en las clulas de +h]an de los nervios O,ra+ M#$oba$,)r#a+. %icobacterias no comprendidas en los dos grupos anteriores. +lo algunas de ellas suelen ser patgenas( otras pueden ser patgenas oportunistas y finalmente otras suelen ser saprofitas. )roducen las denominadas micobacteriosis las infecciones producidas por M. avium( M. kansakii( M. fortuitum y M. chelonei son consideradas oportunistas y no tuberculosas
PROCEDIMIENTO
-. )repara un frotis bacteriano. /aciendo un delgado e'tendido del material para su estudio y permitir ue se se ue al aire. ,. Dijar el frotis con calor( evitar ue hierva 0. Cubrir la preparacin con carbofucsina. o fuscina fenicada 4. Calentar la preparacin en un mechero "unsen durante 1 min. <o debe hervir. +i se evapora( se a>ade ms carbofucsina para ue no se se ue en ning#n momento.
58
59 1. $avar con agua el resto de colorante. 7. :ecolorar con la me&cla cido8alcohol. /asta ue solo permane&ca un tenue color rosa. *. $avar con agua para ue no prosiga la decoloracin. .. 3e>ir con a&ul de metileno - min. 9. $avar con agua el resto de colorante. -5. +ecar la preparacin. --. E'aminar al microscopio. Con objetivo de inmersin por -55 T K aceiteA La ,#"$#!" )+ po+#,#.a para ba$#lo+ roHo+ $o",ra &" Fo"do a%&l $laro
CUESTIONARIO
6.> U!u Clasificacin de bacterias pueden ser encontradas en este tipo de tincinR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8 S!u otro nombre recibe la tincin cido8 alcohol8 resistenteR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8 S!u coloracin se ti>en las bacterias bacilares en la tincin cido8 alcohol8 resistente ue da como resultado la reaccin positivaR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8S!u funcin tiene el alcohol en la tcnica de tincinR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8S!u especies de %ycobacterium son los causantes de la tuberculosisR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7.8 S!u especie de %ycobacterium es el responsable de la lepraR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
OBSERVACIONES:
/a& un es uema de los pasos ue reali&aste durante la reali&acin de la prctica( as como el dibujo de las bacterias bacilares observadas en el microscopio.
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60
CONCLUSIONES:
________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________
E ECTO DE LA PRESIN OSMTICA SOBRE LA VIABILIDAD = EL CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS

Pr/$,#$a No 67 <ombre :el Alumno?IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII+emestreIIIIII 6rupoIIIIII <ombre del titularIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIDechaIIIIIIIIIIIIIIIIIIII <ombre del )rofr. de $aboratorioIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Calif?IIIIIIIIIII
OB1ETIVO:
60
61 El alumno manejar las tcnicas para observar el efecto de la presin osmtica ue ejerce el Cloruro de sodio y la +acarosa sobre el crecimiento microbiano
MATERIAL:
0 3ubos de -7T -15 . En cada uno -5 ml de caldo nutritivo adicionado con? ,ml de cloruro de sodio al -E( ,ml de cloruro de sodio al -5E( ,ml de cloruro de sodio al ,5E 0 3ubos de -7T -15. En cada tubo -5 ml de caldo nutritivo adicionado con? ,ml de +acarosa al -E( , ml de +acarosa al -5E( , ml de +acarosa al ,5E <efelmetro de %ac Darland )ipetas de 1 ml ( y de - ml estriles Agua destilada estril CEPAS: Escherichia Coli +taphylococcus aureus Zlebsiella pneumoniae INTRODUCCIN: AC PRESIN? $a osmosis es la difusin a travs de una membrana semipermeable ue separa a dos soluciones con distintas concentraciones de sustrato. El proceso tiende a igualar la concentracin de soluto a ambos lados de la memoran. Cuando a ciertas clulas bacterianas se les suspende en una solucin ue contiene una concentracin elevada de cloruro de sodio K,5EA( el agua pasar desde la regin de menor concentracin de sustancia disuelta K el interior de la clula tiene una baja concentracin salinaA a travs de la membrana citoplasmtica ue es semipermeable a la solucin ue rodea a la clula. As la clula se deshidrata producindose plasmlisis. +i las bacterias se colocan en una solucin ue contiene menos del -E de cloruro de sodio( el flujo de agua se invertir( es decir ocurrir la difusin( ya ue fluir el agua desde la solucin e'terna al interior de la clula y originar la plasmotipsis. :entro de la clula se establece una presin osmtica a causa de la gran cantidad de agua ue se acumula all( esta presin har ue se hinchen e incluso las clulas pueden reventar. El mecanismo de inhibicin microbiana es la plasmlisis? las clulas se deshidratan y por lo tanto +on incapaces de metaboli&ar o crecer( pueden morir o permanecer vivas pero en condiciones durmientes. +in embargo tambin e'isten microorganismos ue re uieren altas concentraciones salinas y son denominadas halfilos( y los ue re uieren presiones osmticas elevadas se les conoce como osmfilos. $a mayor parte de las bacterias pueden tolerar una amplia gama de presiones osmticas e'ternas y fuer&as inicas debido a su capacidad de regular la osmolaridad interna y la concentracin inica. $a osmolaridad est regulada por el transporte activo de iones potasio al interior de la clula AGARES \ Agar sangre \ Agar <utritivo \ Caldo nutritivo
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62 AC E" *)d#o+ N#po,!"#$o+ Kcon una a]^a] del citoplasmaA es la pared celular la ue ejerce todo el papel? su rigide& se opone a la entrada de agua( y por lo tanto( evita ue la membrana citoplsmica tienda a sufrir una presin de turgor e'cesiva. BC E" *)d#o+ N#p)r,!"#$o+ Kcuando la a] del e'terior es menor ue la del citoplasmaA. $as bacterias poseen mecanismos compensatorios por los ue tienden a aumentar la osmolaridad interior por encima de la del medio Kpara garanti&ar la entrada de agua del ambiente y mantener su metabolismoA. Ello se logra esencialmente aumentando la concentracin de un soluto muy soluble en agua en el interior celular( soluto llamado genricamente +ol&,o $o*pa,#bl)( lo cual se puede lograr por varios posibles mecanismos? bombeando iones al interiorU sinteti&ando una molcula orgnica osmticamente activaU bombeando sustancias osmoprotectoras.
PROCEDIMIENTO:
)=E)A=AC;@< :E $A CE)A A E+3U:;A= +uspender la cepa bacteriana en agua destilada logrado obtener una turbiedad del <o -5 del nefelmetro de %ac8 Darland. En caso de no tener el nefelmetro solo cuidar la turbiedad a manera de suspensin. AA EDEC3B :E$ C$B=U=B :E +B:;B -.8 Colocar en una gradilla en orden creciente de concentracin una serie de 0 tubos con -5 ml cada uno con caldo nutritivo y adiciona , ml de cloruro de sodio con las distintas concentraciones K al -E( -5E y ,5 QE de <aClA ,.8=otularlas de acuerdo a la concentracin y nombre de la cepa ue se va a inocular en ellos 0.8 ;nocular en cada tubo 5.l ml de la suspensin bacteriana correspondiente 4.8 repetir los pasos del - al 4 para cada cepa proporcionada 1.8 ;ncubar los tubos a 0*JC durante ,48 4.JC8 7.8 /omogeni&ar el cultivo y leer el resultado de cada tubo en base a su turbiedad( comparndola con las ampolletas del nefelmetro de %ac8 Darland
"A EDEC3B :E $A +ACA=B+A -.8 Colocar en una gradilla en orden creciente de concentracin una serie de 0 tubos con -5 ml cada uno con caldo nutritivo y adiciona , ml de sacarosa con las distintas concentraciones K al -E( -5E y,5E de +acarosaA ,.8=otularlas de acuerdo a la concentracin y nombre de la cepa ue se va a inocular en ellos
62
63 0.8 ;nocular en cada tubo 5.l ml de la suspensin bacteriana correspondiente. 4.8 repetir los pasos del - al 4 para cada cepa proporcionada. 1.8 ;ncubar los tubos a 0*JC durante ,48 4.JC. 7.8 /omogeni&ar el cultivo y leer el resultado de cada tubo en base a su turbiedad( comparndola con las ampolletas del nefelmetro de %ac8 Darland.
CUESTIONARIO:
-.8 SCmo se define la smosisR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8 S!u es plasmlisis y cuando ocurreR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8 S!u sucedi con las bacterias al incrementar la concentracin del <aCl y sacarosa en los distintos caldos nutritivosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8 S!u nombre reciben las bacterias ue soportan grandes presiones osmticasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8 S!uin es el responsable en la clula bacteriana controlar la presin en medios hipotnicosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7.8 SCundo se establece un medio hipotnicoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII *.8 SCundo se establece un medio hipertnicoR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
RESULTADOS:
Anota los resultados del efecto del cloruro de sodio y de la sacarosa sobre el crecimiento( indicando el n#mero de ampolleta del nefelmetro a ue corresponda dicho crecimiento. En caso de no contar con el <efelmetro registra a manera de cruces dicho crecimiento bacteriano
63
64
CE)A+ E.CB$; +.AU=EU+ Z.)<EU%B<;AE CE)A+ EDEC3B :E $A )=E+;@< B+%@3;CA -E <aCl -5E <aCl ,5E <aCl
EDEC3B :E $A )=E+;@< B+%@3;CA -E -5E ,5E +acarosa sacarosa +acarosa
E.CB$; +.AU=EU+ Z.)<EU%B<;AE
OBSERVACIONES
:ibuja a manera de es uema los pasos reali&ados en la elaboracin de la prctica( as como los resultados obtenidos despus del tiempo de incubacin.
CONCLUSIONES?
DETERMINACIN DEL TIEMPO = PUNTO TARMICO MORTAL EN MICROORGANISMOS

Pr/$,#$a No 68 <ombre :el 6rupoIIIIIII Alumno?IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII+emestreIIIIII
64
65 <ombre titularIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIDechaIIIIIIIIIIIIIIIIIIII <ombre del )rofr. de $aboratorioIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Calif?IIIIIIIIII del
OB1ETIVO
El alumno aplicar un mtodo ue le permitir conocer la temperatura y el tiempo mnimos necesarios para esterili&ar una suspensin( as como el efecto ue tienen diferentes diluyentes sobre dichas determinaciones.
MATERIAL
3ubos de -0 T -55 estriles )ipetas de 1 ml estriles )ipetas de l ml estriles Cajas de Agar <utritivo o Agar sangre "a>os mara a 0*JC( *5JC( y ebullicin 3ubos de ensaye con - ml de pur de tomate( jugo de naranja y agua destilada CEPAS Escherichia coli +taphylococcus aureus Zlebsiella )neumoniae
INTRODUCCIN:
:iferentes especies microbianas varan ampliamente en sus fluctuaciones de temperatura ptima para su desarrollo? $as llamadas psicrfilas crecen mejor a temperaturas bajas K-1 a ,5JCA( las formas mesfilas lo hacen mejor de 05 a 0*JC( la mayor parte de la termfilas entre 15JC y 75JC. $a mayor parte de los microorganismos son mesfilos( 05JC es la temperatura ptima para muchas de las formas de vida libre y la temperatura del husped es ptima para los simbiontes de los animales de sangre caliente. El lmite superior de temperatura tolerada por cual uier especie se correlaciona bien con la estabilidad trmica general de las protenas de dicha especie. $os microorganismos comparten con los vegetales y los animales la respuesta al cho ue por calor( una sntesis de protenas por el calor cuando son e'puestos a una elevacin s#bdita en la temperatura por arriba de la ptima para el crecimiento. Al parecer estas protenas son resistentes al calor y estabili&an a las protenas de la clula sensible al calor. $as bacterias tambin e'hiben fenmeno denominado cho ue por fro( sea la muerte de las clulas por un enfriamiento rpido( en oposicin a uno lento. )or ejemplo( el enfriamiento rpido de la escherichia coli desde 0*JC a 1JC puede matar al 95E de las clulas
65
66 EDEC3B $E3A$ :E$ CA$B=. Al subir la temperatura por encima de la temperatura m'ima de crecimiento( se dejan sentir los efectos sobre la viabilidad? la prdida de viabilidad significa ue las bacterias dejan de ser capaces de crecer y dividirse. $a muerte se debe a la destruccin o inactivacin irreversible de una molcula o estructura esencial Kcomo p. ej. el A:< cromosmico o por creacin de un da>o irreparable en la membranaA. SCmo podemos caracteri&ar o medir en la prctica la inactivacin por calor de una suspensin bacterianaR /e a u algunos parmetros utili&ados? ,#)*po ,2r*#$o *or,al? es el tiempo mnimo re uerido para ue mueran todas las bacterias de una determinada suspensin a una determinada temperaturaU ,#)*po d) r)d&$$#!" d)$#*al? es el tiempo re uerido para reducir al -5E la densidad de la suspensin( a una determinada temperatura Ktambin llamado valor :AU p&",o ,2r*#$o *or,al? es la temperatura mnima ue mata a todas las bacterias en un tiempo determinado Knormalmente el tiempo de referencia empleado es de -5 minA.
PROCEDIMIENTO
AA )=E)A=AC;@< :E $A+ +U+)E<+;B<E+ %;C=B";A<A+ -.8 Adicionar agua destilada a cada cepa ue se va a estudiar cuidado de ue uede turbia a manera de suspensin. ,.8 Colocar - ml de jugo de naranja en un tubo de -0 T -55( - ml de Agua destilada en otro tubo de -0T-55 y - ml de pur de tomate en otro tubo de -0 T -55. +er necesario rotularlos. 0.8 transferir - ml de la suspensin bacteriana preparada a cada tubo "C :E3E=%;<AC;@< :E$ )U<3B 3E=%;CB %B=3A$ K)3%A -.8 Colocar en una gradilla una serie de 4 tubos de -0 T -55 para cada tipo de bacteria a estudiar 0.8 %arcar cada tubo con el nombre de la cepa ue se va a estudiar. 4.8 Anotar en cada tubo las t)*p)ra,&ra+ siguientes ,)+,#'oS 7;VCS ;4VCS G )b&ll#$#!" 1.8 Colocar en cada tubo 5.1 ml de la suspensin bacteriana ue preparaste con agua( jugo de naranja y pur de tomate a tratar 7.8 Calentar la suspensin a la temperatura indicada en un ba>o mara durante -5 minutos E )l ,&bo ,)+,#'o NO SERA CALENTADOC *.8 Caciar el contenido de cada tubo en la superficie de una placa de A'ar "&,r#,#.o y /omogenei&ar por rotacin sobre la mesa o mediante e'tensin con varilla de vidrio doblada a 95 grados ..8 ;ncubar a 09?C durante ,48 4. horas
66
67 9.8 Bbservar si hay crecimiento. CA :E3E=%;<AC;@< :E$ 3;E%)B 3_=%;CB $E3A$K33$A -.8 Colocar en una gradilla una serie de 4 tubos de -0 T -55 para cada tipo de bacteria a estudiar ,.8 %arcar cada tubo con el nombre de la cepa ue se va a estudiar 0.8 Anotar en cada tubo los ,#)*po+ ue se indican a continuacin? T)+,#'oS 9 *#"&,o+S 69 *#"&,o+S 74 *#"&,o+ 4.8 colocar en cada tubo 5.1 ml de la suspensin bacteriana ue preparaste con agua( jugo de naranja y pur de tomate a estudiar 1.8 Calentar en ba>o mara a *5JC para todos los tubos y respetando los tiempos indicados E )l ,&bo ,)+,#'o NO SE CALIENTAC 7.8 Caciar el contenido de cada tubo sobre la superficie de una placa de A'ar "&,r#,#.o y homogenei&ar por rotacin sobre la mesa o e'tensin con varilla de vidrio doblado a 95 grados *.8 ;ncubar las placas a 0*JC durante ,48 4. horas ..8 Bbservar si presenta o no crecimiento
CUESTIONARIO:
-? S!u caractersticas presentan las bacterias llamadas psicrfilasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8 SA u temperatura crecen las bacterias mesfilasR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8 S!u sucede con las protenas en la clula bacteriana cuando se aplica un cambio brusco en la temperatura IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8 SEn u consiste el tiempo trmico letalR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8 SEn u consiste el punto trmico mortalR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7.8 SA u temperatura se reporta el punto trmico mortal para las bacterias estudiadas en los distintos diluyentesR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
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68 *.8 S!u muestras despus de la incubacin reporta el tiempo ptimo para la destruccin de las bacterias en los distintos diluyentesR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
RESULTADOS:
Completa las siguientes tablas despus del tiempo adecuado y temperatura de incubacin para los distintos medios. AA )U<3B 3E=%;CB %B=3A$ K)3%A Cepas E. coli Agua Nugo de <aranja )ur de tomate +. aureus Agua Nugo de <aranja )ur de tomate Z.pneumoniae Agua Nugo de <aranja )ur de tomate 3estig 0* *5QC Ebulli o QC c. 3estig 0* *5QC Ebulli o QC c. :iluyente Crecimiento despus de calentar 3estig 0* *5QC Ebulli o QC c.
"A 3;E%)B 3_=%;CB $E3A$K33$A Cepas E. coli Agua Nugo de <aranja :iluyente Crecimiento despus de calentar 3estig 1 -1mi 05 o min n min.
68
69 )ur de tomate +. aureus Agua Nugo de <aranja )ur de tomate Z.pneumoniae Agua Nugo de <aranja )ur de tomate 3estig 0* *5QC Ebulli o QC c. 3estig 0* *5QC Ebulli o QC c.
OBSERVACIONES:
:ibuja los pasos ue seguiste para la reali&acin de la prctica
CONCLUSIONES: IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
INBIBIDORES BACTERIANOS
69
70 Pr/$,#$a No 69 <ombre :el Alumno?IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII+emestreIIIIII 6rupoIIIIIII <ombre del titularIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIDechaIIIIIIIIIIIIIIIIIIII <ombre del )rofr. de $aboratorioIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Calif?IIIIIIIIIII
OB1ETIVO? El alumno manejar algunas tcnicas para poner de manifiesto la actividad de los antibiticos sobre el crecimiento microbiano. MATERIAL? Cajas de petri con medios de cultivo %uller8/inton( o Agar nutritivo Asa bacteriolgica %echero Disher +ensidiscos K antibiogramasA Denol al 1E SUSTANCIAS BIOLGICAS Cultivo de en caldo nutritivo de ,4 horas de "acillus subtilis K lact bacilosA Cultivo de ,4 horas +taphylococcus aureus en manitol sal Agar KmsaA Cultivo de ,4 horas de Escherichia Coli en medio %acconMey
INTRODUCCIN?
ANTIBITICOS +on sustancias capaces de destruir y eliminar los microorganismos causantes de una infeccin producida por bacterias Kfaringitis( bron uitis( otitis( neumona( amigdalitis( etcA. <o son eficaces cuando la infeccin es producida por virus KgripeA. Cada tipo de antibitico ser efectivo para destruir una clase de microorganismos en funcin de su modo de actuacin..+e les llama antibiticos de amplio espectro a los ue son efectivos frente a un gran n#mero de agentes microbianos? los microorganismos causantes de la infeccin son capaces de desarrollar resistencias al antibitico de manera ue este no ser efica& para eliminarlos. Cada a>o se investiga creando nuevos antibiticos eficaces para las formas microbianas resistentes a sus anteriores tratamientos. +e deben usar siempre bajo prescripcin mdica. E'isten pruebas KantibiogramasA ue determinan el antibitico ms efica& para cada infeccin( pero normalmente se sigue un protocolo de actuacin de los antibiticos de eleccin para cada tipo de infeccin. Es el mdico el profesional ue ju&ga la infeccin e'istente y el antibitico efica& para su tratamiento. $os antibiticos siempre se deben tomar bajo prescripcin mdica y cumplir el
70
71 tratamiento completo. El incumplimiento del tratamiento puede dar lugar a recadas ue precisarn el tratamiento con otro tipo de antibitico por haber desarrollado resistencia al primero. MODO DE ACCION DE LOS ANTIBITICOS -.8 ;nhibicin de la sntesis de la pared celular. ,.8 Alteracin sobre la membrana citoplsmica. 0.8 ;nhibicin de la sntesis proteica.4.8 "lo ueo de la sntesis de los cidos nucleicos.
ANTIBIOGRAMAS
)ara estudiar la sensibilidad de un microorganismo por tcnicas de difusin se dispone de dos sistemas( el de discos de papel impregnados con el antibitico y las tabletas( consistentes en una suspensin del antibitico liofili&ada y comprimida en material inerte. $os fabricantes recomiendan conservar los discos a X,5 PC para largos periodos o entre , y . PC si se utili&an en el pla&o de una semana. )or el contrario( las tabletas se han considerado ms estables( pudindose almacenar a temperatura ambiente y manteniendo su actividad ms tiempo ue los discos .)or lo ue respecta a la temperatura de conservacin( al comparar para cada antibitico los dimetros de los halos de inhibicin de los discos conservados entre 4 y 7 PC con los conservados a temperatura ambiente no se encontraron diferencias significativas a lo largo de todo el estudioU tampoco se encontraron diferencias al comparar los halos de las pastillas conservadas entre 4 y 7 PC con las conservadas a temperatura ambiente( de modo ue tanto los antibiticos ue permanecieron estables durante el tiempo del estudio como los ue disminuyeron su actividad lo hicieron de modo paralelo a ambas temperaturas
PROCEDIMIENTO:
AA )=E)A=AC;@< :E $A+ +U+)E<+;B<E+ %;C=B";A<A+ +uspender la cepa bacteriana en agua destilada logrado obtener una turbiedad del <o -5 del nefelmetro de %ac8 Darland. En caso de no tener el nefelmetro solo cuidar la turbiedad a manera de suspensin. "A AC3;C;:A: :E $B+ A<3;";@3;CB+ E< :;+CB -.8 %arcar , placas %uller8/inton( o Agar nutritivo con el nombre de la cepa +.aureus y otra con el nombre de Z.pneumoniae. ,.8 3omar con un hisopo diferente las muestras ue fueron preparadas en el inciso A de este procedimiento y sembrar las placas rotuladas 0.8 !uemar el hisopo y desecharlo. 4. Colocar un multidisco o discos individuales sobre las placas y presionar ligeramente los discos contra la gelosa 1.8;ncubar las placas a 0*QC durante ,4 horas 7.8 %edir el dimetro de los halos de inhibicin del crecimiento producidos por cada antibitico y notar los resultaos
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CA :E3E=%;<AC;@< :E ;</;";:B=E+ E< $A $EC/E -.8 )reparar el medio de cultivo de la siguiente forma? 8)reparar medio de cultivo %uller8/inton( o Agar nutritivo( esterili&arlo y enfriarlo a 45QC 8 A>adir 5.1 ml de ". +ubtilis obtenido de un cultivo de ,4 horas en caldo nutritivo en una caja de petri esterili&ada 8 Caciar -1 ml del medio de cultivo ya enfriado a 45QC. :istribuir en forma homognea 8 :ejarlo ue solidifi ue. ,.8 3omar una muestra de leche y calentar a ba>o %ara a .5QC durante 0 minutos e'actamente( enfriar bruscamente la leche en un ba>o con hielo 0.8 ;mpregnar un disco de papel filtro con la leche fra( secarlo ligeramente y con unas pin&as esterili&adas depositarlos en el centro de una caja de petri preparada anteriormente 4.8 ;ncubar la placa de -. a ,5 horas a 0*QC y observar las &onas de inhibicin causadas por los antibiticos sobre el ". +ubtilis. 1.8 +i la muestra de leche contiene antibiticos( alrededor del disco se formar un halo( el cual indica la inhibicin de microorganismos y presencia de antibiticos en concentraciones superiores a las permitidas
CUESTIONARIO
-.8 !u funcin tiene lo antibiticosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ,.8!u son los antibiogramas y cul es su funcinR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 0.8%enciona dos causas del por ue los microorganismos pueden llegar a hacerse resistentes a los antibiticosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 4.8En caso de no tener +ensidiscos en el laboratorio? Scmo puedes fabricarlosR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 1.8Escribe dos Duentes naturales de donde se puedan obtener los antibiticos IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7.8+eg#n los resultados de tu prctica . S!u medicamentos puedes utili&ar para destruir y eliminar a los microorganismos como? +taphylococcus y Escherichia ColiR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
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*.8 ;nvestiga u tipo de enfermedades pueden ocasionar los microorganismos estudiados en la prctica IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII ..8E'isti inhibicin de microorganismos y presencia de antibiticos superiores a las permitidas en la leche ue estudiasteRIIIIIIIIpor uR IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
OBSERVACIONES
=eali&a los dibujos de incubacin los resultados obtenidos a las ,4 horas de
CONCLUSIONES
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BIBLIOGRA A
-A :r %artne& =amos( %anual de )rcticas de %icrobiologa 6eneral( Centro de 6raduados e investigacin( ;nstituto 3ecnolgico de Ceracru&( l990. ,A %.C 6aitn /inojosa %ario Alberto( %anual de prcticas de "acteriologa 6eneral( Dacultad e ciencias !umicas ( Universidad de Colima. 0A %anual de $aboratorio Ma"&al de pr/$,#$a+ de M#$rob#olo'(a. Cual uiera de estas prcticas se puede hacer perfectamente en un laboratorio de instituto ... http?OO]]].joseacortes.comOpracticasO Yltima modificacin? 6;>47>3449 ` ,55- por Nos A. Corts 4A El M#$ro+$op#o ptico $o*p&)+,o Pr/$,#$a de laboratorio? %anejo y &+o del *#$ro+$op#o optico $o*p&)+,o. ... %antener seca y limpia la platina del *#$ro+$op#o. +i se derrama +obr) ella ... ]]].joseacortes.comOpracticasOmicroscopio.htm 8 ,0M 8 En cach 8 1A http?OOhtml.rincondelvago.comObiologiaI4-.html 7A http?OOhtml.rincondelvago.comOtincion8de8gram.html *A grficos obtenidos de? http?OO]]].uphs.upenn.eduObugdrugOantibioticImanualOgram.htm .A $as tinciones 8 %onografias.com T#"$#!" +imple? utili&a un solo colorante. T#"$#!" de Gra*? ... En la muestra de la pr/$,#$a anterior 0 eran gran positivo por su coloracin morada. T#"$#!" ... ]]].monografias.comOtrabajos-1O tincionesOtinciones.shtml 8 ,.M 8 En cach 8 )ginas similares
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9A )elc&ar( %ichael( et.al( Elementos de %icrobiologa( %c6ra]8/ill( %e'ico -5A Hinsser( NoMliM aillett Amos( %icrobiologa( Editorial mdica panamericana( -.Q edicin( %'ico. --A Zoheman Elmer ].( et.al. :iagnstico %icrobiolgico( )anamericana( uinta edicin( %'ico.
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DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN MEDIA SUPERIOR

MANUAL DE PRCTICAS DE MICROBIOLOGA

AGOSTO DEL 3445

selectivas..................................................................... 6ram........................................................................ resistente.................................................

RMULA = PREPARACIN DE REACTIVOS USADOS EN LAS DI ERENTES PRCTICAS DE ESTE CURSO

EMPACADO DEL MATERIAL = ESTERILI-ACIN POR CALOR SECO

3ubos )ipetas Cajas de )apel Algodn

14 IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII

ESTERILI-ACIN POR CALOR BDMEDO

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS

Agar base sangre %acconMey

Agar8 %anitol8 +al8 Agar

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO LQUIDOS

%edio de cultivo para caldo %edio de cultivo para caldo Denol al 1E

bA %edios selectivos. +on medios ue contienen sustancias ue impiden o

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