INHIBICION DE MICROORGANISMOS FILAMENTOSOS Y

FLOCULANTES PROVENIENTES DE BARROS ACTIVADOS

MEDIANTE LA APLICACION DE UN SURFACTANTE
CARAVELLI ALEJANDRO, GIANNUZZI LEDA Y ZARITZKY NOEM
FAC. DE INGENIERA. UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA.
CALLE 47 Y 116 (1900) LA PLATA. ARGENTINA.
E-MAIL: zaritzky@volta.ing.unlp.edu.ar
TEL/FAX: (54-221) 425-4853
CURRICULUM ABREVIADO DE LOS AUTORES
AIejandro CARAVELLI
Licenciado en Biologa Orientacin Ecologa. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. UNLP.
Becario de Posgrado del CONICET . Desarrolla su tesis doctoral en el CIDCA ( UNLP
CONICET).
Leda GIANUZZI
Licenciada en Ciencias Qumicas. Orientacin: Qumica Biolgica y Doctora en Ciencias
Qumicas. Fac. de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires. Investigador
Adjunto del CONICET, Profesor Adjunto de la Facultad de Ciencias Exactas, UNLP, Argentina.
Noemi E. ZARITZKY
Ingeniero Qumico de la Universidad Nacional de La Plata y Doctor en Ciencias Qumicas de la
Universidad de Buenos Aires, Investigador Principal del CONICET, Profesor Titular de la
Facultad de Ingeniera, UNLP, Argentina. Vicedirector del Centro de Investigacin y Desarrollo
en Criotecnologa de Alimentos (CIDCA) UNLP CONICET.
PALABRAS CLAVES: Sphaerotilus natans, bulking filamentoso, surfactantes, respirometra,
modelado.

RESUMEN
El proceso de barros activados representa la tecnologa ms ampliamente utilizada
para el tratamiento de aguas residuales. El bulking filamentoso, un problema que ocurre con
frecuencia en las plantas de tratamiento, puede ser remediado por el agregado de sustancias
qumicas.
El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto del surfactante Tritn X-100 sobre
un microorganismo filamentoso (Sphaerotilus natans) y uno floculante (Acinetobacter anitratus)
mediante el empleo de una tcnica respiromtrica y desarrollar un modelo que permita predecir
la fraccin activa del microorganismo filamentoso para diferentes condiciones operativas.
S. natans result ser ms susceptible a la accin del surfactante respecto del
microorganismo floculante A. anitratus. Estudios adicionales deben ser realizados en barros
activados a fin de verificar la efectividad de los surfactantes sintticos en el control del bulking
producido por S. natans y otros tipos de microorganismos filamentosos.
INTRODUCCIN
El proceso de barros activados representa la tecnologa ms ampliamente utilizada
para el tratamiento de aguas residuales. Sin embargo, suelen presentarse problemas que
producen prdida de sedimentabilidad y pobre compactacin de los barros debido al desarrollo
excesivo de microorganismos filamentosos. Este fenmeno, denominado bulking filamentoso,
puede ser controlado mediante mtodos especficos y/o mtodos no especficos.
Los mtodos especficos tienen la finalidad de eliminar las causas responsables de la
proliferacin de microorganismos filamentosos y por lo tanto resulta necesario identificar
previamente las mismas. Como medidas especficas se han implementado selectores
(Chudoba y col., 1973), as como modificaciones del influente, de la configuracin de la planta y
de las condiciones operativas (Jenkins y col., 1993). Sin embargo, las modificaciones
introducidas en el sistema resultan algunas veces imposibles debido a las limitaciones del
diseo de la planta tanto como las caractersticas y capacidad del sistema.
La adicin de sustancias qumicas es una de las formas ms simples del control del
bulking. Compuestos altamente oxidantes como cloro, perxido de hidrgeno y ozono son
empleados para eliminar a las bacterias filamentosas (Neethling, 1984). Sin embargo, estas
sustancias qumicas a menudo tambin atacan a las bacterias floculantes resultando en la falla
del proceso. La cloracin fue uno de los primeros mtodos no especficos de control de bulking
filamentoso (Smith y Purdy, 1936) y actualmente contina siendo ampliamente utilizado
(Switzembaum y col., 1992; Adey y McClintock, 1999). Caravelli y col (2001) determinaron la
cintica de accin del cloro frente a dos tipos microbianos, uno filamentoso y otro floculante.
Sin embargo, es sabido que el agregado de cloro a los efluentes puede ser indeseable debido
a la formacin de productos qumicos llamados cloraminas que resultan ser carcinogenicas.
Entre otras opciones, el agregado de surfactantes qumicos ha comenzado a ser
utilizado debido a que son capaces de lisar bacterias filamentosas. Kitatsuji y colaboradores
(1996) realizaron ensayos de actividad ltica de diferentes surfactantes aninicos y no inicos
sobre S. natans y barros activados con problemas de bulking. El surfactante no inico Tritn X-
100 (50 mg/l) produjo una disminucin del 50% en la densidad ptica a 600nm de una
suspensin de S. natans en solucin buffer (0.1 M KH
2
PO
4
, pH = 7). Estos autores tambin
encontraron que una concentracin de Tritn X-100 de 100 mg/l mejor notoriamente la
sedimentabilidad de los barros activados, provocando lisis de los microorganismos
filamentosos Tipo 1701 y Tipo 021N, sin afectar a los microorganismos floculantes. La principal
ventaja del empleo de surfactantes es su bajo costo. Algunos de ellos son inocuos y pueden
ser fcilmente biodegradables por los microorganismos. Cuando se usan adecuadamente, los
surfactantes son muy tiles para solucionar los problemas del bulking sin daar a los
microorganismos floculantes (Kitatsuji y col., 1996).
Los objetivos del presente trabajo fueron: a) evaluar la prdida de viabilidad en cultivos
puros de un microorganismo filamentoso (Sphaerotilus natans) y uno floculante (Acinetobacter
anitratus) frente al tratamiento con surfactante Tritn X-100 y a partir de estos ensayos poder
determinar las concentraciones mnimas necesarias, pues una sobredosis de surfactante
ocasionara un desarrollo excesivo de espuma, indeseable para el buen funcionamiento de las
plantas de tratamiento, b) desarrollar un modelo que describa la viabilidad del microorganismo

filamentoso Sphaerotilus natans en funcin del tiempo de accin del agente qumico y de su
concentracin.
MATERIALES Y MTODOS
En los ensayos de inactivacin se emple Tritn X-100 (octilfenoxipolietoxietanol), un
detergente no inico sintetizado a partir de octilfenol polimerizado con xido de etileno que
presenta un peso molecular promedio de 625 y un promedio de 9.5 unidades de xido de
etileno por molcula. El tritn X-100 es soluble en H
2
O y solventes orgnicos y es comnmente
empleado en la solubilizacin de membranas celulares.
Como microorganismo filamentoso se emple una cepa de Sphaerotilus natans ATCC
#29329, mientras que la cepa floculante utilizada fue aislada de una planta de tratamiento de
efluentes por barros activados escala laboratorio e identificada como Acinetobacter anitratus.
El medio utilizado en el cultivo de los microorganismos se detalla a continuacin: cido
ctrico monohidrato 3480 mg/l, (NH
4
)
2
SO
4
1000 mg/l, MgSO
4
.7H
2
O 400 mg/l, CaCl
2
.2H
2
O 50
mg/l, KH
2
PO
4
250 mg/l, Na
2
HPO
4
.12H
2
O 1000 mg/l, vitamina B12 100 2g/l, FeSO
4
.7H
2
O 15
mg/l, ZnSO
4
.7H
2
O 5 mg/l, MnSO
4
.H
2
O 3 mg/l, CuSO
4
.5H
2
O 0.75 mg/l, CoCl
2
.6H
2
O 0.15 mg/l,
(NH4)
6
Mo
7
O
24
.4H
2
O 0.5 mg/l, BO
3
H
3
0.1 mg/l, IK 0.1 mg/l.
Se emple un quimiostato para la obtencin de los cultivos puros de los
microorganismos. Las condiciones operativas fueron las siguientes: temperatura 30 GC, pH = 7
y velocidad de dilucin de 0.17 / h.
La concentracin de biomasa se determin mediante medidas de demanda qumica de
oxgeno (DQO), las cuales fueron transformadas a unidades de slidos suspendidos voltiles
(SSV) a travs de una curva de calibracin previamente realizada.
Ensayos de inactivacin
Los ensayos de inactivacin de ambas cepas se realizaron en un recipiente con
agitacin magntica y control de temperatura (30 GC).
A partir del quimiostato operando bajo condiciones de estado estacionario se obtuvo
una muestra de 20 mL de cultivo y se coloc en un respirmetro que consisti en un biorreactor
con cierre hermtico conteniendo un electrodo de oxgeno (YSI Modelo 58). Como sustrato
oxidable se agreg 1 mL de una solucin de cido ctrico (3.5%, pH = 7) y luego de un minuto
de contacto la mezcla fue aireada. Una vez que la aireacin fue detenida se registr la
concentracin de oxgeno en funcin del tiempo y se obtuvo la velocidad de consumo de
oxgeno (OUR, oxygen uptake rate, mgO
2
/l.h).) de la muestra control (OURo).
En el tratamiento con tritn, 300 mL de cultivo fueron colocados en el recipiente con
agitacin magntica para proceder al agregado de diferentes volmenes de una solucin de
tritn (10 gr/l) para obtener un rango de concentraciones del surfactante que vari entre 60-220
mg/l. A diferentes tiempos de contacto, 20 mL fueron trasvasados al respirmetro y 1 mL de la
solucin de cido ctrico fue agregado. Luego de 1 minuto de contacto el cultivo fue aireado
para determinar la OUR correspondiente al tratamiento con tritn.
Tanto en las muestras control como en las tratadas con el surfactante se emplearon
diferentes concentraciones de biomasa (300-1200 mgSSV/l) obtenidas por dilucin con el
medio de cultivo descripto previamente pero carente de cido ctrico en su composicin. Esto
permiti determinar si la inactivacin de los microorganismos en funcin del tiempo resultaba
afectada por la concentracin de biomasa presente en cada ensayo.
Una tcnica respiromtrica permiti evaluar la accin del tritn X-100 sobre los
microorganismos. La respirometra est basada en la relacin entre la velocidad de consumo
de oxgeno y la concentracin de biomasa (X) segn la siguiente ecuacin:
X q OUR
2
O
(1)
donde q
O2
es la velocidad especfica de consumo de oxgeno (mgO
2
/gSSV.h).
Considerando que la velocidad de consumo de oxgeno (OUR) es proporcional a la
concentracin de la biomasa activa (Xv), la tcnica respiromtrica permiti determinar la
fraccin activa de bacterias (F
R
) mediante la siguiente ecuacin:

vo
v
o
R
X
X
OUR
OUR
F (2)
donde OURo es la velocidad de consumo de oxgeno inicial, Xvo es la biomasa activa inicial
(previo al tratamiento con tritn), OUR y Xv corresponden a los valores luego del tratamiento.
RESULTADOS
En todos los experimentos realizados las curvas F
R
(fraccin activa de las bacterias)
obtenidas para cada microorganismo, luego de la aplicacin del surfactante tritn X-100 (60-
220 mg/l), resultaron prcticamente independientes de las concentraciones de biomasa
empleadas (300-1200 mgSSV/l). La figura 1a muestra la fraccin activa F
R
de un cultivo puro
de A. anitratus en funcin del tiempo (t, min) para una concentracin de tritn de 120 mg/l.
Puede apreciarse que los valores F
R
no son afectados por la concentracin de biomasa
empleada y alcanzan un valor F
R
de aproximadamente 0.9 a partir de los 5 minutos de contacto
con el surfactante. La figura 1b representa las curvas F
R
en funcin del tiempo para un cultivo
puro de S. natans y una concentracin de tritn de 60 mg/l. Al igual que para el microorganismo
floculante la concentracin de biomasa no afect la fraccin activa F
R
, que present un valor de
0.6 a partir de los 5 minutos de contacto con el surfactante.
t (min)
0 5 10 15 20 25
F
r
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
t (min)
0 5 10 15 20 25
F
r
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
a)
b)
Figura 1: Fraccin activa (F
R
) en funcin del tiempo para diferentes concentraciones de
biomasa y distintos microorganismos. a) Microorganismo floculante A. anitratus. Concentracin
de biomasa (mgSSV/l): () 310, (3) 570, (8) 830. Concentracin de tritn X-100: 120 mg/l. b)
Microorganismo filamentoso S. natans. Concentracin de biomasa (mgSSV/l): () 600, (V)
980, () 1200. Concentracin de tritn X-100: 60 mg/l.
En todos los ensayos realizados el grado de inactivacin alcanzado dependi del
microorganismo empleado y de las concentraciones de tritn ensayadas. La figura 2 muestra
algunas curvas de F
R
en funcin del tiempo en cultivos puros de S. natans y A. anitratus
expuestos a diferentes concentraciones de surfactante.

t (min)
0 5 10 15 20 25
F
r
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
Figura 2: Fraccin activa (F
R
) en funcin del tiempo para diferentes concentraciones de
tritn X-100 (C, mg/l). S. natans () 80, (V) 120; A. anitratus () 80, (3) 220.
A. anitratus sometido a una concentracin de tritn de 80 mg/l present un valor de F
R
de 0.85 a partir de los 5 minutos de contacto con el surfactante, resultando ser apenas inferior
(F
R
= 0.75) cuando la concentracin fue de 220 mg/l. Por el contrario, S. natans exhibi una
inactivacin gradual en funcin del tiempo alcanzando una fraccin activa de aproximadamente
0.25 a los 20 minutos de contacto con el surfactante (80 mg/l), mientras que el valor F
R
disminuy hasta alcanzar un valor de 0.1 a los 10 minutos de contacto cuando la concentracin
del surfactante fue 120 mg/l, tiempo a partir del cual la fraccin activa se mantuvo constante.
De estos ensayos puede concluirse que S. natans result ser muy susceptible al tritn en el
rango de concentraciones ensayadas, mientras que el microorganismo floculante result poco
afectado an a concentraciones relativamente altas (220 mg/l).
Si bien puede afirmarse que el microorganismo filamentoso result ser mucho ms
sensible a la accin del tritn respecto del floculante, an no se conocen las causas de esta
susceptibilidad diferencial. Kitatsuji y colaboradores (1996) proponen como posible explicacin
la destruccin de la bicapa fosfolipdica que rodea la superficie celular de las bacterias
filamentosas gram-negativas por accin de surfactantes fuertes (SDS y Tritn X-100). Sin
embargo, muchas bacterias floculantes que son gram-negativas, como es el caso de A.
anitratus, no resultan afectadas por estos surfactantes. Frente a estas evidencias dichos
autores sostienen que la vaina que presentan muchas bacterias filamentosas (S. natans entre
otras) podra desempear funciones de proteccin entorno de membranas celulares
relativamente dbiles respecto de aquellas membranas que se encuentran en bacterias que no
presentan vaina.
Teniendo en cuenta que uno de los factores que determinan la efectividad del control
del bulking filamentoso cuando se emplean sustancias qumicas es el tiempo de contacto, se
propuso un modelo que permita predecir tiempos de contacto requeridos para lograr los
porcentajes de inactivacin de S. natans necesarios para las diferentes concentraciones de
tritn aplicadas.
En la figura 3 se grafican algunos ejemplos de los datos experimentales de inactivacin
de S. natans en funcin del tiempo de contacto con tritn para concentraciones de 60, 80 y 100
mg/l.

t (min)
0 5 10 15 20 25
l
n

F
R
-3
-2
-1
0
Figura 3: Relacin entre ln F
R
para S. natans y tiempo (t) para diferentes
concentraciones de tritn X-100 (C, mg/l). Datos experimentales: () 60, (3) 80, (8) 100.
Modelo propuesto (ecuacin 4) : () 60, (- - -) 80, (....) 100.
Los datos experimentales de inactivacin de S. natans en funcin del tiempo, para las
distintas concentraciones de tritn (60-120 mg/l) y biomasa (200-1200 mgSSV/l), se modelaron
de acuerdo a la siguiente ecuacin:
v
v
X k
dt
dX
(3)
donde k representa la constante de decaimiento de la biomasa activa (Xv) y donde la
concentracin de tritn se mantuvo constante para cada experimento.
Integrando la ecuacin (3) y combinando con la ecuacin (2) resulta:
t k F ln
R
(4)
Como puede observarse en la figura 3 el modelo propuesto (ecuacin 4) ajusta
satisfactoriamente los datos experimentales. La pendiente de la recta obtenida a partir de esta
ecuacin corresponde a la constante de decaimiento k.
En la figura 4 se grafica la constante de decaimiento k de la biomasa activa de S.
natans en funcin de la concentracin de tritn (C, mg/l).

C (mg/l)
0 20 40 60 80 100 120 140
k
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
0.40
C (mg/l)
0 20 40 60 80 100 120 140
k
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
0.40
Figura 4: Constante de decaimiento (k) para S. natans en funcin de la concentracin
de tritn X-100 (C, mg/l). Datos experimentales: (). Ecuacin emprica propuesta: : ().
La siguiente ecuacin permiti relacionar la constante de decaimiento de k y la
concentracin de tritn:
) 1 (exp a k
C b
(5)
donde C (concentracin de tritn, mg/l).
Como puede apreciarse en la figura 4 un ajuste satisfactorio pudo ser obtenido,
resultando a = 0.04941 y b = 0.01183.
La ecuacin (5) permite calcular la constante de decaimiento k de la biomasa activa
para cualquier concentracin de tritn empleada. La aplicacin de este valor a la ecuacin (4)
permite predecir los valores F
R
en funcin del tiempo. Puede observarse que el modelo
propuesto ajusta satisfactoriamente a los datos experimentales y sirve para predecir la fraccin
de microorganismos activas para diferentes condiciones operativas (concentracin de tritn y
tiempo de contacto), resultando independiente de la concentracin de biomasa.
CONCLUSIONES
^ El tritn X-100 afect sensiblemente la actividad respiratoria del microorganismo
filamentoso S. natans. El microorganismo floculante A. anitratus no result sensiblemente
afectado en el rango de concentracin de tritn ensayado (60-220 mg/l).
^ El grado de inactivacin de S. natans dependi de la concentracin de tritn, y fue
prcticamente independiente de la concentracin de biomasa empleada.
^ Se ha propuesto un modelo que permite predecir la fraccin activa de un cultivo puro de S.
natans en funcin de la concentracin de tritn y tiempo de contacto empleado.
^ El tritn ha resultado adecuado para eliminar microorganismos filamentosos sin afectar
significativamente los microorganismos floculantes constituyendo una alternativa para el
tratamiento del bulking filamentoso.

REFERENCIAS
Adey A.H. and McClintock S.A. (1999) Battle of the bulk. Industrial Wastewater 7, 34 -37.
Caravelli A., Contreras E., Giannuzzi L. y Zaritzky N. (2001) Evaluacin de la toxicidad del cloro
en microorganismos filamentosos y floculantes mediante tcnicas respiromtricas. Ingeniera
Sanitaria y Ambiental 54, 37-40.
Chudoba J., Grau P. and Ottova V. (1973) Control of activated sludge filamentous bulking II:
Selection of micro-organisms by means of a selector. Wat. Res. 7, 1389-1406.
Jenkins D., Richard M. G. and Daigger G. T. (1993) Manual on the causes and control of
activated sludge bulking and foaming. 2
nd
Edition. Lewis Publishers, Inc., Chelsea, Michigan.
Kitatsuji K., Miyata H., Fukase T. (1996) Lysis of filamentous bacteria by surfactants. Wat. Sci.
Tech., 34, 145153.
Neethling J.B. (1984) The Control of Activated Sludge Bulking by Chlorination. Ph.D.
dissertation, Dept. of Civil Engineering, Univ. of California, Berkeley, CA, USA.
Smith R.S. and Purdy W.C. (1936) The use of Chlorine for correction of sludge bulking in the
activated sludge process. Sew. Wks. J., 8 (2) 223-230.
Switzenbaum M.S, Plante T.R. and Woodworth B.K. (1992) filamentous bulking in
Massachusetts: extent of the problem and case studies. Wat. Sci. Tech. 25, 265 - 271.