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Extraccin de constituyentes txicos

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Extraccin de constituyentes txicos para las ensayos de toxicidad


Isabel Romero Tern

Campo de aplicacin
Este procedimiento complementario describe el mtodo recomendado para llevar a cabo la extraccin de constituyentes txicos para las pruebas de toxicidad. Es aplicable a muestras con una concentracin mayor a 0.5 % de slidos a las que una vez extradas se les realizar una prueba de toxicidad aguda o crnica.

Definiciones
Prueba de extraccin: procedimiento de laboratorio que permite determinar la movilidad de los constituyentes de un residuo, que lo hacen peligroso por su toxicidad al ambiente.

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Material
Filtros de fibra de vidrio, sin aglutinantes, con un tamao efectivo de poro de 0.6 a 0.8 m equivalente; vasos de precipitado o matraces Erlenmeyer de vidrio de 500 mL; vidrio reloj de dimetro adecuado para cubrir el vaso de precipitado o el matraz Erlenmeyer; agitador magntico; termmetro de 0 a 100 C.

Equipo
Equipo de agitacin rotatorio. Este aparato de agitacin debe ser capaz de hacer girar el vaso o recipiente de extraccin a 30 2 r.p.m. Recipientes de extraccin. Se necesitan frascos con suficiente capacidad para contener la muestra y el reactivo de extraccin. No es necesario que estos frascos queden completamente llenos y pueden ser de diferentes materiales como vidrio de borosilicato o plstico de politetrafluoroetileno (PTFE). Los recipientes de extraccin y los equipos de filtracin deben ser de materiales inertes que no lixivien o absorban los componentes del residuo. Equipo de filtracin. Se puede utilizar cualquier unidad de filtracin capaz de sostener un filtro de fibra de vidrio y resistir la presin para llevar a cabo la separacin. Estas unidades de filtracin deben tener un volumen interno mnimo de 300 mL y deben estar adaptadas para acomodar un filtro de 47 mm de dimetro como mnimo. Se recomienda una unidad de filtracin que tenga una capacidad interna de 1.5 L ms y que est equipada para dar cabida a filtros de 142 mm de dimetro. Medidor de pH que cubra el intervalo de medicin de 0 a 14 U de pH a 25 C; balanza analtica con sensibilidad de 0.1 mg; parrilla con

agitacin y calentamiento; estufa con control de temperatura para trabajar a 100 5 C.

Reactivos y soluciones
Los productos qumicos utilizados deben ser grado analtico, a menos que se indique otro grado. El agua utilizada debe ser deionizada. Solucin de cido clorhdrico (HCl) 1.0 N; solucin de cido ntrico (HNO3) 1.0 N; solucin de hidrxido de sodio (NaOH) 1.0 N; cido actico glacial (CH3CH2COOH).

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Fluido de extraccin # 1 Adicionar 5.7 mL de cido actico glacial a 500 mL de agua. Posteriormente, adicionar 64.3 mL de NaOH 1.0 N y llevar a un volumen de un litro. Cuando este fluido ha sido correctamente preparado presenta un valor de pH de 4.93 0.05. Fluido de extraccin # 2 Diluir 5.7 mL de cido actico glacial a un litro de agua. Cuando este fluido ha sido correctamente preparado presenta un valor de pH de 2.88 0.05. Los reactivos de extraccin deben ser verificados frecuentemente. Su pH debe comprobarse para asegurar que sea el correcto. Si se encuentran impurezas o el pH no est dentro de los lmites, se debe desechar el reactivo y preparar uno nuevo.

Preservacin de muestras
Las muestras y los extractos obtenidos deben ser preparados para el anlisis tan pronto como sea posible y mantenerse en refrigeracin a 4 C. Los extractos para las determinaciones de toxicologa se guardan en frascos de vidrio o polietileno y se mantienen en refrigeracin hasta su anlisis.

Procedimiento
Para la extraccin de los componentes txicos de las muestras se deben realizar los pasos que se detallan a continuacin. Evaluaciones preliminares Realizar las evaluaciones preliminares con una alcuota de la muestra de un mnimo de 100 g. Esta alcuota se emplea nicamente para las evaluaciones preliminares que incluyen: 1.1. Determinar de forma preliminar el porcentaje de slidos: Si la muestra no produce lquido cuando est sujeto a la presin de filtracin (es decir es 100 % slido) continuar con el inciso 1.3.

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1.2. Si la muestra es lquida o polifsica, se requiere la separacin slidolquido para hacer la determinacin preliminar del porcentaje de slidos. Esto involucra el equipo de filtracin mencionado en la seccin de equipos y materiales. 1.2.1. Pesar el filtro y el recipiente que recibir el filtrado. 1.2.2. Ensamblar el porta filtros y colocar el filtro sobre el soporte y asegurarlo. 1.2.3. Pesar una parte de la muestra (mnimo 100 g) y registrar el peso. 1.2.4. Las muestras que sedimentan lentamente pueden centrifugarse antes de filtrar. La centrifugacin se utiliza como una ayuda de la filtracin. Si sta es utilizada primero, el lquido debe ser decantado y filtrado continuando con la filtracin de la porcin slida. 1.2.5. Transferir cuantitativamente la muestra al equipo de filtracin de una manera uniforme sobre la superficie del filtro. Dejar que la muestra se estabilice a temperatura ambiente en el aparato antes de ser filtrada, ya que si la filtracin se hace a 4 C, esto reduce la cantidad de lquido extrado. Si ms de 1% del peso de la muestra se ha adherido al recipiente utilizado para transferir la muestra al aparato de filtracin, determinar el peso de este residuo y restarlo del peso de la muestra calculado en el inciso 1.2.3 para conocer el peso efectivo del residuo que se filtr. Aplicar gradualmente la presin a travs del filtro e incrementarla lentamente de 10 psi hasta 50 psi para que todo el lquido pase hasta que el flujo del lquido haya cesado. 1.2.6. El material retenido en el filtro se define como la fase slida y el filtrado como la fase lquida. Determinar el peso de la fase lquida restando el peso del recipiente vaco, del peso total del recipiente con el filtrado. Determinar el peso de la fase slida de la muestra restando el peso de la fase lquida del peso total de la muestra. Calcular el porcentaje de slidos como sigue: % de slidos = Peso de slido Peso total de la muestra * 100

1.2.7. Si el porcentaje de slidos determinado en el inciso 1.2.6 es 0.5%, entonces continuar ya sea con el inciso 2 para determinar si el material slido requiere reduccin de tamao de partcula o con el inciso 1.3 1.2.8. Si el porcentaje de slidos determinado es menor que 0.5% continuar con el inciso 4.6.

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1.3. Determinar el porcentaje de slidos secos. 1.3.1. Quitar del aparato de filtracin la fase slida y el filtro. 1.3.2. Secar el filtro y la fase slida a 100 5 C, hasta que despus de ser pesados dos veces consecutivas no varen en 1.0%. Registrar el peso final. 1.3.3. Calcular el porcentaje de slidos secos de la siguiente manera: % slidos secos = (Peso del residuos slido + filtro) - Peso del filtro Peso inicial del residuo * 100

1.3.4. Si el porcentaje de slidos secos es < 0.5% continuar con 4.1, si es 0.5%, tomar una porcin fresca de muestra, determinar si la reduccin de tamao de la partcula es necesaria y seleccionar el fluido de extraccin adecuado. 2. Determinar si la muestra requiere reduccin de tamao de partcula. Evaluar el slido para determinar el tamao de la partcula. A menos que el rea superficial del slido sea, por gramo de materia, igual o mayor que 3.1 cm2 o menor que 1.0 cm2 en su dimensin ms angosta, se requiere la reduccin del tamao de la partcula. El slido debe ser capaz de pasar a travs de una malla estndar de 9.5 mm o 0.375 pulgadas, si el rea superficial es menor o el tamao de la partcula es ms grande de lo sealado anteriormente, preparar la porcin slida de los desechos para la extraccin, comprimiendo, cortando o triturando los desechos hasta obtener un rea superficial o tamao de la partcula igual a la descrita anteriormente. 3. Seleccionar el fluido de extraccin adecuado: 3.1. Pesar una fraccin de la fase slida, reducir si es necesario a un tamao de partcula de aproximadamente 1 mm de dimetro o menos y transferir 5 g a un matraz Erlenmeyer de 250 mL o un vaso de precipitado. 3.2. Aadir 96.5 mL de agua, cubrir con un vidrio de reloj y agitar durante 5 minutos en una parrilla de agitacin magntica, sacar y dejar sedimentar, medir el pH. 3.3. Si el pH es < 5 utilizar el fluido de extraccin 1. Si es > 5 adicionar 3.5 mL de HCl 0.1 N, mezclar y cubrir con un vidrio de reloj, calentar a 50 C y mantener la temperatura por 10 min. 3.4. Dejar enfriar a temperatura ambiente y medir el pH, si es < 5 utilizar el fluido de extraccin 1 y si es > 5 utilizar el fluido de extraccin 2. 4. Determinar los constituyentes txicos. 4.1. Se recomienda un tamao mnimo de muestra de 100 g.

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4.2. Si la muestra no produce lquido, cuando se somete a filtracin (100% slido), pesar una porcin de la muestra (100 g ) y continuar con 1.3 4.3. Si la muestra es lquida o multifsica, se requiere una separacin lquido-slido. Esto involucra el equipo de filtracin descrito en el apartado de materiales y equipos. 4.4. Pesar el recipiente que recibir el filtrado. 4.5. Ensamblar el portafiltro y colocar el filtro en el soporte y asegurarlo. 4.6. Pesar una fraccin de muestra (100 g mnimo). Si el residuo contiene menos del 0.5% de slidos secos, la porcin lquida del residuo, despus de la filtracin, se define como el extracto. Por lo tanto, se debe filtrar suficiente muestra para que la cantidad de lquido filtrado alcance para realizar todos los anlisis requeridos. Para residuos que contienen ms del 0.5% de slidos secos, utilizar la informacin del porcentaje de slidos obtenido, para determinar el tamao ptimo de la muestra (100 g mnimo) que se llevar a filtracin. 4.7. Dejar sedimentar la fase slida, las muestras que sedimenten lentamente pueden centrifugarse antes de la filtracin. 4.8. Transferir cuantitativamente la muestra (fase lquida y slida) al equipo de filtracin, verter la muestra en forma uniforme sobre la superficie del filtro, continuar como se indica en 1.2.5 4.9. El material en el portafiltro se define como la fase slida del residuo, el filtrado como la fase lquida, pesar el filtrado. 4.10. Si la muestra contiene menos del 0.5% de slidos secos continuar con 4.6. Si el residuo contiene ms del 0.5 de slidos secos y fue necesaria la reduccin de tamao de partcula, continuar con 4.2. Si el residuo pasa un tamiz de 9.5 mm, transferir cuantitativamente el material slido a un frasco de extraccin junto con el filtro (usado para separar la fase lquida inicial de la fase slida) y continuar con 5. 4.11. Preparar la porcin slida del residuo para extraccin. Cuando el tamao de la partcula est preparado adecuadamente, transferir cuantitativamente el material slido a un frasco de extraccin. Incluir el filtro utilizado para separar el lquido inicial de la fase slida. 5. Determinar la cantidad del fluido de extraccin necesario como sigue: Peso del fluido = 20 * % slidos * Peso de la muestra filtrada 100

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Agregar lentamente al recipiente extractor la cantidad de fluido de extraccin calculado. Cerrar bien el vaso extractor (se recomienda utilizar cinta de tefln para asegurar un sello hermtico), asegurar el recipiente en el aparato de agitacin rotatorio y hacer girar a 30 2 rpm por 18 2 horas. La temperatura ambiente debe mantenerse a 23 2 C durante el perodo de extraccin. 6. Despus de las 18 2 horas de extraccin, separar el material en el recipiente extractor en sus fases lquida y slida, filtrando a travs de un filtro de fibra de vidrio nuevo. Para la filtracin final del extracto, es necesario cambiar el filtro de fibra de vidrio, para facilitar la extraccin. El filtrado obtenido es la muestra para evaluar toxicidad. 7. Preparar el extracto obtenido. 7.1. Si el residuo no contiene fase lquida inicial, el lquido filtrado obtenido se define como el extracto. 7.2. Si los lquidos son compatibles, combinar el lquido filtrado con el lquido inicial del residuo obtenido en 6. Este lquido combinado se define como el extracto. Continuar con 8. 7.3. Si la fase lquida inicial del residuo, obtenida en 4.8 no es o no puede ser compatible con el lquido filtrado resultante en 6, no combinar los lquidos, analizar por separado cada uno y combinar los resultados matemticamente, como se describe en 8.2. 8. Despus de colectar el extracto, medir el pH y guardar el extracto para su anlisis. 8.1. Si las fases individuales van a ser analizadas separadamente, determinar el volumen de la fase individual ( 0.5%), realizar los anlisis requeridos y combinar los resultados matemticamente, utilizando un promedio volumen-peso, como se indica: Concentracin final del analito = V1 C1 + V2 C2 V1 + V2

donde: V1= Volumen del primer extracto (L) C1= La concentracin del analito de inters en el primer extracto (mg/L) V2= El volumen del segundo extracto (L) C2= La concentracin del analito de inters en el segundo extracto (mg/L)

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Control de calidad
Preparar un blanco del fluido de extraccin tratndolo igual que una muestra, para monitorear posible contaminacin. Analizar una muestra por duplicado por cada lote de muestras o por cada 20 muestras.

Bibliografa
NOM-053-SEMARNAT-1993 que establece el procedimiento para llevar a cabo la prueba de extraccin para determinar los constituyentes que hacen a un residuo peligroso por su toxicidad al ambiente. Diario Oficial de la Federacin del 2 de octubre de 1993, SEGOB, Mxico. United States Environmental Protection Agency (USEPA). Method 1311 Toxicity Characteristic Leaching Procedure. Revisin julio de 1992.