Dr.

Juan Carlos Gardn

Aplicaciones del ultrasonido en la produccin animal I.- Fisiologa Reproductiva.

APLICACIONES DEL ULTRASONIDO EN LA PRODUCCIN ANIMAL I.- FISIOLOGA REPRODUCTIVA.

INTRODUCCIN. La ultrasonografa es un mtodo de diagnstico que se utiliza en medicina humana y veterinaria desde hace varias dcadas. Bsicamente se basa en la emisin de un pulso acstico de muy alta frecuencia al interior del cuerpo explorado y, a continuacin, se recibe la energa reflejada al propagarse en este. Esta energa reflejada tambin llamada ECO, es cuantificada y expresada de diferentes maneras (47). A diferencia de otros sistemas de diagnstico (rayos X) se considera inocuo por no emitir radiaciones, y ofrece una gran capacidad de visualizar tejidos blandos. Hasta el presente se han desarrollado diferentes sistemas de emisin de ultrasonido que se aplican en produccin animal. Bsicamente existen tres diferentes modos de emisin de ultrasonido. El Modo tipo-A (modo de amplitud), el Doppler y el Modo tipo-B (modo por imagen). La ultrasonografa en tiempo real o modo tipo B, tiene en la actualidad como principal propsito en produccin animal, el poder utilizar un mtodo de diagnstico de gestacin certero y precoz. En forma diferente a los tradicionales equipos de Doppler o ultrasonido (tipo-A), el Modo tipo-B produce una imagen en dos dimensiones de los tejidos escaneados sobre una pantalla semejante a un televisor en blanco y negro. Esta imagen se produce por un transductor manual que emite ondas de ultrasonido que son las que penetran en los tejidos. A medida que la onda de sonido atraviesa tejidos de diferente densidad, la onda es reflejada nuevamente hacia el transductor (eco) que convierte esos sonidos en una seal visual. Los tejidos varan en densidad, y esta diferente densidad de los tejidos se refleja en varias intensidades de brillo (sobre una escala de grises) que se despliega sobre la pantalla. Como los datos recogidos son presentados como una imagen sobre una pantalla, la imagen debe ser interpretada por una persona con experiencia. Debido a esta necesidad de interpretacin, el entrenamiento y la prctica son pre-requisitos para el uso exitoso de la aplicacin de esta tecnologa en las explotaciones pecuarias. Debido al alto costo de los equipos, el tamao grande y su fragilidad, hasta hace pocos aos, no se ha introducido masivamente la aplicacin de la ultrasonografa en produccin animal. Recientemente, varias compaas fabricantes de equipos de ultrasonido han comenzado a comercializar aparatos ms accesibles econmicamente, compactos y durables para su uso especfico en produccin animal. El propsito de este escrito es familiarizar al estudiante/profesional con los principios fsicos de la ultrasonografa, los tipos de equipos de ultrasonografa existentes para su uso en produccin animal.

RESEA HISTRICA En el ao 1880 Curie descubri un efecto llamado "piezoelctrico". La piezoelectricidad es la propiedad que nos permite la transduccin de los sonidos. Un material con propiedades piezoelectricas se caracteriza porque al aplicarle una deformacin mecnica nos produce una tensin elctrica, y viceversa, una tensin elctrica nos provoca una deformacin mecnica (8).

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Estos materiales hicieron posible transformar los pulsos elctricos en las ondas de ultrasonido y subsiguientemente una conversin de la cantidad de energa a partir de las ondas reflejadas en pulsos elctricos (9). Ya en el ao 1920 Solokov propone aplicaciones del ultrasonido en la medicina, aunque estas no pudieron llevarse a cabo sino hasta 1960. Durante la Segunda Guerra Mundial las ondas ultrasnicas conocidas como SONAR (Sound Navigation and Ranging), fueron utilizadas para detectar submarinos. El primer sistema para inspeccionar el abdomen y la cavidad plvica en seres humanos, se bas en una tcnica similar al sonar. En el ao 1947 D. H. Howry construye partes de lo que seria el primer ecgrafo bidimensional de uso mdico. En este caso, el paciente u rgano de estudio deban sumergirse en un tanque con agua. El ultrasonido lleva su nombre debido a que los equipos utilizan ondas de sonido de alta frecuencia por encima de la sensibilidad del odo humano. La frecuencia de las ondas de sonido es el nmero de veces que esa onda se repite (ciclos o Hertz) por segundo. El ser humano puede or sonidos con una frecuencia de hasta 20.000 Hertz, que puede simbolizarse como 20 kilo hertz o abreviado como 20 kHz. Los equipos de ultrasonido utilizan sonidos de frecuencias mucho ms altas, con un rango de 2,000,000 a 10,000,000 Hertz, que puede representarse como 2 - 10 mega hertz o abreviarse como 2 - 10 mHz. (11). El diagnostico por ultrasonido se basa en la interaccin de una onda ultrasnica propagndose por los tejidos. En la dcada de 1950, diversos investigadores (9) informaron sobre la utilizacin el modo-A (modulacin de amplitud) para las imgenes ultrasnicas de los tejidos biolgicos. La tecnologa continu progresando hasta hoy y el modo-B (modulacin de brillo) es una tecnologa ampliamente utilizada para obtener imgenes de diferentes tipos de tejidos.

PRINCIPIOS FSICOS DE LA ULTRASONOGRAFA

La emisin de altas frecuencias son necesarias para la penetracin de los tejidos y la resolucin de las imgenes. Las ondas de frecuencias menores (2 mHz) pueden penetrar tejidos ms profundamente que las ondas de mayor frecuencia (10 mHz). A su vez, las ondas de alta frecuencia tienen mejor poder de resolucin (calidad de imagen) que las de baja frecuencia. Estas ondas de sonido son producidas por el transductor. Muchos transductores emiten ondas de sonido de una nica frecuencia. Los tejidos animales tienen diferentes densidades, caracterizadas por la diferencia de velocidad en la propagacin de las ondas a travs de los tejidos. Por consiguiente estas diferencias permiten el uso de ultrasonidos para caracterizar estos tejidos para diferentes propsitos. Las velocidades los diferentes tejidos animales (12, 45) son: TEJIDO VELOCIDAD (m/s) Sangre 1,549-1565 Grasa 1,476 Tejido conjuntivo 1,545 Msculo esqueltico Longitudinal 1,592 Transversal 1,545 Hueso 3,406-4,030 Calibracin del Escner 1,540 2

Dr. Juan Carlos Gardn MODOS DE EMISIN

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Una imagen de ultrasonido se genera cuando una corriente elctrica se aplica al cristal electrnico localizado en el transductor y las ondas generadas se dirigen hacia el tejido. La onda de sonido viaja a travs del tejido biolgico hasta que impacta en un tejido de una densidad diferente y un eco es devuelto al transductor. Este eco se convierte posteriormente en un signo elctrico y es interpretado por el equipo como un pico osciloscopio, un sonido, una luz o bien como variaciones en brillo desplegadas en un tubo de rayos catdicos como un punto. El brillo del punto depende de la amplitud, o intensidad, del eco. El tiempo que toma el eco para reflejarse nuevamente al transductor determina la situacin o posicin del punto o pixel en la pantalla. Todos los equipos de ultrasonido emiten una seal pulstil de ultrasonido. Los ecos de esta seal se despliegan de diferente manera. Existen tres modos diferentes de emisin: Modo tipo-A (modo de amplitud) Doppler. Modo tipo-B (modo por imagen) El modo tipo-A El modo tipo-A es el ms simple de los equipos de ultrasonido (fotos 1 y 2), con la seal de la onda sonora de eco que al volver se despliega en forma de un tono audible, como emisin de una seal luminosa (light-emitting diodes: LED), o como una traza osciloscpica. Una seal positiva (por ej., un tono audible, una luz verde, un pico osciloscopio) aparece cuando la onda sonora emitida del ultrasonido tipo-A es reflejada desde el abdomen al encontrar una estructura llena de lquido, como el tero gestante con los lquidos fetales. Una seal positiva (figura 1) puede provenir de alguna otra estructura llena de lquido, como la vejiga de la orina. Por lo tanto, resultados falsos positivos puede obtenerse con el uso de estos equipos. El ultrasonido tipo-A es el ms fcil de usar, de poco costo y el tiempo de entrenamiento en mnimo. La efectividad del tipo-A es mejor despus del da 28 de gestacin.

Foto 1. Foto 2

Fotos 1 y 2: Equipos ultrasonogrficos Modo tipo-A. Figura 1: Representacin en pantalla de la seal que indica preez positiva (1) Figura 1 3

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Doppler : Los equipos Doppler se valen del efecto Doppler. El efecto Doppler trabaja emitiendo una onda de sonido y detectando el aumento o disminucin del movimiento de una fuente distante que emite una onda sonora y se observa un cambio en la frecuencia de la onda sonora que se refleja. Los equipos Doppler convierten la frecuencia de la onda sonora que se refleja en seales audibles, escuchados por unos auriculares. En las cerdas, los movimientos indicativos de preez dependen del tiempo de gestacin y son debidos al flujo sanguneo de la arteria uterina media, al flujo sanguneo de las arterias umbilicales, el latido cardaco del feto y los movimientos fatales. Los falsos positivos pueden ocurrir si los sonidos se toman de vasos sanguneos de rganos no reproductivos, como el aparato digestivo. El Doppler fue uno de los primeros ultrasonidos utilizados en la industria porcina. El equipo es fcil de usar y no costoso, pero necesita de mayor entrenamiento que el ultrasonido tipo-A. La eficiencia del Doppler es mejor despus del da 30 de gestacin.

Modo Tipo-B: La ultrasonografa del tipo-B o tambin llamada de tiempo-real, trabaja convirtiendo los ecos en seales elctricas. Estas seales se traducen en una escala de pxeles o puntos en una pantalla, generando una imagen en dos dimensiones (foto 3), para una interpretacin visual y directa. La ubicacin del punto en la pantalla corresponde a la profundidad desde donde se origin el eco emitido por la sonda. El color del punto es proporcional a la amplitud del eco, por lo tanto, a mayor intensidad del eco (por ejemplo, tejidos de alta densidad), mayor color del punto iluminado. La imagen puede ser fijada (congelada) en la pantalla y permite actualizarla constantemente. La continua actualizacin de la imagen, permite a este mtodo dar una imagen en tiempo- real. El modo tipo-B permite realizar exmenes de grandes porciones de tejido en un corto perodo de tiempo. Debido a este tipo de interpretacin de las imgenes, el entrenamiento y la prctica son un pre-requisito para el xito en la aplicacin de esta tecnologa. Un resultado falso positivo o falso negativo se alcanza slo con una inapropiado interpretacin del tcnico. Este modo es verdaderamente precoz, y permite diagnosticar animales ya a partir del da 21 de gestacin. Foto 3

Foto 3: Equipo ultrasonogrfico Modo tipo-B o de tiempo real

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Mientras el modo tipo-A es uni-dimensional y se limita a medir profundidad de tejido, el modo-B permite caracterizacin de tejido con densidades diferentes. Las unidades del modo tipo-B utilizan nmeros de la escala de grises que van de 1 a 64, y la imagen final es generada por diferencias en sombras de gris generadas del campo del tejido. Los tejidos densos dan un eco luminoso, pixel blanco, mientras que los tejidos de menor densidad se ven como pixel gris.

TRANSDUCTORES Un transductor de ultrasonido es un instrumento que vierte energa de una forma en otra. Este elemento contiene cristales piezoelectricos y convierte la energa elctrica en energa mecnica para la produccin de ondas de ultrasonido. La energa acstica que retorna (eco) posteriormente se trasforma en energa elctrica. Los transductores poseen delicados cristales piezoelctricos que pueden emitir y recibir ondas de sonido de diferente frecuencia. Cuando una corriente elctrica es aplicada a estos cristales, stos vibran, produciendo un sonido de una frecuencia inherente a los mismos cristales. La frecuencia es fija o variable y puede ser cambiada por los controles de los equipos. Luego de la estimulacin de los cristales para que emitan una onda de sonido, la mquina detiene los pulsos elctricos, para permitir a los cristales volver a su estado esttico. De este modo, la onda de sonido atraviesa la piel, penetra en el organismo y choca con tejidos de diferente densidad. Cuando la onda sonora se encuentra con estos tejidos durante su penetracin a travs del cuerpo, algunas de las ondas sonoras son reflejadas por los tejidos y vuelven al transductor. En su estado de reposo, los cristales captan las ondas que fueron reflejadas con la misma frecuencia y las convierten en una seal. Las ondas de sonido que quedaron, continan su pasaje por el organismo ms profundamente hasta encontrarse con otros tejidos que las reflejen y vuelvan a los cristales del transductor. Cuando las ondas sonoras vuelven y golpean los cristales (eco), producen impulsos elctricos, por propia modificacin de estas estructuras, que son una interfaz interpretada por la computadora del equipo. Esta interpretacin se despliega sobre el monitor, conformando as una imagen. Los cristales en el transductor estn preparados para emitir ondas de sonido aproximadamente el 1 % del tiempo, mientras que esperan por los sonidos reflejados (ecos) el 99% del tiempo.

Tipos de trasductores: Existen varios tipos de transductores o sondas. Estas pueden ser Lineales o Sectoriales. Los transductores lineales, contienen mltiples cristales fijos que se disponen en forma lineal dentro de la sonda, emiten y reciben la onda de sonido y la despliegan en el monitor generando una imagen rectangular (figura 2 y foto 4). La sonda sectorial lleva su nombre debido a la caracterstica imagen triangular que se observa en el monitor. Las sondas sectoriales escanean con un ngulo de 85 a 110 grados frente a la cabeza de la sonda generando una imagen en forma de tringulo (figura 3 y foto 5). Medios mecnicos y electrnicos son usados para producir el destello de barrido desde la cabeza de las sondas sectoriales. En produccin animal se utilizan tanto sondas sectoriales como lineales, siendo las sectoriales las de mayor aceptacin. Las sondas lineales necesitan una superficie de contacto mayor que las sondas sectoriales. Los cristales son secuencialmente estimulados por una corriente elctrica, provocando que stos emitan una onda de sonido. No hay partes mviles en las sondas lineales y esto hace que sean ms durables que los transductores mecnicos sectoriales.

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Figura 2

Esquema de un transductor del tipo lineal (fig.2) y su correspondiente tipo de imagen en pantalla (foto 4)

Foto 4

Foto 5

Esquema de un transductor del tipo sectorial (fig.3) y su correspondiente tipo de imagen en pantalla (foto 5)

Figura 3

A mayor frecuencia de sonido obtenemos una mejor imagen, pero al mismo tiempo una menor penetracin en los tejidos. Deben tenerse en cuenta diferentes aspectos al utilizar la ecografa en la prctica veterinaria. Por lo tanto, la eleccin del equipo de ultrasonido debe estar basada en la aplicaciones previstas. Si se van a realizar principalmente procedimientos de diagnsticos de rutina tales como control ovrico o diagnstico de preez un equipo simple y pequeo con trasnductor de 5 MHz ser suficiente. Este equipo permite realizar exmenes transrectales en equinos, bovinos, pequeos rumiantes, cerdos, perros y gatos. 6

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El transductor de 5 MHz ofrece un balance entre profundidad de penetracin (hasta 10 cm a partir del transductor) y la calidad de la imagen (resolucin). En tanto el transductor sea lo suficientemente pequeo para permitir su manipulacin intrarectal, no hay ventajas evidentes del transductor lineal sobre el sectorial. Los transductores ms utilizados en veterinaria son los de 3.5 MHz, 5 MHz y 7.5 MHz. La penetracin con un transductor de 7.5 MHz es de slo 4 o 5 cm, por lo tanto permite examinar con claridad estructuras muy cercanas (folculos, cuerpos lteos, embriones). Los traductores de 5 MHz tienen una penetracin de 8 a 10 cm por lo que permiten visualizar ovarios, teros y preeces tempranas La penetracin de los transductores de 3.5 MHz es de 12 a 15 cm. (Figuras 4 y 5). Esta frecuencia puede ser usada en preeces mas avanzadas y condiciones patolgicas del tero, tales como pimetra, momificacin y maceracin

Figura 4

Representacin grfica de la profundidad de penetracin del sonido en relacin a la frecuencia utilizada

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Figura 5: Diferentes tipos de trasnductores utilizados en ultrasonografa Modo tipo-B, segn los diferentes propsitos de utilizacin: A ,B, C, K y L; presentan los cistales en disposicin lineal. E y F; presentan los cistales en disposicin lineal curvada. G, H, Y y J; transductores sectoriales

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APLICACIONES DE LA ULTRASONOGRAFIA En produccin animal, la ultrasonografa se utiliza principalmente en: 1.- fisiologa reproductiva y 2.- evaluacin de la calidad y composicin de la carcasa in vivo. A continuacin detallaremos cada una de las aplicaciones mencionadas. Existen varios usos de la ultrasonografia en fisiologa reproductiva (1). 1.- Fisiologa Reproductiva: 1. 2. 3. Diagnstico temprano de gestacin Sexado de fetos Estimacin del tamao de la camada.

Un uso especfico de la ultrasonografa de tiempo real es la estimacin de la actividad ovrica para ayudar a incrementar las tasas de concepcin. Esto es especialmente importante en operaciones de alta produccin donde se necesitan maximizar la utilizacin de las facilidades disponibles. As, podramos incluir la evaluacin de las cerdas madres en la estacin de cra para el uso de la inseminacin artificial. Del mismo modo, al aplicar la tcnica de multiovulacin en hembras donantes de embriones, se puede visualizar la efectividad del tratamiento. La supervisin de la actividad ovrica para aumentar el nmero de hembras cclicas y de este modo incrementar los ndices de concepcin. Esto podra incluir a priori la evaluacin durante la estacin de la cra de los resultados de la inseminacin artificial (AI), seguido entonces por diagnostico de la preez tan temprano como los 28 das (2, 3, 4). El sexado fetal tambin es posible en el da 48 (6, 22, 43). Esto es de importancia particular para el productor de animales de pedigree o lecherias, en donde los terneros generalmente es de valor econmico mayor que las terneras.

2.- Calidad y composicin de la carcasa in vivo: 1. 2. 3. 4. 5. Determinacin de la grasa subcutnea. Determinacin del rea del ojo de lomo Determinacin del porcentaje de magro Determinacin de la calidad del msculo por estimacin de la grasa intramuscular. Evaluacin de la performance 5.1.- Ordenar el ganado en grupos de produccin uniformes 5.2.- Estimar la calidad potencial del ganado joven 5.3.- Estimar los das de alimento requerido para la finalizacin del engorde.

La composicin y calidad de la carne de la carcasa es la tendencia que existe en los intereses del valor de las reces en el mercado. El operador de feedlot y el empaquetador son los dos interesados en la posibilidad de determinar la produccin carcasas de composicin y calidad consistentes. La ultrasonografia de tiempo real ofrece la habilidad de evaluar grasa subcutnea que es el primer contribuyente a la variacin en composicin de la carcasa de animales de pesos similares (12). El sitio de medida de la grasa australiano tambin puede usarse para estimar composicin en el animal in vivo, sobre todo para el ganado magro (12). El rea de ojo de lomo es de importancia particular a productores de ganado en base a granos que seleccionan msculo en la cra de animales (46) as como para estimar composicin en animales de mercado. 9

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La determinacin de la grasa intramuscular (marmolado) tambin se relaciona favorablemente con la calidad en la comercializacin (35). Los operadores de Feedlot buscan constantemente diferentes maneras de aumentar la eficacia en la produccin de carne. La ultrasonografia de tiempo real, puede ser utilizada para ordenar el ganado en grupos uniformes basados en la grasa subcutnea y el msculo, para obtener ganado terminado a un peso uniforme con composicin consistente (13). Si bien nos referimos a las aplicaciones en el ganado bovino, estas aplicaciones de anlisis de la imagen pueden realizarse en otras especies de animales de consumo, sobre todo el cerdo y oveja.

UTILIZACIN DEL LA ULTRASONOGRAFA EN FISIOLOGA REPRODUCTIVA EN EQUINOS Y BOVINOS. Desde la incorporacin de la ultrasonografa a la reproduccin equina (23), los ecgrafos formaron parte del equipamiento estndar de muchos veterinarios. Como consecuencia, las aplicaciones en otras especies, especialmente en reproduccin, fueron ms frecuentes y ms intensamente investigadas (41). En el rea de la reproduccin equina y bovina, las tcnicas de imgenes ultrasonogrficas bidimensionales son usadas por veterinarios a tres niveles: 1. Diagnstico en la prctica diaria: control posparto del tero en condiciones patolgicas; control de la actividad folicular y luteal normal y patolgica de los ovarios; determinacin temprana de preez; estudio de la viabilidad embrionaria; determinacin de la edad de gestacin; aplicacin en los machos para estudio de glndulas accesorias, testculos y epiddimo; determinacin de preeces mltiples; estudio del momento la aplicacin de agentes luteolticos para sincronizar celos y evaluacin de respuesta del ovario a otros sistemas de sincronizacin de celo (3, 5, 7, 14, 32) 2. Aplicacin en biotecnologas: Durante la seleccin, preparacin y control de donantes y receptoras en programas de reproduccin artificial; evaluacin ginecolgica de donantes y receptoras de embriones; determinacin de momento de inicio de superovulacin de donantes; estimacin de la respuesta superovulatoria o bien, para la recoleccin de ovocitos (Ovum Pick-Up) por parte de veterinarios ms especializados y el sexado fetal (33). 3. En proyectos de investigacin por parte de fisilogos y clnicos en reproduccin. La rutina de la manipulacin del ecgrafo en las vacas requiere de una buena organizacin. Aunque muchos de los ecgrafos pequeos son porttiles, no todos los equipos pueden ser operados con batera. Por lo tanto, algunos tienen que ser conectados a una fuente de energa. Es preferible disponer de un lugar determinado, aislado, con una fuente de energa cercana. De esta manera, los animales seleccionados para el examen ecogrfico pueden ser sujetados de manera adecuada y el equipo y operador estar seguros. Los operadores deben comprender que el transductor es una delicada pieza del equipo. Esta es la pieza del equipo que contiene los cristales que emiten y reciben las ondas de sonido. Un mal uso del transductor o dejarlo caer en el piso, traer como consecuencia un mal funcionamiento o rotura del mismo. Debe evitarse la luz solar directa, ya que realizar ecografas con mucha claridad disminuye considerablemente la calidad de la imagen. La menor claridad asegura el mejor uso de escalas de grises, con lo cual, se obtiene una mxima calidad de imagen.

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Tanto en bovinos como en equinos la visualizacin de los rganos reproductivos de las hembras debe realizarse por va transrectal (figura 6). Para ello, es necesario retirar la materia fecal presente en el recto, debiendo tenerse especial cuidado que durante la introduccin del transductor no ingrese aire dentro del recto, lo que dificulta el posterior examen. Cuando el procedimiento es prolongado, como por ejemplo los exmenes con propsito de investigacin, se recomienda el uso de anestesia epidural (2-5 m1 de lidocana). Puede ser til para una breve relajacin de los intestinos una inyeccin adicional de Buscopan endovenoso (1ml/100 kg de peso). En la prctica bovina, parece ser preferible un uso ms selectivo de la ecografa, por ejemplo en animales inseminados en los que se desea un diagnstico temprano de preez, o cuando el diagnstico de preez es dudoso por tacto rectal o cuando existen dudas acerca de la viabilidad del embrin.

Figura 6: Diagrama representativo de ubicacin de la sonda lineal en la exploracin reproductiva endorectal en la especie bovina

Las estructuras ovricas y uterinas fisiolgicas y patolgicas pueden ser diagnosticadas en vacas y yeguas mediante el examen ecogrfico transrectal (15, 16, 17). A diferencia de la yegua, el examen transrectal en vacas es ms difcil por la anatoma topogrfica de los rganos genitales, lo que crea un muy estrecho contacto entre el transductor y las partes del tracto genital. La manipulacin simultnea del transductor y tracto genital con la misma mano requiere de cierta prctica. El transductor de eleccin para esta tarea, es transrectal y lineal de simple o doble frecuencia (de 5 - 7.5 o de 6 - 8 MHz), que es pequeo y se puede maniobrar con facilidad, con una buena superficie de contacto (7 cm). Otra alternativa es el examen transvaginal, no tan frecuente como el transrectal, el cual ha sido reportado (28, 30, 40). Los ovarios o el tero son manipulados por va rectal contra la pared vaginal anterior y el transductor se coloca a nivel del fornix, por detrs del orificio cervical externo. De esta manera, puede realizarse un procedimiento ms controlado, ya que el transductor y los rganos son manipulados independientemente. Si se utiliza el examen transvaginal, se requiere medidas higinicas extras y una pieza de extensin o grip para el transductor, debido al largo de la vagina de la vaca. (5, 28, 34). Para este tipo de examen puede ser utilizado un transductor de tipo sectorial de 5 o 7.5 MHz, que si bien es un poco ms voluminoso, puede dirigirse su ngulo de incidencia hacia abajo y adelante, para una fcil exploracin reproductiva.

ECOGRAFA DE TERO Para permitir un examen completo del tero es necesario la retraccin, y si es posible la reflexin del mismo, previo a que el transductor sea movido a lo largo de las diferentes estructuras.

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Utilizando como referencia la vejiga, el tero no preado se reconoce por la visualizacin de una o varias secciones del cuerpo uterino y cuernos encorvados sin encontrar lquidos fetales en su interior. Especialmente durante la fase folicular del ciclo estral, los cuernos estn ms encorvados por lo cual el nmero de secciones de los cuernos que pueden ser vistas en el monitor es mayor. Las diferentes partes del tero pueden ser vistas con movimientos lentos del transductor de izquierda a derecha y girando a lo largo de su eje longitudinal. Durante el proestro, la imagen de la pared uterina puede mostrar diferentes capas determinadas por la distinta ecogenicidad (diferentes grises) entre el miometrio y el endometrio. A su vez, estas estructuras se encuentran resaltadas por el estrato vascular, visto como pequeos vasos sanguneos llenos de lquido determinado por presentar interior de color negro (anecognico). El diagnstico temprano de gestacin se basa en el reconocimiento de lquido dentro de la luz del cuerno uterino. No obstante, se podra pensar que la acumulacin de algo de lquido puede existir en ausencia de preez, especialmente durante el celo y durante la primera mitad de la fase luteal del cielo (4, 23). Al respecto, diversos estudios han mostrado que este diagnstico temprano (antes del da 25) no es del todo confiable, debido a que la presencia de pequeas cavidades de lquido pueden ser visualizadas tan temprano como a los 12-14 das posteriores a la inseminacin artificial, especialmente con transductores de 7.5 MHz. Despus del da 25, los fluidos fetales en el tero pueden ser identificados fcilmente, vistos como una lnea negra o estrella, dependiendo de la direccin del ecgrafo. La acumulacin de lquido tambin puede ocurrir en condiciones patolgicas del tracto genital tales como pimetra o mucmetra (foto 6). Un fluido ecognico de aspecto turbio en el tero es siempre patolgico, indica endometritis, pimetra o mortalidad embrionario-fetal temprana (15).

Foto 6: Imagen de un corte transversal del cuerno uterino de una vaca con abundante contenido de aspecto no lmpido.

Foto 6

El embrin puede ser visualizado luego del da 30 de gestacin. En esta etapa, el embrin mide aproximadamente 1 cm, y se encuentra dentro de un lquido oscuro y lmpido, pudiendo identificarse los latidos cardacos. En este estadio el lquido embrionario alcanza ambos cuernos uterinos. El diagnstico de preez con un transductor lineal de 5 MHz tiene una sensibilidad del 97.7% y una especificidad del 87.8% entre los das 26 y 33 de gestacin en el bovino. Entre los das 30 y 40 (fotos 7 y 8) la membrana amnitica alrededor del feto y el latido cardaco fetal se hacen claramente visibles. El corazn es visto como un punto blanco que aparece y desaparece rtmicamente. En este estadio temprano puede realizarse el diagnstico de gestaciones mltiples. 12

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Se han obtenido diagnsticos de preez confiables desde el da 26 en adelante con transductores de 5 MHz, con una eficiencia superior al 90% (44). Estos estudios tambin demostraron que los errores dependen del transductor utilizado y la experiencia del operador. Por otra parte, se describe (29) que las determinaciones en el da 24 de preez, cuando mas craneal est el tero con respecto a la entrada de la pelvis, aparecan mas frecuencia de diagnstico de no-preez falsos negativos. Obviamente es ms difcil en esos animales revisar todo el tero y la retraccin previa del mismo es necesaria. Aunque es posible realizar un diagnstico ecogrfico de preez confiable alrededor de 2 semanas antes que por medio del tacto rectal, permanece la duda si el mismo se justifica rutinariamente a esta edad tan temprana en todos los animales inseminados (7).

Foto 7 Foto 8 Preez de 25 das en una hembra bovina (foto 7) y preez de 30 das en una hembra equina (foto 8). En ambas fotos se muestran cortes transversales de una seccin de cuerno uterino con contenido lmpido en su interior.

A partir del da 40 de preez puede hacerse una buena diferenciacin de cabeza, grupa, extremidades y cordn umbilical. En este momento pueden realizarse diferentes mediciones, como por ejemplo largo cabeza-cola del feto, las cuales dan una estimacin de la edad fetal cuando no se conoce el da del servicio (16 y 17). Tanto en vacas como en yeguas, entre los das 55 y 70 de gestacin (fotos 9 y 10) puede realizarse el sexado fetal con un transductor de 5 MHz (22, 33). El sexado fetal consiste en detectar la ubicacin del tubrculo genital (estructura bilobulada como dos barras paralelas muy ecognicas). En el macho, migra desde su ubicacin original entre los miembros posteriores hacia delante, hasta ubicarse inmediatamente por detrs de la insercin del cordn umbilical, y dar origen al pene. 13

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En la hembra, en cambio, migra hacia atrs, ubicndose por debajo del inicio de la cola, originando el cltoris. Los especialistas en sexado fetal, recomiendan realizar 2 y 3 veces la maniobra de localizacin del tubrculo genital, para dar un diagnstico ms preciso. Foto 9 Foto 10

Preez de 60 das en una hembra bovina (foto 9) y preez de 80 das en una hembra equina (foto 10). En ambas fotos se muestran cortes transversales de una seccin de cuerno uterino con el feto en su interior.

En la preez avanzada, (fotos 11 y 1 2) el volumen de los lquidos fetales aumenta y el tero crece. Como el transductor de 5 MHz penetra solamente 10 cm desde su superficie son necesarios los transductores con menor frecuencia (3.5 MHz) para ver el feto en crecimiento o estructuras de la placenta (cotiledones) (figura 19). La penetracin parcial del tero hacia la cavidad plvica, la que es posible hasta los dos meses de gestacin, podra ser de utilidad. Foto 11 Foto 12

Luego del da 60 de gestacin el tero presenta gran cantidad de contenido en su interior en la foto 11 se observan anexos embrionarios (cotiledones placentarios) en una hembra bovina. Tambin puede observarse (foto 12) un corte transversal del cuerno uterino y la seccin posterior de un feto equino. 14

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El reconocimiento ultrasonogrfico de la mortalidad fetal se basa en la ausencia del latido cardaco del feto, desplazamiento de las membranas fetales, o apariencia nubosa en la luz de los cuernos uterinos. Un diagnstico temprano de preez puede llevar una significativa reduccin en el nmero de das no productivos de las vacas, con la consiguiente ventaja en el esquema productivo. Ventajas similares pueden existir en las vacas con adherencias en el tracto genital en las cuales no es sencillo el diagnstico por tacto rectal o en vacas con fetos momificados que podran no ser claramente diagnosticadas solamente por tacto rectal. En la yegua, el diagnstico precoz se puede realizar a partir del da 9 post-servicio. El embrin se visualiza como una estructura esfrica y anecognica de aproximadamente 3 mm de dimetro. Hacia el da 14 aumenta a 10 mm y se observan dos polos hiperecognicos ( superior e inferior, artefactos producidos por ondas de rebote). Tambin puede observarse el movimiento de la vescula dentro de la luz uterina. En esta especie, la deteccin precoz de la gestacin de mellizos permite practicar la eliminacin de uno de los embriones antes del da 17, posibilitando que contine el desarrollo a trmino de la gestacin del restante.

ECOGRAFA DE LOS OVARIOS La ecografa ha sido una herramienta til para estudiar el desarrollo folicular durante el ciclo estral y preez en vacas sin interrumpir patrones fisiolgicos normales (30). Durante un ciclo estral normal pueden ser vistas dos (comienzan alrededor del da 3 y 12 del ciclo) o tres (comienzan alrededor del da 3, 10 y 16 del ciclo estral) ondas foliculares (10, 25, 26, 27, 36, 37). Cuando comienza la lutelisis, el folculo dominante contina creciendo y finalmente ovula 30 hs. despus de iniciado el celo. Los folculos crecen 1.5 a 2.5 milmetros por da. El crecimiento es constante f durante todas las fases del cielo estral. En general, el folculo dominante alcanza un dimetro de 15 mm, pero son normalmente vistos folculos de 20 mm de dimetro. La mayora de los folculos preovulatorios alcanzan su mximo tamao dos das antes de la ovulacin En la fase final se hacen ms blandos, y sin embrago esto no pueden evidenciarse por ultrasonografa. En vacas no es posible usar el crecimiento folicular para definir cundo inseminar como puede ser hecho en yeguas (29).

f f f f

Foto 13 Foto 14

Los folculos ovricos se presentan como estructuras esfricas con el interior oscuro (licor folicular). La foto 13 muestra un ovario con un folculo (f), mientras que la foto 14 muestra un ovario bovino con varios folculos de diferente tamao.

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Estructuras normales, tales como folculos terciarios de 5 mm de dimetro, cuerpos lteos y vasos sanguneos, son fcilmente reconocidas cuando los ovarios son examinados con transductores de 5 y 7.5 MHz. En las yeguas, el folculo preovulatorio mide entre 35 y 60 mm, siendo monitoreado por el ecgrafo hasta determinar el momento de la ovulacin y posterior servicio o inseminacin. La tecnologa del ultrasonido ha permitido el estudio de las ondas foliculares en el vacuno, de gran ayuda en biotecnologa, como en los procesos de superovulacin. Los folculos (fotos 13 y 14) aparecen como cavidades redondeadas negras (anecognicas), lo que corresponde al fluido folicular. La pared folicular puede ser vista especialmente cuando dos folculos adyacentes estn en el mismo plano del transductor. Los folculos terciarios de 3 a 5 mm de dimetro estn presentes durante todo el ciclo estral (29, 30, 38) y durante la preez. Se ha demostrado claramente que la ultrasonografa es ms segura para detectar la presencia de folculos que el tacto rectal (30). Debido a la apariencia griscea de la ecografa, un cuerpo lteo (CL) (foto 15) de mitad del ciclo puede ser claramente diferenciado por su diferente ecogenicidad de otros tejidos ovricos. Los CL jvenes y viejos pueden ser ms difciles de diagnosticar durante el examen rectal y la ecografa, porque dan una imagen menos ecognica. Incluso con transductores de 7.5 MHz pueden ser difciles de diagnosticar. nicamente luego de 3 o 4 das, un CL joven puede ser visualizado por ecografa. Crece alrededor de 1-2 mm/da, alcanzando un tamao mximo de 8 a 12 das despus de la ovulacin (25, 26). El CL desaparece a la imagen ecogrfica unos pocos das despus de la lutelisis, lo que significa que no puede ser ya visto en el siguiente estro (31). El desarrollo as como la imagen ecogrfica del CL gravdico son iguales que las del CL peridico, por lo tanto no puede ser usado para diagnstico de preez.

CL

Foto 15

La foto 15 muestra la imagen ecogrfica de un cuerpo lteo (CL) perteneciente a una hembra bovina visualizado como una estructura de aspecto grisceo.

La ultrasonografa es ms confiable que la palpacin rectal al comparar vacas con CL jvenes o viejos con vacas con CL de mitad del ciclo. El CL activo puede contener una cavidad llena de lquido (60%), apareciendo como una cavidad negra de forma ms o menos regular en medio del tejido luteal (18). Algunas veces pueden ser vistas pequeas trabculas de tejido en estas cavidades. No obstante, estas estructuras representan variaciones fisiolgicas normales del CL en la vaca y no tienen influencia en los niveles de progesterona o tasas de preez (15). Los quistes ovricos son frecuentemente definidos como folculos anormales, anovulatorios, con un dimetro mayor de 25 mm, sin tener en cuenta la presencia de otra estructura ovrica, tales como CL o folculos de tamao normal. La mayora de las veces no estn presentes CL junto con quistes ovricos. 16

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Sobre la base de la palpacin rectal es difcil discriminar entre quistes lutenicos y foliculares. Esta diferenciacin puede ser importante para elegir la terapia. Durante el examen ultrasonogrfico, la cavidad llena de lquido de los quistes puede presentar varias formas, especialmente cuando hay varios quistes presentes en el mismo ovario. En los quistes foliculares no puede visualizarse tejido dentro de la cavidad y aquellas partes de la pared que pueden ser vistas son siempre muy finas. Los quistes luteales, en cambio, tienen una pared de varios milmetros de espesor causada por la luteinizacin de la capa granulosa. A la imagen ecogrfica, esta capa puede ser vista como una delimitacin griscea irregular de la cavidad. Algunas veces pueden verse trabculas en la cavidad del quiste (15). Cuando la capa de tejido luteinizado es bastante gruesa, la diferencia entre un CL normal con cavidad y un quiste lutenico con pared gruesa se hace arbitraria. En caso de duda un nuevo examen revelar la naturaleza ms esttica del quiste lutenico, mientras que el CL con cavidad seguir el desarrollo cclico con una gradual disminucin de tamao de la cavidad y desaparicin del mismo en el celo. Las densidades ecognicas de las paredes del quiste luteal son ms frecuentemente, pero no siempre, acompaadas con altos niveles de progesterona plasmtica, un nivel de 0.5 ng/ml de suero de sangre perifrica fue utilizado para discriminar entre animales con quistes foliculares o luteales (28, 29). La palpacin rectal es significativamente menos segura que la ultrasonografa para diferenciar entre quistes foliculares y lutenicos.

ULTRASONOGRAFIA EN TIEMPO REAL Y DIAGNOSTICO DE GESTACIN EN PORCINOS, OVINOS Y CAPRINOS. La gestacin en los pequeos rumiantes y en la cerda puede determinarse por medio de la exploracin transrectal. Dada la diferente condicin anatmica del recto en estas especies respecto de los bovinos y los equinos, el transductor debe acoplarse a un vstago o adaptador rgido para ser manipulado dentro del recto. Otra manera de explorar los rumiantes pequeos es por va transabdominal, colocando "sentando" el animal sobre sus miembros posteriores, quedando toda la regin inguinal a disposicin para el estudio (figura 7). Esta tarea es complicada y particularmente tediosa para los colaboradores, cuando estudiamos grandes majadas o rebaos, pero resulta prctica y rpida en granjas de tamao reducido. En el caso de la cerda, la exploracin puede realizarse con el animal de pie (en jaula) o en decbito lateral (14).

Figura 8

Representacin esquemtica de las diferentes alternativas de exploracin ecogrfica en los rumiantes menores (cabra y oveja) y en la cerda.

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En ovejas y cabras podemos determinar la gestacin a partir de los 16-17 das postinseminacin, aunque en forma prctica se observa mejor a partir del da 22-25 post-servicio (fotos 16 y 17), pudiendo identificar a ms de un embrin (foto 18) en una misma imagen determinando la presencia de gestaciones mltiples (cuando el embrin mide aprox. 1 cm). A partir del da 40 de gestacin, ya se observan las diferentes estructuras fetales. Luego el feto alcanza los 5 cm a los 60 das, desciende del piso pelviano y se introduce en la cavidad abdominal. Posteriormente, a los 90 das el feto ya mide 15 cm aproximadamente, lo que dificulta la buena y completa visin en el campo ecogrfico.

Foto 17

Foto 16

Preez de 37 das en una hembra caprina (foto 16) y preez de 47 das en una hembra ovina (foto 17). En ambas figuras se muestran cortes transversales de una seccin de cuerno uterino con el embrin en su interior.

Foto 18

Gestaciones mltiples en rumiantes menores: Foto 18 gestacin gemelar de 35 das en ovinos.

Los equipos de ultrasonido tipo-A y Doppler han sido usados en la industria ovina, caprina y porcina por ms de una dcada para el diagnstico de gestacin. Mediante el uso de este tipo de tecnologa nicamente es posible discriminar entre hembras vacas o preadas, de este modo no es posible determinar la cantidad de fetos ni la viabilidad de los mismos. Asimismo, la incorrecta ubicacin de la sonda incrementa los porcentajes de falsos positivos cuando el sonido genera un falso ECO de gestacin al incidir en la vejiga expandida por la orina. Estos equipos permiten detectar gestaciones a partir del da 25 o 30. 18

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Es necesario aplicar un poco de gel obsttrico al transductor inmediatamente antes aplicarlo a la piel del animal. El gel para ultrasonido es un producto que provee de un excelente contacto entre el transductor y la piel, permitiendo una correcta y clara transmisin de la onda sonora desde y hacia los cristales de la sonda. Pueden utilizarse otras sustancias inocuas de acoplamiento acstico como el aceite vegetal de uso domstico, vaselina lquida o carboxi-metil-celulosa. Luego de colocar gel obsttrico a la cabeza del transductor, se coloca la sonda directamente sobre la superficie de la piel de la cerda frente a la pata trasera, por debajo del flanco por encima las glndulas mamarias. Seguidamente en los equipos de ultrasonido tipo-A y Doppler (figuras 8 y 9) se debe dirigir la sonda hacia la columna vertebral evitando de este modo la vejiga. Se escanea suavemente el abdomen en sentido latero-lateral a efectos de abarcar con el haz de sonido el total de la cavidad abdominal. En los equipos de tipo-B o tiempo real (figuras 8 y 10) se debe dirigir la sonda hacia la columna vertebral y cola del animal para ubicar la vejiga. La vejiga normalmente contiene orina y por lo tanto aparece como una estructura color negro sobre la pantalla. Por lo tanto este rgano ser el punto de referencia interno. Luego de localizar la vejiga, se realizan movimientos suaves hacia delante para visualizar el tero y los ovarios. Para el diagnstico de preez, se escanea el abdomen tratando de identificar a las vesculas embrionarias que, dependiendo de la duracin de la gestacin, aparecern como crculos negros en el monitor (fotos 19 y 20). Si no se visualizan las vesculas embrionarias de un lado del animal, se repite la maniobra colocando la sonda del lado opuesto.

Figura 8

Esquemas de aplicacin y direccionamiento de la sonda para explorar rumiantes menores o cerdas por va transabdominal con equipos de modo-A y modo-B. En la figura 8 se observa el sentido ventro-dorsal para ambos equipos. La figura 9 expresa el sentido antero-posterior que debe tener la sonda para evitar la vejiga en los equipos de modo-A, mientras que la figura 10 muestra la situacin opuesta para los equipos del modo-B.

Figura 9

Figura 10

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El diagnstico de gestacin transcutneo puede ser realizado ya a partir del da 18-20 de gestacin, con una eficiencia en los diagnsticos del 74.5%. La principal dificultad en el diagnstico de gestacin tan precoz, es el pequeo tamao de las vesculas embrionarias que limitan la sensibilidad del equipo y el transductor. Por lo tanto, el diagnstico de gestacin por la va transcutnea es recomendado realizarlo a partir del da 21 de gestacin, cuando la eficiencia de las determinaciones alcanza el 97%. La diferente frecuencia de las sondas, puede variar la eficiencia de los resultados, dependiendo de la edad gestacional al momento de hacer el diagnstico. En general, sondas de 5.0 mHz pueden detectar preeces tempranas de 16-20 de gestacin. Luego del da 21 de gestacin, las sondas de 3.5 mHz son tan exactas como las de 5.0 mHz para determinar si una cerda est o no preada. Una alternativa al mtodo transcutneo, es realizar la ecografia por la tcnica transrectal, publicada (21). Con esta tcnica, un transductor lineal es colocado en un adaptador semi-rgido. Con la cerda ubicada de pie en una jaula, el transductor se introduce lentamente y con movimientos rotatorios a travs del ano de la hembra. Mientras se introduce el transductor, es necesario ejercer cierta presin para avanzar a travs de materia fecal, y lograr un buen contacto de la cabeza del transductor y las paredes del recto y colon. Durante la introduccin, se realizan movimientos rotatorios y de avance del transductor a travs de la porcin externa del adaptador semi-rgido, entras se trata de localizar la vejiga. Luego de localizar la vejiga, se contina insertando el transductor para visualizar los ovarios (generalmente ubicados frente a la vejiga) y el tero. La gestacin en la cerda puede determinarse desde los 18-20 das, aunque en forma prctica se observa mejor a partir del da 22-25 post-servicio, pudiendo identificar a ms de un embrin en una misma imagen. Ms adelante, despus de los 40 das, ya se observan las diferentes estructuras fetales.

Foto 19

Foto 20

La foto 19 muestra una imagen ecogrfica de una cerda no preada dado por la no presencia de lquidos en el interior del cuerno uterino. En la foto 20 se muestra una cerda con 30 das de gestacin.

En los ltimos dos aos, ha crecido mucho el inters sobre el potencial uso de la ultrasonografa de tiempo real para observar el crecimiento folicular (foto 21), la determinacin de la ovulacin y por ende el momento apropiado de inseminacin artificial. El desarrollo folicular puede ser fcilmente observado utilizando la va transcutnea o transrectal. 20

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El desarrollo folicular, la duracin de la ovulacin y el intervalo entre el inicio del estro y la ovulacin, ya han sido reportados (19, 20, 38, 39, 42). A diferencia de lo que ocurre en otras especies, el promedio del tamao folicular y la prediccin de la ovulacin vara mucho en la cerda. De este modo se puede desarrollar un programa de inseminacin artificial en combinacin con la ultrasonografia.

ovario

Foto 21: Ovario de una cerda no gestante en el que se puede observar la presencia de varios folculos.

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