ESCUELA DE INGENIERIA MECANICA

CURSO : FISICA III

TEMA

EL MICROSCOPIO ESPECTROMETRO DE MASA

DOCENTE :

MS. JULIO IDROGO CRDOVA

ALUMNO

: ESPINOZA CASTILLO, ROYER PISFIL DE LA CRUZ, VICTOR SILVA MUOZ, WILLIAM VALVERDE UTRILLA, FELIPE DANIEL

CICLO

IV

TRUJILLO 2010

EL MICROSCOPIO
I. INTRODUCCION.
En su afn de llegar siempre ms lejos en la investigacin de la naturaleza de lo que los lmites de sus rganos sensoriales le imponen, el hombre ha construido mltiples instrumentos que le han permitido acceder all donde los sentidos no podan penetrar. As como el telescopio abri a la humanidad las puertas de lo infinitamente grande, el microscopio hizo posible conocer los mundos de dimensiones nfimas, entre ellos la clula, base de la vida. Los microscopios son aparatos que, en virtud de las leyes de formacin de imgenes pticas aumentadas a travs de lentes convergentes, permiten la observacin de pequeos detalles de una muestra dada que a simple vista no se percibiran.

II. HISTORIA DEL MICROSCOPIO

El microscopio fue inventado hacia los aos 1610, por Galileo Galilei, segn los italianos, o por Zacharias Janssen, en opinin de los holandeses. La palabra microscopio fue utilizada por primera vez por los componentes de la academia Accademia dei Lincei (micro= pequeo, scopein= ver).esta academia era una sociedad a la que perteneca galileo y publicaron un trabajo sobre la observacin microscpica del aspecto de una abeja. Las primeras publicaciones importantes aparecen en 1660 y 1665 cuando malpighi observa los capilares sanguneos y Hokke publica su obra Micrographi. En el siglo XVII Antony Van Leenwenhoek, un comerciante ingles utilizo microscopios simples de fabricacin propia y descubri por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glbulos rojos. Este primitivo microscopio tena dos lupas combinadas con las que llego a alcanzar 260 aumentos. Las mejoras ms importantes de la ptica surgieron en 1877 cuando Ernst Abbe publica su teora del microscopio. Luego Calr Zeiss mejora la microscopia de inmersin sustituyendo al agua por aceite de cedro lo que permite obtener 2000 aumentos.

III.

DEFINICION.

Sistema de lentes y dispositivos de control de la iluminacin para variar su intensidad y modificar su marcha con el fin de formar la imagen por superposicin o interferencia y por difraccin del haz de luz. Instrumento ptico que permite formar imgenes virtuales, invertidas y aumentadas de objetos pequeos. Permite mayor resolucin que el ojo humano y ver detalles ms pequeos.

IV.

FUNDAMENTOS DEL MICROSCOPIO OPTICO

1.- LA PARTE MECANICA DEL MICROSCOPIO. La parte mecnica del microscopio comprende: el pie, el tubo, el revlver, el asa, la platina, el carro, el tornillo micromtrico y el tornillo macromtrico. Estos elementos sostienen la parte ptica y de iluminacin, adems permite los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto.

El pie o Base. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular El tubo. Tiene forma cilndrica y est ennegrecido internamente para evitar las molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los oculares. El revlver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo, la cual se nota por el ruido de un pin que lo fija. La columna, llamada tambin asa o brazo, es una pieza colocada en la parte posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porcin superior y por el extremo inferior se adapta al pie. La platina. Es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u objeto que se va a observar. Presenta un orificio en el eje ptico del tubo que permite el paso de los rayos luminosos a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares. Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparacin con movimiento ortogonal de adelante hacia atrs y de derecha a izquierda. El tornillo macromtrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin. El tornillo micromtrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nitido de la preparacin. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.

2.- SISTEMA OPTICO. El sistema ptico es el encargado de reproducir y aumentar las imgenes mediante el conjunto de lentes que lo componen. Est formado por los oculares y los objetivos.

Los oculares. Son las lentes que forman la imagen que observaremos con nuestros ojos. Todos los microscopios actuales poseen dos oculares, uno para cada ojo. Por eso a los microscopios actuales se les llama binoculares. Los primeros microscopios eran monoculares, es decir, posean una sola lente. Hay que tener en cuenta que en los microscopios ms avanzados tanto el objetivo como el ocular suelen estar compuestos por varias lentes. En los microscopios ms bsicos al menos uno de los oculares puede regularse, alejarse o acercarse al objetivo. Esto permite ajustar el enfoque a las condiciones de visin, dioptras, de cada observador. Los oculares generalmente ms

utilizados son los de: 8X, 1OX, 12.5X, 15X. La X se utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos. Los objetivos. Los objetivos producen aumento de las imgenes de los objetos y organismos y, por tanto, se hallan cerca de la preparacin que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersin. o Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices que indican el aumento que producen, la abertura numrica y otros datos. Asi por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el objetivo es planacromtico, su aumento 40 y su abertura numrica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El nmero de objetivos vara con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos ms frecuentemente utilizados son: 6X, 1OX, 20X, 45X y 60X. o El objetivo de inmersin est compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a travs de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparacin, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 1 OOX y se distingue por uno o dos crculos o anillos de color negro que rodea su extremo inferior.

Los objetivos se disponen en una pieza giratoria denominada revlver. 3.- SISTEMA DE ILUMINACION. Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la preparacin u objeto que se va a observar en el microscopio. Comprende los siguientes elementos:

El espejo. Tiene dos caras: una cncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara cncava se emplea de preferencia con iluminacin artificial, y

la plana, para iluminacin natural (luz solar). Modernamente se prescinde del espejo en la fabricacin de microscopios, ya que stos traen incorporada una lmpara colocada en el eje del microscopio. Condensador. El condensador est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparacin. El condensador se halla debajo de la platina. El condensador puede deslizarse sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo que determina su movimiento ascendente o descendente.

Diafragma. Generalmente, el condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura y controla la calidad de luz que debe pasar a travs del condensador.

Trayectoria del Rayo de Luz a travs del Microscopio. El haz luminoso procedente de la lmpara pasa directamente a travs del diafragma al condensador. Gracias al sistema de lentes que posee el condensador, la luz es

concentrada sobre la preparacin a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo hasta llegar el ocular, donde es captado por el ojo del observador. 4.- COMO FUNCIONA. En la figura, a la derecha, se ve el esquema del microscopio tradicional. La funcin del objetivo es comparable a la de una pequea lente de proyeccin. Sin embargo, en vez de proyectar la imagen en una pantalla, proyecta la imagen primaria aumentada del objeto hacia arriba, cerca del extremo superior del tubo del microscopio. Esta imagen primaria se forma en el aire y por lo tanto se denomina "imagen area. (La presencia de esta imagen podra visualizarse si se retirara el ocular y se instalara una pequea pantalla translcida en el plano de esta imagen area.). En la realidad, sin embargo, no utilizamos una pantalla sino que visualizamos esta imagen a travs del ocular. El ocular funciona prcticamente como lupa, con la diferencia principal de que aumenta una imagen area en vez de un objeto real. La imagen final se forma en la retina del ojo, pero el ojo la percibe como si estuviera en el plano de la imagen virtual, situado cerca del pie del diagrama. Esta ltima imagen se llama 'imagen virtual' ya que los rayos de luz no provienen en realidad de esta imagen, tan slo parece que se originan all. Las lneas trazadas hacia ambos extremos de la imagen virtual estn punteadas para indicar que no se trata de verdaderos rayos de luz, sino slo de extensiones de los rayos reales. Los rayos verdaderos estn dibujados con trazo continuo entre el ocular y el punto focal. El trazar lneas punteadas ayuda a clarificar el hecho de que stas son extensiones de rayos reales. El aumento total del microscopio se produce en dos pasos. El inicial por medio del objetivo y el secundario por el ocular. El aumento total es el producto matemtico de

ambos. Trabajando con un objetivo de 10x y un ocular de 10x, el aumento total es el producto de ambos, o sea 100x. 5.- LOS LMITES DEL AUMENTO. En realidad no hay un lmite mximo de aumentos en un microscopio, slo existe un lmite en cuanto a los aumentos tiles. La limitacin fundamental no consiste en el aumento sino en el poder de resolucin, o sea, la capacidad del microscopio de visualizar los detalles ms finos del objeto. Una vez que el objeto se ha aumentado hasta el punto en donde la imagen se vuelve borrosa, el hecho de aumentar el objeto an ms producir, debido al lmite del poder de resolucin, una imagen de tamao ms grande, pero tambin ms borrosa y sin visualizacin de ms detalles. Este tipo de incremento intil del aumento se llama "aumentos vacos, indicando que se trata de aumentos ms all del lmite til en cuanto a la reproduccin fiel de los detalles finos. 6.- EL PODER DE RESOLUCIN. El poder de resolucin de un microscopio por lo general depende del diseo del objetivo. Un objetivo capaz de aprovechar un gran cono angular de luz procedente de la muestra, tendr mejor poder de resolucin que un objetivo limitado a un cono de luz ms pequeo. Esto se aprecia mirando las imgenes comparativas en la siguiente figura. El objetivo que recibe un cono de luz mayor, proporciona una imagen que reproduce mucho mejor los detalles ms finos.

Microfotografas, ilustrando la dependencia del poder de resolucin de la apertura numrica (A.N.)

La imagen de un objeto puntiforme no es un punto, sino, debido al fenmeno de difraccin, una pequea mancha redonda de luz rodeada de aros luminosos

El disco de Airy. Microfotografa de un poro en un espejo de aluminio, tomada con un objetivo de 4mm, 0.65 A.N., el radio del primer aro oscuro h', es una medida del poder de resolucin

Este fenmeno fue investigado matemticamente por primera vez por el astrnomo Sir George Airy en 1834, quien demostr que la distribucin de la luz de esta forma, la cual se conoce hoy bajo el nombre de disco de Airy es de tal manera que el radio del primer aro oscuro h' es una medida de la distancia resoluble dentro de la imagen. Adems puede demostrarse que esta distancia h en la imagen se corresponde en el objet o con una distancia h definida por la ecuacin:

en la cual ( es la longitud de onda de luz (aproximadamente 0.0005 mm) y A.N. es la 'apertura numrica' del objetivo. 7.- APERTURA NUMERICA (A.N.) DE UN OBJETIVO Por definicin: A.N. = N sin U, siendo N el ndice de refraccin en el espacio objeto. Dado que es una caracterstica muy importante de la lente, por regla general, los fabricantes marcan la A.N. en los objetivos. Cuanto mayor sea la A.N. tanto ms complejo y costoso ser el sistema de lentes.

indica que el lmite factible de definicin h es inversamente proporcional a la A.N. del objetivo. Como indica la frmula anterior, existen tres mtodos para aumentar el poder de resolucin o, lo que es lo mismo, para disminuir la distancia resoluble h. El primer mtodo consiste en la disminucin de la longitud de onda, el segundo en aumentar el

ngulo U en el espacio objeto, y el tercero en el incremento del ndice N en el espacio objeto.

Trabajando con filtros selectivos, la longitud de onda puede disminuirse acercndose al extremo del espectro de la longitud de onda violeta o corta. Por medio de una ptica y tcnicas especiales, este efecto puede extenderse a la longitud de onda ultravioleta, a fin de disminuir an ms los lmites factibles de definicin. La posibilidad de aumentar el ngulo U al mximo terico de los 90, (o sea, A.N. = 1,00) se ve limitada en la prctica. La lente apocromtica de A.N. 0,95 proporciona el valor U ms alto que todava resulta til. Valores de A.N. ms altos de 0,95 se consiguen por medio de lquidos de inmersin. El mtodo final de disminuir la distancia resoluble consiste en incrementar el ndice N dentro del espacio objeto. Esto se consigue trabajando con "objetivos de inmersin en los cuales se aplica un lquido entre el portamuestras y la lente frontal del objetivo. El lquido de inmersin suele ser aceite (N= 1.52) aunque tambin suelen aplicarse de vez en cuando agua (N = 1.33) y bromuro de naftalina (N= 1.66). Por medio de los baos de inmersin, se han realizado objetivos con valores A.N.. hasta 1,60, pero se ha comprobado que el lmite til corresponde a un valor de A.N. de aproximadamente 1,40. 8.- PROFUNDIDAD DE FOCO. Al enfocar un objeto por medio de un microscopio, hay un margen finito por encima y por debajo de este objeto, en el cual se visualizan ntidamente otros objetos. Este margen se llama profundidad de foco del microscopio y vara considerablemente en funcin de la A.N. del objetivo, segn la relacin:

en donde d es la profundidad de foco para microfotografa. Para la visualizacin del objeto, hay que aadir ms profundidad, ya que el ojo es capaz de realizar un cierto grado de acomodacin. En este caso, la profundidad d es

siendo M el aumento del microscopio. En esta ecuacin se asume que el ojo puede acomodar una imagen que se encuentra a una distancia de 250 mm. Si en la expresin anterior reemplazamos las incgnitas por nmeros concretos, resulta que a los tres objetivos ms comunes les corresponden las siguientes profundidades de foco.

9.- ABERRACIONES DE LA IMAGEN. Todos los sistemas de lentes tienen un nmero menor o mayor de aberraciones o defectos segn la habilidad del ingeniero constructor y segn la complejidad del diseo en cada caso concreto. Los sistemas de lentes estn compuestos por lentes individuales con superficies esfricas; y una de las caractersticas de las superficies esfricas es que no forman imgenes perfectas. El diseador de lentes, por medio de combinaciones inteligentes de formas de lentes y tipos de cristal consigue, por lo general, contrarrestar los defectos de una superficie aplicando defectos iguales u opuestos en otras superficies de forma que el resultado final se aproxime a la perfeccin, aunque nunca alcance la perfeccin total. Las aberraciones principales de una imagen formada por una lente esfrica son las siguientes:

a).- ABERRACION ESFRICA. Trmino aplicado para describir el hecho de que los rayos procedentes de un punto y que atraviesan la parte ms externa de la lente tienen distinto foco que los que pasan por el centro de la misma. Para superar este problema se realizan combinaciones de lentes convergentes y divergentes, diseadas adecuadamente con este propsito. Esta difusin desfavorable causa una prdida de contraste en las preparaciones microscpicas ordinarias.

b).- AGTIGMATISMO. Se produce cuando un objeto puntiforme situado fuera del eje se visualiza como dos imgenes lineales separadas, las cuales se encuentran a diferentes distancias de la superficie de la lente. Como en el caso de la aberracin denominada curvatura del campo, el resultado es un deterioro general de la imagen desplazada del eje, sin embargo, al contrario de lo que ocurre con la curvatura del campo, una imagen astigmtica nunca puede enfocarse de modo que resulte una imagen ntida, a excepcin de los detalles que son paralelos o perpendiculares al radio del campo.

En Figura se ve el grave deterioro que sufre la imagen de un objeto puntiforme (poro) en un espejo de aluminio a causa del astigmatismo. c).- COMA. Se dice que una lente est afectada por coma cuando diferentes zonas circulares concntricas de la superficie de la lente proporcionan aumentos diferentes a una imagen desplazada del eje. Debido a este defecto, la imagen de un objeto puntiforme aparece en forma de cometa, y, como en las dos aberraciones anteriores, la imagen desplazada del eje ser de mala calidad. En la figura 6 se puede apreciar el grave deterioro que sufre la imagen de un objeto puntiforme debido a la aberracin de coma. Si en el centro del campo tenemos aberracin de coma, ser un claro ejemplo de que el objetivo est daado. La imagen de un objeto puntiforme afectada por la aberracin de coma

Es la aberracin que provoca que la imagen de un objeto rectangular se visualice con contornos curvados. d).- CRUVATURA DEL CAMPO. Como su nombre indica, esta aberracin produce una imagen curvada de un objeto plano. Esto se debe a que el centro y los lmites de la imagen se enfocan a distancias

distintas. Como consecuencia, cuando la parte central de la imagen est claramente enfocada los lmites del campo parecen quedar fuera del foco, y viceversa.

Curvatura del campo. El centro est enfocado con nitidez, la periferia queda fuera del foco. e).- ABERRAICION CROMATICA. Se debe a que la distancia focal de la lente vara con la longitud de onda. Este defecto se controla combinando adecuadamente los diferentes tipos de cristal que se utilizan en la fabricacin de las lentes convergentes y divergentes que forman el sistema de lentes.

10.- OBJETIVOS. a).- ACROMATICOS. Corrige aberracin cromtica y esfrica para dos longitudes de onda, trabaja bien con flitros verdes.

b).- FLUORITA (SEMI-APOCROMATICOS). Mayor rango de correccin en el espectro visible. Permite mayores aperturas numricas y resultando en imgenes ms luminosas. Conseguimos mejores imgenes en color con luz blanca. c).- APOCROMATICOS. Los objetivos apocromticos son superiores a los acromticos en cuanto a su capacidad de correccin, tanto que eliminan las aberraciones cromticas en los tres colores (RGB), y corrigen las esfricas en 2 colores. Su A.N. suele ser algo mayor, y por consecuencia, su poder de resolucin superior.

d).- PLAN. Incluye correccin para la curvatura del campo. Estas lentes se pueden utilizar en cualquiera de los objetivos anteriores.

V. CONCLUSIONES.
Este instrumento ha sido de gran utilidad, abri el ojo humano hacia una nueva dimensin, tanto es as que actualmente, el microscopio nos permite observar el "corazn" mismo de la materia: los tomos, adems se incorporo con xito a investigaciones dentro del rea de la qumica (en el estudio de cristales), la fsica (en la investigacin de las propiedades fsicas de los materiales), la geologa (en el anlisis de la composicin mineralgica de algunas rocas) y, por supuesto, en el campo de la biologa (en el estudio de estructuras microscpicas de la materia viva), por citar algunas disciplinas de la ciencia.

VI.

LINKOGRAFIA.
1) http://resolution.umn.edu/MMS/ProjectMicro/gallery.html. Microscopy Image Gallery. (check out the sand, Feb 99). Sitio en ingls. 2) http://www.investigaperu.org/es/download/ponencias/biologia/microscopia.pdf 3) http://microbiologiaunq.files.wordpress.com/2008/04/seminario-nc2b02microscopia.pdf. microscopia y tinsiones. 4) http://webdelprofesor.ula.ve/nucleotrujillo/elciv/clases_microbiologia/unidad_1.p df. Introduccin a la microscopia. 5) www.leica-microsystems.com. Teora del microscopio. lderes en fabricacin de microscopios.