PREPARACION DE REACTIVOS Solucin acrilamida-bis acrilamida: Pesar 60g de acrilamida y 1.

6g de bis acrilamida disolver en 200mL de agua, filtrar por poro 0.45um guardar nevera. Tampn del gel separador: Pesar 36.3g TRIS disolver en 150mL de agua, ajustar pH 8.8 y aforar a 200mL. Tampn del gel concentrador: Pesar 3g de TRIS se ajusta pH 6.8 con HCl y se afora a 50mL Solucion SDS 10% Pesar 5g de SDS disolver y aforar a 50mL Solucion iniciadora Pesar 0.1g de persulfato de amonio + 1mL de agua Tampn de muestra 1) 10ml de tampn del gel concentrador

+16mL de solucin de SDS + 0.8mL de mercaptoetanol al 10% +aforar a 32 ml con agua 2) Disolver 18.2g de tampn barbital en 1.5L de agua ajustar pH a 8.6

Solucion de glicerol-azul de bromofenol Pesar 0.2mg Azul de bromofenol, adicionar 1ml de glicerol y aforar a 10mL Tampn de la cmara Pesar 6g de Tris base + 28.8 g de glicina + 2g de SDS Aforar a 2L con agua y guardar en nevera

Solucin de teido 0.2g de azul de comassie +320ml de metanol +56ml de acido actico Diluir a 800ml con agua y filtrar Solucin de desteido 200ml de metanol + 35ml de acido actico diluir a 50ml con agua Solucin de parada 10mL Glicerol diluir a 200mL con agua Preparacin muestras Pesar 2.5g de muestra adicionar 2.5ml de tampn de muestra 1 o 2 calentar a 40C a bao mara x 10 minutos y macerar, con 3ml de tampn de muestra trasladar a un tubo de centrifuga y centrifugar, diluir a 10ml el sobrenadante con tampn de muestra. Condiciones Volumen muestra en cada pozo 40uL Voltaje : 100-120V Corriente: 20mA Teido: Se deja en la bandeja de tincin X 2 horas con 100Ml de solucin de teido, luego se saca la solucin de teido y se adiciona la de desteido se deja por una hora se extrae la solucin y se adiciona la solucin de glicerol para fijar las bandas.