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Anlisis de Northern Blot.

El mtodo de Northern Blot contina siendo, a pesar del enorme desarrollo de nuevas tecnologas como el PCR en Tiempo Real, la herramienta estndar para el anlisis cualitativo y cuantitativo de niveles de ARN mensajero (ARNm) en una determinada clula o tejido de inters. Esta tcnica consiste bsicamente en la extraccin de ARN total (ARN del tipo mensajero, ribosomal y de transferencia). Posteriormente se separa por tamao en un gel de agarosa el tipo de ARN que se desee estudiar y se transfiere por adhesin a una membrana de nylon. Finalmente se procede a hibridizar este ARN con una determinada sonda o secuencia de ADN o ARN que contenga a su vez un reportero (un marcador radioactivo por ejemplo) que permita identificar, visualizar e identificar la hibridizacin de ambos fragmentos de cidos nucleicos y as determinar la posicin y la cantidad de la regin de inters. Las principales desventajas que tiene esta metodologa implican: - Fragilidad del ARN, dado que es muy susceptible a degradarse si no se toman las debidas precauciones tales como el uso de material libre de ARNasas y el almacenamiento a temperaturas adecuadas (-70C). - No tiene la sensibilidad con la que cuentan otras tcnicas ms recientes. - El desarrollo de sondas de hibridizacin para ms de una regin es un proceso complicado. Para el anlisis especfico de tejidos cancergenos la metodologa implica la separacin del tejido sano, la posterior extraccin de ARN total y su posterior anlisis como se ha descrito anteriormente. El objetivo central en este caso es detectar y cuantificar la cantidad de ARN mensajero de inters, es decir, aquel que contenga la secuencia especfica que codifique la enzima que se desea estudiar. Por ltimo se procede a comparar el patrn obtenido con el tejido sano.(Gonzales, Gonzales, Espinosa, & rojas, 2007) .

Gonzales, G. F., Gonzales, C., Espinosa, D., & rojas, C. (2007). Sobre expresin de genes de las enzimas de la va glicoltica en clulas cancergenas. Acta Med Per, 3, 24.