Metodologa de la prueba E.L.I.S.A.

INMUNOLOGIA CLINICA

Jos Bernardo Hctor Escobar Henrriquez

Elaborado por: Diana Barrera Ronzn

Enzyme Linked Inmuno Sorbent Assay

Prueba inmuno absorbente ligada a una enzima

Pocillo de microtitulacin

La fase slida utiliza una mezcla de anticuerpos anti-IgE y otro anticuerpo anti-IgE enzima (peroxidasa de rabano picante) en solucin conjugada.

La muestra (suero) se aade al micropozo de titulacin recubiertos de anti-IgE y se incuban con Solucin cero Buffer.

Residu os

Si la IgE humana esta presente en la muestra, se combina con el anticuerpo en el pozo, posteriormente el pozo se lava para eliminar los residuos de muestra.

El anticuerpo IgE marcado con enzima se aade. El conjugado se unir a la IgE de la muestra unida a la antiIgE en el pozo, resultando que molculas de IgE del paciente se van a encontrar entre la fase solida y la IgE ligado a una enzima. Se incuba a temperatura ambiente.

Residu os

Los pozos se lavan para eliminar todo lo que pueda interferir en la reaccin, se aade una solucin de sustrato especfico para la enzima peroxidasa (TMB) y se incuba en la oscuridad durante 20 minutos resultando el desarrollo de un color azul.

El desarrollo de color se detiene con la adicin de HCl 2N, este color cambiara a amarillo y se mide con un espectrofotmetro a 450 nm. La concentracin de IgE es directamente proporcional a la intensidad de color de la muestra.

http://www.youtube.com/watch?v=Jmrv137VQIA&feat ure=player_detailpage http://clasedeinmunologia2.blogspot.mx/ http://www.immunospot.eu/elisa-animation.html http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/SolucionesELISA-protocolos.pdf Salinas Carmona. La inmunologa en la salud y enfermedad .Editorial mdica Panamericana

GRACIAS!