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Universidad Rafael Landvar

Facultad de Ingeniera
Ingeniera Qumica
Laboratorio de Bioqumica
Lic. Lucia Escobar
















REPORTE PRCTICA NO. 1:
TITULACIN DE CIDO GLUTMICO

















Zucely Castillo Monterroso
Carn 1022507
Interciclo 2012


Guatemala, 11 de Junio de 2012
1. SUMARIO


El cido glutmico es uno de los 20 aminocidos naturales ms comunes, que se
caracteriza por sus propiedades cidas. En la prctica de laboratorio fue titulada
una muestra de 10 ml solucin 1M de glutamato monosdico utilizando HCl 1M,
con el objetivo de determinar experimentalmente su punto isoelctrico.

Para ello fueron preparadas dos muestras de cido glutmico 1M identificadas
como A y B. A la muestra A le fue agregado 7.3 ml de solucin de NaOH hasta
alcanzar un pH de 11; mientras que a la muestra B se le agreg un volumen
equivalente de agua.

Para la titulacin de la muestra A fueron utilizados naranja de metilo y fenoftaleina
como indicadores, el viraje para la fenoftaleina fue observado al haber agregado
7ml de HCl 1M y tener un pH=7; mientras que para el naranja de metilo se observ
a los 13.5 ml de HCl 1M y pH= 3.16.

En la titulacin de la muestra B fue utilizado solamente naranja de metilo como
indicador, y su viraje se observ al haber agregado 7.1 ml de HCl 1M y pH=3.
Mediante un anlisis grfico se determin un punto isoelctrico de



2. OBJETIVOS

- Conocer las diferentes formas en que pueden existir los aminocidos.

- Determinar el punto isoelctrico del cido glutmico a partir de grfica de
titulacin


3. DATOS OBTENIDOS

Tabla 3.1: Mediciones realizadas previo a titulacin de cido glutmico 1M con HCl 1M

VARIABLE DE MEDICIN VALOR OBTENIDO
pH solucin 1M de GMS 7 0.005
Volumen de solucin de NaOH utilizado
para alcanzar pH 11 en muestra A
7.3 ml 0.05 ml
Volumen de agua utilizado en muestra B 7.3 ml 0.05 ml
Volumen de fenoftaleina 3 gotas
Volumen de naranja de metilo 3 gotas



Tabla 3.2. Mediciones obtenidas durante la titulacin muestra A con solucin de HCl 1M

VOLUMEN HCL (ml) pH
0 0.05 11 0.005
5 0.05 9.17 0.005
6.3 0.05 8.75 0.005
7 0.05 6.45 0.005
7.1 0.05 5.84 0.005
7.5 0.05 5.15 0.005
8 0.05 4.78 0.005
9 0.05 4.39 0.005
11 0.05 3.83 0.005
11.4 0.05 3.75 0.005
12.1 0.05 3.55 0.005
13.5 0.05 3.16 0.005
14 0.05 3.01 0.005
15.2 0.05 2.63 0.005
17 0.05 2.08 0.005


Tabla 3.3. Mediciones obtenidas durante la titulacin muestra B con solucin de HCl 1M




4. CLCULOS

- Clculo de equivalentes de HCl en titulacin de muestra A de GMS

3
0 6
3
2
eq
ml ml
V ml
+
= =


2
7 13.5
10.25
2
eq
ml ml
V ml
+
= =

VOLUMEN HCL (ml) pH
0 0.05 6.99 0.005
1 0.05 4.83 0.005
2 0.05 4.42 0.005
3.2 0.05 4.05 0.005
3.6 0.05 3.95 0.005
4 0.05 3.82 0.005
4.5 0.05 3.70 0.005
5 0.05 3.56 0.005
5.5 0.05 3.24 0.005
7.1 0.05 3.00 0.005
8 0.05 2.61 0.005
10 0.05 2.07 0.005
1
13.5 17
15.25
2
eq
ml ml
V ml
+
= =



- Clculo de equivalentes de HCl en titulacin de muestra B de GMS

2
1 7.1
4.05
2
eq
ml ml
V ml
+
= =


1
7.1 10
8.55
2
eq
ml ml
V ml
+
= =



- Clculo de pI para muestra A de GMS (los valores de pK obtenidos de
grfico de titulacin)

2 1
4 2.6
3.3
2 2
A
pK pK
pI
+ +
= = =



- Clculo de pI para muestra B de GMS (los valores de pK obtenidos de
grfico de titulacin)


2 1
3.8 2.3
3.05
2 2
B
pK pK
pI
+ +
= = =



- Clculo de pI promedio

3.3 3.05
3.175
2 2
A B
promedio
pI pI
pI
+ +
= = =


- Clculo de porcentaje de error respecto a pI terico

_ _ 3.2 3.175
% *100 *100 0.8%
_ 3.2
valor terico valor prctico
error
valor terido
| |
| |
= = =
| |
\ .
\ .



5. RESULTADOS Y OBSERVACIONES


Tabla 5.1. Curva de titulacin para muestra A




Tabla 5.2: Curva de titulacin para muestra B



Tabla 5.1: Valores de pI calculados para muestras A y B

CLCULO RESULTADO
pK
A2
muestra A 4
pK
A1
muestra A 2.26
pI
A
3.3
pK
A2
muestra B 3.8
pK
A1
muestra B 2.3
pI
B
3.05
pI
promedio
3.175
%error 0.8%


Tabla 5.2: Observaciones realizadas durante la prctica

DESCRIPCIN OBSERVACIN
Aspecto solucin de glutamato monosdico
1M

Incolora
Aspecto muestra A (GMS a pH 11)
posterior a adicin de indicadores
fenoftaleina y naranja de metilo

Rosa intenso
Titulacin de muestra A Se observ el viraje de fenolftalena a pH
de 7, desapareciendo la tonalidad rosa.
Se observ el viraje de naranja de metilo a
pH 3.1 desapareciendo color amarillo y
obtenindose color rojo-naranja

Aspecto muestra B (GMS a pH 7) posterior
a adicin de indicador naranja de metilo

Amarillo
Titulacin de muestra B Se observ el viraje de naranja de metilo a
pH 3, desapareciendo color amarillo y
obtenindose color rojo-naranja.




6. DISCUSIN DE RESULTADOS

El objetivo de la prctica de laboratorio fue la determinacin experimental del
punto isoelctrico del cido glutmico. Para ello se utiliz una muestra de 20 ml de
solucin de glutamato monosdico 1M, el cual se dividi en dos muestras de 10 ml
A y B. A la muestra A se le fueron aadidos 7.3ml de solucin de NaOH 1M para
obtener un pH 11, mientras que a la B se le aadieron 7.3 ml de agua
desmineralizada.
El cido glutmico es un aminocido que se caracteriza por tener un carcter
cido en soluciones acuosas (pH alrededor de 3.1) y encontrarse en su forma de
zwitterin; pero al medir el pH inicial de la muestra B se obtuvo un valor de pH 7.
Esto se debe a que la titulacin fue realizada con glutamato monosdico, la cual
es una sal proveniente de un cido dbil que en soluciones acuosas aumenta el
pH. (Wade (2004))

El pH inicial de la muestra A fue 11; a este pH el glutamato se encuentra en su
especie con carga neta negativa. Para la titulacin de esta muestra fue utilizado
fenoftaleina, la cual es un indicador que trabaja en el rango de pH de 8-10; y
naranja de metilo que trabaja en el rango de 3-4.5 (Brown (2004)). El viraje de
fenoftaleina a pH de 7.1 fue utilizado para calcular grficamente el valor de pKa
3
;
mientras que el viraje del naranja de metilo a pH 3.1 se utiliz para el clculo de
pKa
2
. A pH 3.1 la especie predominante fue la de zwitterin, y al continuar la
titulacin hasta pH 2 predomin la especie con carga positiva. La reaccin para la
titulacin de la muestra A fue:



El pH inicial de la muestra B fue de 7, correspondiente al pH de la sal de glutamato
monosdico en solucin. A diferencia de la muestra A, para la titulacin de la
muestra B fue utilizado nicamente naranja de metilo como indicador, y su viraje
fue observado a pH 3, en donde la especie predominante fue la zwitterin. La
titulacin continu hasta obtener un pH de 2.07 en donde la especie predominante
es la de carga neta positiva. El punto de equivalencia de la titulacin fue utilizado
para el clculo de pKa
2
y la reaccin de la titulacin para la muestra B fue:



Para el clculo del punto isoelctrico tanto en la muestra A como B, fueron
utilizados nicamente los valores de pKa
1
y pKa
2
obtenidos de la grfica de
titulacin correspondiente a cada muestra. El pI del cido glutmico es
dependiente nicamente de los valores de pKa
1
y pKa
2
ya que stos provienen de
la disociacin de los grupos de cido carboxlico que se ionizan en forma similar
(grupos con carga positiva que se ionizan a grupos con carga negativa al abstraer
los hidrgenos cidos). El valor promedio del punto isoelctrico obtenido
experimentalmente fue de 3.175, con un porcentaje de error del 0.8% respecto al
punto isoelctrico terico de 3.2.
El bajo porcentaje de error se encuentra ligado fuertemente al error humano que
existe durante la experimentacin, tanto durante el uso de la bureta tituladora
como en la lectura visual de viraje de los indicadores.


7. CONCLUSIONES

- A pH 11 el glutamato monosdico se encontraba en su especie con carga
negativa.
- A pH neutro obtenido en el viraje de fenoftalena durante la titulacin de la
muestra A, as como el pH inicial de la muestra B; la especie predominante
fue la que tiene la carga positiva en el grupo amino (NH
3
+
) y negativa en los
grupos carboxlicos (COO
-
).
- A pH 3 obtenido en ambas titulaciones durante el viraje del naranja de
metilo, la especie predominante fue la de zwitterin.
- Al final de la titulacin (pH=2) la especie predominante es la cargada
positivamente, la cual tiene todos los grupos ionizables con hidrgenos
cidos extrables.
- El punto isoelctrico calculado experimentalmente fue de 3.175 con un
0.8% de error respecto al valor terico. El error estuvo ligado al error
humano durante el uso de la bureta y lectura del viraje del indicador.



8. PREGUNTAS POSTLABORATORIO


1. Construya una grfica de titulacin del cido glutmico con HCl con
los datos obtenidos en la primera y segunda parte de la prctica

(Ver seccin de resultados)

2. Determine en forma grfica el punto isoelctrico

(Ver grficos 5.1 y 5.2 de seccin de resultados)


3. Ubique las regiones que se presentan en la grafica y localice las
formas inicas del cido glutmico que existen durante la titulacin,
derivadas de los grupos alfa y beta (carboxilo-amino)

Grfico A1: Especies inicas presentes durante la titulacin de la muestra A


Grfico A2: Especies inicas presentes durante la titulacin de la muestra B


4. Escriba la ecuacin de ionizacin de cido glutmico






9. BIBLIOGRAFA


- Wade, J. (2004) Qumica Orgnica (2. Ed.). Mxico: Prentice Hall

- Yurkanis (2008) Qumica Orgnica (2
o
. Ed). Mxico: Pearson.