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PROPIEDADES DE LOS AMINOÁCIDOS Y LAS PROTEINAS

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Práctica número 2

PROPIEDADES DE LOS AMINOÁCIDOS Y LAS PROTEINAS

Dylan Xavier Mendieta Benítez. 3er Semestre

Bioquímica

PROPIEDADES DE LOS AMINOÁCIDOS Y LAS PROTEINAS

Las proteínas son compuestos a base de carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno y generalmente azufre y fósforo; Todas las enzimas, algunas hormonas y muchos componentes estructurales importantes de la célula son proteínas. Las proteínas son macromoléculas que presentan pesos moleculares entre 5000 y muchos millones de Dalton. Todas las proteínas están compuestas por componentes más simples llamados aminoácidos unidos mediante enlace peptídico. En base a su composición cada una de estas moléculas muestran variaciones en sus propiedades biológicas, físicas y químicas debido a la secuencia específica de aminoácidos, que se conoce como

estructura primaria. La proteína refleja las propiedades de los aminoácidos que la componen, y por lo tanto muestra propiedades características. En la naturaleza existen 200 tipos de aminoácidos, de los cuales sólo 21 forman parte de las proteínas en general. Las plantas pueden sintetizar todos los aminoácidos a partir de sustancias simples, los aminoácidos que los animales no pueden sintetizar y que deben obtener en su alimentación se llaman aminoácidos esenciales, se consideran como esenciales 10 aminoácidos: Fenilalanina, Triptófano, Lisina, Valina, Treonina, Metionina, Leucina, Isoleucina, Arginina e Histidina: estos dos últimos son esenciales durante la infancia. Existen varios métodos para la identificación y cuantificación de las proteínas, pero la mayoría tiene como principio alguna reacción química característica de los grupos R de los diferentes aminoácidos. Los aminoácidos son compuestos sólidos; incoloros; cristalizables; de elevado punto de fusión (habitualmente por encima de los 200 ºC); solubles en agua; con actividad óptica y con un comportamiento anfótero. La actividad óptica se manifiesta por la capacidad de desviar el plano de luz polarizada que atraviesa una disolución de aminoácidos, y es debida a la asimetría del carbono , ya que se halla unido (excepto en la glicina) a cuatro radicales diferentes. Esta propiedad hace clasificar a los aminoácidos en Dextrogiros (+) si desvian el plano de luz polarizada hacia la derecha, y Levógiros (-) si lo desvian hacia la izquierda.
Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 1

. es decir. Dentro de las proteínas podemos decir que son constituyentes químicos fundamentales e imprescindibles en la materia viva porque: a) son los "instrumentos moleculares" mediante los cuales se expresa la información genética. Esta característica diferencia a las proteínas de otros principios inmediatos como glúcidos y lípidos que se encuentran en las células como simples sustancias inertes. El pH en el cual un aminoácido tiende a adoptar una forma dipolar neutra (igual número de cargas positivas que negativas) se denomina Punto Isoeléctrico.). regulación. Proceso de un aminoácido. Sólo excepcionalmente sirven como fuente de energía. b) son sustancias "plásticas" para los seres vivos. como un ácido (cuando el pH es básico). materiales de construcción y reparación de sus propias estructuras celulares. defensa. dependiendo del pH. Proteínas. reserva. los aminoácidos son capaces de ionizarse. c) muchas tienen "actividad biológica" (transporte. es decir. en disolución acuosa. etc. Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 2 . En este último caso adoptan un estado dipolar iónico conocido como zwitterión.. Fig. las proteínas ejecutan las órdenes dictadas por los ácidos nucleicos.Bioquímica El comportamiento anfótero se refiere a que. 1. como una base (cuando el pH es ácido) o como un ácido y una base a la vez (cuando el pH es neutro).

OBJETIVOS GENERALES DE LA PRÁCTICA:  Realizar algunas reacciones coloridas específicas para la identificación de aminoácidos que constituyen a una proteína. 5 y 10 mL 3 Vasos de precipitados de 100 mL.2.  Comprender la importancia de estas reacciones para distinguir proteínas.Bioquímica Fig.  Observar el efecto de algunos agentes fisicoquímicos sobre la solubilidad de las proteínas MATERIAL:        1 Gradilla 24 Tubos de ensayo Pipetas de 1. 1 Baño María a ebullición 1 Pinzas para tubo 1 Agitador de vidrio SOLUCIONES Y REACTIVOS: SOLUCIONES PORCENTUALES: Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 3 . Diagrama funciones enzimáticas y el ADN.

1 N  Regulador de acetatos 0.7 Reactivo de Biuret Reactivo de Elrich Reactivo de Millon Reactivo de Hopkins Cole Reactivos: Ácido acético glacial.Bioquímica           Ninhidrina al 1 % en etanol al 96 % Acetato de plomo al 5 % Cloruro de bario al 5 % Cloruro de sodio al 5% Cloruro mercúrico al 5 % Hidróxido de sodio al 10 % Hidroxido de sodio al 10 % Nitrito de sodio 30 % Nitrato de plata al 2 % Acido sulfanilico 0.5 % Soluciones de aminoácidos y proteínas         Gelatina al 5 % Peptona al 5 % Albúmina al 5 % Tirosina al 1 % Triptofano al 1 % Fenilalanina al 1% Cisteina al 1 % Arginina al 1 %  Clara de huevo fresca y filtrada dil(1:4) SOLUCIONES NORMALES:  Ácido clorhídrico 0. Ácido nítrico concentrado Hidróxido de amonio concentrado Óxido rojo de mercurio Nitrito de sodio Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 4 .1 N  Hidróxido de sodio 0.1 M pH 4.

por lo que se usa comúnmente para determinar la presencia de aminoácidos y proteínas. descubierta por Ruhemman. la coloración producida por la ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido. La prolina y la hidroxiprolina dan productos amarillos con la ninhidrina. agua y el aldehído correspondiente. dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. Es una reacción con alta sensibilidad detecta una parte de alanina en 500. con lo cual hay una descarboxilación.Bioquímica Magnesio en polvo o granallas. también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8. Es una reacción general para compuestos con grupos amino. TÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS: Algunas de las reacciones de identificación cualitativa para proteínas son: REACCIÓN DE LA NINHIDRINA: La ninhidrina (triceto hidrinina) reacciona con los grupos amino libres.00 partes de agua. Este producto colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia. Ácido oxálico saturado Fig. dando lugar a un compuesto púrpura violeta o azul. Reacción con ninhidrina. CO2. La ninhidrina es un poderoso agente reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis.3. Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 5 .

la presencia de cantidades relativamente altas de mercurio conduce a la formación de Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en un medio fuertemente ácido reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloración roja característica.La ninhidrina reducida formada reacción con una molecula de ninhidrina no reducida y con el amoniaco resultante de la desaminación para formar un complejo que presentó coloración violeta. El reactivo de Millon se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en una parte de ácido nítrico (HNO3). Discusión de resultados: Esta reacción tuvo gran interés ya que dio lugar a una reacción coloreada de los aminoácidos . PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL: A 1 mL de la solución problema se le adicionan 5 gotas de la solución de ninhidrina en etanol El cambio de color a azul o violeta se debe a la presencia de grupos amino libres Si es necesario calentar en baño María 1 o 2 minutos. pero si hay aminoacidos libres. De esta forma se puedo determinar cuantitativamente los aminoácidos por espectrofotometría por ejemplo. en aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina. indica que no hay proteinas. REACCIÓN DE MILLON El reactivo de Millon contiene una mezcla de nitritos y nitratos mercúricos en ácido nítrico concentrado. Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 6 . La ninhidrina descarboxila y desamina el aminoácido gracias a su fuerte poder oxidante. Debido a la presencia del grupo fenólico se produce un compuesto de color rojo.Bioquímica Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos.ampliamente utilizada para la identifición y sobre todo para su dedterminación cuantitativa. De esta forma. gracias al dióxido de carbono que se formaría.

4.. el reactivo se puede diluir con dos veces su volumen en agua y deberá ser decantada algunas horas después la solución clara sobrenadante. pero Fenilalanina lo hace más lento. PROCEDIMIENTO: Se calienta en baño Maria a A 1 mL de las soluciones ebullición. Triptófano y Tirosina reaccionan rápidamente.5. dando como resultado un compuesto amarillo que en solución alcalina se vuelve anaranjado. Reacción de Millon. Reacción Xantoproteica. Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 7 . problemasREACCIÓN se les adiciona de 2a 5 XANTOPROTEICA gotas del reactivo de Millon Salkowsky descubrió que los aminoácidos con anillo aromático pueden nitrarse con HNO3 concentrado. Fig. Fig.Bioquímica Al finalizar la reacción. La aparición de un color rojo será una prueba positiva. durante la cual se desprende gran cantidad de óxidos de nitrógeno. por lo que es necesario adicionar H 2SO4 concentrado para activar el anillo.

PROCEDIMIENTO: A 1 mL de la solución problema se le adiciona 1 mL de ácido nítrico concentrado.Bioquímica Cuando se trata una disolución proteica en medio ácido (nítrico concentrado) y a elevada temperatura se forman compuestos nitrofenílicos.5H2O. formándose más colorantes. amarillo o naranja en la interfase será prueba positiva. La reacción XANTROPROTEICA es un método que se puede utilizar para determinar la cantidad de proteína soluble en una solución. Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 8 . por tanto darán positiva a esta reacción. Este test específico es para reconocer enlaces peptídicos. Opera a través del ion Cu2+ el que en reacción alcalina interacciona con los iones de N-3 de los grupos amino formando un complejo color violeta. Los reactivos utilizados son NaOH y SO4Cu. El espectrofotómetro se puede entonces utilizar para medir la intensidad del color que se produjo. La prueba resulta negativa para proteínas que no contengan aminoácidos aromáticos activados. calentar la mezcla y enfriar Adicionar por estratificación La aparición de un color 1 ml de Hidróxido de amonio concentrado. pero todas las proteínas tienen todos los aminoácidos. que son de color amarillo. Esta reacción depende de la nitración de los anillos bencénicos activados. por lo tanto requiere de la presencia de al menos en tetrapéptido para que de positivo. Esta reacción es positiva para aminoácidos aromáticos activados como proteínas en solución. Cada átomo de Cu2+ reacciona con dos átomos de N y establece una resonancia de electrones con otros dos N formando un complejo color violeta y es así como podemos catabolizar una reacción anastrófica de la mayor enzima llamada octatriona. aunque es más sensible cuando se encuentran perfectamente secas.

todavía Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 9 . todavía no determinados. Al añadir NaOH. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de gruposaromáticos. insoluble en las grasas y en el éter. especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali. El espectrofotómetro se puede entonces utilizar para medir la intensidad del color que se produjo. Según las guías químicas es una reacción cualitativa. Se obtuvo bajo forma cristalina. Por ende determina la presencia o no de proteínas. se torna color amarillo oscuro. Para cuantificar se usa otra reacción. y probablemente unidos a una proteína. y se hace un análisis espectro fotométrico. La reacción xantoproteica se puede considerar como una sustitución electrofílica aromática de los residuos de tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un compuesto coloreado amarillo a pH ácido. Cada átomo de Cu2+ reacciona con dos átomos de N y establece una resonancia de electrones con otros dos N formando un complejo color violeta y es así como podemos catabolizar una reacción anastrófica de la mayor enzima llamada octatriona. mas no cuantitativa.Bioquímica Se obtuvo bajo forma cristalina. es destruida por los fermentos digestivos y por esta causa no se administra por la vía digestivo. da las reacciones de las proteínas por investigación química (reacción xantroproteica). una sustancia extraída de las paratiroides de la vaca que tiene los siguientes caracteres: polipéptido compuesto de muchos aminoácidos. Los reactivos utilizados son NaOH y SO4Cu. por lo tanto requiere de la presencia de al menos en tetrapéptido para que de positivo. una sustancia extraída de las paratiroides de la vaca que tiene los siguientes caracteres: polipéptido compuesto de muchos aminoácidos. La reacción XANTROPROTEICA es un método que se puede utilizar para determinar la cantidad de proteína soluble en una solución. como la deBiuret. La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la presencia de proteínas solubles en una solución. algo soluble en el alcohol y muy soluble en el agua acidulada. Opera a través del ion Cu2+ el que en reacción alcalina interacciona con los iones de N-3 de los grupos amino formando un complejo color violeta.8. los nitrógenos se unen mediante un enlace doble (-N=N-) formando colorantes azoicos (de color naranja). empleando ácido nítrico concentrado.5H2O. contiene trazas de fierro y azufre. su pH es de 4. Este test específico es para reconocer enlaces peptídicos.

y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de potasio no participa en la reacción. serina y treonina) no dan esta reacción. Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4). Transporte de Urea a Biuret. Esta es una prueba general para proteínas y péptidos de cadena no menores a 3 aminoácidos. El reactivo. contiene trazas de fierro y azufre.6. cambia a violeta en presencia de proteínas. Reacción de Biuret (Reacción de Piotrowsky) El biuret se forma calentando la urea aproximadamente a 180°C Fig. y probablemente unidos a una proteína. es destruida por los fermentos digestivos y por esta causa no se administra por la vía digestiva.8. ya que la reacción será negativa cuando la hidrólisis sea completa. insoluble en las grasas y en el éter. algo soluble en el alcohol y muy soluble en el agua acidulada. esta reacción es útil para seguir un proceso de hidrólisis proteínica. da las reacciones de las proteínas por investigación química (reacción xantroproteica). su pH es de 4. péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. el sulfato de cobre puede formar un complejo del ión cobre en enlaces covalentes coordinados con los grupos amino de las proteínas formando un complejo de color violeta.Bioquímica no determinados. El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas. En soluciones fuertemente alcalinas. por lo que la reacción sólo es positiva para péptidos o proteínas y no para aminoácidos solos. Para formar el complejo se requieren al menos 2 grupos amino unidos mediante un enlace péptídico. pero proporciona el medio alcalinonecesario para que tenga lugar. de color azul. Se usa normalmente en el ensayo de Biuret. un método colorimétrico que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopia ultravioleta-visible a una Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 10 . Los dipéptidos y los aminoácidos (excepto histidina. junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O6·4H2O).

de color amarillo. La concentración de una disolución problema puede calcularse interpolando el valor obtenido de absorbancia en una recta de calibración trazada con valores conocidos de concentración de una proteína y sus respectivas absorbancias a 750 nm ajustando el aparato a cero con el blanco. Si el color de la reacción no es inmediatamente.Bioquímica longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+). 7. Este reactivo es una disolución de tungstato sódico y molibdato sódico en ácido fosfórico y ácido clorhídrico. Es un método muy usado para la cuantificación de proteínas. dejar reposar de 10 a 15 minutos. que al ser reducido por los grupos fenólicos da lugar a un complejo de color azul intenso. MÉTODO DE LOWRY (NO SE REALIZARÁ EN LA PRÁCTICA) El método de Lowry se basa en la reacción de las proteínas con el reactivo de Folin-Ciocalteau dando un complejo coloreado. La intensidad del color depende de la cantidad presente en las proteínas de estos aminoácidos aromáticos y será proporcional a la concentración de proteínas en la disolución. Fig. A 1 mL de cada solución problema. añadirle 2 mL de NaOH al 10 % y de 3 a 5 gotas del reactivo de biuret. Ensayo de biruet. El mecanismo del proceso es el siguiente: Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 11 . El principal constituyente del reactivo es el ácido fosfomolibdotúngstico. cuya estructura se desconoce. mezclar La formación de un color violáceo o la precipitación de hidróxido cúprico será una prueba positiva. Esta reacción es 100 veces más sensible que la determinación por el método de Biuret en la cuantificación de proteínas.

EDTA) o los reductores de Cu (por ej. Este reactivo reacciona primero produciendo un producto inestable que se reduce lentamente a azul de molibdeno/tungsteno esta reacción ocurre en medio ácido. por los grupos fenólicos de los residuos de tirosina presentes en la mayoría de las proteínas. actuando el cobre como catalizador. Fig. provocan el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la proteína. REACTIVOS • Lowry A: Na2CO3 al 2. es un método colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. 2) Los grupos R de los residuos de tirosina y triptófano de las proteínas. que se reduce para formar un compuesto coloreado. Bajo condiciones alcalinas el Cu++ forma un complejo con los enlaces peptídicos de las proteínas y se reduce a Cu+. fenoles) serán interferentes de la reacción. inicialmente es un producto inestable.Bioquímica 2+ 1) El Cu . ditiotreitol.Reacción de biuret. se lleva a cabo la reducción del reactivo de Folin-Ciocalteau. El Cu+ así como los grupos R de Tirosina. se unen a las proteínas formando complejos con los átomos de nitrógeno de los enlaces peptídicos.0 % en NaOH 0. Las proteínas producirán distintas intensidades de color dependiendo primariamente de su contenido de Tyr y Trp. forma un complejo con los enlaces peptídicos de las proteínas. 8 . estos complejos Cu2+-proteína tienen un color azul claro. exponiendo los residuos fenólicos. Comentarios: aquellos agentes que acidifican las soluciones (por ejemplo: ácidos fuertes o buffers)..1N Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 12 . los quelantes de Cu (por ej. Los iones Cu2+. en medio alcalino. Triptofano y Cisteina reaccionan con el reactivo de Folin.: mercaptoetanol.

0.Bioquímica • Lowry B: CuSO4 al 2 %. histidina para dar complejos coloridos de color rojo cereza.3 ml Lowry C. en la siguiente proporción: 30 ml Lowry A. 1) Se añaden 400 μl de solución problema Mezclar y esperar 15 min a temperatura ambiente. Añadir a todos los tubos 200 μl de reactivo de Folin diluido en agua destilada 1/1 (vol/vol). • Lowry C: Tartrato Sodio-potasio ( KNaC4H4O6) al 2% • Reactivo de Folin-Ciocalteus: tungstato Na y molibdato sódico en PO4H3 y ClH Se debe de preparar ´la solución D al momento. y que permite detectar compuestos formados que se conocen como azo-compuestos. diluida (1:100). Medir la absorbancia a 750 nm ajustando el aparato a cero con un blaco de reactivos Reacción de Ehrlich El ácido sulfianílico diazotizado se condensa con el anillo fenólico de la tirosina e imidazol.3 ml Lowry B y 0. Mezclar y esperar 30 min a temperatura ambiente. Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 13 .

Agregue a cada tubo en el siguiente orden: 1 mL. La positividad se reconoce por la aparición de un anillo color violeta-rojizo.Bioquímica PROCEDIMIENTO: A tubos de ensayo rotulados como: blanco y problemas. Posteriormente adicione 0. de de NH4OH al 10%. Se propone la siguiente reacción: Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 14 . de Nitrito de sodio. Observe y anote los resultados. en presencia de ácido sulfúrico concentrado. El color púrpura que se produce se debe a la condensación del anillo indol con el aldehído. 1 mL de ácido sulfanilico 0. mezcle bien y deje en reposo durante 15 min.5% Observe. Implica la reacción del grupo indol del triptofano con el ácido glioxílico y las proteínas que lo contienen.5 mL. Reacción de Hopkins-Cole.

Este es uno de los R de las cadenas de proteínas más importantes de determinar. La cisteína y la cistina cuando se tratan en un medio de álcalis fuerte pueden formar H2S que se detecta al hacerlo reaccionar con Pb formando un precipitado negro de PbS.. pues el ±SH cumple un papel determinante en conformación de las proteínas y en su actividad biológica. Reacción de Hopkins-Cole.9. Fig. GELATINA No cambio No tiene Rosa Positivo Amarillo traslúcido Positivo Violeta Positivo Naranja /transpare nte negativo PEPTONA Violeta Si tiene Naranja Positivo Amarillo traslúcido Positivo Violeta Positivo Naranja negativo Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 15 ..Bioquímica . Reacción para azufre de cisteína y cistina. pues proteínas más importantes de determinar. libres) REACCIÓN DE MILLON REACCIÓN REACCIÓN XANTOPROTEI CA REACCIÓN DE BIURET DE EHRILCH REACCIÓN DE HOPKINS COLE.A. RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS Parte I REACCIÓN CON SOLUCIÓNES LA NINHIDRINA (A.

que es el valor del pH en el cual la carga neta de la proteína es cero y no migra en un campo eléctrico. desfavoreciendo la Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 16 . además la proteína presenta su máxima viscosidad. ya que disminuyen la constante dieléctrica del agua. acetona (cetonas) y éteres en una solución acuosa de proteína incrementan su tendencia a precipitar.Bioquímica ALBUMINA Violeta Si tiene Una blanca parte Amarillo y Positivo Violeta Positivo Naranjita clara/ negativa otra roja Positivo TIROSINA Amarilla No tiene Blanco Negativo No cambio Negativo Rojo Positivo No cambio Negativo No cambio Negativo Amarillo Positivo Incoloro Negativo Azul Negativo Azul Negativo pareja Amarilla postivo FENILALANINA Violeta Si tiene Naranja/n egativo No cambio/ negativo Rojo/Posi tivo CISTEINA No cambio No tiene ARGININA No cambio No tiene No cambio Negativo No cambio Negativo No cambio Negativo No cambio Negativo Azul Negativo Azul Negativo AGUA No cambio No tiene *Tabla 1 EFECTO POR SOLVENTES La mayoría de las proteínas presentan un mínimo de solubilidad a un pH conocido como punto isoeléctrico (pI). La acción de algunos solventes orgánicos como etanol (alcoholes).

la de la parte superior. se le Se formaron dos fases una blanca con grumos (proteínas) y la otra medio amarillenta Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 17 .7 ( mL) DESCRIPCIÓN DEL EXPERIMENTO: --(mL) --- 1 Se formaron burbujas en la parte superior. opaca y la inferior que es transparente Se forman dos fase.1 M (mL) REGULADOR DE ACETATOS 0. que no son muy visibles porque una es turbulenta y la otra no. TUBO N° Clara de huevo Vol.Bioquímica interacción agua-proteína y favoreciendo la interacción proteína--proteína. 1 3 ---1 --- 2 3 ----1 3 3 ------- (mL) (mL) (mL) (mL) (mL) filtrada dil (1:4) SOLVENTE: HCl 0. ocurriendo su precipitación.1 M pH 4.1 M (mL) NaOH 0. es decir una emulsión Tambien se formaron burbujas pero menos que en la primera Toda la substancia se opaco ETANOL al 96% (mL) Observación: (mL) 3 3 3 Se formaron dos fases. organica.

En el segundo experimento (Biuret) también dio positivo para todas indicando que todas poseían 2 grupos carbamino unidos directamente o a través de un solo átomo de carbono o nitrógeno formando un complejo de coordinación entre los iones Cu 2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos provocando el cambio de coloración ya fuera violeta o rosado.5 como la tirosina. debe ser previamente neutralizada. proteínas como la ovoalbúmina producen un precipitado blanco que progresivamente por acción del calor se torna rojo. ya que el álcali precipitaría al ion mercurio en forma de óxidos amarillos. Análisis de resultados: La reacción del Millón se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molécula proteica. razón por la cual este reactivo no se usa para medir albúmina en orina . en todas las proteínas dio positiva. el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reacción.Bioquímica agrego fenoftaleina para distinguirlas y la organica quedo arriba *Tabla 2. De estos compuestos.Debe tomarse en cuenta que en el caso de que la solución a examinar sea muy alcalina. sólo la tirosina está presente en las proteínas. Cualquier compuesto fenólico que no esté sustituido en la posición 3. ya que el mercurio del reactivo del Millón es precipitado y se vuelve negativo. Se realizó el primer experimento con la reacción de Millon. de manera que sólo las proteínas que tienen este aminoácido ofrecen resultados positivos. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgánicas en gran cantidad. Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 18 . En esta prueba los compuestos mercúricos en medio fuertemente ácido (ácido nítrico del reactivo) se condensan con el grupo fenólico formando un compuesto de color rojo ladrillo rojizo. Además. lo que indicó la presencia de un grupo hidroxifenilo en la molécula proteica excepto en la glicina debido a que este es un aminoácido. Se formaron soluciones rojas debido a que los compuestos mercúricos del reactivo se condensaron con el grupo fenólico de las proteínas.

En el acetato de plomo 5% si se precipito en poco mas que el nitrato de plata pero menos que el cloruro de mercurio porque tomo un tono mas bajito. pero cuando agregamos etanol si se precipito y se separo en dos fases. y cuando agregamos el etanol tampoco cambio . y observamos que con lo primero añadido no se precipito . Con el nitrato de plata al 5% el cual se precipito pero no tanto como el cloruro de mercurio porque tomo un color blanco pero no tanto si no mas blanquizco. En el caso del experimento efecto por solventes. el cual nos dio un resultado de burbujas . pero cuando agregamos el etanol se formaron dos fases . en el tubo se agregó 3ml de clara de huevo. En el experimento de precipitación por metales pesados se agrego cloruro de mercurio al 5% y observamos que se precipito porque cambio de color. al calentar… la cisteína. que con el cloruro de mercurio. pero no cambio el color de nada . En nuestro tubo tres agregamos 3mL de clara de huevo y 1 mL de acetato regulador 0. Con la reacción Xantoproteica.1M con un pH 4. dio negativo para el aminoácido ya que no es aromático y positivo para las proteínas por su grupo fenólico por la nitración del anillo bencénico presente en los residuos de aminoácidos de las proteínas obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo. aunque como experimentación y para comprobar agregamos fenolftaleína nos pudimos dar cuenta que si había dos fases. mas 2 mililitros de acido clorhídrico .7 y se opaco nuestra muestra .transparente. la albúmina y l a gelatina se pusieron color amarillo. pero cuando agregamos el etanol si hubo un precipitado porque se separo nuestra muestra en dos fases una blanca y la otro como babosa transparente y amarillosa. Con el cloruro de bario no se precipito. pero se aclaró un poco El agua fue nuestra muestra patrón.Bioquímica Para el tercer experimento (Xanproteico). blanco. Mientras que en el tubo dos agregamos por primera estancia un mililitro de hidróxido de sodio. Con la reacción de Ehlrich se dieron 2 fases… (se menciona primero la capa superior y después la capa inferior). Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 19 . pero se aclaró un poco Con el cloruro de sodio no se precipito. Dé un color transparente a blanco con aspecto opaco espeso. la cual una era de color blanco y la otra mitad se formo un tono transparente.

2004 Bioquímica. Reverté Barcelona Bogóta Buenos Aires México pp:15-70. G. España Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa Página 20 . 1991 Bioquímica. Tomo I. Técnicas de bioquímica aplicada. Van Holde Mathews. Bioquimica 3 ed. México. 1974. así como también las reacciones específicas para cada aminoácido que las constituye. México Argentina España pp 5963 Stryer. Las reacciones coloridas como por ejemplo la reacción de millón son sirve para identificar las proteínas formadas por grupos fenólicos y también proteínas que contengan tirosina. 1993. BOHINSKI.. Bibliografía: Rendina. Pearson.+ Las propiedades bioquímicas dependieron fundamentalmente del peso molecular de su carga eléctrica y de la conformación que adopte la molécula.. 3ª ed. por lo cuál se pueden interpretar los resultados de acuerdo a las características que se observen como por ejemplo la precipitación o turbidez que experimente la proteína en la reacción. Pearson. 5ed. Latinoamericaca. Ed.Bioquímica Conclusiones: Se observaron algunas de las propiedades de las proteínas tanto físicas como fisicoquímicas. Ed. L.

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