TIPOS DE TINCIONES

Existen múltiples métodos de tinción histológica, unos generales y otros específicos, que permiten poner de manifiesto tanto la topografía tisular, como tipos celulares concretos, determinados orgánulos o estructuras intracelulares. Las tinciones histológicas propiamente dichas utilizan colorantes, la mayor parte de ellos derivados de la industria textil, que se eligen en función de su capacidad de interaccionar con los diferentes constituyentes de los tejidos. Técnicas de tinción más complejas como las histoenzimáticas o inmunocitoquímicas se basan en el empleo de sustratos, lectinas, anticuerpos, etc. ¿QUE ES UN COLORANTE? Un colorante es una molécula que tiene la capacidad de absorber radiaciones electromagnéticas dentro de la región del espectro visible es decier entre 400 y 650 nm. Los colorantes que absorben todas las radiaciones entre estos márgenes, no transmiten ningún tipo de luz y se ven por lo tanto de color negro. Aquellos colorantes que absorben una franja más estrecha, transmiten un color determinado. Por ejemplo el ácido pícrico absorbe predominantemente la luz azul-violeta del final del espectro visible, dando como resultado una luz transmitida de color amarillo. ¿CUÁNDO SE HABLA DE UN BUEN MÉTODO DE TINCIÓN? Un buen método de tinción es aquel que cuando se reproduce da un alto porcentaje de éxito con resultados equiparables. Todos los métodos de tinción requieren siempre una adaptación o modificación para ser utilizados correctamente. Para reproducir un método de tinción hay que utilizar siempre reactivos, colorantes y agua destilada de calidad y preparar las soluciones colorantes en material de vidrio extremadamente limpio. Conviene tener presente que la técnica de tinción en sí misma no es una técnica aislada sino que forma parte integral de todo el proceso histológico. Los protocolos de tinción deben escribirse de forma concisa, anotando de forma muy precisa indicando claramente todos los pasos necesarios para preparar todas las soluciones empleadas, tiempos de actuación, temperatura, condiciones, etc... ¿PUEDE LA FIJACIÓN INTERACCIONAR CON LA TÉCNICA DE TINCIÓN? Los diferentes fijadores interactúan de forma diferente sobre las moléculas que componen los tejidos produciendo modificaciones. En un mismo tejido, los colorantes se comportan de forma diferente en función del grado de fijación y de la naturaleza del fijador utilizado. Por ejemplo, se conoce que tanto la formalina como el trióxido de osmio inducen basófilo en los tejidos, mientras que las soluciones colorantes a base de dicromato inducen acidofilia. En comparación con la formalina, el fijador de Carnoy incrementa la avidez del tejido por los colorantes, mientras que el fijador de Zenker disminuye el grado de coloración. ¿QUE ES UNA TINCIÓN PROGRESIVA Y UNA TINCIÓN REGRESIVA? Una tinción progresiva es aquella en las que los cortes histológicos se sumergen en la solución colorante durante el tiempo necesario hasta que adquieren el grado de tinción deseada. Cuanto más tiempo están los cortes en la solución colorante, más fuerte es la tinción. Una tinción regresiva es aquella en la que los cortes se "sobretiñen" dejándolos en la solución colorante durante un tiempo

de tal manera que se consigue teñir con colores diferentes. ¿QUÉ ES UNA TINCIÓN DE CORTES "EN FLOTACIÓN"? Usualmente los cortes histológicos se montan sobre portaobjetos antes de ser teñidos lo cual facilita su manipulación. ¿EN QUÉ CONSISTE UNA TINCIÓN NEGATIVA? Esta forma de tinción se basa en que el colorante no-tiñe la estructura que se desea estudiar. obtenidos con un criostato o con un vibratomo. estructuras diferentes. ¿QUÉ ES UNA TINCIÓN TRICRÓMICA? Las tinciones pueden ser simples cuando se utiliza un solo colorante.excesivo y posteriormente se procede a retirar el exceso de colorante (proceso que se llama "diferenciación") mediante tratamiento con una solución ácida o alcohólica. . ¿QUÉ DIFERENCIA HAY ENTRE UNA TINCIÓN FÍSICA Y UNA TINCIÓN QUÍMICA? En una tinción física. como el Carmín de litio o el Azul Tripán. En una tinción indirecta se hace interaccionar en primer lugar a una sustancia química denominada "mordiente" con el sustrato la cual permite la posterior interacción del colorante. de tal forma que la morfología externa o los contornos de esa estructura quedan delimitados por el propio colorante que se encuentra a su alrededor. En una tinción química. ¿QUÉ ES UNA TINCIÓN SUPRAVITAL? Es aquella que se realiza sobre células frescas. recién obtenidas. En una tinción tricrómica se emplean tres colorantes. y es empleado para demostrar gotas lipídicas. permitiendo así su rápida identificación en el microscopio. ¿QUÉ ES UNA TINCIÓN DIRECTA Y UNA INDIRECTA? En una tinción directa el colorante interacciona directamente con el sustrato. En este caso se ajusta el tiempo de diferenciación. sobre todo cuando se utilizan cortes gruesos de 3050 micras. Por ejemplo el Sudán III se disuelve en las grasas. Sin embargo en ocasiones. puentes de hidrógeno. el colorante interacciona químicamente con el sustrato a través de fuerzas de van der Waals. se inyecta en un organismo vivo para estudiar procesos vitales de células capaces de acumularlo por pinocitosis o fagocitosis. Para ello los cortes de tejido se mantienen sumergidos (en flotación) en el interior de la solución colorante lo cual permite la accesibilidad del colorante por ambas superficies. el colorante se disuelve en el sustrato. se puede teñir las mitocondrias de células vivas con el colorante Verde Jano y observarlas con el microscopio mientras las células permanecen vivas. enlaces covalentes o enlaces electrostáticos. o múltiples cuando se usan dos o más colorantes. con objeto de realizar una observación de las estructuras teñidas con las células vivas. Usualmente los mordientes son sales. hidróxidos o alumbres de metales bivalentes o trivalentes. cada uno de ellos con unas particularidades. Por ejemplo. conviene realizar determinado tipo de tinciones "en flotación". ¿QUÉ ES UNA TINCIÓN VITAL? Es aquel procedimiento por el cual un colorante no-tóxico.

conviene realizar la tinción no sobre cortes histológicos sino sobre la pieza o bloque de tejido. Para ello se recurre a una serie de reacciones químicas que demuestran la presencia del producto de la actividade enzimática. en algunos tipos de impregnaciones metálicas. técnicas de Golgi. ¿EN QUÉ CONSISTE UNA TINCIÓN "EN BLOQUE"? En ocasiones.. sin embargo. ¿QUÉ ES UNA TINCIÓN PARA MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA? Para la observación de los cortes ultrafinos con el microscopio electrónico de transmisión. Para ello el bloque de tejido se sumerge en la solución colorante durante un tiempo determinado. es preciso "contrastar" los cortes con objeto de incrementar las diferencias de densidad electrónica de las diferentes partes de la muestra. . Para ello se recurre al emleo de sales de metales pesados como uranio. ¿QUÉ ES UNA TINCIÓN EN PLACA? Es aquella que se realiza utilizando placas de cultivo celulares. Estos anticuerpos pueden estar marcados con una sustancia fluorescente y en este caso se trata de una tinción de inmunofluorescencia. Es decir. hasta que no se han confeccionado los cortes y se realiza la observación microscópica.Este tipo de técnica es poco común cuando se utilizan colorantes pero es habitual cuando se realizan técnicas de tinción histoenzimáticas o inmunocitoquímicas. ¿QUÉ ES UNA TINCIÓN HISTOENZIMÁTICA? El objetivo de una tinción histoenzimática es detectar la presencia de un enzima. etc.. Los resultados finales no se pueden valorar. wolframio o plomo. ¿QUÉ ES UNA TINCIÓN INMUNOCITOQUÍMICA? Las tinciones inmunocitoquímicas o inmunohistoquímica pretenden detectar la presencia de una molécula con características antigénicas. la tinción se realiza sobre células que se han mantenido vivas en condiciones in vitro. Para ello se recurre al empleo de anticuerpos que interaccionan directamente con los antígenos.

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