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-Test de nitratos: Se utiliza para diferenciar grupos bacterianos teniendo en cuenta si utilizan el nitrato en una va alternativa como fuente

de energa, reducindolo a nitrito, nitrgeno molecular libre, amonaco, hidroxilamina u otros compuestos nitrogenados, siendo este proceso es catalizado por la enzima nitratoreductasa. La prueba consta de dos fases, en primer lugar se le aaden los dos reactivos 0,5 mL de -naftilamina y otros 0,5 mL de cido sulfanlico, con los que se comprueba si hay o no reduccin a nitritos. La reaccin es positiva si treinta segundos despus de aadir los reactivos aparece un color rojo-morado y es negativa, si no hay cambio de color en el medio. Para confirmar que el proceso es negativo y no se ha reducido el nitrato se comprueba aadiendo un agente reductor, que se trata del polvo de Zinc, por el cual, en caso de que existan nitratos, los reducira a nitritos, volviendo el medio a color rojo. Por otro lado, hay que citar que la presencia de la campana de Durham es para determinar si se han reducido a nitrgeno molecular, que se evidenciara con la produccin de gas en la misma.

El procedimiento se lleva a cabo incubando el medio de cultivo con nitrato con nuestra cepa durante 24-48 horas y transcurrido este tiempo, se le aade el Reactivo Greiss-Ilosvay que est formado por el Reactivo A y B necesarios en la prueba. As, se le aaden 0.5 ml de -naftilamina al 0.5% y a continuacin 0.5 ml de cido sulfanlico al 0.8 %.

Oxidasa.
Prueba utilizada para la deteccin de la enzima citocromo-c-oxidasa, presente en los gneros Pseudomonas, Neisseria, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, entre otros.

Fundamento

Los discos contienen oxalato de dimetil-para-fenilendiamina, el cual es el sustrato de la enzima oxidasa. Los microorganismos que producen la enzima oxidasa se evidencian porque en presencia de oxgeno atmosfrico y citocromo c, se oxida el sustrato presente en los discos a un compuesto de color rojo-fucsia.

Metodologa Siembra
- En tubo: a partir de un cultivo puro, hacer una suspensin densa en 0.2 ml de agua destilada estril, y agregar un disco de OX. - En portaobjetos: humedecer el disco de OX con una gota de agua y luego colocar sobre l la colonia en estudio. (sta metodologa se realiza cuando se tiene escaso nmero disponible de colonias en estudio).

Incubacin

Generalmente dentro del minuto, y a temperatura ambiente se detectan los resultados positivos. Una reaccin lenta, pasado los 2 minutos, debe considerarse negativa. Utilizar como control positivo Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, y como control negativo Escherichia coli ATCC 25922.

Resultados
Positivo: observacin de color rojo-fucsia en el disco y/o solucin. Negativo: el disco permanece sin cambio de color.