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PRACTICA 2 DETERMINACIÓN DE PK

PRACTICA 2 DETERMINACIÓN DE PK

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UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA

PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK

EXPERIENCIA EDUCATIVA: Laboratorio de Bioquímica CATEDRÁTICO: MTRA. LAURA MARTÍNEZ MÁRQUEZ INTEGRANTES: LUIS ALFREDO RODRÍGUEZ BLANCO JULIO VICENTE SERNA

XALAPA, VER A 9 DE MARZO DEL 2012

Kd: Kd= [H+][A]/ [HA] Debido a que las formas protonada y no protonada tienen propiedades biológicas diferentes. Material y reactivos: Material de laboratorio Vasos de precipitados de 100m\ Vasos de precipitados de 150ml Pipeta graduada de 1mi Bureta Agitador magnético . Los aminoácidos y las proteínas sirven de amortiguadores y pueden resistir a cambios de acidez y de alcalinidad. Los ácidos fuertes se disocian por completo. Es conveniente modificar la expresión de Kd en una forma análoga al pH. es posible usar la ecuación de Henderson-Hasselbalch para predecir el grado de disociación del medio: pK= pH + log [A]/[HA] Los aminoácidos tienen un grupo amino que les permite actuar como base y combinarse con ácidos y un grupo carboxilo les permite combinarse con bases. Fundamento: Los ácidos difieren en el grado en que se disocian en agua. pK= -log kd Ahora. el pK.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK Objetivo: Que el alumno realice una curva de titulación de aminoácidos y a partir de ella determine el pK y el pH en el que se encuentra su poder amortiguador. los ácidos débiles no. es importante poder predecir el grado de disociación de un ácido a cualquier pH. La probabilidad de que un ácido se disocie se define por su constante de disociación.

= db/ dpH Siendo dpH el incremento de pH resultante de la adición de un volumen db de base. Haga una gráfica de pH contra volumen en mI de NaOH gastados luego de tomar en cuenta que cada 0.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK Reactivos Glicina 0. Proceda a la medición del pH 3.0 Ácido aspártico 0. 8. Agitar el vaso y volver a medir el pH anotando los resultados. 2. Localiza en la grafica los diferentes pK de los aminoácidos.1 ml de NaOH 1. en una unidad de pH: C. Haga lo mismo (pasos del 1 a 4) para los otros aminoácidos.025M pH 2. 4. 1. .025M pH 2.025M pH 2. 6. 7. Ponga 20ml de la solución de glicina en un vaso de precipitado de 100ml.en 50mmoles. Repita el paso 3 hasta llegar a un pH de 12 aproximadamente.B.0 NaOH 1M Equipo Potenciómetro Procedimiento: Determinación de pKa.1 ml de NaOH diluido en 20ml aumenta la concentración de OH. Añada 0.0 Lisina 0. 5. Identifica a que pH tienen poder amortiguador Determinación de la capacidad buffer La capacidad buffer es la cantidad de base fuerte requerida para alterar el pH de la disolución reguladora.0M.

PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK 1. introduzca los electrodos del potenciómetro y disponga una bureta con disolución de NaOH 1N Y un agitador magnético. Ponga el agitador en marcha sin que este golpee los electrodos. dentro del vaso. hasta obtener por lo menos cinco lecturas. en volúmenes iguales (1ml) y anote los valores de pH correspondientes. Los valores obtenidos deberán arrojar valores que al momento de graficar nos dará una curva que va en aumento de manera directamente proporcional al aumento de pH sobre el aumento de la cantidad agregada de hidróxido de sodio. 2. Anote el pH resultante. Ponga su disolución en un vaso. Repita las adiciones de base. . y agregue un volumen de NaOH 1N medido exactamente en la bureta (1 ml). Hipótesis: Los valores de pH deberían ir en aumento conforme se van agregando las cantidades de hidróxido de sodio a los diferentes aminoácidos partiendo del pH de cada uno de estos hasta llegar a un pH de 12 para cada uno de estos. Determine el pH inicial.

11 ml de NaOH agregados .07 10.85 12.65 9.62 12.2 Glicina pH inicial 7.1 .26 9.1 .1 .05 10.5 .1 .35 9.1 pH obtenido 3.55 9.1 .2 .28 11.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK Hoja de reporte 1.2 .1 .85 9.85 11.98 11.90 10.2 .1 Lisina pH inicial 9.2 .2 .2 .1 .00 pH obtenido 8.58 8.44 9.2 . Determinación de pka: Acido aspártico pH inicial 3.3 .79 9.75 10.1 .08 ml de NaOH agregados .4 .08 9.03 pH obtenido 9.1 .52 9.1 .1 .43 10.95 9.3 .78 10.2 .21 ml de NaOH agregados .84 .69 9.1 .62 4.03 9.2 .2 .79 8.

81 12.08 14 12 10 pH obtenido 8 6 4 2 0 1 2 3 4 5 6 7 8 NaOH agregado (ml) NaOH agregados (ML) pH obtenido .15 10.60 11.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK .3 .04 10.0 2.1 .19 10.2 .3 .3 .26 10.1 .1 . Realice una grafica de los resultados (pH contra ml de NaOH gastados) Acido aspártico pH inicial 3.94 10.32 11.3 9.69 11.1 .1 .

21 14 12 pH Obtenido 10 8 6 4 2 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 NaOH agregados (ml) pH obtenido ml de NaOH agregados Glicina pH inicial 7.11 14 12 pH Obtenido 10 8 6 4 2 0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 NaOH agregado (ml) pH obtenido ml de NaOH agregados .PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK Lisina pH inicial 9.

8/1= 1. a medida que el pKa decrece. Sin embargo.45 pK= 12. que permite ver de una manera sencilla en cambios pequeños de pKa los cambios asociados a variaciones grandes de Ka. la fortaleza del ácido aumenta.1 Discusión de resultados: Al agregar las cantidades en ml de NaOH se puede observar que se llega a un momento donde el cambio del pH no es muy significativo. Calcule el pK y el pH en el cual se encuentra la máxima capacidad amortiguadora. que es más fuerte cuanto mayor es su pKa.98 Glicina pH=10.92 4.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK 3. ante cambios de la concentración de alguna de las especies o incluso ante la acción de un catalizador.49 pK= 11.40= 3 Glicina 1. . después de agregar determinada cantidad de NaOH se puede observar que el pH se dispara de manera considerable es por eso que las cantidades agregadas de NaOH se controlan y son muy pocas ya que si se agrega demasiado se puede sobrepasar el valor de pH que se espera obtener. mantiene su valor a la misma temperatura. la constante de disociación cambia a temperaturas diferentes. Conclusión: Una forma conveniente de expresar la relativa fortaleza de un ácido es mediante el valor de su pKa.32 pK= 12.90= 2. Determine la capacidad buffer Acido aspártico 1.2/. Valores pequeños de pKa equivalen a valores grandes de Ka (constante de disociación) y.8 Lisina 1.85 Lisina pH=10. Un ácido será más fuerte cuanto menor es su pKa y en una base ocurre al revés. es decir se mantiene un tanto constante dentro de un rango. dependen de otras variables.9/. Acido aspártico pH= 10. Por ejemplo. Esas constantes de disociación no son fijas.

el pH en el que un aminoácido forma un ión híbrido se denomina punto isoeléctrico (PI).5 b) Ácido láctico pK= 3. Si aumenta el pH el medio se hace básico. libera protones y se carga negativamente. TES Y tricita. El aminoácido tiende a neutralizar la acidez captando H+ y se carga positivamente. El Tris tiene un pKa de 8. ¿Por qué los aminoácidos actúan como reguladores del pH? R= Los aminoácidos son sustancias anfóteras. de fórmula (HOCH2)3CNH2.0 y 9.35 Indique el nombre completo. se comporta como base. Disminuye el pH. se comporta como un ácido.20 f) Ácido carbónico pK= 6. El carácter anfótero de los aminoácidos permite la regulación del pH. esto quiere decir que en disolución acuosa se pueden comportar como ácidos y como bases dependiendo del pH de la disolución. El grupo carboxílico pierde un protón (actúa como ácido) y el grupo amino gana un protón (actúa como base). CAPS.2. disminuye la concentración H+.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK Cuestionario: Indica el pKa de los siguientes ácidos: a) Ácido pirúvico pK= 3.20 d) Ácido oxálico pK= 1. .5 c) Ácido benzoico pK=4. lo que le aporta capacidad tamponante efectiva en un intervalo de pH entre 7.06. esto es debido la presencia del grupo carboxílico que tiene carácter ácido y del grupo amino que tiene carácter básico. En algunos aminoácidos en las cadenas laterales existen otros grupos aminos (básicos) y carboxílicos (ácidos) que también se ionizan. aumenta la concentración de H+. Tris es el nombre abreviado del compuesto orgánico conocido como tris(hidroximetil)aminometano. ya que se comportan como ácidos o bases según convenga al organismo. Cuando están en disolución acuosa con pH próximo a la neutralidad los aminoácidos están ionizados formando iones dipolares o híbridos.19 e) Ácido succínico pK= 4. El aminoácido tiende a neutralizar la basicidad. MES. el medio se hace ácido. pKa y peso molecular (o formula) de los siguientes compuestos usados como reguladores de pH en bioquímica: TRIS.

Moran. concentración de glutatión reducido. (2009). que puede oponerse a grandes cambios de pH (en un margen concreto) en una disolución acuosa. glutatión reductasa. es decir.\Scrirngeour Gray K (1996). Cox. (2a edición). ARTICULO La administración de glicina en el estriado induce daño oxidativo en lípidos y proteínas y altera las defensas antioxidantes en el cerebro de ratón.. Michael M. Lawrence A. sobre parámetros importantes de estrés oxidativo. que se halla en elevadas concentraciones en el cerebro de pacientes afectados de hiperglicinemia no cetósica (NKH).USA: Prentiee-Hall. David Rawn J. también es un sistema constituido por un ácido débil y su base conjugada o por una base y su ácido conjugado que tiene capacidad "tamponante". Bibliografía: Horton Robert H. Objetivos: Hemos investigado los efectos de la administración in vivo en el estriado de glicina (Gly). después de la inyección de glicina. Raymonds S. que valoran la peroxidación lipídica). este aumento se puede prevenir totalmente mediante el antagonista MK-801 del receptor de NMDA.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK 5. España: Omega. Métodos principales: Se han medido en el estriado de ratas de 30 días de edad los valores de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBA-RS. producción de óxido nítrico y actividad de las enzimas antioxidantes glutatión peroxidasa. lo que indica . Ochs. Define ¿Qué es la capacidad buffer? Un buffer o Tampón químico. catalasa. Principies of Biochemistry. en términos químicos. contenido de grupos sulfidrilo. Nelson. Además. Resultados clave: La administración de Gly aumenta significativamente los valores de TBA-RS. lo que implica daño oxidativo en lípidos. Principios de Bioquímica (4a Edición) Barcelona. fomación de grupos carbonilo ( expresión del daño oxidativo en proteínas). superóxido dismutasa y glucosa 6-fosfato deshidrogenasa (defensas antioxidantes). David L.

Leipnitz G. Life Sci. induce la oxidación proteica y modula las actividades de importantes enzimas antioxidantes en el estriado.89(7-8):276-81. Eichler P. La inyección de Gly también induce la formación de carbonilos de las proteínas. Knebel LA. da Rosa MS.PRACTICA #2: DETERMINACIÓN DE PK la implicación del receptor de glutamato NMDA en este efecto. 2011 Aug 15. catalasa y superóxido dismutasa. Por el contrario. Amaral AU. Brazil. así como la elevación de las actividades de glutatión peroxidasa. los niveles de glutatión. Universidade Federal do Rio Grande do Sul. producción de óxido nítrico y actividad de glucosa 6-fosfato deshidrogenasa no se modifican por la Gly. . Fernandes CG. glutatión reductasa. Wajner M. Significado: Estos datos muestran que la administración de Gly in vivo causa peroxidación lipídica. probablemente secundaria a la estimulación de NMDA. es posible que el estrés oxidativo pueda estar implicado en la fisiopatología del daño cerebral observado en pacientes con esta enfermedad neurológica. Porto Alegre. Instituto de Ciências Básicas da Saúde. RS. En el caso de que estos hallazgos se puedan extrapolar a la NKH humana. Seminotti B. Departamento de Bioquímica. contenido de sulfidrilos. Lycine intrastriatal administration induces lipid and protein oxidative damage and alters the enzymatic antioxidant defenses in rat brain.

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