INTRODUCCIN

Bacterias coliformes
Coliformes como indicadores de contaminacin fecal

Diferentes mtodos de deteccin.

OBJETIVOS

Comparar diferentes protocolos de PCR (optimizaciones) para la deteccin de bacterias coliformes en muestras de agua. PCR mltiple Comparar el mtodo de PCR frente a mtodos enzimticos en la deteccin de coliformes.

PCR

Diferentes resultados en funcin de la temperatura utilizada. Ejemplo:

Resultados negativos con PCR a 40 C

para amplificacin de lacZ Resultados positivos a 50C para la misma muestra en lacZ

PRIMERS

Diferentes cebadores para identificacin de una misma secuencia. Ejemplo:

Seis cebadores utilizados para la amplificacin

de regin de uidA en Bej et al, 1991.

Dos cebadores utilizados por Tantawiwat et al,

2005 para la amplificacin de la misma regin, siendo uno de ellos (UAL) diferente a los usados anteriormente.

PCR

Comparativa entre las especificidades y sensibilidades de cebadores en la amplificacin de secuencias entre una PCR simple y una mltiple.

Gen uid especfico?

Cepas de Hafnia alvei y Serratia odorifera generaron bandas indicadoras de presencia del gen uidA en PCR mltiple (dicho gen no ha sido descrito en estos organismos). Comportamiento similar a E.coli.

Beta-glucuronidasa

Enzima aparentemente confinada a E.coli (y bacterias estrechamente relacionadas). Uso de su actividad como mtodo de deteccin. Excepcin en cepa E.coli O157:H7: resultados negativos en dicha actividad.

Resultados negativos en la deteccin de actividad beta-glucuronidasa en muestras de agua (ausencia de E.coli) Resultados positivos en amplificacin de regiones del gen uid en las mismas muestras (presencia de E.coli).

CONTRADICTORIO