These Medjdoub

REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE MINISTERE DE LENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE UNIVERSITE ABOU BEKR BELKAID FACULTE DES
SCIENCES DE LA NATURE ET DE LA VIE ET SCIENCES DE LA TERRE ET DE LUNIVERS DEPARTEMENT DE BIOLOGIE
LABORATOIRE DE RECHERCHE SUR LES SUBSTANCES NATURELLES ET BIOACTIVES (LASNABIO)
Thse
En vue de lobtention du grade de Docteur en Biologie
Sujet :
Contribution la recherche dventuelles activits biologiques de Zygophyllum geslini Coss.
Prsente par : Melle MEDJDOUB Houria
Devant le jury :
Mme ATIK BEKKARA F. M. TABTI B. M. SELLES C. M. PAOLINI J. M. DJAZIRI R. M. BEGHALIA M.
Prsidente de jury Directeur de Thse Co-directeur de thse Examinateur Examinateur Examinateur
Professeur, Universit de Tlemcen Professeur, Universit de Tlemcen Maitre de confrences, Universit de Tlemcen Maitre de confrences, Universit de Corse Maitre de confrences, Universit de Tlemcen Maitre de confrences, CU de Relizane
Anne universitaire : 2012-2013
A mes chers parents
Remerciement
Mes sincres remerciements sadressent monsieur TABTI B., Professeur luniversit de Tlemcen, Facult des Sciences, Dpartement de Chimie pour la confiance quil a voulu maccorder, une deuxime fois, en acceptant de diriger la ralisation de ce modeste travail. Veuillez croire, professeur, ma gratitude la plus distingue. Ma reconnaissance va tout spcialement monsieur SELLES C., Maitre de confrences luniversit de Tlemcen, Facult des Sciences, Dpartement de Chimie pour ses prcieux conseils et sa grande disponibilit pour laboutissement de ce travail. Je tiens remercier normment Mme ATIK BEKKARA F., Professeur luniversit de Tlemcen, Facult SNV-STU, dpartement de Biologie davoir accepte de prsider ce jury. Notre professeur, veuillez croire ma reconnaissance et mon respect. Mes sincres remerciements Mr DJAZIRI R., Matre de confrences luniversit de Tlemcen, facult SNV-STU, dpartement de Biologie davoir accept de faire partie de ce jury. Encore, une troisime fois, vous accepter dvaluer mon travail de recherche ; cest un honneur. Ma reconnaissance Mr PAOLINI J., Matre de confrences luniversit de Corse (France) davoir accept dexaminer ce travail. Veuillez accepter, monsieur, mes sincres expressions de respect. Je remercie Mr BEGHALIA M., Matre de confrences au centre universitaire de Relizane davoir accept dvaluer ce travail. Veuillez accepter, monsieur, mes sincres expressions de respect. Que les honorables membres du jury veuillent croire en mes remerciements anticips pour leur acceptation dexaminer ce travail. Mes remerciements sadressent aussi mes collgues, luniversit de Mascara, Mme TADJDDINE A., Mme BENOUAZ N., Melle MOHAMMEDI Z., Mme DAHLI K., Mr AIT ABDESLAM A., Mr BENNABI F ; luniversit de Tlemcen, Melle BENARIBA N., Melle BELKACEM N., Melle ZERIOUH M., Mr CHIKHI I. ; tous ceux qui ont particip la ralisation de travail. Jexprime ma profonde reconnaissance Melle BAAFOU W. tudiante en Master 2 Microbiologie, universit de Mascara qui a largement contribu la rcolte de lchantillon vgtal ainsi qu mes tudiants de luniversit de Mascara qui ont particip la ralisation de ce travail. Je remercie spcialement, Mr BENALLAL A., tudiant en Master 2, universit de Tlemcen, qui a particip la conception du manuscrit. Jexprime ma sincre gratitude au personnel de la ferme exprimentale de luniversit de Mascara, spcialement, Mme OULD BELHADJ L. et Mr MANKOUR B. qui, par leur concours, ont facilit la ralisation des essais in vivo. Je tiens remercier, galement, tous ceux qui ont particip de prs ou de loin la ralisation de ce modeste travail.
Rsum
Le diabte sucr est une maladie trs frquente dans le monde entier. Il est trait par linsuline et les antidiabtiques oraux qui peuvent causer des effets secondaires graves. Pour cette raison et vu leur indisponibilit dans certains cas, les diabtiques se soignent par les plantes mdicinales. Le prsent travail a pour objectif lvaluation de lactivit antidiabtique de Zygophyllum geslini, une herbe trs utilise contre le diabte sucr. Nous avons tudi la partie arienne qui a t utilise pour prparer un extrait aqueux brut (EAB). Cet extrait subit une srie de fractionnements liquide-liquide. EAB et les fractions qui en dcoulent, soumises au fur et mesure ltude phytohimique, sont tests pour leur activit antidiabtique sur le rat wistar rendu diabtique par la streptozotocine la dose de 50mg/kg. Les rsultats montrent la prsence de plusieurs familles chimiques dans EAB qui sont, les mucilages, les tannins, les saponosides, les acides amins, les flavonoides, les glucosides cardiotoniques et les alcalodes. EAB 500mg/kg rduit significativement lhyperglycmie jeun et amliore la tolrance orale des rats au glucose. Les effets des sept fractions de EAB ainsi que leur composition sont variables. Aux doses testes, trois fractions ont montr une action positive sur lhyperglycmie jeun et sur la tolrance orale au glucose, deux agissent seulement sur lhyperglycmie jeun alors que les deux restantes nont pas deffets sur le diabte. Il est videment clair que Zygophyllum geslini, prcisment EAB rgule certaines perturbations du diabte. Cette proprit est conserve dans les fractions prpares. Il sera, donc, crucial de choisir la fraction la plus active pour poursuivre le fractionnement chimique et lvaluation de lactivit antidiabtique.
Mots cls : Zygophyllum geslini, Extrait aqueux, streptozotocine, fractionnent liquide-liquide, phytochimie
Abstract
Diabetes mellitus is a very common disease in the world. It is treated by insulin and oral antidiabetic agents that can cause serious side effects. For this reason and because of their unavailability in some cases, diabetes is cured by herbs. This work aims to evaluate the antidiabetic activity of Zygophyllum geslini, an herb widely used against diabetes mellitus. We studied the aerial part that was used to prepare a crude aqueous extract (CAE). This extract undergoes a series of liquid-liquid fractionation. CAE and fractions derived there from, subject to the phytohemical study were tested for their antidiabetic activity in 50mg/kg streptozotocin induced-diabetic Wistar rats. The results show the presence of several chemical compounds in CAE, mucilages, tanins, saponins, amino acids, flavonoids, cardiac glycosides and alkaloids. CAE at 500mg/kg significantly reduces fasting hyperglycemia and improves oral glucose tolerance in rats. The effects of the seven fractions of CAE and their composition are various. At the tested doses, three fractions showed a positive effect on fasting hyperglycemia and the oral glucose tolerance, two act only on fasting hyperglycemia, while the remaining have no effects on diabetes. It is obviously clear that Zygophyllum geslini precisely CAE regulates certain disturbances of diabetes. This property is maintained in the prepared fractions. It is, therefore, crucial to choose the most active fraction for further chemical fractionation and evaluation of the antidiabetic activity.
Keywords: Zygophyllum geslini, aqueous extract, streptozotocin, liquid-liquid fractionation, phytochemistry
Liste des figures
Figure 1 : structure des sulfamides (carbutamide et glibenclamide) Figure 2 : Schma de mcanismes de scrtion de l'insuline ....... Figure 3: structure des biguanides Figure 4: structure des thiazolidindiones Figure 5: structure de lacarbose........ Figure 6: triterpnoides cucurbitanes isols partir du fruit de Momordica charantia Figure 7: diosgenine .. Figure 8: Ginsnoside ... Figure 9 : 3-(3.4- dihydroxycinnamoyl)-rythradiol .. Figure 10: Streptozotocine Figure 11: Alloxane .. Figure 12: Organigramme du fractionnement de lextrait brut aqueux Figure 13: Effet de lextrait aqueux brut (EAB) sur lvolution de la glycmie .. Figure 14: Effet de lextrait aqueux brut (EAB) sur lvolution du poids corporel . Figure 15: Effet de lextrait aqueux brut (EAB) sur la tolrance orale au glucose des rats normaux . Figure 16: Effet de lextrait aqueux brut (EAB) sur la glycmie (% par rapport la gl ycmie initiale) .. Figure 17: Effet de FA1 et FB1 sur lvolution de la glycmie ... Figure 18: Effet de FA1 et FB1 sur lvolution du poids corporel ... Figure 19: Effet de FA1 et FB1 sur la tolrance orale au glucose Figure 20: Effet de FA2 et FB2 sur lvolution de la glycmie ... Figure 21: Effet de FA2 et FB2 sur lvolution du poids corporel .. Figure 22: Effet de FA2 et FB2 sur la tolrance orale au glucose Figure 23: Effet de FAH sur lvolution de la glycmie .. Figure 24: Effet de FAH sur lvolution du poids corporel . Figure 25: Effet de FAH sur la tolrance orale au glucose .. Figure 26: Effet de FA3 et FDM sur lvolution de la glycmie .. Figure 27: Effet de FA3 et FDM sur lvolution du poids corporel . Figure 28: Effet de FA3 et FDM sur a tolrance orale au glucose ... Figure 29: Effet de FA3 (100mg/kg) sur lvolution de la glycmie pendant trois heures ....
7 8 8 10 12 19 20 22 24 29 31 36 62 63
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Figure 30: Effet de FA3 (100mg/kg) sur lvolution de lhyperglycmie provoque par voie intraprotonale . Figure 31: Effet de FA3 et du glimpiride sur la glycmie jeun pendant les quatre semaines de suivi .. Figure 32: Effet de FA3 et du glimpiride sur le poids corporel pendant les quatre semaines de suivi .. Figure 33: Effet de FA3 et du glimpiride sur la tolrance orale au glucose ... Figure 34: variation du pourcentage de rduction de DPPH en fonction de la concentration de FA3 ...
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Liste de tableaux
Tableau 1 : Tests phytochimiques raliss sur la partie arienne de Zygophyllum geslini . Tableau 2 : Teneurs en diffrentes matires organiques et inorganiques exprimes en % par rapport la matire fraiche estimes dans la partie arienne de Z. geslini ... Tableau 3 : Tests phytochimiques raliss sur lextrait aqueux brut (EAB) et ses fractions . Tableau 4 : Rendement de lEAB et ses fractions (par rapport la plante sche) .. Tableau 5 : Teneurs en composs phnoliques et sucres totaux dans EAB et ses fractions 61 60 58 57 55
Liste des abrviations

Echan OMS EOA GLUT ATP PPAR-y ARNm Rha STZ GLP-1 GLP-2 GIP Echantillon Organisation Mondiale de la Sant Espces oxygnes actives Transporteur de glucose Adnosine triphosphate Peroxisome proliferator activated receptor Acide ribonuclique messager Rhamnose Streptozotocine Glucagon like peptide-1 Glucagon like peptide-2 Glucose-dependent insulinotropic peptide
Liste des units

% C g h kg l mg ml mM mn nm P/V t/mn Pourcentage Degr Celsius Gramme Heure Kilogramme Litre Milligramme Millilitre Millimolaire Minute Nanomtre Poids/Volume Tours/Minute
SOMMAIRE
Introduction gnrale : ............................................................................................................ 1 Partie I : Synthse bibliographique Chapitre I : Gnralits sur le diabte sucr 1. Dfinition du diabte sucr: .................................................................................................. 3 2. Complications du diabte sucr: ........................................................................................... 3 2.1. Complications chroniques ...................................................................................... 4 2.1.1. Microangiopathie : ......................................................................................... 4 2.1.2. Macroangiopathie : ........................................................................................ 5 2.1.3. Neuropathie : ................................................................................................. 5 2.2. Complications mtaboliques aigues du diabte sucr : ........................................ 5
3. Traitement du diabte sucr: ................................................................................................. 6 3.1. Les antidiabtiques oraux: ....................................................................................... 7 3.1.1.Les sulfamides : ................................................................................................ 7 3.1.2.Les biguanides: ................................................................................................. 8 3.1.3.Les glinides : ................................................................................................... 10 3.1.4. Les thiazolidindiones ou glitazones : ........................................................... 10 3.1.5.Les inhibiteurs des alpha glucosidases intestinales : ..................................... 12 3.2. Traitement naturel : ............................................................................................... 13 Chapitre II : Plantes Mdicinales Une Usine De Produits Actifs 1. Introduction : ..................................................................................................................... 14 2. Principes actifs des plantes : ............................................................................................. 14 2.1. Les alcalodes : ..................................................................................................... 15 2.2. Les saponosides : ................................................................................................... 15 2.3. Les phnols : .......................................................................................................... 16 2.4. Les flavonodes :.................................................................................................... 16 2.5. Les tannins : ........................................................................................................... 16 2.6. Les glycosides cardiotoniques : ............................................................................. 17 2.7. Les glycosides cyanognes : .................................................................................. 17
2.8. Les polysaccharides : ............................................................................................. 17 2.9. Les anthocyanes : .................................................................................................. 17 2.10. Les huiles essentielles : ....................................................................................... 17 2.11. Les lments minraux : ..................................................................................... 18 3. Quelques plantes antidiabtiques : ..................................................................................... 18 3.1. Momordica charantia : .......................................................................................... 18 3.2. Trigonella foenum-greacum : ................................................................................ 19 3.3. Allium cepa : .......................................................................................................... 21 3.4. Allium sativum : ..................................................................................................... 21 3.5. Ginseng : ................................................................................................................ 22 3.6. Zygophyllum geslini : ............................................................................................ 23 Chapitre III : Mthode D'tude De L'activit Antidiabtique 1. Introduction : ...................................................................................................................... 25 2. Dfinition du diabte exprimental :.................................................................................. 25 3. Modles animaux de diabte sucr : .................................................................................. 26 3.1. Diabte spontan : ................................................................................................. 26 3.1.1. Diabte de type 1: ............................................................................................... 26 3.1.1.1. Le rat BB (Bio-breeding): ........................................................................... 27 3.1.1.2. La souris NOD (Non Obese Diabetic) : ...................................................... 27 3.1.2. Diabte de type 2: ............................................................................................... 27 3.1.2.1. Le rat Psammomys obesus (PO) : ............................................................... 27 3.1.2.2. Souris ob/ob et souris db/db : ..................................................................... 28 3.1.2.3. Rat Goto-Kakizaki (GK) : .......................................................................... 29 3.2. Diabte induit chimiquement : .............................................................................. 29 3.2.1. Diabte induit par la streptozotocine : ........................................................... 29 3.2.2. Diabte induit par lalloxane: ........................................................................ 31 4. Prparation du matriel vgtal : ........................................................................................ 32 5. Voie dadministration des extraits vgtaux : .................................................................... 32 6. Evaluation de lactivit antidiabtique : ............................................................................. 33
Partie II : Exprimentale Chapitre 1 : Matriels et mthodes 1. 2. Objectif : ....................................................................................................................... 35 Matriel vgtal et extraction:....................................................................................... 35 2.1. Rcolte : ................................................................................................................. 35 2.2. Traitement : ........................................................................................................... 35 2.3. Extraction : ........................................................................................................... 36 2.3.1. Prparation de lextrait brut aqueux : ................................................................. 36 2.3.2. Fractionnement de lextrait aqueux brut: ........................................................... 37 3. Etude phytochimique : .................................................................................................. 37 3.1. Phytochimie qualitative : ....................................................................................... 38 3.1.1. Tanins ........................................................................................................... :38 3.1.2. Saponosides : ................................................................................................. 38 3.1.3. Flavonoides : .................................................................................................. 38 3.1.4. Glucosides cardiotoniques : ........................................................................... 38 3.1.5. Coumarines: ................................................................................................... 39 3.1.6. Anthracnosides : .......................................................................................... 39 3.1.7. Alcalodes : ................................................................................................... 39 3.1.8. Amidon : ....................................................................................................... 40 3.1.9. Anthraquinones : ............................................................................................ 40 3.1.10. Mucilages : ................................................................................................... 40 3.1.11. Acides amins : ............................................................................................ 40 3.2. Phytochimie quantitative : ..................................................................................... 41 3.2.1. Humidit: ....................................................................................................... 41 3.2.2. Sucres totaux: ................................................................................................ 42 3.2.3- Protines: ...................................................................................................... 43 3.2.4. La cellulose brute : ......................................................................................... 45 3.2.5. Matire minrale MM : ................................................................................. 46 3.2.6. Composs phnoliques: ................................................................................ 46 3.2.7. Dosage des sels minraux (K, Na, Ca) par spectrophotomtre flamme : ... 47 3.2.8. Dosages des sels minraux (Cr, Mn, Cu) par le spectrophotomtre multiparamtre spcifique d'ion HI 83 200 : ............................................................................ 49
4.
Recherche de lactivit antidiabtique: ......................................................................... 50 4.1. Ractif biologique, rat wistar : .............................................................................. 50 4.2. Induction du diabte sucr : .................................................................................. 50 4.3. Rpartition des rats : .............................................................................................. 51 4.4. Gavage des extraits vgtaux : .............................................................................. 51 4.5. Prlvement sanguin :............................................................................................ 52 4.6. Chronologie de lexprimentation animale: .......................................................... 52 4.7. Essais long terme : .............................................................................................. 52 4.7.1. Glycmie : ...................................................................................................... 52 4.7.2. Test de tolrance orale au glucose : ............................................................... 53 4.8. Test court terme : ............................................................................................... 53 4.9. Test de lhyperglycmie provoque par voie intrapritonale : ............................ 53 4.10. Effet du Glimpiride : .......................................................................................... 53 Recherche de lactivit antiradicalaire: ......................................................................... 53 Etude statistique : .......................................................................................................... 54
5. 6.
Chapitre 2 : Rsultats et interprtation 1. Etude phytochimique : ....................................................................................................... 55 1.1. Phytochimie de la plante (partie arienne) : .......................................................... 55 1.1.1. Tests qualitatifs : .......................................................................................... 55 1.1.2. Tests quantitatifs : ........................................................................................ 56 1.2. Phytochime de lextrait aqueux brut et ses fractions : .......................................... 58 1.2.1. Tests qualitatifs : .......................................................................................... 58 1.2.2.Tests quantitatifs: ......................................................................................... 60 1.2.2.1. Rendement dextraction : .................................................................... 60 1.2.2.2. Teneurs en composs phnoliques et sucres totaux : .......................... 60 2. Recherche de la toxicit aigue de lextrait aqueux brut : .................................................. 61 3. Evaluation de lactivit antidiabtique de Zygophyllum geslini : ...................................... 61 3.1. Evaluation des effets de lextrait aqueux brut (EAB) : ......................................... 61 3.1.1. Effet sur la glycmie jeun : ........................................................................ 61 3.1.2. Effet sur le poids corporel : ......................................................................... 62 3.1.3. Effet sur la tolrance orale au glucose : ....................................................... 64 3.1.4. Glycmie en pourcentage : ........................................................................... 65
3.2. Evaluation des effets de FA1 (fraction aqueuse 1) et FB1 (fraction butanolique 1) : ................................................................................................................................ 65 3.2.1. Effet sur la glycmie jeun : ........................................................................ 65 3.2.2. Effet sur le poids corporel : .......................................................................... 67 3.2.3. Effet sur la tolrance orale au glucose : ....................................................... 67 3.3. Evaluation des effets de FA2 (fraction aqueuse 2) et FB2 (fraction butanolique 2): ...................................................................................................................................... 68 3.3.1. Effet sur la glycmie jeun : ........................................................................ 68 3.3.2. Effet sur le poids corporel : .......................................................................... 69 3.3.3. Effet sur la tolrance orale au glucose : ....................................................... 70 3.4. Evaluation des effets de FAH (fraction aqueuse heptanique) : ............................. 71 3.4.1. Effet sur la glycmie jeun : ........................................................................ 71 3.4.2. Effet sur le poids corporel : ......................................................................... 72 3.4.3. Effet sur la tolrance orale au glucose : ...................................................... 73 3.5. Evaluation des effets de FA3 (fraction aqueuse 3) et FDM (fraction dichloromthanique): ................................................................................................... 74 3.5.1. Effet sur la glycmie jeun : ........................................................................ 74 3.5.2. Effet sur le poids corporel : .......................................................................... 75 3.5.3. Effet sur la tolrance orale au glucose : ....................................................... 76 4. Effet de FA3 court terme : .............................................................................................. 77 5. Effet de FA3 sur lhyperglycmie provoque par voie intrapritonale : ......................... 78 6. Comparaison des effets de FA3 avec ceux du glimipride : .............................................. 79 6.1. Effet sur la glycmie jeun: .................................................................................. 79 6.2. Effet sur le poids corporel : ................................................................................... 80 6.3. Effet sur la tolrance orale au glucose : ................................................................ 81 7. Evaluation du pouvoir antiradicalaire de FA3 : ................................................................. 82 Chapitre 3 : Discussion Discussion ............................................................................................................................... 84 Conclusion gnrale : ............................................................................................................. 96 Rfrences bibliographiques :97
Avant-propos
Le prsent travail constitue une continuit au travail prcdent, ralis dans le cadre de lobtention du diplme de Magistre en biologie. Dans un premier temps, une recherche de lactivit antidiabtique ainsi quune valuation du pouvoir antiradicalaire de lextrait thanolique de la partie arienne de Zygophyllum geslini sont effectues. De plus, un screeneing phytochimique a t fait. Dans cette tude, nous avons test lactivit antidiabtique de lextrait aqueux brut de la mme partie arienne. En comparant les deux effets, il semble que lextrait aqueux est plus efficace que lextrait thanolique. De ce fait, nous avons fractionn lextrait brut aqueux en utilisant plusieurs solvants de polarits diffrentes afin dobtenir la fraction la plus active et la moins toxique. Ce travail est ralis sur Z. geslini, une plante de la rgion dAdrar. Nous avons consacr cette approche lextrait aqueux et ses fractions obtenues par extractions liquideliquide tout en valuant leur activit antidiabtique. Le diabte est induit chez le rat male Wistar par la streptozotocine qui provoque une perturbation physiologique caractrise par une hyperglycmie chronique. Aussi, pour lvaluation de lactivit biologique, nous nous sommes bass sur deux paramtres, la glycmie jeun et le test de tolrance orale au glucose. Le screening phytochimique est essentiel afin didentifier les composs existant dans lextrait aqueux et ses fractions. Ce modeste travail est ralis, dune part, luniversit de Tlemcen, laboratoire recherche, LASNABIO o nous avons effectu les diffrentes extractions et les tests phytochimiques. Dautre part, lvaluation de lactivit antidiabtique des extraits prpars au laboratoire a t faite la ferme exprimentale de la facult des sciences de la nature et de la vie de luniversit de Mascara.
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Introduction gnrale
Le diabte sucr est une maladie htrogne caractrise par une hyperglycmie chronique rsultante dun dfaut de la scrtion ou de laction de linsuline. Cette physiopathologie a une tiologie variable. Plusieurs dfaillances existent et caractrisent les diffrentes formes du diabte sucr. Les chiffres se rvlent inquitants ; en effet, la fdration internationale du diabte (FID) estime environ 371 millions le nombre de diabtiques dans le monde en 2012 ce qui reprsente 8,3% de la population mondiale. En Afrique la prvalence des diabtiques est de 4,3% [FID, 2012]. Avant lre de linsulinothrapie, les diabtiques mourraient rapidement de coma acidoctosique. Depuis lavnement des antibiotiques, les infections svres sont jugules, et ces deux progrs remarquables ont permis daugmenter considrablement lesprance de vie des diabtiques [Wright et al., 1980]. Lhyperglycmie chronique est associe terme avec des complications organiques touchant, particulirement, les yeux, les nerfs, les reins, le cur et les vaisseaux. Ces complications constituent toute la gravit du diabte sucr. Tous ces effets nocifs de lhyperglycmie justifient le besoin dquilibrer aussi parfaitement que possible le taux du glucose dans le sang [Jaspreet et al., 2003]. Un bon contrle glycmique est bas sur un rgime alimentaire quilibr et hypocalorique, lexercice physique et le traitement mdicamenteux. Ce dernier est reprsent seulement par linsuline chez les diabtiques de type 1. Aussi, il est constitu des antidiabtiques oraux (ADO) et dinsuline chez les diabtiques de type 2. Comme tout mdicament, ces thrapies causent chez la majorit des patients, de graves effets secondaires : tat dhypoglycmie, coma dacidoctose, problmes digestifs et autres. De plus, ces ADO ne sont pas disponibles dans certaines rgions du monde ou ils cotent chers et deviennent, dans les deux cas, inaccessibles pour certains patients. Pour ces raisons, les gens retournent de nouveau vers la mdicine traditionnelle, dite conventionnelle, particulirement vers la thrapie par les plantes dite phytothrapie. Cette forme de thrapie est accessible vue la biodiversit vgtale du globe terrestre et sa richesse en plantes antidiabtiques.
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Introduction gnrale
En Algrie, nombre important despces vgtales est utilis comme remde contre le diabte sucr dont la majorit nest pas value scientifiquement. Le fenugrec, le ginseng, lorigan, la lavande et autres sont des exemples de plantes rputes antidiabtiques. Zygophyllum geslini connue sous le nom arabe de Aggaya est une herbe saharienne utilise par la population algrienne contre plusieurs maladies dont le diabte sucr. Cette espce endmique, objet de notre travail, est trs peu tudie. Le prsent travail sintresse lvaluation de lactivit antidiabtique de ce vgtal par la ralisation dune srie dessais effectus sur le rat Wistar rendu diabtique par la streptozotocine comme modle de diabte exprimental. Notre premier objectif est la mise en vidence des effets antidiabtiques de lextrait aqueux brut de la partie arienne de Z. geslini et de ses fractions obtenues par extraction liquide-liquide. Le fractionnement du dit extrait permet de cibler une fraction de molcules chimiques ayant la meilleure activit sur le diabte induit par la streptozotocine.
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Chapitre 1
1. Dfinition du diabte sucr:
Gnralits sur le diabte sucr
Le diabte sucr est un groupe de maladies mtaboliques caractrises par une hyperglycmie chronique rsultante dun dfaut de la scrtion de linsuline et/ou de laction de cette hormone [Raccah, 2004]. Cette insuffisance provoque une augmentation de la glycmie qui conduit son tour des lsions affectant plusieurs appareils ou systmes en particulier les vaisseaux et les nerfs. La glycmie est le paramtre central dans le diabte sucr ; cest le taux de glucose dans le sang [Mnat, 2005]. Un individu est diabtique quand sa glycmie jene est suprieure ou gale 1.26g/l. On distingue quatre types de diabte sucr suivant la cause de la maladie (tiologie) dont les plus rpandus sont le diabte de type 1 et 2 [OMS, 2002]. Le nombre de personnes atteintes de diabte sucr dans le monde connait une croissance acclre. Il tait 135 millions en 1995 et pourrait atteindre 300 millions de personnes en 2025. Laugmentation attendue du nombre de diabtiques de type 2 se traduira par plus de 130 millions de nouveaux cas dans le monde entre 2007 et 2025, essentiellement dans les pays en voie de dveloppement. Le diabte est responsable dune morbidit et dune mortalit accrues [Yang et al., 2012]. 2. Complications du diabte sucr: Lhyperglycmie chronique est la cause des complications organiques spcifiques touchant particulirement les yeux, les nerfs, les reins, le cur et les vaisseaux [Raccah, 2004]. Les complications de cette affection restent trs graves et constituent un risque de mortalit trs lev. La mortalit cardiovasculaire en France chez les personnes atteintes dun diabte sucr de type 2 est approximativement le double de celle des sujets non diabtiques [Drouin et al., 1999]. Les diabtiques de type 2, prcisment, sans aucun pass coronaire avaient un risque dinfarctus myocardique aussi lev que celui des tmoins non diabtiques qui avaient dj prsent antrieurement un infarctus [Buysschaert et al., 1999].
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Chapitre 1
A cot de lhyperglycmie chronique et la glycation non enzymatique des protines, un facteur trs important impliqu dans la gense de ces complications est le stress oxydatif [Punitha et al., 2005 ; Raccah, 2004; Guerci et al., 2001]. Le mtabolisme cellulaire normal de loxygne produit de manire continue de faibles quantits despces oxygnes actives dont font partie les radicaux libres (O2., OH., ), le peroxyde dhydrogne et loxygne singulet [Pincemail et al., 1999 ; Huang et al., 2004]. Dans certaines conditions, une surproduction despces oxygnes actives (EOA) due lactivation de divers mcanismes biochimiques peut submerger rapidement les dfenses antioxydantes ; cest le stress oxydatif [Punitha et al., 2005 ; Pincemail et al., 1999]. Les EOA sont des molcules instables, potentiellement toxiques pour lorganisme car elles peuvent inactiver des protines, induire des cassures au sein de lADN avec, comme consquence, une altration du message gntique, dgrader les sucres, oxyder les lipoprotines et initier des processus de peroxidation lipidique au sein de la membrane cellulaire en sattaquant aux acides gras polyinsaturs [Raccah, 2004]. Parfaitement, le diabte sucr provoque une augmentation de la production des EOA dune part et dautre part, une diminution des antioxydants, ce qui est lorigine des micro et des macro angiopathies [Eshrat, 2002]. 2.1. Complications chroniques Toute la gravit du diabte sucr rside dans la survenue des complications chroniques dgnratives responsables dune surmortalit chez les diabtiques. Un bon quilibre glycmique prvient lapparition de certaines dentre elles (microangiopathie, neuropathie) ou dfaut retarde leur survenue. Ces complications ncessitent une prise en charge pluridisciplinaire pour ralentir leur aggravation [Yang et al., 2012]. Elles sont classes en 3 groupes : 2.1.1. Microangiopathie : Elle rsulte dune atteinte diffuse des artrioles et des capillaires. Elle touche tous les organes mais la localisation la mieux tudie est les vaisseaux de la rtine rtinopathie qui reste la premire cause, chez de nombreux cas, de ccit chez les sujets gs de 20 64 ans. Environ 12% des diabtiques de type 1 dans le monde sont aveugles aprs 30 ans de diabte et -4-
Chapitre 1
7% des diabtiques de type 2 sont aveugles aprs 20 ans de diabte [Grimaldi et al., 2009]. La cataracte ainsi que le glaucome sont les deux formes les plus rpandues dune rtinopathie. La nphropathie diabtique est la premire cause dinsuffisance rnale chronique. Elle est dfinie comme une glomrulopathie spcifique du diabte sucr. Elle peut conduire linsuffisance rnale jusquau stade ultime terminal ncessitant la dialyse [Halimi et al., 2011]. 2.1.2. Macroangiopathie : Elle est lie une atteinte des artres de gros et moyen calibre. Son support anatomique est une athrosclrose non spcifique. On peut citer plusieurs formes de cette complication. Les artres des membres infrieurs peuvent tre le lieu dune artriopathie dont laspect le plus vocateur est la gangrne. Ce type de complication peut se traduire au ni veau des troncs artriels supraortiques par des accidents vasculaires crbraux [Yang et al., 2012]. La coronaropathie est une autre forme de complications. Chez les diabtiques de type 2 le risque coronarien est galement augment [Halimi et al., 2011]. 2.1.3. Neuropathie : Elle est due des lsions du systme nerveux aussi bien somatique (neuropathie priphrique) que vgtatif (neuropathie autonome). Ces complications chroniques ne sont pas inluctables chez tous les diabtiques [Grimaldi et al., 2009]. 2.2. Complications mtaboliques aigues du diabte sucr : Trois principales complications mtaboliques aigues sont connues, lacidoctose, le coma hyperosmolaire et lacidose lactique [Gautier, 2004]. Elles sont, le plus souvent, la consquence derreurs thrapeutiques ou dun dfaut de surveillance. Leur prvention est possible si le malade est conscient. Lacidoctose est de loin la plus frquente. Elle touche surtout les diabtiques de type1 mais aussi certains diabtiques de type 2 [Yang et al., 2012]. En plus, on distingue dautres
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complications aigues telle que, lhypoglycmie [Grimaldi et al., 2009], lacidose lactique et le coma dhyperglycmie [Dirckx, 1998]. 3. Traitement du diabte sucr: Un bon contrle glycmique du diabte sucr est recommand pour retarder, voir prvenir la survenue et ralentir la progression des complications [Jaspreet et al., 2003]. Pour atteindre ces objectifs, plusieurs thrapies sont notre disposition. Un rgime alimentaire bien quilibr en glucides, en protines et en lipides [Gin et Regalleau, 1999] ainsi que lexercice physique [Charbonnel et Cariou, 1997] sont des composantes essentielles du traitement du diabte sucr. Encore, linsulinothrapie occupe une place importante dans larsenal thrapeutique du diabte de type 1 [Gin et Regalleau, 1999] et du diabte de type 2 [Dirckx, 1998]. Ce dernier ncessite chez la majorit des patients et surtout pendant les premiers stades, une prise en charge mdicamenteuse et cela par lintervention des antidiabtiques oraux qui sont classs selon leur mode daction en trois catgories : Les sulfamides hypoglycmiants stimulent la scrtion dinsuline par les cellules du pancras en les sensibilisant laction du glucose [Dey et al., 2002]. Les biguanides classs en deuxime lieu nagissent par sur la scrtion insulinique, ce sont des potentialisateurs deffets de linsuline [Thul, 2012]. Les inhibiteurs des alpha-glucosidases constituent la troisime classe des antidiabtiques oraux. Ils attnuent la glycmie post-prandiale par leur action directe comme agent inhibiteur des alpha-glucosidases intestinales en ralentissant la digestion des polysaccharides [Hermans, 1998].
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3.1. Les antidiabtiques oraux: 3.1.1. Les sulfamides :
Figure 1 : structure des sulfamides (carbutamide et glibenclamide) [Anonyme 01, 2008].
Les sulfamides hypoglycmiants (sulfonylures) sont administrs aux diabtiques ds les annes 1950. Amarel est un driv de rfrence, efficace en une prise quotidienne. Il a t commercialis depuis 1996 [Vaubourdolle, 2007]. Les sulfamides se fixent sur la protine SUR (SulfonylURe) des canaux KATP des cellules des ilots de Langerhans. Ils induisent la fermeture des canaux potassiques ATPsensibles, la dpolarisation des cellules et la scrtion de linsuline. Lafflux de calcium dans le cytoplasme des cellules bta-pancratiques induit lexocytose des vsicules contenant linsuline dune faon similaire celle observe aprs stimulation par le glucose [Guillausseau, 2003]. Lefficacit hypoglycmiante des sulfamides dpend donc de la capacit rsiduelle du pancras secrter de linsuline [Leutenegger, 1996].
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Figure 2 : Schma de mcanisme de scrtion de l'insuline [Mosbah et Andreelli, 2012]. Le principal effet indsirable des insulinoscrtagogues est l'hypoglycmie, une diminution anormale de la glycmie au dessous de 0,50 g/l. Les autres effets indsirables sont observs chez 3 4% des patients recevant des sulfamides hypoglycmiants: ractions cutanes, troubles gastroduodnaux et les
complications hmatologiques qui sont rares (anmie hmolytique) [Guillausseau, 2003]. Les effets tratognes sont rels chez l'animal des doses trs largement supra-thrapeutiques. 3.1.2. Les biguanides:
Figure 3: structure des biguanides [Keen et Jarrett, 1968]
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Chapitre 1
Leur introduction, en 1957, dans la thrapie du diabte, a constitu un progrs considrable [Darnaud, 1999]. Les biguanides sont antihyperglycmiants. Ils rduisent la glycmie basale et postprandiale en diminuant la production hpatique du glucose (inhibition de la noglucognse et de la glycognolyse et favorisant la capture et lutilisation priphrique du glucose principalement au niveau musculaire (augmente la sensibilit linsuline). Sur le plan molculaire, ils stimulent la glycogne synthtase et augmente la capacit de transport de tous les types de transporteurs membranaires de glucose (GLUT). Ce sont des mdicaments du diabte de type 2. On les utilise lorsque la stimulation du pancras n'est ni ncessaire ni recherche [Stora, 2007]. La metformine agit en diminuant l'insulinorsistance [Slama, 2000]. De plus, on observe une diminution du taux des acides gras, cholestrol et triglycrides chez les sujets traits par les biguanides [Damiens, 1985]. Comme ils n'ont pas d'effet pancratique, ils ne provoquent jamais d'hypoglycmie. Les effets secondaires les plus frquents sont les troubles digestifs quon observe dans 10 30% des cas [Perlemuter, 1994]. Les troubles rencontrs sont : got mtallique dans la bouche, nauses, vomissement et aussi diarrhe [Darnaud, 1999]. Ces effets sont maximums en dbut de traitement, et peuvent tre attnus par une augmentation graduelle des doses et la prise des comprims au cours ou au dcours du repas. Lacidose lactique induite par les biguanides est une complication rare mais svre, avec une mortalit suprieure 50%. Lacidose lactique concerne essentiellement des sujets gs [Guillausseau, 2003]. Elle est favorise par toutes les causes prdisposant laccumulation dacide lactique (diminution de llimination : insuffisance rnale ou hpatique, augmentation de laccumulation : toutes les causes dhypoxie telles que insuffisances cardiaque, respiratoire, etc.) [Perlemuter, 1994].
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3.1.3. Les glinides :
Les glinides reprsentent une nouvelle famille dinsulinoscrteurs dont laction est plus rapide et moins prolonge que les sulfamides [Saudon, 2003]. Ils sont des drivs de lacide benzoque [Vaubourdolle, 2007]. Un seul reprsentant de cette classe thrapeutique est actuellement disponible sur le march franais : la repaglinide, appel Novonorm [Saudon, 2003]. Les glinides ont une action globalement superposable celle des sulfamides sur les canaux potassiques [Vaubourdolle, 2007]. Ils se lient la surface des cellules et stimulent, via une fermeture des canaux potassiques ATP sensibles et un influx de calcium, la scrtion dinsuline. Les glinides sont particulirement efficaces pour contrler lhyperglycmie postprandiale et limiter les hypoglycmies tardives. Dans certains cas, leur action trs courte autorise un chappement glycmique en fin de nuit, caractris par une glycmie jene leve [Buysschaett, 2006]. Les effets indsirables observs sont des troubles gastroduodnaux et des ractions cutanes [Guillausseau, 2003]. Le risque dhypoglycmie nest pas nul puisque le produit agit en stimulant la scrtion dinsuline mais le contrle de cet effet est facilit par la souplesse dadministration du produit [Perlemuter, 1994]. 3.1.4. Les thiazolidindiones ou glitazones :
Figure 4: structure des thiazolidindiones [Anonyme 01, 2008]
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Les thiazolidinediones font partie dune toute nouvelle famille [Saudon, 2003]. Une premire thiazolidinedione, la troglitazone a t commercialise aux Etats-Unis en 1997 et retire du march en 2000 en raison de son hpatotoxicit. Deux autres thiazolidinediones ont t mises sur le march franais en 2002, la roziglitazone et la pioglitazone. Les glitazones sont des insulinosensibilisateurs purs [Guillausseau, 2003]. Ils augmentent donc la captation musculaire de glucose, probablement grce une action directe sur le transporteur musculaire de glucose. Elles ont galement, une action sur les cellules graisseuses (adipocytes) en permettant une diminution des taux sanguins de triglycrides et d'acides gras libres, amliorant ainsi indirectement la captation du glucose et son oxydation par le muscle. La cible de ces molcules est un rcepteur appel PPAR-y (peroxisome proliferatoractivated receptor). Les PPAR-y, prsents sur les cellules graisseuses, exercent une action de contrle sur la masse graisseuse. La stimulation de ces rcepteurs par les glitazones provoque la destruction des grosses cellules graisseuses actives au plan mtabolique et par consquent, diminue les taux d'acides gras libres du sang, rduisant au final l'insulino-rsistance [Saudon, 2003]. Plusieurs travaux indiquent que les glitazones, ct de leur effet insulinosensibilisant, influencent favorablement certains facteurs de risque cardio-vasculaire, dont le taux de protines inflammatoires, la dyslipidmie et la pression artrielle [Bysschaett, 2006]. Utilises seules ou en association avec la metformine, la roziglitazone et la pioglitazone n'entrainent pas d'hypoglycmie, mais elles potentialisent l'effet hypoglycmiant des sulfamides hypoglycmiants [Guillausseau, 2003].
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3.1.5. Les inhibiteurs des alpha glucosidases intestinales :
Figure 5: structure de lacarbose [Anonyme 01, 2008]
Les inhibiteurs des alpha glucosidases (acarbose) sont galement dune utilisation intressante [Bysschaert et al., 1999]. Les -glucosidases sont des enzymes contenues dans la salive, le suc pancratique et les cellules de lintestin grle (les anthrocytes). Elles hydrolysent les glucides alimentaires pour leur permettre dtre absorbs sous forme monosaccharidique, qui seuls peuvent franchir la barrire intestinale [Saudon, 2003]. Les inhibiteurs d'alpha glucosidases intestinales ralentissent le clivage enzymatique des sucres alimentaires en mono et disaccharides. Labsorption du glucose aprs un repas est ainsi retarde dans le temps. Les inhibiteurs de l'alpha glucosidase sont essentiellement actifs sur lhyperglycmie postprandiale [Guillausseau, 2003]. Leffet sur la glycmie jene est par contre beaucoup moins vident [Leutenegger, 1996]. Les principaux effets secondaires des inhibiteurs d'alpha glucosidases intestinales sont digestifs et lis larrive doligosaccharides dans le colon, favorisant la croissance bactrienne et la prsence de substance osmotiquement actives dans la lumire intestinale. Les manifestations cliniques, qui affectent dans certaines sries jusqu 50% des patients, sont reprsentes par des flatulences, un mtorisme et de la diarrhe. Ces troubles seront prvenus - 12 -
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par lutilisation de faibles doses initiales, avec une augmentation progressive [Guillausseau, 2003]. 3.2. Traitement naturel Plusieurs plantes sont utilises traditionnellement pour traiter le diabte sucr [Marles et Farnsworth, 1994]. Cependant, juste une minorit de ces plantes connait une valuation scientifique. On peut citer, Momordica charantia, Catharanthus roseus, Trigonella foenumgreacum, Allium cepa, Allium sativum, et autres [Al-Achi, 2005]. Ce qui est remarquable est l'existence de plusieurs composs dorigine vgtale, semblant donner cet effet bnfique. La plante reprsente la forme majeure de traitement traditionnel dans le monde entier. Elle est caractrise par ses effets positifs avec moins deffets secondaires graves. Lusage de la mdecine traditionnelle est trs rpandu et revt une importance sanitaire et conomique croissante. Dans les pays en voie de dveloppement, lutilisation courante de la mdecine traditionnelle est accessible et abordable, particulirement pour les patients les plus pauvres du monde vu le cot lev de certains mdicaments ainsi que leur indisponibilit sur le march [OMS, 2002].
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1. Introduction :
La plante mdicinale, une usine de produits actifs
Depuis la nuit des temps, les hommes apprcient les vertus apaisantes et analgsiques des plantes. Aujourdhui encore, les deux tiers de la pharmacope ont recours leurs proprits curatives. travers les sicles, les traditions humaines ont su dvelopper la connaissance et lutilisation des plantes mdicinales. Si certaines pratiques mdicales paraissent tranges et relvent de la magie, dautres au contraire semblent plus fondes et plus efficaces. Pourtant, toutes ont pour objectif de vaincre la souffrance et damliorer la sant des hommes [Larousse, 2001]. La phytothrapie est lart de se soigner par les plantes [OMS, 2002]. Cest une mdecine trs ancienne. Actuellement, de nombreux mdicaments tirent leur origine des plantes mdicinales. Cette forme de mdecine ne soppose pas aux autres thrapies, elle augmente lefficacit dun traitement ou attnue ses effets secondaires [Larousse, 2001]. Une plante est dite mdicinale lorsquau moins une partie possde des proprits curatives ou prventives lgard des maladies avec ou sans principes actifs dtermins [Claisse-Dauchy, 1996 ; Bruneton, 1999] La plante est un ensemble de secrets. Par son organisation bien structure, elle constitue un lment trs riche en substances actives. La feuille est le site de toutes les synthses chimiques et la partie la plus utilise en thrapeutique. Aussi, la tige et surtout la partie externe de la tige, notamment lcorce, sont souvent utilises. La fleur renferme dans ses diffrentes parties bon nombre de composs apprciables [Wichtl et Anton, 2003]. Si les fruits et les graines fournissent des rserves nutritionnelles et une grande quantit de substances actives, les racines peuvent aussi stocker certains principes actifs comme les alcalodes, sans oublier les tubercules rhizomes et bulbes qui contiennent grand nombre de principes essentiels. 2. Principes actifs des plantes : Les principes actifs des plantes sont de nature organique: polysaccharides, acides amins [Al-Achi, 2005], flavonodes, saponosides, acides gras, alcalodes [Marles et Farnsworth, 1994 ; Dey et al., 2002] ou de nature minrale, tel que le chrome organique qui potentialise l'effet de l'insuline [Aharonson et al., 1969 ; Evans et Bowman, 1992]. - 14 -
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A cot du chrome, le vanadium, un insulinomimtique [Thompson et Godin, 1995] connu avant la dcouverte de l'insuline, a t utilis pour le contrle de la glycmie [Dey et al., 2002]. D'autres minraux tels que le magnsium, le cuivre, le slnium et le fer ont galement des effets bnfiques [Thompson et Godin, 1995 ; Ducros et Favier, 2004]. Cest dabord la chimie dite dextraction qui a permis disoler des composants partir de plantes telle que la morphine du Papaver somniferium. La chimie dite de synthse a permis, ensuite, de reproduire et reconstituer ces principes vgtaux en prenant modle sur la plante. Par ailleurs, les chercheurs ont russi dterminer comment ces substances agissent sur lorganisme [Larousse, 2001]. Donc, les plantes mdicinales doivent leurs actions plusieurs lments actifs quon peut analyser chimiquement [Verdrager, 1978]. 2.1. Les alcalodes : Formant un groupe trs large, les alcalodes possdent presque tous un atome dazote qui les rend pharmaceutiquement trs actifs. Certains sont des mdicaments connus qui ont des vertus thrapeutiques avrs, cest le cas dun driv de la pervenche Vincarosea employ pour traiter certains cancers [Nowitz et Bottet, 2000 ; Larousse, 2001]. De plus, ils ont une action physiologique remarquable sur le systme nerveux central ou sur le systme nerveux autonome sympathique et parasympathique dont ils agissent en petite quantit. 2.2. Les saponosides : Ce sont des molcules de forme htrosidique. Ils se divisent en saponosides gnine triterpenique et strodique. Les saponosides (saponines) doivent leur nom au fait que comme le savon, elles produisent de la mousse en contact avec leau [Bruneton, 1999]. Les saponines strodiques ont une structure chimique similaire celle de nombreuses hormones humaines (cortisol et strogne) et confrent aux plantes qui les contiennent une activit hormonale, comme la rglisse Glycyrrhiza glabra . Les triterpenoides prsents dans les racines de primevre Premulaveris sont de puissants expectorants, mais peuvent aussi faciliter labsorption des lments nutritifs [Larousse, 2001].
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2.3. Les phnols :
Il existe une trs grande varit de composs phnoliques, du plus simple comme lacide salicylique au plus complexe comme les tannins. On suppose que les plantes en les produisant, cherchent se prmunir contre les infections et les insectes phytophages [Nowitz et Bottet, 2000]. Les phnols sont surtout des antiseptiques arbutoside de la busserole et des antalgiques [Wichtl et Anton, 2003]. Les acides phnoliques comme lacide rosmarinique, sont fortement antioxydant es et anti-inflammatoires et peuvent avoir des proprits antivirales [Nowitz et Bottet, 2000]. 2.4. Les flavonodes : Ce sont des pigments vgtaux, en particulier, jaune et orange. Les flavonodes prsents dans nombreuse plantes sont des anti-inflammatoires qui assurent une bonne circulation sanguine. La rutine prsente dans plusieurs plantes telle le citron renforce les parois des vaisseaux capillaires [Larousse, 2001]. Ce sont aussi des antiagrgants plaquettaires non toxiques et empchent ladhsion du thrombus la paroi vasculaire prvention des infarctus [Wichtl et Anton, 2003]. 2.5. Les tannins : Ce sont des substances de saveur astringente ayant la proprit de tanner la peau et de se combiner aux protines animales par des liaisons hydrognes [Pousset, 1989]. Ce sont des composs polyphnoliques qui permettent de stopper les hmorragies et de lutter contre les infections. Les plantes riches en tanins sont utilises pour retendre les tissus souples comme dans le cas des veines variqueuses, pour drainer les secrtions excessives, comme dans la diarrhe et pour rparer les tissus endommags par un eczma ou une brulure [Nowitz et Bottet, 2000].
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2.6. Les glycosides cardiotoniques : Ils sont prsents dans de nombreuses plantes mdicinales telles que les digitales. Ils ont une action puissante sur le cur ; ils aident maintenir le rythme cardiaque en cas daffaiblissement et ils sont galement diurtiques [Nowitz et Bottet, 2000 ; Larousse, 2001]. 2.7. Les glycosides cyanognes : Bien que ces substances soient base de cyanure, un poison trs violent, prises en petite doses, elles ont des effets sdatifs et relaxants sur le cur et les muscles [Larousse, 2001]. 2.8. Les polysaccharides : On les trouve dans toutes les plantes. Du point de vue phytothrapie, les plus importants sont les mucilages et les gommes qui absorbent de grande quantits deau, produisant une masse glatineuse qui peut tre utilise pour protger les tissus enflamms et calmer la douleur [Nowitz et Bottet, 2000]. Un effet hypoglycmiant a t observ avec le fenugrec et le tamarin, ventuellement par ralentissement de la rsorption des sucres induit par les mucilages [Teuscher et al., 2005]. 2.9. Les anthocyanes : Ils sont issus de lhydrolyse des anthocyanidines. Ils donnent aux fleurs et aux fruits leurs teintes bleu, rouge ou pourpre. Ces puissants antioxydants nettoient lorganisme des radicaux libres et maintiennent une bonne circulation du sang [Bruneton, 1999]. 2.10. Les huiles essentielles : Il sagit de mlanges de composs lipophiles, volatiles et souvent liquides, extraits de la plante grce des procds physiques. Les huiles essentielles sont responsables de lodeur caractristique de la plante [Teuscher et al., 2005]. Elles sont utilises pour leurs parfums dans les prparations cosmtologiques et pour leurs proprits antiseptiques et anti-inflammatoires. Dautres sont utilises comme dulcorants [Domart et Bourneuf, 1988]. - 17 -
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2.11. Les lments minraux :
Dans de nombreux cas, les minraux contenus dans une plante participent activement son activit thrapeutique. Le pessenlit Taraxacum officinale est un puissant diurtique o son effet est du sa concentration en potassium [Nowitz et Bottet, 2000]. 3. Quelques plantes antidiabtiques : Plusieurs plantes sont connues avoir une activit antidiabtique, hypoglycmiante, antihyperglycmiante ou hypolipidmiante. Ardemment, plus de 1123 plantes sont utilises traditionnellement pour traiter le diabte sucr [Marles et Farnsworth, 1994]. Cependant, la majorit de ces plantes nest pas value scientifiquement. 3.1. Momordica charantia, Momordica charantia, communment appele melon amer, gourde amre ou Karela, est une plante trs amre. Elle est trs utilise contre le diabte sucr [Jung et al., 2006]. Au fil des annes, les chercheurs tudient la relation entre Momordica charantia et le diabte. Une tude montre que cette plante amliore la tolrance au glucose chez le rat rendu diabtique. Aussi la tolrance au glucose de 73% des patients diabtiques a t amliore par le jus de fruits de Momordica charantia [Garau et al., 2003 ; Leatherdale et al., 1981]. Un peptide ayant un effet hypoglycmique, polypeptide-P, a t isol partir du fruit, les graines et les tissus des Momordica charantia. Cest un agent hypoglycmiant trs efficace lorsqu'il est administr par voie sous cutane la gerbille, langurs et lHomme [Paul et Raychaudhuri, 2010]. De plus, cinq triterpnoides cucurbitanes ont t isols partir du fruit de melon amer. Les structures de ces composs identifis par HPLC sont mentionnes sur la figure 6 [Wang et al., 2008].
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Figure 6: triterpnoides cucurbitanes isols partir du fruit de Momordica charantia Une tude ralise in vitro montre que le compos 5 ainsi que dautres saponosides (momordicine I, momordicine II, 3-hydroxycucurbita-5,24-dien-19-al-7,23-di-O--
glucopyranoside, et kuguaglycoside G) isols partir de la mme plante stimulent la scrtion dinsuline [Keller et al., 2011]. 3.2. Trigonella foenum-greacum Le fenugrec, Trigonella foenum-graecum fait partie de la famille des fabaces et pousse dans l'Inde, l'Egypte et d'autres rgions du monde. Il est utilis comme une pice de cuisson et un agent aromatisant [Hajimehdipoor et al., 2010]. La graine est la partie utilise en mdecine traditionnelle pour le traitement de la constipation, l'hyperlipidmie, le diabte sucr et aprs la grossesse pour favoriser la lactation. La plupart des tudes sont court terme et ne tiennent pas suffisamment compte de dtails. Dans une tude de 10 jours, 10 patients atteints de diabte de type 1 consomment 100 - 19 -
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g/jour de poudre de graines dgraisses. Les rsultats montrent une diminution de la glycmie jeun passant d'une valeur de base moyenne de 2,72 1,96 g/l [Shane-McWhorter, 2009]. La 4-hydroxyisoleucine est un acide amin extrait des graines de fenugrec, prsente une activit intressante en stimulant la scrtion dinsuline glucose-dpendante [Broca et al., 1999]. La teneur moyenne en cet acide amin est environ 0,4% [Hajimehdipoor, 2009]. Une autre tude ralise par Broca et ses collaborateurs sur deux modles de rats ayant une insulinorsistance montre que la 4-hydroxyisoleucine amliore la sensibilit des cellules linsuline, diminue linsulinorsistance et inhibe la libration hpatique du glucose [Broca et al., 2004]. De plus, un autre compos est isol partir du fenugrec ; cest la diosgenine, un saponoside dont la recherche de son activit biologique montre quil agit au niveau hpatique. Cette molcule inhibe lanabolisme des lipides par suppression de lexpression des ARNm des gnes codant la lipogense [Uemura et al., 2011]. Ce compos est le saponoside majoritaire des graines du fenugrec [Raju, 2006].
Figure 7: diosgenine
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3.3. Allium cepa
Allium cepa de la famille des liliaces est utilise dans la mdicine traditionnelle depuis des centaines dannes. Lutilisation la plus populaire de cette espce est contre lhypertension artrielle [Ikram, 1971], comme antiseptique [Khaki et al., 2010], hypoglycmique et hypocholestrolmique [Mathew et August, 1975]. Le principe actif de cette plante est lallylpropyldisulfide, un compos soufr [Kumari et al., 1995]. Lextrait aqueux dAllium cepa test diffrentes doses chez le rat Wistar provoque une diminution dose-dpendante de lhyperglycmie. Une rduction de lordre de 75,4% de la glycmie initiale pour une dose de 300mg/kg [Ozougwu, 2011]. Dautre part, lextrait organique (ther dithylique/ thanol) de la mme plante agit au niveau intestinal par inhibition des -glucosidases et diminution de labsorption intestinale des glucides, ce qui diminue la glycmie post-prandiale [Kim et al., 2011]. 3.4. Allium sativum Lail, Allium sativum, est une des plantes mdicinales les plus utilises contre le diabte sucr [Mahesar et al., 2010]. Au Maroc, cette plante figure parmi les traitements traditionnels les plus populaires [Bnouham et al., 2002]. Les extraits aqueux des bulbes de lail, dAllium cepa et de Zingiber officinale rduisent la glycmie chez le rat wistar rendu diabtique par lalloxane. En comparant les trois espces, A. sativum prsente la meilleure activit [Eyo et al., 2011]. Test chez le rat Wistar rendu diabtique par la streptozotocine, A. sativum est significativement efficace sur la glycmie compar au glibenclamide [Eidi et al., 2006]. En outre, il rduit la cholestrolmie [Khatibi, 2011; Choudhary, 2008 ; Banerjee et Maulik, 2002]. Sur le plan clinique, leffet de lail sur le diabte associ une dyslipidmie a t tudi. Cette tude montre que Allium sativum associ au Curcuma longa diminuent le taux dhmoglobine glyque, la glycmie et amliorent les paramtres lipidiques [Sukandar et al., 2010 ; Rizwan et al., 2011]. Lail contient nombre important de principes actifs responsables de ses effets mdicinaux. Ce sont des composs soufrs tel que le S-allyl cystine sulfoxide responsable de - 21 -
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la majorit des effets bnfiques de lail. Aussi, lail contient environ 1% dalliin qui se transforme par lallicinase en allicine (S-allylcystine sulfoxide). Ce dernier est dou, en plus de son pouvoir antidiabtique, dune activit anticancreuse [Martha et al., 2007]. 3.5. Ginseng : Le ginseng est un nom quon attribue plusieurs espces vgtales dont le Panax ginseng (asiatique ginseng), Eleutherococcus senticosus (ginseng sibrien), P. quiquefolius (ginseng amricain) et P. japonicus (ginseng japonais) [Xie et al., 2005]. Les racines du ginseng sont utilises depuis des centaines dannes dans la mdecine traditionnelle et particulirement contre le diabte sucr. Plusieurs tudes ont montr scientifiquement lusage de ces racines qui ont amlior le diabte chez le rat et le patient diabtique [Shane-McWhorter, 2009] La racine du ginseng asiatique contient des substances chimiques actives appeles ginsnosides (ou panaxosides) auxquelles on attribue les proprits mdicinales de la plante [Attele et al., 2002].
Figure 8: Ginsnoside
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Le mcanisme daction du ginseng reste mal connu. Certains chercheurs proposent la possibilit de son action au niveau des cellules en augmentant la pntration du glucose et quil pourrait potentialiser leffet du glucose sur la scrtion de linsuline [Shane-McWhorter, 2009]. Le ginseng amricain semble efficace sur la glycmie post-prandiale [Vuksan et al., 2001]. Dautre travaux montrent que les glycopeptides du ginseng sont responsable dun effet antihyperglycmiant [Wang et al., 2003]. 3.6. Zygophyllum geslini : En Algrie, plusieurs plantes sont utilises traditionnellement pour traiter le diabte sucr ; parmi elles, le Zygophyllum geslini Coss. [Smati et al., 2004], objet de notre tude. Le Zygophyllum geslini est une Zygophyllace vivace de la classe des Magnoliopsides, de lordre des Sapindales. Cest une plante en petits buissons ramifis, rameaux blanchtres, petites feuilles charnues et composes de deux folioles. Les fleurs sont petites et blanches et le fruit est prolong en lobes, piriforme rgulirement dilat depuis la base jusquau sommet mais non muni de cornu recourb en crochet. Il est une fois et demie plus long que large. Le pdoncule est fructifre, aussi long que le fruit. La portion libre des carpelles est trois quatre fois plus courte que la portion soude, faisant peine saillie [Ozenda, 1977]. Le zygophylle geslini est une espce endmique du Sahara septentrional algrien. Plusieurs espces du mme genre partagent avec le zygophylle geslini le nom vernaculaire de aggaya telles que Z. album, Z. cornutum [Baba Assa, 1999], Z. gaetulum et Z. waterlot [Jouad et al., 2001 ; Eddouks, 2002]. Ces espces sont utilises en mdecine traditionnelle comme remdes de diffrentes affections, notamment, le Z. gaetulum qui est trs utilis au Maroc contre le diabte sucr. Des tudes ralises sur cette plante montrent que lextrait aqueux peut diminuer la glycmie des rats rendus diabtiques [Jouhari et al., 2000]. Il est galement efficace chez des patients souffrant du diabte de type 2 [Jouhari et al., 1999]. De mme pour Zygophyllum cornutum, Aggaya de la Tunisie, o il a t rapport que cette espce est trs efficace quand elle est teste sur le lapin [Perez et Paris, 1958]. Les espces du genre Zygophyllum sont trs riches en saponosides. A partir des racines de Z. coccineum et la partie arienne de Z. album et Z. dumosum a t isol un - 23 -
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htroside triterpnique : Zygophyloside F. Cest un driv dacide quinovique [Elgamal et al., 1995]. La plante est trs riche en saponosides o les deux classes sont prsentes : les saponosides gnine strroidique et ceux gnine triterpnique. On note aussi la prsence des tanins, flavonoides, alcalodes, coumarines, glucosides cardiotoniques, anthracnosides, huiles volatiles et acides gras [Medjboub, 2006]. Lextrait dichloromthanique des racines de Z. geslini montre un effet cytotoxique significatif contre les cellules KB carcinome de lpiderme buccal humain . Cette activit est due un produit actif : le 3-(3.4- dihydroxycinnamoyl)-rythradiol (Figure 9) [Smati et al , 2004].
Figure 9 : 3-(3.4- dihydroxycinnamoyl)-rythradiol
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1. Introduction :
Mthodes dtude de lactivit antidiabtique des plantes
Les mthodes dtudes de lactivit antidiabtique des plantes mdicinales sont variables. Certaines sont effectues sur lanimal (pr-clinique) et dautres sur des patients diabtiques (clinique). Le choix du modle de diabte, la voie du traitement, le type de prparation des extraits de plantes ainsi que les paramtres dvaluation de lactivit antidiabtique sont les points les plus importants fixer avant ltude. 2. Dfinition du diabte exprimental : Le diabte exprimental consiste produire, chez lanimal, un tat comparable au diabte sucr, en vue de mieux comprendre le diabte sucr de lhomme ou de trouver de nouvelles thrapies [Wright et al., 1980]. Le comit du conseil national amricain sur les modles animaux pour la recherche et le vieillissement dfinit le modle animal pour la recherche biomdicale celui o une physiologie ou un comportement peut tre tudi ou celui o une pathologie, peut tre induite ou spontane, est recherche et dont les signes ressemblent celle de lHomme ou dun autre animal [Eddooks et al., 2012] En se basant sur cette dfinition, les modles animaux utiliss en recherche biomdicale peuvent tre classs en cinq groupes: a) les modles spontans o la maladie ou ses conditions se produisent spontanment chez les animaux comme chez les humains, b) exprimentalement, c) des modles gntiquement modifis dans lesquels la maladie ou ses conditions sont induites chimiquement/chirurgicalement ou par manipulation gntique, d) les modles ngatifs, y compris les animaux rsistants une condition ou une maladie particulire, e) les modles orphelins, y compris des modles animaux de la maladie inconnue ses homologues de l'Homme [Chatzigeorgiou et al., 2009].
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Durant ces dernires annes, les tudes entreprises visant la mise au point de modles adquats de diabte chez l'animal, notamment dans le cas du diabte de type 2 (sans obsit associe) ont abouti diffrents types de modles obtenus essentiellement chez le rat. L'exploitation de ces modles de diabte apporte des confirmations en faveur de l'ide selon laquelle les anomalies de l'insulino-scrtion et de la sensibilit l'insuline seraient secondaires une rduction plus ou moins marque de la population de cellules [Etuk, 2010]. 3. Modles animaux de diabte sucr : Le diabte exprimental peut tre induit chez lanimal par injection de substances diabtognes [Crouch et al., 1978] ou spontanment sous leffet dun rgime hypercalorique ou de stress [Vogel et Vogel, 1997]. Le diabte exprimental par pancratectomie nest plus utilis pour des raisons de difficults techniques et aussi car la consquence est une ablation de la scrtion dinsuline ce qui est le but recherch ainsi que dautres hormones comme le glucagon [Dupin, 1992]. 3.1. Diabte spontan : Plusieurs espces animales ont une forte prdisposition au diabte sucr, des espces de souris, de rats, de hamsters, de cobayes, de porcs miniatures, de singes et autres [Ganong, 2005]. Le modle de diabte choisi est en fonction de la pathologie tudier. Certains animaux dveloppent un diabte ressemblant au diabte de type 2 ou de type 1. Dans certaines situations, la pathologie induite est, seulement, une partie du diabte sucr, une insulinorsistance, une raction auto-immune contre les cellules , une rtinopathie, Donc, le choix du modle de diabte est un point crucial pour confirmer leffet des extraits ou de molcules tests. 3.1.1. Diabte de type 1: Cinq modles animaux de diabte spontan sont principalement prfrs pour tudier le diabte auto-immun: la souris NOD, le rat BB, le rat LETL, le rat PDK - 26 -
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et le rat LEW-DID. La souris NOD et le rat BB sont les plus utiliss [Chatzigeorgiou et al., 2009]. 3.1.1.1. Le rat BB (Bio-breeding): Le rat BB est un modle de diabte spontan associ une dficience en insuline et une insulinite due la destruction auto-immune des cellules pancratiques et peut tre plus svre que chez les rats rendus diabtiques par la STZ [Horowitz et Samson, 2004]. Le rat BB dveloppe un diabte de type 1 aprs exposition au stress chez les deux sexes, mle et femelle [Vogel et Vogel, 1997 ; Mordes et al., 2004]. 3.1.1.2. La souris NOD (Non Obese Diabetic) : Les souris NOD reprsentent un modle d'tude du diabte de type 1. Il s'agit d'une souche de souris consanguines dont une grande majorit dveloppe spontanment un diabte similaire au diabte de type 1 humain, au bout de 90 180 jours de vie. Elles ont pour particularit d'avoir un CMH II d'un type particulier (type IA g7) et de dvelopper spontanment la maladie [Chatzigeorgiou et al., 2009]. De nombreuses caractristiques du diabte de type 1 humain et du diabte du rat BB se retrouvent dans ce modle: destruction auto-immune des cellules des ilots du pancras, activit anormale des lymphocytes T, sensibilit de la maladie aux immunosuppresseurs et la composante gntique de la maladie localise l'intrieur du CMH [Cavan et al., 1992 ; Chatzigeorgiou et al., 2009]. 3.1.2. Diabte de type 2: Le diabte sucr de type 2 et une maladie trs complexe et htrogne. Plusieurs espces peuvent dvelopper un diabte ressemblant cette pathologie. Ces animaux sont le plus souvent des espces de rats et de souris, obses (Psammomys obesus, souris ob/ob, souris db/db, et le rat Zucker fa/fa) ou non obse (le rat Goto-Kakizaki et la souris mutante nonobse C57BL/6 Akita) [Chatzigeorgiou et al., 2009]. 3.1.2.1. Le rat Psammomys obesus (PO) Il appartient la famille des Gerbillidae, encore appel le rat des sables. PO vit dans le dsert de lAfrique du nord et des pays dorient [Vogel et Vogel, 1997, 2007]. Il prfre les - 27 -
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feuilles et les tiges des plantes de la famille des Chnopodiaces et qui reprsentent son rgime alimentaire. Ces plantes sont trs riches en sels minraux, en eau et en fibres [Dupin, 1992]. Dans son milieu naturel, cet animal se nourrit de plantes sales pauvres en calories. Soumis un rgime standard de laboratoire, 40% des animaux deviennent obses et dveloppent un diabte de type 2 partir du 3memois. Les 60% restants ne prsentent pas de diabte mais restent obses avec des taux levs dinsuline plasmatique [Shafrir et Renold, 2001]. Le rat des sables rpond l'augmentation alimentaire provoquant une surcharge calorique par un accroissement du poids corporel d une augmentation de la taille des adipocytes ou cellules graisseuses, une hyperinsulinmie et une intolrance au glucose diffrents degrs. L'effet du rgime sur l'installation du diabte est rversible. Par contre, audel de 6 mois de rgime, quelques animaux qui ont dvelopp le diabte prsentent une chute pondrale considrable, les taux d'insuline plasmatique diminuent fortement et celui du glucose plasmatique augmente. Ces rats des sables dveloppent un diabte insulinodpendant constituant la dernire phase de la maladie [Marqui et al., 1997 ; Shafrir et al., 2006]. 3.1.2.2. Souris ob/ob et souris db/db : Ces deux espces prsentent une mutation gntique causant un diabte de type 2 non obse avec une transmission autosomale rcessive. La physiopathologie de cette affection est un dfaut de la synthse de la leptine ou de sa fonction. Pour la souris ob/ob, il sagit dune mutation au niveau du chromosome 6 de la souris de souche C57BL/6J. Cette mutation est dans le gne ob codant pour la synthse de la leptine conduisant une surcharge pondrale de lanimal et une obsit aboutissant une insulinorsistance [Srinivasan et Ramarao, 2007]. Pour la souris db/db, la mutation est dans le chromosome 4 de la souris de souche C57BL/KsJ et prcisment sur le gne db codant la synthse des rcepteurs de leptine. Lanimal est polyphagique, obse et dveloppe une insulinorsistance [Chatzigeorgiou et al., 2009].
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3.1.2.3. Rat Goto-Kakizaki (GK) :
Le rat GK est un modle de diabte polygnique produit par lquipe de Goto et ses collaborateurs [Goto et al., 1975] et cela par levage slectif dindividus de rat Wistar prsentant une tolrance au glucose anormale. Il est caractris par labsence dobsit, une hyperglycmie jene modre et stable, une hypoinsulinmie, une lipidmie normale et une intolrance au glucose. Ces pathophysiologie sont observes partir de deux semaines dge avec des complications avances [Portha, 2003]. Chez ladulte, le nombre de cellules diminue de 60% avec une diminution du stock en insuline dans les cellules pancratiques. De plus, une insulinorsistance est observe au niveau du foie, du muscle et du tissu adipeux [Chatzigeorgiou et al., 2009 ; Srinivasan et Ramarao, 2007]. 3.2. Diabte induit chimiquement : 3.2.1. Diabte induit par la streptozotocine : Le diabte sucr peut tre induit chez lanimal par diffrentes techniques dont linjection de la STZ qui est largement utilise [Szkudelski, 2001]. La STZ est un glucosamine nitros (figure 10) [Anderson et al., 1974; Povoski et al., 1993] qui entrane un effet cytotoxique slectif des cellules des lots de Langerhans [Anderson et al., 1974 ; Robbins et al., 1980 ; Crouch et al., 1978].
Figure 10: Streptozotocine - 29 -
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Le mcanisme daction de cet agent diabtogne reste encore mal connu. Cependant, les tudes antrieures ont montr son action sur les lots de Langerhans en rduisant la masse des cellules et par consquent une insulinopnie caractristique dune hyperglycmie chronique ou transitoire [Aughsteen, 2000; Szkudelski, 2001; Chen et Ianuzzo, 1981]. Le glucose qui constitue la molcule de la STZ permet sa pntration dans les cellules pancratiques travers les transporteurs de glucose GLUT2. A lintrieur de la cellule, la STZ se dcompose en espces ractives oxygnes qui provoquent une alkylation de lADN qui se dfragmente ce qui active la poly(ADP-ribose)polymrase, enzyme cl de la rparation de lADN. Cette raction consomme le NAD et lATP comme cofact eurs enzymatiques conduisant leur dpltion et la ncrose de la cellule [Szkudelski, 2001]. En plus de son impact sur le mtabolisme des hydrocarbures qui est bien tudi, la STZ provoque une altration du mtabolisme glucidique, lipidique et protique due la dfaillance en insuline [Szkudelski, 2001; Szkudelski et Szkudelska, 2002; Junod et al., 1969]. En revanche, des tudes antrieures ont dvoil leffet indirect de cette toxine sur la signalisation de linsuline. Lhyperglycmie chronique est lorigine dune insulinorsistance rsultante dune diminution dautophosphorylation du rcepteur de cette hormone [Kadowaki et al., 1984]. Rcemment dmontr, elle active lexpression de la protine kinase C, une protine responsable de la dphosphorylation du rcepteur de linsuline [Davidoff et al., 2004]. De plus, linjection de la STZ est lorigine dune chute de poids [Junod et al., 1969; Chen et Ianuzzo, 1981]. Plusieurs travaux raliss en vue de mieux comprendre le mcanisme pathogne de la STZ, ont montr que ce produit diminue la dfense antioxydante de la cellule, particulirement une inhibition de lactivit superoxide dismutase [Robbins et al., 1980; Gandy et al., 1982; Crouch et al., 1978; Rajasekaran et al., 2005]. La dose choisie de la STZ est variable selon la voie dadministration, lanimal et surtout la pathologie voulue [Junod et al., 1969; Chen et Ianuzzo, 1981]. Par exemple, dans les essais prliminaires, il est important de garder la vitalit de lanimal o on injecte de faibles doses de STZ (dose infrieure ou gale 60mg/kg par IV) [Jarrin et al., 2002].
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3.2.1. Diabte induit par lalloxane: Lalloxane, le 2,4,5,6-tetraoxypyrimidine, est une pyrimidine oxygne. Cette molcule est prpare par oxydation de lacide urique sous laction de lacide nitrique [Szkudelski, 2001].
Figure 11: Alloxane Lalloxane, par une analogie structurale au glucose, pntre travers les transporteurs de glucose GLUT2 des cellules pancratiques. Au cytosol, lalloxane est rduit en acide dialurique. Cette rduction est assure par plusieurs agents tels que le glutathion rduit, la cystine, lacide ascorbique et les groupements SH des protines. Lalloxane se relie avec deux groupements thiol du site actif de la glucokinase formant un pont disulfure et inactivant lenzyme [Lenzen et al., 1988]. Lacide dialurique form est r-oxyd en alloxane, ce qui gnre des espces ractives oxygnes et active la raction de Fenton [Skudelski, 2001 ; Ankur et Shahjad, 2012]. Dautre part, les espces ractives oxygnes attaquent lADN et induisent une dfragmentation de ce dernier. Ce mcanisme est semblable celui de la streptozotocine [Ankur et Shahjad, 2012]. Lalloxane inhibe la scrtion de linsuline glucose-dpendante et augmente la permabilit des membranes des cellules [Watkins et al., 1964]. Cette substance toxique diminue le taux de lhormone de croissance au niveau de ladnohypophyse [Hazelwood et Hazelwood, 1964].
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Chapitre 3
4. Prparation du matriel vgtal : Afin de rechercher les ventuels effets antidiabtiques des plantes, on prfre se rfrer la mre nature en tudiant plusieurs points tels que la partie utilise de la plante, la saison de rcolte, la prparation, lusage traditionnel, la dure de traitement, Souvent, on conserve les mmes prparations qui sont essentiellement des extraits bruts aqueux, la poudre entire, le jus, la plante fraiche ou sche, etc. Les extraits sont prpars par macration, infusion ou dcoction. Une premire tape est obligatoire avant ltude, cest lidentification botanique de lespce vgtale par plusieurs botanistes. On ne peut s'attendre profiter de toute l'efficacit d'un remde naturel si la plante recherche n'est pas la bonne ou si sa qualit laisse dsirer [Harbone, 1998]. En effet, afin de tirer le meilleur parti des plantes mdicinales, il convient de veiller ce que les herbes et leurs drivs soient d'excellente qualit. Cela exige qu'elles soient cultives dans de bonnes conditions, correctement sches, bien conserves et que leur date limite de consommation soit respecte. Le recours des plantes de mauvaise qualit est bien souvent une perte de temps et d'argent [Larousse, 2001]. En conservant la mre nature, on commence linvestigation de lactivit des plantes sur des extraits bruts o on utilise, dans la majorit des cas, leau et en second e position lthanol [Harbone, 1998 ; Khatibi, 2011]. Dans le but de sparer les molcules actives on procde, ensuite, aux techniques de fractionnement [Bruneton, 1999]. 5. Voie dadministration des extraits vgtaux : Les extraits prpars, afin dtre valus scientifiquement, doivent tre schs la fin de lextraction. Cela permet la bonne conservation et une maitrise des doses administres ainsi quune concentration des principes actifs [Mathieu et Fonteneau, 2008]. Lors de son administration lanimal, lextrait est re-solubilis dans un solvant appropri. Pour les extraits lipophiles, on peut utiliser des dtergents comme le tween 80 et la gomme adragante. Lextrait reconstitu doit tre bien homognis voire solubilis [Williamson et al., 1996].
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Chapitre 3
La voie dadministration qui est souvent choisie est la voie orale pour de multiples raisons. Dune part, on se rfre aux bases ethnopharmacologiques; les gens utilisent, gnralement, les plantes antidiabtiques en avalant les tisanes qui en dcoulent ou en les consommant entirement. Subsquemment, cest la voie la plus proche de la ralit [Eddouks et al., 2002]. Dautre part, cest une voie dadministration physiologique qui offre un certain nombre de critres defficacit et de commodit. De plus, elle ne ncessite aucun matriel particulier. Du point de vue pharmacologique, la voie orale est la plus couramment utilise (70 80% des mdicaments sont administrs per os). Cette voie est, gnralement, bien accepte par les patients [Bourin et Jolliet, 1999]. A cot des avantages de la voie orale, cette dernire peut causer une diminution de lactivit des molcules actives suite leur dgradation par les enzymes hpatiques [Touitou, 2007]. Aussi, il existe des risques de destruction par les sucs digestifs ou une irritation du tube digestif par certains composs. Par consquent, la voie parentrale devient plus avantageuse que la voie per os [Lllmann et al., 1998, Garau et al., 2003, Wang et al., 2003]. 6. Evaluation de lactivit antidiabtique : La recherche sur lanimal, dite prclinique, dure des annes. Elle dbute par des tudes de toxicit aigue et chronique. Ltude pharmacologique valuant les effets antidiabtiques dune poudre ou dun extrait est ralise dabord sur lanimal sain et sur un animal prsentant le diabte. Des essais in vitro sont galement possibles sur des cultures cellulaires. Mais ces tudes ne peuvent pas remplacer les tudes sur lanimal entier qui rendent mieux compte des effets dun mdicament sur lorganisme [Cohen et Jacquot, 2011]. Pour lvaluation de lactivit antidiabtique, plusieurs paramtres physiologiques sont tudis. La variation du poids corporel est un paramtre important cot des paramtres biochimiques qui varient selon le modle animal et la phase de recherche. La composition des tissus et leur structure sont aussi tudies [Wright et al., 1980]. Le passage ltude clinique sur lHomme est dcid si le dveloppement du mdicament parat intressant au terme des tudes toxicologiques et pharmacologiques prcdentes sur lanimal. La recherche clinique se droule en quatre phases dessais thrapeutiques dans un cadre lgal [Kintz, 1998]. - 33 -
Chapitre 3
Pour la phase 1, la recherche est effectue sur des volontaires sains afin de vrifier les effets montrs chez lanimal et tablir une relation dose-effet. A la phase 2, le test se fait sur des patients diabtiques. Si la substance montre une efficacit relle et pas deffets secondaires, on passe la phase 3. A cette tape, laction thrapeutique de la nouvelle substance est compare celle du mdicament de rfrence. Cela doit tre effectu sur un groupe plus important de patients. Les trois premires phases permettent la mise du mdicament sur le march. Aprs, cest la phase 4 qui consiste au suivi du mdicament et de ses effets secondaires [Lllmann et al., 1998 ; Touitou, 2007] .
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Matriels et mthodes
1. Objectif : Le premier objectif de notre travail est dtudier lactivit antidiabtique de la partie arienne de Zygophyllum geslini Coss. sur le diabte sucr induit chez le rat wistar. La pathologie est induite chez lanimal par injection dune substance diabtogne, la streptozotocine. Dans ce travail, lextrait aqueux brut tudi est soumis une srie de fractionnement liquide-liquide. Les fractions obtenues sont testes afin de rechercher une ventuelle activit antidiabtique. Toutes ces fractions ont fait lobjet dune tude phytochimique en caractrisant les grandes familles de composs vgtaux et en quantifiant certains groupes chimiques. A partir des tests biologiques, nous avons slectionn la fraction la plus efficace. La fraction qui a montr une bonne activit antidiabtique est tudie pour valuer lactivit antiradicalaire. 2. Matriel vgtal et extraction: 2.1. Rcolte : Le zygophyllum tudi dans cette approche provient du Sahara algrien. Lespce Zygophyllum geslini Coss. a t identifie daprs Ozenda (1977). La cueillette des chantillons de Z. geslini a t faite au mois de Mai 2008 et 2009 dans la rgion d'Ougrout, situe 120 km du Nord-Est de la wilaya d'Adrar (sud-ouest de l'Algrie). 2.2. Traitement : Aprs rcolte, le matriel vgtal (partie arienne) est sch lair libre et labri de la lumire et de la chaleur. Ensuite, il est broy afin de procder lextraction.
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Matriels et mthodes
2.3. Extraction : Lorganigramme en-dessous rsume les tapes suivies pour prparer les diffrentes fractions de lextrait aqueux brut.
Partie arienne broye
Extrait aqueux brut
Fraction aqueuse 1
Fraction butanolique 1
Fraction aqueuse heptanique
Fraction heptanique
Fraction aqueuse 2
Fraction butanolique 2
Fraction aqueuse 3
Fraction dichloromthanique
Figure 12: Organigramme du fractionnement de lextrait brut aqueux.

Extrait aqueux brut: EAB, Fraction aqueuse 1: FA1, Fraction butanolique 1: FB1, Fraction heptanique : FH, Fraction aqueuse heptanique: FAH, Fraction aqueuse 2: FA2, Fraction butanolique 2: FB2, Fraction aqueuse 3: FA3, Fraction dichloromthanique: FDM
2.3.1. Prparation de lextrait brut aqueux : Lextraction se fait par macration du broyat de la plante temprature ambiante dans l'eau distille raison de 10% (P/V) pendant 24 heures. Aprs, on procde une filtration. Le filtrat est ensuite utilis pour le fractionnement liquide-liquide ou sch 50C ltuve jusqu lobtention dun rsidu sec. Par consquent, un rsidu sec est obtenu. Ce dernier est conserv dans des piluliers en verre ambr une temprature de +4C. - 36 -
Matriels et mthodes
2.3.2. Fractionnement de lextrait aqueux brut: Lextrait aqueux brut, non sch, subit une srie dextractions liquide-liquide afin de rcuprer 8 fractions (voir organigramme). La premire extraction se fait par le n-butanol en rcuprant deux fractions, organique (FB1) et aqueuse (FA1). Cette dernire est extraite par lheptane dont le rsultat est toujours, deux fractions, heptanique (FH) et aqueuse dite aqueuse heptanique (FAH). La fraction FAH subit une extraction liquide-liquide par le dichloromthane pour avoir les fractions, aqueuse 3 (FA3) et dichloromthanique (FDM). La fraction FB1 est r-extraite par leau distille (lavage). Cela permet lobtention de deux fractions, butanolique (FB2) et aqueuse (FA2). Les extractions sont rptes plusieurs fois afin dextraire le maximum de composs. Les fractions organiques sont vapores sec au moyen dun rotavapeur. En parallle, les fractions aqueuses sont sches 50C ltuve pendant 48 heures. Les rsidus secs obtenus sont conservs dans des piluliers en verre, labri de la lumire et temprature de +4C. Les rendements dextraction sont dtermins par rapport 100g de matriel vgtal sec. 3. Etude phytochimique : Une recherche phytochimique est effectue paralllement aux diffrents tests biologiques. Cette contribution est ralise, en premier temps, sur la plante entire, ensuite sur les diffrentes fractions de lextrait aqueux brut. La phytochimie de la plante est ralise sur la plante entire ou traite par trois solvants de polarits diffrentes savoir, lther dithylique, lthanol et leau. Les extraits bruts (therique, thanolique et aqueux) sont prpars par macration de 5 g de la poudre vgtale dans 100ml de solvant. Pour les fractions, les tests phytochimiques se font sur le rsidu sec ou solubilis dans de leau distille. Par ailleurs, les teneurs en composs phnoliques et sucres totaux sont recherchs sur lEAB et ses fractions en suivant la mme technique dcrite pour la partie arienne. EAB et les fractions obtenues sont reconstitues des concentrations connues.
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Matriels et mthodes
3.1. Phytochimie qualitative : La phytochimie qualitative consiste en la mise en vidence des diffrentes familles de composs par la ralisation de ractions chimiques caractristiques. 3.1.1. Tanins : A 2 ml de la solution tester ajouter 2 3 gouttes de solution de FeCl 3 2%. Un test positif est rvl par lapparition dune coloration bleue-noire et un prcipit (laisser reposer quelques minutes) [Karumi et al., 2004]. 3.1.2. Saponosides : Test 1 : 5 ml de la solution tester sont bien mlangs avec 10 ml deau distille pendant 2
mn. La formation dune mousse persistante aprs 15 mn confirme la prsence des saponosides [Karumi et al., 2004]. Test 2 : Evaporer 10 ml dextrait thanolique. Traiter le rsidu obtenu avec 10 ml de
chloroforme anhydre. Mlanger 5 ml de la solution chloroformique avec 5 ml danhydride actique. Ajouter quelques gouttes dacide sulfurique concentr. Agiter puis laisser reposer. Lapparition dune coloration violace fugace virant au vert confirme la prsence des htrosides strodiques [Karumi et al., 2004]. Test 3 : 5 ml de la solution tester sont mlangs avec 2 ml de chloroforme et 3 ml dacide
sulfurique concentr. Une couleur rouge-marronne de la couche dinterface indique la prsence des triterpnes htrosidiques [Edeoga, 2005]. 3.1.3. Flavonoides : Traiter 5 ml de chaque extrait avec quelques gouttes de HCl concentr. Ajouter une quantit de tournures de magnsium (Laisser agir). La prsence des flavonodes est confirme par lapparition dune couleur rouge ou orange [Karumi et al., 2004]. 3.1.4. Glucosides cardiotoniques : Ce test est bas sur la raction de Keller-Kiliani. A 1 ml de chaque extrait ajouter 5 ml dacide actique contenant des traces de FeCl3 et 5 ml dacide sulfurique contenant des traces - 38 -
Matriels et mthodes
de FeCl3. La prsence des glucosides cardiotoniqus est confirme par la formation de deux phases, une colore en brun rouge (acide actique) et la deuxime en bleu-vert (acide sulfurique) [Edeoga et al., 2005]. 3.1.5. Coumarines: Placer 1g dchantillon de la plante humide dans un tube essai. Couvrir le tube avec un papier imbib dune solution de NaOH et le placer dans un bain marie pendant quelques minutes. Ajouter 0,5 ml de NH4OH (10%). Mettre deux taches sur un papier filtre et examiner sous la lumire ultraviolette. La fluorescence des taches confirme la prsence des coumarines [Benmehdi, 2000]. 3.1.6. Anthracnosides : Ce test est ralis sur lextrait thanolique. En premier lieu, prendre 25 ml de lextrait thanolique, ajouter 15 ml dHCl 10%, porter reflux pendant 30 mn, refroidir la solution et lextraire 3 fois avec 15 ml dther dithylique afin dobtenir deux phases, aqueuse et therique. Le test de la prsence des anthracnosides est bas sur la raction de Borntrager. Evaporer 8 ml de la phase therique, rcuprer le rsidu avec 2 ml deau chaude, ajouter quelques gouttes dNH4OH 10%. Le test est positif par lapparition dune coloration rouge orange. 3.1.7. Alcalodes : Deux ractifs sont utiliss : ractif de Mayer et ractif de Wagner qui sont prpars comme suit : Ractif de Mayer : 5 g de KI et 1,358 g de HgCl2 solubiliss dans 100 ml deau distille. Ractif de Wagner : 2 g de KI et 1,27g dI2 solubilis dans 100 ml deau distille.
Ce test se fait par ajout de quelques gouttes de chaque ractif, sparment, aux diffrents extraits tudis. Lapparition dun prcipit confirme la prsence des alcalodes [Bruneton, 1999].
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Matriels et mthodes
3.1.8. Amidon : Traiter lextrait aqueux avec le ractif damidon. Lapparition dune coloration bleue violace indique la prsence damidon [Benmehdi, 2000]. Ractif damidon : 1,2 g dI2 et 2,5 g de KI solubiliss dans 500 ml deau distille. Le test est positif par lapparition dune coloration rouge orange 3.1.9. Anthraquinones : Bouillir 1 g de la plante pendant quelques minutes en prsence de 10 ml de KOH 0,5 N et 1ml dH2O2 5%. Refroidir le mlange, filtrer puis acidifier le filtrat avec lacide actique. Extraire la solution acide obtenue avec 10 ml de benzne. Agiter lextrait benznique en prsence de 5 ml de NH4OH. Une raction positive est rvle par la formation dune couleur rouge au niveau de la couche alcaline [Benmehdi, 2000]. 3.1.10. Mucilages : Mlanger 1 ml dextrait aqueux et 5 ml dalcool absolu. Un test positif est rvl par lapparition dun prcipit floconneux. 3.1.11. Acides amins : Ce test est bas sur la raction des acides amins avec la ninhydrine. A 1ml de la solution tester (solubilise dans leau distille) ajouter 1ml de solution de ninhydrine prpare dans lactone (ou thanol) dont la concentration est de 1%. Chauffer dans le bain marie et observer le changement de couleur. La prsence des aminoacides est confirme par lapparition dune couleur violette [Harbonne, 1993].
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Matriels et mthodes
3.2. Phytochimie quantitative : Dans cette tape, nous avons estim les teneurs de certains composants de la partie arienne de la plante en question dont nous avons prlev cinq chantillons sur lesquels lanalyse a t faite. 3.2.1. Humidit: Principe: Cette mthode analytique est base sur le schage complet du matriel vgtal frais une temprature de 80C jusqu' obtention d'un poids stable. L'humidit est le pourcentage en eau perdue aprs schage par rapport la matire frache [AFNOR, 1990]. Mode opratoire: Cinq grammes de chaque chantillon "plante frache" sont emballs dans le papier d'aluminium, et placs dans l'tuve 80C jusqu' schage total. Aprs, les chantillons sont retirs et placs dans un dessiccateur pour se refroidir, puis pess en utilisant la mme balance analytique utilise pour les pess pralables. Expression des rsultats: Le taux d'humidit est exprim en (%) selon la formule suivante: H (%)= [(M2-M3)/(M2-M1)] x100 M1: la masse du papier aluminium vide en gramme M2:la masse du papier aluminium +la prise d'essai avant le schage M3: la masse du papier aluminium +la prise d'essai aprs le schage H:humidit Le pourcentage en matire sche (MS%) est exprim selon la formule suivante: MS (%)=100-%H - 41 -
Matriels et mthodes
3.2.2. Sucres totaux: Principe: Pour l'analyse des sucres totaux, nous avons suivi la mthode de Dubois et al, (1956). Le principe de cette mthode est qu'en milieu acide et chaud, les liaisons glycosidiques des hydrocarbures sont hydrolyses. Les oses simples ainsi librs subissent une dshydratation intramolculaire pour donner des drivs furfuraux. La fonction aldhyde des furfuraux se condense ainsi en milieux acides avec l'hydrolyse d'un compos phnolique pour donner des actals ou hmi actals de couleur rougetre qui absorbent dans le visible (450-500 mm). Extraction: Le protocole d'extraction consiste peser 50 mg du matriel vgtal sec puis les mettre dans 50 ml d'eau distille, et laisser agir pendant 24 h temprature ambiante. Ensuite, cet extrait est soumis une filtration. Pour le dosage des sucres totaux dans les fractions de lextrait brut aqueux, ces dernires sont solubilises dans leau distille des concentrations connues. Dosage: Dans des tubes essais, on introduit 1ml de la solution doser, puis 1ml de la solution de phnol (5%). Les tubes sont soigneusement agits. Puis 5ml d'acide sulfurique concentrs sont ajouts l'aide d'une pipette gradue. Aprs sjour de 30mn l'obscurit, les mesures d'absorbance (densit optique, DO) sont effectues 490nm. Par ailleurs, le calibrage du spectrophotomtre (UV-VIS spectrophotometer,
SHIMADZU) se fait avec un blanc contenant : 1ml d'eau distille, 1ml de phnol 5% et 5ml de H2SO4. Expression des rsultats: Une courbe d'talonnage corrlant la variation de la DO en fonction de la concentration de glucose a t trace. A partir de cette courbe on dtermine la concentration de notre chantillon en sucres totaux. Le taux des sucres en % par rapport la matire sche est obtenu par la formule suivante: - 42 -
Matriels et mthodes
ST (%MS)= [(CxV)/P] x100 C: concentration en sucres de l'extrait en mg/ml V: volume de l'eau distill utilis en ml P: la prise d'essais en mg ST: sucres totaux ST (%MF) = [ST (%MS) x %MS]/100 %MS: la teneur en matire sche en % MF : matire fraiche 3.2.3- Protines: Principe: Le dosage des protines par la mthode de Kjeldahl est bas sur la minralisation totale de la matire biologique en milieu acide, suivie de la distillation de lazote sous forme dammoniaque. En effet, le matriel biologique est minralis dans lacide sulfurique concentr (H2SO4) chaud (600C) pendant 4 heures en prsence du catalyseur de la digestion (mlange de K2SO4, CuSO4 et slnium). A la fin de la minralisation lazote se trouve sous la forme minrale [(NH4+)2, SO42-]. Afin de pouvoir distiller lazote par entranement la vapeur deau, il faut dabord neutraliser lacide sulfurique et transformer lazote sous forme dammoniac gazeux (NH3). Au cours de la distillation lazote de lammoniac est entran la vapeur deau et pig dans lacide borique ensuite titr par l'acide sulfurique (0,1N). Lopration se fait, donc, en trois tapes, minralisation, distillation et titrage [AFNOR, 1977]. Mode opratoire: Minralisation: Peser 1g de l'chantillon et lintroduire dans le matras de l'appareil minralisation (Gerhardt). Ajouter une quantit approprie de catalyseur (5g de sulfate cuivrique et une - 43 -
Matriels et mthodes
petite quantit de slnium), 5g de sulfate de potassium et 10ml d'acide sulfurique pure. Homogniser, et chauffer le matras jusqu' l'obtention d'une solution limpide de couleur verdtre Laisser ensuite refroidir. N organique +H2SO4 (NH4)2SO4 +H2O +CO2 Distillation: Cette tape se fait en utilisant lappareil distillateur (Gerhardt). Le contenu du matras est vers dans le ballon de distillation. Ensuite, on ajoute 80ml d'eau distille (goutte goutte) et 80ml de solution d'hydroxyde de sodium (33%). Un bcher contenant 25ml d'acide borique (4%) est plac l'autre extrmit de lappareil. On commence la distillation du mlange par chauffage du ballon de faon recueillir plus de 50 ml de distillat. NH4+ +OH - NH3+H2O Titrage: Le titrage se fait laide de H2SO4 (0,1N) en plaant le bcher au dessous d'une burette. On fait couler lacide sulfurique jusqu'au virage de la couleur du jaune clair au rose ple. On lit le volume de H2SO4 vers ncessaire pour la neutralisation. N (%) 0.014 0.1 V 100 P
V: volume de H2SO4 vers P : prise dessai en gramme 0,014 : correspond lacide sulfurique. 0,1 : normalit de H2SO4. N : lazote Protines (%)=N(%)6, 25
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Matriels et mthodes
6,25 : facteur de conversion pour les protines vgtales 3.2.4. La cellulose brute : Le principe: La teneur en cellulose brute des aliments est dtermine par la mthode conventionnelle : la mthode de Weende. Les matires cellulosiques constituent le rsidu organique obtenu aprs deux hydrolyses successives l'une en milieu acide, l'autre en milieu alcalin [Weende, 1809 selon les normes AFNOR, 1997]. Mode opratoire On prend 3g de lchantillon broy. Ensuite, on ajoute 200ml d'acide sulfurique (H2SO4 ; 0,225N). Le tout est mis dans un bain marie pendant 30mn une temprature de 100C. Une filtration est ralise laide de papier filtre. Aprs, on ajoute 200ml de NaOH (0,313N) linfiltrat et on poursuit lhydrolyse en le mettant toujours dans le bain marie pendant 30mn une temprature de 100C. Une deuxime filtration est faite. Un rinage du papier filtre est effectu afin de rcuprer toute la matire insoluble. Cette dernire est mise, dabord, dans l'tuve 105C jusqu' schage complet, puis pese (P1), ensuite dans le four moufle 600C pendant 1h puis pese (P2). La diffrence entre les deux poids reprsente la cellulose brute. Expression des rsultats : P1 P2 100 P0 p1:poids de la capsule aprs le schage (dessiccation) CB . (%) p2:poids de la capsule aprs incinration. p0:poids de l'chantillon de dpart. CB : Cellulose Brute
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Matriels et mthodes
3.2.5. Matire minrale MM : Principe: Cette mthode analytique est base sur l'incinration d'une prise d'essai dans une atmosphre oxydante une temprature suprieure 500C jusqu' combustion complte de la matire organique. Le rsidu obtenu exprime la teneur en cendres [Lafon et al., 1966]. Mode opratoire: Cinq grammes de la matire sche sont dposs dans un creuset (noter le poids total). Le tout est mis dans un four moufle 600C jusqu' obtention des cendres blanches, ce rsidu est enfin pes. Expression des rsultats: MM (%)= [(P3-P1) / (P2-P1)] x 100 P1: poids de creuset vide en gramme. P2: poids de creuset vide + prise d'essai en gramme avant incinration. P3: poids de creuset en gramme aprs incinration. MM: matire minrale. 3.2.6. Composs phnoliques: Principe: Ce test est bas sur la rduction de fer ferrique en fer ferreux par les tanins et d'autres polyphnols ce qui aboutit la formation d'un complexe ferreux-ferricyanide color. Ce produit est appel " bleu de prusse" qui absorbe 720nm [Martin et Larry, 1977]. Mode opratoire: Dans des tubes essais striles, on introduit 1 ml d'extrait vgtal et 3ml de la solution de FeCl3 (0.1M dans HCl 0.1N). Puis, on ajoute 3 ml de K3Fe(CN)6 (0.008N). Les tubes sont - 46 -
Matriels et mthodes
soigneusement agits. Aprs sjour de 1mn la temprature ambiante, les mesures d'absorbance (DO) sont effectues 720nm. Par ailleurs, le calibrage du spectrophotomtre se fait avec un blanc contenant 1ml d'eau distille, 3ml de FeCl3 et 3 ml de K3Fe (CN)6. Extraction: On suit le mme mode dextraction mentionn pour les sucres totaux. Expression des rsultats: Une courbe d'talonnage a t trace pour diffrentes concentrations d'acide gallique. A partir de cette courbe, on dtermine la concentration de notre chantillon en composs phnoliques par rapport la matire sche. CP (%MS) = [C x V / P] x 100. C: concentration en compos phnolique de l'extrait en (mg/ml). V: volume d'eau distille utilise en (ml). P: prise d'essai (mg). CP: composs phnoliques. %CP (%MF) = CP (%MS) x %MS /100 %MS: la teneur en matire sche en %. 3.2.7. Dosage des sels minraux (K, Na, Ca) par spectrophotomtre flamme : Principe: La photomtrie flamme repose sur le fait que tout atome situ un niveau nergtique dit excit met des radiations caractristiques en retournant l'tat fondamental. L'excitation des atomes se fait au moyen de la chaleur. La mesure est ralise sur une raie choisie o l'intensit est proportionnelle sa concentration [Salgarolo, 2003].
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Matriels et mthodes
Extraction: Dans des tubes essais. On introduit 0,5g des cendres blanches puis on ajoute 5ml de HCl pur. Bien agiter, puis laisser agir. Mode opratoire: Tout d'abord on doit rgler la flamme du spectrophotomtre qui doit tre bleu et on choisit le paramtre qu'on veut doser. Le calibrage du spectrophotomtre s'effectue avec l'eau distille. La lecture d'mission est ralise par mergement du capillaire dans la solution doser jusqu' la stabilisation d'mission. Expression des rsultats: Une courbe d'talonnage a t trace pour diffrentes concentrations de NaCl, KOH et CaCl2 respectivement pour le dosage de Na, K et Ca. A partir des ces courbes, on dtermine la concentration de nos chantillons en Na, K et Ca. Le pourcentage des sels minraux par rapport la matire sche est obtenu par la formule suivante: SM (%MS) = (C . V . P x 100)/ (P x m) C:concentration de llment minral en (g/l). V : volume de HCl en (l). P:Poids total des cendres en (g). m : prise d'essai de la plante en (g). P : prise d'essai des cendres (g). SM (%MF) = [%SM (%MS) x %MS]/ 100
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Matriels et mthodes
3.2.8. Dosages des sels minraux (Cr, Mn, Cu) par le spectrophotomtre multiparamtre spcifique d'ion HI 83 200 : Principe: L'analyse colorimtrique est base sur le principe que certains composants spcifiques ragissent avec d'autres par changement de couleur (raction colorimtrique). L'intensit du changement de couleur correspond directement la concentration de l'ion mesur [Manuel d'utilisation, 2004]. Mode opratoire: Tout d'abord, on choisit le paramtre qu'on veut doser en appuyant sur la touche approprie. Aprs, on introduit 10ml de solution qu'on veut doser dans une cuvette nettoye soigneusement et place dans le logement prvu cette effet, en respectant l'ergot d'alignement, puis en appuyant sur la touche "ZERO". Lorsque l'afficheur indique "0.0", on ajoute un sachet de ractif (chaque paramtre a son ractif spcifique) qui doit tre bien agit jusqu' dissolution complte. On place la cuvette dans le logement en respectant l'ergot d'alignement puis en appuyant sur la touche "TIMER". L'affichage de concentration apparait sur l'afficheur aprs un certain temps (ce temps varie d'un paramtre l'autre et l'unit de concentration change selon la gamme "Haute" ou "Basse". Expression des rsultats: Le pourcentage en sels minraux par rapport la matire sche est obtenu par la formule suivante: SM(%MS) = C.V.P.100 / P. m C: concentration de sel minral (g/l). V:volume de HCl (l). P: poids total des cendres (g). P:prise d'essai des cendres (g).
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Matriels et mthodes
m: la prise d'essai de la plante sche (g). SM: sel minral SM (%MF) = [SM(%MS) x (%MS)] / 100 4. Recherche de lactivit antidiabtique: La recherche de lactivit antidiabtique est effectue sur le rat wistar rendu diabtique par la streptozotocine. 4.1. Ractif biologique, rat wistar : Une grande partie de ce travail sest droule au niveau de l'animalerie de luniversit de Mascara, Facult SNV. La premire tape consiste l'levage des animaux dans le but d'obtenir un nombre important de rats mles Rattus norvegicus varit Wistar qui sont nourris par l'aliment de btail (ONAB). Afin de ne pas stresser l'animal, les animaux se trouvent dans des conditions constantes et contrles (temprature plus ou moins constante de 25C et un rythme nycthmral de 12h/12h). Les tests de lactivit antidiabtique de la plante en question sont effectus l'ge de 3 mois o les rats prsentent un poids entre 220 et 300g. De ce fait, llevage des animaux constitue ltape la plus longue. 4.2. Induction du diabte sucr : Le diabte sucr est induit chez le rat par injection intraveineuse de la streptozotocine "STZ" (S-0130 Sigma) raison de 50 mg/kg travers la veine de la queue [Babu et al., 2003]. La STZ est prpare dans du tampon citrate 100 mM, pH 4,5 une concentration de 50 mg/ml [Crouch et al., 1978]. Les rats maintenus jene pendant une nuit, sont anesthsis avec du chloral hydrat administr par voie intrapritonale une dose de 200 mg/kg [Calapai, 1999].
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Matriels et mthodes
Vue son instabilit en solution ainsi qu temprature ambiante, la STZ doit tre prpare juste avant linjection. Il est, donc, dconseill de conserver la solution mme basse temprature [Chen et Ianuzzo, 1981]. Aprs deux semaines d'injection de la STZ, linstallation du diabte sucr est vrifie chez les rats par lanalyse de la glycmie et de la glucosurie. Les animaux prsentant une glucosurie positive et une glycmie suprieure 1,6 g/l sont impliqus dans la prsente tude. 4.3. Rpartition des rats : Aprs linstallation du diabte chez les rats, ces derniers sont rpartis en diffrents groupes: Groupes des normaux tmoins, Groupes des normaux traits, Groupes des diabtiques tmoins, Groupes des Diabtiques traits. Lextrait aqueux brut de la partie arienne de Zygophyllum geslini ainsi que ses fractions sont testes. Cela a ncessit une priode plus prolonge en ralisant lexprimentation en stades, tout en conservant la mme distribution des groupes de rats. Les groupes tmoins ne reoivent pas de traitement par les extraits. En mme temps, les groupes traits reoivent quotidiennement diffrentes doses de lextrait correspondant. 4.4. Gavage des extraits vgtaux : La voie dadministration est la voie orale. A cet effet, le rsidu sec obtenu aprs extraction est solubilis dans la solution de tween 80 5%. Les groupes tmoins reoivent la solution de Tween 80 5%. La solubilisation de certains extraits est effectue l'aide d'un agitateur. Le gavage est ralis l'aide d'une sonde de gavage raison de 10ml/kg. La concentration prpare est en fonction de la dose choisie. En effet, une dose teste de EAB de 500mg/kg correspond une solution de concentration gale 500mg/10ml. Les doses testes des fractions, FA1, FB1, FA2, FB2, FAH, FA3 et FDM sont respectivement 300, 200, 75, 100, 200, 100 et 50mg/kg.
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Matriels et mthodes
4.5. Prlvement sanguin : Le prlvement du sang se fait sur l'animal vivant (sans anesthsie), maintenu jene pendant 16 h, par ponction dans le sinus rtro orbital l'aide d'une pipette pasteur pralablement rince avec l'anticoagulant EDTA 0,01%. Cette technique a t dcrire par Noller en 1955, et par Riley en 1960 [Laroche et Rousselet, 1990]. Le sang est rcupr dans des tubes hmolyse sans anticoagulant et centrifug 3000 tours/mn pendant 15mn une temprature de 4C. Aprs la centrifugation du sang, le srum obtenu est conserv dans des tubes eppendorf une temprature de -4C en vue de l'analyse des diffrents paramtres biochimiques. 4.6. Chronologie de lexprimentation animale: Les tests de lactivit antidiabtique sont effectus sur des rats Wistar rendus diabtiques aprs installation de la pathologie qui a ncessit une priode de deux semaines. Ce temps est ncessaire pour russir un tat dhyperglycmie chronique. Le traitement des animaux par les diffrents extraits stale sur une priode comprise entre deux et quatre semaines. A la fin de chaque exprimentation, un test de tolrance orale au glucose est effectu. Leffet de la fraction considre comme active sur le diabte est compar celui dune molcule antidiabtique, glimpiride. De plus, un suivi court terme de la glycmie ainsi que le test de lhyperglycmie provoque par voie intraveineuse sont ajouts. 4.7. Essais long terme : Aprs chaque semaine, le sang est prlev pour la dtermination de certains paramtres sriques. De plus, le poids des animaux a t pris. A la fin de lexprimentation, un test de tolrance orale au glucose est effectu. 4.7.1. Glycmie :
Le dosage du glucose srique est bas sur une technique enzymatique colorimtrique par Kit-Spinreact par la mthode de Trinder (1969). Le D-glucose est transform par la glucose oxydase en acide gluconique et en peroxyde dhydrogne lequel oxyde, en prsence de la - 52 -
Matriels et mthodes
peroxydase, le phnol en un complexe chromogne color en rouge dont labsorbance est mesure 505 nm. 4.7.2. Afin de Test de tolrance orale au glucose : vrifier lefficacit des extraits administrs durant les semaines
dexprimentation, un test de tolrance orale au glucose est fait et ce, par gavage de 3g/kg de glucose au rats des diffrents lots o la glycmie est suivie pendant 2 heures. 4.8. Test court terme :
Ce test est ralis, seulement, sur la fraction qui a prouv une bonne activit antidiabtique o nous avons suivi lvolution de la glycmie pendant trois heures. Quatre groupes de rats, diabtiques traits, normaux traits, normaux tmoins et diabtiques tmoins sont inclus dans ce test. Les deux premiers groupes sont traits par la fraction la plus active de lextrait brut aqueux la mme dose teste long terme. Nous devons prciser que ces groupes danimaux nont pas reu de traitement pralable. 4.9. Test de lhyperglycmie provoque par voie intrapritonale :
Chez deux groupes de rats normaux, nous avons provoqu un tat dhyperglycmie par injection intrapritonale de 3g/kg de glucose. Un des deux reoit une dose de lextrait, dont leffet est recherch, 1 heure avant le gavage du glucose. La glycmie est suivie pendant 2 heures. 4.10. Effet du Glimpiride :
Le glimpiride est un agent antidiabtique du groupe des sulfamides [Abletshauser et al., 2005]. Son effet sur la glycmie est compar celui de la fraction dite active. Dans cette tape, nous avons suivi le mme plan trac pour lvaluation des effets des extraits vgtaux ; induction du diabte, traitement long terme et le test de tolrance orale au glucose. La dose administre quotidiennement de glimpiride est 0,1mg/kg de poids corporel. 5. Recherche de lactivit antiradicalaire: Le DPPH (Diphenylpicrilhydrazyl) est, pratiquement, le radical libre le plus stable. En solution dans le mthanol, le DPPH est caractris par une couleur violette dont lintensit est mesure 515 nm. En prsence dun donneur dhydrogne, le DPPH est rduit la forme non - 53 -
Matriels et mthodes
radicalaire de couleur jaune ple. Ce passage, de la premire forme la deuxime, est accompagn dune diminution de labsorbance qui peut exprimer le pourcentage de rduction de DPPH [Snchez-Moreno et al., 1998] % DPPH rduit = [(DO contrle DO E) / DO contrle] 100 O : DO contrle est labsorbance du DPPH t0. DO E est labsorbance aprs avoir ajout lacide ascorbique (ou lextrait). Effectivement, on a recherch dventuelle efficacit antiradicalaire de la fraction la plus active. De ce fait, diffrentes concentrations de cette fraction ainsi que de lacide ascorbique ont t tudies. Par dfinition, une concentration de lacide ascorbique (extrait) qui peut rduire 50% du DPPH est dite EC50 (exprime en mg de substrat/g de DPPH). A 1 ml de la solution du DPPH 0,005 g/l (prpar dans du mthanol), on ajoute 1 ml de lchantillon tudier (lacide ascorbique ou la fraction active) pralablement solubilis dans le mthanol. La variation de labsorption est suivie en fonction du temps jusqu la stabilit [Molyneux, 2004]. 6. Etude statistique : Ltude statistique de comparaison entre les diffrents groupes de rats est ralise par un test de Student de distribution bilatrale et de type htroscdastique (type 3). Ce test nous donne le degr de signification P o la diffrence est significative si P < 0,05.
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Rsultats et interprtation
1. Etude phytochimique : 1.1.Phytochimie de la plante (partie arienne) : 1.1.1. Tests qualitatifs :
Le screening phytochimique ralis sur la partie arienne de Zygophyllum geslini nous a permis davoir les rsultats prsents au tableau 1. Tableau 1 : Tests phytochimiques raliss sur la partie arienne de Zygophyllum geslini Compos
Extrait aqueux
Test ralis sur

Extrait thanolique Extrait etherique
Mucilages Tanins Saponosides Tests 1 Strodes Triterpnodes Flavondes Glucosides cardiotoniques Coumarines Anthracnosides Alcaloides Test 1 Test 2 Amidon Anthraquinones Huiles volatiles Acides gras Emodols Acides amins + : Dtect - : Non dtect / : Non effectu
+ + + + + + +
/ + + +
/ + -
Test positif ralis sur la partie arienne humide + + + + / / / -
Test ralis sur la poudre de la partie arienne / / / + / / / / + + /
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La plante contient des mucilages qui sont dtects au niveau de lextrait aqueux. Lajout du FeCl3 aux trois extraits a permis de mettre en vidence la prsence des tanins au niveau de lextrait aqueux et thanolique et leur absence dans lextrait therique. Le Z. geslini est trs riche en saponosides. Les deux types sont prsents, ceux gnine triterpnique et ceux gnine strodique par lapparition de couleur violace fugace virant vers le vert. Les flavonodes sont faiblement prsents dans la partie arienne. Dautres mtabolites sont mis en vidence. Un rsultat positif de la raction de K ellerKiliani effectu sur lextrait aqueux et thanolique confirme la prsence des glucosides cardiotoniques. Lanalyse qualitative des coumarines permet dobserver les taches fluorescentes confirmant la prsence des coumarines. On note aussi la prsence des anthracnosides. Ainsi, nous avons constat lexistence des alcalodes sels au niveau de lextrait aqueux prouve par la formation de prcipit ainsi que lhuile volatile et les acides gras rvls par lobtention dun rsidu arme et un rsidu gras. La recherche des acides amins montre une richesse dans lextrait aqueux. La partie arienne de la plante est dpourvue damidon, danthraquinone et dmodols. La partie arienne de Zygophyllum geslini est trs riche en composs pouvant tre actifs. Nous pouvons conclure que leau est le solvant qui permet une bonne extraction des diffrentes familles de molcules chimiques. 1.1.2. Tests quantitatifs : Ces tests ont t effectus sur cinq chantillons prlevs de la mme zone de rcolte. Les rsultats obtenus sont rsums dans le tableau 2. Pour 100g de matire fraiche de la partie arienne, nous avons trouv plus de 63g deau. Cette teneur est plus ou moins leve. Elle est caractristique des plantes succulentes de la rgion dAdrar.
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Tableau 2 : teneurs en diffrentes matires organiques et inorganiques exprimes en % par rapport la matire fraiche estimes dans la partie arienne de Z. geslini Echan 1
Humidit Matire sche Sucres totaux Protines Celluloses brutes Composs phnoliques Matire minrale Na K Ca Cu Cr Mn
Echan 2 60,64 39,36 5,22 0,26 13,44 5,69 9,06 0,060 0,039 0,022 0,30 10-5 1,69 10-5 0,082 10-5
Echan 3 59,75 40,25 5,88 0,29 7,36 6,27 8,79 0,061 0,042 0,024 0,32 10-5 0 0
Echan 4 61,22 34,78 3,94 0,27 7,50 4,17 8,82 0,059 0,042 0,024 0,41 10-5 0 0
Echan 5 61,76 38,24 5,23 0,30 14,73 4,18 8,70 0,057 0,045 0,029 0,35 10-5 7,26 10-5 0
Moyenne 63,13 36,87 4,8 0,26 9,98 4,85 8,18 0,057 0,041 0,023 0,32 10-5 2,42 10-5 0,036 10-5
68,28 31,72 3,78 0,18 6,91 3,94 7,53 0,049 0,037 0,016 0,24 10-5 3,17 10-5 0,1 10-5
La matire fibrillaire (cellulose brute) occupe une place importante dans la composition de cette espce. Prs de 10g ont t analyss dans les chantillons tudis. La matire minrale ou cendres, prsente une teneur importante. Elle est du mme ordre que le taux des fibres. Ces minraux sont reprsents surtout par des lments tels que le Na (0,057g) et le K (0,041g). La plante, prcisment la partie tudie continent une teneur considrable en sucres. Le taux de 4,8g est trs important pour comprendre la physiologie de cette espce. Comme tout matriel biologique, la plante contient une quantit en protines. Cette dernire est faible et estime 0,26g dans 100g de matire fraiche. Cette quantit est certainement incluse dans la structure des cellules.
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Les composs phnoliques sont prsents en taux lev. Cela a t montr par les tests phytochimiques, par la mise en vidence de la prsence des flavonoides, tanins et autres. 1.2. Phytochime de lextrait aqueux brut et ses fractions : 1.2.1. Tests qualitatifs : Afin dexpliquer les effets de lEAB et ses fractions, il est trs important de suivre leur composition chimique. Lextrait aqueux est trs riche en composs pouvant avoir une activit antidiabtique. On note la prsence des mucilages, tanins, saponosides, flavonodes, glucosides cardiotoniques, alcalodes et acides amins. Lexistence de ces familles de composs est vrifie dans les fractions issues de EAB. Tableau 3 : Tests phytochimiques raliss sur lextrait aqueux brut (EAB) et ses fractions Rsultat EAB FA1 FB1 FA2 Compos Mucilages Tanins Saponosides Test 1 Strodes + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + FB2 FH FAH FA3 FDM
faible + + + + + + + + + + + + -
faible faible faible faible + faible + + + + + + + + + + + faible + +
Triterpnodes + Flavonodes Glucosides cardiotoniques Alcalodes Test 1 Test 2 Acides amins + + + + +
FA1 : fraction aqueuse 1 FB1 : fraction butanolique 1 FA2 : fraction aqueuse 2 FB2 : fraction butanolique 2
FH : fraction heptanique FAH : fraction aqueuse heptanique FA3 : fraction aqueuse 3 FDM : fraction dichloromthanique
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En observant attentivement le tableau 3, on peut remarquer la variabilit de la composition des diffrentes fractions. Pour les fractions FA1 et FB1, on observe lexistence des mmes familles de composs trouves dans EAB lexception des flavonodes qui sont absents dans toutes les fractions. Cela est expliqu par leur prsence en faible concentration dans EAB et leur dilution en fonction des fractionnements liquide-liquide. Pour les fractions FA2 et FB2 issues de FB1, on constate une diffrence au niveau des acides amins et des saponosides triterpniques qui ne sont prsents que dans FA2. En revanche, les glucosides cardiotoniques sont prsents dans FB2 et absents dans FA2. Cette dernire est moins riche en tanins. Aprs extraction heptanique de FA1, on a obtenu FH et FAH dont la composition est nettement diffrente. FAH est trs riche par rapport FH qui est dpourvue de tanins, saponosides, glucosides cardiotoniques, alcalodes et dacides amins. Ici, on doit faire la liaison entre la composition de FH et son effet sur le diabte sucr o on a test pendant une semaine la fraction FH chez des rats normaux et diabtiques raison de 20mg/kg administr quotidiennement. Si aucun effet positif sur lvolution de la glycmie na t observ, une chute importante de poids corporel des rats cette faible dose a t marque (rsultat non montr). Sur le tableau 3, on observe que le test 1 des saponosides est positif alors que les deux autres tests sont ngatifs ; comme le test 1 est une simple raction pour produire une mousse, il reste, donc, non spcifique et incomplet. Enfin, on peut dduire que FH contient une famille de composs non dfinie, probablement absente dans FAH et responsable de la toxicit de FH. FA3 et FDM sont les fractions filles de FAH aprs traitement par le dichloromthane. La fraction organique FDM est pauvre par rapport FA3. La fraction aqueuse est trs riche en molcules ; on marque la prsence de mucilages, tanins, saponosides, glucosides cardiotoniques, alcalodes et acides amins. Cette diffrence de composition des huit fractions issues de EAB montre que on a russi fractionner lextrait aqueux brut. Quon parle de la prsence des saponosides, par exemple, dans FA1 et FB1, on doit prciser quil sagit de la famille de molcules dont certaines sont prsentes dans FA1 et dautres dans FB1.
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Ce rsultat permet dattirer lattention sur les ides classiques qui dictent que lextraction dune famille de composs se fait par un solvant bien prcis, cest le cas du butanol qui est connu pour lextraction des saponosides. Pour lvaluation de lactivit biologique des plantes mdicinales, plusieurs auteurs soulignent limportance des essais bioguids, la chimie des extraits et leurs activits biologiques en parallle. 1.2.2. Tests quantitatifs : 1.2.2.1. Rendement dextraction : Lestimation des rendements de lextrait aqueux brut et de ses fractions est rsume dans le tableau 4. Les valeurs sont reprsentes en g par rapport 100g de plante sche (partie arienne). Tableau 4 : Rendement dextraction de lEAB et ses fractions (par rapport la plante sche) EAB Rendement (%) 26,33 FA1 16,23 FB1 8,33 FA2 / FB2 / FH 0,64 FAH 14,17 FA3 11,8 FDM 1,88
Le rendement en EAB, qui est le plus important, est de lordre de 26%. On remarque que celui des fractions aqueuses est toujours lev par rapport celui des fractions organiques. La fraction heptanique (FH) prsente le rendement le plus faible (0,64%). 1.2.2.2. Teneurs en composs phnoliques et sucres totaux : Le tableau 5 regroupe les teneurs estimes en composs phnoliques et sucres totaux de lextrait aqueux brut et ses fractions. Dans 100mg dEAB, on trouve 0,97mg de composs phnoliques et plus de 10mg de sucres totaux. EAB est donc riche en sucres totaux qui se trouvent sous forme de mucilages et surtout dhtrosides mis en vidence par les tests phytochimiques (tableau 3). La quantit des composs phnoliques dans les fractions tudies est denviron 1%. Par contre, les concentrations en sucres sont variables et importantes ; la fraction FA1 est la plus riche en sucres avec prs de 20% suivie de FDM (19%).
- 60 -
Tableau 5 : teneurs en composs phnoliques et sucres totaux dans EAB et ses fractions (mg/100mg dextrait)
EAB Composs phnoliques % Sucres totaux % 0,97 10,36
FA1 1,01 19,90
FB1 1,00 16,98
FAH 0,99 15,92
FDM 1,11 18,86
FA3 1,09 12,80
2. Recherche de la toxicit aigue de lextrait aqueux brut : Lextrait aqueux brut administr aux rats males Wistar de fortes doses de 1 ; 1,5 et 3 g/kg ne provoque ni effet toxique aigu, ni mortalit. Cela montre que lEAB ne prsente pas un risque de toxicit mme fortes doses. Pour lvaluation de lactivit antidiabtique, nous avons test la dose de 500mg/kg qui est six fois plus faible que 3g/kg, dose confirme sans toxicit aigue. Le risque de perte de lanimal durant les expriences est, donc, loign. 3. Evaluation de lactivit antidiabtique de Zygophyllum geslini : Les essais dvaluation de lactivit antidiabtique de EAB et ses fractions ont t raliss en plusieurs tapes afin de suivre lefficacit en fonction des extractions liquideliquide. Pour chaque essai, nous avons des lots prvus de rats normaux (sains) et diabtiques, traits et tmoins (non traits). Les rats sont rendus diabtiques par la STZ injecte par voie intraveineuse. Il faut attendre 15 jours pour confirmer linstallation de la pathologie chez lanimal. Lhyperglycmie rsultante tait variable dun animal lautre. 3.1.Evaluation des effets de lextrait aqueux brut (EAB) : 3.1.1. Effet sur la glycmie jeun : Aprs linstallation de lhyperglycmie, nous avons commenc le traitement par gavage de lextrait aqueux brut de Zygophyllum geslilni la dose de 500mg/Kg chez les rats traits. Les rsultats sont mentionns dans la figure 13.
- 61 -
4,5 4,0
Mort des rats

3,5
GLycmie (g/l)
3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 t0 sem1 sem2 sem3
Temps (semaine)
Diabetiques tmoins Diabetiques traits Normaux traits Normaux tmoins
Figure 13: Effet de lextrait aqueux brut (EAB) sur lvolution de la glycmie
Durant les 3 semaines, nous avons enregistr chez les rats diabtiques traits une diminution progressive de la glycmie partir de la 1resemaine. Elle varie de 3,65 1,62 g/l reprsentant plus de 17 % aprs une semaine et 51% la dernire semaine. Cette diminution est significative la fin dexprimentation. Pour les rats diabtiques non traits, ds la 2me semaine, la glycmie est re-augmente entrainant la mort de tous les rats de ce lot. En revanche, pour les rats normaux traits et tmoins, nous navons remarqu aucun changement significatif de la glycmie. Celle-ci reste dans les limites normales. 3.1.2. Effet sur le poids corporel : Au cours de toute la priode dexprimentation les rats ont t pess rgulirement. Lvolution du poids corporel est mentionne dans la figure 14.
- 62 -
Nous avons enregistr une diminution progressive du poids corporel chez les rats diabtiques tmoins (non traits) par rapport aux autres lots ainsi que leur mort aprs 3 semaines dexprimentation. Pour les rats diabtiques traits, nous avons observ une diminution du poids corporel aprs linjection de la STZ, puis une re-augmentation ds la 2me semaine du traitement jusqu' la fin dexprimentation. En revanche, aucun changement na t remarqu pour la croissance corporelle des rats normaux tmoins, alors quune faible variation du poids a t observe chez les rats normaux traits. Toutes ces observations restent statistiquement non significatives.
260
240
220
Poids (g)
200
180
160
Mort des rats
140
120 t0 sem1 sem2 sem3
Temps (semaine)
Diabetiques tmoins Diabetiques traits Normaux traits Normaux temoins
Figure 14: Effet de lextrait aqueux brut (EAB) sur lvolution du poids corporel.
- 63 -
3.1.3. Effet sur la tolrance orale au glucose : Ladministration de 3g/kg du glucose a provoqu chez les rats un tat dhyperglycmie. Les rsultats de ce test sont mentionns dans la figure 15. Une hyperglycmie est observe chez les deux groupes de rats une heure aprs gavage de la solution glucose. En parallle, une rgulation de la glycmie est observe aprs le pic. Ce qui est remarquable est lamlioration de cette rgulation chez les rats traits. En comparant la glycmie, point par point, aucune diffrence significative nest note. Par contre, la diminution de la glycmie des rats normaux traits du temps t1 (1h) jusqu'au temps t2 (2h) est trs significative.
2,4 2,2 2,0 1,8 1,6 1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 t0 1(h) 2(h)
Glycmie (g/l)
Temps (heure)
Normaux Tmoins Normaux traits
Figure 15: Effet de lextrait aqueux brut (EAB) sur la tolrance orale au glucose des rats normaux.
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3.1.4. Glycmie en pourcentage : Nous avons essay de reprsenter la diminution de la glycmie, pendant les trois semaines, sous forme de pourcentage par rapport la glycmie initiale. Pour les diabtiques traits, nous remarquons une diminution de la glycmie de lordre de 51% la troisime semaine, alors que celle des diabtiques tmoins est faible (13%). Sur les quatre lots dexprimentation, nous avons observ la mort des diabtiques tmoins la troisime semaine.
60
Pourcentage de diminutionde la glycmie
50
40
30
20
10
0 sem1 sem2 sem3
Temps (semaine)
Diabtiques Tmoins Diabtiques Traits
Figure 16: Effet de lextrait aqueux brut (EAB) sur la glycmie (% par rapport la glycmie initiale).
3.2. Evaluation des effets de FA1 (fraction aqueuse 1) et FB1 (fraction butanolique 1) : 3.2.1. Effet sur la glycmie jeun : Durant les deux semaines de traitement, nous avons observ une diminution de la glycmie des deux lots de diabtiques traits, par FA1 et FB1 (figure17). Cette variation est - 65 -
importante chez les diabtiques traits par FB1, une diminution hautement significative la 1re semaine. Mais nous pouvons remarquer qu la 2me semaine, les deux groupes ont des glycmies proches. A partir de ces rsultats, il semble que les deux extraits sont efficaces sur la glycmie jeun et que la fraction FB1 est plus efficace avec un effet montr ds la premire semaine. Pour les rats normaux, la glycmie reste, dans les limites, normale. Une lgre diminution est observe et qui reste statistiquement non significative.
4,5 4,0 3,5
Glycmie (g/m)
3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 t0 sem1 sem2
Temps (semaine)
Normaux Traits FB1 (200mg/Kg) Normaux non Traits Normaux Traits FA1 (300mg/Kg) Diabetiques Traits FB1 (200mg/Kg) Diabetiques non Traits Diabetiques Traits FA1 (300mg/Kg)
Figure 17: Effet de FA1 et FB1 sur lvolution de la glycmie
- 66 -
3.2.2. Effet sur le poids corporel : Nous remarquons que les diabtiques tmoins prsentent une diminution de la croissance (figure18). Par contre, cette chute de poids est corrige chez les rats traits par FA1 et FB1. La croissance est amliore chez les rats normaux traits par FA1.
280
260
240
Poids (Kg)
220
200
180
160 t0 sem1 sem2
Temps (semaine)
Normaux Traits FB1 (200 mg/Kg) Normaux non Trais Normaux Traits FA1 (300 mg/Kg) Diabtique Traits FB1 (200 mg/Kg) Diabtiques non Traits Diabtiques Traits FA1 (300 mg/Kg)
Figure 18: Effet de FA1 et FB1 sur lvolution du poids corporel
3.2.3. Effet sur la tolrance orale au glucose : Le schma de la variation de la glycmie des rats aprs une surcharge en glucose (figure 19) montre une amlioration de la rponse au glucose des rats diabtiques traits par FA1,. Par contre, ceux traits par FB1 prsentent une lvation importante de la glycmie aprs une heure. Cette augmentation est plus importante par rapport celle des diabtiques tmoins. De plus, la tolrance des rats normaux est amliore par FA1. - 67 -
A partir de ce test simple, nous pouvons conclure que la fraction FA1 pourrait agir positivement sur la glycmie post-prandiale contrairement FB1.
Glycmie (g/l)
0 t0 60mn 120mn
Temps (minute)
Diabtiques Traits FA1 (300mg/Kg) diabtiques non Traits Normaux Traits FB1 (200 mg/Kg) Normaux non Traits Diabtiques Traits FB1 (200 mg/Kg) Normaux Traits FA1 (300 mg/Kg)
Figure 19: Effet de FA1 et FB1 sur la tolrance orale au glucose 3.3.Evaluation des effets de FA2 (fraction aqueuse 2) et FB2 (fraction butanolique 2): 3.3.1. Effet sur la glycmie jeun : La figure 20 illustre llvation de la glycmie des rats tmoins et traits par FA2 et FB2. Le traitement dune semaine des rats diabtiques par 100mg/kg de la FB2 provoque une diminution de la glycmie alors quune re-augmentation est observe la 2me semaine. La fraction FA2 75mg/kg semble tre non efficace et sans influence sur la glycmie des rats diabtiques.
- 68 -
Chez les rats normaux, lvolution de la glycmie est normale et quaucune hypoglycmie na t provoque chez les normaux.
Glycmie (g/l)
0 t0 sem1 sem2
Temps (semaine)
Normaux non Traits Normaux Traits FB2 (100 mg/Kg) Normaux Traits FA2 (75 mg/Kg) Diabtiques Traits FB2 (100 mg/Kg) Diabtiques non Traits Diabtiques Traits FA2 (75 mg/Kg)
Figure 20: Effet de FA2 et FB2 sur lvolution de la glycmie
3.3.2. Effet sur le poids corporel : Sur la figure 21 qui reprsente lvolution du poids corporel des diffrents lots, nous remarquons une amlioration de la croissance des diabtiques traits par FB2 mais une altration de celle des normaux. Par contre, la fraction FA2 corrige la croissance des diabtiques et ninflue pas sur celle des normaux.
- 69 -
350
300
250
poids (g)
200
150
100
50
0 t0 sem1 sem2
Temps (semaine)
Normaux Traits FB2 (100 mg/Kg) Diabtiques non Traits Normaux Traits FA2 (75 mg/Kg) Diabtiques Traits FB2 (100 mg/Kg) Normaux non Traits Diabtiques Traits FA2 (75 mg/Kg)
Figure 21: Effet de FA2 et FB2 sur lvolution du poids corporel.
3.3.3. Effet sur la tolrance orale au glucose : La figure 22 rsume la rponse des rats une surcharge orale au glucose. La fraction FB2 qui a amlior la glycmie jeun des diabtiques, aprs une semaine de traitement, na pas deffet sur la tolrance au glucose ; la glycmie reste en constante augmentation. De mme, pour la fraction FA2, la rponse des diabtiques la surcharge en glucose est perturbe. A partir de ce rsultat, nous pouvons conclure que ces deux fractions aux doses testes ne sont pas efficaces sur la glycmie post-prandiale.
- 70 -
Glycmie (g/l)
0 0mn 60mn 120mn
Temps (minute)
Normaux Traits FA2 (200 mg/Kg) Normaux non Traits Diabtiques Traits FB2 (100 mg/Kg) Diabtiques non Traits Normaux Traits FB2 (100 mg/Kg) Diabtiques Traits FA2 (200 mg/kg)
Figure 22: Effet de FA2 et FB2 sur la tolrance orale au glucose.
3.4.Evaluation des effets de FAH (fraction aqueuse heptanique) : 3.4.1. Effet sur la glycmie jeun : Nous reprsentons sur la figure 23, lvolution de la glycmie durant les deux semaines de traitement. Les rats diabtiques traits par FAH prsentent une diminution importante ds la premire semaine de traitement et qui continue jusqu la 2 me semaine. Cette variation est statistiquement significative. Pour les diabtiques tmoins, la glycmie est en constante augmentation. Pour les rats normaux, le traitement par FAH provoque une lgre diminution de la glycmie qui reste dans ses valeurs normales.
- 71 -
Glycmie (g/l)
0 t0 sem1 sem2
Temps 'semaine)
Normaux non Traits Normaux Traits (200 mg/kg) Diabtiques non traits Diabtiques Traits (200 mg/Kg)
Figure 23: Effet de FAH sur lvolution de la glycmie
3.4.2. Effet sur le poids corporel : Les courbes illustres sur la figure 24, montrent une lgre diminution du poids corporel des diabtiques tmoins. Elle suit la mme variation que celle des normaux tmoins. Nous pouvons clairement remarquer la stabilit de la croissance des diabtiques traits par FAH, ce qui explique leffet positif de cette fraction sur la croissance des animaux. La fraction FAH nagit pas sur lvolution du poids des rats normaux. Ce rsultat montre que la fraction FAH na pas deffet ngatif sur la croissance des animaux.
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300
280
260
Poids (g)
240
220
200
180
160 t0 sem1 sem2
Temps (semaine)
Normaux non Traits Normaux Traits (200 mg/Kg) Diabtiques non Traits Diabtiques Traits (200 mg/Kg)
Figure 24: Effet de FAH sur lvolution du poids corporel.
3.4.3. Effet sur la tolrance orale au glucose : La rponse des animaux au glucose est schmatise sur la figure 25. Les diabtiques traits par FAH tolrent mieux le glucose. En observant attentivement lallure de la rponse au glucose de ce groupe, nous pouvons conclure leffet positif de cette fraction sur la tolrance au glucose. Une augmentation modre, aprs 1 heure, est rapidement corrige la deuxime heure. En parallle, la glycmie des diabtiques tmoins est en continuelle augmentation.
- 73 -
La rponse des rats normaux est habituelle ; une lgre augmentation avec une rgulation la deuxime heure.
Glycmie (g/l)
0 0mn 60mn 120mn
Temps (minute)
Normaux non Traits Normaux Traits (200 mg/Kg) Diabtiques Traits (200 mg/Kg) Diabtiques non Traits
Figure 25: Effet de FAH sur la tolrance orale au glucose.
3.5. Evaluation des effets de FA3 (fraction aqueuse 3) et FDM (fraction dichloromthanique): 3.5.1. Effet sur la glycmie jeun : Sur la figure 26, sont mentionnes les courbes dvolution de la glycmie des six groupes de rats. Les diabtiques traits par FDM ont une variation proche de celle des diabtiques tmoins. Cela montre que cette fraction, la dose teste, ne corrige pas lhyperglycmie provoque par la STZ. Par contre, un effet positif et hautement significatif de FA3 est not chez les diabtiques traits par cette fraction. Cet effet apparait ds la premire semaine et persiste jusqu la fin - 74 -
dexprimentation. La glycmie qui en rsulte est du mme ordre que celle des normaux. Elle atteint, la quatrime semaine, un niveau plus bas que les normaux non traits. Ce rsultat est intressant et reflte lefficacit de Z. geslini et spcialement celle de lextrait aqueux brut. Chez les normaux, quils soient traits par FDM ou par FA3, la variation est normale.
4,0 3,5 3,0
Glycmie (g/l)
2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 t0 sem1 sem2 sem3 sem4
Temps (semaine)
Normaux Traits FDM (50 mg/Kg) Diabtiques Traits FDM (50 mg/Kg) Normaux non Traits Diabtique non Traits Normaux Traits FA3 (100mg/Kg) Diabtiques Traits FA3 (100 mg/Kg)
Figure 26: Effet de FA3 et FDM sur lvolution de la glycmie
3.5.2. Effet sur le poids corporel : La croissance des diabtiques traits par FDM telle quelle est montre sur la figure 27, rvle une diminution progressive du poids corporel durant les semaines dexprimentation.
- 75 -
En revanche, lvolution du poids corporel des diabtiques traits par FA3 est constante durant les quatre semaines. La croissance des normaux traits par FDM est similaire celle des normaux tmoins. De mme pour les normaux traits par FA3 o la croissance est normale.
350
300
250
Poids (g)
200
150
100
50
0 t0 sem1 sem2 sem3 sem4
Temps (semaine)
Normaux Traits FDM (50 mg/Kg) Diabtiques Traits FDM (50 mg/Kg) Normaux non traits Diabtiques non Traits Normaux Traits FA3 (100 mg/kg) Diabtiques Traits FA3 (100 mg/Kg)
Figure 27: Effet de FA3 et FDM sur lvolution du poids corporel.
3.5.3. Effet sur la tolrance orale au glucose : Aprs une surcharge de 3g/kg de glucose, nous avons suivi la glycmie des animaux. Les rsultats sont illustrs sur la figure 28. Il est videmment remarquable que la rponse des diabtiques traits par FDM est perturbe. Elle suit la mme volution que celle des diabtiques tmoins. Cependant, une tolrance positive est enregistre chez les diabtiques traits par FA3. - 76 -
Glycmie (g/l)
0 0mn 60mn 120mn
Temps (minute)
Normaux Traits FDM (50 mg/Kg) Normaux non traits Normaux Traits FA3 (100 mg/Kg) Diabtiques Traits FDM (50 mg/Kg) Diabtique non Traits Diabtiques Traits FA3 (100 mg/Kg)
Figure 28: Effet de FA3 et FDM sur a tolrance orale au glucose. Chez les trois lots de rats normaux, la rponse au glucose reste physiologique avec une rgulation de la glycmie la deuxime heure. 4. Effet de FA3 court terme : Le schma de lvolution de la glycmie pendant 3 heures, illustr sur la figure 29, montre une diminution de la glycmie des diabtiques traits par 100mg/kg de FA3 partir de la 1 re heure. Cet effet est observ jusqu' la troisime heure o la glycmie diminue de 22% par rapport sa valeur initiale. Cette variation est statistiquement non significative. Par contre, chez les normaux, on observe une lgre augmentation de la glycmie suite au gavage de 100mg/kg de FA3.
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4 3,5
3 Glycmie (g/l)
2,5 2 1,5 1 0,5 0 T0 Diabtiques tmoins Normaux tmoins 60mn 120mn 180mn Temps (mn)
Diabtiques traits FA3 (100mg/kg) Normaux traits FA3 (100mg/kg)
Figure 29: Effet de FA3 (100mg/kg) sur lvolution de la glycmie pendant trois heures
5. Effet de FA3 sur lhyperglycmie provoque par voie intrapritonale : Sur la figure 30, nous avons rsum lvolution de lhyperglycmie provoque par voie intrapritonale. Il est clair que FA3 na pas corrig cet tat dhyperglycmie chez les rats normaux. Ce test qui reste incomplet car il est ralis seulement sur des rats normaux. Il devrait, galement, tre ralis sur des rats rendus diabtiques.
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1,8 1,6 1,4 Glycmie (g/l) 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 t0 60mn 120mn Temps (mn) Normaux traits FA3 (100mg/kg) Normaux tmoins
Figure 30: Effet de FA3 (100mg/kg) sur lvolution de lhyperglycmie provoque par voie intraprotonale
6. Comparaison des effets de FA3 avec ceux du glimipride : 6.1. Effet sur la glycmie jeune: A travers la srie dessais raliss, nous avons conclu que FA3 semble la plus efficace. A cet effet, nous avons compar ses effets sur le diabte avec ceux dun agent antidiabtique. La figure 31 schmatise leffet de FA3 et du Glimpiride sur la glycmie jeun. Le glimpiride 0,1mg/kg provoque une rduction significative de la glycmie la 2me semaine. Cependant, leffet de FA3 atteint un niveau de rduction significatif ds la 1re semaine. La glycmie des rats normaux reste dans lintervalle des valeurs normales. Il semble de ces rsultats que la fraction FA3 100mg/kg est plus efficace que le glimpiride 0,1mg/kg.
- 79 -
4 3,5 3 Glycmie (g/l) 2,5 2 1,5 1 0,5 0 t0 sem 1 sem 2 sem 3 sem 4 Temps (semaine)
Diabtiques tmoins Normaux tmoins Diabtiques traits glimpiride (0,1mg/kg)
Diabtiques traits FA3 (100mg/kg) Normaux traits FA3 (100mg/kg) Normaux traits glimpiride (0,1mg/kg)
Figure 31: Effet de FA3 et du glimpiride sur la glycmie jeun pendant les quatre semaines de suivi 6.2. Effet sur le poids corporel : La croissance des rats illustre sur la figure 32, montre une amlioration de la courbe du poids corporel des rats normaux traits par FA3. Celle des normaux traits par glimpiride est presque constante et sans variation notable. Lvolution du poids des diabtiques traits par FA3 est corrige la 4me semaine o celle des diabtiques traits par glimpirides est perturbe.
- 80 -
350
300
250 Poids (g) 200 150 100 50 0 t0 sem 1 sem 2 sem 3 sem 4 Temps (semaine)
Figure 32: Effet de FA3 et du glimpiride sur le poids corporel pendant les quatre semaines de suivi
6.3. Effet sur la tolrance orale au glucose : Ici, sur la figure 33, nous pouvons observer lcart entre les effets de glimpiride et de FA3. Cette dernire amliore significativement la rponse des rats la surcharge orale de glucose o la glycmie revient son niveau initial la 2me heure. La rponse des rats normaux est physiologique dont nous avons not une rapide correction du pic la deuxime heure.
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4,5 4 3,5 Glycmie (g/l) 3 2,5
2
1,5 1 0,5 0
T0
60mn
120mn
Temps (mn)
Figure 33: Effet de FA3 et du glimpiride sur la tolrance orale au glucose 7. Evaluation du pouvoir antiradicalaire de FA3 : Le pouvoir antioxydant dun extrait vgtal est un paramtre important pouvant avoir une forte relation avec lactivit antidiabtique. Cette proprit est value par diffrentes techniques dont celle du radical DPPH qui est trs utilise. La figure 34 trace la variation du pourcentage de rduction de DPPH en fonction des diffrentes concentrations utilises de FA3. A partir de cette courbe, nous pouvons tirer un seul paramtre qui est le EC50 qui est gal 30892,87 mg/g de DPPH ; valeur calcule graphiquement. Compare dautres valeurs, celle-ci est assez leve. Pour lacide ascorbique la valeur de EC50 est 123,94 mg/g.
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45
40 %de rduction de DPPH 35 30 25 20 15 10 5
y = 0,0016x + 0,5714 R = 0,997
0
0 10000 20000 30000 FA3 (mg/g de DPPH)
Figure 34: variation du pourcentage de rduction de DPPH en fonction de la concentration de FA3
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Discussion
Au cours des dernires dcennies, une attention particulire a cibl lutilisation des plantes mdicinales dans le traitement et le contrle du diabte sucr conformment aux recommandations de lOMS [Bnouham et al., 2002]. En Algrie, la recherche des plantes hypoglycmiantes a connu ces dernires annes un essor travers les enqutes ethnopharmacologiques et lvaluation scientifique de ces plantes. Un inventaire ralis en 2000 par Benmehdi, classe les plantes les plus utilises par la population tlemcenienne pour soigner le diabte sucr. Parmi elles, figure Zygophyllum geslini, objet de ce travail [Benmehdi, 2000]. Cette plante est connue sous le nom vernaculaire arabe Aggaya . Elle est utilise pour traiter le diabte sucr et les problmes digestifs. Dans la rgion dAdrar, cette espce est largement consomme comme condiment . Aussi, elle est utilise contre les affections de la peau et comme dsinfectant pour le nourrisson. Plusieurs espces du genre Zygophyllum partagent le nom de Aggaya telles que Z. album, Z. cornutum [Baba Assa, 1999], Z. gaetulum et Z. waterlot [Jouad et al., 2001 ; Eddouks, 2002] et Z. geslini, espce endmique dAlgrie [Ozenda, 1977]. Les travaux raliss sur cette dernire sont limits ceux de Smati et al. (2004) valuant leffet cytotoxique des racines de Z. geslini et lidentification dun triterpnode. Dans un travail antrieur, ralis dans le cadre de lobtention du diplme de magistre [Medjdoub, 2006], nous avons contribu lvaluation de lactivit antidiabtique de lextrait thanolique de la partie arienne de Z. geslini. La prsente tude constitue, donc, une suite au travail prcdent et ce, par lvaluation de lactivit antidiabtique de lextrait aqueux de la partie arienne de la mme plante. Les rsultats prliminaires nous ont permis de conclure que lextrait aqueux est plus efficace que lextrait thanolique. De ce fait, ceci nous a pouss ltude de lvaluation des effets antidiabtiques de lextrait aqueux et ses fractions extraites ainsi que la mise en vidence des diffrentes familles de composs chimiques prsents dans les extraits tests.
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Discussion
Phytochimie de la plante : Les tests phytochimiques raliss sur la partie arienne de Z. geslini montrent la prsence de saponosides, acides amins, tannins, alcalodes, glucosides cardiotoniques, mucilages, flavonodes, coumarines, anthracnosides, huile volatile et acides gras. De plus, nous avons estim plus de 63% le taux dhumidit, prs de 5% de sucres, 10% de cellulose et environ 5% de composs phnoliques. Ces teneurs ont t confirmes par les tests phytochimiques qui ont montr une richesse en mucilages et tannins. Les mucilages sont des polysaccharides htrognes comprenant du D-mannose dans leur structure [Bruneton, 1999]. Les sucres solubles peuvent assurer plusieurs fonctions pour la cellule vgtale dont certaines demeurent mal connues ; ils reprsentent une forme de stockage dnergie et ils sont des protecteurs contre la dsh ydratation du fait de leur pouvoir hydrophile. Aussi, ils rentrent dans la structure de certaines molcules comme les acides nucliques et les htrosides [Harbone, 1998]. Dans la cellule vgtale, les sucres sont les premires (et les seules) molcules formes par le systme de photosynthse et du fait, elles sont les prcurseurs de toutes les molcules existant dans la cellule [Bruneton, 1999]. Les sucres occupent, donc, une place capitale dans la physiologie du vgtal. Spcialement, les mucilages foliaires assurent plusieurs fonctions pour le vgtal ; ils interviennent dans les rponses aux blessures, linteraction hte-pathogne, le transport de leau et dans la rponse aux stress abiotiques [Ghanem et al., 2010]. Cela, pourrait expliquer la richesse de Z. geslini en mucilages surtout quelle fait partie des halophytes et quelle est expose aux stress biotique et abiotique. Ici, on peut citer lexemple des espces de Ziziphus (Z. mauritiana Lamk. et Z. rotundifolia Lamk.) qui tolrent la scheresse et qui sont riches en mucilages (7 10% par rapport au poids sec) [Clifford et al., 2002]. Les espces dAstragalus dont la majorit se dveloppe dans les rgions arides du monde sont, galement, riches en mucilages [Niknam et Salehi lisar, 2004] Les composs phnoliques constituent un groupe vaste de molcules dont font partie les tannins, les flavonodes, les coumarines, les anthraquinones, les phnols simples et les acides phnols. Dans ce modeste travail, nous avons confirm la richesse de Z. geslini en tannins. Ces derniers sont, dans certaines conditions, [Harbone, 1998]. des prcurseurs de flavonodes
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Discussion
La composition chimique dune plante reflte directement sa physiologie qui peut tre le rsultat dune adaptation un environnement. Pour discuter les teneurs en composs dtects dans Z. geslini, il faut, avant tout, maitriser les notions de physiologie vgtale. Phytochimie de lextrait aqueux brut : Les tests phytochimiques raliss sur la partie arienne montrent sa richesse en plusieurs composs pouvant tre lorigine des effets antihyperglycmiants trouvs au cours de cette tude. Lextrait aqueux, qui est laxe de cette contribution, contient la majorit de composs dcels dans la plante ce qui peut tre ardemment li avec son efficacit contre le diabte. Cet extrait est trs riche en saponosides, acides amins, tannins, alcalodes, glucosides cardiotoniques, mucilages et flavonodes. Les principes actifs antidiabtiques extraits des plantes sont de natures diffrentes. Dans le chapitre 3, nous avons cit plusieurs cas dont celui de Momordica charantia o il sagit de triterpnoides (Momordicosides) et de polypeptides [Garau et al., 2003 ; Leatherdale et al., 1981 ; Wang et al., 2008]. Trigonella foenum-graecum, une espce connue par ses vertus antidiabtiques tire cette proprit partir des alcalodes (Trigonelline) [Marles et Farnsworth, 1994 ; Dey et al., 2002] et les acides amins (4-hydroxyisoleucine) quelle en contient [Broca et al., 1999]. Les fruits de Blighia sapida contiennent des acides amins, cyclopropanodes nomms hypoglycine A et B et qui sont dous dune activit antidiabtique remarquable [Marles et Farnsworth, 1994]. Catharantus roseus, une autre espce anciennement connue en tant que plante antidiabtique, connait une valuation scientifique depuis 1920. Les principes actifs hypoglycmiants extraits de cette espce sont des alcalodes (catharantine, leurosine, lochnerine, tetrahydroalstonine, vindoline et vindolinine) [Marles et Farnsworth, 1994]. Aussi, les sels minraux sont un puissant antidiabtique. Chez Atriplex halimus, le chrome organique (Glucose Tolerance Factor: GTF) rgule la glycmie en potentialisant l'effet de l'insuline [Aharonson et al., 1969 ; Evans et Bowman, 1992]. En outre, le vanadium qui est connu avant la dcouverte de l'insuline est un insulinomimtique [Thompson et Godin, 1995] utilis pour le contrle de la glycmie [Dey et al., 2002]. - 86 -
Discussion
Les saponosides qui sont classs selon la gnine qui les constitue en deux types, les strodiens et les triterpniques [Bruneton, 1999], sont dous dactivit antidiabtique [Lacaille-Dubois et Wagner, 1996]. En plus des Momordicosides isols de Momordica charantia, cette plante contient une famille varie de saponosides (momordicine I, momordicine II, 3-hydroxycucurbita-5,24-dien-19-al-7,23-di-O--glucopyranoside, et kuguaglycoside G) responsable deffet antidiabtique [Keller et al., 2011]. Ici, nous pouvons ajouter les espces du genre Zygophyllum qui sont, gnralement, riches en saponosides. Plusieurs travaux ont permis disoler et didentifier diffrentes molcules de cette famille de composs. Nous pouvons citer, les htrosides dacide quinovique isols partir de Zygophyllum album [Hassanean et al., 1993], zygophyloside F de Z. album et Z. dumosum [Elgamal et al., 1995] ainsi que zygophyloside D et E isols partir de Z. propinquum [Ahmad et al., 1993]. Smati et al., ont isol le 3-(3.4- dihydroxycinnamoyl)-rythradiol partir de Z. geslini [Smati et al., 2004]. Le Zygophylle endmique du Maroc, Z. gaetulum, connu traditionnellement comme antidiabtique et dont cette proprit est value scientifiquement [Jaouhari et al., 1999; Jaouhari et al., 2000] est trs riche en zygophyloside N [Aquino et al., 2001]. Les flavonodes de Pterocarpus marcipium reprsents par lpicatechine
potentialisent leffet insulinoscrtagogue du glucose au niveau des cellules pancratiques [Marles et Farnsworth, 1994]. Lextrait aqueux brut de Z. geslini est trs riche en mucilages et qui sont prsents dans toutes les fractions qui en dcoulent. Les mucilages isols partir des graines du fenugrec additionns laliment du rat Wistar rendu diabtique, diminuent lactivit des disaccharidases intestinales [Kumar et al., 2005]. Dautres travaux rapportent leffet bnfique des mucilages sur le diabte [Mahmoud et al., 2008 ; Xue et al., 2007]. Cette proprit serait le rsultat de la composition de ces molcules dont il est connu, depuis plusieurs dcennies, quelles sont de nature polysaccharidique et contiennent des protines. Lanalyse des cendres qui en dcoulent montre la prsence du Calcium, Potassium, Fer, Phosphore et Magnsium [Anderson et Lowe, 1947 ; Woolfe et al., 1976]. Du point de vue composition, les travaux de Metaxatos et al. raliss sur des mucilages isols partir dalgues, montrent la structure en monosaccharides (glucose, galactose, xylose, fucose, mannose, rhamnose, arabinose et glucosamine). Aussi, 15 - 87 -
Discussion
acides amins (arginine, glutamine, acide aspartique, serine, lysine, glycine, thronine, alanine, tyrosine, mthionine, valine, phnylalanine, isoleucine, leucine et histidine ont t mis en vidence [Metaxatos et al., 2003]. galement, les drivs soufrs de la cystine dtects dans le genre dAllium (A. sativum et A. cepa) sont lorigine de lefficacit antidiabtique des plantes qui en contiennent. Ces composs sont des insulinomimtiques et agissent en comptition avec linsuline [Marles et Farnsworth, 1994 ; Dey et al., 2002]. Une autre hypothse concernant le mcanisme daction de ces molcules suppose quelles stimulent la scrtion dinsuline et agissent comme antioxydant [El-Demerdash et al., 2005]. Phytochimie des fractions de lextrait aqueux brut Z. geslini : Le fractionnement des extraits bruts par extraction liquide-liquide, utilisant des solvants de polarits diffrentes, est recommand afin de sparer les diffrents constituants. Cette tape prcde les analyses chromatographiques et spectroscopiques [Harbone, 1998]. De ce fait, lEAB est fractionn par une srie dextractions liquide-liquide o nous avons utilis, le butanol, lheptane et le dichloromthane. Ces solvants sont souvent employs dans les extractions liquide-liquide vue leur non miscibilit avec leau. Ces extractions sont bio-guids. En effet, les fractions obtenues sont soumises, en mme temps, aux tests phytochimiques et biologiques. En effectuant des examens phytochimiques sur les des diffrentes fractions, nous constatons une variation dans la composition. Les mucilages constituent la seule famille de composs prsente dans toutes les fractions. De plus, les saponosides, les glucosides cardiotoniques, les acides amins et les alcalodes sont prsents dans la majorit des fractions. Nanmoins, les tannins ne sont reprs que dans les premires fractions. Au dbut, nous avons choisi le butanol car il permet une bonne extraction des saponosides [Bruneton, 1999] surtout que lEAB en est trs riche. Cependant, les tests phytochimiques montrent que ces composs se trouvent dans les deux fractions qui dcoulent de ce premier fractionnement (FA1 et FB1). Nous avons pu conclure quil sagit de molcules diffrentes ; cest un fractionnement de la mme famille chimique et non pas par famille chimique. - 88 -
Discussion
Lexemple des saponosides peut expliquer la prsence des mmes familles chimiques dans les fractions issues de la mme extraction. Face ces rsultats, nous pouvons se rfrer aux techniques modernes qui recommandent un bio-guidage des essais phytochimiques doivent tre bio-guids [Touitou, 2007]. Plus loin, nous avons discut les rsultats de lactivit antidiabtiques o il ressort que FAH et FA3 sont les fractions les plus actives vis--vis le diabte. Ces deux fractions sont riches en, mucilages, saponosides, glucosides cardiotoniques, alcalodes et acides amins. Plus haut, il est rapport que ces familles chimiques peuvent avoir des effets bnfiques sur le diabte sucr. Activit antidiabtique : La discussion du mode opratoire est souvent nglige malgr son importance capitale. Le choix de la plante, la voie dadministration, le diabte induit ainsi que les paramtres suivis sont des points essentiels fixer afin davoir des rsultats discutables. Dans le chapitre 3, nous avons discut les diffrents modles exprimentaux du diabte o la STZ est trs utilise pour son induction [Anderson et al., 1974]. Cette toxine dtruit les cellules pancratiques dont le premier effet est un tat dhyperglycmie qui peut tre, transitoire ou chronique [Junod et al., 1969]. Les autres effets de la STZ sont peu discuts ; des tudes in vitro montrent son effet lipolytique sur les adipocytes isols [Szkudelski et Szkudelska, 2002]. Dans cette approche, nous avons fix comme objectif ltude de lactivit antidiabtique des fractions de lextrait aqueux brut en suivant lvolution de la glycmie jeun et la rponse des animaux une surcharge orale de glucose. Ces deux paramtres sont les plus recherchs dans la thrapie du diabte sucr. Cette dernire est base sur linsuline et les antidiabtiques oraux (ADO) qui sont reprsents par les sulfamides, les biguanides, les inhibiteurs des alpha-glucosidases et autres. Pour ces classes de mdicaments, on discute principalement les effets sur le pancras (insulinoscrtion), sur le foie (mtabolisme glucidique) et sur les intestins (absorption des sucres). Ceci est rsum en deux mcanismes, jeun et post-prandial [Touitou, 2007 ; Bloomgarden, 2004 ; Malher et Alder, 1998].
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Discussion
Actuellement, plusieurs stratgies thrapeutiques sont focalises sur : 1) la rduction de la production excessive du glucose par le foie, 2) laugmentation de la scrtion dinsuline stimule par le glucose, 3) lamlioration de la sensibilit des cellules linsuline [Wagner, 2002]. La dose teste de EAB est la mme que celle de lextrait thanolique (test antrieurement) afin de pouvoir comparer entre les deux extraits dont il semble que EAB est plus efficace sur le diabte. Pour les fractions de EAB, les doses sont choisies en fonction du rendement dextraction ; une dose est faible quand son rendement est fable et vice versa. Activit antidiabtique de lextrait aqueux brut : LEAB est dou dune activit antihyperglycmiante remarquable. Chez les normaux, il amliore la tolrance orale au glucose. De plus, il ne prsente aucun risque de toxicit aigue. Ces constatations expriment des effets positifs, jeun et post-prandial, qui pourraient tre expliques par des mcanismes diffrents niveaux. Dune part, les substances de EAB semblent stimuler la scrtion de linsuline. Cette hypothse est argumente par leffet positif observ aprs une surcharge de glucose. Ce test simple reflte la physiologie de la scrtion dinsuline dont il est connu que la prsence des aliments dans la lumire intestinale stimule les entrocytes librer le Glucagon like peptide1 (GLP-1) et le Glucose-dependent insulinotropic peptide (GIP). Ces hormones intestinales provoquent la scrtion de linsuline glucose-dpendante et inhibent la scrtion du glucagon [Baggio et Drucker, 2004 ; Brubaker et Drucker, 2004]. Ce travail prliminaire met en vidence certaines hypothses qui doivent, dans le futur, tre prises en considration. LEAB semble potentialiser leffet insulinoscrtagogue des GLP-1 et GIP ou il stimule directement la scrtion dinsuline. Cet ventuel mcanisme est proche de celui des sulfamides hypoglycmiants qui se fixent sur un rcepteur spcifique au niveau des cellules et stimulent directement la scrtion dinsuline [Bloomgarden, 2004 ; Malher et Alder, 1998]. La metformine, un agent antidiabtique, diminue lhyperglycmie en potentialisant leffet insulinoscrtagogue du GLP-1 [Bloomgarden, 2004] (*).
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Discussion
Dautre part, lEAB amliore lhyperglycmie jeun rsultante des effets toxiques de la STZ. Cela pourrait tre le rsultat dune potentialisation des effets dinsuline ou dun insulino-mimtisme. La pharmacologie indexe des mdicaments antidiabtiques qui agissent en potentialisant les effets de linsuline dont on connait principalement la classe des biguanides reprsents par la metformine [Lllmann et al., 1998]. Cette dernire permet de normaliser un niveau trop lev de glucose en prsence dinsuline. Elle inhibe la noglucogense [Bloomgarden, 2004] et la glycognolyse [Malher et Alder, 1998]. Pour soutenir cette dernire hypothse, nous pouvons ajouter lexemple des thiazolidinediones, une nouvelle classe dagents antidiabtiques. Ces principes actifs sont des potentialisateurs dinsuline puissants. En se fixant sur le PPARs (Peroxisome proliferatoractivated receptors), ils agissent sur les adipocytes o ils contribuent trois effets : 1) potentialiser leffet de linsuline sur le stockage et le mtabolisme des acides gras libres, 2) induire la production des adipocytokines (Adiponectine, leptine) augmentant la sensibilit des cellules (Muscle et foie) linsuline[Kurlawalla-Martinez et al., 2005], 3) diminuer la production des facteurs induisant linsulinorsistance tels que le TNF (Tumor necrosis factor alpha) et la rsistine [Wagner, 2002]. A cot des thiazolidinediones, le vanadium est connu pour ses vertus antidiabtiques, bien avant la dcouverte de linsuline ; cest un insulinomimtique [Dey et al., 2002]. Paeda et al. ont montr lactivit insulinomimtique dun compos isol partir des graines de Lathyrus sativum. Ce compos nomm GPI (Glycosyl-phosphatidylinositol) a des proprits chromatographiques et hydrolytiques similaires celles du GIP isol des hpatocytes du rat [Paeda et al., 2001]. Le GPI est impliqu dans la transduction des signaux de plusieurs hormones par la libration de molcules dinositolphosphate glycane (IPG) comme second messager [Bogdanowicz et Pujol, 2001]. Le L-783,281 est un insulinomimtique dorigine fongique. Il induit lactivation des rcepteurs dinsuline activit tyrosine kinase aboutissant aux effets de linsuline [Roper et al., 2002 ; Qureshi et al., 2000].
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Discussion
Activit antidiabtique des fractions de lextrait aqueux brut : Lextrait aqueux est un mlange complexe dont le principe actif responsable de lactivit antidiabtique peut tre soit une molcule soit une combinaison de substances. De ce fait, nous avons procd au fractionnement afin de cibler la fraction la plus active contenant le moins de composs. La fraction est dite active quand elle exerce les deux effets positifs ; la rgulation de lhyperglycmie jeun et lamlioration de la tolrance orale au glucose (voir tableau 1, Annexe 1). Activit antidiabtique de FA1 et FB1 :
Il ressort des rsultats obtenus que FA1 amliore la tolrance orale au glucose et diminue lhyperglycmie jeun alors que FB1 agit seulement sur la glycmie jeun. Nous pouvons, videment, constater que FA1 est plus active que FB1. Pour expliquer les effets bnfiques de FA1, nous proposons le mme mcanisme suggr pour lextrait aqueux brut. Pour FB1, leffet est observ sur lhyperglycmie jeun qui est le rsultat dune production hpatique de glucose par deux phnomnes importants, la noglucogense et la glycognolyse [Wright et al., 1980]. Il est donc possible que FB1 inhibe ces deux ractions biochimiques aboutissant la diminution de lhyperglycmie jeun. FB1 est une fraction de molcules solubles dans le butanol et peuvent fortement tre liposolubles. Cette proprit peut confrer ces molcules la possibilit de traverser la membrane plasmique des hpatocytes. A lintrieur des cellules, les molcules peuvent ragir avec les enzymes (inhibition) intervenant dans le mtabolisme glucidique (noglucogense et glycognolyse). Un autre mcanisme est lantagonisme du glucagon sur son rcepteur conduisant linhibition des effets biologiques de cette hormone h yperglycmiante. Actuellement, les molcules diminuant la vitesse de la libration hpatique du glucose, par des mcanismes molculaires variables, sont trs recherches [Wagner, 2002].
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Discussion
Activit antidiabtique de FA2 et FB2 :
Leffet de FA2 nest pas notable et peut tre nglig. Cependant, celui de FB2 est not seulement sur la glycmie jeun. Cela montre que nous avons pu fractionner FB1 et obtenir une fraction active ; cest FB2. Celle-ci a reproduit les mmes effets que FB1. Le mcanisme molculaire probable est celui suppos pour FB1. Activit antidiabtique de FAH : FAH est une fraction issue de FA1. Elle agit positivement sur lhyperglycmie jeun et sur la tolrance orale au glucose. Ces effets sont semblables ceux de FA1. Ces rsultats peuvent avoir les mmes explications proposes pour lextrait aqueux brut. Ce rsultat est trs intressant et nous a pouss poursuivre le fractionnement de FAH par le dichloromthane. Activit antidiabtique de FA3 et FDM :
FA3 et FDM sont les fractions de FAH dont FDM na pas deffets sur le diabte nanmoins FA3 est la fraction la plus active dans cette tude. Elle amliore la tolrance orale au glucose et diminue, voire normaliser la glycmie jeun. Ces effets positifs peuvent avoir tous les ventuels mcanismes proposs prcdemment, savoir : diminution de linsulinorsistance et linsulinomimtisme, diminution de la production hpatique du glucose ainsi que la stimulation de la scrtion dinsuline. Nous pouvons proposer un autre mcanisme reprsent par la prolifration des cellules . Il est possible que FA3 favorise la prolifration et la rgnration des cellules . En effet, aprs avoir interrompu le traitement par FA3 pendant une semaine, aucune augmentation de la glycmie jeun na t observe. En plus des hormones intestinales, GIP et GLP-1, qui stimulent la scrtion dinsuline, une troisime hormone intestinale, GLP-2 (Glucagon-like peptide 2) est responsable de la prolifration des cellules pancratiques [Baggio et Drucker, 2004]. A cot de ce mdiateur, une autre hormone gastrique, gastrine, module la croissance des cellules pancratiques. - 93 -
Discussion
Ladministration de la gastrine chez le rat trait par lalloxane induit la rgnration des cellules pancratiques. Cette hormone augmente la masse des cellules [Brubaker et Drucker, 2004]. Les molcules prsentes dans FA3 peuvent exercer un effet similaire ces hormones prolifratives. Effet de FA3 sur lvolution de la glycmie pendant 3 heures :
Ce test, si simple, vient confirmer le mcanisme propos o lextrait (FA3) inhibe la production hpatique de glucose. Effet de FA3 sur lhyperglycmie provoque par voie intrapritonale :
Quand le glucose est administr par voie orale, la stimulation de la scrtion dinsuline est plus importante que par voie parentrale (injectable). Le contact du glucose avec les cellules intestinales provoque la libration des incrtines intestinales (GIP et GLP-1) qui potentialisent leffet insulinoscrtagogue du glucose [Baggio et Drucker, 2004 ; Wright et al., 1980]. Pour le test de lhyperglycmie provoque par voie intrapritonale, la fraction FA3 na pas corrig cet tat. Lefficacit de FA3 est marque quand le glucose est administr par voie orale. Cela nous amne accepter lhypothse suggre plus haut (paragraphe(*)) et qui suppose que FA3 potentialise les effets des GIP et GLP-1. Par consquent, une autre hypothse sera moins accepte parlant dinsulinomimtisme. Comparaison des effets de FA3 avec ceux du glimipride :
Le glimpiride est un sulfamide hypoglycmiant [Derosa et Salvadeo, 2009]. Grace ses proprits pharmacocintiques et pharmacodynamiques, ce principe actif est administr en monodose journalire [Campbell, 1998]. Il stimule la scrtion dinsuline en se fixant sur un rcepteur spcifique au niveau des cellules ; cest le seul sulfamide qui peut sinternaliser lintrieur de la cellule [Derosa et Salvadeo, 2009]. Les sulfamides sont, gnralement, non prescrits pour les patients souffrant de complications cardio-vasculaires alors que le glimpiride chappe de cette classification o il peut amliorer certaines perturbations aggravant ces complications [Overkamp et al., 2002]. Une autre action du glimpiride est postpancratique o il potentialise leffet de linsuline [Hribal et al., 2001].
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Discussion
Les rsultats obtenus montrent que les effets de FA3 sur lhyperglycmie jeun et sur la tolrance orale au glucose sont meilleurs que ceux du glimpiride. Cela peut tre d la dose du glimpiride qui semble insuffisante sachant quelle est comprise entre 1 et 8mg/jour chez le patient diabtique. En rsum : Nous avons pu obtenir une fraction (FA3) de lextrait aqueux brut qui est efficace sur le diabte induit chez le rat par la streptozotocine. Le mcanisme par lequel agissent les (la) molcules contenues dans cette fraction reste rechercher. Trois effets, directs ou indirects, sont possibles : stimulation de la scrtion dinsuline, potentialisation des effets de linsuline ou rgnration des cellules . La fraction FA3 contient plusieurs composs, mucilages, tanins, saponosides, glucosides cardiotoniques, alcalodes et acides amins. Lactivit antidiabtique pourrait tre attribue lun ou une combinaison de molcules.
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Conclusion gnrale
A la fin de ce travail, nous pouvons conclure que Zygophyllum geslini, prcisment, lextrait aqueux brut de la partie arienne est dou dune activit antidiabtique trs remarquable. Cet extrait diminue lhyperglycmie chronique provoque par la streptozotocine et amliore les perturbations de la tolrance orale au glucose. De plus cet extrait ne provoque aucune mortalit, mme fortes doses. La mise en vidence des familles chimiques existant dans cet extrait montre une richesse en plusieurs composs tels que, les saponosides, les mucilages, les tannins, les acides amins, les glucosides cardiotoniques, les alcalodes et les flavonodes. Pour cela, le fractionnement de ce mlange qui nous a paru ncessaire nous a permis dobtenir huit fractions. La phytochimie des fractions de lextrait aqueux brut rvle une composition variable. Les mucilages constituent la seule famille de composs prsente dans toutes les fractions. De plus, les saponosides, les glucosides cardiotoniques, les acides amins et les alcalodes sont prsents dans la majorit des fractions. Nanmoins, les tannins ne sont reprs que dans les premires fractions. Lactivit antidiabtique des fractions obtenues montre que la fraction aqueuse, dite FA3, issue de lextrait brut aprs traitement par le butanol suivi de lheptane et le dichloromthane est la plus active et reproduit les mmes effets de lextrait brut. Nous avons propos plusieurs mcanismes daction dont le plus accept est celui potentialisant les effets des incretines intestinales GIP, GLP-1 et GLP-2. Ces dernires stimulent la scrtion dinsuline et rgnrent les cellules pancratiques. Comme perspective, nous envisageons une purification plus pousse de cette fraction afin de cibler la ou les molcules actives vis--vis le diabte sucr dans le but de les classer parmi les principes actifs antidiabtiques. Par la suite, le ou les mcanismes daction seront recherchs et les ventuels effets secondaires seront valus. A cot des effets positifs de FA3, dautres fractions ont montr un effet non ngligeable sur le diabte et peuvent tre testes dune autre manire en variant certains paramtres tels que la dose administre aux rats. Dautre part, une purification de ces fractions savrerait indispensable.
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Rfrences bibliographiques
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Annexes
Annexe 1 : rsultats de lextrait aqueux brut de Zygophyllum geslini
Tableau 1 : rsultat rsumant les effets des fractions de EAB sur la glycmie jeun et la tolrance orale au glucose
Effet sur Glycmie jeun Fraction FA1 (300mg/kg) FB1 (200mg/kg) FA2 (75mg/kg) FB2 (100mg/kg) FAH (200mg/kg) FH (20mg/kg) FA3 (100mg/kg) FDM (50mg/kg) + + + + Tolrance orale au glucose + +
Effet ngatif avec toxicit (rsultat non montr) + + -
+ : effet positif - : pas deffet
Annexes
Annexe 1 : rsultats de lextrait thanolique brut de Zygophyllum geslini
Toxicit de lextrait thanolique : Sept doses de lextrait thanolique ont t testes sur des lots de 4 rats. Les doses sont : 0,45 ; 0,9 ; 1 ; 11 ; 12 ; 15 ; et 19 g/kg administres par voie orale. Daprs les rsultats obtenus, aucune toxicit na t remarque. Evolution de la glycmie pendant les 5 semaines :
8,00
(A)
Glycmie (g/l)
4,00
0,00 0 1 2 3 4 5 Te mps (se maine )
300
(B)
Poids (g)
200
100 0 1 2 3 4 5 Te mps (se maine )
No rmaux tmo ins
No rmaux traits
Diabtiques tmo ins
Diabtiques traits
Figure 01 : Evolution de la glycmie (A) et du poids (B) des rats normaux et

diabtiques traits et tmoins durant les cinq semaines de traitement par 500 mg/kg dextrait thanolique.
Annexes
Glycmie (g/l)
2,40 2,00 1,60 1,20 0,80 0,40 0,00 0 30 60 90 120 Temps (mn)
Normaux tmoins
Normaux traits pralablement
Figure 02 : Test de tolrance chez des rats normaux traits 1 heure (par 1 g/kg de lextrait thanolique) avant gavage de 3 g/kg de glucose.
4,50
**
Glycmie (g/l)
3,50 2,50
* ****
1,50 0,50 0 1 2
3 5
Tem ps (heure)
No rmaux tmo ins
No rmaux traits
Diabtiques tmo ins
Diabtiques traits
Figure 03 : Evolution de la glycmie des rats suivis 7 heures aprs gavage (ou non) de 1 g/kg dextrait thanolique. * La signification de la diffrence entre les diabtiques tmoins et les traits. La signification de la diffrence entre les diabtiques tmoins et les traits.
Annexes
Figure 04 : structure du glimpiride
Figure 05: Photo de Zygophyllum geslini de la rgion dAdrar
. . . ) ( . ) ( . . / 00 : / 000 . : . ) 2( . . :
Le diabte sucr est une maladie trs frquente dans le monde entier. Il est trait par linsuline et les antidiabtiques oraux qui peuvent causer des effets secondaires graves. Pour cette raison et vu leur indisponibilit dans certains cas, les diabtiques se soignent par les plantes mdicinales. Le prsent travail a pour objectif lvaluation de lactivit antidiabtique de Zygophyllum geslini, une herbe trs utilise contre le diabte sucr. Nous avons tudi la partie arienne qui a t utilise pour prparer un extrait aqueux brut (EAB). Cet extrait subit une srie de fractionnements liquide-liquide. EAB et les fractions qui en dcoulent, soumises au fur et mesure ltude phytohimique, sont tests pour leur activit antidiabtique sur le rat wistar rendu diabtique par la streptozotocine la dose de 50mg/kg. Les rsultats montrent la prsence de plusieurs familles chimiques dans EAB qui sont, les mucilages, les tannins, les saponosides, les acides amins, les flavonoides, les glucosides cardiotoniques et les alcalodes. EAB 500mg/kg rduit significativement lhyperglycmie jeun et amliore la tolrance orale des rats au glucose. Les effets des sept fractions de EAB ainsi que leur composition sont variables. Aux doses testes, trois fractions ont montr une action positive sur lhyperglycmie jeun et sur la tolrance orale au glucose, deux agissent seulement sur lhyperglycmie jeun alors que les deux restantes nont pas deffets sur le diabte. Il est videment clair que Zygophyllum geslini, prcisment EAB rgule certaines perturbations du diabte. Cette proprit est conserve dans les fractions prpares. Il sera, donc, crucial de choisir la fraction la plus active pour poursuivre le fractionnement chimique et lvaluation de lactivit antidiabtique. Mots cls : Zygophyllum geslini, Extrait aqueux, streptozotocine, fractionnent liquide-liquide, phytochimie
Diabetes mellitus is a very common disease in the world. It is treated by insulin and oral antidiabetic agents that can cause serious side effects. For this reason and because of their unavailability in some cases, diabetes is cured by herbs. This work aims to evaluate the antidiabetic activity of Zygophyllum geslini, an herb widely used against diabetes mellitus. We studied the aerial part that was used to prepare a crude aqueous extract (CAE). This extract undergoes a series of liquid-liquid fractionation. CAE and fractions derived there from, subject to the phytohemical study were tested for their antidiabetic activity in 50mg/kg streptozotocin induced-diabetic Wistar rats. The results show the presence of several chemical compounds in CAE, mucilages, tanins, saponins, amino acids, flavonoids, cardiac glycosides and alkaloids. CAE at 500mg/kg significantly reduces fasting hyperglycemia and improves oral glucose tolerance in rats. The effects of the seven fractions of CAE and their composition are various. At the tested doses, three fractions showed a positive effect on fasting hyperglycemia and the oral glucose tolerance, two act only on fasting hyperglycemia, while the remaining have no effects on diabetes. It is obviously clear that Zygophyllum geslini precisely CAE regulates certain disturbances of diabetes. This property is maintained in the prepared fractions. It is, therefore, crucial to choose the most active fraction for further chemical fractionation and evaluation of the antidiabetic activity. Keywords: Zygophyllum geslini, aqueous extract, streptozotocin, liquid-liquid fractionation, phytochemistry

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REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE MINISTERE DE LENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE UNIVERSITE ABOU BEKR BELKAID FACULTE DES

SCIENCES DE LA NATURE ET DE LA VIE ET SCIENCES DE LA TERRE ET DE LUNIVERS DEPARTEMENT DE BIOLOGIE

LABORATOIRE DE RECHERCHE SUR LES SUBSTANCES NATURELLES ET BIOACTIVES (LASNABIO)

Prsente par : Melle MEDJDOUB Houria

Mme ATIK BEKKARA F. M. TABTI B. M. SELLES C. M. PAOLINI J. M. DJAZIRI R. M. BEGHALIA M.

Prsidente de jury Directeur de Thse Co-directeur de thse Examinateur Examinateur Examinateur

Anne universitaire : 2012-2013

A mes chers parents

Keywords: Zygophyllum geslini, aqueous extract, streptozotocin, liquid-liquid fractionation, phytochemistry

Liste des figures

Liste des abrviations

Liste des units

Gnralits sur le diabte sucr

Gnralits sur le diabte sucr

Gnralits sur le diabte sucr

Gnralits sur le diabte sucr

Gnralits sur le diabte sucr

Figure 1 : structure des sulfamides (carbutamide et glibenclamide) [Anonyme 01, 2008].

Gnralits sur le diabte sucr

Figure 3: structure des biguanides [Keen et Jarrett, 1968]

Gnralits sur le diabte sucr

Gnralits sur le diabte sucr

Figure 4: structure des thiazolidindiones [Anonyme 01, 2008]

Gnralits sur le diabte sucr

Gnralits sur le diabte sucr

3.1.5. Les inhibiteurs des alpha glucosidases intestinales :

Figure 5: structure de lacarbose [Anonyme 01, 2008]

Gnralits sur le diabte sucr

La plante mdicinale, une usine de produits actifs

La plante mdicinale, une usine de produits actifs

La plante mdicinale, une usine de produits actifs

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La plante mdicinale, une usine de produits actifs

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La plante mdicinale, une usine de produits actifs

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Figure 9 : 3-(3.4- dihydroxycinnamoyl)-rythradiol

Mthodes dtude de lactivit antidiabtique des plantes

Mthodes dtude de lactivit antidiabtique des plantes

Mthodes dtude de lactivit antidiabtique des plantes

Mthodes dtude de lactivit antidiabtique des plantes

Mthodes dtude de lactivit antidiabtique des plantes

Figure 10: Streptozotocine - 29 -

Mthodes dtude de lactivit antidiabtique des plantes

Mthodes dtude de lactivit antidiabtique des plantes

Mthodes dtude de lactivit antidiabtique des plantes

Mthodes dtude de lactivit antidiabtique des plantes

Mthodes dtude de lactivit antidiabtique des plantes

Partie arienne broye

Extrait aqueux brut

Fraction aqueuse heptanique

Figure 12: Organigramme du fractionnement de lextrait brut aqueux.

Test ralis sur

Test positif ralis sur la partie arienne humide + + + + / / / -

Test ralis sur la poudre de la partie arienne / / / + / / / / + + /

faible faible faible faible + faible + + + + + + + + + + + faible + +

Triterpnodes + Flavonodes Glucosides cardiotoniques Alcalodes Test 1 Test 2 Acides amins + + + + +

EAB Composs phnoliques % Sucres totaux % 0,97 10,36

FA1 1,01 19,90

FB1 1,00 16,98

FAH 0,99 15,92