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BIOLOGA MOLECULAR DE ANTGENOS Y ANTICUERPOS

Tecnologa Mdica 2013

INTRODUCCIN. ASPECTOS GENERALES

Anticuerpos, corresponden a glicoprotenas que estn relacionadas con la Inmunidad Humoral.

Molculas del CHP. Receptores Linfocitos T. Anticuerpos

3 clases de molculas que se utilizan en la inmunidad innata para reconocer antgenos


Se unen al espectro mas amplio de estructuras antignicas. Muestra mayor capacidad de discriminacin. Unin con mas Fuerza

ANTICUERPOS

ANTICUERPOS. DISTRIBUCIN Y PRODUCCIN


Fluidos Biolgicos. (sangre y Linfa) Distribucin Membrana celular (N limitado de clulas)

SINTESIS

Linfocitos B

Se encuentran en vesculas de secrecin dentro de los linfocitos, (GOLGI). En la membrana linfocitaria se expresan como protenas integrales de membrana. Se unen a clulas inmunitarias. (F. mono nucleares, mastocitos y NK)

TRANSPORTE Y DISTRIBUCIN DE LOS ANTICUERPOS (ISOTIPOS)


Docente Alejandra Arancibia Daz

DISTRIBUCIN DE ISOTIPOS EN EL
ORGANISMO
1.

2.

3.

4.

Superficie de clulas B productoras (todos) Plasma (IgG, IgA, IgMpent) y fluido intersticial (IgG) Unidos a receptores de alta afinidad en la superficie de otras clulas (IgE) En lquidos secretados IgA dimrica
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Ag.

Forma secretada

Ag.

Ig Ab

Clula plasmtica

Forma de membrana (BCR)

ANTICUERPOS.

En sangre coagulada los anticuerpos permanecen en el sobrenadante denominado SUERO.

Experimentalmente a ese suero es posible agregarle antgenos y es cuando se denomina ANTISUERO.

El estudio de la relacin antgeno-anticuerpo se denomina SEROLOGA.

ANTICUERPOS

Un adulto promedio (70 Kg) produce 3g de Anticuerpos que pueden ser detectados por serologa. De los 3 g de Anticuerpos el 67% corresponde al denominado IgA. IgA se produce por los linfocitos B en las paredes del A. digestivo y A respiratorio. Estos se ubican en el lumen de estos sistemas. El tipo mas frecuente que se encuentra en el suero en el IgG

ESTRUCTURA MOLECULAR DE ANTICUERPOS

1 estudios basados en anticuerpos purificados procedentes de sangre de individuos inmunizados con diversos antgenos.

Imposible definir estructura molecular. Mezclas de anticuerpos secretados por linfocitos B clones. Respuesta a distintas porciones de un antgeno. (EPITOPOS) Anticuerpos policlonales.
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ESTRUCTURA MOLECULAR DE ANTICUERPOS


Tumor monoclonal de clulas plasmticas. Produccin de anticuerpos idnticos en sangre u orina.

MIELOMA MULTIPLE

ANTICUERPOS MONOCLONALES

1975 Khler y Milsteins produccin in vitro de hibridomas. Aislamiento de Anticuerpos monoclonales.

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Clulas del Bazo

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ANTICUERPOS

Disponibilidad Homognea de Anticuerpos. Clulas productoras de anticuerpos.

Determinacin de la secuencia de aminocidos y la clonacin molecular de molculas de anticuerpos concretos. Determinacin cristalogrficas de rayos X.
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ANTICUERPOS

Gammaglobulinas o Inmunoglobulinas. Poseen componentes estructurales bsicos, con una variabilidad en las regiones que se unen a los antgenos. Existen entre 107-109 molculas de anticuerpos distintas en cada individuo. Poseen secuencias aminocidicas nicas en sus sitios de unin con el antgeno.

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ANTICUERPOS.
De forma monomrica en Y. Posee 2 cadenas ligeras (L) idnticas y 2 pesadas (H) iguales.

Docente Alejandra Arancibia Daz

Uniones disulfuros: Las dos H-H.


Cada H con una L. S-S.


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ANTICUERPOS

Cadena Ligera: 24 kD. Cadena Pesada: 55-70 kD. Ambas poseen una serie de unidades homlogas que se repiten. 110 aa aprox. de longitud.
Regin Variable Especificidad

Cadenas ligeras Cadenas pesadas

Sitios de unin al antgeno

Se repliegan independiente en una estructura globular llamada DOMINIO Ig

Regin Constante Funcin

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DOMINIOS DE INMUNOGLOBULINAS

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DOMINIOS DE INMUNOGLOBULINAS

Un dominio Ig posee:

2 laminas en beta-plegada. Cada lamina con 3-5 hebras polipeptidica antiparalelas.

El gen codifica el domino inmunoglobulina es el ms repetido en nuestro genoma, 765 veces. Todas las molculas que poseen este patrn de plegamiento se les incluye en la superfamilia Ig
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ANTICUERPOS

Ambas cadenas (L y H) poseen regiones aminoterminales variables. (V) asociadas al reconocimiento antignico. Adems poseen las regiones constantes (C) carboxiterminales que median la funcin efectora
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ANTICUERPOS
Posee un dominio Ig Posee un dominio Ig

Posee 3-4 dominio Ig

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CARACTERSTICAS ESTRUCTURALES EN LAS REGIONES VARIABLES.

Son breves segmentos en las regiones V. Se denominan regiones Hipervariables.

Corresponden solo a 10 residuos de aminocidos y mantienen su posicin gracias a la estabilidad de las regiones mas conservadas de dominio Ig. Estas zonas hipervariables se encuentran en un espacio tridimensional para formar la superficie de unin al antgeno.

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CARACTERSTICAS ESTRUCTURALES EN LAS REGIONES VARIABLES.

Reciben el nombre de Regiones determinantes de complementariedad (CDR) Tienen la capacidad de formar boucles sobre las estructuras de del antgeno y as generar una relacin mas estrecha y especfica. La unin del antgeno a las molculas de anticuerpo es fundamentalmente una funcin de las regiones hipervariables.
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REGIONES VARIABLES (HVR) Y


REGIONES
150 Variability Index HVR3

100 HVR1 50 FR1

HVR2

FR2

FR3

FR4

0
25 50 Amino acid residue CDR CDR 75 100
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CDR

CARACTERSTICAS ESTRUCTURALES DE LAS


REGIONES CONSTANTES

Los anticuerpos se pueden subdividir en clases y sub clases dependiendo de las diferencias en las estructuras de sus regiones C.

Las clases de molculas de anticuerpos se denominan ISOTIPOS

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CARACTERSTICAS ESTRUCTURALES DE LAS


REGIONES CONSTANTES

En el humano Ig A y IgG se pueden subdividir en:

IgA (1 y 2) IgG (1, 2, 3, 4)

En las regiones C de anticuerpo de un isotipo o subtipo tienen esencialmente la misma secuencia de aa.

Las cadenas pesadas se designan con el alfabeto griego correspondiente al isotipo del anticuerpo.
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CARACTERSTICAS ESTRUCTURALES DIFERENCIALES:


Variacin discreta (categorizable):
Cadena pesada clases e Isotipos a,d, e, g1,g2,g3,g4 cadena ligera. Tipos: y . 4 isotipos

Variacin continua (no categorizable): - Nmero de clones muy elevado


- Diversidad de la regin variable 109 a 1011 molculas diferentes con secuencias nicas en sus sitios de unin al antgeno.

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VARIACIN DISCRETA
Variacin gnica (en distintos loci) En funcin de cadena pesada, clases: aIgA, dIgD, eIgE, IgM, gIgG. Isotipos, subtipos o subclases: 95 % de identidad productos de segmentos gnicos diferentes. Ig G1, Ig G2, Ig G3, Ig G4(por orden decreciente de concentracin en suero). Ig A1 suero, Ig A2 (secreciones) Subtipo determina funcin biolgica cadena ligera. Tipos: y . 4 isotipos

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UNIN DE LOS ANTICUERPOS A LOS


ANTGENOS

Que es un Antgeno??

Se define como cualquier sustancia que puede unirse especficamente a una molcula de anticuerpo o a un receptor de linfocito T
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UNIN DE LOS ANTICUERPOS A LOS


ANTGENOS

Anticuerpo reconoce a casi todo los tipos de molculas biolgicas. Necesita de los inmunogenos que estimulan a los linfocitos B a generar la respuesta humoral. Las macromolculas suelen ser mucho mas grandes que los puntos de unin al anticuerpo. Los anticuerpos por lo tanto se fijan a una porcin de la macromolcula que se denomina Determinante o eptopo.

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UNIN DE LOS ANTICUERPOS A LOS ANTGENOS

Las macromolculas pueden contener mltiples eptopos repetidos. (c/u se une a un anticuerpo). Mltiples determinantes idnticos se denomina: Polivalencia o multivalencia
No contienes eptopos idnticos mltiples

Protenas globulares

Polisacridos

Poseen y se encuentran separados en forma regular Poseen y se encuentran separados en forma regular
Molculas Polivalentes

cidos Nucleicos

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Superficies celulares (bacterias) poseen formaciones polivalentes de eptopos antignicos de protenas e hidratos de carbono

DETERMINANTE ANTIGNICO O EPTOPOS

Porcin de una molcula que es reconocida por el anticuerpo. Tipos:


Determinante conformacional. Determinante Lineal. Determinante neoantignico. (creado por protelisis)

La configuracin espacial de los diferentes eptopos en una molcula de protena puede influir en la unin de diferentes formas.

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DETERMINANTE CONFORMACIONALES O DISCONTINUOS

Formados por aminocidos de porciones separadas en la secuencia primaria de la protena pero que estn juntos yuxtapuestos en la estructura tridimensional.

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EPTOPOS LINEALES

Corresponden a 6 aminocidos correlativos en la estructura primaria.

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EPTOPOS LINEALES

Cuando estos aparecen en la superficie externa de la protena plegada nativa estos pueden ser accesible a los anticuerpos. Comnmente son inaccesibles en la conformacin nativa y aparecen solo cuando esta es sometida a un proceso de desnaturalizacin.

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DETERMINANTES NEO ANTIGNICOS

Corresponden a eptopos formados in vitro. Las protenas pueden sufrir modificaciones tales como fosforilacin y protelisis. Estas modificaciones alteran la estructura covalente, generando nuevos determinantes.

Estos determinantes son los que se denominan Neo antignicos.


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BASES ESTRUCTURALES DE LA UNIN AL


ANTGENO
Unin

no covalente, reversible pero de alta afinidad. Se ubican en las Regiones hipervariables.


1. Mayor variacin entre diversos anticuerpos.

2. Cambios en su secuencia alteran la especificidad de unin.


3. 4. Forman lazos extendidos superficie del anticuerpo. expuestos en la

Los residuos aminocidos de las regiones hipervariables estn en contacto con el antgeno unido, sobre todo la regin CDR3, (la ms variable).

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BASES ESTRUCTURALES DE LA UNIN AL ANTGENO

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Docente Alejandra Arancibia Daz