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Informe de Laboratorio Nº 4 1

BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL


FACULTAD DE INGENIERÍA INDUSTRIAL Y DE SISTEMAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

INFORME DE LABORATORIO Nº 4

BIOQUÍMICA 1

TEMA:

____ Reconocimiento de proteínas _____

INTEGRANTES:

CÓDIGO APELLIDOS Y NOMBRES CORREO ELECTRÓNICO


2008002303 Palacios Rodriguez Ângela angie_kc6@hotmail.com
2008015683 Salome Ordoñes Vanessa vanessalome@hotmail.com
2008003532 Salvatierra Ccachulli Amys Celestina syma_0210@hotmail.com
2008235371 Serrano Yarleque Soraida Brigitte brigitte_1415@hotmail.com
2008013626 Zambrano Sayas Linda Lady adriana_2330@hotmail.com

DOCENTE:

Ing. Guillermo Chumbe Gutiérrez

Semestre 2009 – I
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BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I

I. INTRODUCCIÓN
Em este presente trabajo desarrollamos el tema de Reconocimiento de
proteínas y para esto hemos realizado un trabajo de investigación mediante el
cual estamos exponiendo las diferentes formas de reconocer la presencia de
las proteínas en una sustancia ( clara de huevo), las reacciones a utilizar, etc.

Este informe en completo también contiene la experiencia en el laboratorio,


imágenes de ella y algunos resultados que se pedía en la realización de
informe y que se requería saber en cada experimentación.

II. MARCO TEÓRICO

PROTEINAS:

Son biomoleculas de gran tamaño y peso molecular formadas por C, H, O, y N.


Son macromoléculas o polímeros de aminoácidos.

AMINOACIDOS

Son moléculas orgánicas que presentan grupo amino (- NH2) y un grupo


nacido carboxi8lico (- COOH).
En disolución los aminoácidos forman iones dobles denominados (Zwitteriones)
debido a sus grupos acido y base; además, un aminoácido, dependiendo del
PH de la solución, puede comportarse como acido o como base por esta razón
se les denomina anfótera.

AMINOACIDOS

NO ESENCIALES ESENCIALES
Acido aspartico Histidina
Acido glutamico treonina
prolina triptófano
serina leucina
tirosina isoleucina
asparagina valina
glutamina fenilalanina
cisteína Lisina
glicina metionina
alanina arginina
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ESTRUCTURA DE LAS PROTEINAS:

Estructura primaria: es la secuencia de aminoácidos de la proteína (en forma


lineal).

Estructura secundaria: La estructura secundaria es la disposición de la


secuencia de aminoácidos en el espacio. La a (alfa)-hélice Esta estructura se
forma al enrollarse helicoidalmente sobre sí misma la estructura primaria.

La conformación beta En esta disposición los aminoácidos no forman una


hélice sino una cadena en forma de zigzag.

Estructura terciaria: informa sobre la disposición de la estructura secundaria


de un polipéptido al plegarse sobre sí misma originando una conformación
globular. Aparecen varios tipos de enlaces:(el puente disulfuro, los puentes de
hidrógeno, los puentes eléctricos, las interacciones hidrófobas)

Estructura cuaternaria: Esta estructura informa de la unión, mediante enlaces


débiles (no covalentes) de varias cadenas polipeptídicas con estructura terciaria, para
formar un complejo proteico. Cada una de estas cadenas polipeptídicas recibe el
nombre de protómero.
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Reacciones de reconocimiento

• Reacción de Biuret

El reactivo de Biuret está formado por una disolución de sulfato de cobre en


medio alcalino, este reconoce el enlace peptídico de las proteínas mediante la
formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de
electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces
peptídicos, lo que produce una coloración rojo-violeta.

• Reacción de Millon

Reconoce residuos fenólicos, es decir aquellas proteínas que contengan


tirosina. Las proteínas se precipitan por acción de los ácidos inorgánicos
fuertes del reactivo, dando un precipitado blanco que se vuelve gradualmente
rojo al calentar.

• Reacción xantoproteica

Reconoce grupos aromáticos, es decir aquellas proteínas que contengan


tirosina o fenilalanina, con las cuales el ácido nítrico forma compuestos nitrados
amarillos.

III. MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES Y REACTIVOS:

Para la práctica y experimentación sobre reconocimiento de proteínas se


utilizaron los siguientes elementos.

REACTIVOS
• Acido nítrico concentrado
• Hidróxido de sodio al 40 %
• Hidróxido de sodio al 20%
• Sulfato cúprico al 1%
• Acetato de plomo al 5%
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MATERIALES
• Tubo de ensayo
• Gradilla
• Varillas de vidrio
• Mechero
• Vaso precipitado
• Vagueta
• Pipeta

MUESTRA
• Clara de huevo

METODOLOGIA:

Existen varios métodos diferentes para el reconocimiento de proteínas uno de


estos es la coagulación de proteínas debido al gran amaño de sus moléculas,
también esta la reacción xantoproteica que es debida a la formación de un
compuesto aromático nitrado de color amarillo, otra es la reacción de biuret y
finalmente la reacción de los aminoácidos azufrados.

IV. DESCRIPCION DE LA PRÁCTICA

• REACCIÓN XANTOPROTEICA:

 Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de solución problema


(clara de huevo).

 Añadir 1 cc. de HNO3 concentrado.


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 Calentar al baño maría a 100 0C.

 Enfriar en agua fría.

 Añadir gota a gota una disolución de sosa al 40%.

40%

• REACCIÓN DE BIURET:

 Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 cc. de albúmina de huevo.


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 Añadir 2cc. de solución de hidróxido sódico al 20%.

 A continuación 4 ó 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%.


Debe aparecer una coloración violeta-rosácea característica.

Sulfato cúprico 1%

4 a 5 gotas
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• REACCIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS AZUFRADOS:

 Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de albúmina de huevo (clara de


huevo).

 Añadir 2 cc. de solución de hidróxido sódico al 20%.

 Añadir 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%.

 Calentar el tubo hasta ebullición.


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 Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha


formado sulfuro de plomo, utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo
que nos sirve para identificar proteínas que tienen en su composición
aminoácidos con azufre.

Resultados final de las diferentes reacciones para


identificar proteínas

V. RESULTADOS Y DISCUSIONES
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• ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de


huevo?

La desnaturalización de proteínas se da en la clara de los huevos, que son en


gran parte albúminas en agua. En los huevos frescos, la clara es transparente y
líquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando una masa sólida
intercomunicada. Esa misma desnaturalización puede producirse a través de
una desnaturalización química, por ejemplo volcándola en un recipiente con
acetona.

Desnaturalización irreversible de la proteína de la clara de huevo y pérdida de


solubilidad, causadas por la alta temperatura (mientras se la fríe)

• ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de


desnaturalización?

El efecto de la temperatura, cuando la temperatura es elevada aumenta la


energía cinética de las moléculas con lo que se desorganiza la envoltura
acuosa de las proteínas y, se desnaturalizan.

• ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida


es una proteína?

Para saber si una sustancia desconocida, es una proteína se utiliza el Reactivo


de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y
otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de
composición desconocida.

Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con
(KNaC4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de
proteínas, y a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El
Hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio
alcalino necesario para que tenga lugar.

• ¿Qué coloración da la reacción del Biuret?

La coloración que presenta es el color violeta, indicando la presencia de


proteínas.
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• ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del


Biuret?

Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua
soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formación de
coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70 ªC o al ser
tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.
Si una proteína coagulada podría dar la reacción de Biuret, porque el reactivo
reacciona con cualquier proteína, liquida o sólida, por ejemplo cuando haces
una cuantificación de proteínas en suero (liquida) o cuando haces una prueba
cualitativa en huevos, carne, papas, etc.

• Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido


como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué?

La glicina no reaccionó con el reactivo de Biuret porque está en forma libre y no


hay enlaces peptídicos con los que pueda reaccionar este reactivo. De esta
manera, la glicina dio una prueba negativa. Además en la reacción
xantoprotéica da negativo porque carece de grupos aromáticos.

VI. CONCLUSIONES

• Las proteínas constituyen una de las moléculas más importantes en el


organismo ya que cumplen muchas funciones

• Las proteínas están constituidas por aminoácidos por los cuales los
métodos se basan en el reconocimiento de los aminoácidos

• Al realizar las diferentes pruebas con la albúmina se pudo comprobar


experimentalmente efectivamente que se trata de una proteína

• Las proteínas son sensibles con las sales metálicas pesadas (mercurio
,cobre ,plomo) formando precipitados

• En las reacciones donde se obtuvo precipitación se debió a un cambio


en el estado físico de la proteína , mientras que en la coagulación se ha
producido un cambio en el estado físico y en la estructura química por
eso es irreversible

VII. BIBLIOGRAFÍA

• http://www.monografias.com
• Ediciones Pamer
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• http://es.wikipedia.org/wiki/Proteínas
• http://www.proteinas.org.es