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Tecnica de Fish

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TECNICA DE FISH

Se utiliza sondas específicas para determinados cromosomas o secuencias de ellos. Se desnaturaliza el ADN con calor y se incuban las muestras con formamida y tampón o bien son a su vez detectables por un intermediario marcado con fluorescencia. Esto nos permite poner de manifiesto alteraciones cromosómicas (translocaciones, deleciones, monosomías y trisomías). Para utilizar la FISH es necesario que las células se encuentren en metafase o en interface. Para estudiar pequeñas translocaciones cromosómicas con sondas completas de un determinado cromosoma, la técnica ha de realizarse en metafase con los cromosomas separados para lo cual es necesario disponer de un cultivo celular75. Es una técnica de gran sensibilidad que puede realizarse con relativa rapidez. El FISH centromérico permite contar exactamente el número de centrómeros presentes en una célula, o valorar varios centrómeros a la vez en cada célula usando zonas de varios colores, además requiere una cantidad de ADN muy pequeña. Las desventajas de esta técnica es que es muy laboriosa, no permite estudiar las muestras varias veces , no puede ser automatizada y es difícil la diferenciación morfológica entre células normales y malignas25. Se emplea tres tipos de sondas21: 1. Pintado de cromosomas: Es una sonda compuesta por: a. secuencia específica de un cromosoma, y b. secuencias compartidas por otros cromosomas. El resultado obtenido es una hibridación uniforme en todo el cromosoma diana. 2. Sondas centroméricas: Se basan en el ADN satélite alfa (a), que son secuencias específicas de cada cromosoma. 3. Sondas de cósmidos: vectores que cionan fragmentos grandes de ADN de eucariotas.

Aplicación en dermatología
Identificación de anomalías cromosómicas en muestras prenatales (numéricas. translocaciones, etc), detección de translocaciones específicas de determinados tipos tumorales o t(9,11) o t(9,22)en leucemias mieloides,

puede detectarse células tumorales en márgenes aparentemente libres de tumor en el carcinoma epidermoide de cavidad oral77 . o detección de inserción cromosómica de genomas virales. Valorando el número de copias de ciertos cromosomas en células epiteliales descamadas mediante cepillado. una alteración también descrita en el carcinoma epidermoide de piel76. Se ha detectado la presencia de trisomía 7 en algunos estudios de queratoacantomas.altercaciones del cromosoma 12 en los lipomas) o incluso detección de amplificaciones de oncogenes como el neu en los carcinomas de mama o de próstata. Al igual que el estudio de p53 mediante PCR. se ha utilizado FISH para valorar los márgenes de resección de neoplasias.

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