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Dengue - Laboratorio

Dengue - Laboratorio

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Dengue Diagnostico de laboratorio

Clasificación revisada de dengue
Dengue ± signos de alarma
Dengue probable

Dengue severo

+
Signos de alarma* •Dolor espontáneo o a la palpación del abdomen • Vómitos persistentes • Acumulación clínica de líquidos • Sangrado de mucosas • Letargia o irritabilidad • Hepatomegalia > 2cm • Laboratorio: incremento del hto. asociado a disminución del conteo de plaquetas
•Requiere monitoreo estricto e • intervención médica

Vive/ ha viajado a áreas endémicas de dengue mas fiebre y dos de los siguientes criterios: - Náuseas /vómitos - Exantema - Dolor y malestar - Prueba de torniquete (+) - Leucopenia -Y cualquier signo de alarma
Laboratorio: Dengue confirmado

Dengue severo
2. Fuga plasmática de gran volumen que conduce a:
• • Shock (SSD) Acumulación de líquidos con SDRA clasificada por un médico

(de importancia cuando no hay fuga capilar)

2. Hemorragia severa 3. Falla severa de órganos
  Hígado: AST o ALT ≥ 1000 SNC: trastornos de la conciencia  Corazón u otro órgano

2

Dengue Exámenes esenciales • Hemograma completo • Hematocrito • Plaquetas

Dengue Exámenes complementarios
• Albúmina y proteínas séricas • Aminotransferasas • Eritrosedimentación • NU y creatinina • Examen general orina

Dengue Exámenes específicos
Diagnostico individual •Confirmación de casos •Diagnostico diferencial •Manejo clínico •Detección temprana •Circulación de cepas •Estudios de incidencia •Caracterización de cepas

Soporte de vigilancia

Dengue Exámenes específicos
• • • • • • Cultivo Biología molecular Serologia Hemaglutinación Inhibición de la hemaglutinación Inmunofluorescencia

Dengue Exámenes específicos
• • • • • Cultivo Los tres primeros días Diez mililitros de sangre total Colocar en hielo, refrigerar a menos 4°C Conservar a -20-70 °C

Dengue laboratorio Aislamiento viral
• • • • Inoculación intratecal en ratón RN Inoculación cultivos celulares de mamíferos Inoculación intra toráxica de mosquitos adultos Inoculación en células de mosquitos

Dengue laboratorio Aislamiento viral
• Inoculación intracerebral en ratón
– Inconvenientes:
• Alto costo • Tiempo largo para aislar • Baja sensibilidad

Dengue laboratorio Aislamiento viral
• Cultivos celulares en mamíferos
– Con frecuencia pasos múltiples
• Inconvenientes

Dengue laboratorio Aislamiento viral
• Inoculación en mosquitos • Mas sensible, menos usada
– A. aegypti – A. albopictus

• Inmunofluorescencia indirecta (IFA)

Dengue laboratorio Aislamiento viral
• Cultivo células de mosquito (3 líneas) • Línea celular C6/36
– – – – Rápida Sensible Económica IFA

Dengue laboratorio Aislamiento viral
Ventajas cultivo en células de mosquito
– – – – Alta sensibilidad Fáciles de mantener Crecen a temperatura ambiente Se mantienen por 14 días en el medio

Dengue laboratorio Aislamiento viral
• Inoculo intracerebral a ratón lactante • Líneas celulares: BSC1, VERO, BHK21 • Células de cultivo de mosquito – C6/36 A. albopictus – AP61 A. pseudoscutellaris

Dengue Exámenes de laboratorio
Cultivo normal Efecto citopático

Dengue Exámenes de laboratorio Biología molecular
– Diagnostico viral de dengue – Identificación de serotipos – Vigilancia molecular – Caracterización genética

Dengue Exámenes de laboratorio
Biología molecular • Reacción en cadena de Polimerasa (PCR)
– Demostración de infecciones concurrentes – Diagnostico retrospectivo – Clasificación rápida en genotipos y subgrupos geográficos – Niveles de viremia

Dengue Exámenes de laboratorio
Muestras para serologia • Inhibición de la hemaglutinación (IH) • Inmunofluorescencia (IF) • Inmunoensayo enzimático (ELISA)
– – – – Sensibilidad ELISA de captura IgM: 90-97% Falsos positivos 2% Se elevan y duran mas en infección primaria En la infección secundaria se elevan menos y pueden estar ausentes

Dengue Exámenes de laboratorio
• ELISA IgG identifican infección primaria y secundaria por dengue • Durante la infección 1ª : 7°-10° día • Durante infección 2ª : elevados desde la fase aguda y mucho mas en la convalecencia • ELISA: proteínas no estructurales 1 (NS1)

Dengue Exámenes de laboratorio
• ELISA de captura de IgM – Sensibilidad: 92% – Especificidad: 98% – Coincidencia con IH: 94%

Dengue Exámenes de laboratorio
Muestras para serologia • Primera desde el 5° día de la enfermedad • Segunda 2-3 semanas despues de la primera • Enviar al laboratorio preferentemente a -20°C o en su defecto a 4 °C

Infección por Dengue Comportamiento del virus, T°, y Acs.
6 4 2 41

VIREMIA Log/ml NS1Ag

40 39 38 37

T° ( °C)

20480 5100 120 20 -2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 21 23 25 28 Anticuerpos IgM IgG Días

Comportamiento de los marcadores para el diagnóstico
6 4 2 VIREMIA log/ml, NS1 Ag

IgM Ac 640 120 20 20480 5100 120 HI Antibodies 2rio HI antibodies 1rio

20

Días -2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 21 23 25 28

Infección por dengue: respuesta inmune

Infección primaria

Infección Secundaria

IgG

virus

virus

NS1

IgM

NS1 20nm IgM

-2 0

5

14

60 (6m)

tiempo en días (meses)

Dengue. Interpretación de resultados de laboratorio (1)
Laboratorio Títulos de Ac. elevados Seroconversión (cuadruplicación de valores) Aislamiento (+) Pruebas de antigenos (+) PCR (+) Clasificación de caso Probable Confirmado Confirmado

Dengue. Interpretación de resultados frente a la infección
Laboratorio Títulos de Ac. elevados IgM positiva Muestra Una sola muestra suero o plasma Probable

(2)

Clasificación de caso

Seroconversión Muestra pareada suero Confirmado Cuadruplicación de o plasma los títulos Aislamiento (+) Prueba de Ag. (+) PCR (+) Muestra en la fase Confirmado aguda o crónica de la infección (suero, tejido, LCR, sangre total)

Interpretación de resultados de laboratorio frente a la infección (3)
Laboratorio
Serología •Título de anticuerpos • Anticuerpos IgM (+)

Muestra
• Una sola muestra (suero o plasma)

Clasificaci ón de casos
Probable

Ventajas y desventajas
Ventajas: 2. Toma de muestra fácil 3. Identifica la circulación de agentes infecciosos recientes Desventajas: 5. No confirma la infección actual Ventajas: 2. Confirmación del caso Desventajas: 4. Rechazo de parte del paciente 5. Costo elevado (toma de muestra y pruebas de laboratorio) 6. Requiere mas tiempo Ventajas: 2. Confirmación del caso 3. Genotipificación, vacunas, pruebas, etc. Desventajas: 5. Costo elevado (pruebas de laboratorio)

•Seroconversión • Cuadruplicación de titulo de anticuerpos

•Muestra pareada (suero o plasma)

Confirmado

• Pruebas de antígeno (+) • Aislamiento viral (+) • PCR (+)

•Muestras en la fase aguda o crónica de la infección (suero, tejidos, LCR, sangre total)

Confirmado

Proteínas Virus del dengue

Muchas gracias

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