Tema 1.1 Esterilizacion y medios de cultivo. Tema 1.2 APLICAR TCNICAS FSICAS Y QUMICAS PARA EL CONTROL BACTERIOLGICO.

. Tema 1.3 Preparar los diferentes medios de cultivo para el aislamiento de bacterias. Tema 1.4 Caractersticas morfolgicas y taxonmicas de las bacterias

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Tema 1.1 Esterilizacion y medios de cultivo.

Es el proceso mediante el cual se alcanza la muerte de todas las formas de vida microbianas, incluyendo bacterias y sus formas esporuladas altamente resistentes, hongos y sus esporos, y virus. Metodos de esterilizacio Fisicos, Son aquellos que no involucran el empleo de sustancias letales para los microorganismos, si no procedimientos fisicos qu Metodos de esterilizacion Calor Humedo Tindalazion Metodo termico de esterilizacin, mata microorganismos , por la coagulacin de proteinas, causada por rutura de los puentes de hidrogeno. Consiste en someter una sustancia a esterilizar a un proceso seriado de elevacin y disminucin de la temperatura, de tal modo que en cada una de esas etapas se eliminen paulatinamente las forma vegetativas y esporas Es el proceso trmico realizado a lquidos (generalmente alimentos) con el objeto de reducir los agentes patgenos que pueden contener: bacterias, protozoos, mohos y levaduras. La ebullicin es el proceso fsico en el que un liquido pasa a estado gaseoso. Elimina la mayoria de microorganismos en el medio liquido.

Pasteurizacion

Ebullicion

Metodos de esterilizacin Quimicos: Los mtodos qumicos de esterilizacin son aquellos que involucran el empleo de sustancias letales para los microorganismos. El uso de este mtodo es muy limitado para la industria alimentaria pero muy utilizado en otras industrias como la farmacutica por ejemplo. OXIDO DE ETILENO ALDEHIDOS GLUTARALDEHIDO FORMALDEHIDO

Medios de cultivo. Pagina 2 de 13

Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado ( es decir, se le aaden organismos) y a continuacion incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. Condiciones para el Desarrollo de los Microrganismos:

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores que en algunos casos son ajenos al medio ambiente. 1.Disponibilidad de nutrientes adecuados. 2.Consistencia adecuada del medio 3.Presencia o ausencia del oxigeno y otros gases. 4.Condiciones adecuadas de humedad. 5.Luz ambiental. 6.Ph. 7.Temperatura. 8.Esterilidad del medio. Un medio de cultivo adecuado debe de contar como minimo carbono, nitrogeno,azufre,fosforo,sales inorganicas y ciertas vitaminas inductoras de crecimiento. Tipos de medios para su desarrollo:

Partiendo de un medio liquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos como albumina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o solido. Los medios solidificados tienen el gran inconveniente de que muchos no desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusin y otros pueden licuarlo. Clasificacin de los medios de cultivo

De acuerdo a su consistencia, los medios pueden clasificarse en: 1. Liquidos: se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulacion. 2. Semisolido: contiene 0.5% de agar en su formulacion. Se utilizan para estudiar la mo vilidad de las bacterias (presencia o ausencia de flagelos) 3. Solido: contiene de 1.5% a 2% agar en su formulacion. Estos medios inmovilizan a las celulas, permitiendoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Pagina 3 de 13

De acuerdo a su funcion se clasifican en : 1. Medios selectivos: son aquellos que poseen uno o mas componentes aadidos, los cuales prevendan el crecimiento de cierto tipos de especie de bacterias deseada ajustando las condiciones fisicas tales como temperatura, ph, etc. 2. Medios diferenciales: permiten al investigador distinguir las diferencias entre diferentes tipos de bacterias con base en alguna caracteristica observable en su patron de crecimiento en el medio. 3. Medios de enriquecimiento: contiene algun componente que permite el crecimiento de cierto tipo especifico de bacteria, pero no contienen sustancias inhibidoras. 4. Medios enriquecidos: se emplean para cultivar microorganismos que requieren un gran numero de factores de crecimiento. Generalmente contiene extractos biologicos poco usuales como sangre, suero en polvo, extracto de cerebro de res, etc.

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Tema 1.2 APLICAR TCNICAS FSICAS Y QUMICAS PARA EL CONTROL BACTERIOLGICO. Aportaciones ms importantes de cientficos en la microbiologa de inters mdico Anthony Van Conocido por introducir a la fabricacin de L. los microscopios y descubrimientos pioneros sobre los protozoos,los globulos rojos, el sist. De capilares y ciclo vital de los insectos.

Lazzaro Spallanzani

investigo el origen de la vida la regeneracin tisular la respiracin y otras funciones del ser humano. tambin trabajo en la inseminacin artificial

Agostino Bassi Realiz la 1era prueba experimental de un agente biolgico como causa de una enfermedad epidmica seal en obras que las enfermedades como el sarampin, peste bubnica, sfilis, clera, rabia y gonorrea tambin son producidas por parsitos. Luis Pasteur La pasteurizacin proceso de la destruccin de las bacterias patgenas en un liquido mediante calor. demostr que todo proceso de fermentacin y descomposicin orgnica se debe a la accin de organismos vivos. Tambin vacunas contra enfermedades entre ellas la rabia. Walter Reed Realizo importantes investigaciones sobre la etiologa, control y transmisin de enfermedades epidmicas, la examinacin de la fiebre tifoidea y demostr que la fiebre amarilla solo se propaga por medio de la picaduradel m osquito Aede Paul Ehrlich Descubri elsalvarsn, derivado de arsnico activo frente a la sfilis estableci concepto quimioterapico un frmaco que mataba bacterias respetando las clulas del husped y la teora de la inmunidad de cadena lateral. Descubri las causas y vas de transmisin de varias enfermedades brucelosis y tripanosomiasis africana. Descubri el fenmeno fiebre de malta. Descubri el parasito de la llamada "fiebre de Texas" el cual era transmitido por una garrapata. tambin hizo un trabajo que describa la presencia de la brucella en el protoplasma de las clulas del epitelio corial.

David Bruce Theobald Smith

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Medios de esterilizacin. Mtodos Qumicos

Estos mtodos provocan la prdida de viabilidad de los microorganismos. Hipoclorito de Sodio: Es el ms utilizado por su fcil adquisicin y por su efectividad en la desinfeccin. Oxido de etileno: Destruye todos los microorganismos incluso virus. Aldehdos: Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas. Estos compuestos destruyen las esporas Glutaraldehdo: Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro Formaldehdo: Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 horas. Gas-plasma de Perxido de Hidrgeno: Es proceso de esterilizacin a baja temperatura la cual consta en la transmisin de perxido de hidrgeno en fase plasma. Alcohol: Esteriliza superficies, pero se evapora fcilmente.

Mtodos Fsicos
Calor: La utilizacin de este mtodo y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos. Calor Hmedo: El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Autoclave. Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de Chamberland. Calor seco: El calor seco produce desecacin de la clula, es esto txico por niveles elevados de electrolitos, fusin de membranas. Estufas Hornos: Doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperatura de 170 C para el instrumental metlico y a 140 C para el contenido de los tambores.

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Tema 1.3 Preparar los diferentes medios de cultivo para el aislamiento de bacterias.
Un medio de cultivo intenta el crecimiento y reproduccin in vitro de las bacterias, para observar sus propiedades y conseguir un mejor estudio bioqumico e inmunolgico, al contar con material en cantidad suficiente. Por ello consta de algunas propiedades (pH adecuado, sales, nutrientes, condicione de Aero-anaerobiosis, etc.), que son las ms idneas para la bacteria que deseamos estudiar y se citan en cada una de ellas en particular, en la bacteriologa sistemtica. Se entiende por medio de cultivo la mezcla de sustancias, naturales, sintticas o ambas, que permite el crecimiento y la reproduccin de microorganismos o bien que permite mantener su variabilidad. Un microrganismo se siembra en un medio lquido o en la superficie de un medio slido de agar . Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la original. Condiciones requeridas. Los medios de cultivo para poder ser utilizados y garantizar que los resultados obtenidos a partir de ellos sean confiables deben cumplir con los siguientes requisitos:

1- Disponibilidad de nutrientes adecuados: Pagina 7 de 13

Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar. 2- Consistencia adecuada del medio: Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o slido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusin de este solidifcate y de que otros tienen la capacidad de licuarla. 3- Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases: Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microrganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias(tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones. En un punto intermedio, los microrganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias(tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones. 4- Condiciones Adecuadas De Humedad: Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio. 5- Luz ambiental: La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos Pagina 8 de 13

6- pH: La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales. 7- Temperatura: Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los termfilos a 80C o incluso a temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saprofitos tienen rangos ms amplios. 8- Esterilidad del medio: Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especmenes inoculados en dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante).

Clasificacin de los medios de cultivo.

Para Usos Generales. Selectivos. No Selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos difciles de hacer crecer. A menudo estn enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las bacterias. pueden ser de moderada o de alta selectividad) se aaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia aadidas, se vara el tipo y grado de selectividad. Algunos microorganismos no son capaces de desarrollarse en medios de cultivo normales. Para cultivarlos necesitamos aadir sustancias altamente nutritivas como sangre, suero, extractos de tejidos animales. Los microorganismos que crecen en ellos son microorganismos exigentes o fastidiosos.

Enriquecidos.

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Para Aislamientos Formulaciones nutritivas especiales que satisfacen Especializados. requerimientos de grupos especficos de bacterias, ayudando a su identificacin(Lowenstein).

AGAR SANGRE Medio enriquecido, estndar. El AS al 5% con base de Tripticasa-Soja es un medio de uso general que permite el crecimiento tanto de microorganismos exigentes como no exigentes, que incluyen bacterias aerobias y anaerobias, as como los del gnero Candida. AGAR POLIVITEX (chocolate) Medio enriquecido, para bacterias que no crecen en medios habituales. El Agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de gonococos y meningococos, pero en el que pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. MACCONKEY Este medio es ligeramente selectivo ya que la concentracin desales Biliares, que inhiben el crecimiento de los microorganismos Gram positivos, es baja en relacin con otros medios similares. Se incluye tambin cristal violeta para inhibir el crecimiento de las bacterias Gram positivas, especialmente estafilococos y enterococos.

SCHAEDLER Medio bsico enriquecido con sangre. Este medio reductor est particularmente adaptado al cultivo de los grmenes anaerobios. KANA-VANCO Con Kanamicina y Vancomicina. Contiene 75 g/ml de Kanamicina, que inhibe a la mayora de los bacilos aerobios, facultativos y anaerobios excepto Bacteroides, y 7,5 g/ml de Vancomicina, que inhibe a la mayora de los microorganismos Gram Positivos.

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Tema 1.4 Caractersticas morfolgicas y taxonmicas de las bacterias

BACTERIAS Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan un tamao de unos pocos micrmetros (entre 0,5 y 5 m, por lo general) y diversas formas incluyendo esferas (c ocos), barras (bacilos) y hlices (espirilos). Las bacterias son procariotas y, por lo tanto, a diferencia de las clulas eucariotas (de animales, plantas, hongos, etc.). MORFOLOGIA DE LAS BACTERIAS En biologa, la morfologa es la disciplina encargada del estudio de la reproduccin y estructura de un organismo o sistema. La morfologa es una ciencia biolgica que trata de la forma y reproducciones de los seres orgnicos. MORFOLOGA BACTERIANA La morfologa bacteriana debe considerarse desde dos puntos de vista: 1) como clulas individuales observables slo al microscopio. 2) como colonias bacterianas apreciables a simple vista despus de desarrollarse en la superficie de medios de cultivo slidos. Las diferencias en el tamao, forma y ciertos detalles estructurales son caractersticos de los principales grupos de bacterias, y proporcionan las bases fundamentales para su estudio sistemtico e identificacin. CARACTERSTICAS MORFOLGICAS DE LAS BACTERIAS Presentan una forma en cocos o bacilos. Su tamao es aproximadamente 10 micras 1x10-6m. Generalmente se reproducen por biparticin. Son unicelulares.

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LA FORMA DE LAS BACTERIAS ADOPTA DISTINTOS TIPOS MORFOLOGICOS LO QUE SE CONOCE COMO PLEOMORFISMO LOS CUALES SON: 1. Coco : de forma esfrica. 2. Diplococo: cocos en grupos de dos. 3. Tetracoco: cocos en grupos de cuatro. 4. Estreptococo: cocos en cadenas. 5. Estafilococo: cocos en agrupaciones irregulares o en racimo. 6. Bacilo: en forma de bastoncillo. 7. Formas helicoidales: 8. Vibrio: ligeramente curvados y en forma de coma, juda o cacahuete. 9. Espirilo: en forma helicoidal rgida o en forma de tirabuzn. 10. Espiroqueta: en forma de tirabuzn (helicoidal flexible).

TAXONOMA DE LAS BACTERIAS La taxonoma es, en su sentido ms general, la ciencia de la clasificacin. Habitualmente, se emplea el trmino para designar a la taxonoma biolgica, la ciencia de ordenar a los organismos en un sistema de clasificacin compuesto por una jerarqua de taxones anidados.

Objetivo de la Taxonomia
Es dar un ordenamiento de las unidades taxonmicas bsicas (especie). Especie bacteriana: es un conjunto de poblaciones clonales que presenta un elevado grado de similitud fenotpica entre si y que a su ves difiere de otros conjuntos de poblaciones clonales. Carac terizacin Ideal: Caracterizacin completa de genotipo (es decir de su constitucin gentica) Real: Caracterizacin parcial del fenotipo (apariencia) LOS PRINCIPALES TAXONOMAS BACTERIANAS Dominio Bacteria (Eubacteria) Reino Proteobacteria Seccin g-Proteobacteria Pagina 12 de 13

Clase Zymobacteria Orden Enterobacteriales Familia Enterobacteriaceae Gnero Escherichia Especie E. coli Morfovar propiedades morfolgicas Biovar propiedades bioqumicas Serovar propiedades antignicas Fagovar sensibilidad a fagos Patovar propiedades patognicas

Coloracin de Gram
Negativo: se observan bacilos aislados de color rosado (coloracin dada por la safranina).

Positivo: se observan cocos agrupados en estafilos (estafilococos) de color violeta, tpico de una coloracin de Gram (+).

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