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DIAGNOSTICO DE PROTOZOOS SANGUNEOS Y TISULARES Plasmodium spp El paludismo o malaria es un problema de salud en gran parte de los pases tropicales

y subtropicales y una de las principales causas de mortalidad en el mundo. La enfermedad es causada por un parsito, protozoo del gnero Plasmodium. Existen cuatro especies de Plasmodium que causan enfermedad en el hombre: P. vivax, P. falciparum, P. malarie, P. ovale , siendo las dos primeras (P. vivax, P. falciparum), las especies ms frecuentes. El P. falciparum produce las formas graves de la enfermedad y ha desarrollado resistencia a algunas de las drogas usadas para el tratamiento. Los vectores de la enfermedad son varias especies del gnero Anopheles, la transmisin es a travs de la picadura de las hembras de estos mosquitos. La transmisin directa puede darse por transfusin sangunea o por va transplacentaria. El vector (Anopheles) se considera el husped definitivo porque en l se desarrolla el ciclo sexual o esporognico que origina los esporozoitos, formas infectivas localizados principalmente en las glndulas salivares del mosquito y que penetran a los capilares sanguneos con la picadura.

enfermedad. Los gametocitos son las formas que infectan al vector al picar un enfermo con malaria Mtodos Diagnsticos Frente a la sospecha clnica de un sndrome febril y teniendo en cuenta los antecedentes epidemiolgicos, relacionados con las zonas endmicas, se debe realizar el diagnstico parasitolgico que consiste en observar en el microscopio los parsitos en una muestra de sangre por los mtodos de gota gruesa y extendido delgado, con la coloracin de Giemsa o Wright. Se recomienda estudiar varias muestras en un mismo da o en das consecutivos, si es necesario. 1. Gota gruesa. Utiliza como muestra una gota de sangre, los eritrocitos quedan unos sobre otros pero son lisados durante la coloracin, dejando los parsitos libres. Esta concentracin de los eritrocitos facilita la deteccin de los parsitos, haciendo de la gota gruesa un mtodo ms sensible que el extendido delgado. 2. Extendido delgado. Es la tcnica usada en hematologa para observar la morfologa de los eritrocitos. Es una capa delgada, nica, de glbulos rojos que permite observar la morfologa de los parsitos y las alteraciones que estos glbulos parasitados pueden sufrir como: cambios de forma, tamao, presencia de granulaciones. 3. Pruebas inmunolgicas. Los mtodos serolgicos detectan una respuesta humoral pero no pueden sustituir a la microscopa en el diagnstico. Los mtodos enzimticos de inmunoanlisis que usan anticuerpos monoclonales pueden detectar parasitemias bajas. Las pruebas rpidas llamadas tiras reactivas, detectan antgenos especficos (protenas), producidos por los parsitos.

Anopheles spp El hombre se considera el husped intermediario porque en l se desarrolla el ciclo asexual o esquizognico que tiene dos etapas: la preeritroctica y la eritroctica. La primera sucede en el hgado, los esporozoitos inoculados por la hembra de Anopheles, infectan las clulas hepticas, se multiplican formando esquizontes tisulares, que al romperse liberan merozoitos a la circulacin para iniciar la segunda etapa o eritroctica. En las infecciones por P. vivax, los hipnozotos o formas latentes del parsito, pueden permanecer en el hgado por varios meses y son responsables de las recadas. En la circulacin, con la fase esquizognica se desarrollan diferentes formas del parsito: trofozotos o formas anulares, esquizontes y gametocitos que permiten hacer el diagnstico de la enfermedad e identificar las especies de Plasmodium. Los trofozoitos y los esquizontes son los responsables de los sntomas clnicos de la

y la respuesta al tratamiento. El recuento es mas necesario en las infecciones por P. falciparum.

Trofozoitos delgado

maduros de P. vivax en extendido

En la gota gruesa y el extendido delgado los parsitos se identifican por su forma y por la coloracin diferencial de sus componentes, el citoplasma se colorea azul, la cromatina (ncleo) se colorea rojo y el pigmento malrico, producto del metabolismo de la hemoglobina, caf amarillo. En sangre circulante se deben diferenciar tres formas parasitarias: Trofozoitos. El ncleo o cromatina es un punto denso, compacto que se colorea de rojo, el citoplasma en los parsitos jvenes tiene forma anillada y en los trofozoitos maduros toma forma ameboide, se colorea de azul. Los trofozoitos maduros de P. falciparum solo se ven en las infecciones severas. Esquizontes. Tiene 2 o ms grnulos de cromatina, segn el grado de maduracin, en el citoplasma se puede observar el pigmento malrico. Los esquizontes maduros estn formados por varios granos de cromatina que forman una roseta, cada uno rodeado de citoplasma. Al ocurrir la lisis del eritrocito el esquizonte maduro se fragmenta y se liberan los merozoitos. En P. falciparum solo se observan esquizontes circulantes en las infecciones severas. Gametocitos. La cromatina es laxa o difusa, tienen un citoplasma grande de color azul que contiene pigmento malrico. En P. vivax tienen forma redondeada y en P. falciparum son alargados. En las infecciones por P. vivax, todas las formas parasitarias circulan en la sangre perifrica. En P. falciparum solo los trofozoitos jvenes y los gametocitos circulan en la sangre perifrica, los trofozoitos maduros y los esquizontes quedan atrapados en la microcirculacin, ocasionando la obstruccin de los capilares en varios rganos. En el diagnstico de malaria, adems de identificar la especie es importante contar el nmero de parsitos por microlitro de sangre, para poder seguir la evolucin de la enfermedad

Esquizonte de P. vivax

Gametocito de P. vivax vivax gota gruesa

Trofozoitos de P.

Trofozoitos de P. falciparum falciparum

Gametocito de P.

Trypanosoma cruzi La enfermedad de Chagas o tripanosomiasis americana es causada por el protozoario Trypanosoma cruzi y transmitida por artrpodos hematfagos de la familia Reduviidae. Los parsitos infectantes salen en las deyecciones del vector y pueden introducirse al organismo a

travs del orificio de la picadura, heridas o excoriaciones de la piel o atravesando directamente la mucosa ocular, nasal o bucal. En la sangre se encuentran unas formas flageladas llamadas tripomastigostes y otras formas se encuentran intracelulares en algunos tejidos conocidas como amastigotes. Tripomastigote: Se encuentra en la sangre circulante de las personas o animales infectados en la fase aguda o iniciales de la infeccin, es alargado, fusiforme, de 20 micras de tamao aproximadamente. Posee un ncleo grande cerca de la parte central y a lo largo de su cuerpo poseen una membrana ondulante bordeada por un flagelo que se origina en el quinetoplasto y sale del parsito por el extremo anterior. Se diferencia de otras especies de Trypanosoma por el tamao grande del quinetoplasto. Amastigote: Se encuentra en clulas como macrfagos, clulas del sistema retculo endotelial, tejido muscular cardaco, muscular estriado, muscular liso y menos frecuente en tejido nervioso. Se caracteriza por ser redondeado u oval, medir de 1.5 a 4 micras de dimetro y no poseer flagelo, se multiplica por divisin binaria, estos amastigotes se aglomeran dentro de las clulas formando nidos. Epimastigotes: Constituye la forma reproductiva en los insectos vectores, hasta su maduracin en formas triposmastigotas metacclicas. Su quinetoplasto se encuentra anterior al ncleo, miden de 35 a 40 micras de largo y su flagelo se origina cerca al quinetoplasto. Estas formas epimastigotas crecen muy bien en los medios de cultivo in vitro. Mtodos Diagnsticos: Parasitolgicos Directos 1. Examen en fresco: se obtiene una gota de sangre por puncin digital con lanceta y se coloca entre lmina y laminilla para buscar los tripomastigotes movindose, se encuentran hasta en un 90% en la fase aguda pero solo hasta en 10% en la crnica. 2. Gota gruesa y extendido de sangre perifrica: la muestra de sangre se procesa igual que para malaria y se utiliza la misma coloracin (Derivados de Romanowsky, especialmente Giemsa). se buscan los tripomastigotes, su sensibilidad es aproximadamente del 70% para la gota gruesa y del 60% para el extendido.

Tripomastigote en sangre 3. Mtodo de Strout: se obtiene sangre por puncin venosa y se coloca en un tubo sin anticoagulante, se deja retraer el cogulo y los tripomastigotes salen hacia el suero, el cual se centrifuga para obtener una mayor concentracin y observarlos en fresco o coloreados. Tiene una sensibilidad de 90 a 100% en la fase aguda pero no llega al 10% en la crnica. 4. Biopsia: se utiliza para comprobar las formas tisulares de T. cruzi. Se pueden ver los llamados nidos de amastigotes y se prefiere la biopsia de ganglio linftico. Parasitolgicos Indirectos 1. Xenodiagnstico: se utilizan vectores limpios de la infeccin, mantenidos en el laboratorio, se prefieren ninfas de 3 a 5 estadio de Rhodnius prolixus, las cuales se alimentan de la sangre del paciente, 30 y 60 das despus de la succin de sangre, se examinan las heces e intestinos de los insectos bajo el microscopio para detectar formas del T. cruzi. Este mtodo presenta una efectividad entre el 85 y 100% en las formas agudas, 80% en las congnitas y entre 20 y 50% en las crnicas.

Rhodnius prolixus 2. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR): es altamente sensible y con especificidad entre 85 y 95% 3. Cultivos: se utiliza el medio LIT (LiverInfusin-Tryptose). Se puede obtener una sensibilidad muy alta en la fase aguda de la enfermedad y de un 40 a 50% en la crnica. Otros medios utilizados son NNN (Novy-MacNeal-Nicolle), BHI (Infusin de cerebro- y corazn), Noeller. A los 8 das de la siembra se debe observar el lquido sobrenadante para buscar en fresco y en preparaciones coloreadas los epimastigotes.

4. Serologa: La presencia de anticuerpos indican indirectamente la existencia, presente o pasada del parsito en el organismo. Los mtodos utilizados son inmunofluirescencia indirecta, ELISA, Fijacin de complemento, Hemaglutinacin indirecta y Prueba de ltex. Toxoplasma gondii Protozoo intracelular de la subclase Coccidia que causa toxoplasmosis. El hombre y los animales se infectan mediante la ingestin de los ooquistes esporulados diseminados en el medio ambiente y que son excretados en las heces de los gatos y algunos felinos que son los huspedes definitivos. El parsito adopta diferentes estados segn la fase de su desarrollo. Taquizoito: llamada forma proliferativa, mide 6 micras de longitud por 2 de ancho. Su forma es alargada y un poco arqueada (como en media luna), el ncleo se tie con facilidad con colorantes comunes. Esta forma parasitaria se encuentra en la infeccin aguda.

Taquizoitos Quistes tisulares: miden entre 20 y 200micras, tienen una membrana propia, generalmente son redondos, en su interior se encuentran cientos de parsitos conocidos como bradizotos que se forman por multiplicacin lenta y estn presentes en la infeccin crnica. Ooquistes: salen en las materias fecales de los hospederos definitivos, son esfricos, miden de 10 a 12 micras, luego de 2 a 5 das de estar en el medio ambiente en su interior se forman dos esporoquistes cada uno con cuatro esporozotos

El laboratorio es bsico para definir la etiologa de la enfermedad. El diagnstico de infeccin se puede establecer mediante las pruebas serolgicas; para comprobar la enfermedad se requiere, adems el criterio clnico. Con la prueba de amplificacin de ADN por PCR, ha adquirido importancia la bsqueda de parasitemia en el paciente inmunosuprimido o en el recin nacido. Demostracin directa del parsito: solo es posible hacerlo en un nmero reducido de casos. Se pueden encontrar en LCR, ganglios linfticos, mdula sea y ocasionalmente en otros tejidos. En los tejidos las caractersticas morfolgicas son difciles de precisar pues la biopsia muestras formas redondeadas o partes del parsito, segn sea su posicin en el corte histolgico. La coloracin con Giemsa o hematoxilina-eosina, inmunofluorescencia directa y la inmunoperoxidasa ayudan a la diferenciacin. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR): amplifica el ADN de T. gondii indicando la presencia del parsito en los lquidos o tejidos inclusive en el lquido amnitico. Inoculaciones: el parsito se puede aislar de LCR, sangre, esputo y de los tejidos infectados (ganglios linfticos, msculos, placenta, ojos enucleados y vsceras) haciendo inoculaciones en ratones y observando en el lquido peritoneal la presencia de taquizotos despus de 4 a 8 das. Mtodos inmunolgicos: la demostracin indirecta de T. gondii se hace por la bsqueda de anticuerpos y su presencia indica infeccin pero no necesariamente enfermedad. Los anticuerpos detectados son principalmente IgM e Ig G, la interpretacin de los ttulos se hace frente al cuadro clnico y la historia del paciente. Las pruebas ms utilizadas son inmunofluorescencia indirecta (IFI), ELISA, hemaglutinacin indirecta (HIA), Sabin y Feldman (S-F), fijacin de complemento y toxoplasmina. LEISHMANIASIS: Es necesario diferenciarla de otro tipo de lceras como las pigenas, especialmente las de evolucin crnica, pioderma gangrenoso, lcera vascular, esporotricosis, pian, lepra, infeccin por micobacterias no tuberculosas, cromomicosis, histoplasmosis, tumores de piel etc.. Para confirmar la leishmaniasis es indispensable identificar el parsito por cualquiera de los mtodos que existen: 1. Examen directo:

Ooquiste sin esporular esporulado Mtodos Diagnsticos:

Ooquiste

Se debe hacer una buena limpieza de la lcera y luego hacer una incisin en el reborde de la lcera para luego raspar el tejido y obtener histiocitos y macrofgos parasitados; esta

muestra se extiende en un portaobjetos para hacer uno o dos extendidos de un centmetro de dimetro, que despus de seco se colorea con Giemsa o Wright. Se deben tomar dos o tres preparaciones por paciente y observar en 100 X. En las lesiones iniciales sin contaminacin se hallan con facilidad los amastigotes intra o extracelulares. En las lceras ms crnicas, fibrticas y altamente contaminadas es ms difcil su hallazgo. El frotis directo tiene una especificidad del 100% y sensibilidad del 90%

Promastigotes en cultivo 4. Prueba de la PCR: Amplifica segmentos especficos de ADN de los parsitos en la muestra. Tiene gran valor en tejidos donde no ha sido posible detectar parsitos por otros mtodos parasitolgicos, especialmente en lesiones en mucosas y para comprobar la infeccin en los vectores 5. Intradermoreaccin de Montenegro: Es un mtodo indirecto y corresponde a una reaccin de hipersensibilidad tarda, llamada de Montenegro o Leishmanina. Consiste en la aplicacin de un antgeno compuesto por suspensin de promastigotes procedentes de cultivo, que se aplican intradrmicamente al paciente y se hace la lectura de la prueba a las 48 y 72 horas. Es positiva si se palpa un ndulo de > 5 mm, semejante al observado en la tuberculina. La reaccin indica contacto previo y tiene valor en el estudio de lesiones crnicas o evaluaciones epidemiolgicas. 6. Mtodos serolgicos La prueba de inmunofluorescencia indirecta es la ms utilizada, aunque se detectan anticuerpos circulantes los ttulos son muy bajos. Tiene poco valor en las leishmaniasis cutneas pero tienen mayor importancia en las mucocutneas Lutzomya sp: es el vector de Leishmaniasis. Son insectos dpteros muy pequeos que miden entre 2 y 5 mm, tienen el cuerpo cubierto de pelos, en reposo las alas las mantienen en posicin erecta. Vive en sitios sombreados y hmedos como huecos de rboles, nidos de animales, madrigueras, socavones de minas, races de rboles, hojarasca y chozas cercanas a zonas boscosas.

Amastigotes de Leishmania en un examen directo coloreado con Giemsa o Wright. 2. Biopsia: El estudio histopatolgico permite hacer el diagnstico en muchos casos al observar la presencia de amastigotes intracelulares, en las formas crnicas no siempre se logra demostrar los parsitos. 3. Cultivos: Parte del material obtenido de la lcera se siembra en el medio de cultivo llamado NNN (Novy-MacNeal-Nicolle), el cual es un medio bifsico que permite el desarrollo de los parsitos. La incubacin se hace a temperatura ambiente entre 20 y 30C. Despus de 8 das se revisa el medio para buscar los promastigotes (formas flageladas del parsito) en la fase lquida, que con frecuencia estn aglomerados y entrelazados por los flagelos formando rosetas que son caractersticas.

Es el ectoparasitismo temporal por pulgas, su picadura se observa como una mcula con un punto central rojizo y es intensamente pruriginosa Las pulgas de importancia mdica son: Pulex irritans o pulga del hombre; Ctenocephalides canis del perro; Ctenocephalides felis del gato y Xenopsylla cheopis de las ratas. Son insectos pteros, aplanados de 2mm de longitud. El cuerpo es quitinoso y resistente y tiene 3 pares de patas. La clasificacin de las especies se basa en las estructuras quitinosas en forma de peine, llamados ctenidios (pronales y genales)

Lutzomya sp DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES CAUSADAS POR INSECTOS PEDICULOSIS Es la infestacin por ectoparsitos que se llaman comnmente como piojos. El diagnstico se hace por la sintomatologa y la observacin de liendres o parsitos adultos. Los piojos del gnero Pediculus humanus variedad capitis que se localizan en la cabeza y Pediculus humanus variedad corporis que estn en el cuerpo son insectos pteros, miden de 2 a 3 mm de longitud, aplanados dorso-ventralmente y provistos de uas terminales en forma de garra que les permiten adherirse al cabello o a la ropa. Sus huevos llamados liendres miden 600 micras y se pueden observar a simple vista, los cuales se adhieren de manera muy firme al pelo o a la ropa por una sustancia pegajosa El otro gnero Phthirus pubis llamado piojo pbico, ms pequeo, su longitud es de 1 a 2 mm y es casi tan ancho como largo. Las patas son cortas, fuertes y terminan en garras muy desarrolladas que le permiten fijarse a los pelos ms gruesos del cuerpo, como los del pubis, perin, barba, cejas y pestaas. Son llamados ladillas.

Pulex irritans Ctenocephalides canis CIMICOSIS Es causada por los llamados chinches de la cama, los principales son Cimex lectularius y Cimex hemipterus, miden 3 a 5mm es aplanado dorsoventralmente, el abdomen es voluminoso, ovalado y segmentado Reciben el nombre popular de chinches de la cama, debido a que se alojan y reproducen en los colchones y hendiduras de las camas. Las manifestaciones clnicas de la picadura son muy variables, de acuerdo con la reaccin alrgica que puede causar la saliva del chinche en el momento de la picadura.

Pediculus humanus pubis PULICOSIS

Phthirus Cimex lectularius

MIASIS Corresponde a los daos que causan las larvas de moscas al invadir los tejidos y rganos de los animales y el hombre. Las miasis del ser humano se pueden localizar en diversas partes del cuerpo y por lo tanto se clasifican clnicamente en: Cutnea fija, cutnea migrante, cavitaria, de las heridas e intestinal.

DEMODICOSIS Producida por Demodex folliculorum y D. brevis, caros alargados de 100 a 400 micras de longitud, cuerpo segmentado, 4 pares de patas atrofiadas, carente de vellosidades. Se toma muestra del folculo o de la secrecin de la glndula sebcea principalmente de la nariz y prpados y se monta el directo con KOH donde se observa el parsito

Miasis por Dermatobia Dermatobia hominis ENFERMEDADES POR ARCNIDOS ESCABIOSIS Tambin llamada Sarna. Es producida por Sarcoptes scabiei var hominis, es un caro ovalado, la hembra mide 350m y el macho 250 m. Como todos los arcnidos, tiene cefalotrax y en la parte anterior sobresale el captulo provisto de aparato bucal fuerte que le permite penetrar la epidermis. Posee cuatro pares de patas muy atrofiadas que terminan en filamentos largos. Las hembras forman tneles en capa cornea de la piel y all depositan los huevos, los cuales miden 150 micras.

Demodex folliculorum PICADURAS POR GARRAPATAS Las garrapatas son ectoparsitos principalmente de animales y ocasionalmente se encuentran en el hombre. Producen lesin local traumtica a travs de la cual succiona sangre o inoculan una neurotoxina que rara vez es sintomtica.

Adulto de Sarcoptes scabiei con KOH El material obtenido por raspado de las lesiones se observan con KOH al microscopio en donde se observan los parsitos y los huevos, de esta manera es confirmado el diagnstico por el laboratorio. La biopsia tambin puede hacer el diagnstico al identificar las lesiones epidrmicas y los huevos