Pruebas cualitativas

Reacción de Molisch (da positiva con todos los glúcidos. . sean o no reductores) Fundamento: Todos los glúcidos por acción del ácido sulfúrico concentrado se deshidratan formando compuestos furfúricos (las pentosas dan furfural y las hexosas dan hidroximetilfurfural). Estos furfurales reaccionan positivamente con el reactivo de Molish (solución alcohólica de alfa-naftol) dando un producto coloreado.

La coloración producida va desde verde. anaranjado o rojizo. . pero la sacarosa no los posee. amarillo. Esta prueba se basa en la capacidad del carbohidrato de reducir el Cu2+ en un medio alcalino a Cu+. dependiendo de la concentración de óxido de cobre y ésta a su vez de la cantidad de cobre reducido. lo que proporciona la coloración positiva de la reacción. Los disacáridos maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres.Reacción de Benedict Una de las reacciones más comunes en la identificación de carbohidratos es la reacción de Benedict. Esta reacción es específica para azúcares con grupo reductores libres (C=O). ya que se pierden los grupos reductores de sus componentes cuando ésta es formada. Este Cu+ se oxida y precipita en forma de Cu2O. Todos los monosacáridos poseen un grupo reductor libre.

y permitir que reaccione con los glúcidos reductores . Los glúcidos reductores se manifiestan en medio alcalino.Reacción de Fehling (da positiva con todos los glúcidos reductores) Fundamento: El catión cúprico (Cu++) del reactivo de Fehling reacciona con los glúcidos reductores pasando a óxido cuproso. que es un precipitado de color rojo ladrillo. Esta es una reacción que resulta positiva sólo si el glúcido es reductor. a fin de evitar la formación del óxido cúprico. de manera que es necesaria la presencia de tartrato doble de sodio y potasio en el reactivo para "secuestrar" al catión Cu++. pero el Cu++ en ese medio tiende a precipitar espontáneamente como óxido cúprico (que en esa forma no reacciona).

.Reacción del Lugol (da positiva con los polisacáridos) Fundamento: El color que dan los polisacáridos con el lugol (solución de I2 y de IK) se debe a que el I2 ocupa espacios vacíos en las hélices de la cadena de unidades de glucosa. formando un compuesto de inclusión que altera las propiedades físicas del polisacárido. Esta unión del I2 a la cadena es reversible. y por calentamiento desaparece el color. El lugol da con el almidón color azul y con el glucógeno color rojo caoba. que al enfriarse reaparece. especialmente la absorción lumínica.

en presencia de un ácido fuerte producen rápidamente derivados furfúricos que reaccionan con un difenol llamado resorcina. ya que el HCI del reactivo provoca en caliente la hidrólisis del compuesto liberando fructosa (responsable de la reacción positiva).Reacción de Seliwanof (da positiva con cetosas y negativa con aldosas) Fundamento: Los glúcidos que se clasifican como cetosas tienen en el carbono 2 una función cetona. . La sacarosa (un disacárido formado por glucosa y fructosa) y la inulina (un polisacárido de la fructosa) dan positiva la reacción.

Se basa en la formación de un compuesto furfúrico que se condensa con el orcinol del reactivo.Reacción de Bial (da positiva con pentosas) Fundamento: Esta reacción permita reconocer pentosas (glúcidos de 5 carbonos) y sustancias que las contengan. .

.Prueba de Barfoed Sirve para distinguir monosacáridos reductores de disacáridos reductores. en los monosacáridos la formación del oxido cuproso es mas rápido que en los disacáridos. basándose en la velocidad de reacción. La reacción consiste en utilizar acetato cúprico y ácido acético en solución ácida con lo que los monosacáridos son capaces de reducir al cobre de manera más rápida y en condiciones menos drásticas. pues si éste se prolongara se produciría la hidrólisis ácida del enlace glucosídico con la consiguiente liberación del carbono anomérico y la aparición de nuevos grupos reductores que falsearían el resultado. Por supuesto que al tener la solución un pH ácido resulta necesario controlar rigurosamente el tiempo de reacción.

Como consecuencia de ello pueden adicionar oxígeno. bromo. Fundamento: El reactivo de Hübl está formado por yodo en alcohol (con bicloruro de mercurio como catalizador). El yodo se fija sobre la cadena carbonada de los ácidos grasos etilénicos a razón de dos átomos por cada doble ligadura. yodo. hidrógeno. utilizándose la cantidad de sustancia fijada para determinar su grado de insaturación. cuya fórmula es C18H34O2 con doble enlace en C9.    . Los no saturados se caracterizan por tener en su molécula uno o más dobles enlaces. por lo tanto el reactivo se decolora al perder yodo (mientras el ácido graso lo gana). El ácido graso insaturado que se halla con mayor frecuencia es el ácido oleico. cloro.Reacción de Hübl   Investigación de dobles ligaduras Los ácidos grasos pueden ser saturados o no saturados.

Observar la formación de un anillo coloreado en la internase. cuidando que los líquidos no se mezclen.  . inclinar el tubo y deslizar por su pared interna un volumen igual de ácido sulfúrico concentrado. medir 2 ml de la solución clorofórmica de colesterol de la experiencia anterior.Reacción de Salkowsky    (caracterización de colesterol) En un tubo de ensayo.

añadir 10 gotas de anhídrido acético.Reacción de LiebermanBurchard (caracterización de colesterol)  En un tubo de ensayo colocar 2 ml de solución clorofórmica de colesterol. y luego 3 gotas de ácido sulfúrico concentrado  .

. La reacción positiva se manifiesta por la reacción de un precipitado amarillo de fosfomolibdato de amonio. Las sustancias orgánicas dan la reacción positiva. siempre que se haga una hidrólisis previa. La positividad de esta reacción indica la presencia de fósforo inorgánico.Prueba de Fusión     Para investigar fósforo Se utiliza Molibdato de amonio.

 . amoniaco y un aldehído que contiene un átomo de carbono menos que el compuesto original El amoniaco reacciona con otra molécula de ninhidrina formando un compuesto azul violáceo denominado púrpura de Ruhemmans.Reacción de la Ninhidrina     (caracteriza a todos los aminoácidos) Fundamento: Todas las aminas primarias (y por lo tanto también los alfa-aminoácidos) reaccionan con la ninhidrina en presencia de calor dando dióxido de carbono.

según la siguiente ecuación: R-SH + 2 NaOH → R-OH + Na2S + H2O De esta manera el sulfuro de sodio se encuentra libre para reaccionar con el acetato de plomo del reactivo de Courtone: Na2S + (CH3-COO)2Pb → 2 CH3-COONa + PbS (precipitado)      . la cisteína y la metionina. La reacción consiste en someter la muestra a una hidrólisis alcalina con hidróxido de sodio.Reacción de tiogrupos     caracterización de aminoácidos azufrados) Fundamento: Esta reacción dará positiva con aquellos aminoácidos que presenten azufre en su estructura. como son la cistina.

formando compuestos coloreados.Reacción de Hopkins-Cole     (caracterización del aminoácido triptófano) Fundamento: El grupo indol del aminoácido triptófano se condensa con el ácido glioxílico del reactivo. El agregado de una pequeña cantidad de ácido sulfúrico concentrado puro. aumenta la sensibilidad de la reacción .

fenilalanina y triptofano. obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo. que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formación del ácido picrámico o trinitrofenol) .Reacción xantoproteica     (caracterización de aminoácidos aromáticos) Fundamento: Se produce la nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos tirosina.

formando complejos de color rojizo.  .Reacción de Millon   (caracterización del aminoácido tirosina) Fundamento:  Los compuestos mercúricos en medio fuertemente nítrico (reactivo de Millon) se condensan con el grupo fenólico del aminoácido tirosina.

y luego forma un complejo coloreado con el hipoclorito de sodio.  .Reacción de Sakaguchi    (caracterización del aminoácido arginina) Fundamento:  El grupo guanidino del aminoácido arginina se condensa con el alfanaftol del reactivo.

.Reacción del Biuret     (caracterización de tripéptidos en adelante) Fundamento: Los péptidos y proteínas producen una reacción coloreada muy usada para la valoración de los mismos. Se necesitan 2 ó más uniones peptídicas para que se forme el complejo coloreado. Las proteínas por sus uniones peptídicas reaccionan con los iones cúpricos del reactivo en medio alcalino formando un complejo de color violeta. llamada reacción del Biuret.

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